EA043820B1

EA043820B1 - Лиганды toll-подобных рецепторов

Info

Publication number: EA043820B1
Application number: EA202091931
Authority: EA
Inventors: Хелен Базин-Ли; Джордж Эттенгер; Джухиенах Кхалаф; Кендал Т. Райтер
Original assignee: Иниммьюн Корпорейшн
Priority date: 2018-02-12
Filing date: 2019-02-12
Publication date: 2023-06-27

Description

Родственные заявки

Изобретение испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/629513, поданной 12 февраля 2018 года, которая включена в данное изобретение посредством ссылки во всей своей полноте.

Декларация государственного интереса

Настоящее изобретение было выполнено при поддержке государства в рамках гранта № 1R43AI136081-01A1, предоставленного Национальным институтом аллергии и инфекционных заболеваний. Правительство имеет определенные права на настоящее изобретение.

Область техники

Настоящее изобретение относится к лигандам Toll-подобных рецепторов, применимым в лечении заболеваний или состояний, опосредованных Toll-по добными рецепторами.изобретении.

Предпосылки изобретения

Давно известно, что грамотрицательные бактерии вызывают иммунологические реакции при участии Toll-по добных рецепторов (TLR). Для отдельных структурных компонентов, которые являются уникальными для этих патогенов, была установлена связь с сильными врожденными и адаптивными иммунными ответами. Существует значительный интерес к разработке агонистов и антагонистов TLR, поскольку фармакологические манипуляции с врожденными иммунными ответами могут привести к более эффективным вакцинам и новым подходам к лечению аутоиммунных, аллергических, атопических, злокачественных и инфекционных заболеваний.

Первым обнаруженным продуктом микроорганизмов, который является агонистом Toll-подобных рецепторов, был полученный из LPS липид А, высококонсервативный компонент клеточной стенки бактерий на основе глюкозамина, специфический для грамотрицательных бактерий, который активирует Toll-по добный рецептор 4 (TLR-4). Хотя липид А представляет собой сильное иммуномодулирующее средство, его медицинское применение является ограниченным вследствие его крайней токсичности, включая индукцию синдрома системного воспалительного ответа. Токсические эффекты липида А можно ослабить путем селективной химической модификации липида А с получением соединений на основе монофосфориллипида А (иммуностимулятор MPL; GlaxoSmithKline). Иммуностимулятор MPL и родственные соединения характеризуются адъювантной активностью, когда его применяют в вакцинных составах с белковыми и углеводными антигенами для усиления гуморального и/или клеточного иммунитета к антигенам. Гетерогенность, низкая эффективность и неудовлетворительная стабильность MPL и других лигандов TLR4 из природных источников или синтетических лигандов затрудняют их применение при многих показаниях.

Таким образом, существует потребность в улучшенных лигандах TLR с улучшенной эффективностью, стабильностью и/или чистотой.

Краткое описание изобретения

В настоящем изобретении предусмотрены соединения или их фармацевтически приемлемая соль, а также способы, композиции и наборы, раскрытые в данном изобретении, для лечения или предупреждения заболевания или состояния, опосредованных Toll-подобными рецепторами. Лиганды TLR по настоящему изобретению характеризуются новым остовом на основе аллозы с исключительной стабильностью в водном составе. В одном аспекте настоящего изобретения предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемая соль,

где: R¹ представляет собой R^2c или R^2c;

каждый из R^2a, R^2b и R^2c независимо представляет собой CH(R¹⁰)(Rⁿ);

R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С1_₂1алкил, -Х'-С₂-2(Длкил или -СЦ-Х^См₉алкил;

R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой С3_17алкил, -Х²-С2_1₆алкил, -СН₂-Х²-С1_15алкил, -Х²-С(=У⁴)С1.₁₅алкил, -СН₂-С(=¥⁴)С1.|5алкил, -Х²-С(=У⁴)С1.₁₅алкилен-2¹-С1.₁₅алкил, -СН₂-С(=У⁴)

Сызалкилен^-Сызалкил, -Сз.ралкилен^-Сызалкил, -Х²-С2_16алкилсн-2¹-С|_15алкил,

1 2 4 2 2 2

-СН₂-Х -С1-1₅алкилен-2 -С1_1₅алкил, -X -C(=Y )С1_1₅алкилен-2 или -X -С₂_1₆алкилен-2 ;

каждый из R^3a и R^3c независимо представляет собой СО₂Н, -OSO₃H, -ОР(О)(ОН)₂, -С1_₆алкиленСО₂Н, -С1_₆алкилен-О8О₃Н, -С1_₆алкилен-ОР(О)(ОН)₂, -ОС1_₆алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С1_₆алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С1_₆галогеналкилен-Р(О)(ОН)₂ или Н;

R^3a представляет собой СО₂Н, СО₂С1_₆алкил, -OSO₃H, -ОР(О)(ОН)₂, -С1_₆алкилен-СО₂Н, -С1_₆алкилен-О8О₃Н, -С1_₆алкилен-ОР(О)(ОН)₂, -ОС1_₆алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С1_₆алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С1_₆галогеналкилен-Р(О)(ОН)₂ или Н;

R^3d представляет собой СО₂Н, -SO₃H, -Р(О)(ОН)₂, -С1_₆алкилен-СО₂Н, -С1_₆алкилен-О8О₃Н,

- 1 043820

-С_1-балкилен-ОР(О)(ОН)₂, -ОС₁-₆алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-балкилен-Р(О)(ОН)₂, -С₁-₆галогеналкиленР(О)(ОН)₂, Н, С_1-6алкил, С_1-6галогеналкил или С_3-8циклоалкил;

R^4a представляет собой СО2Н, CH₂OSO₃H, СН2СО2Н, СН₂Р(О)(ОН)₂, СН2ОН или Н;

R^4b в каждом случае независимо представляет собой СО2Н, CH2OSO3H, CH2CO2H, СН₂Р(О)(ОН)₂,

СН2ОН или Н;

R⁵ и R⁶ в каждом случае независимо представляют собой Н, С_1-6алкил, C_1-6галогеналкил, -О-С_1-6алкил или -С_1-6алкилен-ОН;

X¹ и X² в каждом случае независимо представляют собой О, S или NH;

X³ представляет собой О, S, NH или СН2;

Y¹, Y² и Y³ независимо представляют собой О;

Y⁴ в каждом случае независимо представляет собой О;

Z¹ в каждом случае независимо представляет собой фенилен, причем фенилен необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила, C_1-4галогеналкила, -ОС_1-4алкила, -ОС_1-4галогеналкила, циано и галогена;

Z² в каждом случае независимо представляет собой фенил, где Z² необязательно замещен 1-5 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, -ОС₁_₄алкила, -ОС₁_₄галогеналкила, циано и галогена; и каждый из k и q независимо составляет целое число от 0 до 4.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрены фармацевтические композиции, содержащие фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ обеспечения развития, или усиления, или модификации иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ обеспечения развития, или усиления, или модификации иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции на основе соединения формулы (I).

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения, предупреждения инфекционного заболевания или снижения предрасположенности к нему у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемой соли.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрен способ лечения, предупреждения инфекционного заболевания или снижения предрасположенности к нему у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции на основе соединения формулы (I).

В настоящем изобретении также предусмотрены наборы, содержащие соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, или фармацевтические композиции на их основе и инструкции по применению.

Краткое описание графических материалов

На фиг. 1А-С показана активация hTLR4 под действием репрезентативных соединений. hTLR4экспрессирующие клетки Hek, также содержащие управляемый NF-kB репортерный ген SEAP, стимулировали с помощью указанной концентрации указанного соединения в течение 18 ч с последующей оценкой клеточного супернатанта в отношении SEAP. Результаты изображают средние значения OD относительно среднего значения OD для технических повторностей клеток, обработанных средой-носителем (±SD).

На фиг. 2А и 2В показана индукция цитокина MIP-1e в клетках hMM6 в ответ на воздействие соединений. Клетки hMM6, клеточную линию моноцитов/макрофагов, подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 ч. Супернатанты собирали и анализировали в отношении выработки MIP-1e с помощью ELISA.

На фиг. 3 показана индукция цитокина MIP-1e в мышиных клетках RAW264.7 в ответ на воздействие соединений. Клетки mRAW264.7, клеточную линию макрофагов, подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 ч. Супернатанты собирали и анализировали в отношении выработки MIP-1e с помощью ELISA.

На фиг. 4А показана индукция MIP-1e в первичных hPBMC в ответ на воздействие соединений 1-4 (среднее значение для 3 доноров).

На фиг. 4В показана индукция MIP-1e в первичных hPBMC в ответ на воздействие соединений 1, 2, 4, 5, 6 и 7 (показаны значения для одного донора).

На фиг. 4С показана индукция MIP-1e в первичных hPBMC в ответ на воздействие соединений 8 и 9 (показаны значения для одного донора). Первичные мононуклеарные клетки периферической крови

- 2 043820 человека выделяли из цельной крови трех разных доноров с использованием градиента фиколла. Затем клетки подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение ч, и супернатанты анализировали в отношении выработки MIP-1e.

На фиг. 5А (среднее значение для 3 доноров), 5В (1 донор) и 5С (1 донор) показана индукция RANTES в первичных hPBMC в ответ на воздействие соединения. Первичные мононуклеарные клетки периферической крови человека выделяли из цельной крови трех разных доноров с использованием градиента фиколла. Затем клетки подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 ч, и супернатанты анализировали в отношении выработки RANTES с помощью ELISA.

На фиг. 6А (среднее значение для 3 доноров), 6В (1 донор) и 6С (1 донор) показана индукция цитокина TNFa в первичных hPBMC в ответ на воздействие соединений. Первичные мононуклеарные клетки периферической крови человека выделяли из цельной крови трех разных доноров с использованием градиента фиколла. Затем клетки подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 чч, и супернатанты анализировали в отношении выработки TNFa с помощью ELISA.

На фиг. 7 показаны титры антитела IgG2a, специфического к вирусу гриппа, измеренные через 14 дней после внутримышечной иммунизации мышей BALB/c с помощью 0,2 мкг антигена вируса гриппа A/Victoria H3N2 с воздействием соединений по настоящему изобретению или без него.

На фиг. 8 показаны результаты в виде кривых выживания для мышей (BALB/c) возрастом 12-14 недель, которым интраназально вводили дозу (10 мкл/ноздря) водного состава на основе 10, 1 и 0,1 мкг соединения 4 в день -2. В день 0 животных заражали интраназально с помощью A/HK/68, вируса гриппа человека H3N2, адаптированным для мышей, из расчета 1 LD50. Соединение 4 обеспечивало защиту дозозависимым образом.

На фиг. 9 показан график стабильности соединения 1, составленного в 2,5% глицине, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

На фиг. 10А и В показаны графики стабильности соединения 2, составленного в 2,5% глицине и 2% глицерине соответственно, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

На фиг. 11 показан график стабильности соединения 3, составленного в 2,5% глицине, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

На фиг. 12 показан график стабильности соединения 4, составленного в 2,5% глицине, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

На фиг. 13 показан график стабильности соединения 5, составленного в 2% глицерине, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

На фиг. 14 показан график стабильности соединения 6, составленного в 2% глицерине, хранящегося при 2-8, 25 и 40°С и контролируемого на предмет деградации с помощью HPLC с обращенной фазой.

Подробное описание

1. Определения.

Как описано в данном изобретении, соединения по настоящему изобретению необязательно могут быть замещены одним или несколькими заместителями, такими как проиллюстрированы в целом выше или приведены в качестве примера в конкретных классах, подклассах и молекулах по настоящему изобретению. Как описано в данном изобретении, переменные в формуле I охватывают конкретные группы, такие как, например, алкил и циклоалкил. Средний специалист в данной области техники будет понимать, что комбинации заместителей, предусмотренные в настоящем изобретении, представляют собой такие комбинации, которые приводят к образованию стабильных или химически допустимых соединений. Используемый в данном изобретении термин стабильные относится к соединениям, которые практически не изменяются, когда их подвергают воздействию условий, обеспечивающих их получение, обнаружение и, предпочтительно, их извлечение, очистку и применение для одной или нескольких целей, раскрытых в данном изобретении. В некоторых вариантах осуществления стабильное соединение или химически допустимое соединение представляет собой соединение, которое практически не изменяется при хранении при температуре 40°С или ниже, в отсутствие влаги или других химически активных условий, в течение по меньшей мере недели.

Используемый в данном изобретении термин алкил означает насыщенный углеводород с прямой или разветвленной цепью. Репрезентативные примеры алкила включают без ограничения метил, этил, нпропил, изопропил, н-бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, н-пентил, изопентил, неопентил, нгексил, 3-метилгексил, 2,2-диметилпентил, 2,3-диметилпентил, н-гептил, н-октил, н-нонил и н-децил.

Используемый в данном изобретении термин алкилен означает двухвалентную группу, полученную из насыщенного углеводорода с прямой или разветвленной цепью. Репрезентативные примеры алкилена включают без ограничения -СН₂-, -СН2СН2-, -СН2СН2СН2-, -СН₂СН(СН₃)СН₂- и СН₂СН(СНз)СН(СНз)СН₂-.

Используемый в данном изобретении термин арил означает фенил или бициклический арил. Би- 3 043820 циклический арил представляет собой нафтил, дигидронафталинил, тетрагидронафталинил, инданил или инденил. Фенил и бициклический арил присоединяются к первичному молекулярному фрагменту при участии любого атома углерода, содержащегося в фениле или бициклическом ариле.

Термин галоген означает атом хлора, брома, йода или фтора.

Используемый в данном изобретении термин галогеналкил означает алкил, как определено в данном изобретении, в котором один, два, три, четыре, пять, шесть или семь атомов водорода заменены на галоген. Например, репрезентативные примеры галогеналкила включают без ограничения 2-фторэтил, дифторметил, трифторметил, 2,2,2-трифторэтил, 2,2,2-трифтор-1,1-диметилэтил и т.п.

Используемый в данном изобретении термин гетероарил означает ароматический гетероцикл, т.е. ароматическое кольцо, которое содержит по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, N или S. Гетероарил может содержать от 5 до 12 атомов кольца. Гетероарил может представлять собой 5-6членный моноциклический гетероарил или 8-12-членный бициклический гетероарил. 5-членное моноциклическое гетероарильное кольцо содержит две двойные связи и один, два, три или четыре гетероатома в качестве атомов кольца. Репрезентативные примеры 5-членных моноциклических гетероарилов включают без ограничения фуранил, имидазолил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, оксазолил, пиразолил, пирролил, тетразолил, тиадиазолил, тиазолил, тиенил и триазолил. 6-членное гетероарильное кольцо содержит три двойные связи и один, два, три или четыре гетероатома в качестве атомов кольца. Репрезентативные примеры 6-членных моноциклических гетероарилов включают без ограничения пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил и триазинил. Бициклический гетероарил представляет собой 8-12-членную кольцевую систему, содержащую моноциклический гетероарил, конденсированный с ароматическим, насыщенным или частично насыщенным карбоциклическим кольцом или конденсированный со вторым моноциклическим гетероарильным кольцом. Репрезентативные примеры бициклического гетероарила включают без ограничения бензофуранил, бензоксадиазолил, 1,3-бензотиазолил, бензимидазолил, бензотиенил, индолил, индазолил, изохинолинил, нафтиридинил, оксазолопиридин, хинолинил, тиенопиридинил, 5,6,7,8-тетрагидрохинолинил и 6,7-дигидро-5Н-циклопента[b]пиридинил. Гетероарильные группы связываются с первичным молекулярным фрагментом при участии любого замещаемого атома углерода или любого замещаемого атома азота, содержащегося в пределах групп.

Используемый в данном изобретении термин циклоалкил означает моноциклическое полностью углеродное кольцо, содержащее нулевое количество гетероатомов в качестве атомов кольца и нулевое количество двойных связей. Примеры циклоалкилов включают без ограничения циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил. Описанные в данном изобретении циклоалкильные группы могут быть присоединены к первичному молекулярному фрагменту при участии любого замещаемого атома углерода.

Термины гетероцикл или гетероциклический обычно относятся к кольцевым системам, содержащим по меньшей мере один гетероатом в качестве атома кольца, при этом гетероатом выбран из кислорода, азота и серы. В некоторых вариантах осуществления атом азота или серы в гетероцикле необязательно замещен на оксо. Гетероциклы могут представлять собой моноциклический гетероцикл, конденсированный бициклический гетероцикл или спирогетероцикл. Моноциклический гетероцикл обычно представляет собой 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членное неароматическое кольцо, содержащее по меньшей мере один гетероатом, выбранный из О, N или S. 4-членное кольцо содержит один гетероатом и необязательно одну двойную связь. 5-членное кольцо содержит нулевое количество или одну двойную связь и один, два или три гетероатома. 6-, 7- или 8-членное кольцо содержит нулевое количество, одну или две двойные связи и один, два или три гетероатома. Репрезентативные примеры моноциклического гетероцикла включают без ограничения азетидинил, азепанил, диазепанил, 1,3-диоксанил, 1,4-диоксанил, 1,3диоксоланил, 4,5-дигидроизоксазол-5-ил, 3,4-дигидропиранил, 1,3-дитиоланил, 1,3-дитианил, имидазолинил, имидазолидинил, изотиазолинил, изотиазолидинил, изоксазолинил, изоксазолидинил, морфолинил, оксадиазолинил, оксадиазолидинил, оксазолинил, оксазолидинил, оксетанил, пиперазинил, пиперидинил, пиранил, пиразолинил, пиразолидинил, пирролинил, пирролидинил, тетрагидрофуранил, тетрагидропиранил, тетрагидротиенил, тиадиазолинил, тиадиазолидинил, тиазолинил, тиазолидинил, тиоморфолинил, 1,1-диоксидидиоморфолинил, тиопиранил и тритианил. Конденсированный бициклический гетероцикл представляет собой 7-12-членную кольцевую систему, содержащую моноциклический гетероцикл, конденсированный с фенилом, с насыщенным или частично насыщенным карбоциклическим кольцом, или с другим моноциклическим гетероциклическим кольцом, или с моноциклическим гетероарильным кольцом. Репрезентативные примеры конденсированного бициклического гетероцикла включают без ограничения 1,3-бензодиоксол-4-ил, 1,3-бензодитиолил, 3-азабицикло[3.1.0]гексанил, гексагидро-Ш-фуро[3,4-с]пирролил, 2,3-дигидро-1,4-бензодиоксинил, 2,3-дигидро-1-бензофуранил, 2,3-дигидро1-бензотиенил, 2,3-дигидро-Ш-индолил, 5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразинил и 1,2,3,4тетрагидрохинолинил. Спирогетероцикл означает 4-, 5-, 6-, 7- или 8-членное моноциклическое гетероциклическое кольцо, где два заместителя на одном и том же атоме углерода образуют второе кольцо, содержащее 3, 4, 5, 6, 7 или 8 членов. Примеры спирогетероцикла включают без ограничения 1,4-диокса8-азаспиро[4.5]деканил, 2-окса-7-азаспиро[3.5]нонанил, 2-окса-6-азаспиро[3.3]гептанил и 8азаспиро[4.5]декан. Моноциклические гетероциклические группы по настоящему изобретению могут

- 4 043820 содержать алкиленовый мостик из 1, 2 или 3 атомов углерода, связывающий два несмежных атома группы. Примеры такого гетероцикла с мостиковой связью включают без ограничения 2,5диазабицикло[2.2.1]гептанил, 2-азабицикло[2.2.1]гептанил, 2-азабицикло[2.2.2]октанил и оксабицикло[2.2.1]гептанил. Моноциклические, конденсированные бициклические и спирогетероциклические группы связываются с первичным молекулярным фрагментом при участии любого замещаемого атома углерода или любого замещаемого атома азота, содержащегося в пределах группы.

