EA044828B1 - Моноклональное антитело против фактора роста нервов, кодирующий его ген и его применение - Google Patents
Моноклональное антитело против фактора роста нервов, кодирующий его ген и его применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA044828B1 EA044828B1 EA202092491 EA044828B1 EA 044828 B1 EA044828 B1 EA 044828B1 EA 202092491 EA202092491 EA 202092491 EA 044828 B1 EA044828 B1 EA 044828B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- antibody
- monoclonal antibody
- seq
- variable region
- region
- Prior art date
Links
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 title claims description 70
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 title claims description 52
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 title claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 29
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 39
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 38
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 38
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 36
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 35
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims description 32
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 16
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 16
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 6
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 6
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 claims description 5
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 2
- XFKUFUJECJUQTQ-CIUDSAMLSA-N Gln-Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XFKUFUJECJUQTQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 claims 1
- SYAYROHMAIHWFB-KBIXCLLPSA-N Glu-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O SYAYROHMAIHWFB-KBIXCLLPSA-N 0.000 claims 1
- CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N His-Thr-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CCUSLCQWVMWTIS-IXOXFDKPSA-N 0.000 claims 1
- SPLBRAKYXGOFSO-UNQGMJICSA-N Pro-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@@H]2CCCN2)O SPLBRAKYXGOFSO-UNQGMJICSA-N 0.000 claims 1
- WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N Tyr-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WQOHKVRQDLNDIL-YJRXYDGGSA-N 0.000 claims 1
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 26
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 21
- 229950008160 tanezumab Drugs 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 description 14
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 13
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 12
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 101001111439 Homo sapiens Beta-nerve growth factor Proteins 0.000 description 10
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 10
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 10
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108010087230 Sincalide Proteins 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 238000010609 cell counting kit-8 assay Methods 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 5
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 5
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 5
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 5
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 5
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N sincalide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C1=CC=C(OS(O)(=O)=O)C=C1 IZTQOLKUZKXIRV-YRVFCXMDSA-N 0.000 description 5
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 5
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 4
- 208000000094 Chronic Pain Diseases 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 206010058019 Cancer Pain Diseases 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 3
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 3
- 210000000629 knee joint Anatomy 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N Gln-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O JXFLPKSDLDEOQK-JHEQGTHGSA-N 0.000 description 2
- GAFKBWKVXNERFA-QWRGUYRKSA-N Gly-Phe-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 GAFKBWKVXNERFA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N L-tryptophan-L-tyrosine Natural products C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 TYYLDKGBCJGJGW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N Thr-Ile-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FQPDRTDDEZXCEC-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000004436 artificial bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 2
- 108010072405 glycyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010010096 glycyl-glycyl-tyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 208000004296 neuralgia Diseases 0.000 description 2
- 208000021722 neuropathic pain Diseases 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 108010044292 tryptophyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 108010077037 tyrosyl-tyrosyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N Ala-Asp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O BTYTYHBSJKQBQA-GCJQMDKQSA-N 0.000 description 1
- ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N Ala-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ARHJJAAWNWOACN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N Ala-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O CREYEAPXISDKSB-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N Ala-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O ZDILXFDENZVOTL-BPNCWPANSA-N 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N Arg-Gly-Gly Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)NCC(O)=O CYXCAHZVPFREJD-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N Arg-Phe-His Natural products NC(CCNC(=N)N)C(=O)NC(Cc1ccccc1)C(=O)NC(Cc2c[nH]cn2)C(=O)O IGFJVXOATGZTHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 208000006820 Arthralgia Diseases 0.000 description 1
- XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N Asp-Arg-Val Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O XYBJLTKSGFBLCS-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N Asp-Gly-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SNDBKTFJWVEVPO-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N Asp-Ile-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QNFRBNZGVVKBNJ-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N Asp-Leu-Asn Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O CLUMZOKVGUWUFD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N Asp-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJLLRXWFPQQPHV-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- HTSSXFASOUSJQG-IHPCNDPISA-N Asp-Tyr-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HTSSXFASOUSJQG-IHPCNDPISA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 206010005949 Bone cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N Cys-Arg-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O SZQCDCKIGWQAQN-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 206010012335 Dependence Diseases 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 1
- 241001524679 Escherichia virus M13 Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- LLRJEFPKIIBGJP-DCAQKATOSA-N Gln-Glu-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N LLRJEFPKIIBGJP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WLRYGVYQFXRJDA-DCAQKATOSA-N Gln-Pro-Pro Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N1[C@H](C(O)=O)CCC1 WLRYGVYQFXRJDA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N Gln-Val-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ZFBBMCKQSNJZSN-AUTRQRHGSA-N 0.000 description 1
- IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N Glu-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O IESFZVCAVACGPH-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N Gly-Ile-Val Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O COVXELOAORHTND-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N Gly-Leu-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O MIIVFRCYJABHTQ-ONGXEEELSA-N 0.000 description 1
- PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N Gly-Lys-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(O)=O PDUHNKAFQXQNLH-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N Gly-Ser-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WCORRBXVISTKQL-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N Gly-Thr-Asp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O NVTPVQLIZCOJFK-FOHZUACHSA-N 0.000 description 1
- JYGYNWYVKXENNE-OALUTQOASA-N Gly-Tyr-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O JYGYNWYVKXENNE-OALUTQOASA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- ZHHLTWUOWXHVQJ-YUMQZZPRSA-N His-Ser-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)O)N ZHHLTWUOWXHVQJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101710138871 Ig gamma-1 chain C region Proteins 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 102100039345 Immunoglobulin heavy constant gamma 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010065390 Inflammatory pain Diseases 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N Leu-Asn-Trp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)N USTCFDAQCLDPBD-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N Leu-Gln-Glu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N ZTLGVASZOIKNIX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CQGSYZCULZMEDE-SRVKXCTJSA-N Leu-Gln-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N Leu-Gln-Pro Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)N1CCCC1C(O)=O CQGSYZCULZMEDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N Leu-Glu-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 FEHQLKKBVJHSEC-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- XXXXOVFBXRERQL-ULQDDVLXSA-N Leu-Pro-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XXXXOVFBXRERQL-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N Leu-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O LINKCQUOMUDLKN-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N Leu-Val-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O QESXLSQLQHHTIX-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N Lys-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IXHKPDJKKCUKHS-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N Lys-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KWUKZRFFKPLUPE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N Lys-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SKRGVGLIRUGANF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N Lys-Leu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O AIRZWUMAHCDDHR-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WRODMZBHNNPRLN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N Lys-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O PDIDTSZKKFEDMB-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- 239000012515 MabSelect SuRe Substances 0.000 description 1
- SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N Met-Thr-Gln Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O SPSSJSICDYYTQN-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108010066427 N-valyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 229940122467 Nerve growth factor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N Phe-Asp-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 CUMXHKAOHNWRFQ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- UNBFGVQVQGXXCK-KKUMJFAQSA-N Phe-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UNBFGVQVQGXXCK-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BPIMVBKDLSBKIJ-FCLVOEFKSA-N Phe-Thr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 BPIMVBKDLSBKIJ-FCLVOEFKSA-N 0.000 description 1
- FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108091005682 Receptor kinases Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N Ser-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBZBPFLJNDXRAY-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N Ser-Arg-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O QGMLKFGTGXWAHF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- HBOABDXGTMMDSE-GUBZILKMSA-N Ser-Arg-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HBOABDXGTMMDSE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N Ser-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VQBCMLMPEWPUTB-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N Ser-Gly-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)CNC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)O KDGARKCAKHBEDB-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N Ser-Gly-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O UIGMAMGZOJVTDN-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N Ser-Gly-Tyr Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 OQPNSDWGAMFJNU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YUJLIIRMIAGMCQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HDBOEVPDIDDEPC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N Ser-Pro-Ser Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O AZWNCEBQZXELEZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N Ser-Tyr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O OSFZCEQJLWCIBG-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N Thr-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GXUWHVZYDAHFSV-FLBSBUHZSA-N 0.000 description 1
- YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N Thr-Leu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YOOAQCZYZHGUAZ-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N Thr-Phe-Gly Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 BIBYEFRASCNLAA-CDMKHQONSA-N 0.000 description 1
- MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N Thr-Val-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MNYNCKZAEIAONY-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- 102000005937 Tropomyosin Human genes 0.000 description 1
- 108010030743 Tropomyosin Proteins 0.000 description 1
- BEWOXKJJMBKRQL-AAEUAGOBSA-N Trp-Gly-Asp Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N BEWOXKJJMBKRQL-AAEUAGOBSA-N 0.000 description 1
- GQHAIUPYZPTADF-FDARSICLSA-N Trp-Ile-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O)=CNC2=C1 GQHAIUPYZPTADF-FDARSICLSA-N 0.000 description 1
- NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N Tyr-Ala-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 NOXKHHXSHQFSGJ-FQPOAREZSA-N 0.000 description 1
- QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N Tyr-Cys-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QOIKZODVIPOPDD-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- QOEZFICGUZTRFX-IHRRRGAJSA-N Tyr-Cys-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QOEZFICGUZTRFX-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N Tyr-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O QUILOGWWLXMSAT-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RZAGEHHVNYESNR-RNXOBYDBSA-N Tyr-Trp-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RZAGEHHVNYESNR-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N Tyr-Tyr-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 TYGHOWWWMTWVKM-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N Tyr-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N Val-Arg-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 1
- COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N Val-Arg-Gly Natural products CC(C)C(N)C(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CCCN=C(N)N COYSIHFOCOMGCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N Val-Pro-Ser Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O SSYBNWFXCFNRFN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N Val-Ser-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N PZTZYZUTCPZWJH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- QHSSPPHOHJSTML-HOCLYGCPSA-N Val-Trp-Gly Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)NCC(=O)O)N QHSSPPHOHJSTML-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 230000000202 analgesic effect Effects 0.000 description 1
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- -1 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 230000009830 antibody antigen interaction Effects 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010069205 aspartyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 238000004182 chemical digestion Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000008451 emotion Effects 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000037406 food intake Effects 0.000 description 1
- 235000012631 food intake Nutrition 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 102000046917 human NGF Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 230000007472 neurodevelopment Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007514 neuronal growth Effects 0.000 description 1
- 230000006576 neuronal survival Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127240 opiate Drugs 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010087846 prolyl-prolyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000012521 purified sample Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005026 transcription initiation Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 102000015533 trkA Receptor Human genes 0.000 description 1
- 108010064884 trkA Receptor Proteins 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010003137 tyrosyltyrosine Proteins 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области иммунологии и молекулярной биологии. Более конкретно, настоящее изобретение относится к моноклональному антителу против фактора роста нервов, кодирующему его гену и его применению для изготовления наборов для детектирования и для производства различных лекарственных средств.
Уровень техники
Фактор роста нервов (NGF) является одним из самых ранних определенных трофических факторов роста нервов и играет важную роль в формировании, дифференцировке и поддержании функции биологических нейронов. NGF может связываться с тропомиозин-рецепторной киназой A (TrKA) с высоким сродством и неспецифично связываться с рецептором P75NTR. Появляется все больше и больше доказательств, свидетельствующих о том, что помимо биологического воздействия на рост, развитие и выживание нейронов, NGF следует рассматривать в качестве медиатора постоянной и хронической боли. Например, внутривенная инфузия NGF может вызвать системные болевые реакции, а местная инъекция NGF может вызвать гипералгезию и аномальную боль в месте инъекции. Секреция NGF в месте воспаления увеличивается и длится дольше. Кроме того, при некоторых типах рака избыток NGF способствует росту и инфильтрации нервных волокон, вызывая, таким образом, боль при раке. Имеются сообщения о том, что мыши с нокаутным рецептором TrKA не испытывают боли, и NGF считается молекулой, тесно связанной с болью. Эти данные свидетельствуют о том, что использование ингибиторов NGF может облегчить болевые реакции на животных моделях невропатической и хронической воспалительной боли. Нейтрализующие анти-NGF антитела могут существенно облегчить боль на мышиной модели боли при раке.
Лекарственные препараты на основе антител, особенно моноклональных антител, на сегодняшний день являются высокоэффективными при лечении различных заболеваний. Получение безопасных и эффективных моноклональных анти-NGF антител может обеспечить новый класс анальгетиков для лечения хронической боли и боли при раке, отличный от опиатов, нестероидов и т.д., которые вызывают привыкание или побочные эффекты в пищеварительном тракте. В настоящее время танезумаб, разработанный компанией Pfizer Pharmaceuticals Co., Ltd., показал хорошие анальгетические эффекты в доклинических и клинических исследованиях. Однако до сих пор имеется недостаток в других более эффективных антиNGF антителах.
Сущность изобретения
Целью настоящего изобретения является преодоление недостатков, связанных с низкой активностью и видовыми различиями антител против фактора роста нервов, предшествующего уровня техники, а также предоставление моноклональных антител против фактора роста нервов, которые являются высокоактивными с устраненными межвидовыми различиями, и предоставление кодирующего гена и их применение, а также их применение при изготовлении наборов для детектирования и при изготовлении различных лекарственных средств.
Для достижения вышеуказанной цели изобретения настоящее изобретение предоставляет моноклональное антитело, которое может специфически связываться с человеческим фактором роста нервов, содержащее тяжелые цепи и легкие цепи, где тяжелая цепь содержит константную область тяжелой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, и легкая цепь содержит константную область легкой цепи и вариабельную область легкой цепи.
Вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи определяют связывание антигена; где вариабельная область каждой цепи содержит три гипервариабельные области, называемые определяющими комплементарность областями (CDR) (CDR тяжелой цепи (H) включают HCDR1, HCDR2, HCDR3, и CDR легкой цепи (L) включают LCDR1, LCDR2, LCDR3; названные по Kabat et al., см. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition (1991), Volumes 1-3, NIH Publication 91-3242, Bethesda Md).
В настоящем изобретении вариабельная область тяжелой цепи содержит три определяющих комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и вариабельная область легкой цепи содержит три определяющих комплементарность области LCDR1, LCDR2 и LCDR3;
где аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области HCDR1 приведена в SEQ ID NO: 5;
аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области HCDR2 приведена в SEQ ID NO: 6;
аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области HCDR3 приведена в SEQ ID NO: 7;
аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области LCDR1 приведена в SEQ ID NO: 8;
аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области LCDR2 приведена в SEQ ID NO: 9; и аминокислотная последовательность определяющей комплементарность области LCDR3 приведена в SEQ ID NO: 10.
