EA043409B1 - VETERINARY PROBIOTIC PRODUCT - Google Patents

VETERINARY PROBIOTIC PRODUCT Download PDF

Info

Publication number
EA043409B1
EA043409B1 EA202000310 EA043409B1 EA 043409 B1 EA043409 B1 EA 043409B1 EA 202000310 EA202000310 EA 202000310 EA 043409 B1 EA043409 B1 EA 043409B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
subtilis
probiotic composition
probiotic
bacillus subtilis
composition according
Prior art date
Application number
EA202000310
Other languages
Russian (ru)
Inventor
Денис Олегович Шаталов
Алексей Валерьевич Панов
Наталья Александровна Михайлова
Анна Викторовна Айдакова
Диана Александровна Ахмедова
Original Assignee
Общество С Ограниченной Ответственностью "Синапс"
Filing date
Publication date
Application filed by Общество С Ограниченной Ответственностью "Синапс" filed Critical Общество С Ограниченной Ответственностью "Синапс"
Publication of EA043409B1 publication Critical patent/EA043409B1/en

Links

Description

Область техникиField of technology

Изобретение относится к биотехнологии (кормопроизводство, сельское хозяйство, ветеринария), в частности к ветеринарным препаратам пробиотического типа, и может быть использовано для лечения и профилактики заболеваний у животных и птицы, в том числе бактериальных и грибковых инфекций.The invention relates to biotechnology (feed production, agriculture, veterinary medicine), in particular to probiotic-type veterinary preparations, and can be used for the treatment and prevention of diseases in animals and poultry, including bacterial and fungal infections.

Предшествующий уровень техникиPrior Art

Пробиотики - препараты живых микроорганизмов, которые при введении в организм человека или животного оказывают положительное действие на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма-хозяина посредством оптимизации состава его кишечной микрофлоры. Пробиотики находят все более широкое применение в ветеринарии в качестве кормовых добавок.Probiotics are preparations of living microorganisms that, when introduced into the human or animal body, have a positive effect on the physiological, biochemical and immune reactions of the host by optimizing the composition of its intestinal microflora. Probiotics are increasingly used in veterinary medicine as feed additives.

В качестве ветеринарных биопрепаратов получили распространение пробиотики, состоящие из бактерий, продуцирующих молочную и пропионовую кислоты (Lactobacillus, Bifidobacterium, Propionibacterium, Enterococcus), непатогенных бактерий рода Escherichia, спорообразующих бактерий (Bacillus, Closthdium), дрожжей (Saccharomyces), термофильных стрептококков (Streptococcus).Probiotics consisting of bacteria producing lactic and propionic acids (Lactobacillus, Bifidobacterium, Propionibacterium, Enterococcus), non-pathogenic bacteria of the genus Escherichia, spore-forming bacteria (Bacillus, Closthdium), yeast (Saccharomyces), thermophilic streptococci (Streptococcus) have become widespread as veterinary biological products. .

Особый интерес представляют пробиотики на основе спорообразующих бактерий рода Bacillus. Известно, что бактерии рода Bacillus подавляют рост и развитие патогенной и условно-патогенной микрофлоры кишечника животных и птиц. Микроорганизмы рода Bacillus обладают целым рядом ценных свойств: продуцируют множество различных ферментов, аминокислот, белков, витаминов, антибиотиков, нуклеотидов. Представители этого рода характеризуются высокой приспособляемостью к условиям внешней среды и способностью образовывать споры. В связи с этим различные штаммы бактерий рода Bacillus широко используют в качестве пробиотических препаратов, как в виде монопрепаратов, содержащих только один штамм рода Bacillus, так и в виде комбинированных препаратов, сочетающих несколько штаммов бактерий рода Bacillus или бактерии разных родов в различных комбинациях.Of particular interest are probiotics based on spore-forming bacteria of the genus Bacillus. It is known that bacteria of the genus Bacillus suppress the growth and development of pathogenic and opportunistic microflora of the intestines of animals and birds. Microorganisms of the genus Bacillus have a number of valuable properties: they produce many different enzymes, amino acids, proteins, vitamins, antibiotics, and nucleotides. Representatives of this genus are characterized by high adaptability to environmental conditions and the ability to form spores. In this regard, various strains of bacteria of the genus Bacillus are widely used as probiotic preparations, both in the form of monopreparations containing only one strain of the genus Bacillus, and in the form of combined preparations combining several strains of bacteria of the genus Bacillus or bacteria of different genera in various combinations.