Используемый в данном изобретении термин оксо относится к атому кислорода, связанному с первичным молекулярным фрагментом. Оксо может быть присоединен к атому углерода или атому серы посредством двойной связи. В качестве альтернативы оксо может быть присоединен к атому азота посредством одинарной связи, т.е. в виде N-оксида.

Перед терминами, такими как алкил, циклоалкил, алкилен и т.д., может находиться обозначение, указывающее на число атомов, присутствующих в группе в конкретном случае (например, Смалкил, С_3-бциклоалкил, Смалкилен). Эти обозначения используются в том смысле, который обычно понятен специалистами в данной области техники. Например, обозначение С, за которым следует число в виде нижнего индекса, указывает на число атомов углерода, присутствующих в следующей группе. Таким образом, С₃алкил представляет собой алкильную группу с тремя атомами углерода (т.е. н-пропил, изопропил). Если указан диапазон, как в случае См, члены нижеследующей группы могут содержать любое число атомов углерода, попадающее в указанный диапазон. С_1-4алкил, например, представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, расположенные любым образом (т.е. с прямой или разветвленной цепью).

Соединения по настоящему изобретению характеризуются стереохимическими конфигурациями на основании корового сахара, как специфически показано на формуле (I). Помимо стереохимии корового сахара, стереоцентры, расположенные в любом заместителе, присоединенном к коровому сахару, включают все изомерные (например, энантиомерные, диастереомерные и геометрические (или конформационные)) формы структуры; например, R- и S-конфигурации для каждого центра асимметрии, (Z)- и (Е)изомеры с двойной связью и (Z)- и (Е)-конформационные изомеры. Следовательно, в объем настоящего изобретения входят как одиночные стереохимические изомеры, так и смеси энантиомеров, диастереомеров и геометрических (или конформационных) изомеров соединений по настоящему изобретению. Если не указано иное, все таутомерные формы соединений по настоящему изобретению входят в объем настоящего изобретения. Таким образом, в объем настоящего изобретения включены таутомеры соединений формулы I. Структуры также включают цвиттерионные формы соединений или солей формулы I, где это необходимо.

2. Соединения.

В первом аспекте настоящего изобретения предусмотрены соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли, где R¹, R^2a, R^2b, R^3a, R^4a, Y¹ и Y² являются такими, как определено в данном изобретении.

R^2a, R^2b и R^2c могут представлять собой CH(R¹⁰)(R¹¹). R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С1_21алкил, -Х¹-C2.₂₀алкил или -СН₂-Х¹-С1_19алкил. R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой С3_₁₇алкил, -Х²-С2_1балкил, -CH2-X²-C1.₁₅алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1.15алкил, -CH2-C(=Y⁴)С1.₁₅алкил, -X²-C(=Y⁴)С1.15алкилен-Z¹-C1.₁₅алкил, -CH₂-C(=¥⁴)С1.15алкилен-Z¹-С1.₁₅алкил, -С₃.₁₇алкилен-Z¹-С1.15алкил, -Х²-С2._1бαлкилен-Z¹-С1.15αлкил, -СН2-X²-С1.₁₅алкилен-Z¹-С1.15алкил,-X²-C(=¥⁴)C1.₁₅алкилен-Z² или

-Х²-С2.1балкилен-Z². X¹ и X² в каждом случае независимо представляют собой О, S или NH. ¥⁴ в каждом случае представляет собой О. Z¹ в каждом случае независимо представляет собой фенилен, причем фенилен необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из С1-4алкила, С_1-4галогеналкила, -ОС_1-4алкила, -ОС_1-4галогеналкила, циано и галогена. Z² в каждом случае независимо представляет собой фенил, где Z² необязательно замещен 1-5 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила,

Смалогеналкила, -ОСмалкила, -ОС_1-4галогеналкила, циано и галогена. Независимые случаи X¹, X², ¥⁴, Z¹, Z², R¹⁰ и R¹¹ в R^2a, R^2b и R^2c могут быть одинаковыми или различными в соответствии с определениями, предусмотренными в данном изобретении. Аналогичным образом, в каждом случае алкильные и алкиленовые группы в R^2a, R^2b, R^2c, R¹⁰ и R¹¹ могут иметь одинаковое или различное число атомов углерода. Таким образом, описание вариантов осуществления, касающихся переменных X¹, X², ¥⁴, Z¹, Z², R¹⁰ и R¹¹, относится к вариантам осуществления с одним или несколькими случаями приведенных описаний переменных. Однако каждый отдельный случай может характеризоваться одинаковым или разным определением.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил, такой как С_1-19алкил или С₃-₂₁алкил (например, С₁₁алкил, такой как С₁₁алкил с прямой цепью).

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С_1-21алкил, такой как С_1-19алкил или С₃_₂₁алкил (например, С₈.₁₄алкил, С_10-12алкил или С₁₁алкил, такой как С₁₁алкил с прямой цепью). Независимый С_1-21алкил может быть одинаковым или различным (например, с цепью разной длины и/или с разветвленной или прямой цепью).

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой

- 5 043820

-X²-C(=¥⁴)C1.15алкил (например, -О-С(=О)С1.15алкил, такой как -О-С(=О)С9алкил). Независимый -X²С(=¥⁴)С1.15алкил может быть одинаковым или различным (например, с цепью разной длины, и/или с разветвленной или прямой цепью, и/или с О, S или NH в X²). Например, R¹¹ в одном случае может представлять собой -Х²-С(=¥⁴)С9алкил, а в других случаях -Х²-С(=¥⁴)С10алкил. Или во всех трех случаях R¹¹ может быть разным.

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -Х²-С2.16алкил (например, -О-С2.16алкил, такой как -О-С10алкил). Независимый -Х²-С2.₁₆алкил может быть одинаковым или различным (например, с цепью разной длины, и/или с разветвленной или прямой цепью, и/или с О, S или NH в X²). Например, R¹¹ в одном случае может представлять собой -Х²-С10алкил, а в других случаях -Х²-С11алкил. Или во всех трех случаях R¹¹ может быть разным.

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -Х²С(=¥⁴)С1-15алкилен-2² (например, О-С(=О)С1.₁₅алкилен-2², такой как -О-С(=О)С7алкилен-2²). Независимый -Х²-С(=¥⁴)С1.₁₅алкилен-2² может быть одинаковым или различным (например, с цепью разной длины, и/или с разветвленной или прямой цепью, и/или с О, S или NH в X²). Например, R¹¹ в одном случае может представлять собой -Х²-С(=¥⁴)С7алкилен-2², а в других случаях -Х²-С(=¥⁴)С8алкилен-2². Или во всех трех случаях R¹¹ может быть разным.

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в одном случае (например, в R^2b) представляет собой Х²-С(=¥⁴)С1.15алкилен-2² (например, -О-С(=О)С1.₁₅алкилен-2², такой как -О-С(=О)С7алкилен-2²), а в двух других случаях R¹¹ (например, в R^2a и R^2c) независимо представляет собой -Х²-С(=¥⁴)С1.₁₅алкил (например, -О-С(=О)С₁.₁₅алкил, такой как -О-С(=О)С9алкил) или другие варианты для R¹¹.

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -Х²-С2.16алкилен-2² (например, -О-С2.₁₆алкилен-2², такой как -О-С8_9алкилен-2²). Независимый -Х²-С2.₁₆алкилен-2² может быть одинаковым или различным (например, с цепью разной длины, и/или с разветвленной или прямой цепью, и/или с О, S или NH в X²). Например, R¹¹ в одном случае может представлять собой -Х²-С₈алкилен-2², а в других случаях -Х²-С9алкилен-2². Или во всех трех случаях R¹¹ может быть разным.

В некоторых вариантах осуществления R¹¹ в одном случае (например, в R^2b) представляет собой Х²-С2.16алкилен-2² (например, -О-С2.₁₆алкилен-2², такой как -О-С8.9алкилен-2²), а в двух других случаях R¹¹ (например, в R^2a и R^2c) независимо представляет собой -Х²-С2.₁₆алкил (например, -О-С₂.₁₆алкил, такой как -О-С₁₀алкил) или другие варианты для R¹¹.

Например, в вариантах осуществления, содержащих по меньшей мере один случай -CH(R¹⁰)(R¹¹), по меньшей мере один случай R¹⁰ и R¹¹ может быть определен следующим образом. R¹⁰ может представлять собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -X²-C(=¥⁴)C1_₁₅алкил. R¹⁰ может представлять собой С1.19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=¥⁴)С1.15алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой С3_17алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой Х²-С2.16алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой Х²-С(=¥⁴)С1.15алкилен2¹-С1_₁₅алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=¥⁴) С1.15алкилен-2¹-С1.₁₅алкил. R¹⁰ может представлять собой С₁.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой

Х²-С2.16алкилен-2¹-С1.₁₅алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=¥⁴)С1_₁₅алкилен-2². R¹⁰ может представлять собой С₁-₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой

-Х²-С₂- 1 6алкилен-2².

R¹⁰ может представлять собой С11алкил, a R¹¹ представляет собой -X²-C(=¥⁴)C1.15алкил (например, -О-С(=О)С9алкил) или -Х²-С2.₁₆алкил (например, -О-С₁₀алкил).

Например, -CH(R¹⁰)(R¹¹) может представлять собой ⁰ или

R¹⁰ может представлять собой С11алкил, a R¹¹ представляет собой -X²-C(=¥⁴)C1.15алкил (например, О-С(=О)С9алкил), -Х²-С2.₁₆алкил (например, -О-С₁₀алкил), -X²-С(=¥⁴)С1.15алкилен-2² (например, -ОС(=О)С7алкилен-2²) или -Х²-С2.16алкилен-2² (например, -О-С8_₉алкилен-2²). Например, -CH(R¹⁰)(R¹¹) мо жет представлять собой

В дополнительных вариантах осуществления, содержащих по меньшей мере один случай CH(R¹⁰)(R¹¹), по меньшей мере один случай R¹⁰ и R¹¹ может быть определен следующим образом. R¹⁰

- 6 043820 может представлять собой С_3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15αлкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С_3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -СН₂-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С_3-21алкил, а R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16αлкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -С3-17алкилен-Z¹-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С3-21алкил, a R¹¹ представляет собой С3-17алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С2-1балкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой С3-21алкил, а R¹¹ представляет собой -СН2-Х2-С_1-15алкил.

В дополнительных вариантах осуществления, содержащих по меньшей мере один случай CH(R¹⁰)(R11), по меньшей мере один случай R¹⁰ и R¹¹ может быть определен следующим образом. R¹⁰может представлять собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15αлкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰может представлять собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -СН₂-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С_2-16алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰может представлять собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -С_3-17алкилен-Z¹-С1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой С3-17алкил. R¹⁰ может представлять собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С2-16алкил. R¹⁰ может представлять собой C1-21αлкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой C1-21алкил, a R¹¹ представляет собой CH2-C(=Y⁴)C1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой C1-21aлкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15aлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой -Х1-С_2-20алкил.

В дополнительных вариантах осуществления, содержащих по меньшей мере один случай CH(R¹⁰)(R11), по меньшей мере один случай R¹⁰ и R¹¹ может быть определен следующим образом. R¹⁰может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -X²-С(=Y⁴)С1-15αлкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1-15αлкилен-Z¹-С1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -С3-17алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой С3-17алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С2-16алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х2-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-C(=Y⁴)C1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-X²-C1-15αлкилен-Z¹-С1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19алкил.

В дополнительных вариантах осуществления, содержащих по меньшей мере один случай CH(R¹⁰)(R11), по меньшей мере один случай R¹⁰ и R¹¹ может быть определен следующим образом. Например, R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой С_3-17алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19αлкил, a R¹¹ представляет собой -СН₂-Х2-С_1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19αлкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С_2-16алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С_1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой CH2-X¹-C1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2Х1-С_1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15αлкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-Х¹-C1-19αлкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-C(=Y⁴)C1-15αлкилен-Z¹-С_1-15αлкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-Х¹-C1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -С3-17алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19aлкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкилен-Z¹-С1-15алкил. R¹⁰ может представлять собой -СН2-X¹-С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН₂-Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2С(=Y⁴)С1-15αлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой С3-17алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²С2-1балкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-19алкил, a R¹¹ представляет собой Х²С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-19алкил, a R¹¹ представляет собой Х²- 7 043820

С_2- 1 ₆алкилен-Z 1-С_1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z².

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²С2-16алкилен-Z².

В дополнительных вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С11алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С_1-15алкил (например, -О-С(=О)С₉алкил) или -Х2-С_2-16алкил (например, -О-С₁₀алкил). Например, -CH(R¹⁰)(R11) может представлять собой

В дополнительных вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С11алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил (например, -O-С(=O)С9алкил), -Х2-С2-16алкил (например, -О-С10алкил), -Х²С(=У4)С1-15алкилен-Z² (например, -О-С(=О)С7алкилен-Z²) или -Х²-С2-16алкилен-Z² (например, -О-С_8-9алкилен-Z²). Например, -CH(R¹⁰)(R11) может представлять собой

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-C(=Y⁴)C1-15алкилен-Z¹-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2.1 ₆алкилен-Z¹-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -С3-17алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С3-21алкил, а R¹¹ представляет собой С3-17алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С3-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_3-17алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х²-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-C(=Y⁴)C1-15алкилен-Z¹-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой C_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -С3-17алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, а R¹¹ представляет собой С3-17алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-X²-C_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил. Например, в некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, а R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С_2-20алкил, a R¹¹ представляет

- 8 043820 собой -СН₂-С(=Y⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С_2-2оалкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16αлкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С_2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -С_3-17алкилен-Z¹-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой С3-17алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С2-16алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х2-С_1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С_2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1-15алкил.

В некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -Х1-С2-20алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х1-С1-19алкил. Например, в некоторых вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х1-С_1-19алкил, a R¹¹ представляет собой С₃_₁₇алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х1-С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х2-С_1-15алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -Х2-С_2-16алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х1-С1-19алкил, a R¹¹ представляет собой -Х-С(=Y⁴)С1.₁5алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -CH2-C(=Y⁴)C1.₁5алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С(=Y⁴)С1.15алкилен-Z¹-С1.₁5алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-С(=Y⁴)С1.₁5алкилен-Z¹-С₁.₁5αлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -С3.17алкилен-Z¹-С1.₁5алкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16αлкилен-Z¹-С1-15αлкил.

В других вариантах осуществления R¹⁰ представляет собой -СН2-Х¹-С1.₁₉алкил, a R¹¹ представляет собой -СН2-Х²-С1.₁5алкилен-Z¹-С₁.₁5aлкил.

В некоторых вариантах осуществления X² представляет собой О (например, R¹¹ представляет собой -О-С_2-16алкил, -О-С(=О)С_1-15алкил).

В некоторых вариантах осуществления X³ представляет собой О.

Каждый из R^3a и R^3c независимо представляет собой СО2Н, -OSO₃H, -OP(O)(OH)₂, -С₁_₆алкиленСО2Н, -С_1-6алкилен-OSO₃H, -С_1-балкилен-ОР(О)(ОН)₂, -ОС_1-6алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-балкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-бгалогеналкилен-Р(О)(ОН)₂ или Н.

R^3b представляет собой СО2Н, СО₂С_1-балкил, -OSO₃H, -OP(O)(OH)₂, -С_1-балкилен-СО₂Н, -С_1-6алкиленOSO3H, -С_1-балкилен-ОР(О)(ОН)₂, -ОС_1-6алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-балкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-6галогеналкиленР(О)(ОН)2 или Н.

В некоторых вариантах осуществления R^3a представляет собой -ОР(О)(ОН)2.

В некоторых вариантах осуществления R^3a представляет собой -OSO₃H.

В некоторых вариантах осуществления R^3a представляет собой -ОСН₂Р(О)(ОН)₂.

R^3d представляет собой СО2Н, -SO₃H, -Р(О)(ОН)₂, -С_1-6алкилен-СО₂Н (например, -СН2СО2Н), -С_1-6алкиленOSO3H (например, -CH2OSO3H), -С_1-6алкилен-ОР(О)(ОН)₂ (например, -СН₂ОР(О)(ОН)₂), -ОС_1-6алкиленР(О)(ОН)₂ (например, -ОСН₂Р(О)(ОН)₂), -С_1-6алкилен-Р(О)(ОН)₂ (например, СН₂Р(О)(ОН)₂), -С_1-6галогеналкилен-Р(О)(ОН)₂ (например, CF2P(O)(OH)2), Н, С_1-6алкил (например, метил, этил, изопропил, трет-бутил), С_1-6галогеналкил (например, трифторметил, трифторэтил) или С_3-8-циклоалкил (например, циклопропил, циклобутил и т.д.).

В некоторых вариантах осуществления R^4a представляет собой СН2ОН.

В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой

- 9 043820

R^3b

3d

В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой . Например, R¹ может представлять собой

R⁵ r^2c

В дополнительных вариантах осуществления к составляет 1; R^3b представляет собой водород или СООН или ее сложный эфир; и каждый из R^3d, R⁵ и R⁶ представляет собой водород.

или

В приведенных выше примерах представлены дополнительные варианты осуществления, где q составляет целое число от 1 до 4.