В настоящем изобретении сконструированы аминокислотные последовательности 6 областей CDR
- 1 044828 и введены специфические модификации для улучшения антигенсвязывающей активности вариабельных областей антитела. Для приведения в соответствие с изменениями в областях CDR, каркасные области также модифицируют. Однако необходимо убедиться, что модификации этих каркасных областей все еще совместимы с последовательностями человеческой зародышевой линии. Модификации каркаса также анализируют, чтобы убедиться, что эти изменения не влияют на связывание областей CDR с антигенами.
Определяющие комплементарность области (CDR) вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи моноклонального антитела, которые представлены в приведенных выше SEQ ID NO: 5-7 и SEQ ID NO: 8-10, соответственно, анализируют с помощью технических средств, известных специалистам в данной области, например, через веб-сайт Национального центра биотехнологической информации (NCBI). В настоящем изобретении это моноклональное антитело названо H26L17.
В качестве предпочтительной технической схемы моноклонального антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи приведена в SEQ ID NO: 2; аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи приведена в SEQ ID NO: 4.
В качестве дополнительной предпочтительной технической схемы моноклонального антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи, приведена в SEQ ID NO: 1; нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи, приведена в SEQ ID NO: 3.
В одном из вариантов осуществления моноклонального антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению моноклональное антитело против фактора роста нервов выбирают из Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, фрагмента определяющей комплементарность области, одноцепочечного антитела (например, scFv), гуманизированного антитела, химерного антитела и диатела.
В одном из вариантов осуществления моноклонального антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению моноклональное антитело против фактора роста нервов связывается с белком NGF с EC50 менее 100 нМ (например, менее примерно 10, 1, 0,9, 0,8, 0,7, 0,6, 0,5, 0,4, 0,3, 0,2, 0,1 нМ или менее). При этом EC50 можно измерить с помощью сэндвич-метода ELISA.
В одном из вариантов осуществления моноклонального антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению моноклональное антитело против фактора роста нервов содержит область, не являющуюся CDR, где эта область, не являющаяся CDR, принадлежит другим видам, не мышам, например, человеческому антителу.
Для достижения указанной выше цели настоящее изобретение также предоставляет ген, кодирующий указанное выше моноклональное антитело против фактора роста нервов.
Для достижения вышеупомянутой цели настоящее изобретение также предоставляет вектор, содержащий нуклеотидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи и/или нуклеотидную последовательность вариабельной области легкой цепи.
Для достижения вышеупомянутой цели настоящее изобретение также предоставляет клетку-хозяин, содержащую нуклеотидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи и/или нуклеотидную последовательность вариабельной области легкой цепи; или вектор, содержащий нуклеотидную последовательность вариабельной области тяжелой цепи и/или нуклеотидную последовательность вариабельной области легкой цепи.
Для достижения вышеуказанной цели настоящее изобретение также предоставляет способ получения моноклонального антитела против фактора роста нервов, который включает культивирование клетки-хозяина по настоящему изобретению в подходящих условиях и выделение моноклонального антитела против фактора роста нервов из клеточной культуры.
Настоящее изобретение также предоставляет конъюгат моноклонального антитела, содержащий моноклональное антитело против фактора роста нервов и конъюгированную часть, конъюгированную с ним, где конъюгированная часть представляет собой детектируемую метку. Предпочтительно конъюгированная часть представляет собой радиоизотоп, люминесцентное вещество, окрашенное вещество или фермент.
Настоящее изобретение также предоставляет набор, содержащий моноклональное антитело против фактора роста нервов и/или конъюгат моноклонального антитела.
В качестве предпочтительной технической схемы набора по настоящему изобретению набор дополнительно содержит вторичное антитело, которое специфически распознает моноклональное антитело против фактора роста нервов; кроме того, вторичное антитело дополнительно содержит детектируемую метку, такую как радиоизотоп, люминесцентное вещество, окрашенное вещество или фермент.
Настоящее изобретение также предоставляет применению моноклонального антитела против фактора роста нервов и/или конъюгата моноклонального антитела в наборе, который позволяет определять присутствие и/или уровень фактора роста нервов. Набор используется для определения наличия или уровня NGF в образце.
Настоящее изобретение также предоставляет лекарственное средство, содержащее моноклональное антитело против фактора роста нервов и/или конъюгат моноклонального антитела; где лекарственное
- 2 044828 средство необязательно дополнительно содержит фармацевтически приемлемые носители и/или вспомогательные вещества.
Вышеупомянутое лекарственное средство специфически связывается с фактором роста нервов и может быть использован для подавления биологических эффектов, опосредованных фактором роста нервов, таких как пролиферация клеток TF-1; и/или для лечения или профилактики невропатической боли, хронической боли и связанной с воспалением боли.
В настоящем изобретении в результате экспериментов in vivo было обнаружено, что моноклональные антитела против фактора роста нервов по настоящему изобретению могут уменьшать изменение походки в случае пораженной конечности и потерю веса животным в мышиной модели боли при артрите коленного сустава Lenti-IL-1e-NIH/3T3.
В настоящем изобретении, если не указано иное, используемые научные и технические термины имеют значения, обычно понятные специалистам в данной области. Кроме того, выполняемые в лаборатории операции по культивированию клеток, молекулярной генетике, химии нуклеиновых кислот и иммунологии, используемые в настоящем изобретении, являются рутинными операциями, широко используемыми в соответствующих областях. Между тем, для лучшего понимания настоящего изобретения ниже приведены определения и пояснения соответствующих терминов.
Используемый в настоящем изобретении термин антитело относится к молекуле иммуноглобулина, которая обычно состоит из двух пар полипептидных цепей (каждая пара с одной легкой (L) цепью и одной тяжелой (H) цепью). Легкие цепи антитела классифицируются как легкие к- и λ-цепи. Тяжелые цепи классифицируются как μ, δ, γ, α или ε. Изотипы антител определяются как IgM, IgD, IgG, IgA и IgE, соответственно. В легких цепях и тяжелых цепях вариабельная область и константная область связаны областью J, состоящей из примерно 12 или более аминокислот, и тяжелая цепь также содержит область D, состоящую из примерно 3 или более аминокислот. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (CH). Константная область тяжелой цепи состоит из трех доменов (CH1, CH2 и CH3). Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL). Константная область легкой цепи состоит из одного домена CL-константная область антитела может опосредовать связывание иммуноглобулинов с тканями или факторами хозяина, включая связывание различных клеток (например, эффекторных клеток) иммунной системы и первого компонента (C1q) классической системы комплемента. Области VH и VL могут быть дополнительно подразделены на высоковариабельные области (называемые определяющими комплементарность областями (CDR)), между которыми распределены консервативные области, называемые каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из 3 CDR и 4 FR, расположенных от аминоконца до карбоксильного конца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области (VH и VL) каждой пары тяжелая цепь/легкая цепь образуют сайты связывания антител, соответственно. Отнесение аминокислот к каждой области или домену выполнено в соответствии с определением по Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 и 1991)) или Chothia & Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al. (1989) Nature 342:878-883. Термин антитело не ограничено каким-либо конкретным способом получения антитела. Например, антитело включает, в частности, рекомбинантное антитело, моноклональное антитело и поликлональное антитело. Антитела могут быть разными изотипами антител, такими как антитела IgG (например, подтип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), IgA1, IgA2, IgD, IgE или IgM.
