EA044986B1 - Экстракт жидкого прополиса, способ его производства и его применение - Google Patents
Экстракт жидкого прополиса, способ его производства и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA044986B1 EA044986B1 EA202192022 EA044986B1 EA 044986 B1 EA044986 B1 EA 044986B1 EA 202192022 EA202192022 EA 202192022 EA 044986 B1 EA044986 B1 EA 044986B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- propolis
- liquid
- lecithin
- acid
- propolis extract
- Prior art date
Links
- 229940069949 propolis Drugs 0.000 title claims description 237
- 241000241413 Propolis Species 0.000 title claims description 236
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 197
- 239000007788 liquid Substances 0.000 title claims description 160
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 62
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 182
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 124
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 109
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 claims description 109
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 claims description 109
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 99
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 claims description 90
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 claims description 88
- PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 1-hexadecanoyl-2-octadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[C@@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZNPLUBHRSSFHT-RRHRGVEJSA-N 0.000 claims description 72
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 claims description 72
- NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 4-coumaric acid Chemical compound OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 71
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 claims description 70
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 claims description 56
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 45
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 claims description 44
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 39
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 claims description 35
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 34
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 claims description 33
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 claims description 32
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 claims description 32
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 claims description 32
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims description 32
- SWUARLUWKZWEBQ-VQHVLOKHSA-N phenethyl caffeate Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1\C=C\C(=O)OCCC1=CC=CC=C1 SWUARLUWKZWEBQ-VQHVLOKHSA-N 0.000 claims description 30
- NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-M 4-Hydroxycinnamate Natural products OC1=CC=C(\C=C\C([O-])=O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-M 0.000 claims description 27
- DFYRUELUNQRZTB-UHFFFAOYSA-N Acetovanillone Natural products COC1=CC(C(C)=O)=CC=C1O DFYRUELUNQRZTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 27
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 claims description 26
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 claims description 25
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 25
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 25
- SWUARLUWKZWEBQ-UHFFFAOYSA-N 3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoic acid 2-phenylethyl ester Chemical compound C1=C(O)C(O)=CC=C1C=CC(=O)OCCC1=CC=CC=C1 SWUARLUWKZWEBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 claims description 23
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 claims description 20
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 20
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 19
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 claims description 18
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 17
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 17
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- WWVKQTNONPWVEL-UHFFFAOYSA-N caffeic acid phenethyl ester Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C=CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 WWVKQTNONPWVEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 13
- 239000003905 agrochemical Substances 0.000 claims description 13
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 claims description 13
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 claims description 13
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 claims description 12
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 12
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 12
- 229940005741 sunflower lecithin Drugs 0.000 claims description 12
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 229940113115 polyethylene glycol 200 Drugs 0.000 claims description 11
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 11
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 claims description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 10
- 229960003085 meticillin Drugs 0.000 claims description 10
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 claims description 10
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 claims description 9
- 229940057847 polyethylene glycol 600 Drugs 0.000 claims description 9
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 8
- RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N Methicillin Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(=O)N[C@@H]1C(=O)N2[C@@H](C(O)=O)C(C)(C)S[C@@H]21 RJQXTJLFIWVMTO-TYNCELHUSA-N 0.000 claims description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 8
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 claims description 8
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 claims description 8
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000002674 ointment Substances 0.000 claims description 8
- 239000007921 spray Substances 0.000 claims description 8
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 7
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 claims description 7
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 7
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 claims description 7
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 7
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 7
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 7
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 claims description 7
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 6
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 claims description 6
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 claims description 6
- 235000011292 Brassica rapa Nutrition 0.000 claims description 6
- 240000008100 Brassica rapa Species 0.000 claims description 6
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 claims description 6
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 claims description 6
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 claims description 6
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 claims description 6
- 241000194054 Streptococcus uberis Species 0.000 claims description 6
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 5
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims description 5
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 claims description 5
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 239000008406 cosmetic ingredient Substances 0.000 claims description 5
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000035876 healing Effects 0.000 claims description 5
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 5
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 claims description 5
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 claims description 4
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 4
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 4
- 241000342334 Human metapneumovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000711920 Human orthopneumovirus Species 0.000 claims description 4
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 claims description 4
- 229920000604 Polyethylene Glycol 200 Polymers 0.000 claims description 4
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims description 4
- 241000186064 Trueperella pyogenes Species 0.000 claims description 4
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 4
- 239000003974 emollient agent Substances 0.000 claims description 4
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 claims description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 4
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims description 4
- 229940068886 polyethylene glycol 300 Drugs 0.000 claims description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 4
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 3
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 3
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 claims description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003906 humectant Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 3
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 3
- 229940115922 streptococcus uberis Drugs 0.000 claims description 3
- 241000186041 Actinomyces israelii Species 0.000 claims description 2
- 241000606749 Aggregatibacter actinomycetemcomitans Species 0.000 claims description 2
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 claims description 2
- 241000228245 Aspergillus niger Species 0.000 claims description 2
- 241000203233 Aspergillus versicolor Species 0.000 claims description 2
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims description 2
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 2
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 2
- 241000606124 Bacteroides fragilis Species 0.000 claims description 2
- 241000589513 Burkholderia cepacia Species 0.000 claims description 2
- 241000079253 Byssochlamys spectabilis Species 0.000 claims description 2
- 241000589877 Campylobacter coli Species 0.000 claims description 2
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 claims description 2
- 241000144583 Candida dubliniensis Species 0.000 claims description 2
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 claims description 2
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 claims description 2
- 241001515917 Chaetomium globosum Species 0.000 claims description 2
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 2
- 241001508000 Corynebacterium bovis Species 0.000 claims description 2
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 claims description 2
- 241000588697 Enterobacter cloacae Species 0.000 claims description 2
- 241001522957 Enterococcus casseliflavus Species 0.000 claims description 2
- 241000194031 Enterococcus faecium Species 0.000 claims description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 claims description 2
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 claims description 2
- 206010017999 Gastrointestinal pain Diseases 0.000 claims description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 2
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 claims description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 claims description 2
- 241000588749 Klebsiella oxytoca Species 0.000 claims description 2
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 claims description 2
- 241001299738 Malassezia pachydermatis Species 0.000 claims description 2
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 claims description 2
- 241000785903 Odoribacter denticanis Species 0.000 claims description 2
- 241001135232 Odoribacter splanchnicus Species 0.000 claims description 2
- 208000002606 Paramyxoviridae Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 241000191992 Peptostreptococcus Species 0.000 claims description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims description 2
- 241000162745 Porphyromonas gulae Species 0.000 claims description 2
- 241001135241 Porphyromonas macacae Species 0.000 claims description 2
- 241001135221 Prevotella intermedia Species 0.000 claims description 2
- 241000588770 Proteus mirabilis Species 0.000 claims description 2
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 claims description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015815 Rectal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 claims description 2
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 claims description 2
- 241000191982 Staphylococcus hyicus Species 0.000 claims description 2
- 241000794282 Staphylococcus pseudintermedius Species 0.000 claims description 2
- 241001147691 Staphylococcus saprophyticus Species 0.000 claims description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 claims description 2
- 241000194007 Streptococcus canis Species 0.000 claims description 2
- 241000194042 Streptococcus dysgalactiae Species 0.000 claims description 2
- 241000194049 Streptococcus equinus Species 0.000 claims description 2
- 241000194025 Streptococcus oralis Species 0.000 claims description 2
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 claims description 2
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 claims description 2
- 241000194020 Streptococcus thermophilus Species 0.000 claims description 2
- 241000606507 Talaromyces pinophilus Species 0.000 claims description 2
- 241000589886 Treponema Species 0.000 claims description 2
- 241001149558 Trichoderma virens Species 0.000 claims description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 2
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 claims description 2
- 241000607447 Yersinia enterocolitica Species 0.000 claims description 2
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 claims description 2
- 239000012868 active agrochemical ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 235000019730 animal feed additive Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000003899 bactericide agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 claims description 2
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 claims description 2
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 claims description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000010989 colorectal carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 210000001198 duodenum Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000417 fungicide Substances 0.000 claims description 2
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 2
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 claims description 2
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 claims description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 2
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037798 influenza B Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002917 insecticide Substances 0.000 claims description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 claims description 2
- 235000004213 low-fat Nutrition 0.000 claims description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940127554 medical product Drugs 0.000 claims description 2
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 claims description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 2
- 239000005645 nematicide Substances 0.000 claims description 2
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000000053 special nutrition Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000004514 sphincter of oddi Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 claims description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 2
- 229940115920 streptococcus dysgalactiae Drugs 0.000 claims description 2
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 claims description 2
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 claims description 2
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 claims description 2
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000012873 virucide Substances 0.000 claims description 2
- 229940098232 yersinia enterocolitica Drugs 0.000 claims description 2
- 241000208818 Helianthus Species 0.000 claims 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims 1
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 claims 1
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 claims 1
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 claims 1
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 claims 1
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 claims 1
- 201000008100 Vaginitis Diseases 0.000 claims 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims 1
- 210000000883 ear external Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 claims 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 claims 1
- 208000007565 gingivitis Diseases 0.000 claims 1
- 208000014617 hemorrhoid Diseases 0.000 claims 1
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 claims 1
- 201000001245 periodontitis Diseases 0.000 claims 1
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 claims 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 claims 1
- 201000009890 sinusitis Diseases 0.000 claims 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 claims 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 claims 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 179
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 86
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 61
- 239000000047 product Substances 0.000 description 44
- RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N chrysin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 RTIXKCRFFJGDFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 40
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 30
- VCCRNZQBSJXYJD-UHFFFAOYSA-N galangin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=CC=C1 VCCRNZQBSJXYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 22
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 21
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 21
- RDIVANOKKPKCTO-UHFFFAOYSA-K aluminum;octadecanoate;hydroxide Chemical compound [OH-].[Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RDIVANOKKPKCTO-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 20
- KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N apigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 19
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 18
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 17
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 15
- URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N pinocembrin Chemical compound C1([C@@H]2CC(=O)C3=C(O)C=C(C=C3O2)O)=CC=CC=C1 URFCJEUYXNAHFI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 15
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 14
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 14
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 14
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 13
- NYCXYKOXLNBYID-UHFFFAOYSA-N 5,7-Dihydroxychromone Natural products O1C=CC(=O)C=2C1=CC(O)=CC=2O NYCXYKOXLNBYID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N Pinocembrin Natural products Cc1cc(C)c2C(=O)C[C@H](Oc2c1)c3ccccc3 FGUBFGWYEYFGRK-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 12
- 235000015838 chrysin Nutrition 0.000 description 12
- 229940043370 chrysin Drugs 0.000 description 12
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- CIPSYTVGZURWPT-UHFFFAOYSA-N galangin Natural products OC1=C(Oc2cc(O)c(O)cc2C1=O)c3ccccc3 CIPSYTVGZURWPT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 12
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- SUYJZKRQHBQNCA-UHFFFAOYSA-N pinobanksin Natural products O1C2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C(O)C1C1=CC=CC=C1 SUYJZKRQHBQNCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 11
- XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N apigenin Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 235000008714 apigenin Nutrition 0.000 description 11
- 229940117893 apigenin Drugs 0.000 description 11
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N trans-cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 10
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 9
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 9
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 8
- -1 2-phenylethyl caffeic acid ester Chemical compound 0.000 description 8
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 8
- 229940083466 soybean lecithin Drugs 0.000 description 8
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 7
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 7
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 235000013871 bee wax Nutrition 0.000 description 6
- 239000012166 beeswax Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 6
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 6
- QJVHTELASVOWBE-AGNWQMPPSA-N (2s,5r,6r)-6-[[(2r)-2-amino-2-(4-hydroxyphenyl)acetyl]amino]-3,3-dimethyl-7-oxo-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;(2r,3z,5r)-3-(2-hydroxyethylidene)-7-oxo-4-oxa-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21.C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 QJVHTELASVOWBE-AGNWQMPPSA-N 0.000 description 5
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 5
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 5
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 5
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 5
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N (+/-)-1,3-Butanediol Chemical compound CC(O)CCO PUPZLCDOIYMWBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-m-cresol Chemical compound CC1=CC(O)=CC=C1Cl CFKMVGJGLGKFKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N Cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-SREVYHEPSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001214 Polysorbate 60 Polymers 0.000 description 4
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 4
- 229940083916 aluminum distearate Drugs 0.000 description 4
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 235000013985 cinnamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229930016911 cinnamic acid Natural products 0.000 description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 4
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 4
- BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N hexadecan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCO BXWNKGSJHAJOGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N methyl p-hydroxycinnamate Natural products OC(=O)C=CC1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 235000010989 polyoxyethylene sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 4
- 239000001818 polyoxyethylene sorbitan monostearate Substances 0.000 description 4
- 229940113124 polysorbate 60 Drugs 0.000 description 4
- SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N silver(1+) nitrate Chemical compound [Ag+].[O-]N(=O)=O SQGYOTSLMSWVJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 4
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004166 Lanolin Substances 0.000 description 3
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 3
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 238000009635 antibiotic susceptibility testing Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 3
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 3
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 3
- 235000019388 lanolin Nutrition 0.000 description 3
- 229940039717 lanolin Drugs 0.000 description 3
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 3
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 3
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 3
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 3
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 3
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 3
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 3
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 3
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 3
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical class OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 229940058015 1,3-butylene glycol Drugs 0.000 description 2
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N Butylparaben Chemical compound CCCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QFOHBWFCKVYLES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930186147 Cephalosporin Natural products 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 2
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N Menadione Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(C)=CC(=O)C2=C1 MJVAVZPDRWSRRC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N N,N-bis{2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl}glycine Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(=O)O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O QPCDCPDFJACHGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 2
- 229920002582 Polyethylene Glycol 600 Polymers 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 2
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 2
- 229960004543 anhydrous citric acid Drugs 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 239000003904 antiprotozoal agent Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 235000019437 butane-1,3-diol Nutrition 0.000 description 2
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 2
- 229940124587 cephalosporin Drugs 0.000 description 2
- 150000001780 cephalosporins Chemical class 0.000 description 2
- 229960000541 cetyl alcohol Drugs 0.000 description 2
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- JEQRBTDTEKWZBW-UHFFFAOYSA-N dehydroacetic acid Chemical compound CC(=O)C1=C(O)OC(C)=CC1=O JEQRBTDTEKWZBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N ethylparaben Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 NUVBSKCKDOMJSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 2
- 150000002215 flavonoids Chemical group 0.000 description 2
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 2
- 230000002443 hepatoprotective effect Effects 0.000 description 2
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 2
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 230000006651 lactation Effects 0.000 description 2
- 229940099367 lanolin alcohols Drugs 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- 238000002803 maceration Methods 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 2
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 2
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 2
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N phenol group Chemical group C1(=CC=CC=C1)O ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 239000002824 redox indicator Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 229910001961 silver nitrate Inorganic materials 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- UBCKGWBNUIFUST-YHYXMXQVSA-N tetrachlorvinphos Chemical compound COP(=O)(OC)O\C(=C/Cl)C1=CC(Cl)=C(Cl)C=C1Cl UBCKGWBNUIFUST-YHYXMXQVSA-N 0.000 description 2
- 235000015961 tonic Nutrition 0.000 description 2
- 230000001256 tonic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N (2-nonanoyloxy-3-octadeca-9,12-dienoyloxypropoxy)-[2-(trimethylazaniumyl)ethyl]phosphinate Chemical class CCCCCCCCC(=O)OC(COP([O-])(=O)CC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HBJOXQRURQPDEX-MHXMMLMNSA-N (2s,4r)-n-[(1s,2s)-2-chloro-1-[(2r,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-methylsulfanyloxan-2-yl]propyl]-4-ethylpiperidine-2-carboxamide Chemical compound C1[C@H](CC)CCN[C@@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 HBJOXQRURQPDEX-MHXMMLMNSA-N 0.000 description 1
- YWKJNRNSJKEFMK-PQFQYKRASA-N (6r,7r)-7-[[(2z)-2-(2-amino-1,3-thiazol-4-yl)-2-methoxyiminoacetyl]amino]-8-oxo-3-(5,6,7,8-tetrahydroquinolin-1-ium-1-ylmethyl)-5-thia-1-azabicyclo[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylate Chemical compound N([C@@H]1C(N2C(=C(C[N+]=3C=4CCCCC=4C=CC=3)CS[C@@H]21)C([O-])=O)=O)C(=O)\C(=N/OC)C1=CSC(N)=N1 YWKJNRNSJKEFMK-PQFQYKRASA-N 0.000 description 1
- WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N (E)-8-Octadecenoic acid Natural products CCCCCCCCCC=CCCCCCCC(O)=O WRIDQFICGBMAFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N (R)-alpha-Tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 1
- NNVNAJGCZFCILW-UHFFFAOYSA-N 1'-methylspiro[3,4-dihydrochromene-2,4'-piperidine]-4-amine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1CN(C)CCC21OC1=CC=CC=C1C(N)C2 NNVNAJGCZFCILW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 1-dodecoxydodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidin-2-one;molecular iodine Chemical compound II.C=CN1CCCC1=O CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YIQUTYFGUKCQCY-UHFFFAOYSA-N 1-tert-butyl-2-methoxybenzene Chemical compound COC1=CC=CC=C1C(C)(C)C YIQUTYFGUKCQCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 2-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]-5-ethylpyrazol-1-yl]-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C=1C=NN(C=1CC)CC(=O)N1CC2=C(CC1)NN=N2 FYELSNVLZVIGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 2-phenoxyethanol Chemical compound OCCOC1=CC=CC=C1 QCDWFXQBSFUVSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 20:1omega9c fatty acid Natural products CCCCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O LQJBNNIYVWPHFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-1-piperidin-4-ylpyrrolidin-2-one Chemical compound O=C1CC(O)CN1C1CCNCC1 HIQIXEFWDLTDED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CFBVWCHTNQHZLT-UHFFFAOYSA-N 4-methoxy-5-[3-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-(phenylcarbamoyl)tetrazol-3-ium-2-yl]-2-nitrobenzenesulfonate Chemical compound COC1=CC([N+]([O-])=O)=C(S([O-])(=O)=O)C=C1N1[N+](C=2C(=CC(=C(C=2)S(O)(=O)=O)[N+]([O-])=O)OC)=NC(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)=N1 CFBVWCHTNQHZLT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 9-Heptadecensaeure Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O QSBYPNXLFMSGKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 244000144725 Amygdalus communis Species 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N Chlorhexidine Chemical compound C=1C=C(Cl)C=CC=1NC(N)=NC(N)=NCCCCCCN=C(N)N=C(N)NC1=CC=C(Cl)C=C1 GHXZTYHSJHQHIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588923 Citrobacter Species 0.000 description 1
- HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N Clavulanic acid Natural products OC(=O)C1C(=CCO)OC2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N D-alpha-Tocopheryl Acid Succinate Chemical compound OC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C IELOKBJPULMYRW-NJQVLOCASA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 239000004287 Dehydroacetic acid Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241001495410 Enterococcus sp. Species 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241000208341 Hedera Species 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000005913 Maltodextrin Substances 0.000 description 1
- 229920002774 Maltodextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000005642 Oleic acid Substances 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N Oleic acid Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(O)=O ZQPPMHVWECSIRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 239000004264 Petrolatum Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000153 Povidone-iodine Polymers 0.000 description 1
- 239000012979 RPMI medium Substances 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N Sorbitan monostearate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O HVUMOYIDDBPOLL-XWVZOOPGSA-N 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 241001415849 Strigiformes Species 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N Triclosan Chemical compound OC1=CC(Cl)=CC=C1OC1=CC=C(Cl)C=C1Cl XEFQLINVKFYRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 230000036579 abiotic stress Effects 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012675 alcoholic extract Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000842 anti-protozoal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004365 benzoic acid Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000002815 broth microdilution Methods 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229960005229 ceftiofur Drugs 0.000 description 1
- ZBHXIWJRIFEVQY-IHMPYVIRSA-N ceftiofur Chemical compound S([C@@H]1[C@@H](C(N1C=1C(O)=O)=O)NC(=O)\C(=N/OC)C=2N=C(N)SC=2)CC=1CSC(=O)C1=CC=CO1 ZBHXIWJRIFEVQY-IHMPYVIRSA-N 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 229960000800 cetrimonium bromide Drugs 0.000 description 1
- 229960003260 chlorhexidine Drugs 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical group C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004106 citric acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N clavulanic acid Chemical compound OC(=O)[C@H]1C(=C/CO)/O[C@@H]2CC(=O)N21 HZZVJAQRINQKSD-PBFISZAISA-N 0.000 description 1
- 229960003324 clavulanic acid Drugs 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 235000019258 dehydroacetic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940061632 dehydroacetic acid Drugs 0.000 description 1
- PGRHXDWITVMQBC-UHFFFAOYSA-N dehydroacetic acid Natural products CC(=O)C1C(=O)OC(C)=CC1=O PGRHXDWITVMQBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 150000005690 diesters Chemical class 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L disodium;2-(carboxymethyl)-2-hydroxybutanedioate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O CEYULKASIQJZGP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010228 ethyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000004744 fore-foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N heavy water Substances [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000749 insecticidal effect Effects 0.000 description 1
- QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N isooleic acid Natural products CCCCCCCC=CCCCCCCCCC(O)=O QXJSBBXBKPUZAA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940119170 jojoba wax Drugs 0.000 description 1
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 1
- 229940035034 maltodextrin Drugs 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229940057917 medium chain triglycerides Drugs 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- HWPKGOGLCKPRLZ-UHFFFAOYSA-M monosodium citrate Chemical compound [Na+].OC(=O)CC(O)(C([O-])=O)CC(O)=O HWPKGOGLCKPRLZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000018342 monosodium citrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002524 monosodium citrate Substances 0.000 description 1
- 239000002101 nanobubble Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001069 nematicidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N nitrilotriacetic acid Chemical class OC(=O)CN(CC(O)=O)CC(O)=O MGFYIUFZLHCRTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-M oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC([O-])=O ZQPPMHVWECSIRJ-KTKRTIGZSA-M 0.000 description 1
- 229940049964 oleate Drugs 0.000 description 1
- 150000002888 oleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000668 oral spray Substances 0.000 description 1
- 229940041678 oral spray Drugs 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- RARSHUDCJQSEFJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxypropiophenone Chemical compound CCC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 RARSHUDCJQSEFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 229940066842 petrolatum Drugs 0.000 description 1
- 235000019271 petrolatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 229960005323 phenoxyethanol Drugs 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229960001635 pirlimycin Drugs 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 159000000001 potassium salts Chemical class 0.000 description 1
- RMGVATURDVPNOZ-UHFFFAOYSA-M potassium;hexadecyl hydrogen phosphate Chemical compound [K+].CCCCCCCCCCCCCCCCOP(O)([O-])=O RMGVATURDVPNOZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 229960001621 povidone-iodine Drugs 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 150000003242 quaternary ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 235000020185 raw untreated milk Nutrition 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229920002545 silicone oil Polymers 0.000 description 1
- 239000000344 soap Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 1
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940037001 sodium edetate Drugs 0.000 description 1
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 1
- JACYMBNQPPWQML-UHFFFAOYSA-M sodium;4-methoxy-5-[3-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfonatophenyl)-5-(phenylcarbamoyl)tetrazol-3-ium-2-yl]-2-nitrobenzenesulfonate Chemical compound [Na+].COC1=CC([N+]([O-])=O)=C(S([O-])(=O)=O)C=C1N1[N+](C=2C(=CC(=C(C=2)S([O-])(=O)=O)[N+]([O-])=O)OC)=NC(C(=O)NC=2C=CC=CC=2)=N1 JACYMBNQPPWQML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011076 sorbitan monostearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001587 sorbitan monostearate Substances 0.000 description 1
- 229940035048 sorbitan monostearate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N tocofersolan Chemical compound OCCOC(=O)CCC(=O)OC1=C(C)C(C)=C2O[C@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C AOBORMOPSGHCAX-DGHZZKTQSA-N 0.000 description 1
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 1
- 229960000716 tonics Drugs 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 229960003500 triclosan Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 1
- 229940099259 vaseline Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007966 viscous suspension Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000012711 vitamin K3 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011652 vitamin K3 Substances 0.000 description 1
- 229940041603 vitamin k 3 Drugs 0.000 description 1
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 1
- 239000003357 wound healing promoting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000230 xanthan gum Substances 0.000 description 1
- 235000010493 xanthan gum Nutrition 0.000 description 1
- 229920001285 xanthan gum Polymers 0.000 description 1
- 229940082509 xanthan gum Drugs 0.000 description 1
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 1
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 1
Description
Настоящее изобретение относится к новому жидкому стандартизованному экстракту прополиса, к способу производства новой фармацевтической композиции на основе упомянутого экстракта и к его применению.