Конкретные примеры R¹ включают

В других вариантах осуществления R¹ представляет собой

или

, где q1 и q2 составляют целые числа от 0 до 4, при условии, что q1+q2 составляет целое число от 1 до 4.

- 10 043820

В некоторых вариантах R¹ представляет собой ^R каждый из R^2a, R^2b и R^2c независимо представляет собой -CH(R¹⁰)(R¹¹); R¹⁰ представляет собой C1-21алкил; R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -Х²-С2-16алкил, -X²-C(=Y⁴)C1-15алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1-15алкилен-Z² или -Х²-С2-16алкиленZ²; R^3a представляет собой -OSO3H, -ОР(О)(ОН)2 или -OC_1-6алкилен-Р(О)(ОН)₂; R^3b представляет собой Н, СО2Н или ее сложный эфир; каждый из R^3d, R⁵ и R⁶ представляет собой водород; Y¹, ¥², ¥³ и ¥⁴ представляют собой О; X² и X³ представляют собой О; R^4a представляет собой СН2ОН; и k составляет 1.

В некоторых вариантах осуществления R¹ представляет собой ^r2c ; каждый из R^2a, R^2b и R^2c независимо представляет собой -CH(R¹⁰)(R¹¹); R¹⁰ представляет собой С1-21алкил; R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -Х²-С2-16алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1-15алкил или -X²-C(=¥⁴)C1-l₅алкилен-Z²; R^3a представляет собой -OSO3H, -OP(O)(OH)2 или -ОС1-6алкилен-Р(О)(ОН)2; R^3b представляет собой Н, СО2Н или ее сложный эфир; каждый из R^3d, R⁵ и R⁶ представляет собой водород; ¥1, ¥², ¥³ и ¥⁴ представляют собой О; X² и X³ представляют собой О; R^4a представляет собой СН₂ОН; и к составляет 1.

^R ’ каждый из R^2a, R^2b и R^2c независимо представляет собой -CH(R¹⁰)(R¹¹); R¹⁰представляет собой С1-21алкил; R¹¹ представляет собой -Х²-С2-16алкил или -X²-C(=¥⁴)Cl-15алкил; R^3a представляет собой -OSO3H или -ОР(О)(ОН)2; R^3b представляет собой Н, СО₂Н или ее сложный эфир; каждый из R^3d, R⁵ и R⁶ представляет собой водород; ¥1, ¥², ¥³ и ¥⁴ представляют собой О; X² и X³ представляют собой О; R^4a представляет собой СН2ОН; и к составляет 1.

Соединения формулы (I) могут характеризоваться формулой (I-а),

где R^2a, R^2b, R^2c, R^3a и R^3b являются такими, как определено в данном изобретении. R^3a может представлять собой -ОР(О)(ОН)2, -OSO3H или -ОСН2-Р(О)(ОН)2, где R^2a, R^2b, R^2c и R^3b являются такими, как определено в данном изобретении. R^3a может представлять собой -ОР(О)(ОН)2, -OSO₃H или -ОСН₂Р(О)(ОН)₂, где R^3b представляет собой Н, СО2Н или сложный эфир СО2Н, a R^2a, R^2b и R^2c являются такими, как определено в данном изобретении. Например, R^2a, R^2b и R^2c могут представлять собой CH(R¹⁰)(R¹¹), где R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С1-21алкил, -Х¹-С2-20алкил или -СН2Х¹-С1-19алкил; R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой С3-17алкил, -Х²-С2-16алкил, -CH₂-X²-Cl-15алкил, Х¹-С(=¥⁴)С1-1₅алкил, -CH₂-C(=¥⁴)C1-15алкил, -X²-C(=¥⁴)C1-15алкилен-Z¹-C_1-15алкил,

-CH₂-C(=¥⁴)C1-15алкилен-Z¹-C1-15алкил, -С_3-l₇алкилен-Z¹-С1-l5алкил, -Х²-С2-16алкилен-Z¹-С_1-15алкил, -СН₂Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил, -X²-C(=¥⁴)C_1-15алкилен-Z² или -Х²-С2-16алкилен-Z²; а X¹, X², ¥⁴, Z¹ и Z²являются такими, как определено в данном изобретении. R^2a, R^2b и R^2c могут представлять собой CH(R¹⁰)(R¹¹), где R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С1-21алкил, -Х¹-С2-20алкил или СН2-Х¹-С1-19алкил; R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой С3-17алкил, -Х²-С2-16алкил, -CH₂X²-C1-15алкил, -Х¹-С(=¥⁴)С1-15алкил, -СН₂-С(=¥⁴)С1-15алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1-l₅алкилен-Z¹-С_1-l₅алкил, -СН₂С(=¥⁴)С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил, -С_3-17алкилен-Z¹-С_1-15алкил, -Х²-С2-16алкилен-Z¹-С1-15алкил,

-СН₂-Х²-С1-15алкилен-Z¹-С1-15алкил или -Х²-С(=¥⁴)С_1-15алкилен-Z²; а X¹, X², ¥⁴, Z¹ и Z² являются такими, как определено в данном изобретении.

Сложные эфиры в R^3b включают сложные алкиловые эфиры (например, сложные Cl_-6алкиловые эфиры), сложные галогеналкиловые эфиры (например, сложные C_1-6галогеналкиловые эфиры) и сложные ариловые эфиры (например, необязательно замещенные сложные фениловые или нафтиловые эфиры).

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой

- 11 043820

- 12 043820

их фармацевтически приемлемую соль.

В другом варианте осуществления соединения включают меченные изотопом формы. Меченная изотопом форма соединения идентична соединению, за исключением того, что один или несколько атомов соединения были замещены атомом или атомами, характеризующимися атомной массой или массовым числом, которые отличаются от атомной массы или массового числа атома, который обычно характеризуется большей распространенностью в природе. Примеры изотопов, которые являются широкодоступными на рынке и которые можно вводить в соединение посредством хорошо известных способов, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фтора и хлора, например ²Н, ³Н, ¹³С, ¹⁴С, ¹⁵N, ¹⁸0,¹⁷0,¹⁸F и ³⁶Cl.

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой агонист TLR (например, TLR4).

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой антагонист TLR (например, TLR4).

В некоторых вариантах осуществления соединение формулы (I) представляет собой модулятор TLR.

3. Пути применения и способы.

Когда чужеродный антиген стимулирует иммунную систему, она отвечает путем запуска защитного ответа, который характеризуется скоординированным взаимодействием между системами врожденного и приобретенного иммунитета. Эти две взаимозависимые системы удовлетворяют два взаимоисключающие требования: скорость (за счет врожденной системы) и специфичность (за счет адаптивной системы).

Система врожденного иммунитета служит в качестве первой линии защиты от вторжения патогенных микроорганизмов, удерживающей патоген под контролем, пока адаптивные ответы созревают. Она запускается в пределах нескольких минут после заражения независимым от антигена образом, при этом реагирует на широко консервативные паттерны в патогенах (тем не менее она не является неспецифической и может отличать свое от патогенов). Что особенно важно, она также образует воспалительное и костимулирующее окружение (иногда называемое сигналом опасности), которое усиливает систему адаптивного иммунитета и управляет ею (или поляризует ее) в направлении клеточных или гуморальных ответов, которые наиболее подходят для борьбы с инфекционным агентом. Был сделан обзор разработки модуляторов TLR для терапевтического нацеливания на врожденный иммунитет (см. Nature Medicine, 2007, 13, 552-559; Drug Discovery Today: Therapeutic Strategies, 2006, 3, 343-352 и Journal of Immunology, 2005, 174, 1259-1268).

Адаптивный ответ становится эффективным в течение нескольких дней или недель, но в конечном итоге обеспечивает точную антигенную специфичность, необходимую для полной элиминации патогена и формирования иммунологической памяти. Он опосредуется в первую очередь Т- и В-клетками, которые подверглись перестройке генов зародышевой линии и характеризуются специфичностью и длительно действующей памятью. Однако он также включает рекрутинг элементов системы врожденного иммунитета, включая профессиональные фагоциты (макрофаги, нейтрофилы и т.д.) и гранулоциты (базофилы, эозинофилы и т.д.), которые поглощают бактерий и даже относительно крупных паразитов-простейших. После созревания адаптивного иммунного ответа последующее воздействие патогена приводит к его быстрой элиминации вследствие образования высокоспецифических клеток памяти, которые быстро активируются при последующем воздействии когнатного для них антигена.

В определенных вариантах осуществления соединения и композиции, предусмотренные в данном изобретении, приводят к развитию клеточно-опосредованного иммунного ответа и/или гуморального иммунного ответа. В других вариантах осуществления иммунный ответ индуцирует длительно действующие (например, нейтрализующие) антитела и клеточно-опосредованный иммунитет, которые приводят к быстрому ответу при воздействии инфекционного агента.

Обычно считается, что два типа Т-клеток, CD4- и CD8-клетки, необходимы для инициации и/или усиления клеточно-опосредованного иммунитета и гуморального иммунитета. CD8 Т-клетки могут экспрессировать корецептор CD8 и обычно называются цитотоксическими Т-лимфоцитами (CTL). CD8 Тклетки способны распознавать или взаимодействовать с антигенами, представленными на молекулах МНС класса I.

- 13 043820

CD4 Т-клетки могут экспрессировать корецептор CD4 и обычно называются хелперными Тклетками. CD4 Т-клетки способны распознавать антигенные пептиды, связанные с молекулами МНС класса II. После взаимодействия с молекулой МНС класса II CD4-клетки могут секретировать такие факторы, как цитокины. Эти секретируемые цитокины могут активировать В-клетки, цитотоксические Тклетки, макрофаги и другие клетки, которые участвуют в иммунном ответе. Хелперные Т-клетки или CD4+ клетки можно дополнительно разделить на два функционально отличные подкласса: ТН1-фенотип и ТН2-фенотип, которые отличаются своими цитокинами и эффекторной функцией.

Активированные ТН1-клетки усиливают клеточный иммунитет (включая увеличение выработки антигенспецифических CTL) и поэтому имеют особое значение при ответе на внутриклеточные инфекции. Активированные ТН1-клетки могут секретировать один или несколько из IL-2, IFN-γ и TNF-β. Иммунный ответ TH1-типа может приводить к местным воспалительным реакциям за счет активации макрофагов, NK- клеток (естественных киллеров) и цитотоксических CD8 Т-клеток (CTL). Иммунный ответ TH1-тunα может также расширять иммунный ответ за счет стимуляции роста В- и Т-клеток с помощью IL-12. TH1-стимулированные В-клетки могут секретировать IgG2a.

Активированные ТН2-клетки усиливают выработку антител и поэтому имеют значение при ответе на внеклеточные инфекции. Активированные ТН2-клетки могут секретировать один или несколько из IL4, IL-5, IL-6 и IL-10. Иммунный ответ ТН2-типа может приводить к выработке IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти для будущей защиты.

Усиленный иммунный ответ может включать одно или несколько из усиленного иммунного ответа TH1-тunα, иммунного ответа ТН2-типа и ответа ТН17-типа.

Иммунный ответ TH1-тuna может включать одно или несколько из повышения числа CTL, повышения уровня одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с иммунным ответом TH1-тuna (таких как IL-2, IFN-γ и TNF-β), повышения числа активированных макрофагов, повышения активности NK или повышения выработки IgG2a. Предпочтительно усиленный иммунный ответ TH1-типа будет включать увеличение выработки IgG2a.

Иммунный ответ ТН2-типа может включать одно или несколько из повышения уровня одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с иммунным ответом ТН2-типа (таких как IL-4, IL-5, IL-6 и IL10), или повышения выработки IgG1, IgE, IgA и В-клеток памяти. Предпочтительно усиленный иммунный ответ ТН2-типа будет включать увеличение выработки IgG1 и IgE.

Иммунный ответ Th17-типа может включать одно или несколько из повышения уровня одного или нескольких цитокинов, ассоциированных с иммунным ответом ТН17-типа (таких как IL-17, IL-22, IL-23, TGF-бета и IL-6), или повышения гуморального иммунитета и числа В-клеток памяти.

В определенных вариантах осуществления иммунный ответ представляет собой одно или несколько из иммунного ответа TH1-типа, ответа ТН2-типа и ответа ТН17-типа. В других вариантах осуществления иммунный ответ предусматривает усиленный ответ TH1-типа, ответ ТН2-типа и/или ответ ТН17-типа.

В некоторых вариантах осуществления соединения или композиции, раскрытые в данном изобретении, могут функционировать в качестве адъюванта (например, в вакцине).

В определенных вариантах осуществления усиленный иммунный ответ представляет собой одно или оба из системного иммунного ответа и иммунного ответа в слизистой оболочке.

В других вариантах осуществления иммунный ответ предусматривает одно или оба из усиленного системного иммунного ответа и усиленного иммунного ответа в слизистой оболочке.

В определенных вариантах осуществления иммунный ответ в слизистой оболочке представляет собой иммунный ответ TH1-типа, ТН2-типа или ТН17-типа.

В определенных вариантах осуществления иммунный ответ в слизистой оболочке включает повышение выработки IgA.

В определенных вариантах осуществления иммуногенные композиции, предусмотренные в данном изобретении, применяются в качестве вакцин, при этом такие композиции включают иммунологически эффективное количество одного или нескольких антигенов.

Для аутоиммунных заболеваний характерен (i) гуморальным ответ или ответ с аутоантителами на собственный антиген (исключительно в качестве примера, первичный гипертиреоз Грейвса с антителами к рецептору TSH) или (ii) клеточный ответ, при котором иммунные клетки разрушают неиммунные клетки, из которых происходит собственный антиген (исключительно в качестве примера, тиреоцит (тиреоидит Хашимото) или β-островковая клетка поджелудочной железы (диабет 1 типа)). При многих аутоиммунных заболеваниях наблюдают комбинацию обоих явлений, например, при тиреоидите Хашимото и диабете 1 типа также имеются аутоантитела, антитело к тиреоидной пероксидазе (ТРО) или антитело к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD)/островковым клеткам. Аутоиммунные заболевания часто имеют воспалительный компонент, включающий без ограничения повышение числа молекул адгезии (исключительно в качестве примера, молекулы адгезии сосудистого эндотелия 1 типа (VCAM-1)) и измененную адгезию лейкоцитов к сосудистой сети, такой как, исключительно в качестве примера, колит, системная красная волчанка, системный склероз и сосудистые осложнения диабета.

Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой трансмембранные белки I типа, характери

- 14 043820 зующиеся внеклеточным N-концевым доменом с богатым лейцином повтором (LRR), за которым следуют богатый цистеином участок, трансмембранный (ТМ) домен и внутриклеточный (цитоплазматический) хвост, который содержит консервативный участок, называемый доменом рецептора Toll/IL-1 (TIR). TLR представляют собой паттерн-распознающие рецепторы (PRR), которые экспрессируются преимущественно на иммунных клетках, включая без ограничения дендритные клетки, Т-лимфоциты, макрофаги, моноциты и клетки естественные киллеры. LRR-домен важен для связывания лиганда и ассоциированной передачи сигнала и является общим признаком для PRR. TIR-домен важен для межбелковых взаимодействий и ассоциирован с врожденным иммунитетом. TIR-домен также объединяет более крупное суперсемейство IL-1 R/TLR, состоящее из трех подгрупп. Члены первой группы содержат домены иммуноглобулина в своих внеклеточных участках и включают рецепторы IL-1 и IL-18 и вспомогательные белки, а также ST2. Вторая группа включает TLR. Третья группа включает внутриклеточные адаптерные белки, важные для передачи сигнала.

TLR представляют собой группу паттерн-распознающих рецепторов, которые связываются с патоген-ассоциированными молекулярными паттернами (PAMPS) бактерий, грибов, простейших и вирусов и действуют в качестве первой линии защиты от вторжения патогенов. TLR необходимы для индукции экспрессии генов, вовлеченных в воспалительные реакции, a TLR и система врожденного иммунитета являются важнейшей стадией в развитии антигенспецифического приобретенного иммунитета.

Адаптивный (гуморальный или клеточно-опосредованный) иммунитет ассоциирован с механизмом передачи сигнала от TLR врожденного иммунитета. Врожденный иммунитет представляет собой защитный ответ на основе иммунных клеток, который быстро срабатывает для борьбы с вредными воздействиями окружающей среды, включая без ограничения бактериальные или вирусные агенты. Адаптивный иммунитет представляет собой более медленный ответ, который охватывает дифференцировку и активацию наивных Т-лимфоцитов в Т-хелперы 1 (Th1), Т-хелперы 2 (Th2), Т-хелперы 17 (Th17) или другие типы Т-клеток. TH1-клетки в основном стимулируют клеточный иммунитет, тогда как Th2-клетки в основном стимулируют гуморальный иммунитет. Хотя это в первую очередь защитная система хозяина, патологическая экспрессия сигналов врожденного иммунитета, исходящих из пути TLR, участвует в инициации аутоиммунных воспалительных заболеваний.

Все TLR, по-видимому, функционируют либо как гомодимер, либо как гетеродимер при распознавании специфической молекулярной детерминанты или наборов специфических молекулярных детерминант, присутствующих на патогенных организмах, включая липополисахариды клеточной поверхности бактерий, липопротеины, бактериальный флагеллин, ДНК как бактерий, так и вирусов, а также вирусную РНК. Клеточный ответ при активации TLR включает активацию одного или нескольких транскрипционных факторов, что приводит к выработке и секреции цитокинов и костимулирующих молекул, таких как интерфероны, TNF-α, интерлейкины, MIP-1 и МСР-1, которые способствуют уничтожению и выведению из организма патогенной инвазии. Пространственная экспрессия TLR совпадает с системой взаимодействия хозяина с окружающей средой. Хотя у Drosophila было клонировано лишь несколько других Tollподобных белков, семейство TLR человека состоит по меньшей мере из 11 членов, TLR1-TLR11, которые вызывают перекрывающиеся, но отличающиеся биологические ответы вследствие отличий в клеточной экспрессии и сигнальных путях, которые они инициируют. Каждый из TLR экспрессируется на собственной подгруппе лейкоцитов, и каждый из TLR является специфическим в отношении своих паттернов экспрессии и чувствительности к РАМР и обнаруживает различные подгруппы патогенов, что обеспечивает строгий надзор со стороны иммунной системы.