Используемый в настоящем изобретении термин антигенсвязывающий фрагмент антитела относится к полипептиду, содержащему фрагмент полноразмерного антитела, который сохраняет способность специфически связываться с тем же антигеном, с которым связывается полноразмерное антитело, и/или конкурировать с полноразмерным антителом за специфическое связывание с антигеном, который также известен как антигенсвязывающая часть. См. Fundamental Immunology, гл. 7 (Paul, W., ed., 2nd edition, Raven Press, NY (1989), которая включена в настоящее описание во всей своей полноте в виде ссылки для всех целей. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены с помощью технологии рекомбинантной ДНК или ферментативного или химического расщепления интактных антител. В некоторых случаях антигенсвязывающий фрагмент включает Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, фрагмент определяющей комплементарность области (CDR), одноцепочечный фрагмент антитела (например, scFv), химерное антитело, диатело и полипептид, содержащий по меньшей мере часть антитела, достаточную для придания полипептиду специфической способности связывания антигена.
Используемый в настоящем изобретении термин фрагмент Fd относится к фрагменту антитела, состоящему из доменов VH и CH1; термин фрагмент Fv относится к фрагменту антитела, состоящему из доменов VL и VH одного плеча антитела; термин фрагмент dAb относится к фрагменту антитела, состоящему из домена VH (Ward et al., Nature 341:544-546 (1989)); термин Fab-фрагмент относится к фрагменту антитела, состоящему из доменов VL, VH, CL и CH1; и термин фрагмент F(ab')2 относится к фрагменту антитела, содержащему два Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области.
В некоторых случаях антигенсвязывающий фрагмент антитела представляет собой одноцепочечное
- 3 044828 антитело (например, scFv), в котором домены VL и VH спарены с образованием одновалентной молекулы через линкер, который позволяет им продуцировать единую полипептидную цепь (см., например, Bird et al., Science 242:423 426 (1988) и Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879 5883 (1988)). Такие молекулы scFv имеют общую структуру: NH2-VL-линкер-VH-COOH или NH2-VH-линкер-VL-COOH. Подходящий линкер предшествующего уровня техники состоит из повторяющейся аминокислотной последовательности GGGGS или ее варианта. Например, можно использовать линкер, имеющий аминокислотную последовательность (GGGGS)4, но также можно использовать его варианты (Holliger et al. (1993), Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448). Другие линкеры, которые можно использовать в настоящем изобретении, описаны Alfthan et al. (1995), Protein Eng. 8:725-731, Choi et al. (2001), Eur. J. Immunol. 31:94-106, Hu et al. (1996), Cancer Res. 56:3055-3061, Kipriyanov et al. (1999), J. Mol. Biol. 293:41-56 и Roovers et al. (2001), Cancer Immunol.
В некоторых случаях антигенсвязывающий фрагмент антитела представляет собой диатело, т.е. двухвалентное антитело, в котором домены VH и VL экспрессируются в одной полипептидной цепи. Однако используемый линкер слишком короткий, чтобы позволить спаривание двух доменов в одной цепи, поэтому домены вынуждены спариваться с комплементарными доменами другой цепи, создавая два сайта связывания антигена (см., например, Holliger P. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993) и Poljak RJ et al., Structure 2:1121-1123 (1994)).
Антигенсвязывающие фрагменты антител могут быть получены из данных антител с помощью обычных методов, известных специалистам в данной области (например, технологии рекомбинантной ДНК или ферментативного или химического расщепления), и антигенсвязывающие фрагменты антител подвергают скринингу на специфичность в тех же условиях, что и интактные антитела.
В настоящем изобретении, если из контекста в явном виде не следует иное, когда речь идет о термине антитело, он включает не только интактные антитела, но также антигенсвязывающие фрагменты антител.
Используемые в настоящем изобретении термины McAb и моноклональное антитело относятся к антителу или фрагменту антитела, которое происходит из группы высокогомологичных антител, т.е. из группы идентичных молекул антител, за исключением естественных мутаций, которые могут возникать спонтанно. Моноклональное антитело обладает высокой специфичностью к одному эпитопу на антигене. Поликлональное антитело по сравнению с моноклональным антителом обычно содержит по меньшей мере два или более разных антител, которые обычно распознают разные эпитопы на антигене. Моноклональные антитела как правило могут быть получены с помощью гибридомной технологии, впервые описанной Kohler et al. (Nature, 256:495, 1975), но также могут быть получены с помощью технологии рекомбинантной ДНК (например, см. Патент США 4,816,567).
Используемый в настоящем изобретении термин гуманизированное антитело относится к антителу или фрагменту антитела, получаемому, когда все или часть областей CDR человеческого иммуноглобулина (рецепторного антитела) заменены областями CDR нечеловеческого антитела (донорского антитела), где донорское антитело может быть нечеловеческим (например, мышиным, крысиным или кроличьим) антителом с требуемой специфичностью, сродством или реактивностью. Кроме того, некоторые аминокислотные остатки в каркасных областях (FR) рецепторного антитела также могут быть заменены аминокислотными остатками соответствующих нечеловеческих антител или аминокислотными остатками других антител для дальнейшего улучшения или оптимизации функциональных характеристик антитела. Более подробно о гуманизированных антителах см., например, Jones et al., Nature, 321:522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332:323-329 (1988); Presta, Curr. Op Struct. Biol., 2:593-596 (1992); и Clark, Immunol. Today 21:397-402 (2000).
Используемый в настоящем изобретении термин эпитоп относится к участку антигена, с которым специфически связывается иммуноглобулин или антитело. Эпитоп также называется в данной области антигенной детерминантой. Эпитоп или антигенная детерминанта обычно состоит из поверхностных химически активных групп молекулы, таких как аминокислоты, углеводы или боковые цепи сахара, и обычно имеет специфические трехмерные структурные характеристики и специфические характеристики заряда. Например, эпитоп обычно включает по меньшей мере 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15 непрерывно или дискретно расположенных аминокислот в уникальной пространственной конформации, и может быть линейным или конформационным. См., например, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol.66, G. E. Morris, Ed. (1996). В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком и взаимодействующей молекулой (например, антителом) расположены линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия находятся между аминокислотными остатками белка, которые отделены друг от друга.
Используемый в настоящем изобретении термин выделенный означает полученный искусственным путем из естественного состояния. Если в природе появляется некоторое выделенное вещество или компонент, это может быть связано с изменением в его естественной среде, или он является выделенным из естественной среды, или и то, и другое. Например, определенный невыделенный полинуклеотид или полипептид существует в природе в определенном живом животном, и тот же полинуклеотид или полипептид, выделенный с высокой чистотой из такого естественного состояния, называется выде- 4 044828 ленным полинуклеотидом или полипептидом. Термин выделенный не исключает существования искусственных или синтетических веществ или других примесей, которые не влияют на активность этого вещества.
Используемый в настоящем изобретении термин система экспрессии E. coli относится к системе экспрессии, состоящей из E. coli (штамма) и вектора, где E. coli (штамм) происходит из коммерчески доступного штамма, такого как, без ограничения, GI698, ER2566, BL21 (DE3), B834 (DE3) и BLR (DE3).