Так, из уровня техники известен препарат, включающий смесь биомассы бактерий рода Bacillus следующих штаммов: Bacillus subtilis ВКПМ В-7048, Bacillus licheniformis ВКПМ В-7038 и рекомбинантный штамм Bacillus subtilis ВКПМ В-7092 в равных соотношениях в споровой форме с титром не менее 3x101° спор/г (RU 2142287, 10.12.1999). Препарат обладает широким спектром антивирусной и антибактериальной активности, однако наличие в его составе генномодифицированных компонентов накладывает ограничения на его применение.Thus, a preparation is known from the prior art that includes a mixture of biomass of bacteria of the genus Bacillus of the following strains: Bacillus subtilis VKPM V-7048, Bacillus licheniformis VKPM V-7038 and the recombinant strain Bacillus subtilis VKPM V-7092 in equal proportions in spore form with a titer of at least 3x101 ° spores/g (RU 2142287, 12/10/1999). The drug has a wide spectrum of antiviral and antibacterial activity, however, the presence of genetically modified components in its composition imposes restrictions on its use.

Известен препарат для профилактики и лечения гнойно-воспалительных заболеваний и диспепсий у животных (RU 2172175, 20.08.2001). Биопрепарат включает биомассу Bacillus subtilis 12 В-ДЕП и наполнитель при следующем соотношении компонентов, мас.%: биомасса B. subtilis 12 В-ДЕП - живых микробных клеток - (1-2)x109 в 1 мл растворителя 92-95 мас.%, наполнитель 5-8 мас.%. Биопрепарат подавляет развитие ветеринарных штаммов болезнетворных микроорганизмов родов: Streptococcus, Eshehchia coli, Pseudomonas, Sthaphilococcus, Proteus, Shigella, Hexaera, обладает широкой устойчивостью к антибиотикам и эффективностью при лечении.A known drug for the prevention and treatment of purulent-inflammatory diseases and dyspepsia in animals (RU 2172175, 08/20/2001). The biological product includes the biomass of Bacillus subtilis 12 B-DEP and a filler in the following ratio of components, wt.%: biomass of B. subtilis 12 B-DEP - living microbial cells - (1-2)x10 9 in 1 ml of solvent 92-95 wt.% , filler 5-8 wt.%. The biological product suppresses the development of veterinary strains of pathogenic microorganisms of the following genera: Streptococcus, Eshehchia coli, Pseudomonas, Sthaphilococcus, Proteus, Shigella, Hexaera, has broad resistance to antibiotics and is effective in treatment.

Известно пробиотическое лекарственное средство для сельскохозяйственных животных и птицы, которое содержит смесь суспензий штаммов бактерий и защитную среду (RU 2326692, 20.06.2008). В качестве защитной среды средство содержит сахарозо-желатиновую смесь при следующем соотношении компонентов, мас.%: сахароза - 15; желатин - 5; 9%-ный раствор хлорида натрия - 80. В качестве смеси суспензий штаммов средство содержит суспензии следующих штаммов, мас.%: Azomonas agilisc B-2586 - 8; Azotobacter chroococcum B-3162 - 7; Azotobacter vinelandii B-2587 - 7; Bacillus subtilis B-5225 - 7; Bacillus subtilis B-4828 - 9; Bifidum bacterium globosum B-2584 - 10; Eschehchia coli B-4412 - 8; Enterococcus faecium B-2898 - 7; Lactobacillus acidophilus B-3488 - 7; Lactobacillus acidophilus B-2585 - 7; Propionibacterium freudenreichii B-6561 - 7; Pseudomonas sp. B-3908 - 7; Pseudomonas sp. B-2589 - 7; Saccharomyces cerevisiae Y-365 - 2. Средство позволяет нормализовать микробиоценоз кишечника здоровых животных и птицы, сократить заболеваемость гнойно-воспалительного и диспепсийного характера, снизить падеж и повысить прирост массы тела у молодняка.A probiotic medicinal product for farm animals and poultry is known, which contains a mixture of suspensions of bacterial strains and a protective medium (RU 2326692, 06/20/2008). As a protective medium, the product contains a sucrose-gelatin mixture with the following ratio of components, wt.%: sucrose - 15; gelatin - 5; 9% sodium chloride solution - 80. As a mixture of strain suspensions, the product contains suspensions of the following strains, wt.%: Azomonas agilisc B-2586 - 8; Azotobacter chroococcum B-3162 - 7; Azotobacter vinelandii B-2587 - 7; Bacillus subtilis B-5225 - 7; Bacillus subtilis B-4828 - 9; Bifidum bacterium globosum B-2584 - 10; Eschehchia coli B-4412 - 8; Enterococcus faecium B-2898 - 7; Lactobacillus acidophilus B-3488 - 7; Lactobacillus acidophilus B-2585 - 7; Propionibacterium freudenreichii B-6561 - 7; Pseudomonas sp. B-3908 - 7; Pseudomonas sp. B-2589 - 7; Saccharomyces cerevisiae Y-365 - 2. The product allows you to normalize the intestinal microbiocenosis of healthy animals and poultry, reduce the incidence of purulent-inflammatory and dyspeptic diseases, reduce mortality and increase body weight gain in young animals.