TLR распределены по всей клетке. TLR1, TLR2, TLR3 и TLR4 экспрессируются на поверхности клетки, тогда как TLR3, TLR7, TLR8 и TLR9 экспрессируются во внутриклеточных компартментах, таких как эндосомы. Для TLR3-, TLR7- или TLR9-опосредованного распознавания их лигандов требуется созревание и процессинг в эндосомах. Когда макрофаги, моноциты, дендритные клетки или неиммунные клетки, которые становятся антигенпрезентирующими клетками, поглощают бактерий посредством фагоцитоза, бактерии разрушаются и CpG-ДНК высвобождается в фагосомах-лизосомах или в эндосомахлизосомах, где она может взаимодействовать с TLR9, который был рекрутирован из эндоплазматического ретикулума при неспецифическом поглощении CpG-ДНК. Кроме того, когда вирусы проникают в клетки посредством рецептор-опосредованного эндоцитоза, содержимое вирусов контактирует с цитоплазмой за счет слияния вирусной мембраны с мембраной эндосомы. Это приводит к воздействию лигандов TLR, таких как dsRNA, ssRNA и CpG-ДНК, на TLR9 в фагосомальных/лизосомальных или эндосомальных/лизосомальных компартментах.

В сигнальных путях ниже TIR-домена адаптер, содержащий TIR-домен, MyD88 и/или TRIF, является необходимым для индукции цитокинов, таких как TNF-α и IL-12, при участии всех TLR. Хотя адаптерные молекулы, содержащие TIR-домен, являются общими для всех TLR, отдельные сигнальные пути TLR расходятся, и активация специфических TLR приводит к слегка отличающимся паттернам профилей генной экспрессии. Исключительно в качестве примера, активация сигнальных путей TLR3 и TLR4 приводит к индукции интерферонов I типа (IFN), тогда как активация TLR2- и TLR5-опосредованных путей не приводит к этому. Однако активация сигнальных путей TLR7, TLR8 и TLR9 также приводит к индук- 15 043820 ции IFN I типа, хотя это происходит при участии механизмов, отличных от TLR3/4-опосредованной индукции.

После вовлечения TLR инициируют каскад сигнальной трансдукции, приводящий к активации NFkB или IRF посредством адаптерных белков, гена-88 первичного ответа миелоидной дифференцировки (MyD88) или TIR-домен содержащей адаптерной молекулы, индуцирующей интерферон-β (TRIF). MyD88-зависимый путь аналогичен передаче сигнала с помощью рецепторов IL-1, и считается, что MyD88, несущий С-концевой TIR-домен и N-концевой домен смерти, ассоциируется с TIR-доменом в TLR. После стимуляции MyD88 рекрутирует IRAK-4 к TLR при участии взаимодействия доменов смерти обеих молекул и способствует IRAK-4-опосредованному фосфорилированию IRAK-1. Затем фосфорилирование IRAK-1 приводит к рекрутированию фактора-6, ассоциированного с рецептором TNF (TRAF6), что приводит к активации двух различных сигнальных путей. Один путь ведет к активации факторов транскрипции АР-1 путем активации МАР-киназ. Другой путь активирует комплекс Taki/Тав, который усиливает активность комплекса IKB-киназы (IKK). После активации комплекс IKK индуцирует фосфорилирование и последующую деградацию IkB, ингибитора NFkB, что приводит к ядерной транслокации фактора транскрипции NFkB и инициации транскрипции генов, промоторы которых содержат сайты связывания NFkB, таких как гены цитокинов. MyD88-зависимый путь играет важнейшую роль и необходим для выработки воспалительных цитокинов при участии всех TLR.

TRIF-зависимая передача сигнала через TLR требует последовательного или одновременного связывания адаптерных белков, содержащих TIR-домен, TRAM/TICAM-2 и TRIF/TICAM-1, с TLR4-TIRдоменом. Передача сигналов при участии TRIF-зависимого пути индуцирует более слабую и более позднюю, но более устойчивую активацию NF-kB при участии альтернативного пути, включающего взаимодействующий с рецептором белок 1 (RIP1). TRIF-зависимая передача сигнала также вызывает активацию и ядерную транслокацию регуляторных факторов интерферона (IRF)-3 и IRF-7, которые запускают транскрипцию IFNe и его последующее высвобождение из клетки. Аутокринное или паракринное связывание IFNe с рецептором IFN-α/β, в свою очередь, активирует путь JAK/STAT, что приводить к повышенной экспрессии IFNa и IFNe, а также индуцируемых IFN хемокинов, таких как интерферон-индуцируемый белок-10 (IP-10), экспрессируемый нормальными Т-клетками и регулируемый при активации белок (RANTES) и хемотаксический белок-1 макрофагов (МСР-1). Монофосфориллипид A (MPLA) и CRX-547 (оба являются лигандами TLR4) характеризуются сниженной активностью передачи сигнала с участием MyD88, но активностью передачи сигнала ч участием TRIF, аналогичной таковой у LPS. Этот TRIFсмещенный ответ может объяснять повышенный терапевтический индекс, сниженную токсичность и устойчивую адъювантную активность.

Соединения и композиции, предусмотренные в данном изобретении, могут быть применимы для обеспечения развития, или усиления, или модификации, или подавления у хозяина по меньшей мере одного иммунного ответа (например, ответа с Т-лимфоцитами TH1-типа, ответа с Т-лимфоцитами ТН2типа, ответа с Т-лимфоцитами ТН17-типа, ответа с цитотоксическими Т-лимфоцитами (CTL), ответа с антителами, ответа с цитокинами, ответа с лимфокинами, ответа с хемокинами и воспалительного ответа). B определенных вариантах осуществления иммунный ответ может включать по меньшей мере выработку одного или нескольких цитокинов, где цитокин выбран из интерферона-гамма (IFN-γ), фактора некроза опухоли-альфа (TNF-α), выработку одного или нескольких интерлейкинов, где интерлейкин выбран из IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-12, IL-13, IL-16, IL-18 и IL-23, выработку одного или нескольких хемокинов, где хемокин выбран из MIP-1a, MIP-1e, RANTES, IP-10, CCL4 и CCL5, и ответ с лимфоцитами, который выбран из ответа с Т-клетками памяти, ответа с В-клетками памяти, ответа с эффекторными Т-клетками, ответа с цитотоксическими Т-клетками и ответа с эффекторными В-клетками.

Соединения и композиции по настоящему изобретению также могут быть полезны при лечении, предупреждении пищевой аллергии, аллергического ринита, аллергической астмы, аллергического кожного заболевания, сезонной аллергии и ассоциированных аллергических состояний или снижении предрасположенности к ним. Другие виды аллергии включают аллергический конъюнктивит, атопический дерматит и псориаз.

Соединения и композиции по настоящему изобретению также могут быть применимы при лечении, предупреждении бактериальных, грибковых и протозойных инфекций, включая без ограничения туберкулез и инфекцию, вызванную Mycobacterium avium, проказу; инфекцию, вызванную Pneumocystis carnii, криптоспоридиоз, гистоплазмоз, токсоплазмоз, трипаносомную инфекцию, лейшманиоз, инфекции, вызванные бактериями рода Escherichia, Enterobacter, Salmonella, Staphylococcus, Klebsiella, Proteus, Pseudomonas, Streptococcus и Chlamydia, и грибковую инфекцию, такую как кандидоз, аспергиллез, гистоплазмоз, криптококковый менингит, или снижении предрасположенности к ним.

Соединения и композиции по настоящему изобретению можно применять при лечении, предупреждении вирусных заболеваний, таких как генитальные бородавки, обыкновенные бородавки, подошвенные бородавки, респираторно-синцитиальный вирус (RSV), гепатит В, гепатит С, вирус Денге, вирус простого герпеса (исключительно в качестве примера, HSV-I, HSV-II, CMV или VZV), контагиозный моллюск, вакцинная болезнь, натуральная оспа, лентивирус, вирус иммунодефицита человека (HIV), ви- 16 043820 рус папилломы человека (HPV), цитомегаловирус (CMV), вирус ветряной оспы (VZV), риновирус, энтеровирус, аденовирус, коронавирус (например, SARS), грипп, парагрипп, вирус эпидемического паротита, вирус кори, паповавирус, гепаднавирус, флавивирус, ретровирус, аренавирус (исключительно в качестве примера, LCM, вирус Хунин, вирус Мачупо, вирус Гуанарито и лихорадка Ласса) и филовирус (исключительно в качестве примера, вирус лихорадки Эбола или вирус Марбург), или снижении предрасположенности к ним.

Соединения и композиции по настоящему изобретению можно применять при лечении, предупреждении сепсиса в результате бактериальных, вирусных или грибковых инфекций, включая раневые инфекции, пневмонию, абдоминальную инфекцию, почечную инфекцию или инфекцию кровотока (бактериемию), или снижении предрасположенности к нему, а также снижения тяжести сепсиса за счет противодействия активации с помощью LPS (эндотоксина) рецепторной системы TLR4.

Соединения и композиции по настоящему изобретению можно применять при лечении, предупреждении аутоиммунных заболеваний, которые включают заболевания, состояния или нарушения, при которых иммунная система хозяина или субъекта губительным образом опосредует иммунный ответ, который направлен против собственных тканей, клеток, биомолекул (например, пептидов, полипептидов, белков, гликопротеинов, липопротеинов, протеолипидов, липидов, гликолипидов, нуклеиновых кислот, таких как РНК и ДНК, олигосахаридов, полисахаридов, протеогликанов, гликозаминогликанов и т.п., и других молекулярных компонентов клеток и тканей субъекта) или эпитопов (например, специфических иммунологически определенных структур распознавания, таких как структуры, распознаваемые определяющим комплементарность участком вариабельной области антитела (CDR), или рецептором Т-клеток), или снижения предрасположенности к ним.

Таким образом, аутоиммунные заболевания характеризуются аномальным иммунным ответом с участием либо клеток, либо антител, которые в любом случае направлены против нормальных аутологичных тканей. В целом, аутоиммунные заболевания у млекопитающих можно классифицировать как относящиеся к одной из двух разных категорий: клеточно-опосредованное заболевание (т.е. за счет Тклетки) или нарушения, опосредованные антителами. Неограничивающие примеры клеточноопосредованных аутоиммунных заболеваний включают рассеянный склероз, ревматоидный артрит, тиреоидит Хашимото, сахарный диабет I типа (ювенильный диабет) и аутоиммунный увеоретинит. Аутоиммунные нарушения, опосредованные антителами, включают без ограничения миастению гравис, системную красную волчанку (или SLE), болезнь Грейвса, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунную тромбоцитопению, аутоиммунную астму, криоглобулинемию, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, первичный билиарный склероз и пернициозную анемию.

4. Фармацевтические композиции и введение.

В другом аспекте настоящего изобретения предусмотрены фармацевтически приемлемые композиции, при этом эти композиции содержат любое из соединений, описанных в данном изобретении, и необязательно содержат фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или среду-носитель.

В определенных вариантах осуществления эти композиции необязательно дополнительно содержат одно или несколько дополнительных терапевтических средств.

В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит терапевтически эффективное количество соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей или сред-носителей.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть изготовлены с помощью способов, хорошо известных в данной области техники, например, посредством традиционных способов смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, отмучивания, эмульгирования, инкапсулирования, захватывания или лиофилизации.

Используемый в данном изобретении термин фармацевтически приемлемая соль относится к тем солям, которые по результатам тщательного медицинского исследования являются подходящими для применения в контакте с тканями человека и низших животных, не вызывая излишней токсичности, раздражения, аллергической реакции и т.п., и соответствуют приемлемому соотношению польза/риск. Фармацевтически приемлемые соли являются широко известными из уровня техники. Например, S. M. Berge et al. подробно описывают фармацевтически приемлемые соли в J Pharmaceutical Sciences, 1977, 66, 1-19, включенном в данное изобретение посредством ссылки. Фармацевтически приемлемые соли соединений по настоящему изобретению включают соли, полученные из подходящих неорганических и органических кислот и оснований. Примерами фармацевтически приемлемых нетоксичных солей присоединения кислоты являются соли аминогруппы, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, серная кислота и перхлорная кислота, или с органическими кислотами, такими как уксусная кислота, щавелевая кислота, малеиновая кислота, винная кислота, лимонная кислота, янтарная кислота или малоновая кислота, или с помощью других способов, используемых в данной области техники, таких как ионный обмен. Другие фармацевтически приемлемые соли включают адипатные, альгинатные, аскорбатные, аспартатные, бензолсульфонатные, бензоатные, бисульфатные, боратные, бутиратные, камфоратные, камфорсульфонатные, цитратные, циклопентанепропионатные, диглюконатные, додецилсульфатные, этансульфонатные, формиатные,

- 17 043820 фумаратные, глюкогептонатные, глицерофосфатные, глюконатные, гемисульфатные, гептаноатные, гексаноатные, гидройодидные, 2-гидроксиэтансульфонатные, лактобионатные, лактатные, лауратные, лаурилсульфатные, малатные, малеатные, малонатные, метансульфонатные, 2-нафталинсульфонатные, никотинатные, нитратные, олеатные, оксалатные, пальмитатные, памоатные, пектинатные, персульфатные, 3-фенилпропионатные, фосфатные, пикратные, пивалатные, пропионатные, стеаратные, сукцинатные, сульфатные, тартратные, тиоцианатные, п-толуолсульфонатные, ундеканоатные, валератные соли и т.п. Соли, полученные из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов, щелочноземельных металлов, аммония и К(С1.₄алкила)₄. В настоящем изобретении также предусмотрена кватернизация любых основных азотсодержащих групп соединений, раскрытых в данном изобретении. С помощью такой кватернизации можно получать растворимые или диспергируемые в воде или масле продукты. Репрезентативные соли щелочных или щелочноземельных металлов включают соли натрия, лития, калия, кальция, магния и т.п. Дополнительные фармацевтически приемлемые соли включают, когда это необходимо, нетоксичные катионы аммония, четвертичного аммония и амина, образованные с применением противоионов, таких как галогенид, гидроксид, карбоксилат, сульфат, фосфат, нитрат, низший алкилсульфонат и арилсульфонат (например, содержащий фенил/замещенный фенил).

Как описано в данном изобретении, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению содержат фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или среду-носитель, которые, как используется в данном изобретении, включают все возможные растворители, разбавители или другие жидкие среды-носители, дисперсионные или суспензионные добавки, поверхностно-активные средства, изотонические средства, загущающие или эмульгирующие средства, консерванты, твердые связующие, смазывающие вещества и т.п., подходящие для конкретной требуемой лекарственной формы. В Remington's Pharmaceutical Sciences, Sixteenth Edition, E.W. Martin (Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1980) раскрыты различные носители, используемые при составлении фармацевтически приемлемых композиций, и известные методики их получения. За исключением тех случаев, когда любая традиционная среданоситель несовместима с соединениями по настоящему изобретению, например, из-за создания какоголибо нежелательного биологического эффекта или же вредоносного взаимодействия с любым другим компонентом(компонентами) фармацевтически приемлемой композиции, предполагается, что ее применение находится в рамках данного изобретения. Некоторые примеры материалов, которые могут служить в качестве фармацевтически приемлемых носителей, включают без ограничения ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, белки сыворотки крови, такие как человеческий сывороточный альбумин, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновая кислота или сорбат калия, смеси частичных глицеридов насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протаминсульфат, гидрофосфат динатрия, гидрофосфат калия, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, полиакрилаты, воски, блок-полимеры полиэтиленполиоксипропилена, ланолин, сахара, такие как лактоза, глюкоза и сахароза; разновидности крахмала, такие как кукурузный крахмал и картофельный крахмал; целлюлозу и ее производные, такие как натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, этилцеллюлоза и ацетат целлюлозы; порошкообразный трагакант; солод; желатин; тальк; вспомогательные вещества, такие как масло какао и воски для суппозиториев; масла, такие как арахисовое масло, хлопковое масло; сафлоровое масло; кунжутное масло; оливковое масло; кукурузное масло и соевое масло; гликоли, такие как пропиленгликоль или полиэтиленгликоль; сложные эфиры, такие как этилолеат и этиллаурат; агар; буферные средства, такие как гидроксид магния и гидроксид алюминия; альгиновую кислоту; апирогенную воду; изотонический солевой раствор; раствор Рингера; этиловый спирт и фосфатные буферные растворы, а также другие нетоксичные совместимые смазывающие вещества, такие как лаурилсульфат натрия и стеарат магния, а также по решению составителя в композиции также могут присутствовать красящие средства, средства, способствующие высвобождению, средства, создающие покрытие, подсластители, вкусовые добавки и ароматизирующие средства, консерванты и антиоксиданты.

Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению можно вводить человеку и другим животным перорально, ректально, парентерально, интрацистернально, внутрикожно, интраназально, интравагинально, внутрибрюшинно, внутримышечно, внутривенно, внутриопухолево, местно (например, с помощью порошков, мазей или капель), буккально, сублингвально, в виде орального или назального спрея и т.п. в зависимости от тяжести заболевания, подлежащего лечению.

Фармацевтические композиции для парентеральной инъекции включают фармацевтически приемлемые стерильные водные или неводные растворы, дисперсии, суспензии или эмульсии, а также стерильные порошки для восстановления в стерильные инъекционные растворы или дисперсии непосредственно перед применением. Примеры подходящих водных и неводных носителей, разбавителей, растворителей или сред-носителей включают воду, этанол, полиолы (такие как глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль и т.п.), растительные масла (такие как оливковое масло), инъецируемые органические сложные эфиры (такие как этилолеат) и их подходящие смеси. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем применения материалов для покрытия, таких как лецитин, путем поддержания необходимого размера частиц в случае дисперсий и путем применения поверхностно-активных веществ.

- 18 043820

Данные композиции также могут содержать вспомогательные вещества, такие как консерванты, смачивающие средства, эмульгирующие средства и диспергирующие средства. Предотвращение действия микроорганизмов можно обеспечивать путем включения различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабена, хлорбутанола, фенолсорбиновой кислоты и т.п. Также может потребоваться включение изотонических средств, таких как сахара, хлорид натрия и т.п. Пролонгированной абсорбции инъекционной лекарственной формы можно достигать путем включения средств, которые задерживают абсорбцию, таких как моностеарат алюминия и желатин.

В некоторых случаях, чтобы пролонгировать действие лекарственного средства, требуется замедлить абсорбцию лекарственного средства из подкожной или внутримышечной инъекции. Этого можно достичь за счет применения жидкой суспензии кристаллического или аморфного материала со слабой растворимостью в воде. В таком случае скорость абсорбции лекарственного средства зависит от скорости его растворения, которая, в свою очередь, может зависеть от размера кристалла и кристаллической формы. В качестве альтернативы, отсроченной абсорбции вводимой парентерально лекарственной формы достигают путем растворения или суспендирования лекарственного средства в масляной среденосителе.