Используемый в настоящем изобретении термин вектор относится к носителю нуклеиновой кислоты, в который может быть вставлен полинуклеотид. Когда вектор обеспечивает экспрессию белка, кодируемого вставленным полинуклеотидом, вектор называется вектором экспрессии. Вектор может быть введен в клетку-хозяин путем трансформации, трансдукции или трансфекции таким образом, что элементы генетического вещества, переносимые вектором, могут быть экспрессированы в клеткехозяине. Векторы хорошо известны специалистам в данной области и включают, без ограничения: плазмиды; фагемиды; космиды; искусственные хромосомы, такие как искусственные хромосомы дрожжей (YAC), бактериальные искусственные хромосомы (BAC) или искусственные хромосомы на основе P1 (PAC); фаги, такие как лямбда-фаги или фаги M13, и вирусы животных и т.д. Вирусы животных, которые могут использоваться в качестве векторов, включают, без ограничения, ретровирусы (включая лентивирусы), аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, вирусы герпеса (такие как вирус простого герпеса), поксвирусы, бакуловирусы, папилломавирусы и паповавирусы (например, SV40). Вектор может содержать множество элементов, контролирующих экспрессию, включая, помимо прочего, промоторные последовательности, последовательности инициации транскрипции, энхансерные последовательности, элементы отбора и репортерные гены. Кроме того, вектор может дополнительно содержать сайт инициации репликации.
Используемый в настоящем изобретении термин клетка-хозяин относится к клеткам, которые можно использовать для введения векторов, включая, без ограничения, прокариотические клетки, такие как E. coli или bacillus subtilis, клетки грибов, такие как клетки дрожжей или aspergillus, клетки насекомых, такие как клетки дрозофилы S2 или Sf9, или клетки животных, такие как фибробласты, клетки CHO, клетки COS, клетки NSO, клетки HeLa, клетки BHK, клетки HEK 293 или клетки человека.
Используемый в настоящем изобретении термин специфически связывать относится к реакции неслучайного связывания между двумя молекулами, такой как реакция между антителом и антигеном, на который оно нацелено. В некоторых вариантах реализации антитело, которое специфически связывается с антигеном (или антитело, которое является специфическим для антигена), означает, что антитело связывается с антигеном со сродством (KD) менее примерно 10-5 М, например, менее чем примерно 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 М или менее.
Используемый в настоящем изобретении термин KD относится к константе равновесной диссоциации, характеризующей специфическое взаимодействие антитело-антиген, которая используется для описания сродства связывания между антителом и антигеном. Чем меньше константа равновесной диссоциации, тем прочнее связь антитело-антиген и тем выше сродство между антителом и антигеном. Обычно антитела связываются с антигенами (например, белком L1) с константой равновесной диссоциации (KD) менее примерно 10-5 М, например менее примерно 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-10 М или менее, например, определенной с помощью прибора BIACORE методом поверхностного плазмонного резонанса (SPR).
Используемые в настоящем изобретении термины моноклональное антитело и McAb имеют одинаковое значение и могут использоваться взаимозаменяемо; термины поликлональное антитело и PcAb имеют одинаковое значение и могут использоваться взаимозаменяемо; термины полипептид и белок имеют одинаковое значение и могут использоваться взаимозаменяемо. И в настоящем изобретении аминокислоты как правило представлены однобуквенными или трехбуквенными обозначениями, известными в данной области. Например, аланин может быть представлен буквой А или Ala.
Используемый в настоящем изобретении термин эффективное количество относится к количеству, достаточному для получения или, по меньшей мере, частичного получения требуемого эффекта. Например, профилактически эффективное количество относится к количеству, достаточному для профилактики, купирования или отсрочки возникновения заболеваний; терапевтически эффективное количество относится к количеству, достаточному для излечения или, по меньшей мере, частичного купирования заболевания и его осложнений у пациентов, страдающих этим заболеванием. Специалисты в данной области вполне могут определить такое эффективное количество. Например, количество, эффективное для терапевтического применения, будет зависеть от тяжести заболевания, которое подлежит лечению, общего состояния иммунной системы пациента, общего состояния пациента, такого как возраст, вес и пол, способа введения лекарственного средства и других одновременно предоставляемых видов лечения и т.д.
По сравнению с предшествующим уровнем техники настоящее изобретение имеет следующие преимущества:
моноклональное антитело против фактора роста нервов по настоящему изобретению может специфически связываться с фактором роста нервов и имеет такие преимущества, как высокая активность и т.п., и может использоваться для обнаружения наличия и/или уровня фактора роста нервов, а также для
- 5 044828 производства лекарственного средства, противодействующего фактору роста нервов, и для производства лекарственного средства для лечения или профилактики невропатической боли, хронической боли и связанной с воспалением боли, таким образом, оно имеет хорошие перспективы применения и востребовано на рынке.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 показаны результаты анализа SDS-PAGE моноклонального антитела H26L17 против фактора роста нервов по настоящему изобретению. Образцы из четырех полос слева направо и их соответствующие загрузочные количества представляют собой: антитело в загрузочном буфере для электрофореза белка в нередуцирующих условиях, 1 мкг; антитело в загрузочном буфере для электрофореза белка в редуцирующих условиях, 1 мкг; маркер молекулярной массы белка (Marker), 5 мкл; бычий сывороточный альбумин (BSA), 1 мкг.
На фиг. 2 показаны результаты анализа активности связывания H26L17 и танезумаба с антигеном человеческим β-NGF.
На фиг. 3 показаны результаты стандартной кривой для анализа ингибирования пролиферации клеток TF-1, обусловленного действием H26L17 и танезумаба, выполненного методом CCK-8.
На фиг. 4 показано количество клеток через 72 часа ингибирования NGF-индуцированной пролиферации клеток TF-1 моноклональным антителом H26L17 против фактора роста нервов по настоящему изобретению.
На фиг. 5 показано значение OD для каждой группы, полученное при измерении методом CCK-8 ингибирования пролиферации клеток TF-1, обусловленного действием H26L17 и танезумаба.
На фиг. 6 показана кривая аппроксимации для H26L17, ингибирующего NGF-индуцированную пролиферацию клеток TF-1. Взяв логарифм концентрации антител (нМ) в качестве оси абсцисс и значение OD при 450 нм в качестве оси ординат, строили кривую доза-эффект для сравнения EC50 разных антител.
На фиг. 7 показано влияние H26L17 на паттерн ходьбы при пораженной конечности, вызванную болью, на мышиной модели боли при артрите коленного сустава Lenti-IL-1e-NIH/3T3.
На фиг. 8 показано влияние H26L17 на вес мышей на мышиной модели боли при артрите коленного сустава Lenti-IL-1e-NIH/3T3.
Подробное описание изобретения
Варианты осуществления настоящего изобретения описаны более подробно ниже со ссылкой на примеры. Специалисты в данной области поймут, что приведенные ниже примеры используются только для иллюстрации настоящего изобретения и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего изобретения. Случаи без конкретных описаний методов или условий выполняли в соответствии с методами или условиями, описанными в литературе в данной области техники (например, см. Guide to Molecular Cloning Experiments, под редакцией J. Sambrook et al. и переведенным Huang Peitang et al., third edition, Science Press) или в соответствии с руководством по продукту. Используемые реагенты или инструменты являются обычными коммерчески доступными продуктами, если их производители не указаны.
В приведенных ниже примерах настоящего изобретения мышей C57BL/6 для экспериментов приобретены в Центре медицинских экспериментальных животных провинции Гуандун.