Техническая проблема
Что касается того факта, что прополис представляет собой смесь пчелиного воска и большого количества природных органических соединений, различные процессы экстракции дают экстракты с очень разным составом активных веществ. С использованием хемоселективных экстракционных растворителей (ES), которые обладают способностью к селективной экстракции преимущественно определенных групп органических соединений, вместе с использованием подходящих аналитических методов теоретически возможно получить согласованный и стандартизованный состав экстракта прополиса.
Технические задачи, решаемые настоящим изобретением, включают (i) безалкогольный жидкий экстракт прополиса, который будет характеризоваться высоким и стандартизированным содержанием фенольных прополисовых кислот, пара-кумаровая кислота (1), трансферуловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2-фенилэтиловый эфир кофейной кислоты, 2-фенетил-3,4дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ), для которых известны несколько фармакологической активностей как на человеческие, так и на животные организмы;
(ii) способ его изготовления;
(iii) применение для производства фармацевтических, косметических, ветеринарных, агрохимических или пищевых продуктов с известным стандартизированным содержанием активных веществ прополиса 1-4; и особенно (iv) фармацевтическая композиция на основе указанного экстракта прополиса, которая будет эффективна при лечении воспалительных и инфекционных заболеваний, а также заболеваний и состояний, при которых антиоксидантная, противовоспалительная и иммуномодулирующая активность определенных активных веществ прополиса играет важную роль в этиологии заболеваемости, о чем свидетельствуют некоторые источники информации в современном уровне техники.
Такие безалкогольные экстракты с незначительным содержанием пчелиного воска и других балластных соединений прополиса с высоким и стандартизованным содержанием высокобиоактивных ингредиентов прополиса представляют собой основу для разработки и производства высокоценных фармацевтических, ветеринарных, агрохимических или функциональных пищевых продуктов или пищевых добавок. Напротив, использование для этой цели стандартных экстрактов прополиса на основе этанола, глицерина или 1,2-пропиленгликоля сопряжено с различными трудностями, такими как неизвестное содержание вышеупомянутых активных веществ прополиса или низкий количественный состав ценных фенольных кислот и САРЕ относительно флавоноидных ингредиентов прополиса.
Настоящее изобретение относится к (i) примненению состава специального экстракционного растворителя (ES), который служит для хемоселективного процесса экстракции сырого прополиса;
(ii) способу количественного определения активных ингредиентов прополиса, включая основные активные вещества 1-4;
(iii) стандартизации приготовленного таким образом жидкого экстракта прополиса путем разбавления определенным количеством того же экстракционного растворителя до желаемого уровня активных веществ 1 -4 согласно настоящему изобретению; где указанный экстракционный растворитель состоит из двух или более пищевых и фармацевтически приемлемых веществ, а также в конечном продукте жидкий стандартизованный экстракт прополиса. Этот же растворитель для экстракции играет роль носителя или разбавителя; и (iv) фармацевтическая композиция, основанная на указанном стандартизированном экстракте прополиса согласно настоящему изобретению, которая оказалась эффективным средством для лечения воспалительных и инфекционных заболеваний. Благодаря широкому спектру фармакологической активности, она может использоваться для лечения различных заболеваний и состояний, таких как: воспалительные заболевания, бактериальные и грибковые инфекции, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, для регенерации слизистой оболочки, лечения ожогов и ран и раковых заболеваний.
- 1 044986
Предыдущий уровень техники
Прополис - это натуральный продукт, собираемый пчелами, служит который для них клеем для закрытия мелких нежелательных отверстий в ульях. Прополис содержит в качестве основного ингредиента пчелиный воск и большое количество различных органических соединений. Многие из них обладают значительными благотворными фармакологическими эффектами; см., например, источник информации 1:
1) С. Кастальдо, Ф. Капассо: прополис и старое лекарство, используемое в современной медицине, Фитотерапия 73 (2002) S1-6.
Помимо упомянутых активных веществ 1-4, прополис содержит целый ряд других природных соединений, например, среди кислот он также содержит транс-коричную кислоту (5) и ряд флавоноидов с относительно большим количеством хризина (6), пиноцембрина (7), галангина (8), апигенина (9) и кемпферола (10):
Традиционно сырой прополис экстрагируют этанолом или смесями этанола и воды, получая так называемые настойки прополиса. Такие жидкие экстракты прополиса характеризуются рядом недостатков:
(i) наличие относительно агрессивного растворителя (этанола);
(ii) спиртосодержащие продукты не подходят детям, беременным и кормящим женщинам и некоторым пациентам; и (iii) относительно высокое содержание пчелиного воска, что обуславливает его дезагрегация на стадии смешивания с водой во время производства фармацевтических и других продуктов, когда такой экстракт используется в качестве активного ингредиента.
Помимо этанола, в качестве экстракционного растворителя использутся глицерин, вода, смеси глицерина и воды, а также другие органические растворители.
Таким образом, Т. Цукада и соавторы раскрыли использование глицерина в качестве экстракционного растворителя при соотношении прополис: экстракционный растворитель, 1:2 по весу, при температуре 90-160°С с последующей фильтрацией. Такие экстракты глицерина водорастворимы и подходят для производства фармацевтических продуктов в качестве активного фармацевтического ингредиента (API); см. источник информации 2:
2) JPH05957A; Т. Цукада, ЗВ. Камеда, М. Иде: Производство водорастворимого фармацевтического препарата прополиса; Огава Коре К.К., Сантапурон К.К. (Япония).
Водные экстракты прополиса также описаны в предшествующем уровне техники. Экстракцию водой в качестве экстрационного растворителя (ES) можно проводить при температуре 30-50°С в течение 6-8 минут, что после фильтрации дает непосредственно жидкий экстракт прополиса. Последний в конечном итоге может быть дополнительно переработан путем микрокапсулирования с помощью технологии распылительной сушки на подходяих носителях, такие как мальтодекстрин и гуммиарабик, в твердые экстракты; см. источник информации 3:
3) CN103783349A; 3. Ван, С. Шао, X. Ма, С. Ван, Л. Ван, К. Чжан, X. Ма: Способ для производства микрокапсул для экстракции полифенолов в виде сот с помощью спрея; Университет Цзянсу (Китай).
Использование поверхностно-активных агентов в качестве компонентов экстракционного растворителя (ЕР), которые включают лецитины, обычно известно из предшествующего уровня техники. Например, Парадкар и его сотрудники описали процесс экстракции прополиса с использованием водного растворителя полисорбата при температуре 40-90°С в течение 2-24 часов с получением жидкого экстракта прополиса; см. источник информации 4:
4) WO 2011092511А1; А. Парадкар, Р. Дхумал, А. Келли, С. Гильда: Прополис и способ его обработки и конечные продукты, полученные из него; Natures Lab Ltd (Великобритания).
Сосновский раскрыл способ экстракции прополиса различными органическими растворителями, включая 1,2-пропиленгликоль, полиэтиленгликоль (PEG) и смеси этих растворителей с водой; см. ссылку на литературу 5:
5) US 4382886; 3.М. Сосновский: Метод извлечения прополиса и водорастворимого сухого порошка
- 2 044986 прополиса.
Chun и соавторы раскрыли фармацевтическую композицию, которая, среди прочего, основана на жидком экстракте прополиса в 1,3-бутиленгликоле в качестве экстракционного растворителя, который при использовании гидрогенизированного лецитина вместе с другими эмульгаторами превращается в фармацевтическую лекарственную форму, содержащую наночастицы с экстрактом прополиса; см. источник информации 6:
6) KR 20130134800 А; YJ Chun, SB Shim, X. Ke: Состав нанопузырьков, содержащих прополис, и способ его производства; Университет Чхунгун IACF (KR).
Несмотря на то, что в этом документе не используется лецитин для облегчения экстракции активных веществ прополиса с помощью 1,3-бутиленгликоля, безусловно, предлагается возможность его использования в качестве поверхностно-активного вещества, которое в конечном итоге может улучшить экстракцию и эмульгирование некоторых жирных активных ингредиентов прополиса в более полярных растворителях.
Что касается анализа прополиса, в уровне техники существует большое количество аналитических способов для количественного определения активных веществ прополиса в сложных экстрактах прополиса, которые содержат большое количество ингредиентов. В качестве примера аналитический способ, аналогичный используемому в настоящем изобретении, приводится в работе китайских авторов ЦуйПинга и его сотрудников. Они описали количественный способ определения 12 различных флавоноидов и 8 фенольных прополисовых кислот с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC). Этот способ, среди прочего, позволяет определять пара-кумаровую кислоту (1), трансферуловую кислоту (2) и кофейную кислоту (3), которые упоминаются как качественные маркеры прополиса; см. источник информации 7:
7) Z. Cui-ping, H. Shuai, W. Wen-ting, P. Shun, S. Xiao-ge, L. Ya-jing, H. Fu-liang: Разработка высокоэффективной жидкостной хроматографии для контроля качества и подлинности китайского прополиса, J. Food Sci. 79 (2014) С1315-С1322.
Благодаря содержанию активных веществ 1-10 и других, прополис и прополис-экстракт оказывают ряд очень ценных и полезных фармакологических эффектов на здоровье человека, животных и растений. В предшествующем уровне техники существует большое количество научных и патентных документов, подтверждающих широкий спектр положительных эффектов, среди которых наиболее значительными являются следующие: противовоспалительный эффект; эффект антиоксиданта; иммуномодулирующий эффект; гепатопротекторный эффект; противомикробные эффекты, включая антибактериальные, противовирусные, противогрибковые и противопротозойные; и противоопухолевые; см., например, источники информации 8-12:
8) EL Ghisalberti: Прополис: Обзор, Bee World 60 (1979) 59-84;
9) А. Банскота, Ю. Тезука, С. Кадота: недавний прогресс в фармакологических исследованиях прополиса, фитотер. Res. 15 (2001) 561-571;
10) Г. А. Лопух: Обзор биологических свойств и токсичности пчелиного прополиса (прополиса), FoodChem. Toxicol.36 (1998) 347-363;
11) JM Сфорцин: прополис и иммунная система: обзор, J. Ethnopharmacol. 113 (2007) 1-14;
12) Ю.В. Добровольский, SB Vohora, K. Sharma, SA Shah, SAH Naqvi, PC Dandiya: Антибактериальные, противогрибковые, антиамебные, противовоспалительные и жаропонижающие исследования продуктов пчеловодства на основе прополиса, J. Ethnopharmacol. 35 (1991) 77-82.
Помимо экстрактов прополиса, в предшествующем уровне техники описан целый ряд полезных фармакологических эффектов для некоторых выделенных (чистых) активных веществ прополиса, например:
(i) п-кумаровая кислота (1); см. источники информации 13 и 14;
(ii) транс-феруловая кислота (2); см. источники информации 15 и 16;
(iii) кофейная кислота (3); см. источники информации 17 и 18; а также (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ); см. источники информации 19 и 20, которые, среди прочего, обладают иммуномодулирующим, противовоспалительным и антимикробным действием:
13) TF Bachiega, CL Orsatti, AC Pagliarone, JM Sforcin: Влияние прополиса и его изолированных соединений на продукцию цитокинов мышиными макрофагами, Phytother. Res. 26 (2012) 1308-1313;
14) К. Пей, Дж. Оу, Дж. Хуанг, С. Оу: пара-кумаровая кислота и ее конъюгаты: пищевые источники, фармакокинетические свойства и биологическая активность, J. Sci. Продовольственное сельское хозяйство. 96 (2016) 2956-2962;
15) Н. Кумар, В. Прути: Возможные применения феруловой кислоты из природных источников, Biotechnol. Отчет 4 (2014) 86-93;
16) К. Ши, X. Чжан, Ю. Сунь, М. Ян, К. Сун, 3. Чжэн, Ю. Чен, X. Лю, 3. Цзя, Р. Донг, Л. Цуй, X. Ся: антимикробное действие феруловой кислоты против Cronobacter sakazakii и возможный механизм действия, Foodborne Pathog. Дис. 13 (2016) 196-204;
17) HG Choi, PT Tran, JH Lee, BS Min, JA Kim: Противовоспалительная активность производных
- 3 044986 кофейной кислоты, выделенных из корней Salvia miltiorrhiza Bunge, Arch. Pharm. Res. (2018) 64-70;
18) B.H. Лима, С.Д. Оливейра-Тинтино, Э.С. Сантос, Л.П. Мораис, С.Р. Тинтино, Т.С. Фрейтас,
Ю.С. Джеральдо, Р.Л. Перейра, Р.П. Круз, И.Р. Менезес, HD Коутиньо: Противомикробные средства и усиление антибиотической активности фенольными соединениями: галловая кислота, кофеиновая кислота и пирогаллол, Microb. Патог. 99 (2016) 56-61;
19) К. Френкель, X. Вэй, Р. Бхимани, Дж. Е, Дж. Задунайский, М.-Т. Хуанг, Т. Ферраро, А.Х. Конней, Д. Грюнбергер: Ингибирование процессов, опосредованных промотором опухоли, в коже мышей и линзах крупного рогатого скота фенетиловым эфиром кофейной кислоты, Cancer Res. 53 (1993) 12551261;
20) А. Руссо, Р. Лонго, A. Vanella: Антиоксидантная активность прополиса: роль фенетилового эфира кофейной кислоты и галангина, Fitother. 73 (2002) S21-S29.
Кроме того, активные вещества прополиса представляют собой фунгициды, бактерициды, вирулициды, инсектициды, нематоциды и используются для защиты растений. Благодаря сильной антиоксидантной активности прополис укрепляет растения и повышает их устойчивость к абиотическому стрессу и помогает им бороться с инфекциями, см. источники информации 21-25:
21) СА Гугински-Пива, И. душ Сантуш, А. В. Жуниор, Д. В. Хек, М. Ф. Флорес, К. Пазолини: Прополис для борьбы с мучнистой росой и индукции фитоалексинов в огурцах, IDESIA (Чили) 33 (2015) 39-47;
22) Z. Ararso, G. Legesse: Инсектицидное действие экстракта прополиса медоносных пчел против личинок малой восковой моли, Agric. Биол. J. North Am. (2015) DOI: 10.5251 / abjna.2016.7.6.302.306;
23) Л. Кумар, М. К. Махатма, К. А. Калария, С.К. Биши, А. Манн: Растительные фенолы: важное биологическое оружие против патогенов и насекомых-травоядных, Popular Kheti 2 (2014) 149-152;
24) ЭМ Noweer, MG Dawood: Эффективность экстракта прополиса на растениях фасоли и его роль в борьбе с нематодной инфекцией, Commun. Agric. Прил. Биол. Sci. 74 (2009) 593-603;
25) К. Кульбат: Роль фенольных соединений в устойчивости растений, Biotechnol. Food Sci. 80 (2016) 97-108.
Насколько нам известно, использование специального экстракционного растворителя (ES) на основе жидкого полиэтиленгликоля с низким (0,1-3,5 вес.%) содержанием лецитина в качестве усилителя хемоселективности экстракции прополиса не описывалось в предшествующем уровене техники. Применение таких специфических ES по настоящему изобретению позволяет повысить хемоселективность экстракции сырого прополиса, давая соответствующий жидкий экстракт со значительно повышенным содержанием соответствующих активных веществ 1-4.
Кроме того, использование упомянутого конкретного стандартизованного жидкого экстракта прополиса в качестве активного фармацевтического ингредиента (API) в фармацевтической композиции, согласно настоящему изобретению, обеспечивает неожиданное улучшение ряда различных показаний к его применению, как описано в подробном описании этого изобретения.
Краткое изложение сущности изобретения
Настоящее изобретение основано на неожиданной эффективности и хемоселективности экстракции сырого прополиса специальным экстракционным растворителем (ES).
Последний состоит из смеси жидкого полиэтиленгликоля (PEG), например PEG 400, и лецитина или гидролизованного лецитина в соотношении 96,5-99,9 : 0,1-3,5 по весу.
Экстракционный растворитель (ES) эффективно и хемоселективно извлекает следующие активные вещества прополиса: п-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2фенэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4); САРЕ). Использование подходящего аналитического способа, основанного на высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), позволяет количественно определять активные вещества 1-4, приготовленные первичным экстрактом. Последний подвергают дальнейшей стандартизации путем разбавления тем же ES, который использовался на стадии экстракции, до желаемого содержания активных веществ 1-4 в соответствии с настоящим изобретением. Таким образом, получают жидкий экстракт прополиса с известными и стандартизованными концентрациями основных активных веществ 1-4 согласно настоящему изобретению. Он также используется в качестве активного фармацевтического ингредиента (API), активного косметического ингредиента (ACI), или в качестве пищевого ингредиента для производства функциональных продуктов питания и пищевых добавок.
Композиция по настоящему изобретению на основе указанного жидкого экстракта прополиса, который содержит основные активные вещества п-кумаровую кислоту (10-1300 мкг/мл), трансферуловую кислоту (10-800 мкг/мл), кофейную кислоту (5-300 мкг /мл) и 2-фенэтил-3,4-дигидрокситрансциннамат (5-400 мкг/мл) является эффективным средством в терапии воспалительных заболеваний, бактериальных инфекций, грибковых инфекций, вирусных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, функциональных желудочно-кишечных расстройств, для регенерации слизистой оболочки, лечения ожогов и ран, а также при лечении онкологических заболеваний.
Описание чертежей
Фиг. 1 показывает типичную хроматограмму HPLC основных ингредиентов прополиса 1-4 и сопутствующих ингредиентов 5-10.
Фиг. 2.1-2.4 показаны результаты измерения количественного состава активных веществ 1-4 в жид- 4 044986 ких экстрактах прополиса, полученных экстракцией этанолом (96%) и смесями этанола с различными видами и концентрациями лецитинов.