Жидкие лекарственные формы для перорального или назального введения включают без ограничения фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и настойки. В дополнение к активным соединениям жидкие лекарственные формы могут содержать инертные разбавители, традиционно применяемые в данной области техники, такие как, например, вода или другие растворители, солюбилизирующие средства и эмульгаторы, такие как этиловый спирт, изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, бензилбензоат, пропиленгликоль, 1,3бутиленгликоль, диметилформамид, масла (в частности, хлопковое, арахисовое, кукурузное масла, масло из зародышей пшеницы, оливковое, касторовое и кунжутное масла), глицерин, тетрагидрофурфуриловый спирт, полиэтиленгликоли и сложные эфиры жирных кислот и сорбитана и их смеси. Помимо инертных разбавителей, композиции для перорального введения также могут включать вспомогательные вещества, такие как смачивающие средства, эмульгирующие и суспендирующие средства, подсластители, вкусовые добавки и ароматизирующие средства.

Твердые лекарственные формы для перорального введения включают капсулы, таблетки, пилюли, порошки, цемент, замазку, тонкую пленку и гранулы. В таких твердых лекарственных формах активное соединение может быть смешано с по меньшей мере одним инертным фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом или носителем, таким как цитрат натрия или фосфат дикальция, и/или а) наполнителями или сухими разбавителями, такими как разновидности крахмала, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота; b) связывающими веществами, такими как карбоксиметилцеллюлоза, альгинаты, желатин, поливинилпирролидон, сахароза и аравийская камедь; с) увлажнителями, такими как глицерин; d) разрыхляющими средствами, такими как агар-агар, карбонат кальция, картофельный или тапиоковый крахмал, альгиновая кислота, определенные разновидности силикатов и карбонат натрия; е) средствами замедления растворения, такими как парафин; f) ускорителями абсорбции, такими как четвертичные аммониевые соединения; g) увлажняющими средствами, такими как цетиловый спирт и моностеарат глицерина; h) адсорбентами, такими как каолин и бентонитовая глина, и i) смазывающими веществами, такими как тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия и их смеси. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственная форма также может содержать буферные средства.

Твердые композиции подобного типа также можно использовать в качестве наполнителей для мягких и твердых желатиновых капсул с применением таких вспомогательных веществ, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярных полиэтиленгликолей и т.п. Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получать с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия и другие покрытия, хорошо известные в области получения фармацевтических составов. Они могут необязательно содержать замутняющие средства и также могут представлять собой композицию, которая высвобождает исключительно или преимущественно активный(-ые) ингредиент(-ы) в определенной части кишечного тракта, необязательно отсроченным образом. Примеры заключающих композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски. Твердые композиции подобного типа также можно использовать в качестве наполнителей для мягких и твердых желатиновых капсул с применением таких вспомогательных веществ, как лактоза или молочный сахар, а также высокомолекулярных полиэтиленгликолей и т.п.

Активные соединения также могут находиться в микроинкапсулированной форме с одним или несколькими вспомогательными веществами, отмеченными выше. Твердые лекарственные формы в виде таблеток, драже, капсул, пилюль и гранул можно получать с покрытиями и оболочками, такими как энтеросолюбильные покрытия, покрытия, контролирующие высвобождение, и другие покрытия, хорошо известные в области получения фармацевтических составов. В таких твердых лекарственных формах активное соединение может быть смешано с по меньшей мере одним инертным разбавителем, таким как сахароза, лактоза или крахмал. Такие лекарственные формы также могут содержать, в качестве обычной практики, дополнительные вещества, отличные от инертных разбавителей, например, смазывающие

- 19 043820 средства для таблетирования и другие вспомогательные средства для таблетирования, такие как стеарат магния и микрокристаллическая целлюлоза. В случае капсул, таблеток и пилюль лекарственные формы также могут содержать буферные средства. Они могут необязательно содержать замутняющие средства и также могут представлять собой композицию, которая высвобождает исключительно или преимущественно активный(-ые) ингредиент(-ы) в определенной части кишечного тракта, необязательно отсроченным образом. Примеры заключающих композиций, которые можно применять, включают полимерные вещества и воски.

Композиции для ректального или вагинального введения предпочтительно представляют собой суппозитории, которые можно получать путем смешивания соединений по настоящему изобретению с подходящими нераздражающими вспомогательными веществами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или суппозиторный воск, которые являются твердыми при температуре окружающей среды, но жидкими при температуре тела, и, следовательно, расплавляются в прямой кишке или полости влагалища и высвобождают активное соединение.

Лекарственные формы для местного или трансдермального введения соединения по настоящему изобретению включают мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки,трастворы, спреи, средства для ингаляции или пластыри. Активный компонент смешивают в стерильных условиях с фармацевтически приемлемым носителем и любыми необходимыми консервантами или буферами, которые могут потребоваться. Офтальмологический состав, ушные капли и глазные капли также рассматриваются как находящиеся в пределах объема настоящего изобретения. Кроме того, в настоящем изобретении предусмотрено применение трансдермальных пластырей, дополнительное преимущество которых заключается в обеспечении контролируемой доставки соединения в организм. Такие лекарственные формы получают путем растворения или распределения соединения в подходящей среде. Усилители абсорбции также можно применять для увеличения потока соединения через кожу. Скорость можно регулировать либо путем обеспечения мембраны, регулирующей скорость, либо путем диспергирования соединения в полимерной матрице или геле.

В предпочтительных вариантах осуществления соединения по описанному изобретению можно составлять или в виде фармацевтически приемлемых солей, или в виде свободных кислот. Соединения могут быть составлены с фармацевтически приемлемой средой-носителем для инъекции, ингаляции, приема внутрь или другой подходящей формы введения. Фармацевтически приемлемый носитель представляет собой среду, раствор или матрицу, которая не препятствует иммуномодулирующей активности соединения и не является токсичной для пациента, а также предпочтительно обеспечивает значительную физическую и химическую стабильность API. Фармацевтически приемлемые носители включают водный раствор, липосомы, эмульсии типа масло-в-воде или вода-в-масле, полимерные частицы, блоксополимеры, водные дисперсии, микрочастицы, растворы белков или биоразлагаемые частицы для замедленного высвобождения. Например, среда-носитель может представлять собой микросферу, наночастицу или микрочастицу и содержать соединение по настоящему изобретению в матрице частицы или адсорбированное на поверхности. Среда-носитель также может представлять собой водный раствор, забуференный раствор или мицеллярную дисперсию, содержащую моноэтаноламин, триэтиламин, триэтаноламин или другое химическое вещество, которое делает состав щелочным. Среда-носитель может представлять собой суспензию, содержащую гидроксид алюминия, фосфат алюминия, гидроксид кальция или фосфат кальция, где соединение может быть адсорбировано на поверхности металла. Средыносители также могут включать все из растворителей, буферов, дисперсионных сред, носителей, покрытий, разбавителей, антибактериальных и противогрибковых средств, мукоадгезивов, мукопенетрантов, средств, замедляющих абсорбцию, упаковочных средств, суспензий, коллоидов и т.п. Применение таких носителей для API хорошо известно специалистам в данной области техники. За исключением носителей или средств, которые несовместимы с API, считается, что они применимы в профилактических или терапевтических композициях.

В одном варианте осуществления соединения по настоящему изобретению составлены в 2% глицерине или 2% глицине в виде изотонической нанодисперсии с рН в диапазоне от 5 до 7,4. В другом варианте осуществления соединения по настоящему изобретению заключены в липидный бислой липосомы. Эти липосомы также могут содержать другие соединения с иммуномодулирующей активностью для обеспечения совместного состава с соединениями по настоящему изобретению. В более широком смысле соединения по настоящему изобретению могут быть инкапсулированы в нано- или микрочастице, эмульсии или другом подходящем носителе, описанном выше, и они также могут содержать другие иммуномодулирующие соединения или вспомогательные вещества для усиления биологической активности, улучшения стабильности или изменения фармакокинетики состава благоприятным образом.

Описанные в данном изобретении соединения можно вводить в виде фармацевтической композиции, содержащей представляющие интерес соединения в комбинации с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями. Фраза терапевтически эффективное количество соединений по настоящему изобретению подразумевает количество соединений, достаточное для лечения нарушений, при приемлемом соотношении польза/риск, применимом к любому медицинскому лечению. Понятно, однако, что общую суточную дозировку соединений и композиций может определить лечащий врач в

- 20 043820 рамках обоснованного врачебного решения. Специфический терапевтически эффективный уровень дозы для любого конкретного пациента может зависеть от ряда факторов, включая нарушение, подвергаемое лечению, и тяжесть нарушения; активность специфического используемого соединения; специфическую используемую композицию, возраст, массу тела, общее состояние здоровья и предыдущий медицинский анамнез, пол и рацион пациента; время введения, путь введения и скорость экскреции специфического используемого соединения; продолжительность лечения; лекарственные средства, применяемые в комбинации или одновременно со специфическим используемым соединением; и подобные факторы, хорошо известные в области медицины. Например, вполне в рамках компетентности в данной области техники начинают с доз соединения на уровнях ниже, чем требуются для достижения необходимого терапевтического эффекта, и постепенно повышают дозировку до тех пор, пока не будет достигнут необходимый эффект. Фактические уровни дозировки активных ингредиентов в фармацевтических композициях можно изменять таким образом, чтобы получать такое количество активного соединения(-ий), которое является эффективным для достижения необходимого терапевтического ответа в случае конкретного пациента и конкретного способа введения. При лечении определенных медицинских состояний для достижения необходимого терапевтического ответа может потребоваться повторное или постоянное введение соединений. Повторное или постоянное введение относится к введению соединений ежедневно (т.е. каждый день) или периодически (т.е. не каждый день) в течение периода времени, составляющего дни, недели, месяцы или дольше.

В случае взрослых дозы обычно составляют от приблизительно 0,00001 до приблизительно 100 мг/кг, желательно от приблизительно 0,0001 до приблизительно 100 мг/кг массы тела в сутки при ингаляционном, интраназальном, внутриопухолевом, сублингвальном, внутрикожном или внутрибрюшинном введении, от приблизительно 0,00001 до приблизительно 100 мг/кг, желательно от 0,0001 до 70 мг/кг, более желательно от 0,5 до 10 мг/кг массы тела в сутки при пероральном введении и от приблизительно 0,00001 до приблизительно 50 мг/кг, желательно от 0,0001 до 1 мг/кг массы тела в сутки при внутривенном введении.

Раскрытые соединения можно включать в наборы, содержащие соединение или его фармацевтически приемлемую соль, фармацевтическую композицию или и то, и другое; а также информацию, инструкции или и то, и другое, о том, что применение набора будет обеспечивать лечение патологических состояний у млекопитающих (в частности, человека). Информация и инструкции могут быть в форме слов, картинок или и того, и другого, и т.п. В дополнение или в качестве альтернативы набор может включать лекарственный препарат, композицию или и то, и другое; а также информацию, инструкции или и то, и другое относительно способов применения лекарственного препарата или композиции, предпочтительно с целью лечения или предупреждения патологический состояний у млекопитающих (например, человека).

Наборы могут содержать один или несколько контейнеров, содержащих дополнительное терапевтическое средство, включая без ограничения перечисленные выше. В определенных вариантах осуществления наборы могут содержать один или несколько контейнеров, содержащих антиген(-ы), описанные(ые) в данном изобретении. В некоторых вариантах осуществления наборы могут предусматриваться в форме вакцинной композиции, описанной в данном изобретении, и необязательно включают шприц для инъецирования вакцинной композиции субъекту.

5. Химический синтез.

Соединения по настоящему изобретения могут быть получены таким образом, как это проиллюстрировано на следующих схемах и примерах.

Аббревиатуры.

Вп бензил

Расч. расчетный

Cbz бензилоксикарбонил

DIAD диизопропилазодикарбоксилат

DPPA дифенилфосфорилазид

EDC 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодид Et этил

ESI-TOF времяпролетная с электрораспылительной ионизацией

FA жирная кислота

HRMS масс-спектрометрия высокого разрешения

Me метил

Ph фенил ppm частей на миллион psig фунтов на квадратный дюйм

- 21 043820 руг пиридин

Tf трифлат

TFA трифторуксусная кислота

На схемах 1-5 проиллюстрированы способы получения общих промежуточных соединений и соединений формулы (I). Хотя на схемах проиллюстрированы некоторые определения переменных для промежуточных и конечных соединений (например, R¹, R⁵, R⁶), специалисту в данной области техники будет понятно, что способы синтеза также могут быть применимы к соединениям с другими определениями переменных. Например, другие промежуточные соединения, которые обеспечивают фрагмент R¹ (например, ), также могут быть использованы в следующих схемах.

На схеме 1 проиллюстрирован способ получения общего позднего промежуточного соединения 2.

ОАс

АсО

_R3b

Схема 1

1. Кислота Льюиса

2. Основание

3. PhCHO

ОАс

NHCbz

R^3b . .„ NHCbz NHCbz ^K

DPPA, DIAD, PPh₃, Et₃N

О

R^3b

NHCbz

1. РМе_э, NaOH

2. EDC, Mel

FA = γ2 ^rAJUco₂h

NHCbz

1. 10% Pd/C, руг

2. EDC, Mel

FA = γ ^r2UL-co₂h

ΙΝΠυΟΖ

Общее позднее промежуточное соединение 1

TEA, NaCNBH₃

Общее позднее промежуточное соединение 2

На схеме 2 проиллюстрирован альтернативный способ получения общего позднего промежуточного соединения 2 из общего промежуточного соединения 1.

Схема 2

О

N₃

Общее позднее промежуточное соединение 1 _R3b

NHCbz

FA

1.10% Pd/C, руг

2. EDC, Mel

TFA. NaCNBH₃

Общее позднее промежуточное соединение 2

На схеме 3 проиллюстрирован способ получения соединений формулы (I), где R^3a представляет собой -ОР(О)(ОН)₂, с применением общего промежуточного соединения 2.

Схема 3

Общее позднее промежуточное соединение 2

1. (BnO)₇PNz-Pr₇, затем ITO,

2.10% Pd/C; NaOH ,

HO-

R2b

- 22 043820

На схеме 4 проиллюстрирован способ получения соединений формулы (I), где R^3a представляет собой -OSO3H, с применением общего промежуточного соединения 2.

_R2b

Схема 4

1SO_3> Et₃N

2. 20% Pd(OH)₂/C; NaOH

HO—c о

R^2b

Общее позднее промежуточное соединение 2

На схеме 5 проиллюстрирован способ получения соединений формулы (I), где R^3a представляет собой -ОСН₂Р(О)(ОН)₂, с применением общего промежуточного соединения 2.

Схема 5

1. (BnO)₂POCH₂OTf

2. 10% Pd/C; NaOH

HO-P

_R2b

Общее позднее промежуточное соединение 2

Пример 1.

Получение 2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]этил-2,3-ди-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозида (соединения 1).

В примере 1 используется способ, показанный на схеме А..

Пример 1А..

Раствор гидрохлорида 1,3,4,6-тетра-О-ацетил-2-амино-2-дезокси-β-D-глюкопиранозы (76,47 г, 0,23 моль) в метиленхлориде (350 мл) и Н₂О (350 мл) обрабатывали бикарбонатом натрия (149,94 г, 1,79 моль), медленно добавляемого по частям. Бензилхлорформиат (79,17 г, 0,46 моль) добавляли по частям для контроля выделения газа, и реакционную смесь энергично перемешивали в течение 2,5 ч. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали метиленхлоридом (100 мл). Объединенные органические слои промывали с помощью насыщенного водного хлорида натрия, высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали до примерно 100 мл. Добавляли простой метил-трет-бутиловый эфир (200 мл), и полученную смесь перемешивали и охлаждали до 0°С, а осадок собирали путем фильтрации, промывали холодным простым метил-трет-бутиловым эфиром и высушивали в вакуумной печи с получением 88,89 г (81%) 1,3,4,6-тетра-О-ацетил-2-(бензилоксикарбониламино)-2-дезокси-β-D глюкопиранозида.

Пример 1В.

Раствор соединения, полученного в примере 1А выше (10 г, 20,8 ммоль), и бензил-N-(2гидроксиэтил)карбамата (4,48 г, 22,9 ммоль) в безводном метиленхлориде (80 мл), охлажденный до 15°С, по каплям обрабатывали триметилсилилтрифлатом (0,37 мл, 2,08 ммоль). Обеспечивали нагревание реакционной смеси до комнатной температуры на протяжении 5,5 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным бикарбонатом натрия (40 мл), и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x20 мл), и объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Полученный неочищенный продукт кристаллизировали из метиленхлорида/гептана с получением 10,4 г (81%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил-3,4,6три-О-ацетил-2-бензилоксикарбониламино-2-дезокси-β-D-глюкопиранозида в виде белого твердого вещества.

- 23 043820

Пример 1С.

Раствор соединения, полученного в примере 1В выше (10 г, 16,3 ммоль), в метаноле (160 мл) обрабатывали с помощью гидроксида аммония (20 эквивалентов) в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали и высушивали под глубоким вакуумом в течение ночи с получением 8 г (100%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил-2-бензилоксикарбониламино-2-дезокси-β-Dглюкопиранозида в виде белого твердого вещества, который использовали без дополнительной очистки.

Пример 1D.

Раствор соединения, полученного в примере 1С выше (8 г, 16,3 ммоль), в ацетонитриле (180 мл) обрабатывали с помощью диметилацеталя бензальдегида (4,9 мл, 32,6 ммоль) и камфорсульфоновой кислоты (1,9 г, 8,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч, нейтрализовали насыщенным водным бикарбонатом натрия, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт кристаллизировали из этилацетата/гептана с получением 7,1 г (75%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил4,6-О-бензилиден-2-дезокси-2-бензилоксикарбониламино-2-дезокси-в-О-глюкопиранозида в виде белого твердого вещества.

Пример 1E.

Раствор соединения, полученного в примере 1D выше (1,5 г, 2,59 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (40 мл) обрабатывали триэтиламином (0,54 мл, 3,89 ммоль) и трифенилфосфином (1,09 г, 4,14 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и добавляли диизопропилазодикарбоксилат (0,82 мл, 4,14 ммоль). По прошествии 45 мин при 0°С добавляли дифенилфосфорилазид (0,89 мл, 4,14 ммоль). Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до комнатной температуры, и перемешивание продолжали в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом, и остаток подвергали хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование, 20^70% этилацетата/гептана) с получением 1,16 г (74%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил-3 -азидо-4,6-О-бензилиден-2-бензилоксикарбониламино2,3-дидезокси-в-О-аллопиранозида в виде белого твердого вещества.