Используемое антитело положительного контроля, танезумаб, представляло собой антитело Танезумаб компании Pfizer (David L. Shelton. Methods for treating bone cancer by administering a Nerve Growth Factor antagonist antibody. USA, 20110243961A1. 2011-06-06).
Пример 1. Разработка, экспрессия и очистка последовательностей тяжелой и легкой цепи H26L17.
1. Разработка антитела.
Для создания антитела H26L17 к NGF человека, была разработана серия последовательностей антител на основе последовательности белка NGF и его трехмерной кристаллической структуры и т.д. Посредством широкомасштабного скрининга и анализов было получено антитело H26L17, которое специфически связывается с NGF. Аминокислотные последовательности вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи антитела и их кодирующие последовательности ДНК представлены в SEQ ID NO: 1-4.
2. Экспрессия и очистка антител.
Кодирующая нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи (приведена в SEQ ID NO: 1; константная область представляет собой C-область цепи гамма-1 Ig, номер доступа: P01857) и кодирующая нуклеотидная последовательность вариабельной области легкой цепи (приведена в SEQ ID NO: 3; константная область представляет собой C-область цепи лямбда-2 Ig; номер доступа: P0CG05.1) H26L17 независимо клонировали в векторы pUC57simple (предоставленные Genscript), и получали плазмиды pUC57simple-H26L17H и pUC57simple-H26L17L, соответственно.
Плазмиды pUC57simple-H26L17H и pUC57simple-H26L17L расщепляли (HindIII и EcoRI), и нуклеотидные последовательности тяжелой цепи и легкой цепи, выделенные с помощью электрофореза, независимо субклонировали в векторы pcDNA3.1, и для совместной трансфекции экстрагировали рекомби- 6 044828 нантные плазмиды. Затем трансфицированные клетки 293F культивировали в течение 7 дней, культуральную среду центрифугировали с высокой скоростью, полученный супернатант концентрировали и наносили на колонку HiTrap MabSelect SuRe. Белок элюировали за одну стадию элюентом для выделения целевого образца. Образец антител хранили в буфере PBS.
Очищенный образец добавляли как к буферному раствору для электрофореза белка в редуцирующих условиях, так и к буферному раствору для электрофореза белка в нередуцирующих условиях, а затем кипятили. Обработанные образцы анализировали электрофорезом в SDS-PAGE. Электрофореграмма H26L17 показана на фиг. 1. Образец целевого белка в редуцирующем буфере составляет 45 кДа и 30 кДа, а образец целевого белка в нередуцирующем буфере (одно антитело) составляет 150 кДа.
H26L17, полученный в этом примере, использовали в следующих примерах 2-4.
Пример 2. Анализ связывающей активности H26L17 к антигену человеческому β-NGF.
В этом эксперименте использовали метод ELISA для определения EC50 (концентрация медианного эффекта) связывания H26L17 с человеческим β-NGF для исследования специфичности связывания и сродства антитела к человеческому β-NGF.
Микропланшет покрывали 50 мкл 0,5 мкг/мл человеческого β-NGF в каждой лунке и инкубировали в течение ночи при 4°C. После того как микропланшет промывали один раз и промокали насухо, каждую лунку блокировали 300 мкл 1% раствора BSA (растворенного в PBS). Микропланшет инкубировали при 37°C в течение 2 ч и промокали насухо после трехкратной промывки. Антитело разбавляли до 1 мкг/мл в качестве начальной концентрации, и в микропланшете выполняли градиентное разбавление 1:3 для получения всего 7 концентраций в дополнение к пустой контрольной лунке. Для указанных выше концентраций готовили дублирующие лунки с конечным объемом 100 мкл на лунку, и микропланшет инкубировали при 37°C в течение 30 мин. После трехкратной промывки микропланшета и промокания насухо в каждую лунку добавляли 50 мкл рабочего раствора вторичных козьих антител к человеческому IgG (H+L), меченных пероксидазой хрена, и микропланшет инкубировали при 37°C в течение 30 мин. После четырехкратной промывки микропланшета и промокания насухо в каждую лунку добавляли 50 мкл хромогенного раствора TMB для проявления цвета при комнатной температуре в течение 5 мин в отсутствие света, затем в каждую лунку добавляли 50 мкл стоп-раствора для остановки реакции проявления цвета. Сразу после прекращения реакции микропланшет помещали в считывающее устройство для микропланшетов и выбирали длину волны света, равную 450 нм, для считывания значения OD каждой лунки микропланшета. Программное обеспечение SoftMax Pro 6.2.1 использовали для анализа и обработки данных.
Из таблицы и фиг. 2 видно, что результаты считывания при 450 нм показывают, что H26L17 может эффективно связываться с человеческим β-NGF, и эффективность связывания зависит от дозы. Взяв концентрацию антитела в качестве абсциссы и значение оптической плотности в качестве оси ординат, строили 4-параметрическую кривую для аппроксимации, и получали EC50 связывания, составляющее 0,071 нМ, что сравнимо с танезумабом. В табл. 2 представлены результаты анализа активности связывания H26L17 и танезумаба с человеческим β-NGF. Результаты показывают, что связывание H26L17 с антигеном человеческим β-NGF является дозозависимым, при этом EC50 связывания составляет 0,071 нМ, что сравнимо с танезумабом.
Результаты анализа активности связывания H26L17 и танезумаба __________________ с антигеном человеческим β-NGF___________________
| Разведение антитела | Значение OD связывания антиген-антитело (450 нм) | |||
| H26L17 | танезумаб | |||
| 1 мкг/мл | 2,730 | 2,655 | 2,770 | 2,705 |
| 1:3 | 2,704 | 2,797 | 2,656 | 2,553 |
| 1:9 | 2,663 | 2,605 | 2,482 | 2,274 |
| 1:27 | 2,242 | 2,222 | 2,166 | 1,969 |
| 1:81 | 1,613 | 1,525 | 1,178 | 1,266 |
| 1:243 | 0,779 | 0,735 | 0,560 | 0,609 |
| 1:729 | 0,323 | 0,313 | 0,227 | 0,245 |
| 0 | 0,047 | 0,046 | 0,044 | 0,045 |
| ЕС50 (нм) | 0,071 | 0,103 |
Пример 3. Анализ клеточной биологической активности H26L17.
1. Анализ фармакологической активности H26L17 при ингибировании NGF-индуцированной пролиферации клеток TF-1.
Для анализа влияния H26L17 на ингибирование NGF-зависимой пролиферации клеток TF-1, антитела, клетки NGF и TF-1 в различных концентрациях совместно инкубировали, и измеряли пролифера- 7 044828 цию клеток через 72 ч культивирования. Конкретные процедуры заключаются в следующем:
клетки TF-1 собирали центрифугированием и подсчитывали, и в каждую лунку 96-луночного планшета высевали 40000 клеток. Для введения контрольной группе использовали три концентрации NGF: 0,2, 2 и 20 нг/мл, а для группы, получающей антитело, использовали концентрацию 20 нг/мл NGF; антитело использовали в пяти концентрациях: 0,016, 0,08, 0,4, 2 и 10 нМ. Перед введением в клетки премикса NGF/антитело антитело и NGF предварительно инкубировали при 37°C в течение 30 мин. В эксперименте также использовали контрольную группу изотипа. После того, как клетки культивировали в течение 72 ч (пипетировали и гомогенизировали каждые 24 ч) после обработки, пролиферацию клеток измеряли в соответствии с инструкциями тестового набора CCK-8 (для анализа брали 100 мкл жидкости). Стандартная кривая пролиферации клеток показана на фиг. 3. Результаты анализа клеточной пролиферации через 72 ч инкубации клеток показаны на фиг. 4. Как видно на фиг. 4, H26L17 ингибирует стимулирующий эффект NGF на пролиферацию клеток TF-1 дозозависимым образом. В частности, когда концентрация антитела ниже 0,08 нМ, антитело H26L17 значительно лучше ингибирует действие NGF на пролиферацию клеток TF-1, чем танезумаб, антитело положительного контроля.