Препарат Ветоспорин-актив представляет собой сыпучий порошок активированного угля с сорбированными клетками живых бактерий пробиотических штаммов Bacillus subtilis 11В и Bacillus subtilis 12B черного цвета без запаха. Применяют для профилактики и лечения при отравлениях, диарее, аллергии, незаменим при недоброкачественных кормах, необходим после приема антибиотиков и антигельминтных препаратов, при стрессах, переохлаждениях и перегреваниях.The drug Vetosporin-active is a free-flowing powder of activated carbon with sorbed cells of living bacteria of the probiotic strains Bacillus subtilis 11B and Bacillus subtilis 12B, black and odorless. Used for the prevention and treatment of poisoning, diarrhea, allergies, indispensable for poor-quality feed, necessary after taking antibiotics and anthelmintic drugs, for stress, hypothermia and overheating.

Энзимспорин - инновационная кормовая пробиотическая добавка для оптимизации процессов пищеварения, повышения продуктивности и сохранности свиней, крупного рогатого скота и сельскохозяйственной птицы. Предназначен для снижения уровня колонизации кишечника условно патогенными микроорганизмами. Энзимспорин содержит три штамма спорообразующих бактерий рода Bacillus в равных соотношениях, а именно: Bacillus subtilis BKM B-2998D (ВКПМ В-314), Bacillus licheniformis BKM B-2999D (ВКПМ В-8054), Bacillus subtilis BKM B-3057D (ВКПМ В-12079). Наполнители - сухая молочная сыворотка, мальтодекстрин, кукурузная мука.Enzymsporin is an innovative feed probiotic additive for optimizing digestion processes, increasing productivity and safety of pigs, cattle and poultry. Designed to reduce the level of intestinal colonization by opportunistic pathogenic microorganisms. Enzymsporin contains three strains of spore-forming bacteria of the genus Bacillus in equal proportions, namely: Bacillus subtilis BKM B-2998D (VKPM B-314), Bacillus licheniformis BKM B-2999D (VKPM B-8054), Bacillus subtilis BKM B-3057D (VKPM B -12079). Fillers - whey powder, maltodextrin, corn flour.

Несмотря на то что на рынке представлено множество пробиотических препаратов, широкомасштабное применение антибиотиков в качестве стимуляторов роста в животноводстве и птицеводствеAlthough there are many probiotic products available on the market, the widespread use of antibiotics as growth promoters in livestock and poultry production

- 1 043409 привело к возникновению проблемы формирования резистентной микрофлоры. Поэтому важным направлением исследований является поиск альтернативных стимуляторов роста и создание новых, более эффективных пробиотических препаратов для промышленного животноводства и птицеводства.- 1 043409 led to the problem of the formation of resistant microflora. Therefore, an important area of research is the search for alternative growth stimulants and the creation of new, more effective probiotic preparations for industrial livestock and poultry farming.

Раскрытие изобретенияDisclosure of the Invention

Задачей изобретения является создание пробиотической композиции, способной быстро и эффективно восстанавливать микрофлору кишечника при повреждениях, а также повышать ее устойчивость к негативным микробиологическим воздействиям.The objective of the invention is to create a probiotic composition capable of quickly and effectively restoring intestinal microflora when damaged, as well as increasing its resistance to negative microbiological influences.

Поставленная задача достигается путем разработки новой пробиотической композиции для применения в ветеринарии на основе культур микроорганизмов рода Bacillus, включающей смесь биомассы живых и споровых форм бактерий штаммов Bacillus subtilis 1719 в титре 1-1,5x108 КОЕ/мл и Bacillus subtilis 3H в титре 1-1,5x108 КОЕ/мл.This task is achieved by developing a new probiotic composition for use in veterinary medicine based on cultures of microorganisms of the genus Bacillus, including a mixture of biomass of live and spore forms of bacteria of the Bacillus subtilis 1719 strains in a titer of 1-1.5x108 CFU/ml and Bacillus subtilis 3H in a titer of 1-1 .5x108 CFU/ml.