Пример 1F.

Раствор соединения, полученного в примере 1E выше (2,95 г, 4,89 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (100 мл) обрабатывали с помощью раствора 0,1 н. гидроксида натрия (9,8 мл, 0,98 ммоль) и раствора 1,0 М триметилфосфина в тетрагидрофуране (7,8 мл, 7,82 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Остаток подвергали хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование, 30^100% этилацетата/гептана, затем 0^10% метанола/хлороформа) с получением 2,37 г (84%) 2(бензилоксикарбониламино)этил-3-амино-4,6-О-бензилиден-2-бензилоксикарбониламино-2,3-дидезоксиe-D-аллопиранозида в виде белого твердого вещества.

Пример 1G.

Раствор соединения, полученного в примере 1F выше (0,5 г, 0,87 ммоль), в безводном метиленхлориде (10 мл) подвергали ацилированию (R)-3-деканоилокситетрадекановой кислотой (414 мг, 1,04 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодидом (310 мг, 1,04 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (5 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали хлороформом (2x5 мл), и объединенные органические слои промывали водой (5 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 10^60% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 748 мг (90%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил-4,6-О-бензилиден2-бензилоксикарбониламино-3-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-Dаллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 1H.

Раствор соединения, полученного в примере 1G выше (745 мг, 0,78 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (20 мл) гидрировали с использованием 10% палладия на углероде (220 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 24 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло, растворенное в метиленхлориде (10 мл), подвергали ацилированию с помощью (R)-3деканоилокситетрадекановой кислоты (680 мг, 1,71 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимида метйодида (510 мг, 1,71 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x10 мл), и объединенные органические слои промывали водой (10 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20^80% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 732 мг (65%) 2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]этил-4,6-О-бензилиден-2,3-ди-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-вЮ-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 1I.

Раствор соединения, полученного в примере 1Н выше (400 мг, 0,282 ммоль), в безводном метилен

- 24 043820 хлориде (20 мл), охлажденный до 0°С, обрабатывали цианоборгидридом натрия (42 мг, 0,655 ммоль) с последующим добавлением трифторуксусной кислоты (0,06 мл, 0,786 ммоль). Реакционную смесь постепенно нагревали до комнатной температуры, и перемешивание продолжали в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили с помощью метанола (2 мл), концентрировали под вакуумом, затем растворяли в метиленхлориде и промывали с помощью насыщенного раствора бикарбоната натрия. Слои разделяли, и водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x10 мл), и объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 10>95% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 380 мг (93%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 1J.

Раствор соединения, полученного в примере II выше (150 мг, 0,103 ммоль), в безводном метиленхлориде (10 мл) подвергали фосфорилированию с помощью дибензилдиизопропилфосфорамидита (0,049 мл, 0,144 ммоль) и 4,5-дицианоимидазола (17 мг, 0,144) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждали до 0°С и обрабатывали пероксидом водорода (2 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь гасили путем добавления насыщенного водного бикарбоната натрия (5 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (3x5 мл), и объединенные органические слои промывали водой (5 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 10>70% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 112 мг (64%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-4-О-дибензилфосфино-2,3-ди-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3 -дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде пенообразного твердого вещества.

Пример 1K.

Раствор соединения, полученного в примере 1J выше (110 мг, 0,064 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (3 мл) подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (30 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 36 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Проводили хроматографию на силикагеле с помощью смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5 >70:30:2:0,5). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (14 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (5,52 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 64 мг (70%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества: 1H ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 5,21 (br s, 3 Н), 4,60-4,50 (m, 3Н), 4,08-4,01 (m, 2Н), 3,85-3,80 (m, 2Н), 3,71-3,68 (m, 1Н), 3,52-3,31 (m, 4Н), 2,64-2,18 (m, 12Н), 1,59 (br s, 12Н), 1,40-1,15 (m, 90 Н), 0,88 (t, J=6,4 Гц, 18 Н); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C₈₀H₁₅₂N₃O₁₆P [М-Н]^- 1441,0832, выявленное 1441,0755.

Пример 2.

Получение 2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]этил-2,3-ди-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозида (соединения 2).

Пример 2А.

Раствор соединения, полученного в примере 1I - (9) (105 мг, 0,072 ммоль), в безводном диметилформамиде (5 мл) обрабатывали комплексом триоксида серы и триэтиламина (78 мг, 0,43 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 5 ч. Добавляли дополнительное количество комплекса триоксида серы и триэтиламина (100 мг, 0,55 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Хроматография на колонке C₁₈ (градиентное элюирование, 5>20% метиленхлорида+1% триэтиламина/метанола) обеспечивала получение 90 мг (82%) триэтиламмониевой соли 2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-2,3-ди-[(R)3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозида в виде белой

- 25 043820 соли.

Пример 2В.

Раствор соединения, полученного в примере 2А выше (70 мг, 0,045 ммоль), в смеси 2:1 безводного тетрагидрофурана: метанола (5 мл) подвергали гидрированию в присутствии 20% гидроксида палладия на углероде (30 мг) и триэтиламина (0,034 мл, 0,00024 ммоль) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и давлении 50 psig в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Проводили хроматографию на колонке C₁₈ с силикагелем (градиентное элюирование, 5^20% метиленхлорида+1% триэтиламина/метанола), очищенный материал растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (8 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (1,6 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Остаток подвергали солеобразованию с использованием (1-2 экв.) триэтиламина с получением 28 мг (43%) триэтиламмониевой соли 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-2,3-ди-[(К)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества: ¹H ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 7,84 (t, J=5,5 Гц, 1H), 7,55 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,22 (d, J=9,0 Гц, 1H), 5,27-5,23 (m, 3 Н), 4,65 (br s, 1H), 4,59-4,55 (m, 2H), 4,26-4,21 (m, 1H), 4,19-4,15 (m, 1H), 3,85-3,79 (m, 2 H), 3,73-3,70 (m, 1H), 3,51-3,43 (m, 2 H), 3,18 (q, J=7,5 Гц, 7 H, CH₂ триэтиламина (~1,2 экв.)), 2,62-2,19 (m, 12), 1,64-1,52 (m, 12 Н), 1,37-1,26 (m, 100 Н, в том числе 10, СН₃ триэтиламина), 0,88 (t, J=7,0 Гц, 18 Н); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C80H151N3O16S [M-H]-1441,0737, выявленное 1441,0714.

Пример 3.

Получение сложного метилового эфира N-[(R)-3-деканоилоkситетрадеканоuл]-О-[2,3-дu-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозил]-L-серина (соединения 3).

Пример 3А.

Суспензионный раствор гидрохлорида сложного метилового эфира L-серина (11,4 г, 73,3 ммоль) в смеси 1:1 метиленхлорида:воды (160 мл) обрабатывали бикарбонатом натрия (74 г, 879 ммоль) с последующим добавлением по каплям бензилхлорформиата (12,4 мл, 87,9 ммоль). Реакционную смесь энергично перемешивали в течение 18 ч. Слои разделяли, водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x30 мл), и объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 10^50% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 16,8 г (91%) сложного метилового эфира N-бензилоkсикарбонил-Lсерина в виде бесцветного масла.

Пример 3В.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1В, раствор соединения, полученного в примере 3А выше (16,8 г, 66,3 ммоль), и соединения, полученного в примере 1А (38 г, 73,0 ммоль) вводили в реакцию в присутствии эфирата трифторида бора (11,3 мл, 79,6 ммоль) с получением 45,5 г (колич.) сложного метилового эфира N-бензилоксикарбонил-О-(3,4,6-три-О-ацетил-2-бензилоkсиkарбониламино-2дезоκси-β-D-глюκопиранозил)-L-серина в виде вязкого масла, которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 3С.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1С, раствор соединения, полученного в примере 3В (15 г, 22,2 ммоль), подвергали деацилированию в присутствии 6-10% раствора метоксида магния в метаноле (6 мл, 44,5 ммоль) с получением 4,7 г (39%) сложного метилового эфира Nбензuлоkсиkарбонил-O-[2-бензилоkсukарбониламuно)-2-дезоkси-β-D-глюкопиранозил]-L-серина в виде бесцветного масла.

Пример 3D.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1D, раствор соединения, полученного в примере 3С выше (4,7 г, 8,57 ммоль), в ацетонитриле (20 мл) защищали с использованием диметилацеталя бензальдегида (2,6 мл, 17,14 ммоль) и камфорсульфоновой кислоты (1,0 г, 4,28 ммоль) с получением 4,08 г сложного метилового эфира (75%) N-бензилоксикарбонил-О-[4,6-О-бензилиден-2- 26 043820 бензилоксикарбониламино-2-дезокси-в-О-глюкопиранозил]-Ь-серина в виде белого твердого вещества.

Пример 3Е.

Аналогичным образом, как это описано в примере 1E, раствор соединения, полученного в примере 3D (2,0 г, 3,14 ммоль), подвергали реакции Мицунобу с использованием триэтиламина (0,66 мл, 4,71 ммоль), трифенилфосфина (1,32 г, 5,03 ммоль) и диизопропилазодикарбоксилата (1,0 мл, 5,03 ммоль) с последующим добавлением дифенилфосфорилазида (1,08 мл, 5,03 ммоль) с получением 1,37 г (66%) сложного метилового эфира №бензилоксикарбонил-О-[3-азидо-4,6-О-бензилиден-2бензилоксикарбониламино-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде белого пенообразного твердого вещества.

Пример 3F.

Раствор соединения, полученного в примере 3Е выше (0,52 г, 0,79 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (10 мл) подвергали гидрированию с использованием 10% палладия на углероде (100 мг) и (0,10 мл) пиридина с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 36 ч. Реакционную смесь пропускали через слой целита, концентрировали под вакуумом и подвергали азеотропному промыванию с помощью толуола (2x10 мл), затем концентрировали под вакуумом и выдерживали под вакуумом в течение 48 ч. Полученное в результате пенообразное твердое вещество в безводном метиленхлориде (10 мл), охлажденное до 0°С, подвергали ацилированию с помощью (R)-3-деканоилокситетрадекановой кислоты (1,0 г, 2,50 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимида метйодида (0,74 г, 2,50 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали хлороформом (2x10 мл), и объединенные органические слои промывали водой (10 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20^60% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 230 мг (20%) сложного метилового эфира N-[(R)-3деканоилокситетрадеканоил]-О-[4,6-О-бензилиден-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3дидезокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 3G.

Аналогичным образом, как это указано в примере II, соединение, полученное в примере 3F выше (210 мг, 0,15 ммоль), вводили в реакцию с цианоборгидридом натрия (46 мг, 0,73 ммоль) и трифторуксусной кислотой (0,066 мл, 0,87 ммоль) с получением 200 мг (91%) сложного метилового эфира N-[(R)-3деканоилокситетрадеканоил]-O-[6-O-бензил-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3дидезокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде бесцветного масла.

Пример 3Н.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1J, раствор соединения, полученного в примере 3G выше (200 мг, 0,13 ммоль), подвергали фосфорилированию с помощью дибензилдиизопропилфосфорамидита ((, 0,079 мл, 0,234 ммоль), 4,5-дицианоимидазола (27 мг, 0,234 ммоль) и пероксида водорода (1 мл) с получением 45 мг (19%) сложного метилового эфира N-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоил]-О[6-О-бензил-4-О-дибензилфосфино-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-Dаллопиранозил]-Ь-серина в виде пенообразного твердого вещества.

Пример 3I.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1K, раствор соединения, полученного в примере 3Н выше (45 мг, 0,025 ммоль), подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (30 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Хроматография на колонке C₁₈ (градиентное элюирование, 5^20% метиленхлорида+1% триэтиламина/метанола) обеспечивала получение материала, который растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформаметанола (8 мл) и промывали с помощью холодного 0,1 н. водного гидрохлорида (1,6 мл). Нижний органический слой отделяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 28 мг (82%) сложного метилового эфира N-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоил]-О-[2,3ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества:1Н ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 7,93 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,21 (d, J=9,0 Гц, 1H), 5,26-5,19 (m, 3Н), 4,67-4,64 (m, 1Н), 4,59 (d, J=2,5 Гц, 1H), 4,51-4,45 (m, 2Н), 4,21-4,19 (m, 1Н), 4,09-4,06 (m, 2Н), 3,76 (s, 3Н), 3,74-3,70 (m, 1Н), 3,66-3,63 (m, 2Н), 2,64-2,19 (m, 12 Н), 1,60 (br s , 12 H), 1,26 (br s, 90 H), 0,88 (t, J=7,0 Гц, 18 H); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C82H154N3O18P [M-H]1499,0887, выявленное 1499,0816.

Пример 4.

Получение N-[(R)-3-децилокситетрадеканоил] -O-[2,3-ди-[(R)-3 -децилокситетрадеканоиламино]-2,3дидезокси-4-О-фосфоно-]-в-О-аллопиранозил]-Ь-серина (соединения 4).

- 27 043820

Пример 4А.

Аналогичным образом, как это указано в примере 3F, раствор соединения, полученного в примере 3Е (1,37 г, 2,07 ммоль), подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (200 мг) и (0,20 мл) пиридина с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 36 ч. Соответствующий остаток подвергали ацилированию с помощью (R)-3децилокситетрадекановой кислоты (2,64 г, 7,24 ммоль) (патент США № 7960522) и 1-(3диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодида (2,15 г, 7,24 ммоль) с получением 940 мг (31%) сложного метилового эфира N-[(R)-3-децилокситетрадекαноил]-О-[4,6-О-бензилиден-2-дезокси-2-[(R)-3децилокситетрадеканоиламино]-3-дезокси-3-[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино]-β-D-аллопиранозил]L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 4В.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1I, раствор соединения, полученного в примере 4А выше (940 мг, 0,64 ммоль), обрабатывали цианоборгидридом натрия (242 мг, 3,84 ммоль) и трифторуксусной кислотой (0,24 мл, 3,2 ммоль) с получением 600 мг (64%) сложного метилового эфира N-[(R)3-децилокситетрадеканоил]-6-бензил-4-гидрокси-2-дезокси-2-децилокситетрадеканамидо-3-дезокси-3[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино-β-D-αллопиранозид]-L-серина в виде бесцветного масла.

Пример 4С.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1J, раствор соединения, полученного в примере 4В выше (450 мг, 0,31 ммоль), подвергали фосфорилированию с помощью дибензилдиизопропилфосфорамидита (0,14 мл, 0,44 ммоль), 4,5-дицианоимидазола (51 мг, 0,44 ммоль) и пероксида водорода (3 мл) с получением 410 мг (78%) сложного метилового эфира N-[(R)-3-децилокситетрαдеканоил]-O-[6-О-бензил4-О-дибензилфосфино-2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозил]L-серина в виде пенообразного твердого вещества.

Пример 4D.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1K, раствор соединения, полученного в примере 4С выше (200 мг, 0,12 ммоль), подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (80 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 16 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Хроматография на колонке C₁₈ (градиентное элюирование, 5^20% метиленхлорида+1% триэтиламина/метанола) обеспечивала получение 70 мг (40%) сложного метилового эфира N-[(R)-3децилокситетрадеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадекαноиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфиноβ-D-αллопирαнозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 4Е.

Раствор соединения, полученного в примере 4D выше (70 мг, 0,048 ммоль), растворяли в THF (1 мл), охлажденном до 0°С, подвергали гидролизу с помощью 1 н. гидроксида натрия (0,012 мл, 0,192 ммоль) в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовали с помощью ледяного 1 н. гидрохлорида с доведением значения рН до 3. Слои разделяли, и водный слой насыщали хлоридом натрия и экстрагировали хлороформом (3x5 мл). Органические слои объединяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (14 мл), промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (5,52 мл). Нижний органический слой отделяли, высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 30 мг (41%) N-[(R)-3-децилокситетрадеканоил]О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадекαноиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопирαнозил]-Lсерина в виде стекловидного твердого вещества: 1Н ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 4,68-4,63 (m, 3Н), 4,444,40 (m, 1H), 4,13 (dd, J=11 и 6,5 Гц, 1H), 4,08 (t, J=4,75 Гц, 1H), 3,79-3,66 (m, 6H), 3,50-3,38 (m, 7H), 2,522,28 (m, 6H), 1,53-1,50 (m, 12H), 1,33-1,25 (m, 96) 0,87 (t, J=7,0 Гц, 18Н); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C₈iHi5₈N₃0i5P [M-H]^- 1443,1352, выявленное 1443,1295.

- 28 043820

Пример 5.

Получение N-[(R)-3-децилокситетрадеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрαдеканоиламино]-2,3дидезокси-4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина (соединение 5).

Пример 5А.

Раствор соединения, полученного в примере 4В (150 мг, 0,102 ммоль), растворенного в безводном диметилформамиде (5 мл), обрабатывали комплексом триоксида серы и триэтиламина (111 мг, 0,613 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 5 ч. Снова добавляли дополнительное количество комплекса триоксида серы и триэтиламина (111 мг, 0,613 ммоль), и реакционную смесь перемешивали при 50°С в течение 18 ч. Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. Хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5) с получением 96 мг (62%) сложного метилового эфира N-[(R)-3-децилокситетрадеkаноил]-О-[6-О-бензил-2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадеkаноиламино]2,3-дидезокси-4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 5В.

Раствор соединения, полученного в примере 5А выше (96 мг, 0,062 ммоль), растворенного в смеси 2:1 безводного тетрагидрофурана:метанола (5 мл), подвергали гидрированию в присутствии 20% гидроксида палладия на углероде (60 мг) и триэтиламина (0,044 мл, 0,0003 ммоль) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и давлении 50 psig в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5) с получением 58 мг (55%) сложного метилового эфира N-[(R)-3децилокситетрадеканоил] -О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино] -2,3 -дидезокси-4-Осульфокси-β-D-аллоnиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 5С.

Раствор соединения, полученного в примере 5В выше (58 мг, 0,040 ммоль), растворяли в THF (2 мл), охлаждали до 0°С и подвергали гидролизу с помощью 1 н. гидроксида натрия (0,08 мл, 0,08 ммоль) в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовали с помощью ледяного 1 н. гидрохлорида с доведением значения рН до 3.