Фиг. 2.5-2.10 показаны результаты измерения количественного состава сопутствующих веществ 510 в жидких экстрактах прополиса, полученных экстракцией этанолом (96%) и смесями этанола с различными видами и концентрациями лецитинов.
Фиг. 3.1-3.4 показаны результаты измерения количественного состава активных веществ 1-4 в жидких экстрактах прополиса, полученных экстракцией полиэтиленгликолем 400 и смесями полиэтиленгликоля 400 с различными видами и концентрациями лецитинов.
Фиг. 3.5-3.10 показаны результаты измерения количественного состава сопутствующих веществ 510 в жидких экстрактах прополиса, полученных экстракцией полиэтиленгликолем 400 и смесями полиэтиленгликоля 400 с различными видами и концентрациями лецитинов.
Фиг. 4 показывает блок-схему способа производства стандартизированного жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению.
Фиг. 5 показывает типичную хроматограмму HPLC количественного анализа фармацевтического состава по настоящему изобретению, продукта из примера 11.
Сокращения.
ES - экстракционный растворитель.
SL - соевый лецитин (Глицин макс. Л.).
RL - рапсовый лецитин (Brassica napus Л.).
HRL - гидролизованный соевый лецитин.
SUL - обезжиренный лецитин подсолнечника.
EtOH - 96% этанол.
PEG - полиэтиленгликоль.
HPLC - высокоэффективная жидкостная хроматография.
GC - газовая хроматография.
TLC - тонкослойная хроматография.
MIC - минимальная ингибирующая концентрация.
RPMI - среда для культур клеток и тканей.
ТТС - 2,3,5-трифенил-2Н-тетразолий хлорид, окислительно-восстановительный индикатор.
PBS - фосфатный буфер в физиологическом растворе.
КОЕ - колониеобразующие единицы; количество живых микроорганизмов, способных образовывать колонии. ХТТ - Натриевая соль ХТТ; 2,3-бис(2-метокси-4-нитро-5-сульфофенил)-2Н-тетразолий-5карбоксанилид внутренняя соль, окислительно-восстановительный индикатор.
MRSA - Метициллин-резистентный золотистый стафилококк. MSSA - Метициллин-чувствительный золотистый стафилококк. CLSI - Институт клинических и лабораторных стандартов.
EUCAST - Европейский комитет по тестированию на чувствительность к противомикробным препаратам.
API - активный фармацевтический ингредиент/вещество.
DER - лекарственное средство: экстракт, весовое соотношение; мера силы экстрактов, выраженная массовым соотношением исходного лекарственного средства и конечного экстракта.
SCC - количество соматических клеток, i.mam. - интрамаммарное применение.
АТСС - Американская коллекция типовых культур; некоммерческая организация, которая собирает, хранит и распространяет стандартные эталонные микроорганизмы.
ЦНС - коагулазонегативные стафилококки.
Подробное описание сущности изобретения
Настоящее изобретение относится к новому жидкому экстракту прополиса, стандартизованному по содержанию основных активных веществ, выбранных из группы, состоящей из: п-кумаровой кислоты (1), трансферуловой кислоты (2), кофейной кислоты (3) и 2-фенилэтиловый эфир кофейной кислоты, 2фенетил-3,4-дигидрокситрансциннамат (4), способу его производства и его применению.
Жидкий экстракт прополиса, применяемый в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента, согласно настоящему изобретению, содержит:
(A) сухой экстракт прополиса: 0,1-10,0 вес.%; и
- 5 044986 (B) экстракционный растворитель: 90,0-99,9 вес.%; где экстракционный растворитель содержит:
(B.1) один или несколько жидких полиэтиленгликолей (PEG) 200-600: 96,5-99,9 вес.%; и (B.2) лецитин или гидролизованный лецитин: 0,1-3,5 вес.%; где указанный жидкий экстракт прополиса стандартизирован по:
(I) количественному массовому соотношению сырого прополиса, применяемому в качестве лекарственного средства и конечного экстракта (DER) в соотношении: 1:2 - 1:20 по весу; и (II) количественному содержанию активных веществ, выбранных из группы, состоящей из: пкумаровой кислоты (1), транс-феруловой кислоты (2), кофейной кислоты (3) и 2-фенилэтил-3,4дигидроксициннамата (4), где количественный состав, минимум двух из четырех указанных основных активных веществ, следующий:
(I) n-кумаровая кислота (1): 100-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 75-800 мкг/мл; (iii) кофейная кислота (3): 25-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил 3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ): 40-400 мкг/ мл.
В предпочтительном варианте осуществления этого изобретения жидкий полиэтиленгликоль (PEG), применяемый в качестве компонента экстракционного растворителя (ES) выбран из группы, состоящей из: полиэтиленгликоля 200, полиэтиленгликоля 300, полиэтиленгликоля 400, полиэтиленгликоля 600 или смеси этих веществ.
В частности, жидкий полиэтиленгликоль (PEG), применяемый в качестве компонента экстракционного растворителя (ES) выбирается из группы, состоящей из: полиэтиленгликоля 200, полиэтиленгликоля 400 или смесей этих веществ.
Кроме того, лецитин или гидролизованный лецитин выбран из группы, состоящей из продуктов, характеризующихся коэффициентом гидрофильно-липофильного баланса (HLB) от 2 до 12, и выбран из группы, состоящей из: лецитина сои (SL; из Glycine max. L. ); лецитина подсолнечника (SUL; из Helianthus annuus L.); рапсового лецитина (RL; из Brassica napus L.); лецитина канолы (Brassica rapa L.); лецитина из куриных яиц (Gallus gallus domesticus L.); обезжиренных продуктов указанных лецитинов; гидрированныех лецитинов из указанных источников; гидролизованных лецитинов из указанных источников; модифицированных ферментами производных указанных лецитинов; или смеси этих веществ.
В частности, в качестве лецитина в настоящем изобретении используется природный лецитин, обезжиренный, гидрогенизированный, гидролизованный или ферментно-модифицированный лецитин из сои (Glycine max. L.), подсолнечника (Helianthus annuus L.), семян рапса (Brassica napus L.) или канолы (Brassica rapa L.); или могут использоваться смеси этих веществ.
Термин ферментно-модифицированный лецитин включает гидролизованный лецитин, полученный ферментативно-катализируемым гидролизом одного фрагмента высшей жирной кислоты с образованием моноэфира глицерина и высших жирных кислот с оставшимися фосфатными и холиновыми группами в молекуле. Это приводит к значительному увеличению фактора HLB такого гидролизованного лецитина.
Предпочтительно в качестве экстракционного растворителя (ES) для производства жидкого экстракта прополиса, согласно настоящему изобретению, используется смесь, содержащая:
(I) полиэтиленгликоль (PEG) 200, полиэтиленгликоль 300, полиэтиленгликоль 400 или их смеси: 9799 вес.%; и (ii) природный лецитин, обезжиренный лецитин или гидролизованный лецитин из сои (Glycine max. L.), подсолнечника (Helianthus annuus L.), рапса (Brassica napus L.) или канолы (Brassica rapa L.): 1-3 вес.%; или могут быть использованы смеси этих веществ.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения жидкий экстракт прополиса, согласно настоящему изобретению, стандартизирован по:
(I) количественному массовому соотношению сырого прополиса, применяемый в качестве лекарственного средства к конечному экстракту (DER) в соотношении: 1:3-1:5 по весу; и (II) количественному составу активных веществ, выбранных из группы, состоящей из: п-кумаровой кислоты (1), транс-феруловой кислоты (2), кофейной кислоты (3) и 2-фенилэтил-3,4дигидроксициннамата (4), где количественный состав, минимум двух из четырех указанных основных активных веществ, следующий:
(i) n-кумаровая кислота (1): 500-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 300-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3): 100-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил 3,4-дигидрокси-циннамат (4; САРЕ): 100-400 мкг/мл.
Аналитика активных веществ прополиса в жидких экстрактах
Для разработки нового стандартизованного жидкого экстракта прополиса, согласно настоящему изобретению, необходимо разработать подходящий аналитический способ количественного определения следующих веществ:
(i) основные активные вещества прополиса, выбранные из группы, состоящей из:
п-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2-фенилэтил-3,4дигидроксициннамат (4); и (ii) сопутствующие активные вещества, выбранные из группы, состоящей из: транскоричная кисло-
- 6 044986 та (5), хризин (6), пиноцембрин (7), галангин (8), апигениа (9) и кемпферол (10).
Для первоначального изучения указанного аналитического способа необходимо было приготовить модельные жидкие экстракты прополиса. Использовали модельные экстракты прополиса в этаноле (96%) и полиэтиленгликоле. Их получали стандартным способом экстракции путем мацерации при комнатной температуре в течение 24 ч. Затем нерастворенный остаток отделяли фильтрованием, и прозрачный фильтрат использовали в качестве модельного жидкого экстракта прополиса для дальнейшего изучения. В качестве модельного жидкого полиэтиленгликоля использовался полиэтиленгликоль 400 (PEG 400). Процедуры производства модельных жидких экстрактов прополиса в классических экстракционных растворителях, этаноле (96%) и полиэтиленгликоле 400, описаны в примере 1 (96% этанол) и примере 2 (PEG 400).
Был разработан подходящий аналитический способ, основанный на высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC), с помощью которого было достигнуто успешное разделение всех 10 указанных соединений 1-10. Способ подробно описан в примере 3.
Типичная хроматограмма HPLC, полученная данным аналитическим способом, показана на фиг. 1. Время удерживания (tR) соединений 1-10 представлено в табл. 1.
Таблица 1
Время удерживания активных веществ прополиса 1-10, согласно способу HPLC, настоящего изобретения
№ | Действующее вещество прополиса | Время удерживания (1R) [мин] |
1 | п-кумаровая кислота (1) | 14,13 |
2 | транс-феруловая кислота (2) | 15.31 |
3 | кофейная кислота (3) | 10,57 |
4 | 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-трансциннамат (4) | 48,62 |
5 | отрш/с-коричная кислота (5) | 29,76 |
6 | хризин (6) | 44,68 |
7 | пиноцембрин (7) | 47,39 |
8 | галангин (8) | 49,94 |
9 | апигенин (9) | 37,72 |
10 | кемпферол (10) | 36,87 |
a Хроматографическая колонка: Ascentis express; C18; размеры: 15 смх3,0 мм; диаметр частиц в колонке: 2,7 мкм; подвижная фаза: А = 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, В = метанол; градиент: 0 мин, 80% А, 20% В; 3 мин, 70% А, 30% В; 60 мин, 20% А, 80% В;90 мин, 20% А, 80% В; 100 мин, 70% А, 30% В; 105 мин, 80% А, 20% В; температура колонки: 30°С; поток: 0,25 мл / мин; время анализа: 110 мин; длина волны на детекторе UV-VIS: для обнаружения: 370 нм, для интегрирования 290 нм; объем закачки: 10 мкл; давление: 210-290 бар
Изучение влияния лецитина на эффективность экстракции активных веществ прополиса 1-4.
В продолжение этого исследования, влияние различных экстракционных растворителей (ES) с содержанием различных видов (SL, RL, HRL) и концентраций (1-30 весовых) лецитинов на эффективность эктракции активных веществ прополиса 1-4 были изучены, см. табл. 2.
- 7 044986
Таблица 2
Системы экстракционных растворителей (ES) испытаны для экстракции активных веществ 1-4 прополиса
№ | Растворитель | Лецитин | Соотношение веса растворитель: лецитин (по весу) | Эксперимент |
1 | EtOH | - | - | Пример 1 |
2 | EtOH | SL | 97: 3 | Пример 4, Е1 |
3 | EtOH | SL | 90: 10 | Пример 4, Е2 |
4 | EtOH | SL | 80: 20 | Пример 4, ЕЗ |
5 | EtOH | SL | 70: 30 | Пример 4, Е4 |
6 | EtOH | RL | 98,9: 1,1 | Пример 4, Е5 |
7 | EtOH | RL | 96: 4 | Пример 4, Е6 |
8 | EtOH | HRL | 97,8: 2,2 | Пример 4, Е7 |
9 | EtOH | HRL | 92,3: 7,7 | Пример 4, Е8 |
10 | PEG 400 | - | - | Пример 2 |
И | PEG 400 | SR | 97: 3 | Пример 5, Е1 |
12 | PEG 400 | SR | 90: 10 | Пример 5, Е2 |
13 | PEG 400 | RL | 98,9: 1,1 | Пример 5, ЕЗ |
14 | PEG 400 | RL | 96: 4 | Пример 5, Е4 |
15 | PEG 400 | HRL | 97,8: 2,2 | Пример 5, Е5 |
16 | PEG 400 | HRL | 92,3: 7,7 | Пример 5, Е6 |
EtOH = 96% этанол; PEG 400 = полиэтиленгликоль 400; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = гидролизованный лецитин рапсового масла. |
Приготовленные, таким образом, жидкие экстракты прополиса подвергали количественному анализу на содержание основных активных веществ 1-4 и сопровождаемых активных веществ 5-10. Результаты представлены в табл. 3-6.
В случае использования экстракционного растворителя (ES) на основе 96% этанола (EtOH) и смесей EtOH и различных видов (SL, RL, HRL) и концентраций (1-30 вес.% в составе композиции ES), первичные жидкие экстракты прополиса содержат п-кумаровую кислоту (1; приблизительно 800-1250 мкг/мл), транс-феруловую кислоту (2; приблизительно 485-770 мкг/мл), кофейную кислоту (3; приблизительно 185-290 мкг/ мл) и 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ; приблизительно 215-320 мкг/мл), применяемый в качестве доминирующих активных ингредиентов, см. табл. 3.
- 8 044986
Таблица 3
Количественный состав активных веществ 1-4 в жидких экстрактах прополиса, полученных с помощью экстракционных растворителей (ES) на основе этанола
ES | и-кумаровая кислота(1) у[мкг / мл] (Фигура 2.1) | транс-др ерул овая кислота(2) γ [мкг / мл] (Фигура 2.2) | кофеиновая кислота (3) γ [мкг / мл] (Фигура 2.3) | 2-фенэтил-3,4дигидрокси -трансциннамат (4) γ [мкг / мл] (Фигура 2.4) |
1 | 916,32 | 559,26 | 209,49 | 236,68 |
2 | 820,35 | 501,87 | 186,22 | 216,63 |
3 | 872,51 | 533,16 | 204,30 | 232,98 |
4 | 1116,27 | 679,58 | 251,24 | 289,45 |
5 | 1248,16 | 770,88 | 288,66 | 320,75 |
6 | 808,30 | 485,32 | 185,58 | 231,19 |
7 | 981,25 | 596,21 | 225,33 | 266,46 |
8 | 861,11 | 516,41 | 196,96 | 248,14 |
9 | 945,73 | 582,69 | 228,69 | 263,48 |
Экстракцинный растворитель (ES) | ||||
1 - EtOH | 6-EtOH + 1,1% RL | |||
2 - EtOH + 3% SL | 7 - EtOH + 4% RL | |||
3 - EtOH + 10% SL | 8 - EtOH + 2,2% HRL | |||
4 - EtOH + 20% SL | 9 - EtOH + 7,7% HRL | |||
5 - EtOH + 30% SL | ||||
ES = экстракционный растворитель; EtOH = 96% этанол; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = гидролизованный лецитин рапсового масла. |
При этом концентрации вспомогательных активных веществ 5-10 были на следующем уровне: транс-коричная кислота (примерно 40-65 мкг/мл), хризин (примерно 500-690 мкг/мл), пиноцембрин (примерно 440-670 мкг/мл), галангин (примерно 210-300 мкг/мл), апигенин (примерно 90-150 мкг/мл) и кемпферол (примерно 45-90 мкг/мл)), см. табл. 4.
В случае использования экстракционного растворителя (ES) на основе полиэтиленгликоля (PEG 400) и смесей PEG 400 и различных видов (SL, RL, HRL) и концентраций (1-10 вес.% в составе ES) из лецитинов первичные жидкие экстракты также содержат п-кумаровую кислоту (примерно 750-1300 мкг/мл), трансферуловую кислоту (примерно 400-800 мкг/мл), кофейную кислоту (примерно 140-300 мкг/мл) и 2фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (САРЕ; приблизительно 190-370 мкг/мл), см. табл. 5.
- 9 044986
Таблица 4
Количественный состав сопутствующих активных веществ 5-10 в жидких экстрактах прополиса, полученных с помощью экстракционных растворителей на основе этанола
ES | транскоричная кислота(5) у[мкг/ мл] | хризин (6) у[мкг / мл] | пиноцембрин (Ό у[мкг / мл] | галангин (8) у[мкг / мл] | апигенин (9) у[мкг / мл] | кемпферол (10) у[мкг / мл] |
1 | 48,88 | 521,03 | 496,38 | 232,36 | 103,38 | 54.00 |
2 | 43,06 | 463,66 | 444,22 | 208,74 | 93,41 | 47,72 |
3 | 46,60 | 499,97 | 479,67 | 224,56 | 100,84 | 74,08 |
4 | 58,37 | 623,32 | 594,05 | 267,18 | 127,17 | 62,16 |
5 | 65,92 | 685,81 | 665,44 | 297,85 | 146,91 | 71,11 |
6 | 40,53 | 500,50 | 477,17 | 226,86 | 96,11 | 79,10 |
7 | 51,21 | 576,39 | 552,12 | 263,99 | 115,45 | 87,40 |
8 | 43,15 | 534,08 | 510,26 | 245,27 | 102,79 | 85,78 |
9 | 51,21 | 557,42 | 535,33 | 256,51 | 111,98 | 88,93 |
Экстракционный растворитель (ES) | ||||||
1 - EtOH | 6-EtOH + 1,1% RL | |||||
2 - EtOH + 3% SL | 7 - EtOH + 4% RL | |||||
3 - EtOH + 10% SL | 8 - EtOH + 2,2% HRL | |||||
4 - EtOH + 20% SL | 9 - EtOH + 7,7% HRL | |||||
5 - EtOH + 30% SL | ||||||
ES = экстракционный растворитель; EtOH = 96% этанол; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = гидролизованный лецитин рапсового масла. |
Таблица 5
Количественный состав активных веществ 1-4 в жидких экстрактах прополиса, полученных с использованием экстракционных растворителей (ES), на основе полиэтиленгликоля 400
ЕО | и-кумаровая кислота(1) у[мкг / мл] (Фигура 3.1) | трансферуловая кислота(2) у[мкг / мл] (Фигура 3.2) | кофеиновая кислота (3) у[мкг / мл] (Фигура 3.3) | 2-фенилэтил-3,4дигидрокситранс-циннамат (4) у[мкг / мл] (Фигура 3.4) |
1 | 750,57 | 458,93 | 167,79 | 226,14 |
2 | 1112,08 | 685,14 | 249,67 | 329,41 |
3 | 781,98 | 485,75 | 171,88 | 223,99 |
4 | 1215,61 | 745,35 | 274,49 | 366,41 |
5 | 659,80 | 405,60 | 146,30 | 194,79 |
6 | 1294,35 | 792,50 | 292,18 | 392,23 |
7 | 806,44 | 495,64 | 182,80 | 236,48 |
Экстракционный растворитель (ES) | ||||
1 - PEG 400 | 5 - PEG 400 + 4% от нормы | |||
2 - PEG 400 + 3% SL | 6 - PEG 400 + 2,2% HRL | |||
3 - PEG 400 + 10% SL | 7 - PEG 400 + 7,7% HRL | |||
4 - PEG 400+ 1,1% RL | ||||
ES = экстракционный растворитель; PEG 400 = полиэтиленгликоль 400; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = гидролизованный лецитин рапсового масла. |
В этом случае концентрация вспомогательных активных веществ 5-10 была на уровне: транскоричная кислота - примерно 30-70 мкг/мл, хризин - примерно 400-830 мкг/мл, пиноцембрин - примерно 390-800 мкг/мл, галангин - примерно 190-360 мкг/мл), апигенин - примерно 80-170 мкг/мл) и кемпферол примерно 40-140 мкг/мл, см. табл. 6.
- 10 044986
Таблица 6
Количественный состав сопутствующих активных веществ 5-10 в жидких экстрактах прополиса, полученных с использованием экстракционных растворителей (ES), на основе полиэтиленгликоля 400
ES | транскоричная кислота (5) у[мкг / мл] | хризин (6) у[мкг / мл] | пиноцембрин (Ό у[мкг / мл] | галангин (8) у[мкг / мл] | апигенин (9) у[мкг / мл] | кемпферол (Ю) у[мкг / мл] |
1 | 38,40 | 476,77 | 457,71 | 208,31 | 97,03 | 80,18 |
2 | 57,81 | 681,36 | 649,38 | 293,11 | 145,59 | 68,23 |
3 | 39,28 | 456,61 | 437,36 | 196,76 | 103,89 | 43.00 |
4 | 62,14 | 772,55 | 736,93 | 329,80 | 157,13 | 130,60 |
5 | 32,92 | 412,97 | 391,23 | 172,80 | 84,25 | 44,46 |
6 | 66,58 | 824,77 | 794,67 | 354,62 | 171,29 | 138,94 |
7 | 40,75 | 499,97 | 473,43 | 210,09 | 103,22 | 54,16 |
Экстракционный растворитель (ES)
- PEG 400
- PEG 400 + 3% SL____________
- PEG 400 + 10% SL___________
- PEG 400+ 1,1% RL
- PEG 400 + 4% от нормы б - PEG 400 + 2,2% HRL
- PEG 400 + 7,7% HRL
ES = экстракционный растворитель; PEG 400 = полиэтиленгликоль 400; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = гидролизованный лецитин рапсового масла.