В некоторых вариантах осуществления изобретения пробиотическая композиция дополнительно включает фармакологически приемлемый носитель, растворитель или наполнитель.In some embodiments, the probiotic composition further includes a pharmacologically acceptable carrier, diluent or excipient.

В некоторых частных вариантах осуществления изобретения пробиотическая композиция имеет форму суспензии для перорального применения.In some particular embodiments of the invention, the probiotic composition is in the form of an oral suspension.

В некоторых частных вариантах осуществления изобретения пробиотическая композиция имеет форму лиофилизата.In some particular embodiments of the invention, the probiotic composition is in the form of a lyophilisate.

В некоторых частных вариантах осуществления изобретения бактерии Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н иммобилизованы на угольном энтеросорбенте.In some particular embodiments of the invention, the bacteria Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H are immobilized on a carbon enterosorbent.

Поставленная задача также достигается путем применения представленной пробиотической композиции для профилактики и/или лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта.This objective is also achieved by using the presented probiotic composition for the prevention and/or treatment of diseases of the gastrointestinal tract.

Кроме этого, поставленная задача достигается при осуществлении способа профилактики и/или лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта в животноводстве, птицеводстве или звероводстве, включающего применение пробиотического препарата по изобретению.In addition, the objective is achieved by implementing a method for the prevention and/or treatment of diseases of the gastrointestinal tract in livestock, poultry or fur farming, including the use of a probiotic preparation according to the invention.

В некоторых вариантах осуществления изобретения пробиотическую композицию вводят перорально перед кормлением или вместе с кормом или питьевой водой из расчета 0,5-2 мл на 10 кг массы животного или птицы.In some embodiments of the invention, the probiotic composition is administered orally before feeding or along with food or drinking water at a rate of 0.5-2 ml per 10 kg of animal or bird weight.

В некоторых частных вариантах осуществления изобретения пробиотическую композицию вводят из расчета 1 мл на 10 кг массы животного или птицы.In some particular embodiments of the invention, the probiotic composition is administered at the rate of 1 ml per 10 kg of animal or poultry weight.

В некоторых частных вариантах осуществления изобретения пробиотическую композицию добавляют в корм путем его орошения за 20-30 мин до кормления.In some particular embodiments of the invention, the probiotic composition is added to the feed by sprinkling it 20-30 minutes before feeding.

Поставленная задача также достигается путем разработки кормовых добавок, включающих предлагаемую пробиотическую композицию, для включения в комбикорма, концентраты, премиксы или любые другие сухие или жидкие корма.This objective is also achieved by developing feed additives containing the proposed probiotic composition for inclusion in feed, concentrates, premixes or any other dry or liquid feed.

В некоторых вариантах осуществления изобретения кормовая добавка дополнительно включает растительные, минеральные, технологические и/или балансирующие добавки.In some embodiments, the feed additive further includes plant, mineral, processing and/or balancing additives.

В некоторых частных вариантах растительные добавки выбраны из группы, состоящей из эфирных масел, экстрактов растений, шрота, жмыха; минеральные добавки выбраны из группы, состоящей из карбоната кальция, мела кормового, монокальцийфосфата, костной муки, сера; технологические добавки выбраны из группы, состоящей из сорбата калия, бензоата натрия, пиросульфита натрия, уротропина; балансирующие добавки выбраны из группы, состоящей из белковый, белково-витаминной, белкововитаминно-минеральной добавок, карбамидного пищеконцентрата.In some particular embodiments, herbal additives are selected from the group consisting of essential oils, plant extracts, meal, cake; mineral additives are selected from the group consisting of calcium carbonate, feed chalk, monocalcium phosphate, bone meal, sulfur; technological additives are selected from the group consisting of potassium sorbate, sodium benzoate, sodium pyrosulfite, hexamine; balancing additives are selected from the group consisting of protein, protein-vitamin, protein-vitamin-mineral additives, urea food concentrate.

Количество пробиотической композиции в кормовой добавке рассчитывается так, чтобы обеспечить введение 0,5-2 мл пробиотической композиции на 10 кг массы животного или птицы.The amount of probiotic composition in the feed additive is calculated to ensure the introduction of 0.5-2 ml of probiotic composition per 10 kg of animal or poultry weight.