2. Значение EC50 H26L17, нейтрализующее NGF, в эксперименте с H26L17, ингибирующим NGFиндуцированную пролиферацию клеток TF-1.
Для анализа фармакологической активности H26L17 в отношении ингибирования NGFиндуцированной пролиферации клеток TF-1 и вычисления значения EC50 H26L17, нейтрализующего NGF, антитела, клетки NGF и TF-1 в различных концентрациях инкубировали совместно, и через 72 часа культивирования измеряли пролиферацию клеток. Ниже приводится краткое описание конкретных процедур или методов:
клетки TF-1 собирали центрифугированием и в 96-луночный планшет высевали по 40000 клеток на лунку. Для введения в контрольной группе использовали три концентрации NGF: 0,06, 0,3 и 1,5 нМ. Конечная концентрация NGF в группе премикса NGF/антитела составляла 1,5 нМ, а концентрации антител составляли 0,0468, 0,07, 0,105, 0,158, 0,237, 0,356, 0,533 и 0,8 нМ, соответственно. Перед введением в клетки премикса NGF/антитело антитело и NGF предварительно инкубировали при 37°C в течение 30 мин. В эксперименте использовали контрольную группу с изотипом антитела с концентрацией 1,5 нМ. Через 72 часа культивирования (пипетирования и гомогенизации один раз каждые 24 часа) после обработки, пролиферацию клеток измеряли в соответствии с инструкциями набора для тестирования CCK-8 (для анализа использовали 100 мкл жидкости).
Значения OD для каждой группы, измеренные в эксперименте CCK-8, показаны на Фиг. 5. На оси x откладывали логарифм концентрации антител (нМ), а на оси y - значение OD 450 нм, и выполняли подбор кривой доза-эффект для сравнения EC50 различных антител; аппроксимирующая кривая показана на Фиг. 6. H26L17 может ингибировать NGF-индуцированную пролиферацию клеток TF-1 дозозависимым образом, демонстрируя нейтрализующую NGF активность, которая немного лучше активности коммерчески доступного препарата Танезумаб, применяемого с той же целью. Значение EC50, нейтрализующее NGF, этих двух антител составляют 0,16 и 0,21 нМ, соответственно, где антитело H26L17 оказалось значительно более эффективным по NGF-ингибирующему действию на пролиферацию клеток TF-1, чем танезумаб, антитело положительного контроля.
Пример 4. H26L17 может улучшать ходьбу при пораженной конечности и уменьшить потерю веса в мышиной модели Lenti-IL-1e-NIH/3T3 боли при артрите коленного сустава.
Пациенты с артритом хромают и имеют другие изменения в поведении из-за боли, а также потерю веса в результате уменьшения потребления пищи из-за плохих эмоций, вызванных болью. Для измерения облегчения, обусловленного анти-NGF антителом, болевого ответа при артрите коленного сустава создавали мышиную модель боли при артрите коленного сустава, вызванной Lenti-IL-1e-NIH/3T3, и эффективность лекарственного средства оценивали по улучшению поведения мышей. В этой модели клетки Lenti-IL-1e-NIH/3T3 сверхэкспрессируют ΓΕ-1β в суставной полости мышей, что, в свою очередь, вызывает воспаление суставов и боль в месте инъекции. В этом эксперименте 60 мышей C57BL/6 делили на 6 групп в соответствии с массой тела, а именно: нормальная группа (физиологический раствор, подкожно), модельная группа (анти-HEL, 20 мг/кг, подкожно), группа танезумаба (танезумаб, 20 мг/кг, подкожно) и группа низкой дозы антитела H26L17 (H26L17, 0,2 мг/кг, подкожно), группа средней дозы (H26L17, 2 мг/кг, подкожно) и группа высокой дозы (H26L17, 20 мг/кг, подкожно), по 10 животных в группе. День группировки обозначен как день 0 (D0). После группировки мышей взвешивали, и вводили подкожно соответствующие лекарственные средства в соответствии с массой тела мыши в объеме введения 10 мл/кг. Лекарственные средства вводили всего три раза подкожно в D0, D3 и D6, соответственно, после группировки. После введения в день группировки 10 мышам C57BL/6 в нормальной группе инокулировали суспензию клеток NIH/3T3 (50000 клеток/мышь) в полость коленного сустава, а другим 50 мышам C57BL/6 в остальных группах инокулировали суспензию клеток Lenti-IL-1e-NIH/3T3 (50000 клеток/мышь) в полость коленного сустава. Затем после введения в день группировки оценивали поведение мышей в дни D3, D5 и D11.
Результаты влияния анти-NGF антитела на болевую реакцию в коленном суставе у мышей показа
- 8 044828 ны на Фиг. 7. По сравнению с танезумабом, антителом положительного контроля (20 мг/кг, подкожно), у группы высокой дозы H26L17 (20 мг/кг, подкожно) болевой ответ был существенно снижен; по сравнению с танезумабом, антителом положительного контроля (20 мг/кг, подкожно) в группе низкой дозы антитела H26L17 (0,2 мг/кг, подкожно) и группе средней дозы H26L17 (2 мг/кг, подкожно) эффект уменьшения боли у мышей был эквивалентным. Результаты анти-NGF антитела в отношении потери веса мышей в мышиной модели боли при артрите коленного сустава показаны на Фиг. 8. Эффект уменьшения потери веса в мышиной модели боли при артрите коленного сустава в группах средней и высокой доз антитела H26L17 был эквивалентным эффекту танезумаба, антитела положительного контроля, и более значимым, чем в случае анти-HEL контрольного изотипа.
Выше были подробно описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, но настоящее изобретение не ограничивается этими вариантами осуществления. Специалисты в данной области могут сделать различные эквивалентные модификации или замены, не нарушая сущности настоящего изобретения. Эти эквивалентные модификации или замены включены в объем, определенный формулой изобретения настоящего изобретения.