Как видно из результатов, все протестированные лецитины (SL, RL, HRL) в сочетании с любым чистым растворителем, 96% этанолом или полиэтиленгликолем 400 (PEG 400), при использовании в более низких концентрациях, от 1-3 вес.%, входящих в состав экстракционного растворителя (ES), вносят значительный вклад в повышение хемоселективности экстракции активных веществ 1 -4 по сравнению с чи стыми растворителями.
Неожиданный эффект комбинации PEG 400 и лецитина (SL, RL, HRL) проявляется в том факте, что, хотя PEG 400 как чистый растворитель, экстрагирует активные вещества 1-4 значительно слабее, чем 96% этанол (табл. 3; строка 1, столбец 2), при использовании в комбинации с лецитинами (SL, RL, HRL) в концентрации от 1 до 3 вес.% он экстрагирует соединения 1-4 значительно более эффективно по сравнению с аналогичными комбинациями 96% этанола с теми же лецитинами. Например, хотя достигнутая концентрация п-кумаровой кислоты (1) в экстракте, полученном с использованием 100% PEG 400, применяемым в качестве экстракционного растворителя, находилась в диапазоне 750 мкг/мл (табл. 5; строка 1, столбец 2) и с 96% EtOH как ES в диапазоне 916 мкг/мл (табл. 3; строка 1, столбец 2), использование 3% SL в PEG 400 привело к концентрации 1112,08 мкг/мл (табл. 5; строка 2, столбец 2), в случае использования ES на основе 96% этанола с 3 процентым весовым SL.
Из этого типичного примера отчетливо виден совершенно неожиданный эффект комбинации полиэтиленгликоля и лецитина в концентрации от 1 до 3 процентов по весу в растворителе для экстракции (ES). Это может быть экстраполировано специалистом в данной области до приемлемого диапазона оптимального массового процентного содержания лецитина от 0,1-3,5 процентов по весу в составе ESкомпозиции.
При использовании более высоких вес.% лецитина в композиции экстракционного растворителя (ES) полезное влияние лецитина на хемоселективность экстракции прополиса теряется по сравнению с аналогичными системами на основе этанола. Например, при использовании лецитинов в концентрациях от 4% RL, 7,7% HRL или 10% SL в ES были зарегистрированы более низкие концентрации основных активных веществ 1-4 по сравнению с использованием аналогичных систем ES на основе этанола. Типичные результаты показаны в табл. 7 и 8 для двух наиболее распространенных активных веществ: пкумаровой кислоты (1) и трансферуловой кислоты (2).
- 11 044986
Таблица 7
Количественный состав п-кумаровой кислоты (1) в жидких экстрактах прополиса, полученных с использованием различных экстракционных растворителей, согласно настоящему изобретению
ES | и-кумаровая кислота(1) у[мкг / мл] | Процентное изменение в системе PEG 400 ES по сравнению с ES на основе EtOH (%) а | Процентное изменение в системе EtOH ES по сравнению с ES на основе PEG 400 (%) b | |
1 | 916,32 | - | +22,1 | |
2 | 750,57 | -18,1 | - | |
3 | 820,35 | - | -26,2 | |
4 | 1112,08 | +35,6 | - | |
5 | 872,51 | - | +11,6 | |
6 | 781,98 | -10,4 | - | |
7 | 808,30 | - | -33,5 | |
8 | 1215,61 | +50,4 | - | |
9 | 981,25 | - | +48,7 | |
10 | 659,80 | -32,8 | - | |
И | 861,11 | - | -33,5 | |
12 | 1294,35 | +50,3 | - | |
13 | 945,73 | - | +17,3 | |
14 | 806,44 | -14,7 | - | |
Экстракционный растворитель (ES) | ||||
1 - EtOH | 8-PEG 400 + 1,1% РЛ | |||
2 - PEG 400 | 9 - EtOH + 4% RL | |||
3 - EtOH + 3% SL | 10 - PEG 400 + 4% от нормы | |||
4 - PEG 400 + 3% SL | 11 - EtOH + 2,2% HRL | |||
5 - EtOH + 10% SL | 12 - PEG 400 + 2,2% HRL | |||
6 - PEG 400 + 10% SL | 13 - EtOH + 7,7% HRL | |||
7 - EtOH + 1,1% RL | 14 - PEG 400 + 7,7% HRL | |||
ES = экстракционный растворитель; EtOH = 96% этанол; PEG 400 = | ||||
полиэтиленгликоль 400; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = | ||||
гидролизованный лецитин рапсового масла. | ||||
а Увеличение или уменьшение процента (%) концентрации п-кумаровой кислоты (1) | ||||
в экстракте, полученном с ES на основе PEG 400, по сравнению с аналогичными | ||||
ES на основе этанола. | ||||
6 Увеличение или уменьшение процента (%) концентрации п-кумаровой кислоты (1) | ||||
в экстракте, полученном с ES | на основе этанола, по сравнению с аналогичным ES | |||
на основе PEG 400. |
В табл. 7 можно увидеть типичный неожиданный результат настоящего изобретения в строке 8, столбец 3, где наблюдалось увеличение концентрации п-кумаровой кислоты (1) на 50%, когда экстракционный растворитель (ES), PEG 400 + RL (98,9: 1,1 по весу) по сравнению с аналогичным ES на основе EtOH (EtOH + RL = 98,9: 1,1 по весу).
- 12 044986
Таблица 8
Количественный состав транс-феруловой кислоты (2) в жидких экстрактах прополиса, полученных с использованием различных экстракционных растворителей согласно настоящему изобретению
ES | отрш/с-феруловая кислота(2) у[мкг / мл] | Процентное изменение в системе PEG 400 ES по сравнению с ES на основе EtOH (%) а | Процентное изменение в системе EtOH ES по сравнению с ES на основе PEG 400 (%) b | |
1 | 559,26 | - | +21,9 | |
2 | 458,93 | -17,9 | - | |
3 | 501,87 | - | -26,7 | |
4 | 685,14 | +36,5 | - | |
5 | 533,16 | - | +9,8 | |
6 | 485,75 | -10,4 | - | |
7 | 485,32 | - | -33,5 | |
8 | 745,35 | +50,4 | - | |
9 | 596,21 | - | -19,3 | |
10 | 405,60 | +23,9 | - | |
И | 516,41 | - | -34,8 | |
12 | 792,50 | +53,5 | - | |
13 | 582,69 | - | +17,6 | |
14 | 495,64 | -14,9 | - | |
Экстракционный растворитель ι | ES) | |||
1 - EtOH | 8-PEG 400 + 1,1% РЛ | |||
2 - PEG 400 | 9 - EtOH + 4% RL | |||
3 - EtOH + 3% SL | 10 - PEG 400 + 4% от нормы | |||
4 - PEG 400 + 3% SL | 11 - EtOH + 2,2% HRL | |||
5 - EtOH + 10% SL | 12 - PEG 400 + 2,2% HRL | |||
6 - PEG 400 + 10% SL | 13 - EtOH + 7,7% HRL | |||
7 - EtOH + 1,1% RL | 14 - PEG 400 + 7,7% HRL | |||
ES = экстракционный растворитель; EtOH = 96% этанол; PEG 400 = | ||||
полиэтиленгликоль 400; SL = соевый лецитин; RL = рапсовый лецитин; HRL = | ||||
гидролизованный лецитин рапсового масла. | ||||
а Увеличение или уменьшение процента (%) концентрации транс-феруловой | ||||
кислоты (2) в экстракте, полученном с ES на основе | PEG 400, по сравнению с | |||
аналогичным ES на основе этанола. | ||||
6 Увеличение или уменьшение процента (%) концентрации транс-феруловой кислоты | ||||
(2) в экстракте, полученном с ES на основе этанола, по сравнению с аналогичным | ||||
ES на основе PEG 400. |
В качестве еще одного типичного примера неожиданного результата здесь представлены данные в таблице 8, строка 12, столбец 3, где было зарегистрировано 53,5% увеличение концентрации транс-феруловой кислоты (2), когда использовали экстракционный растворитель (ES) PEG 400 и URL (97,8: 2,2 по весу), по сравнению с аналогичным ES на основе 96% этанола.
Способ производства стандартизированного жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению.
Способ производства жидкого экстракта прополиса согласно изобретению, включает следующие этапы:
(i) охлаждение сырого прополиса до температуры -20° С минимум на 1 ч;
(ii) помол охлажденного прополиса с просеиванием через поры 1-8 мм;
(iii) экстракция сырого прополиса экстракционным растворителем при следующих условиях:
(а) массовое соотношение сырого прополиса и экстракционного растворителя равно 1:2-1:20 по весу;
(b) температура экстракции от 10 до 150°С; и (c) время экстракции от 5 мин до 72 ч;
(iv) фильтрация полученной смеси через серию фильтров с порами от 100 мкм до 5 мкм, с образованием нерастворенного остатка и жидкого экстракта прополиса;
(v) количественный анализ основных активных веществ прополиса 1-4 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC); и (vi) стандартизация полученного жидкого экстракта прополиса с определением точного количест-
- 13 044986 венного состава основных действующих веществ 1-4 на стадии (v) путем разбавления свежим экстракционным растворителем, который использовался на стадии (iii), до желаемого содержания активных веществ 1-4.
В предпочтительном варианте реализации способа производства жидкого экстракта прополиса, согласно изобретению, стадия экстракции (iii) выполняется при следующих условиях:
(а) массовое соотношение сырого прополиса и экстракционного растворителя равно 1:3-1:5 по весу;
(b) температура отжима: 15-70°С; и (c) время экстракции: 1-24 ч.
Кроме этого, этап количественного определения основных активных веществ 1-4 и для сопровождаемого мониторинга вспомогательных активных веществ 5-10, разработанный для этой цели аналитический высокоэффективной способ жидкостной хроматографии (HPLC), выполняется при следующих условиях:
(i) хроматографическая колонка: Ascentis express; C18; размеры: 15 смх3,0 мм; диаметр частиц в колонке: 2,7 мкм;
(ii) подвижная фаза: А=0,1% водный раствор муравьиной кислоты, В = метанол; градиент: 0 мин, 80% А, 20% В; 3 мин, 70% А, 30% В; 60 мин, 20% А, 80% В; 90 мин, 20% А, 80% В; 100 мин, 70% А, 30% В; 105 мин, 80% А, 20% В;
(iii) температура колонки: 30°С;
(iv) поток: 0,25 мл /мин;
(v) время анализа: 110 мин;
(vi) длина волны на детекторе UV-VIS: для обнаружения: 370 нм, для интеграции: 290 нм;
(vii) объем закачки: 10 мкл; (viii) давление: 210-290 бар.
Экспериментальные способы производства жидкого экстракта прополиса, согласно настоящему изобретению, раскрыты в примерах 4-9. В примере 9 описана оптимизированная версия способа производства стандартизованного жидкого экстракта прополиса, выраженного параметром отношения лекарственного средства к экстракту (DER) 1:2 по весу, в соответствии с изобретением.
Аналитический способ количественного определения основных активных веществ 1 -4 и вспомогательных активных веществ 5-10 описан в примере 3.
Определение противомикробной эффективности стандартизированного жидкого экстракта согласно настоящему изобретению.
Определение минимальной ингибирующей концентрации (МИК) на модельных патогенных микроорганизмах.
Противомикробная эффективность экстрактов прополиса была измерена в отделении молекулярной медицины Института Руджера Босковича, Загреб, Хорватия. Минимальные ингибирующие концентрации (МИК) стандартизованного жидкого экстракта прополиса, согласно настоящему изобретению, определяли по указанию CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов) и EUCAST (Европейский комитет по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам), как описано в источниках информации 26-29. Использовали продукт из примера 9.
26) М. Balouiri, M. Sadiki, SK Ibnsouda: Способы оценки антимикробной активности in vitro: обзор, J. Pharm. Анальный. 6 (2016) 71-79.
27) CLSI, Способы испытаний на чувствительность к противомикробным препаратам при разведении бактерий, которые растут в аэробных условиях, Утвержденный стандарт, 9-е изд., Документ CLSIM07-A9. Институт клинических и лабораторных стандартов, 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, Pennsylvania 19087, USA, 2012.
28) CLSI, Эталонный эталонный способ тестирования дрожжей на противогрибковую чувствительность при разведении бульона, Утвержденный стандарт, 2-е изд., Документ NCCLS M27-A2. CLSI, 940 West Valley Road, Suite 1400, Уэйн, Пенсильвания, 19087-1898, США, 2002.
29) CLSI, Способы определения бактерицидной активности противомикробных агентов. Утвержденное руководство, документ CLSI M26-A. Институт клинических и лабораторных стандартов, 950 West Valley Road, Suite 2500, Wayne, Pennsylvania 19087, USA, 1998.
Противомикробная эффективность была протестирована в условиях in vitro на штаммах АТСС следующих модельных патогенных микроорганизмов (М):
(i) золотистый стафилококк АТСС 29293 (M1);
(ii) метициллин-резистентный золотистый стафилококк; MRSA (коллекция MFBF; М2);
(iii) метициллин-чувствительный золотистый стафилококк; MSSA (коллекция MFBF; М3);
(iv) Enterococcus faecalis АТСС 9212 (М4);
(v) Enterococcus faecalis VRE (коллекция MFBF) (M5);
(vi) кишечная палочка АТСС 10536 (М6);
(vii) Acinetobacter baumanii АТСС 43498 (M7);
(viii) синегнойная палочка АТСС 9027 (М8); и (ix) грибковые микроорганизмы албиканс АТСС 90028 (М9).
Для определения минимальных ингибирующих концентраций (MIC) экстрактов была проведена
- 14 044986 процедура последовательного микроразбавления. Значения MIC определили как концентрацию экстракта прополиса, при которой происходило 80%-ное снижение количества бактерий или грибов (MIC80). Минимальные ингибирующие концентрации (MIC80), показанные в табл. 9, показаны в виде раствора (%) соответствующего жидкого экстракта в данном растворителе. Исходный жидкий экстракт прополиса получали при соотношении сырого прополиса и конечного экстракта (DER) 1:2 -продукт из примера 9. Если разбавление жидкого экстракта больше, что означает, что концентрация активных веществ 1-10 ниже для MIC, полученный антимикробный эффект тестируемого экстракта выше.
Подробное описание экспериментальной процедуры определения MIC приведено в примере 10, а результаты приведены в табл. 9.
Таблица 9 Результаты определения минимальной ингибирующей концентрации (MIC; %) разбавленных экстрактов прополиса, продукта из примера 9, по сравнению с жидкими экстрактами, полученными с 96% этанолом (пример 1) или полиэтиленгликолем 400 (пример 2), применяемым в качестве экстракционных растворителей.
№ | Модельный микроорганизм | М1С80 (%)а | ||
Жидкий экстракт на основе ESlb | Жидкий экстракт на основе ES2C | Жидкий экстракт на основе ES3d | ||
1 | Золотистый стафилококк АТСС 29293 (Ml) | 40 | 10 | 40 |
2 | MRSA (М2) | 20 | 10 | 40 |
3 | MSSA (М3) | 52,5 | 10 | 51,5 |
4 | Enterococcus faecalis АТСС 9212 (М4) | 10 | 5 | 10 |
5 | Enterococcus faecalis VRE (M5) | 0 | 0 | 2,5 |
6 | кишечная палочка АТСС 10536 (Мб) | 10 | 10,85 | 12,8 |
7 | Acinetobacter baumanii АТСС 43498 (М7) | 20 | 10 | 20 |
8 | Синегнойная палочка АТСС 9027 (М8) | 0 | 0 | 1,85 |
9 | грибковые микроорганизмы албиканс АТСС 90028 (М9) | 0 | 0 | 12,85 |
ES = экстракционный растворитель; ESI = 96% этанол; ES2 = полиэтиленгликоль 400 (PEG 400); ES3 = смесь PEG 400 + 3% соевого лецитина аМ1С80 - минимальная ингибирующая концентрация исследуемого вещества, при которой концентрация живых модельных микроорганизмов снижается на 80%. Когда MIC80 = 0, экстракт не оказывает никакого воздействия.
6 Продукт из Примера 1.
с Продукт из Примера 2.
d Продукт из Примера 9.
В табл. 10-15 приведены массовые концентрации активных веществ 1-10 в эффективных растворах экстрактов прополиса в каждой из трех испытанных систем экстракционных растворителей, они получены с использованием:
(i) 96% этанол, продукт из примера 1, (ii) полиэтиленгликоль 400 (PEG 400), продукт из примера 2; и, (iii) PEG 400 (9 вес.%) и смесь соевого лецитина (3 вес.%), продукт из примера 9;
или массовые концентрации соответствующих активных веществ 1-10, при которых каждый конкретный жидкий экстракт достигает MIC. Он был определен из первичного жидкого экстракта, где DER составляет 1:2, разведенного раствора, при котором достигается MIC.
- 15 044986
Таблица 10
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ прополиса 1-4 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного с 96% этанолом; продукт из примера 1
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 1-4 | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Ml | 22,91 | 13,98 | 5,24 | 5,92 |
М2 | 45,82 | 27,96 | 10,47 | 11,83 |
М3 | 17,41 | 10,63 | 3,98 | 4,50 |
М4 | 90,91 | 55,48 | 20,78 | 23,48 |
М5 | 916,32 | 559,26 | 209,49 | 236,68 |
Мб | 91,63 | 55,93 | 20,95 | 23,67 |
М7 | 45,82 | 27,96 | 10,47 | 11,83 |
М8 | 916,32 | 559,26 | 209,49 | 236,68 |
М9 | 916,32 | 559,26 | 209,49 | 236,68 |
Активное вещество: п-кумаровая кислота (1), транс-ферулловая кислота (2), кофейная кислота (3), 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4) Модельный микроорганизм: S. aureus ATCC 29293 (Ml), MRSA (М2), MSSA (М3), E. faecalis ATCC 9212 (M4), E. faecalis VRE (M5), E. coli ATCC 10536 (M6), A. baumanii ATCC 43498 (M7) , P. aeruginosa ATCC 9027 (M8), C. albicans ATCC 90028 (M9) |
Таблица 11
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ прополиса 5-10 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного с 96% этанолом, продукт из примера 1
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 5-10 | |||||
5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Ml | 1,22 | 13.03 | 12,41 | 5,81 | 2,59 | 1,35 |
М2 | 2,44 | 26.05 | 24,82 | 11,62 | 5,17 | 2,70 |
М3 | 0,93 | 9,90 | 9,43 | 4,42 | 1,96 | 1.03 |
М4 | 4.85 | 51,69 | 49,24 | 23.05 | 10,26 | 5,36 |
М5 | 48,88 | 521,03 | 496,38 | 232,36 | 103,38 | 54.00 |
Мб | 4.89 | 52,10 | 49,64 | 23,24 | 10,34 | 5,40 |
М7 | 2,44 | 26.05 | 24,82 | 11,62 | 5,17 | 2,70 |
М8 | 48,88 | 521,03 | 496,38 | 232,36 | 103,38 | 54.00 |
М9 | 48,88 | 521,03 | 496,38 | 232,36 | 103,38 | 54.00 |
Активное вещество: коричная кислота (5), хризин (6), пиноцембрин (7), галангин (8), апигенин (9), кемпферол (10) Модельный микроорганизм: S. aureus ATCC 29293 (Ml), MRSA (М2), MSSA (М3), E. faecalis ATCC 9212 (M4), E. faecalis VRE (M5), E. coli ATCC 10536 (M6), A. baumanii ATCC 43498 (M7) , P. aeruginosa ATCC 9027 (M8), C. albicans ATCC 90028 (M9) |
- 16 044986
Таблица 12
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ
1-4 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного с полиэтиленгликолем 400 (PEG 400), продукт из примера 2
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 1 -4 | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
Ml | 75,06 | 45,89 | 16,78 | 22,61 |
М2 | 75,06 | 45,89 | 16,78 | 22,61 |
М3 | 75,06 | 45,89 | 16,78 | 22,61 |
М4 | 433,08 | 264,80 | 96,81 | 130,63 |
М5 | 750,57 | 458,93 | 167,79 | 226,14 |
Мб | 69,05 | 42,22 | 15,44 | 20,81 |
М7 | 75,06 | 45,89 | 16,78 | 22,61 |
М8 | )750,57 | )458,93 | ) 167,79 | )226,14 |
М9 | )750,57 | )458,93 | ) 167,79 | )226,14 |
Активное вещество: п-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3), 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4) Модельный микроорганизм: S. aureus АТСС 29293 (Ml), MRS А (М2), MSSA (М3), Е. faecalis АТСС 9212 (М4), Е. faecalis VRE (М5), Е. coli АТСС | ||||
10536 (Мб), A. baumanii АТСС 43498 (М7) , Р. aeruginosa АТСС 9027 (М8), С. albicans АТСС 90028 (М9) |
Таблица 13
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ прополиса 5-10 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного с полиэтиленгликолем 400 (PEG 400), продукт из примера 2
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 5-10 | |||||
5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Ml | 3,84 | 47,68 | 45,77 | 20,83 | 9,70 | 8,02 |
М2 | 3,84 | 47,68 | 45,77 | 20,83 | 9,70 | 8,02 |
М3 | 3,84 | 47,68 | 45,77 | 20,83 | 9,70 | 8,02 |
М4 | 22,16 | 275,10 | 264,10 | 120,20 | 56,05 | 46,26 |
М5 | 38,40 | 476,77 | 457,71 | 208,31 | 97,03 | 80,18 |
Мб | 3,53 | 43,86 | 42,11 | 19,17 | 8,93 | 7,38 |
М7 | 3,84 | 47,68 | 45,77 | 20,83 | 9,70 | 8,02 |
М8 | )38,40 | ) 476,77 | )457,71 | )208,31 | ) 97,03 | ) 80,18 |
М9 | )38,40 | ) 476,77 | )457,71 | )208,31 | ) 97,03 | )80,18 |
Активное вещество: коричная кислота (5), хризин (6), пиноцембрин (7), галангин (8), апигенин (9), кемпферол (10) Модельный микроорганизм: S. aureus АТСС 29293 (Ml), MRSA (М2), MSSA (М3), Е. faecalis АТСС 9212 (М4), Е. faecalis VRE (М5), Е. coli АТСС 10536 (Мб), A. baumanii АТСС 43498 (М7) , Р. aeruginosa АТСС 9027 (М8), С. albicans АТСС 90028 (М9) |
- 17 044986
Таблица 14
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ 1-4 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного смесью полиэтиленгликоля 400 (PEG 400, 97 вес.%) и соевого лецитина (3 вес.%), продукт из примера 9
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 1 -4 | ||||
1 | 2 | 3 | 4 | ||
Ml | 27,80 | 17,13 | 6,24 | 8,24 | |
М2 | 27,80 | 17,13 | 6,24 | 8,24 | |
М3 | 27,80 | 17,13 | 6,24 | 8,24 | |
М4 | 111,21 | 68,51 | 25.00 | 32,94 | |
М5 | 547,05 | 337,03 | 122,82 | 162,05 | |
Мб | 86,50 | 53,29 | 19,42 | 25,62 | |
М7 | 55,60 | 34,26 | 12,48 | 16,47 | |
М8 | 603,22 | 371,64 | 135,42 | 178,68 | |
М9 | 864,95 | 532,89 | 194,19 | 256,21 | |
Активное вещество: п-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3), 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4) Модельный микроорганизм: S. aureus АТСС 29293 (Ml), MRSA (М2), MSSA (М3), Е. faecalis АТСС 9212 (М4), Е. faecalis VRE (М5), Е. coli АТСС 10536 (Мб), A. baumanii АТСС 43498 (М7) , Р. aeruginosa АТСС 9027 (М8), С. albicans АТСС 90028 (М9) |
Таблица 15
Массовая концентрация (γ) в [мкг/мл] для активных веществ прополиса 5-10 в эффективных растворах жидкого экстракта прополиса, полученного смесью полиэтиленгликоля 400 (PEG 400, 97 вес.%) и соевого лецитина (3 вес.%), продукт из примера 9.