Слои разделяли, и водный слой насыщали хлоридом натрия и экстрагировали хлороформом (3x5 мл). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматографию на силикагеле осуществляли с использованием смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (14 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (5,52 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 15 мг (26%) N-[(R)-3-децилокситетрадеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3децилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезоkси-4-О-сульфокси-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества: 1Н ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 7,74 (d, J=7,0 Гц, 1 Н), 7,30 (d, J=8,0 Гц, 1 Н), 7,02 (d, J=8,0 Гц, 1Н), 4,62-4,55 (m, 3Н), 4,17-4,08 (m, 3Н), 3,71-3,60 (m, 5Н), 3,45-3,31 (m, 6Н), 2,49-2,25 (m, 6Н), 1,48-1,45 (m, 12Н), 1,33-1,25 (m, 96 Н) 0,87 (t, J=7,0 Гц, 18Н); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C₈₁H₁₅₇N₃O₁₅S [М-Н]- 1443,1257, выявленное 1443,1187.

Пример 6.

Получение 2-[(R)-3-деканоилокситетрадекαноиламино]этил-2,3-ди-[(R)-3деkаноилоkситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-метилфосфоно-β-D-аллоnиранозида(соединения 6).

- 29 043820

Пример 6А.

Раствор параформальдегида (190 мг, 6,3 ммоль) в дибензилфосфите (1,54 г, 5,87 ммоль) обрабатывали безводным триэтиламином (100 мг, ммоль). Реакционную смесь нагревали до 50°С в течение 15 мин, и температуру постепенно повышали до 85°С в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляли хлороформом (20 мл), затем концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20>100% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 1,04 г (58%) дибензилгидроксиметилфосфоната в виде бесцветного масла.

Пример 6В.

Раствор соединения, полученного в примере 6А выше (500 мг, 1,71 ммоль), и 2,6-лутидина (5,0 мл,42,8 ммоль) в безводном метиленхлориде (5 мл) и охлажденный до -50°С обрабатывали путем добавления по каплям трифлатного ангидрида (0,33 мл, 2,05 ммоль). Обеспечивали постепенное нагревание реакционной смеси до 0°С. Реакционную смесь разбавляли с помощью Et₂O (30 мл) и последовательно промывали с помощью Н₂О (10 мл), 1 н. HCl (10 мл) и солевого раствора (10 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 724 мг (колич.) [ди(бензилокси)фосфорил]метилтрифлата в виде масла розового цвета.

Пример 6С.

Раствор соединения, полученного в примере II (100 мг, 0,065 ммоль), в безводном THF (2 мл) охлаждали до 0°С в инертной атмосфере и обрабатывали раствором 1 М бис(триметилсилил)амида лития в тетрагидрофуране (0,089 мл, 0,085 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин, после чего ее обрабатывали путем добавления по каплям тетрагидрофуранового раствора (0,5 мл) соединения, полученного в примере 6В выше (50 мг, 0,24 ммоль). Реакционную смесь гасили с помощью 0,1 н. гидрохлорида (5 капель), разбавляли хлороформом (5 мл), разделяли и органический слой промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2 мл). Водный слой экстрагировали хлороформом (2x5 мл), и объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20 >100% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 43 мг (36%) 2-[(R)-3-деканоилокситетрадекαноилαмино]этил-6-О-бензил-4-Одибензилметилфосфоно-2,3-ди-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-Dаллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 6D.

Раствор соединения, полученного в примере 6С выше (43 мг, 0,025 ммоль), растворенного в безводном тетрагидрофуране (20 мл) подвергали гидрированию с применением H-Cube с использованием 10% палладия на углероде (30 мм CatCart®, режим подачи максимального количества Н₂ при 60°С в течение 1 мин, который предусматривал гидрирование при давлении окружающей среды, при этом вводимое количество Н₂ составляло 30 мл/мин). Реакционную смесь концентрировали под вакуумом. После проведения хроматографии на силикагеле с помощью смеси хлороформа-метанола-воды-триэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5>70:30:2:0,5) фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформаметанола (8,6 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (3,4 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом с получением 27 мг (75%) 2-[(R)-3-деканоилокситетрадекαноилαмино]этил-2,3-ди-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-метилфосфоно-β-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества: 1H ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 5,19-5,16 (m, 3Н); 4,54-4,52 (m, 2Н); 3,98 (s, 2Н); 3,84-3,82 (m, 1 Н); 3,78-3,75 (m, 2Н); 3,71 (s, 1 Н); 3,68-3,63 (m, 2Н); 3,45-3,37 (m, 2Н); 3,31-3,29 (m, 1 Н); 2,54-2,37 (m, 6 Н); 2,28-2,22 (m, 6 Н); 1,56 (br s, 12 H); 1,22 (br s, 90 H); 0,85 (t, J=7,25 Гц, 18 H); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C₈₁H₁₅₄N₃O₁₆P [M-H]⁺ 1457,1145, выявленное 1457,1185.

Пример 7.

Получение триэтиламмониевой соли N-[(R)-3-децилокситетрαдеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3децилокситетрαдеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-метилфосфоно-β-D-аллоnиранозил]-L-серина (соединения 7).

- 30 043820

Пример 7А.

Аналогичным образом, как это указано в примере 6С, раствор соединения, полученного в примере 4В выше (150 мг, 0,102 ммоль), в безводном THF (2 мл) охлаждали до 0°С в инертной атмосфере и обрабатывали раствором 1 М бис(триметилсилил)амида лития в тетрагидрофуране (0,135 мл, 0,133 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 10 мин после чего ее обрабатывали путем добавления по каплям тетрагидрофуранового раствора (0,5 мл) соединения, полученного в примере 6В выше (90 мг, 0,173 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили с помощью 0,1 н. гидрохлорида (5 капель), разбавляли хлороформом (5 мл), разделяли и органический слой промывали насыщенным водным бикарбонатом натрия (2 мл). Водный слой экстрагировали хлороформом (2x5 мл), и объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20^100% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 48 мг (27%) сложного метилового эфира N-[(R)-3децилокситетрадеканоил]-О-[6-О-бензил-2,3-ди-[^)-3-децилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4О-дибензилметилфосфоно-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде бесцветного масла.

Пример 7В.

Раствор соединения, полученного в примере 7А выше (160 мг, 0,092 ммоль), растворенного в безводном тетрагидрофуране (20 мл), подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (48 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и давлении 50 psig в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой целита, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Хроматография с обращенной фазой с применением колонки С18 (градиентное элюирование, 0^100% хлороформа/метанола) обеспечивала получение 91 мг (67%) сложного метилового эфира N[(R)-3-децилокситетрадеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-Ометилфосфоно-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 7С.

Раствор соединения, полученного в примере 7В выше (91 мг, 0,062 ммоль), растворяли в THF (2 мл), охлаждали до 0°С и подвергали гидролизу с помощью 1 н. гидроксида натрия (0,26 мл, 0,26 ммоль) в течение 1 ч. Реакционную смесь нейтрализовали с помощью ледяного 1 н. гидрохлорида с доведением значения рН до 5. Слои разделяли, и водный слой насыщали хлоридом натрия и экстрагировали хлороформом (3^5 мл). Объединенные органические слои высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Осуществляли хроматографию на силикагеле (градиентное элюирование; 0^30% [90:10 МеОН/Н₂О]/хлороформ). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (14 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (5,52 мл). Нижний органический слой отделяли, высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали под вакуумом, затем подвергали солеобразованию с использованием триэтиламина с получением 56 мг (62%) триэтиламмониевой соли N-[(R)-3-децилокситетрадеканоил]-О-[2,3-ди-[(R)-3-децилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-Ометилфосфоно-β-D-аллопиранозил]-L-серина в виде стекловидного твердого вещества: ¹Н ЯМР (CDCl3/CD3OD): δ (ppm) 4,61-4,54 (m, 2Н); 4,14-4,06 (m, 2Н); 3,84 (br m, 2H); 3,69 (br m, 6H); 3,47-3,39 (m, 8H); 3,09 (q, J=7,6 Гц, 2H, CH₂ Et₃N (~1/2 экв.); 2,47-2,33 (m, 6H); 1,51-1,45 (m, 12H); 1,26-1,14 (m, 101H); 0,88 (t, J=7,0 Гц, 18Н); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C₈₂H₁₆₀N₃O₁₅P [M-H]^- 1457,1507, выявленное 1457,1367.

Пример 8.

Получение триэтиламмониевой соли 2-[(R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]этил-2,3ди-[(R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-Dаллопиранозида(соединения 8).

- 31 043820

Пример 8А.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1G, раствор соединения, полученного в примере 1F выше (250 мг, 0,43 ммоль), в безводном метиленхлориде (10 мл) подвергали ацилированию с помощью (R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадекановой кислоты (231 мг, 0,52 ммоль) (полученной в результате ацилирования сложного эфира (R)-3-гидрокситетрадеканоила с помощью 8-фенилоктановой кислоты) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодида (153 мг, 0,52 ммоль) с получением 378 мг (88%) 2-(бензилоксикарбониламино)этил-4,6-О-бензилиден-2-бензилоксикарбониламино-3-[(R)-3-(8фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 8В.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1H, раствор соединения, полученного в примере 8А выше (189 мг, 0,19 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (10 мл) подвергали гидрированию с использованием 10% палладия на углероде (50 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло, растворенное в метиленхлориде (10 мл), подвергали ацилированию с помощью (R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадекановой кислоты (180 мг, 0,402 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодида (119 мг, 0,402 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x10 мл), и объединенные органические слои промывали водой (10 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20^80% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 290 мг (99%) 2-[(R)-3-(8фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]этил-4,6-О-бензилиден-2,3-ди-[(R)-3-(8фенил)октαноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллоπиранозида в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 8С.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1I, раствор соединения, полученного в примере 8В выше (290 мг, 0,182 ммоль), обрабатывали с помощью цианоборгидрида натрия (57 мг, 0,91 ммоль) и трифторуксусной кислоты (0,083 мл, 1,09 ммоль) с получением 231 мг (80%) 2-[(R)-3-(8фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-2,3-ди-[(R)-3-(8фенил)октαноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 8D.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1J, раствор соединения, полученного в примере 8С выше (231 мг, 0,145 ммоль), в безводном метиленхлориде (10 мл) подвергали фосфорилированию с помощью дибензилдиизопропилфосфорамидита (0,070 мл, 0,203 ммоль), и 4,5-дицианоимидазола (24 мг, 0,203), и пероксида водорода (2 мл) с получением 269 мг (76%) 2-[(R)-3-(8фенилоктаноилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-4-О-дибензилфосфино-2,3-ди-[(R)-3-(8фенил)октαноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллоnиранозида в виде пенообразного твердого вещества.

Пример 8Е.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1K, раствор соединения, полученного в примере 8D выше (269 мг, 0,145 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (5 мл) подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (50 мг) в атмосфере водорода при давлении окружающей среды (Н₂из баллона) в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Проводили хроматографию на силикагеле с помощью смеси хлороформа-метанола-водытриэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (17 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (6,72 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали под вакуумом и подвергали солеобразованию с использованием триэтиламина с получением 75 мг (33%) триэтиламмониевой соли 2-[(R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]этил-2,3-ди-[(R)-3-(8фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозида в виде стек- 32 043820 ловидного твердого вещества: 1H ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 7,69 (br s, 1H), 7,26-7,16 (m, 15H), 5,21 (br s, 3H), 4,54-4,39 (m, 3H), 4,09-4,05 (m, 2H), 3,78 (br s, 3H), 3,53-3,39 (m, 4H), 3,08 (q, J=6,8 Гц, 5Н, CH₂

Et₃N (~5/6 экв.), 2,58-2,46 (m, 12 H), 2,27 (br m, 6H), 1,58 (br s, 12H), 1,31-1,24 (m, 81H), 0,87 (t, J=6,8 Гц,

9H); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C92H152N3O16P [M-H]^- 1586,0832, выявленное 1586,0799.

Пример 9.

Получение триэтиламмониевой соли 2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]этил, 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-3-[(R)-3-(8-фенuл)октаноилокситетрадеканоuламuно]-2,3-дидезокси4-О-фосфоно-β-D-аллопuранозида (соединения 9).

Пример 9А.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1Н, раствор соединения, полученного в примере 8А выше (189 мг, 0,19 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (10 мл) подвергали гидрированию с использованием 10% палладия на углероде (50 мг) с применением реактора Parr для гидрирования при комнатной температуре и 50 psig в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Полученное в результате масло, растворенное в метиленхлориде (10 мл), подвергали ацилированию с помощью (R)-3-деканоилокситетрадекановой кислоты (160 мг, 0,402 ммоль) и 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида метйодида (119 мг, 0,402 ммоль) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (10 мл) и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом (2x10 мл), и объединенные органические слои промывали водой (10 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия и концентрировали под вакуумом. Хроматография на силикагеле (градиентное элюирование, 20^80% этилацетата/гептана) обеспечивала получение 145 мг (53%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-4,6-О-бензилиден-2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-3[(R)-3-(8-фенuл)октаноилоксuтетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 9В.

Аналогичным образом, как это указано в примере II, раствор соединения, полученного в примере 9А выше (145 мг, 0,097 ммоль), обрабатывали с помощью цианоборгидрида натрия (30 мг, 0,48 ммоль) и трифторуксусной кислоты (0,044 мл, 0,58 ммоль) с получением 103 мг (71%) 2-[(R)деканоилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-2-[(R)-3-деканоuлокситетрадеканоиламuно]-3-[(R)-3(8-фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-β-D-аллопиранозида в виде бесцветного масла.

Пример 9С.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1J, раствор соединения, полученного в примере 9В выше (103 мг, 0,069 ммоль), в безводном метиленхлориде (10 мл) подвергали фосфорилированию с помощью дибензилдиизопропилфосфорамидита (0,033 мл, 0,096 ммоль) и 4,5-дицианоимидазола (11 мг, 0,096) и обрабатывали с помощью пероксида водорода (2 мл) с получением 105 мг (87%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-6-О-бензил-4-О-дибензилфосфино-2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]-3-[(R)-3-(8-фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезоксиe-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества.

Пример 9D.

Аналогичным образом, как это указано в примере 1K, раствор соединения, полученного в примере 9С выше (100 мг, 0,057 ммоль), в безводном тетрагидрофуране (5 мл) подвергали гидрированию в присутствии 10% палладия на углероде (30 мг) в атмосфере водорода при давлении окружающей среды (Н₂из баллона) в течение 18 ч. Реакционную смесь фильтровали через целит, и фильтрат концентрировали под вакуумом. Проводили хроматографию на силикагеле с помощью смеси хлороформа-метанола-водытриэтиламина (градиентное элюирование; 90:10:0,5:0,5^70:30:2:0,5). Фракции, содержащие очищенный продукт, объединяли, концентрировали под вакуумом, затем повторно растворяли в холодной смеси 2:1 хлороформа-метанола (12 мл) и промывали холодным 0,1 н. водным гидрохлоридом (4,8 мл). Нижний органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, концентрировали под вакуумом и

- 33 043820 подвергали солеобразованию с использованием триэтиламина с получением 36 мг (43%) 2-[(R)-3деканоилокситетрадеканоиламино]этил-2-[(R)-3-деканоилокситетрадеканоиламино]-3-[(R)-3-(8фенил)октаноилокситетрадеканоиламино]-2,3-дидезокси-4-О-фосфоно-β-D-аллопиранозида в виде стекловидного твердого вещества: 1H ЯМР (CDCl₃/CD₃OD): δ (ppm) 7,56 (br s, 1H), 7,10-7,18 (m, 5H), 5,14 (br m, 3H), 4,33-4,47 (m, 3H), 3,97-4,03 (m, 2H), 3,63-3,75 (m, 3H), 3,13-3,40 (m, 3H), 3,01 (q, J=6,8 Гц, 6H, CH₂Et₃N (~1 экв.), 2,38-2,52 (m, 8H), 2,21 (br s, 6H), 1,52 (br s, 12H), 1,18-1,25 (m, 87H), 0,88 (t, J=6,4 Гц, 15H); HRMS (ESI-TOF) масса/заряд: расч. для C84H152N3O16P [M]^- 1490,0910, выявленное 1490,0813.

6. Биологические данные и данные о стабильности.

Анализы in vitro проводили с соединениями 1-9 и MPL, коммерчески доступным агонистом TLR4. Для измерения биологической активности различные клетки стимулировали с помощью широкого диапазона доз каждого соединения с последующей оценкой либо активации транскрипции (клетки HEK hTLR4 NF-kB-SEAP), либо выработки цитокинов (hMM6 или hPBMC). Начальной точкой кривых дозаответ для каждого соединения были либо 100 мкМ, либо 20 мкМ с последующим 5-кратными серийными разведениями в среде-носителе (2% глицерин или глицин, IN), при этом конечные концентрации составляли 1,6х10^-8 мкМ (1,6 фМ) или 3,3х10^-8 мкМ (3,3 фМ). После инкубации в течение 18-24 ч с диапазоном доз соединений супернатанты от клеток собирали для анализа.

Активация hTLR4 hTLR4-экспрессирующие клетки HEK обрабатывали тестируемым соединением при концентрации 100 мкМ, а затем серией 5-кратных разведений. hTLR4-экспрессирующие клетки HEK также содержали управляемый NF-kB репортерный ген SEAP и их стимулировали с помощью указанной концентрации (фиг. 1А-С) тестируемого соединения в течение 18 ч, а затем супернатант от клеток оценивали в отношении SEAP с помощью анализа Quantikine SEAP (InvivoGen). Анализ SEAP применяли для обнаружения экспрессии управляемого NF-кВ репортерного гена щелочной фосфатазы в ответ на активацию TLR4 под действием соединений, и результаты интерпретируются как с точки зрения активности соединений при индукции активации SEAP (т.е. активности, при которой более низкое значение ЕС50 указывает на более высокую активность), так и эффективности активации рецептора (т. е. максимальной индукции SEAP). Значения ЕС50 для каждого соединения в клетках HEK hTLR4 показаны в табл. 1а и 1b. Значения ЕС50 определяли путем аппроксимации кривых доза-ответ к нелинейному уравнению с 4 параметрами.

Таблица 1а

ЕС50 для Hek hTLR4 (нМ)
Соединение 1	Соединение 2	Соединение 3	Соединение 4	MPL
13,68	63,98	3,952	1,319	151,9

Таблица1Ь*

ЕС50 для Нек hTLR4 (нМ)
1	2	4	5	6	7	8	9
19,67	41,02	1,39	2,90	10,23	0,78	4,99	15,67

*Числа 1-9 относятся к соединениям 1-9 соответственно.