Перечень последовательностей < 110> АКЕСО БАЙОФАРМА, ИНК < 12 0> МОНОКЛОНАЛЬНОЕ АНТИТЕЛО ПРОТИВ ФАКТОРА РОСТА НЕРВОВ, КОДИРУЮЩИЙ ЕГО ГЕН И ЕГО ПРИМЕНЕНИЕ < 160>10 < 170> SIPOSequenceListing 1.0 < 210>1 <211>363 < 212> ДНК <213> Нуклеотидная последовательность вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела H26L17 (искусственная последовательность) <400> 1 caggtgcagc tgcaggaaag cggaccagga ctggtgaagc ctagcgagac cctgagcctg 60 acttgtaccg tgtccggatt cgatctgagc ggctacgacc tgaattggat cagacagcct 120 cccggaaagg gcctggagtg gatcggtatc gtctggggag acggcagcag cgattacaac 180 agcgccgtga agagccgcgt gacaatcagc aaggacacca gcaagaacca gttcagcctg 240 aagctgtcta gcgtgacagc cgccgataca gcagtgtact attgcgtgcg gggcggctat 300 tggtacgcca ccagctacta cttcgactat tggggccagg gaacactggt gaccgtgtct 360 tct 363 <210> 2 <211> 121 <212> Белок <213> Аминокислотная последовательность вариабельной области тяжелой цепи моноклонального антитела H26L17 (искусственная последовательность) <400>2
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro SerGlu
5 1015
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Asp Leu Ser GlyTyr
2530
Asp Leu Asn Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
4045
Gly Ile Val Trp Gly Asp Gly Ser Ser Asp Tyr Asn Ser Ala Val Lys 50 5560
Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe SerLeu
70 7580
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr CysVal
9095
Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115120 <210> 3
- 9 044828 <211> 321 <212> ДНК <213> Нуклеотидная последовательность вариабельной области легкой цепи моноклонального антитела H26L17 (искусственная последовательность) <400> 3 gatatccaga tgacccagag ccccagctct ctgtcagcca gcgtgggcga tagagtgacc 60 atcacttgca gagccagcga gagcatcagc agcaacctga attggtacca gcagaagcca 120 ggcaaggccc ccaagctgct gatctactac accagcagat tccacagcgg cgtgcctagc 180 agattcagcg gaagcggcag cggcaccgac tttaccttca ccatcagctc tctgcagccc 240 gaggacatcg ccacctacta ttgccagcag gagcacaccc tgccctttac ctttggccag 300 ggaacaaagc tggagatcaa g 321 <210> 4 <211> 107 <212> Белок <213> Аминокислотная последовательность вариабельной области легкой цепи моноклонального антитела H26L17 (искусственная последовательность) <400> 4
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
5 1015
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser Ile Ser SerAsn
2530
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 4045
Tyr Tyr Thr Ser Arg Phe His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 5560
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu GlnPro
70 7580
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Glu His Thr Leu ProPhe
9095
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100105 <210>5 <211>8 <212> Белок <213> Определяющая комплементарность область 1 вариабельной области тяжелой цепи (HCDR1) <400> 5
Gly Phe Asp Leu Ser Gly Tyr Asp 15 <210>6 <211>7 <212> Белок <213> Определяющая комплементарность область 2 вариабельной области тяжелой цепи (HCDR2) <400> 6
Val Trp Gly Asp Gly Ser Ser 15 <210>7 <211>15 <212> Белок <213> Определяющая комплементарность область 3 вариабельной области тяжелой цепи (HCDR3) <400>7
Val Arg Gly Gly Tyr Trp Tyr Ala Thr Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr 1 5 1015 <210>8 <211>6 <212> Белок
-
Claims (10)
- <213> Определяющая комплементарность область 1 (LCDR1) <400> 8Glu Ser Ile Ser Ser Asn <210><211><212><213>БелокОпределяющая комплементарность область 2 (LCDR2) <400>Tyr Thr Ser 1 <210><211><212><213>БелокОпределяющая комплементарность область 3 (LCDR3) <400>Gln Gln Glu His Thr Leu Pro Phe ThrФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Моноклональное антитело против фактора роста нервов (NGF), содержащее тяжелую цепь, содержащую константную область тяжелой цепи и вариабельную область тяжелой цепи, и легкую цепь, содержащую константную область легкой цепи и вариабельную область легкой цепи, или его антигенсвязывающий фрагмент, где вариабельная область тяжелой цепи содержит три определяющие комплементарность области HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и вариабельная область легкой цепи содержит три определяющие комплементарность области LCDR1, LCDR2 и LCDR3;аминокислотная последовательность HCDR1 приведена в SEQ ID NO: 5;аминокислотная последовательность HCDR2 приведена в SEQ ID NO: 6;аминокислотная последовательность HCDR3 приведена в SEQ ID NO: 7;аминокислотная последовательность LCDR1 приведена в SEQ ID NO: 8;аминокислотная последовательность LCDR2 приведена в SEQ ID NO: 9; и аминокислотная последовательность LCDR3 приведена в SEQ ID NO: 10.
- 2. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1, в котором вариабельная область тяжелой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:2; и вариабельная область легкой цепи имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
- 3. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по п.1 или 2, где моноклональное антитело выбрано из Fab, Fab', F(ab')2, Fd, Fv, dAb, одноцепочечного антитела, гуманизированного антитела, химерного антитела и диатела.
- 4. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-3, которое связывается с NGF с EC50, значение которого меньше 100 нМ.
- 5. Моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-4, где моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержит область, не являющуюся CDR, которое принадлежит видам, отличным от вида мыши.
- 6. Молекула нуклеиновой кислоты, содержащая нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область тяжелой цепи, и нуклеотидную последовательность, кодирующую вариабельную область легкой цепи моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по любому из пп.1-5.
- 7. Молекула нуклеиновой кислоты по п.6, где нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область тяжелой цепи, представляет собой SEQ ID NO: 1; и нуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную область легкой цепи, представляет собой SEQ ID NO: 3.
- 8. Вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по п.6 или 7.
- 9. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п.6 или 7 или вектор по п.8.
- 10. Конъюгат моноклонального антитела, содержащий моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по любому из пп.1-5 и конъюгированный участок, конъюгированный с ним, где конъюгированный участок представляет собой детектируемую метку.-
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810344670.3 | 2018-04-17 | ||
| CN201811320006.1 | 2018-11-07 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA044828B1 true EA044828B1 (ru) | 2023-10-04 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230064544A1 (en) | Anti-ctla4 monoclonal antibody or its antigen binding fragments, pharmaceutical compositions and uses | |
| US20240025983A1 (en) | Monoclonal antibody against nerve growth factor, and encoding gene and use thereof | |
| WO2017071625A1 (zh) | 一种抗pd-1单克隆抗体、其药物组合物及其用途 | |
| US11402383B2 (en) | Nucleic acid encoding PCSK9 antibody | |
| CA2877669A1 (en) | Dual receptor antagonistic antigen-binding proteins and uses thereof | |
| CN112424223A (zh) | 抗序列相似家族19成员a5的抗体在治疗神经性疼痛中的用途 | |
| RU2716101C2 (ru) | Антитело к склеростину, его антигенсвязывающий фрагмент и медицинское применение | |
| TWI685504B (zh) | 抗gitr抗體、其抗原結合片段及其醫藥用途 | |
| KR20230004659A (ko) | 항-인간 신경 성장 인자 항체 | |
| WO2020244540A1 (zh) | 抗结缔组织生长因子抗体及其应用 | |
| EA044828B1 (ru) | Моноклональное антитело против фактора роста нервов, кодирующий его ген и его применение | |
| RU2737466C1 (ru) | Гуманизированное нейтрализующее антитело к интерферону-бета человека | |
| WO2024088386A1 (en) | Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof | |
| WO2024012434A1 (en) | Antibody, antigen-binding fragment thereof, and pharmaceutical use thereof | |
| KR20240022546A (ko) | 항il-36r 항체 및 그의 사용 | |
| CN114269788A (zh) | 一种能够与人4-1bb结合的分子及其应用 | |
| EA046350B1 (ru) | Анти-интерлейкин-17а антитело, фармацевтическая композиция и их применение |