Модельный микроорганизм | Действующее вещество 5-10 | |||||
5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
Ml | 1,45 | 17.03 | 16,24 | 7,33 | 3,64 | 1,71 |
М2 | 1,45 | 17.03 | 16,24 | 7,33 | 3,64 | 1,71 |
М3 | 1,45 | 17.03 | 16,24 | 7,33 | 3,64 | 1,71 |
М4 | 5,78 | 68,14 | 64,94 | 29,31 | 14,60 | 6,82 |
М5 | 28,44 | 335,17 | 319,44 | 144,19 | 71,62 | 33,56 |
Мб | 4,50 | 53.00 | 50,51 | 22,80 | 11,32 | 5,31 |
М7 | 2,89 | 34,07 | 32,47 | 14,66 | 7,28 | 3,41 |
М8 | 31,36 | 369,59 | 352,24 | 158,99 | 78,97 | 37.01 |
М9 | 44,96 | 529,95 | 505,08 | 227,98 | 113,23 | 53,07 |
Активное вещество: коричная кислота (5), хризин (6), пиноцембрин (7), галангин (8), апигенин (9), кемпферол (10) Модельный микроорганизм: S. aureus АТСС 29293 (Ml), MRSA (М2), MSSA (М3), Е. faecalis АТСС 9212 (М4), Е. faecalis VRE (М5), Е. coli АТСС 10536 (Мб), A. baumanii АТСС 43498 (М7) , Р. aeruginosa АТСС 9027 (М8), С. albicans АТСС 90028 (М9) |
Общий антимикробный эффект (МПК) каждого из протестированных жидких экстрактов прополиса достигается за счет синергетического действия нескольких активных веществ 1-10. Интересно и совершенно неожиданно то, что смесь активных веществ 1-10 в малых концентрациях более эффективна, чем смесь гораздо более высоких (чистых) концентраций некоторых активных веществ 1-10.
Состав по настоящему изобретению является наиболее эффективным против грамположительных микроорганизмов, таких как Staphylococcus spp., но, как видно из Таблицы 9, в более высокой концентрации он также эффективен против некоторых грамотрицательных бактерий: Е. coli и A. baumanii, а также грибка С. albicans.
Применение стандартизированного жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению.
Экстракт прополиса, применяемый в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента, в соответствии с настоящим изобретением, содержит стандартизованные концентрации высокобиоактивных веществ:
(i) п-кумаровая кислота (1): 100-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 75-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3): 25-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4) (САРЕ): 40-400 мкг/мл.
Благодаря стандартизованному содержанию основных активных веществ 1 -4 жидкий экстракт прополиса согласно изобретению, представляет собой активный фармацевтический ингредиент (API) для использования у людей и животных, активный косметический ингредиент (ACI) или функциональный
- 18 044986 ингредиент для пищевых продуктов или продуктов питания, корма для животных, который характеризуется следующими полезными фармакологическими эффектами:
(i) противовоспалительное средство, см. источники информации 1, 8, 9, 11, 12, 13, 17;
(ii) антиоксидант, см. источники информации 8, 9, 14, 15, 20;
(iii) иммуномодулирующий, см. источники информации 1, 8, 11, 13, 15, 17, 18, 19, 20;
(iv) гепатопозащитный, см. источник информации 9;
(v) противомикробный, включая также антибактериальные, противовирусные, противогрибковые и противопротозойные средства, см. источники информации 9, 10, 12, 15, 16, 18;
(vi) противоопухолевый, см. источники информации 9, 10, 11, 14, 19; и (vii) противоопухолевый, см. источники информации 11, 14.
Другими ценными эффектами жидкого экстракта прополиса согласно изобретению, являются: фунгицидное, бактерицидное, вирулицидное, инсектицидное и нематоцидное действие при защите растений. Благодаря сильной антиоксидантной активности, жидкий экстракт прополиса, согласно изобретению, косвенно укрепляет растения и их устойчивость к факторам абиотического стресса и помогает им противостоять инфекциям. Благодаря этому его используют как укрепляющее средство для растений, см. источники информации 21-25.
Жидкий экстракт прополиса, согласно настоящему изобретению, используется как:
(i) активный фармацевтический ингредиент или наполнитель для производства фармацевтических продуктов, выбранный из группы, состоящей из: лекарств, медицинских устройств или лечебных средств;
(ii) активный косметический ингредиент или вспомогательное вещество для производства косметических продуктов;
(iii) пищевой ингредиент для производства функциональных пищевых продуктов, пищевых добавок или пищевых продуктов для специального питания;
(iv) активный фармацевтический ингредиент или наполнитель для производства ветеринарных продуктов, выбранных из группы, состоящей из: ветеринарно-медицинских продуктов, кормов для животных, кормовых добавок для животных, или средств для ветеринарного использования; или (v) активный агрохимический ингредиент или наполнитель для производства агрохимических продуктов, выбранных из группы, состоящей из: фунгицидов, бактерицидов, вирулицидов, инсектицидов, нематоцидов и усилителей растений, что особенно подходит для экологичного сельского хозяйства.
Фармацевтическая композиция на основе указанного стандартизированного жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению.
Кроме того, настоящее изобретение раскрывает фармацевтическую композицию, которая основана на указанном стандартизированном жидком экстракте прополиса, применяемом в качестве активного фармацевтического ингредиента (API). Фармацевтическая композиция по данному изобретению содержит:
(i) жидкий экстракт прополиса: от 5 до 95 вес.%; и (ii) один или несколько фармацевтических наполнителей, необходимых для препарата конечной лекарственной формы, выбранный из группы, состоящей из: раствора, суспензии, геля, крема, мази, спрея для перорального или назального применения; до 100 вес.% конечной композиции;
где количественный состав минимум двух из четырех указанных основных активных веществ следующий:
(i) n-кумаровая кислота (1): 10-1300 мкг/г;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 10-800 мкг/г;
(iii) кофейная кислота (3): 5-300 мкг/г; и (iv) 2-фенилэтил 3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4), (САРЕ); 5-400 мкг/г.
Таким образом, фармацевтические вспомогательные вещества (вспомогательные вещества) выбираются из группы, состоящей из: разбавители, увлажнители, консерванты, хелатирующие агенты, антиоксиданты, загустители, смягчающие вещества, эмульгаторы, тонизирующие агенты и агенты, регулирующие рН.
Разбавитель представляет собой фармацевтически приемлемую жидкость, выбранную из группы, состоящей из: очищенная вода, этиловый спирт, 1,2-пропиленгликоль, жидкие полиэтиленгликоли (PEG), такие как PEG 200, PEG 400 или PEG 600, или смеси этих веществ.
Увлажнитель выбирается из группы, состоящей из глицерина, сорбита, 1,2-пропиленгликоля или смесей этих веществ.
Консервант выбран из группы, состоящей из: парабенов, таких как метил-4-гидроксибензоат, этил4-гидроксибензоат, пропил-4-гидроксибензоат, бутил-4-гидроксибензоат, 4-хлор-м-крезол, триклозан, бензиловый спирт, 2-феноксиэтанол, бензойная кислота и ее соли, такие как бензоат натрия, сорбиновая кислота или ее соли, такие как сорбат калия, дегидроуксусная кислота (3-ацетил-2-гидрокси-6-метил-4Нпиран-4-он), хлоргексидин и его соли, такие как диглюконат хлоргексидина, соли четвертичного аммония, такие как хлорид бензалкония или бромид цетримония, или смеси этих веществ.
Хелатирующий агент выбран из группы, состоящей из: натриевых или калиевых солей этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA), диэтилентриаминопентауксусной кислоты (DTPA), нитрилотриук- 19 044986 сусной кислоты (NTA); растворимые соли цитрата, такие как дигидрат тринатрийцитрата (Na3C6H5O7-2H2O), или смеси этих веществ.
Типичным хелатирующим агентом является дигидрат динатрия эдетата (Na2EDTA-2H2O).
Антиоксидант выбран из группы, состоящей из: α-токоферола и его сложных эфиров, таких как αтокоферилсукцинат, аскорбиновая кислота и ее соли, такие как аскорбат натрия, 2,6-ди-трет-бутил-4метилфенол (ВНТ), трет-бутиланизол (ВНА), или смеси этих веществ.
Загуститель выбран из группы, состоящей из: метиллцеллюлоза, подобная гидроксипропилметилцеллюлозе (НРМС), гидроксипропилцеллюлоза (НРС), гидроксиэтилцеллюлоза (НЕС), метилцеллюлоза (МС), карбоксиметилцеллюлоза натрия (NaCMC), синтетические полимеры, такие как поливиниловый спирт (ПВС), полиакриловая кислота (ПАК) и ее сополимеры, поливинилпирролидон (ПВП), различные камеди, такие как гуммиарабик, ксантановая камедь, трагакант; альгиновая кислота и ее соли, такие как альгинат натрия, металлические соли высших жирных кислот, такие как моностеарат алюминия, дистеарат алюминия, тристеарат алюминия, или смеси этих веществ.
Смягчающее средство выбрано из группы, состоящей из вазелина; минеральное масло; растительные масла, такие как миндальное, подсолнечное или оливковое масло; триглицериды со средней длиной цепи; натуральные или синтетические сложные эфиры высших жирных кислот и одновалентных спиртов, такие как изопропилмиристат или масло жожоба; воски, подобные пчелиному воску, силиконовое масло, высшие жирные кислоты, такие как олеиновая или стеариновая кислота, высшие жирные спирты, такие как цетиловый спирт, или смеси этих веществ.
Эмульгатор выбран из группы, состоящей из: ланолин, этоксилированный ланолин, ланолиновые спирты; этоксилированные ланолиновые спирты, лецитин, гидролизованный лецитин, моно- и диэфиры глицерина и высших жирных кислот, такие как моностеарат глицерина, сложные эфиры сорбитана и высших жирных кислот, такие как моностеарат сорбитана, этоксилированные высшие жирные спирты, такие как полиоксиэтилен (23) лауриловый эфир или полиоксиэтилен (2) олеат, где число 23 или 2 представляет количество звеньев этиленоксида, сложные эфиры этоксилированных сложных эфиров сорбитана, такие как полисорбат 60; водорастворимые мыла, такие как стеарат натрия, водорастворимые сульфаты высших жирных спиртов, такие как лаурилсульфат натрия, водорастворимые фосфаты жирных спиртов, такие как цетилфосфат калия, или смеси этих веществ.
Тонизирующий агент используется в основном в фармацевтических лекарственных формах, которые наносят на слизистую оболочку, например слизистую оболочку носа, и выбираются из группы, состоящей из: хлорида натрия (NaCl), глицерина, 1,2-пропиленгликоля или смесей этих веществ.
Агент для регулирования рН включает фармацевтически приемлемые кислоты и основания для уменьшения или увеличения значения рН и буферные системы. Его выбирают из группы, состоящей из соляной кислоты (HCl), серной кислоты (H2SO4), фосфорной кислоты (Н3РО4), лимонной кислоты, уксусной кислоты, гидроксида натрия (NaOH), гидроксида калия (KOH), гидроксида аммония (NH4OH), дигидрофосфат натрия (NaH2PO4), гидрофосфат натрия (Na2HPO4), дигидроцитрат натрия (NaH2C6H5O7), водородцитрат натрия (Na2HC6H5O7), цитрат натрия (Na3HC6H5O) или смеси этих веществ.
Производство фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению получают способом, который включает следующие стадии:
(i) добавление стандартизированного жидкого экстракта прополиса согласно данному изобретению в разбавитель и их гомогенизация;
(ii) добавление одного или нескольких других вспомогательных веществ и их гомогенизация;
где стадии (i) и (ii) проводят при температуре от 10 до 100°С, предпочтительно при температуре от 20 до 60°С, в течение 1-5 мин, в случае изготовления лекарственной формы:
(iii. a) раствор или раствор для спрея; выполняется фильтрация конечного раствора, в том числе стерильная фильтрация, если нужно;
(iii .b) гель или суспензия; осуществляется добавление загустителя и его гомогенизация;
(iii.c) крем; производство жировой фазы осуществляется смешиванием смягчителя и эмульгатора и их гомогенизации при температуре 50-80°С в течение 1-15 мин, а затем проводят добавление раствора со стадии (ii), нагретого до 50-80°С, с последующим эмульгированием с использование гомогенизатора высокого сдвига или высокого давления, при температуре от 50-80°С, предпочтительно от 55-65°С, в течение 1-30 мин, с последующей гомогенизацией при температуре от 65-20°С, в течение 10-120 мин; или (iii.d) мазь; смешивание раствора со стадии (ii) с ранее расплавленной смесью смягчителя и, возможно, эмульгатора при температуре 50-70°С в течение 5-30 мин с последующей гомогенизацией при температуре 70-20°С, в течение 10-120 мин.
Способы производства фармацевтической композиции по настоящему изобретению могут включать также различные альтернативные общепринятые технологические способы для производства указанных дозированных форм, известных специалистам в области фармацевтической технологии.
Типичные примеры производства фармацевтической композиции согласно изобретению, описаны в примерах 11-16.
- 20 044986
В качестве особого примера, обрисованная в общих чертах конечная лекарственная форма раствора для интрамаммарного применения, которая раскрыта в примере 11. В этом случае первичный стандартизованный жидкий экстракт прополиса, производство которого описано в примере 9, в котором просто разбавляют экстракционный растворитель согласно изобретению; в данном случае со смесью полиэтиленгликоля 400 (97 вес.%) и лецитина сои (3 вес.%), который здесь находится в функции разбавителя. Полученный таким образом раствор для интрамаммарного применения дает количественное содержание основных действующих веществ 1-4 в указанных пределах, см. табл. 16.
Табл. 16. Результаты количественного анализа активных веществ 1-10 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) фармацевтической композиции по настоящему изобретению; лекарственная форма раствора для интрамамамарного применения; продукт из Примера 11, характеризующийся массовым соотношением лекарственного средства к экстракту (DER) 1:2, разбавленный в 10 раз для целей анализа HPLC.
Таблица 16
№ | Действующее вещество прополиса 1-10 | Концентрация [мкг / г] |
1 | п-кумаровая кислота (1) | 40,97 |
2 | транс-феруловая кислота (2) | 52,18 |
3 | кофейная кислота (3) | 17,73 |
4 | САРЕ(4) | 52,25 |
5 | коричная кислота (5) | 6,99 |
6 | хризин (6) | 84,70 |
7 | пиноцембрин (7) | 77,36 |
8 | галангин (8) | 43,37 |
9 | апигенин (9) | 15,24 |
10 | кемпферол (10) | 4,76 |
а Аналитический метод HPLC описан в Примере 3. |
Типичная хроматограмма HPLC количественного анализа настоящей композиции показана на фиг. 5.
Исследования фармакологических эффектов фармацевтической композиции по настоящему изобретению.
Отдельные фармакологические эффекты композиции по настоящему изобретению в дозировке из раствора, продукта из примера 11, изучали в клинических исследованиях при терапии:
(I) мастита, воспаления вымени у коров;
(ii) мастита у коз; и (iii) заживления ран у лошадей.
Изучение терапии мастита у коров.
Изучение лечения мастита у коров проводилось на пяти фермах молочного скота Голштинской породы. Всего в исследовании было задействовано 86 коров или 339 четвертей вымени, где четверть вымени использовалась в качестве статистической единицы. Животных свободно содержали в глубокой подстилке и кормили стандартным премиксом для молочного скота без добавления антибиотиков. Исследование было одобрено этическим комитетом ветеринарной медицины. Были включены здоровые животные и четверти без клинических симптомов мастита с количеством соматических клеток (SCC) ниже 200,000 мл, а также инфицированные четверти вымени с SCC выше 200,000 мл. Рандомизированное перекрестное клиническое исследование безопасности и эффективности было выполнено с интрамаммарным применением композиции по настоящему изобретению в форме раствора в условиях местности. Композицию по настоящему изобретению из примера 11 наносили трижды на все четыре четверти вымени коровы: во время утреннего доения, вечернего доения и на следующий день после утреннего доения. Подробная процедура описана в примере 17, тогда как табл. 17 представляет бактериологическое излечение для каждого патогена, идентифицированного за определенное количество кварталов до первого интрамаммарного применения.
- 21 044986
Таблица 17
Эффективность бактериологической обработки/лечения мастита у коров после интрамаммарного применения композиции по настоящему изобретению из примера 11.а
№ | Возбудитель | Состав из Примера 11 | ||
Количество обработанных четвертей вымени (N) | Количество четвертей вымени, подвергшихся бактериальной обработке | % вылечившихся | ||
1 | Стрептококк уберис | 9 | 9 | 100 |
2 | Streptococcus spp. | 2 | 2 | 100 |
3 | ЦНС | 1 | 1 | 100 |
4 | Enterococcus sp. | 2 | 2 | 100 |
5 | Кишечная палочка | 3 | 3 | 100 |
6 | Corynebacterium spp. | 4 | 4 | 100 |
7 | Pasteurella spp. | 2 | 2 | 100 |
8 | Citrobacter spp. | 1 | 1 | 100 |
9 | Серратия | 1 | 1 | 100 |
10 | Бациллы | 1 | 1 | 100 |
Всего: | 26 | 26 | 100 |
а Процедура проведения исследования описана в Примере 17
Трехкратный (двухдневный) режим введения композиции из примера 11 обеспечил бактериологическое излечение в 100% случаев всего за 7 дней.
Для сравнения, антибиотик цефалоспоринового ряда цефтиофур достигает 66% бактериологического излечения, но только после ежедневного интрамаммарного применения в течение 8 дней, а через 5 дней излечение дает лишь 54% случаев, см. источник информации 30. При субклиническом мастите, вызванном S. uberis, двухдневная терапия пирлимицином привела к излечению в 58,1% случаев, в то время как терапия в течение 5 и 8 дней обеспечила излечение в 68,8% и 80% случаев, см. источник информации 30:
30) С.П. Оливер, Б.Е. Гиллеспи, С.Дж. Хедрик, X. Мурхед, П. Ланн, Е. X. Даулен, Д. Джонсон, К. К. Ламар, С. Т. Честер, В. М. Мозли: Эффективность расширенной интрамаммарной терапии цефтиофуром для лечения субклинического мастита у лактирующих молочных коров. J. Dairy Sci. 87 (2004) 2393-2400.