Индукция цитокина MIP-13 в клетках hMM6. Следующим шагом соединения тестировали с помощью общепринятого анализа активности ММ6, в котором измеряется выработка цитокина MIP-1P в качестве показателя активности соединения. Клеточную линию моноцитов человека Mono-Mac-6 (hMM6) получили из DSMZ (Брауншвейг, Германия). Клетки поддерживали в колбах Т-75 и культивировали при 1,53 х 105 клеток/лунка в 96-луночных планшетах для тканевых культур со средой RPMI-1640 (HyClone™, Логан, Юта), пенициллин/стрептомицин/глутамин (HyClone™, Логан, Юта), 2-меркаптоэтанол (Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк) и 10% термоинактивированной FBS (Corning, Манассас, Вирджиния). Клетки hMM6 подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 ч (фиг. 2А-2В). Обработки начинали при концентрации 100 мкМ, за которой следовала серия 5кратных разведений из 16 точек. Супернатанты собирали и анализировали в отношении выработки MIP1β с помощью ELISA (R&D systems, № по кат. DY271). Значения ЕС50 для каждого соединения в клетках hMM6 показаны в табл. 2. Значения ЕС50 определяли путем аппроксимации кривых доза-ответ к нелинейному уравнению с 4 параметрами.

Таблица 2

ЕС50 для ЬММб ΜΙΡ-Ιβ (нМ)
Соединение 1	Соединение 2	Соединение 3	Соединение 4	MPL
0,2514	5,893	0,4623	0,1236	3,095

Индукция цитокина MIP-1e в клетках mRAW264.7. Чтобы определить, обладают ли соединения также активностью в клетке мыши, все соединения тестировали в клетках RAW, клеточной линии макрофагов мыши. Клетки mRAW264.7 подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения в течение 18 ч (фиг. 3). Обработки начинали при концентрации 20 мкМ с 5-кратным серийным разведением до 3,2768Е-09 мкМ. Супернатанты собирали и анализировали в отношении выработки MIP-1e с помощью ELISA (R&D Systems № по кат. DY451). Значения ЕС50 для каждого соедине- 34 043820 ния в клетках mRAW264.7 показаны в табл. 3. Значения ЕС50 определяли путем аппроксимации кривых доза-ответ к нелинейному уравнению с 4 параметрами.

Таблица 3

ЕС50 для mRaw MIP-1 β (нМ)
Соединение 1	Соединение 2	Соединение 3	Соединение 4	MPL
0,0576	0,0176	0,0112	0,0014	0,2583

Индукция цитокинов MIP-1e, RANTES или TNFa в первичных hPBMC В дополнение к выработке MIP-1p в клеточной линии ММ6, MIP-1e, TNF-α и RANTES также исследовали первичные мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС). Анализ этих цитокинов применим для оценки активации MYD88-зависимых (TNF-α) или TRIF-TRAM (RANTES) внутриклеточных сигнальных путей в ответ на воздействие соединений. РВМС для биологических анализов получали от разных доноров, и супернатанты от клеток, обработанных соединением, применяли для анализов ELISA в отношении трех цитокинов. На фиг. 4А, 5А и 6А показан среднее значение ответа на соединения 1, 2, 3 и 4 для трех доноров. На фиг. 4В, 5В и 6В показан ответ на соединения 1, 2, 4, 5, 6 и 7 для одного донора, и на фиг. 4С, 5С и 6С показан ответ на соединения 8 и 9 для одного донора. Следует отметить, что более высокая изменчивость между донорами наблюдалась в случае RANTES и TNF-α, но меньшая в случае MIP-1e; независимо от этого, у всех доноров наблюдалась одинаковая динамика активности соединений. Все соединения могли индуцировать все три цитокина с примерно эквивалентной активностью, что позволяет предположить MyD88/TRIF-смещение цитокинового баланса. Первичные мононуклеарные клетки периферической крови человека выделяли из цельной крови доноров с применением градиента фиколла. Затем клетки подвергали обработке с помощью возрастающих концентраций указанного соединения (фиг. 4АС, фиг. 5А-С и 6А-С) в течение 18 ч и супернатанты анализировали в отношении выработки МТР-1в, RANTES или TNFa посредством ELISA. Значения ЕС50 для каждого соединения у каждого донора hPBMC показаны в табл. 4a-4d. Значения ЕС50 определяли путем аппроксимации кривых доза-ответ к нелинейному уравнению с 4 параметрами.

Таблица 4 а

ЕС50 для hPBMC (пМ)
	Соединение 1	Соединение 2	Соединение 3	Соединение 4	MPL
RANTES	23,9	64,2	41,7	8,4	1415	Донор 10
25,4	284,5	158,1	8,1	5155	Донор 5
12,1	379,9	15,8	8,3	1925	Донор 2

20,5	242,9	71,9	8,3	2831,7	Среднее значение
5,9	132,2	61,9	0,1	1656,0	Ст. откл.

I ΜΙΡ-Ιβ I	20,2	47,5	39,4	6,2	1259	Донор 10
24,1	165,9	72,7	2,7	857,9	Донор 5
19,8	75,5	31,4	5,9	756,5	Донор 2

21,4	96,3	47,8	4,9	957,8	Среднее значение
1,9	50,5	17,9	1,6	217,0	Ст. откл.

- 35 043820

Таблица 4b*

ЕС50 для hPBMC (пМ)
RANTES	1	2	4	5	6	7	MPL
179,5	608,5	22,1	31,9	109,1	8,0	6737,0	Донор 22
89,9	238,4	14,9	15,6	238,4	4,1	2232,0	Донор 5

134,7	423,5	18,5	23,8	173,8	6,0	4484,5	Среднее значение
44,8	185,1	3,6	8,1	64,7	1,9	2252,5	Ст. откл.

I Μΐρ-ΐβ_________I	284,6	785,8	13,3	39,0	122,1	13,3	10260,0	Донор 22
76,1	119,1	14,1	15,1	36,0	3,3	986,1	Донор 5

180,3	452,5	13,7	27,0	79,1	8,3	5623,1	Среднее значение

104,3	333,4	0,4	12,0	43,0	5,0	4637,0	Ст. откл.

*Числа 1, 2, 4, 5, 6 и 7 относятся к соединениям 1, 2, 4, 5, 6 и 7.

Таблица 4с

ЕС50 для hPBMC (пМ) RANTES
Соединение 8 39,12	Соединение 9 143,30

Таблица 4d

ЕС50 для hPBMC (пМ) ΜΙΡ-Ιβ
Соединение 8 41,79	Соединение 9 182,20

Исследование адъюванта вакцины соединения 2, 4, 5 и 7 оценивали в качестве адъюванта вакцины на мышиной модели вакцинации против вируса гриппа. Мышам BALB/c возрастом 7-9 недель (10 мышей на группу) внутримышечно инъецировали в заднюю конечность антиген вируса гриппа A/Victoria/210/2009-H3N2 (0,2 мкг/мышь) с 0,1, 0,01 или 0,001 мкг соединения 2, 4, 5 или 7 (составленного в 2% глицина) или без него. Через четырнадцать дней после однократной иммунизации у животных брали кровь из поднижнечелюстной вены и собирали сыворотку для анализа в отношении специфических антител к A/Victoria с помощью анализа ELISA (фиг. 7). Соединения 2, 4, 5 и 7 проявляли дозозависимый адъювантный эффект путем увеличения титров антитела IgG2a, специфического к вирусу гриппа, по сравнению с ответом на вакцину, содержащую только антиген.

Исследование неспецифической резистентности (NSR). Мышам BALB/c возрастом 12-14 недель (9 мышей на группу) вводили интраназально дозу (10 мкл/ноздря) водного состава с 10, 1 и 0,1 мкг соединения 4 в день -2. В день 0 животных заражали 1 LD50 дозой антигена вируса гриппа A/HK/68 (вирус гриппа человека H3N2, адаптированный для мышей). Массу тела, индекс заболевания и температуру тела регистрировали ежедневно в течение 20 дней после заражения. Соединение 4 обеспечивало сильную неспецифическую защиту от летального заражения вирусом гриппа дозозависимым образом (Фиг. 8).

Состав.

Солевую форму соединения точно отвешивали в депирогенизированные стеклянные флаконы и добавляли необходимый объем водной среды-носителя для обеспечения требуемой концентрации. Флаконы помещали в ультразвуковую ванну (температура ультразвуковой ванны <45 °С) для содействия растворению и уменьшения размера частиц, чтобы обеспечить стерилизующую фильтрацию без значительных потерь соединения. После того как раствор выглядел гомогенным, размер частиц периодически контролировали с помощью динамического рассеяния света до тех пор, пока раствор не становился прозрачным и размер частиц не составлял <200 нм, или пока размер частиц не переставал уменьшался при дальнейшей обработке ультразвуком. Состав фильтровали через фильтр из PVDF-мембраны с размером пор 0,22 мкм в сосуд из депирогенизированного стекла и полученный раствор количественно определяли с помощью RP-HPLC.

Исследования стабильности.

Водные составы соединений 1, 2, 3, 4, 5 и 6 разделяли на аликвоты, помещаемые в небольшие депирогенизированные флаконы, предназначенные для оценки стабильности при температурах 2-8, 25 и 40°С. Это воспроизводить ICH-руководства по исследованию температурной стабильности, но влажность не контролировали. Флакон извлекали в каждый момент времени/температуры в соответствии со следующим графиком, начиная с 2 недель до 12 месяцев, и анализировали с помощью HPLC с обращенной фазой (фиг. 9-14).

-

Claims

Температура 2 недели 1 месяц 2 месяца 3 месяца 4 месяца 6 месяцев 9 месяцев 12 месяцев

40°С X X X X X X X

25°С X X X X X

2-8°С X X X X X

Соединение 1 продемонстрировало хорошую стабильность без разложения до Т=6 недель при 40°С. Соединение 2 показало исключительную стабильность без разложения до 8 недель при 40°С и 12 месяцев при 25°С при составлении в 2% глицине (фиг. 10А) и разложение на менее чем 10% через 12 месяцев при 40°С при составлении в 2% глицерина (фиг. 10В). Соединение 4 продемонстрировало отличную стабильность без разложения до 8 недель при 40°С. Превосходная стабильность состава необходима для надежной безопасности, активности и снижения зависимости от холодовой цепи, а также увеличения срока хранения продукта.

В приведенном выше обсуждении раскрыты и описаны только иллюстративные варианты осуществления настоящего изобретения. Специалист в данной области техники легко поймет из такого обсуждения и из прилагаемых графических материалов и формулы изобретения, что в них могут быть внесены различные изменения, модификации и вариации без отклонения от сущности и объема настоящего изобретения, определенных в следующей формуле изобретения.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль,

R¹ представляет собой

или где:

каждый из R^2a, R^2b и R^2c независимо представляет собой CH(R¹⁰) (R¹¹);

R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С1-21алкил, -Х¹-С2-20алкил или -СН2-Х¹-С_1-19алкил;

R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой С3-17алкил, -Х²-С2-16алкил, -СН₂-Х²-С1-15алкил, -Х²-С(=У⁴)С1-15алкил, -СН₂-С(=Y⁴)C1-15алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1-15алкилен-2¹-С1-15алкил, -СН2-С(=У⁴) С1-15алкилен-2¹-С1-15алкил, -С3-17алкилен-2¹-С1-15алкил, -Х²-С2-16алкилен-2¹-С1-15алкил, -СН₂-Х²-С1-15алкилен-2¹-С1-15алкил, -Х²-С(=¥⁴)С1-15алкилен-2² или -Х²-С2-16алкилен-2²;

каждый из R^3a и R^3c независимо представляет собой СО₂Н, -OSO3H, -OP(O)(OH)₂, -С_1-6алкиленСО2Н, -С1-6алкилен-OSOзH, -С1-балкилен-ОР(О)(ОН)2, -OC1.₆алкилен-Р(O)(OH)2, -С1-балкилен-Р(О)(ОН)2, -C_1-6галогеналкилен-Р(O)(OH)₂ или Н;

R^3b представляет собой СО₂Н, СО₂С_1-6алкил, -OSO3H, -OP(O)(OН)₂, -С_1-6алкилен-СО₂Н, -С_1-6алкилен-OSO₃H, -С_1-6алкилен-OP(O)(OН)₂, -OC₁-₆αлкилен-Р(O)(OH)₂, -С_1-6алкилен-Р(O)(OH)₂, -С_1-6галогеналкилен-Р(О)(ОН)₂ или Н;

R^3d представляет собой СО₂Н, -SO3H, -Р(O)(OH)₂, -С_1-6алкилен-СО₂Н, -С_1-6αлкилен-OSO₃H, -С_1-6алкилен-OP(O)(OH)₂, -OC_1-6αлкилен-Р(O)(OН)₂, -С_1-6алкилен-Р(О)(ОН)₂, -С_1-6галогеналкиленР(О)(ОН)₂, Н, С_1-6алкил, С_1-6галогеналкил или С_3-8циклоалкил;

R^4a представляет собой СО2Н, CH2OSO3H, CH2CO2H, СН2Р(О)(ОН)2, СН2ОН или Н;

R^4b в каждом случае независимо представляет собой СО2Н, CH2OSO3H, СН2СО2Н, СН2Р(О)(ОН)2, СН2ОН или Н;

R⁵ и R⁶ в каждом случае независимо представляют собой Н, С_1-6алкил, С_1-6галогеналкил, -O-С_1-6αлкил или -С_1-6алкилен-OH;

X¹ и X² в каждом случае независимо представляют собой О, S или NH;

X³ представляет собой О, S, NH или СН₂;

Y¹, ¥² и ¥3 независимо представляют собой О;

- 37 043820

Y⁴ в каждом случае независимо представляет собой О;

Z¹ в каждом случае независимо представляет собой фенилен, причем фенилен необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, -ОС_1-4алкила,

-OC_1-4галогеналкила, циано и галогена;

Z² в каждом случае независимо представляет собой фенил, где Z² необязательно замещен 1-5 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила, С_1-4галогеналкила, -ОС_1-4алкила, -OC_1-4галогеналкила, циано и галогена; и каждый из k и q независимо составляет целое число от 0 до 4.
2. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где: R¹⁰ представляет собой С1-21алкил, -Х¹-С2-20алкил или -CH₂-X¹-C_1-19алкил;

R¹¹ представляет собой С3-17алкил, -Х²-С2-16алкил, -CH₂-X²-C1-15алкил, -X²-C(=Y⁴)C1-15алкил, -СН₂-С(=Y⁴)С1-15алкил, -Х²-С(=Y⁴)C1-l₅алкилен-Z¹-С1-15алкил, -СН2-С(=Y⁴)Сl-l₅алкилен-Z¹-С1-l5алкил, -С3-l7алкилен-Z¹-Сl-l₅алкил, -Х²-С2-16алкилен-Z¹-Сl-l₅алкил или -CH₂-X²-C1-15алкилен-Z¹-Сl-15алкил;

каждый из R^4a и R^4b независимо представляет собой СО₂Н, CH2OSO3H, СН₂СО₂Н, СН₂Р(О)(ОН)₂, СН2ОН или Н;

X¹ и X² независимо представляют собой О, S или NH;

Z¹ представляет собой фенилен, причем фенилен необязательно замещен 1-4 заместителями, независимо выбранными из С_1-4алкила, Cl_-4галогеналкила, -OCl_-4алкила, -OC_1-4галогеналкила, циано и галогена.
3. Соединение по любому из пп.1, 2 или его фармацевтически приемлемая соль, где в по меньшей мере одном случае R¹⁰ представляет собой С_1-21алкил.
4. Соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемая соль, где в по меньшей мере одном случае R¹¹ представляет собой -X²-С(=Y⁴)Сl-15алкил, -Х²-С(=Y⁴)С1-21алкилен-Z², -Х²-С(=Y⁴)С2-16алкилен-Z², Х²-С2-16алкил или СН₂-Х²-С_1-15алкил.
5. Соединение по любому из пп.1-4 или его фармацевтически приемлемая соль, где X² представляет собой О.
6. Соединение по любому из пп.1-5 или его фармацевтически приемлемая соль, где X³ представляет собой О.
7. Соединение по любому из пп.1-6 или его фармацевтически приемлемая соль, где R^3a представляет собой -OP(O)(OH)2, -OSO3H или ОСН2Р(О) (ОН)2.
8. Соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемая соль, где R^4a представляет собой СН₂ОН.
9. Соединение по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемая соль, где ¹ I ^R‘ А,

R¹ представляет собой ^r2c ;

k составляет 1;

R^3b представляет собой водород, СООН или СО₂С_1-6алкил; и каждый из R^3d, R⁵ и R⁶ представляет собой водород.
10. Соединение по любому из пп.1-8 или его фармацевтически приемлемая соль, где _R3_C _R ^4b I γ³ η

R¹ представляет собой ^R ·
11. Соединение по п.9 формулы (I-а) или его фармацевтически приемлемая соль

где R^3a представляет собой -OP(O)(OH)2, -OSO3H или ОСН2Р(О)(ОН)2.
12. Соединение по п.11 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой C_8-14 алкил.
13. Соединение по п.12 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹⁰ в каждом случае незави-

- 38 043820 симо представляет собой Си алкил.
14. Соединение по п.13 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹⁰ в каждом случае независимо представляет собой С11 алкил с прямой цепью.
15. Соединение по любому из пп.11-14 или его фармацевтически приемлемая соль, где R¹¹ в каждом случае независимо представляет собой -O-С(=O)С9αлкил, -O-С10алкил, -O-С(=O)С7алкилен-Z² или -O-С8-9алкиленZ².
16. Соединение по любому из пп.1-15 или его фармацевтически приемлемая соль, где -CH(R¹⁰)(R¹¹) представляет собой
17. Соединение по п.1, выбранное из группы, состоящей из

- 39 043820

или его фармацевтически приемлемая соль.
18. Соединение по п.17, где соединение представляет собой

- 40 043820

или его фармацевтически приемлемая соль.
19. Соединение по п.17, где соединение представляет собой

или его фармацевтически приемлемая соль.
20. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
21. Фармацевтическая композиция по п.20, дополнительно содержащая вирусный антиген.
22. Способ обеспечения развития, или усиления, или модификации иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемой соли.
23. Способ обеспечения развития, или усиления, или модификации иммунного ответа у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.20 или 21.
24. Способ по п.22 или 23, где иммунный ответ обеспечивает лечение инфекционного заболевания у субъекта.
25. Способ лечения, предупреждения инфекционного заболевания, или снижения предрасположенности к нему у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемой соли.
26. Способ лечения, предупреждения инфекционного заболевания, или снижения предрасположенности к нему у субъекта, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции по п.20 или 21.
27. Набор, содержащий соединение по любому из пп.1-19 или его фармацевтически приемлемую соль, или фармацевтическую композицию по п.20 или 21; и инструкции по применению.

-