Альтернативно, при терапии мастита у коров композиция по настоящему изобретению в дозированной форме суспензии для интрамаммарного применения, как описано в примере 12, также может быть успешно использована.
Исследование терапии мастита у коз.
Изучение лечения мастита у коз было проведено на ферме альпийских коз при OPG Matijasec, Sigetec Ludbreski, Хорватия, на 25 козах. У всех коз был диагностирован субклинический мастит левой и правой половин вымени. Козы, молоко которых при микробиологическом исследовании дали положительный результат, были разделены на две группы: в одну группу применяли композицию по настоящему изобретению из Примера 11, а в другую группу применяли интрамаммарную суспензию амоксициллина и клавулановой кислоты (Клавуксил®; Genera, Хорватия). Все по трехкратному режиму применения. Переносимость и бактериологическое излечение половинок контролировали параллельно после i.mam. нанесения композиции из примера 11. Трехкратное (двухдневное) нанесение композиции по настоящему изобретению обеспечило бактериологическое излечение 75% инфицированных половин и 85% через 14 дней. Это оказалось более эффективным, чем интрамаммарное введение антибиотиков, которое позволило бактериологическое излечение в 73,3% случаев. Результаты исследования показали, что лечение мастита коз композицией из примера 11 может обеспечить своевременное бактериологическое излечение без использования антибиотиков.
Подробная процедура исследования описана в примере 18, а результаты бактериологического лечения представлены в табл. 18.
- 22 044986
Таблица 18
Эффективность бактериологической обоработки/лечения мастита у коз после i.mam. применения композиции по настоящему изобретению из примера 11 по сравнению с антибиотиком (фиксированная комбинация амоксициллина и клавулановой кислоты)а
№ | Возбудитель | Количество обработанны x половинок вымени (Ν) | Количество подвергшихся бактериальной обработке половинок вымени через 7 дней | Количество подвергшихся бактериальной обработке половинок вымени через 14 дней | % вылечивш ихся |
Антибиотик (амоксициллин + клавулановая кислота) | |||||
1 | Staphylococcu s spp. | 8 | 2 | 4 | 50 |
2 | S. aureus | 1 | 1 | 1 | 100 |
3 | Streptococcus spp. | 3 | 3 | 3 | 100 |
4 | С. уберис | 2 | 2 | 2 | 100 |
5 | Arcanobacteri um pyogenes | 2 | 2 | 2 | 100 |
Всего: | 15 | 9 | И | 73,3 | |
Состав из Примера 11 | |||||
1 | Staphylococcu s spp. | 8 | 6 | 7 | 87,5 |
2 | S. aureus | 7 | 4 | 6 | 85,7 |
3 | Streptococcus spp. | 2 | 2 | 2 | 100 |
4 | С. уберис | 2 | 2 | 2 | 100 |
5 | Arcanobacteri um pyogenes | 1 | 1 | 1 | 100 |
Всего: | 20 | 15 | 17 | 85 | |
a Процедура проведения исследования описана в Примере 18. |
При сравнении активности i.mam. при применении амоксициллина в качестве антибиотика широкого спектра действия, который подходит для лечения мастита, вызванного патогенами, обнаруженными в образцах молока и композиции из примера 11, была доказана более сильная активность последнего. Через семь дней после применения амоксициллина вылечилось только 60% половинок, в то время как результат для композиции из примера 11 составил 75%. Через 14 дней после первого применения общий процент бактериологически вылеченных половинок при применении антибиотика составил 73,3%, в то время как для тестируемой композиции - 85%.
Из указанных результатов можно увидеть высокую эффективность противовоспалительной и противомикробной активности композиции по настоящему изобретению при лечении мастита. Эффективность выше, чем у классической терапии, такой как фиксированная комбинация амоксициллина и клавулановой кислоты в качестве антибиотика широкого спектра действия.
Альтернативно при терапии мастита у коз, композиция по настоящему изобретению в виде суспензии для интрамаммарного применения, как описано в примере 12, также может быть успешно использована.
Можно сделать вывод, что композиция по настоящему изобретению, помимо других своих свойств, характеризуется антимикробной активностью против ряда бактерий и грибов, причем антимикробная эффективность по сравнению с классическими антибиотиками выше in vivo, чем в условиях in vitro. Это не только антимикробное средство, но также противовоспалительное и иммуномодулирующее средство.
Иммуномодулирующие эффекты прополиса тесно связаны с его антиоксидантным действием, а окислительный стресс является неотъемлемой частью патогенеза мастита, см., например, ссылку 31 на источник информации:
31) О. Атакиси, X. Орал, Э. Атакиси, О. Мерхан, С. Метин Панкарчи, А. Озджан, С. Марасли, Б. Полат, А. Колак, С. Кайя: Субклинический мастит вызывает изменения оксида азота, всей окислительной и антиоксидантной способности коровьего молока, Res. Вет. Sci. 89 (2010) 10-13.
Обзор случая заживления ран у лошадей.
Описан случай заживления ран на передней ноге кобылы. Это была глубокая рана в области передней ноги, которая возникла, когда задняя нога зацепила переднюю ногу во время бега. Перед началом введения композиции из примера 11 рану лечили консервативно, безуспешно, разными препаратами.
Затем рану промывали физиологическим раствором, сушили и обрабатывали композицией из при- 23 044986 мера 11 один раз в день в течение 5 дней. Улучшение, подобное эпителизации, можно было увидеть через 48 часов, а полное заживление раны произошло через 96 ч. Кобыла в течение нескольких дней интенсивно хромала, после чего признаков хромоты не наблюдалось. Восстановление было полным. Подробное описание этого случая приведено в примере 19.
Несмотря на то, что для более точных выводов необходимо провести подробное клиническое исследование, специалистам в данной области ясно, что настоящая композиция эффективно действует как средство для заживления ран. Поскольку из литературы известно, что противовоспалительная, антиоксидантная и эпителизирующая активности важны для процесса заживления ран, стимуляция синтеза коллагена, как и в случае с композицией по настоящему изобретению, вместе с доказанной антимикробной активностью является частью спектра фармакологические эффекты; для сравнения см. источник информации 32:
32) С. Маринотти, Э. Ранзато: Прополис: новый рубеж для заживления ран, Burns Trauma (2015) 3:9, DOI 10.1186/s41038-015-0010-z.
Применение фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используется для лечения заболеваний и состояний у людей и животных из следующих групп: воспалительные заболевания, бактериальные инфекции, грибковая инфекция, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, функциональные желудочно-кишечные расстройства, для регенерации слизистой оболочки, лечения ожогов и заживления ран, а также онкологических заболеваний.
К воспалительным заболеваниям и состояниям относятся: гингивит, пародонтит, ларингит, гастрит, колит, геморроидальная болезнь, дерматит, воспаление наружного уха, синусит, ринит, вагинит и мастит.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используется для лечения бактериальных инфекций, вызванных бактериями из следующих групп:
(i) грамположительные бактерии: Staphylococcus spp .: Staphylococcus aureus, MRSA (метициллинрезистентный золотистый стафилококк), MSSA (метициллин-чувствительный золотистый стафилококк), Staphylococcus intermediates, Staphylococcus pseudintermedius; коагулазонегативные стафилококки: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus hyicus; Streptococcus spp.: Streptococcus uberis, Streptococcus bovis, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus canis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus oralis, Streptococcus thermophilus; Peptostreptococcus spp., Corynebacterium spp.: Corynebacterium Bovis, Trueperella pyogenes; Nocardia spp ., Bacillus subtilis, Bacillus cereus, энтерококки: Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis. устойчивые к ванкомицину энтерококки (VRE): Enterococcus casseliflavus; и (ii) грамотрицательный бактерии: кишечная палочка; Acinetobacter baumanii, Синегнойная палочка, Haemophilus influenzae, Salmonella choleraesuis, Yersinia enterocolitica; Enterobacter spp. (Enterobacter cloacae), Klebsiella spp.: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Shigella flexner,; Burkholderia cepacia, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Aggregatibacter actinomycetemcomitans, Actinomyces israelii, Bacteroides fragilis, Helicobacter pylori, Campylobacter coli, Campylobacter jejuni, Porphyromonas gulae, Porphyromonas salivosa, Porphyromonas denticanis, Prevotella intermedia, Treponema spp., Bacteroides splanchnicus.
Кроме того, настоящая фармацевтическая композиция используется для лечения грибковых инфекций, вызванных такими грибами, как: Candida vs.: Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida kruzei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis; Aspergillus spp.: Aspergillus niger, Aspergillus versicolor, Penicillium pinophilum, Paecilomyces variotii, Trichoderma virens, Chaetomium globosum, и Malassezia pachydermatis.
Также композиция по изобретению используется для лечения вирусных заболеваний, вызываемых вирусами, такими как: Вирус простого герпеса (HSV), Вирус папилломы человека (ВПЧ), Вирус Эпштейна-Барра (EBV), Цитомегаловирус (ЦМВ), полиовирус, вирусы гриппа А и В, ретровирусы, вирус осповакцины, вирусы простуды: риновирус, пикорнавирус, вирус парагриппа человека (HPIV), метапневмовирус человека (HMPV), коронавирус, аденовирусы, респираторно-синцитиальный вирус человека (HRSV), энтеровирусы.
Альтернативно, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению используется для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как псориаз, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, целиакия и рассеянный склероз.
Кроме того, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используется для лечения раковых заболеваний, таких как рак кожи и слизистых оболочек, опухоли желудочно-кишечного тракта, колоректальная карцинома.
Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению используется для лечения следующих функциональных желудочно-кишечных расстройств: расстройства пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, тонкого кишечника и толстой кишки, центрально опосредованная желудочно-кишечная боль, расстройства желчного пузыря и сфинктера Одди, аноректальные расстройства, специфические желудочно-кишечные расстройства у детей и подростков.
В частности, композиция по настоящему изобретению используется для лечения мастита у животных.
- 24 044986
Примеры
Основные замечания.
В качестве первичного прополиса использовался неочищенный прополис тополевого типа от компании Hedera Ltd. Этанол (96%) и полиэтиленгликоль 200, 400 и 600, а также порошкообразный соевый лецитин (SL) были приобретены у компании Fagron Croatia Ltd (HR). Лецитин рапса (RL) и гидролизованный лецитин рапса (HRL) были приобретены от компании Pfannenschmidt (Германия). Обезмасленный лецитин подсолнечника (SUL) был приобретен в компании Barentz (Нидерланды). Дистеарат алюминия был приобретен у компании Sigma-Aldrich (США). Все остальное исходное сырье закупалось у местных поставщиков.
Пробы химически чистых соединений аналитического назначения: и-кумаровая кислота (1; >98% HPLC), транс-феруловая кислота (2; 99%), кофейная кислота (3; >98% HPLC), 2-фенэтил-3,4-дигидрокситранс-циннамат (САРЕ; 4; >97% HPLC), транс-коричная кислота (5; >96,5% ГХ), хризин (6; >98% HPLC), пиноцембрин (7; >95% ТСХ), галангин (8; >95% HPLC), апигенин (9; >99% HPLC) и кемпферол (10; >90% HPLC), которые служили количественными аналитическими стандартами для определения их количественного содержания в жидких экстрактах прополиса, были приобретены у компании SigmaAldrich (США).
Термин комнатная температура относится к температурному интервалу от 20 до 25° С. Аббревиатура мин означает минуты. Выход (% от теоретического выхода) выражается как весовой процент выделенного жидкого экстракта прополиса по отношению к весу исходного экстракционного растворителя (этанол, PEG, этанол + лецитин, PEG + лецитин).
Количественное содержание активных веществ 1-10 в жидких экстрактах прополиса выражается в виде массовой концентрации (γ) в микрограммах на миллилитр [мкг/мл], в то время как его количественный состав в фармацевтической композиции по настоящему изобретению выражается в микрограммах на грамм конечного продукта (лекарственной формы) [мкг/г].
Пример 1. Производство жидкого экстракта прополиса с использованием 96% этанола в качестве экстракционного растворителя.
Предварительная обработка прополисом перед экстракцией: Образец неочищенного прополиса (типа тополя; 1 кг) был охлажден в холодильнике при - 20°С в течение минимум 1 ч. Затем образец измельчали в мельнице.
Экстракция 96% этанолом: Этанол (96%; 70,00 г) добавляли к измельченному прополису (30,00 г). Полученную смесь выдерживали при комнатной температуре 72 ч при периодическом перемешивании. Затем смесь фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента), получая 60,00 г (85,7%) жидкого экстракта прополиса в виде раствора темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом прополиса. С целью тестирования минимальной ингибирующей концентрации (MIC) спиртового экстракта прополиса, описанной в примере 10, та же процедура была повторена при соотношении лекарственного средства к экстракту (DER) 1:2.
Пример 2. Производство жидкого экстракта прополиса с использованием полиэтиленгликоля 400 в качестве экстракционного растворителя.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1 (30,00 г), смешивали с полиэтиленгликолем 400 (PEG 400; 70,00 г). Полученную смесь выдерживали при комнатной температуре 72 ч при периодическом перемешивании. Затем смесь фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). Получили 55,00 г (78,6%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис.
С целью тестирования минимальной ингибирующей концентрации (MIC) экстракта полиэтиленгликоль-прополиса, описанной в примере 10, ту же процедуру повторяли при соотношении лекарственного средства к экстракту (DER) 1:2.
Пример 3. Аналитический способ HPLC для количественного определения активных веществ 1-10 в жидких экстрактах прополиса.
Количественные анализы с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) были выполнены с использованием способа, разработанного специально для целей мониторинга основных активных веществ 1-4 и сопровождаемых активными ингредиентами 5-10 из прополиса.
Образцы имеющихся в продаже стандартов активных веществ 1-10 готовят для анализа разбавлением смесью этанол: вода, 75:25 по объему, до концентрации 100 мкг/мл.
Образцы жидких экстрактов прополиса (100 мкл) согласно настоящему изобретению перед анализом разбавляли смесью этанол: вода, 75:25 по объему (900 мкл), в соотношении 1:10 по весу (10 кратное разведение).
Анализы проводились на приборе Shimadzu LC201CHT, оборудованном автосамплером, насосом, дегазатором, термостатом колонок и детектором UV-VIS, при следующих условиях:
(i) хроматографическая колонка: Ascentis express; C18; размеры: 15 смх3,0 мм; диаметр частиц в колонке: 2,7 мкм;
(ii) подвижная фаза: А = 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, В = метанол; градиент: 0 мин,
- 25 044986
80% А, 20% В; 3 мин, 70% А, 30% В; 60 мин, 20% А, 80% В; 90 мин, 20% А, 80% В; 100 мин, 70% А, 30%
В; 105 мин, 80% А, 20% В;
(iii) температура колонки: 30°С;
(iv) поток: 0,25 мл/мин;
(v) время анализа: 110 мин;
(vi) длина волны на детекторе UV-VIS: для обнаружения: 370 нм, для интеграции: 290 нм;
(vii) объем закачки: 10 мкл; (viii) давление: 210-290 бар.
В указанных условиях основные активные вещества 1-4 и сопутствующие ингредиенты 5-10 имеют следующие времена удерживания (tr):
(i ) tr [п-кумаровая кислота (1)] = 14,13 мин, tr [транс-феруловая кислота (2)] = 15,31 мин; tr [кофейная кислота (3)] = 10,57 мин; tr [2-фенэтил-3,4-дигидрокситрансциннамат; САРЕ (4)] = 48,62 мин;
(ii ) tr [транс-коричная кислота (5)] = 29,76 мин; tr [хризин (6)] = 44,68 мин; tr [пиноцембрин (7)]=47,39 мин; tr [галангин (8)] = 49,94 мин; tr [апигенин (9)] =37,72 мин; tr [кемпферол (10)] = 36,87 мин.
Время удерживания основных активных веществ прополиса 1-4 и сопутствующих активных ингредиентов 5-10 представлено в табл. 1.
При мер 4. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием экстракционного растворителя на основе смеси этанола и лецитина.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1, (30,00 г) смешивали с экстракционным растворителем следующего состава (эксперименты Е1-8):
Е1: 96% этанол (67,00 г; 95,7%) и лецитин соевых бобов (SL; 3,00 г; 4,3%);
Е2: 96% этанол (60,00 г; 85,7%) и лецитин соевых бобов (SL; 10,00 г; 14,3%);
Е3: 96% этанол (50,00 г; 71,4%) и лецитин соевых бобов (SL; 20,00 г; 28,6%);
Е4: 96% этанол (40,00 г; 57,1%) и лецитин соевых бобов (SL; 30,00 г; 42,9%);
Е5: 96% этанол (67,00 г; 98,9%) и лецитин рапса (RL; 3,00 г 25% -ного препарата; 0,75 г лецитина; 1,1%); теоретический выход в Е5 = 67 г этанола + 0,75 г лецитина = 67,75 г;
Е6: 96% этанол (60,00 г; 96,0%) и лецитин из семян рапса (RL; 10,00 г 25% -ного препарата; 2,50 г лецитина; 4,0%); теоретический выход в Е6 = 60 г этанола +2,50 г лецитина = 62,50 г;
Е7: 96% этанол (67,00 г; 97,8%) и гидролизованный лецитин из семян рапса (HRL; 3,00 г 50% -ного препарата; 1,50 г гидролизованного лецитина из семян рапса; 2,2%); теоретический выход в Е7 = 67 г этанола + 1,50 г лецитина = 68,50 г;
Е8: 96% этанол (60,00 г; 92,3%) и гидролизованный лецитин из семян рапса (HRL;10,00 г 50% -ного препарата; 5,00 г лецитина; 7,7%); теоретический выход в Е8 = 60 г этанола + 5,00 г лецитина = 65,00 г.
Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и оставляли при комнатной температуре на 72 ч при периодическом перемешивании. Затем смесь фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). Получили 50-60 г (71,0-85,7%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис.
Приготовленный таким образом первичный жидкий экстракт прополиса подвергся количественному анализу на содержание основных активных веществ 1-4, а также сопутствующих ингредиентов 5-10 в соответствии с аналитическим способом, описанным в примере 3. Результаты представлены в табл. 3 и 4.
Приготовленные таким образом первичные жидкие экстракты прополиса в экстракционных растворителях (ES), описанные в экспериментах Е1-Е8 с известным количественным содержанием активных веществ 1-4, стандартизировали путем разбавления теми же ES, которые использовались на стадии экстракции, до желаемого уровня количественного состава активных веществ 1-4, согласно настоящему изобретению.
При мер 5. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием экстракционного растворителя на основе смеси полиэтиленгликоля 400 и лецитина.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1, (30,00 г) смешивали с экстракционным растворителем следующего состава (эксперименты Е1-Е8):
E1: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 67,00 г; 97%) и лецитин соевых бобов (SL; 3,00 г; 3%);
Е2: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 60,00 г; 90%) и лецитин соевых бобов (SL; 10,00 г; 10%);
Е3: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 67,00 г; 98,9%) и лецитин рапса (RL; 3,00 г 25% -ного препарата; 0,75 г лецитина; 1,1%); теоретический выход в Е3 = 67 г PEG 400 + 0,75 г лецитина = 67,75 г;
Е4: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 60,00 г; 96,0%) и лецитин рапса (RL; 10,00 г 25% -ного препарата; 2,50 г лецитина; 4,0%); теоретический выход в Е4 = 60 г PEG 400 + 2,50 г лецитина = 62,50 г;
Е5: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 67,00 г; 97,8%) и гидролизованный лецитин рапсового масла (HRL; 3,00 г 50% -препарата; 1,50 г гидролизованного лецитина; 2,2%); теоретический выход в Е5 = 67 г PEG 400 + 1,50 г лецитина =68,50 г;
Е6: полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; 60,00 г; 92,3%) и гидролизованный лецитин рапсового масла (HRL; 10,00 г 50% -ного препарата; 5,00 г лецитина; 7,7%); теоретический выход в Е6 = 60 г PEG 400 + 5,00 г лецитина = 65,00 г.
Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и остав- 26 044986 ляли при комнатной температуре на 72 ч при периодическом перемешивании. Затем смесь фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). Получили 45-55 г (69,0-78,6%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис.
Приготовленный таким образом первичный жидкий экстракт прополиса подвергся количественному анализу на содержание основных активных веществ 1-4, а также сопутствующих ингредиентов 5-10 в соответствии с аналитическим способом, описанным в примере 3. Результаты представлены в табл. 5 и 6.
Такие приготовленные первичные жидкие экстракты прополиса в экстракционных растворителях (ES), описанные в экспериментах Е1-Е6, с известным количественным содержанием активных веществ 1-4, стандартизировали путем разбавления теми же ES, которые использовались на стадии экстракции, до желаемого уровеня количественного состава действующих веществ 1-4, согласно настоящему изобретению.
Пример 6. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием экстракционного растворителя на основе смеси полиэтиленгликоля 200 и соевого лецитина.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1 (30,00 г), смешивали с экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 200 (149,85 г, 99,9%) и соевого лецитина (SL, 0,15 г, 0,1%). Полученную таким образом смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и оставляли при комнатной температуре на 48 ч при периодическом перемешивании. Затем смесь фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). В результате было получено 137,00 г (91,3%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис. Затем был проведен количественный анализ HPLC в соответствии со способом, описанным в примере 3, для определения количественного содержания основных активных веществ 1-4. Фильтрат разбавляли тем же экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 200 и соевого лецитина (SL), 99,9:0,1 по весу, до общего уровня содержания активных веществ 1-4 в соответствии со спецификацией стандартизированного жидкого экстракта по настоящему изобретению.
Пример 7. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием экстракционного растворителя на основе смеси полиэтиленгликоля 600 и обезжиренного лецитина подсолнечника.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1, (30,00 г) смешивали с экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 600 (PEG 600, 297,00 г, 99%) и обезжиренного лецитина подсолнечника (SUL, 3,00 г, 1,0%). Полученную таким образом смесь нагревали до температуры 70°С и интенсивно перемешивали в течение 3 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). В результате было получено 261,00 г (87,0%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис. Затем был проведен количественный анализ HPLC в соответствии со способом, описанным в примере 3, на основании которого было определено количественное содержание основных активных веществ 1-4. Фильтрат разбавляли тем же экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 600 и обезжиренного лецитина подсолнечника (SUL), 99:1 по весу, до общего уровня содержания активных веществ 1-4, в соответствии со спецификацией стандартизированного жидкого экстракта по настоящему изобретению.
Пример 8. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием экстракционного растворителя на основе смеси полиэтиленгликоля 200, полиэтиленгликоля 600 и гидролизованного лецитина рапсового семени.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1, (30,00 г) смешивали с экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 200 (PEG 200, 150,00 г, 50%), полиэтиленгликоля 600 (139,50 г, 46,5%) и гидролизованный лецитин рапсового масла (HRL; 10,50 г, 3,5%). Полученную смесь нагревали при температуре 100° С при интенсивном перемешивании в течение 3 ч. Затем смесь охлаждали до комнатной температуры и фильтровали через фильтровальную бумагу (черная лента). В результате получили 245,00 г (81,7%) жидкого экстракта прополиса в виде вязкой жидкости темно-коричневого цвета со слегка интенсивным запахом, напоминающим прополис.
Затем был проведен количественный анализ HPLC в соответствии со способом, описанным в примере 3, на основании которого было определено количественное содержание основных активных веществ 1-4. Фильтрат разбавляли тем же экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 200, полиэтиленгликоля 600 и гидролизованного лецитина рапса (HRL), 50:46,5:3,5 по весу, до общего уровня активных веществ 1-4, согласно спецификации стандартизированного жидкого экстракта по настоящему изобретению.
Пример 9. Производство стандартизированных жидких экстрактов прополиса с использованием смеси полиэтиленгликоля 400 и соевого лецитина.
Измельченный прополис, предварительная обработка которого описана в примере 1, (30,00 г) смешивали с экстракционным растворителем, смесью полиэтиленгликоля 400 (PEG 400, 87,30 г, 97 вес.%) И соевого лецитина (SL, 2,70 г, 3 вес.%.). Полученной таким образом смеси давали отстояться для мацерации при периодическом перемешивании в течение 72 ч. Затем смесь фильтровали через фильтровальную
- 27 044986 бумагу (800 пор/см2). Получили 50-55 г вязкой жидкости темно-коричневого цвета с интенсивным запахом, напоминающим прополис. Полученный таким образом продукт разбавляли тем же экстракционным растворителем до массы 60,00 г. Таким образом, полученный экстракт лекарственного средства-экстракт (DER) с соотношением 1:2 был получен, или, как указано, 60 г экстракта из 30 г исходного прополиса.
Такой приготовленный жидкий экстракт прополиса для целей производства фармацевтической композиции по настоящему изобретению:
(i) подвергли количественному анализу HPLC в соответствии с способом, описанным в примере 3 для определения активных веществ 1-4, а в дальнейшем, с учетом реальной массовой концентрации действующих веществ 1-4 в таком приготовленном экстракте, (II) стандартизировано разбавлением чистой (свежей) смесью растворителей: полиэтиленгликоль 400 (97 вес.%) и лецитин соевых бобов (3 вес.%), до массовой концентрации действующих веществ 1-4:
(i) п-кумаровая кислота (1), 10-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2), 10-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3), 5-300 мкг/мл; и, (iv) 2-фенэтил-3,4-дигидрокситрансциннамат (4; САРЕ); 5-400 мкг/мл; деленного на коэффициент X/100, где X - весовой процент указанного стандартизированного жидкого экстракта прополиса в составе фармацевтической композиции.
Пример 10. Определение антимикробной эффективности стандартизированных жидких экстрактов согласно настоящему изобретению.
Определение минимальной ингибирующей концентрации (MIC) на модельных патогенных микроорганизмах.
Минимальные ингибирующие концентрации (MIC) стандартизованных жидких экстрактов прополиса, согласно настоящему изобретению, были определены с использованием продукта из примера 9 по сравнению с аналогичными жидкими экстрактами прополиса, полученными с 96% этанолом (продукт из примера 1) или PEG 400 (продукт из Примера 2) в соответствии с указаниями способов CLSI и EUCAST; см. источники информации 26-29.
Противомикробная эффективность была протестирована в условиях in vitro на штаммах АТСС следующих модельных патогенных микроорганизмов (М): Золотистый стафилококк АТСС 29293 (M1); Метициллин-резистентный золотистый стафилококк; MRSA (коллекция MFBF; M2); метициллинчувствительный золотистый стафилококк; MSSA (коллекция MFBF; М3); Enterococcus faecalis АТСС 9212 (М4); Enterococcus faecalis VRE (коллекция MFBF) (M5); кишечная палочка АТСС 10536 (М6); Acinetobacter baumanii АТСС 43498 (M7); Pseudomonas aeruginosa АТСС 9027 (M8); и грибковые микроорганизмы албиканс АТСС 90028 (М9).
Процедуру серийного микроразбавления проводили для определения минимальных ингибирующих концентраций (MIC) экстрактов. Суспензии клеток были приготовлены из родительской культуры в буфере PBS (рН 7,4), и они были доведены до 0,5 единиц МакФарланда нефелометрией. Тестирование проводили в серийных растворах в 96-луночных микротитрационных планшетах в диапазоне от 100 до 0,7125 мкг/мл путем добавления 100 мкл раствора экстракта прополиса, растворенного в бульоне Мюллера-Хинтона. После инокуляции 100 мкл каждой бактериальной культуры, доведенной до 105 КОЕ/мл, планшеты инкубировали в течение 24 ч при температуре 37°С. MIC определяли добавлением 10 мкл 0,5 мг/мл раствора хлорида 2,3,5-трифенил-2Н-тетразолия (ТТС; индикатор окислительновосстановительного потенциала) на одну лунку, и после инкубации в течение 4 ч при температуре 30°С оптическую плотность определяли спектрофотометрически при длине волны 490 нм.
Значения MIC определяли, как концентрацию экстракта прополиса, при которой происходило 80% снижение количества бактерий (MIC80).
Для видов грибов значения MIC определяли в среде RPMI с добавлением глюкозы по той же схеме, что и для бактерий. После инкубации (48 ч, 37°С, аэробные условия, в темноте) добавляли ХТТ (индикатор окислительно-восстановительного потенциала) в сочетании с менадионом, и оптическую плотность определяли спектрофотометрически при длине волны 540 нм.
Значения MIC определяли, как концентрацию экстракта прополиса, при которой происходило 80% снижение количества бактерий или грибов (MIC80).
Отрицательный контроль содержал только среду и растворитель (без добавленных микроорганизмов и прополиса), тогда как положительный контроль подвергался воздействию антибиотиков или противогрибковых агентов.
Путем определения антимикробной активности раствора прополиса in vitro были измерены минимальные ингибирующие концентрации (MIC80), которые показаны в таблице 9 в виде раствора (%) жидкого экстракта в данном растворителе. Исходный жидкий экстракт прополиса получали при массовом соотношении лекарственное средство: экстракт (DER) 1:2; продукт из Примера 9. Если разбавление жидкого экстракта больше, что означает, что концентрация активных веществ 1-10 ниже для MIC, полученный антимикробный эффект тестируемого экстракта выше.
Результаты представлены в табл. 9.
В табл. 10-15 рассчитанные значения массовой концентрации (γ) в [мкг/мл] для каждого конкретно- 28 044986 го активного вещества даны 1-10 (из каждого из трех исследованных жидких экстрактов прополиса), для которых каждый конкретный экстракт достиг MIC. Экстракты получали с использованием следующих экстракционных растворителей (ES): 96% этанол (продукт из примера 1), полиэтиленгликоль 400 (PEG 400; продукт из Примера 2) и смесь PEG 400 (97 вес.%) и лецитина соевых бобов (3 вес.%) (продукт из примера 9). Они были определены из первичных жидких экстрактов, где DER составляет 1:2; деленное на раствор (коэффициент), при котором был достигнут соответствующий MIC.
Пример 11. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме раствора для интрамаммарного применения с минимальным содержанием 150 мкг/г действующих веществ 1-4.
Состав (на 100 г раствора):
(1) 50,00 г (50,00 вес.%) жидкого экстракта прополиса согласно данному изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 300 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 50,00 г (20,00 вес.%) полиэтиленгликоль 400.
Подготовка. Ингредиенты (1) и (2) смешивали и гомогенизировали путем перемешивания при комнатной температуре в течение 5 мин. Раствор фильтровали через фильтровальную бумагу и заливали в интрамаммарные инжекторы по 4-8 г. Состав раствора: минимум 150 мкг/г общая концентрация действующих веществ 1-4. Результаты количественного анализа HPLC представлены в табл. 16, а соответствующая типичная хроматограмма HPLC приведена на фиг. 5.
Пример 12. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме суспензии для интрамаммарного применения с минимальным содержанием 100%. мкг/г действующих веществ 1-4.
Состав (на 100 г суспензии):
(1) 770,00 г (77,00 вес.%) жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 150 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 200,00 г (вес.%) полиэтиленгликоля 4000;
(3) 3,00 г (вес.%) дистеарата алюминия.
Подготовка. Полиэтиленгликоль расплавляли (2) при температуре 60°С, добавляли дистеарат алюминия (3) и гомогенизировали при этой температуре в течение 15 мин. Затем смесь охлаждали при перемешивании и добавляли экстракт прополиса (1) при температуре 40-45°С. Смесь дополнительно охлаждали до комнатной температуры при перемешивании и дополнительно гомогенизировали при комнатной температуре в течение 15 мин. Была получена вязкая суспензия бледно-желтого цвета, которую далее заливали во внутримаммарные инъекторы по 4-8 г.
Состав подвески: минимально 100 мкг/ г общая концентрация активных веществ 1-4.
Пример 13. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме геля с минимальным содержанием 250 мкг/г действующих веществ 1-4.
Состав (на 100 г геля):
(1) 30,00 г (30,00 вес.%) жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 850 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 20,00 г (2,00 вес.%) карбопол 940;
(з) 1,00 г (1,00 вес.%) полисорбат 60;
(4) 00,20 г (0,20 вес.%) сорбата калия;
(5) 0,30 г (0,30 вес.%) бензоат натрия;
(6) 0,30 г (0,30% w/w) лимонная кислота, безводная;
(7) q.s. гидроксид натрия (20% раствор);
(8) дополнительно 100% дистиллированная вода.
Подготовка. К 30 г жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению добавляли (2) и гомогенизировали путем перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин. Затем добавляли 50 г очищенной воды (8) и гомогенизировали путем перемешивания при комнатной температуре в течение 5 мин. После этого добавляли ингредиенты (3-6) и растворяли при перемешивании в течение 10 мин. Затем значение рН доводили до 5,5-6 с помощью (7). К полученному таким образом гелю добавляли оставшееся количество очищенной воды до 100 г общей массы и гомогенизировали путем перемешивания при комнатной температуре в течение 15 мин с окончательной деаэрацией продукта.
Состав геля: минимально 250 мкг/г общая концентрация активных веществ 1-4.
Пример 14. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме крема с минимальным содержанием 100 мкг/г действующих веществ 1-4.
Состав (на 100 г крема):
(1) 20,00 г (20,00 вес.%) жидкий экстракт прополиса согласно данному изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 500 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 5,00 г (5,00 вес.%) полисорбат 60;
(3) 5,00 г (5,00 вес.%) ланолин, безводный;
(4) 2,00 г (2,00 вес.%) пчелиный воск, белый;
(5) 8,00 г (8,00 вес.%) цетиловый спирт;
(6) 8,00 г (8,00 вес.%) вазелин, белый;
(7) 10,00 г (10,00 вес.%) минеральное масло густое;
- 29 044986 (8) 0.20 г (0.20 вес.%) 4-хлор-м-крезол;
(9) дополнительно 100% дистиллированная вода.
Подготовка. Масляная фаза была приготовлена плавлением смеси ингредиентов (2-7) при температуре 65-70°С в течение 15-20 мин до образования почти бесцветной маслянистой жидкости. Водную фазу получали растворением соединений (8) и (1) в очищенной воде с последующим нагреванием до температуры 65-70°С при перемешивании. Затем водную фазу медленно добавляли к масляной фазе при интенсивном перемешивании, предпочтительно с помощью гомогенизатора, который обеспечивает гомогенизацию с высоким сдвигом, от 1000 до 3000 оборотов в минуту (об /мин) в течение 15-20 мин. Полученную таким образом эмульсию дополнительно интенсивно перемешивали с постепенным охлаждением при температуре 65-20°С в течение 30 минут.
Состав крема: минимально 100 мкг/г общая концентрация активных веществ 1-4.
Пример 15. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме мази с минимальным содержанием 500 мкг/г действующих веществ 1-4.
Форма выпуска (на 100 г мази):
(1) 50.00 г (50.00 вес.%) жидкий экстракт прополиса согласно данному изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 1000 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 10,00 г (10,00 вес.%) полиэтиленгликоль 400;
(3) 40,00 г (40,00 вес.%) полиэтиленгликоль 4000.
Подготовка. Ингредиенты (1-3) тщательно перемешивали и нагревали до температуры 60°С, гомогенизировали путем перемешивания в течение 5 мин и постепенно охлаждали до комнатной температуры при перемешивании.
Состав мази: минимально общая концентрация активных веществ 1-4 500 мкг/ г.
Пример 16. Производство композиции по настоящему изобретению в лекарственной форме назального спрея с минимальным содержанием 50 мкг/г действующих веществ 1-4.
Состав (на 100 г раствора для спрея):
(1) 5,00 г (5,00% w/w) жидкий экстракт прополиса согласно данному изобретению, продукт из примера 9, стандартизованный минимум на 1000 мкг/мл активных веществ 1-4;
(2) 0,60 г (0,60 вес.%) хлорида натрия;
(3) 0,10 г (0,10 вес.%) полисорбат 60;
(4) 0,10 г (0,10 вес.%) сорбат калия;
(5) 0,10 г (0,10 вес.%) бензоат натрия;
(6) 0.20 г (0.20 вес.%) лимонная кислота, безводная;
(7) 0,01 г (0,01 вес.%) эдетат натрия (Na2EDTA-2H2O);
(8) дополнительно 100% дистиллированная вода.
Подготовка. К 90 г очищенной воды (1) добавляли ингредиенты (2-7) и растворяли путем перемешивания при комнатной температуре в течение 15 мин. Затем добавляли (1) и смесь гомогенизировали при комнатной температуре в течение 15 мин. После этого раствор фильтровали через стерильный фильтр 0,2 мкм и разливали в подходящие стерильные флаконы, снабженные крышкой и распылительными насосами для назального применения.
Состав раствора: минимально 50 мкг/г общая концентрация активных веществ 1-4.
Пример 17. Исследование противовоспалительной активности композиции по настоящему изобретению в форме интрамаммарного раствора из примера 11 при лечении мастита дойных коров.
Изучение лечения мастита у коров проводилось на пяти фермах молочного скота Голштинской породы. Всего в исследовании было задействовано 86 коров или 339 четвертей вымени, где четверть вымени использовалась в качестве статистической единицы. Животных свободно содержали в глубокой подстилке и кормили стандартным премиксом для молочного скота без добавления антибиотиков. Исследование одобрено этическим комитетом ветеринарной медицины. Были включены здоровые животные и четверти вымени без клинических симптомов мастита с количеством соматических клеток (SCC) ниже 200,000 мл, а также инфицированные четверти вымени с SCC выше 200,000 мл. Рандомизированное перекрестное клиническое исследование безопасности и эффективности проводили с интрамаммарным применением композиции по настоящему изобретению в форме раствора. Композицию по настоящему изобретению из Примера 11 наносили трижды на все четыре четверти вымени коровы: во время утреннего доения, вечернего доения и на следующий день после утреннего доения. Сначала была протестирована переносимость композиции при интрамаммарном применении. Следили за изменениями в поведении коров, а также за макроскопическим внешним видом вымени (отек и покраснение), молоком и чувствительностью вымени к прикосновениям. Изменение количества соматических клеток (SCC) в молоке отслеживали с периода до первого i.mam. применения композиции, до 7 суток с момента первого нанесения. Образцы молока, а также четвертинки были сгруппированы в зависимости от того, был ли SCC повышен или ниже 200,000 мл, и были ли образцы положительными или отрицательными при бактериологическом исследовании, см. источник информации 33:
33) Европейское агентство по лекарственным средствам (1992): Местная толерантность к интрамаммарным препаратам у коров. Директива 81/852/EEC.
- 30 044986
Затем были проведены испытания эффективности бактериологического лекарства с композицией прополиса в соответствии с указаниями Европейского медицинского агентства (ЕМА), что является единственным показателем эффективности для i.mam. примнения составы при лечении субклинического мастита. Он определяется как отсутствие ранее подтвержденного патогена в образце молока, собранном в течение определенных периодов времени после i.mam. применения данной рецептуры, см. источник информации 34:
34) Европейское агентство по лекарственным средствам (2017 г.): Руководство по проведению исследований эффективности интрамаммарных препаратов для использования у крупного рогатого скота. CVMP. ЕМА / CVMP / 344/1999-Rev.2.
Отбор проб молока производился по стандартной методике. Микробиологическое обследование проводилось по стандартным направлениям, см. источник информации 35:
35) JW Hogan: Лабораторный справочник по маститу крупного рогатого скота. Национальный совет мастита (1999) Мэдисон, Висконсин, САД.
Результаты бактериологического заживления мастита у коров представлены в табл. 17.
Прим ер 18. Исследование противовоспалительной активности композиции по настоящему изобретению в форме интрамаммарного раствора из примера 11 при лечении мастита у коз.
Изучение лечения мастита у коз проведено на 25 козах с диагностированным субклиническим маститом левой и правой половин вымени. Козы, молоко которых было положительным при микробиологическом исследовании, были разделены на две группы: в одну группу применяли композицию по настоящему изобретению из примера 11, а в другую группу применяли интрамаммарную суспензию амоксициллина и клавулановой кислоты (Klavuxil®; Genera, Хорватия). Все по трехкратному режиму применения.
Переносимость и бактериологическое излечение половинок контролировали параллельно после i.mam. применения композиции из примера 11. Препараты применяли по трехразовой (двухдневной) схеме с указанным антибиотиком или композицией из примера 11.
Во время исследования коз содержали в стойле с глубокой подстилкой. В период лактации было 170 коз со средней продуктивностью 500-600 кг молока на одну козу за одну лактацию, которая длится около 300 дней. Их кормили сеном по желанию, минимум 2 кг на козу, и премиксом, содержащим 16% белков, около 1 кг на козу, делится на две порции во время утреннего и вечернего доения. 2% витаминно-минеральный премикс Овисан® (компания Sano, Хорватия) был добавлен в премикс. Козы, молоко которых было положительным при бактериологическом исследовании, были разделены на две группы: в одну группу (количество обработанных половин, N = 20) применяли композицию из примера 11; в то время как в другой группе (N = 15) интрамаммарная суспензия амоксициллина с клавулановой кислотой (Klavuxil®; Genera Company, Хорватия). Все по трехкратному режиму применения.
Во время тестирования переносимости композиции из примера 11 не наблюдалось ни поведенческих изменений у коз, ни макроскопического внешнего вида вымени (отек и покраснение) и молока, ни чувствительности вымени к прикосновению. Образцы молока из левой и правой половин вымени отбирали в предварительно промаркированные стерильные пластиковые пробирки после доения первых нескольких форсунок. Образцы отбирали перед первым нанесением композиции из примера 11, через 12 часов после первого нанесения, через 24 часа после первого нанесения и через 7 дней после первого нанесения композиции. Образцы молока хранили при температуре 4°С до следующего дня и анализировали в лаборатории Хорватского ветеринарного института на предмет мастита и качества сырого молока.
Тестирование эффективности бактериологического лечения проводилось в соответствии с указаниями Европейского медицинского агентства (ЕМА), см. источник информации 34. Отбор проб молока проводился по стандартной методике, а микробиологическое исследование по стандартным процедурам; см. источник информации 35.
Результаты бактериологического лечения мастита у коз представлены в табл. 18.
Пример 19. Обзор успешного заживления ран на ноге кобылы при введении композиции по настоящему изобретению из примера 11 в форме раствора.
Описан случай заживления ран на передней ноге лошади. Это была глубокая рана в области передней ноги, которая возникла, когда задняя нога кобылы зацепила переднюю ногу во время бега. Перед началом введения композиции из примера 11 рану безуспешно лечили различными препаратами консервативно.
Рана образовалась во время галопа кобылы, когда она перехитрила себя задними лапами. Затем черепно-мозговая часть копыта и подкова задней лапы повредили суставной участок передней стопы. В результате образовалась рана эллиптической формы размером 2x4 см. Сразу после травмы кобыла показала признаки хромоты, получившие оценку 4/5 (Американская ассоциация практикующих врачей). Сразу после травмы рану побрили и промыли обычной холодной водой, после чего обработали йодом (повидон-йод 0,01%) и опрыскали спреем нитрата серебра. Рану закрыли, чтобы избежать инфекционного заражения. Поскольку кобыла уже была вакцинирована против столбняка, сыворотка ТАТ не применялась. Кобыле давали отдохнуть в течение двух недель, и рану ежедневно обрабатывали механической очисткой и содержали в чистоте и сухости. Рану обрабатывали спреем йода и нитрата серебра каждые 48 ча
- 31 044986 сов. Через 5 дней рана начала заживать, становилось лучше. Затем рану начали обрабатывать цинковитаминной мазью. Через две недели кобылу вернули к работе. Однако рана начала кровоточить, как только кобыла пустилась галопом. Рану снова продезинфицировали йодом и нанесли местный антибиотик на основе цефалоспорина в составе для интрамаммарного применения (Cobactan®). Наряду с механической очисткой раны рана местно обрабатывалась антибиотиком в течение следующих 5 дней. Затем была предпринята попытка дальнейшей работы с кобылой, но рана снова начала кровоточить.
После этого рану промывали физиологическим раствором, сушили и обрабатывали композицией из примера 11 один раз в день в течение 5 дней. Улучшение, видимое через эпителизацию, можно было наблюдать через 48 часов, а полное заживление наступило через 96 ч. Кобыла хромала только первые несколько дней, но в дальнейшем признаков хромоты не наблюдалось. Восстановление было полным.
Выводы.
Экспериментальные результаты показали, что специфическая смесь жидких полиэтиленгликолей (PEG), таких как PEG 400, в сочетании с лецитинами в количестве 0,1-3,5 вес.% экстракционного растворителя (ES) неожиданным образом эффективно и хемоселективно экстрагирует активные вещества прополиса: n-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2-фенэтил-3,4дигидрокси-транс-циннамат (4)по сравнению с чистыми растворителями, такими как 96% этанол, PEG 400 или смеси EtOH и тех же лецитинов.
Точный количественный состав основных активных веществ 1-4 и сопутствующих ингредиентов 510 в первичном жидком экстракте прополиса определяется с использованием подходящего метода аналитической HPLC, разработанного в данном изобретении. Затем такой первичный экстракт стандартизируют тем же экстракционным растворителем (ES), который использовался на стадии экстракции. Это приводит к получению жидкого экстракта прополиса согласно настоящему изобретению с известными и стандартизованными концентрациями основных активных веществ 1-4. Приготовленный таким образом стандартизованный экстракт прополиса используется в качестве активного фармацевтического ингредиента (API), активного косметического ингредиента (ACI) или пищевого ингредиента для производства функциональных пищевых продуктов и пищевых добавок.
Композиция по настоящему изобретению на основе указанного жидкого экстракта прополиса, который содержит основные активные вещества п-кумаровую кислоту (1; 10-1300 мкг/г), трансферуловую кислоту (2; 10-800 мкг/г), кофейная кислота (3; 5-300 мкг/г) и 2-фенетил-3,4-дигидрокситрансциннамат (4; 5-400 мкг/г) - эффективные средства при терапии воспалительных заболеваний, бактериальных инфекций, грибковые инфекции, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, функциональные желудочно-кишечные расстройства, для регенерации слизистой оболочки, лечения ожогов и заживления ран, а также для лечения онкологических заболеваний.
Промышленная применимость.
Благодаря широкому практическому применению жидкого экстракта прополиса и фармацевтической композиции на его основе, промышленная применимость настоящего изобретения очевидна.
Claims (31)
1. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента, содержащий (A) сухой экстракт прополиса: 0,1-10,0 вес.%; и (B) экстракционный растворитель: 90,0-99,9% вес.%;
где экстракционный растворитель содержит:
(В.1) один или несколько жидких полиэтиленгликолей (PEG) 200-600: 96,5-99,9 вес.%; и (В.2) лецитин или гидролизованный лецитин: 0,1-3,5 вес.%;
где указанный жидкий экстракт прополиса стандартизирован по:
(I) количественному массовому соотношению сырого прополиса в качестве лекарственного средства и конечного экстракта (DER) в соотношении: 1:2-1:20 по весу; и (II) количественному содержанию активных веществ прополиса, выбранных из группы, состоящей из: п-кумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2-фенилэтил-3,4дигидроксициннамат (4):
- 32 044986 где количественный состав минимум двух из четырех указанных основных активных веществ следующий:
(i) п-кумаровая кислота (1): 100-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 75-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3): 25-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ): 40-400 мкг/мл.
2. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по п.1, в котором жидкий полиэтиленгликоль (PEG) выбран из группы, состоящей из: полиэтиленгликоль 200, полиэтиленгликоль 300, полиэтиленгликоль 400, полиэтиленгликоль 600 или смеси этих веществ.
3. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по п.2, в котором жидкий полиэтиленгликоль (PEG) выбран из группы, состоящей из: полиэтиленгликоль 200, полиэтиленгликоль 400 или смесей этих веществ.
4. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по любому пп.1-3, в котором лецитин или гидролизованный лецитин характеризуется коэффициентом гидрофильнолипофильного баланса (HLB) от 2 до 12 и выбран из группы, состоящей из: соевый лецитин (Glycine max L); лецитин подсолнечника (Helianthus annuus L); рапсовый лецитин (Brassica napus L); лецитин канолы (Brassica rapa L); лецитин из куриных яиц (Gallus gallus domesticus L); обезжиренные продукты указанных лецитинов; гидрированные лецитины из указанных источников; гидролизованные лецитины из указанных источников; модифицированные ферментами производные указанных лецитинов; или смеси этих веществ.
5. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по п.4, в котором лецитин выбран из группы, состоящей из: природный лецитин, обезжиренный, гидрогенизированный, гидролизованный или модифицированный ферментами лецитин из сои (Glycine max L), подсолнечник (Helianthus annuus L), рапс (Brassica napus L) или канола (Brassica rapa L); или смеси этих веществ.
6. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по любому пп.1-5, в котором экстракционный растворитель содержит:
(i) полиэтиленгликоль (PEG) 200, полиэтиленгликоль 300, полиэтиленгликоль 400 или их смеси: 9799 вес.%; и (ii) природный лецитин, деолеинизированный лецитин или гидролизованный лецитин из сои (Glycine max L), подсолнечника (Helianthus annuus L), семян рапса (Brassica napus L) или канолы (Brassica rapa L), или смеси этих веществ: 1-3 вес.%.
7. Жидкий экстракт прополиса, предназначенный для применения в качестве фармацевтического, косметического или агрохимического ингредиента или пищевого ингредиента по пп.1-3, в котором указанный жидкий экстракт прополиса стандартизован по:
(I) количественному массовому сотношению сырого прополиса в качестве лекарственного средства к конечному экстракту (DER) в соотношении: 1:3-1:5 по весу; и (II) количественному составу активных веществ прополиса, выбранных из группы, состоящей из: пкумаровая кислота (1), транс-феруловая кислота (2), кофейная кислота (3) и 2-фенилэтил-3,4дигидроксициннамат (4), где количественный состав, минимум двух из четырех указанных основных активных веществ, следующий:
(i) п-кумаровая кислота (1): 500-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 300-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3): 100-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидроксициннамат (4; САРЕ): 100-400 мкг/мл.
8. Способ производства жидкого экстракта прополиса по любому из пп.1-7, включающий следующие стадии:
(i) охлаждение сырого прополиса при температуре -20°С не менее 1 ч;
(ii) измельчение охлажденного прополиса с просеиванием через поры 1-8 мм;
(iii) экстракция сырого прополиса экстракционным растворителем при следующих условиях:
а) массовое соотношение сырого прополиса и экстракционного растворителя: 1:2-1:20 вес.%.;
(b) температура экстракции: 10-150°С; и (с) время экстракции: 5 мин - 72 ч;
(iv) фильтрование полученной таким образом смеси через серию фильтров с порами от 100 мкм до 5 мкм с образованием нерастворенного остатка и жидкого экстракта прополиса;
(v) количественный анализ основных активных веществ прополиса 1-4 с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC); и (vi) стандартизация полученного таким образом жидкого экстракта прополиса с определенным точ-
- 33 044986 ным количественным составом основных активных веществ 1-4 на этапе (v) путем разбавления свежим экстракционным растворителем, который использовался на этапе (iii), до желаемого содержания активных веществ 1-4:
(i) п-кумаровая кислота (1): 100-1300 мкг/мл;
(ii) транс-феруловая кислота (2): 75-800 мкг/мл;
(iii) кофейная кислота (3): 25-300 мкг/мл; и (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ): 40-400 мкг/мл.
9. Способ производства жидкого экстракта прополиса по п.8, в котором стадию экстракции (iii) проводят при следующих условиях:
а) массовое соотношение сырого прополиса и экстракционного растворителя: 1:3-1:5 по весу;
(b) температура экстракции: 15-70°С; и (c) время извлечения: 1-24 ч.
10. Способ производства жидкого экстракта прополиса по п.8 или 9, в котором способ высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) проводят для количественного определения основных активных веществ 1-4, при следующих условиях:
(i) хроматографическая колонка: Ascentis express; C18; размеры: 15 смх3,0 мм; диаметр частиц в колонке: 2,7 мкм;
(ii) подвижная фаза: А - 0,1% водный раствор муравьиной кислоты, В - метанол; градиент: 0 мин, 80% А, 20% В; 3 мин, 70% А, 30% В; 60 мин, 20% А, 80% В; 90 мин, 20% А, 80% В; 100 мин, 70% А, 30% В; 105 мин, 80% А, 20% В;
(iii) температура колонки: 30°С;
(iv) поток: 0,25 мл/мин;
(v) время анализа: 110 мин;
(vi) длина волны на детекторе UV-VIS для обнаружения: 370 нм, для интеграции: 290 нм;
(vii) объем инъекции: 10 мкл;
(viii) давление: 210-290 бар.
11. Применение о жидкого экстракта прополиса по любому пп.1-7, в качестве активного фармацевтического ингредиента или наполнителя для производства фармацевтических продуктов, выбранных из группы, состоящей из: лекарственные препараты, медицинские устройства или лечебные средства.
12. Применение жидкого экстракта прополиса по любому пп.1-7 в качестве активного косметического ингредиента или наполнителя для производства косметических продуктов.
13. Применение жидкого экстракта прополиса по любому пп.1-7 в качестве пищевого ингредиента для производства функциональных пищевых продуктов, пищевых добавок и пищевых продуктов для специального питания.
14. Применение жидкого экстракта прополиса по любому пп.1-7 в качестве активного фармацевтического ингредиента или наполнителя для производства ветеринарных продуктов, выбранных из группы, состоящей из: ветеринарно-медицинские продукты, корма для животных, кормовые добавки для животных или средства для ветеринарного использования.
15. Применение жидкого экстракта прополиса по любому пп.1-7 в качестве активного агрохимического ингредиента или наполнителя для производства агрохимических продуктов, выбранных из группы, состоящей из: фунгициды, бактерициды, вирулициды, инсектициды, нематоциды и средства для стимуляции роста растений.
16. Фармацевтическая композиция, содержащая:
(I) жидкий экстракт прополиса по любому из пп.1-7; от 5 до 95% по весу; и (II) один или несколько фармацевтических наполнителей, необходимых для производства конечной лекарственной формы, выбранных из группы, состоящей из: раствор, суспензия, гель, крем, мазь, спрей для перорального или назального применения, до 100 вес.% конечной композиции;
где количественный состав минимум двух из четырех указанных основных активных веществ следующий:
(i) п-кумаровая кислота (1); 10-1300 мкг/г;
(ii) транс-феруловая кислота (2); 10-800 мкг/г;
(iii) кофейная кислота (3); 5-300 мкг/г; и (iv) 2-фенилэтил-3,4-дигидрокси-транс-циннамат (4; САРЕ); 5-400 мкг/г.
17. Фармацевтическая композиция по п.16, в которой фармацевтический эксципиент выбран из группы, включающей: разбавители, увлажнители, консерванты, хелатирующие агенты, антиоксиданты, загустители, смягчающие вещества, эмульгаторы, агенты, повышающие тоничность, и агенты, регулирующие рН.
18. Способ производства фармацевтической композиции по п.16 или 17, включающий следующие стадии:
(i) добавление стандартизированного жидкого экстракта прополиса по пп.1-7 в разбавитель и их гомогенизация;
(ii) добавление одного или нескольких других вспомогательных веществ; и их гомогенизация;
- 34 044986 где стадии (i) и (ii) проводят при температуре от 10 до 100°С в течение 1-5 мин.
19. Способ производства фармацевтической композиции по п.18, в котором в случае изготовления лекарственной формы в виде раствора или раствора для спрея производят фильтрацию конечного раствора, в том числе стерильную фильтрацию при необходимости.
20. Способ производства фармацевтической композиции по п.18, в котором в случае изготовления лекарственной формы в виде геля или суспензии осуществляют добавление загустителя и его гомогенизацию.
21. Способ производства фармацевтической композиции по п.18, в котором в случае изготовления лекарственной формы в виде крема осуществляют производство жировой фазы, проводят путем смешивания смягчающего средства и эмульгатора и их гомогенизации при температуре 50-80°С в течение 1-15 мин с последующим добавлением раствора со стадии (ii), нагретого до температуры 50-80°С с последующим эмульгированием с использованием гомогенизатора высокого сдвига или высокого давления при температуре от 50 до 80°С, в течение 1-30 мин, с последующей гомогенизацией при температуре от 65 до 20°С в течение 10-120 мин.
22. Способ производства фармацевтической композиции по п.18, в котором в случае изготовления лекарственной формы в виде мази осуществляют смешивание раствора со стадии (ii) с ранее расплавленной смесью смягчителя и эмульгатора при температуре 50-70°С в течение 5-30 мин с последующей гомогенизацией при температуре 70-20°С, в течение 10-120 мин.
23. Применение фармацевтической композиции по пп.16 или 17 для лечения заболеваний и состояний человека и животных из следующих групп, включающих: воспалительные заболевания, бактериальные инфекции, грибковые инфекции, вирусные заболевания, аутоиммунные заболевания, функциональные желудочно-кишечные расстройства, для регенерации слизистой оболочки, лечения ожогов и заживления ран и раковых заболеваний.
24. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения воспалительных заболеваний из группы, включающей: гингивит, пародонтит, ларингит, гастрит, колит, геморроидальное заболевание, дерматит, воспаление наружного уха, синусит, ринит, вагинит и мастит.
25. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения бактериальных инфекций, вызванных бактериями из следующих групп, включающих:
(I ) грамположительные бактерии: Staphylococcus spp: Staphylococcus aureus, MRSA (метициллинрезистентный Staphylococcus aureus), MSSA (метициллин-чувствительный Staphylococcus aureus), Staphylococcus intermediates, Staphylococcus pseudintermedius; коагулазонегативные стафилококки: Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus hyicus; Streptococcus spp: Streptococcus uberis, Streptococcus bovis, Streptococcus dysgalactiae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus canis, Streptococcus pyogenes, Streptococcus pneumoniae, Streptococcus oralis, Streptococcus thermophilus; Peptostreptococcus spp; Corynebacterium spp: Corynebacterium bovis; Trueperella pyogenes; Nocardia spp; Bacillus subtilis; Bacillus cereus; энтерококки: Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis; устойчивые к ванкомицину энтерококки (VRE): Enterococcus casseliflavus; и, (II ) грамотрицательные бактерии: Escherichia coli; Acinetobacter baumanii; Pseudomonas aeruginosa; Haemophilus influenzae; Salmonella choleraesuis; Yersinia enterocolitica; Enterobacter spp (Enterobacter cloacae); Klebsiella spp: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca; Shigella flexneri; Burkholderia cepacia; Proteus mirabilis; Proteus vulgaris; Aggregatibacter actinomycetemcomitans; Actinomyces israelii; Bacteroides fragilis; Helicobacter pylori; Campylobacter coli; Campylobacter jejuni; Porphyromonas gulae; Porphyromonas salivosa; Porphyromonas denticanis; Prevotella intermedia; Treponema spp; Bacteroides splanchnicus.
26. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения грибковых инфекций, вызванных грибками из следующих групп, включающих: Candida spp: Candida albicans, Candida dubliniensis, Candida glabrata, Candida kruzei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis; Aspergillus spp: Aspergillus niger, Aspergillus versicolor; Penicillium pinophilum; Paecilomyces variotii; Trichoderma virens; Chaetomium globosum; Malassezia pachydermatis.
27. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения вирусных заболеваний, вызываемых вирусами из группы, включающей: вирус простого герпеса (HSV); вирус папилломы человека (HPV); вирус Эпштейна-Барра (EBV); цитомегаловирус (CMV); полиовирус; вирусы гриппа А и В; ретровирусы; вирус осповакцины; вирусы простуды: риновирус, пикорнавирус, вирус парагриппа человека (HPIV), метапневмовирус человека (HMPV), коронавирус, аденовирусы, респираторно-синцитиальный вирус человека (HRSV), энтеровирусы.
28. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения аутоиммунных заболеваний из группы, включающей: псориаз, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, воспалительное заболевание кишечника, целиакия и рассеянный склероз.
29. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения раковых заболеваний из группы, включающей: рак кожи и слизистой оболочки, опухоль желудочно-кишечного тракта, колоректальная карцинома.
30. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения мастита у животных.
31. Применение фармацевтической композиции по п.23 для лечения функциональных желудочно-
- 35 044986 кишечных расстройств, выбранных из группы, включающей: расстройства пищевода, желудка, двенадцатиперстной кишки, тонкой кишки и толстой кишки, центрально опосредованная желудочнокишечная боль, расстройства желчного пузыря и сфинктера Одди, аноректальные расстройства, желудочно-кишечные расстройства у детей и подростков.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
HRP20190325A | 2019-02-19 | ||
HRP20200178A | 2020-02-03 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA044986B1 true EA044986B1 (ru) | 2023-10-19 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20160000845A1 (en) | Extract of trigonella foenum-graecum | |
EP2879662B1 (de) | Zusammensetzungen zur linderung von gastrointestinaltraktstörungen oder damit assoziierter systemischer störungen von wiederkäuern und cameliden | |
CN110575432B (zh) | 一种含有大麻二酚的组合物及其在动物用品中的应用 | |
WO2018062605A1 (ko) | 생약 추출물을 함유하는 치약 조성물 | |
CN100438862C (zh) | 辅酶q作为活性成分的经粘膜给药的组合物 | |
US20220133810A1 (en) | Liquid propolis extract, its formulation and use thereof | |
KR20170086019A (ko) | 감염증 및 염증의 예방 및/또는 치료에 유용한 조성물 | |
HRP20200178A2 (hr) | Tekući ekstrakt propolisa, njegova formulacija i upotreba | |
WO2015114163A2 (de) | Zusammensetzung zur prophylaxe oder behandlung von oxidativem stress | |
Çelik et al. | Apitherapy: Health and healing from the bees | |
EA044986B1 (ru) | Экстракт жидкого прополиса, способ его производства и его применение | |
US20220016193A1 (en) | ANTIBACTERIAL AND ANTIVIRUS COMPOSITION COMPRISING Extract of CANNABIS SATIVA L. | |
JP2015091772A (ja) | 抗微生物作用を備えた組成物の製造のためのパチョリ抽出物の使用 | |
Kacemi et al. | Bee Pollen as a Source of Pharmaceuticals: Where Are We Now? | |
US20150050372A1 (en) | Extract of rhus copallina as pharmaceutical | |
KR20130048109A (ko) | 부처손 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 폐렴 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
CN108434261B (zh) | 一种预防和/或治疗慢性唇炎的中药组合物及其用途 | |
KR101625412B1 (ko) | 단풍잎돼지풀 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 충치와 치주질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
WO2023137548A1 (en) | Anti-inflammatory feed formulation and uses thereof | |
KR20130042726A (ko) | 부처손 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 편도선염 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
KR20030079185A (ko) | 국화류 유래의 추출물을 이용한 임산부와 젖소의 유방염치료제 제조방법 및 그의 응용성 | |
WO2011134667A2 (de) | Ausgewählte hydrolysate aus pflanzenextrakten sowie diese enthaltendes antibakterielles mittel | |
Saadawi et al. | Green Synthesis and Characterization of Libyan Propolis Nanoparticles and its Biological Activity | |
Mamillapalli et al. | Bee Propolis-A Novel Perspective | |
WO2012093917A2 (ko) | 관동화 추출물을 포함하는 백혈병 치료용 조성물 및 건강 기능성 식품 |