Эффективное синергетическое взаимодействие штаммов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H обеспечивает достижение следующих технических результатов:The effective synergistic interaction of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H strains ensures the achievement of the following technical results:

разработана новая пробиотическая композиция на основе культур микроорганизмов рода Bacillus, способная быстро и эффективно восстанавливать микрофлору кишечника при повреждениях, а также повышать ее устойчивость к негативным микробиологическим воздействиям, обладающая следующими важными свойствами:A new probiotic composition has been developed based on cultures of microorganisms of the genus Bacillus, capable of quickly and effectively restoring intestinal microflora in case of damage, as well as increasing its resistance to negative microbiological influences, having the following important properties:

оказывает ингибирующее действие по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, как бактериальной, так и грибковой природы, не подавляя при этом микрофлору кишечника, повышает барьерные функции организма, устойчива к большинству антибиотиков, повышает биодоступность кормов, активизирует работу кишечника, не содержит генетически модифицированных микроорганизмов, микроорганизмы, входящие в препарат, не патогенны, не токсичны для теплокровных;has an inhibitory effect against pathogenic and conditionally pathogenic microorganisms, both bacterial and fungal in nature, without suppressing the intestinal microflora, increases the barrier functions of the body, is resistant to most antibiotics, increases the bioavailability of feed, activates intestinal function, does not contain genetically modified microorganisms, microorganisms included in the drug are not pathogenic, not toxic to warm-blooded animals;

предлагаемую пробиотическую композицию можно применять как индивидуально, так и групповым методом с комбикормом, концентратами, минеральными добавками, заменителями молока, питьем и др.The proposed probiotic composition can be used both individually and in a group method with mixed feed, concentrates, mineral supplements, milk substitutes, drinks, etc.

- 2 043409- 2 043409

Подробное раскрытие изобретенияDetailed Disclosure of the Invention

Определения и термины.Definitions and terms.

Следующие термины и определения применяются в данном документе, если иное не указано явно. Ссылки на методики, используемые при описании данного изобретения, относятся к хорошо известным методам, включая изменения этих методов и замену их эквивалентными методами, известными специалистам.The following terms and definitions apply throughout this document unless otherwise expressly stated. References to techniques used in the description of this invention refer to well known techniques, including modifications of these techniques and replacement thereof with equivalent techniques known to those skilled in the art.

В описании данного изобретения термины включает и включающий интерпретируются как означающие включает, помимо всего прочего. Указанные термины не предназначены для того, чтобы их истолковывали как состоит только из.As used herein, the terms includes and including are interpreted to mean includes, among other things. These terms are not intended to be construed as consisting only of.

Термин пробиотическая композиция в данном описании подразумевает композицию, полученную из суспензий клеток Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н, концентрация каждого из которых доведена до 1-1,5x108 КОЕ/мл.The term probiotic composition in this description means a composition obtained from suspensions of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H cells, the concentration of each of which is adjusted to 1-1.5x108 CFU/ml.

Под (терапевтически) эффективным количеством (терапевтической дозой) подразумевается количество пробиотической композиции (пробиотического препарата), вводимой или доставляемой животному (птице), при котором у него с наибольшей вероятностью проявится ожидаемый терапевтический эффект. Точное требуемое количество может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида животного (птицы), возраста, массы тела, общего состояния, тяжести заболевания, методики введения пробиотической композиции, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п. Ведение пробиотической композиции (пробиотического препарата) по изобретению субъекту, нуждающемуся в лечении и/или профилактике заболевания или состояния, осуществляется в дозе, достаточной для достижения терапевтического эффекта. При проведении лечения и/или профилактики введение может осуществляться как разово, так и несколько раз в день, чаще в виде курсового введения на протяжении времени, достаточного для достижения терапевтического эффекта (от одной до нескольких недель до месяцев), при этом курсы введения пробиотической композиции могут проводиться повторно (на протяжении года, нескольких лет и др.).By (therapeutically) effective amount (therapeutic dose) is meant the amount of a probiotic composition (probiotic preparation) administered or delivered to an animal (bird) at which it is most likely to exhibit the intended therapeutic effect. The exact amount required may vary from subject to subject depending on the species of animal (bird), age, body weight, general condition, severity of the disease, method of administration of the probiotic composition, combination treatment with other drugs, etc. Administration of the probiotic composition (probiotic preparation) according to the invention to a subject in need of treatment and/or prevention of a disease or condition is carried out in a dose sufficient to achieve a therapeutic effect. When carrying out treatment and/or prevention, administration can be carried out either once or several times a day, more often in the form of a course of administration over a period of time sufficient to achieve a therapeutic effect (from one to several weeks to months), with courses of administration of the probiotic composition can be carried out repeatedly (over the course of a year, several years, etc.).

Термин кормовая добавка означает ингредиент, премикс, добавку, которые могут быть использованы для получения кормовых композиций (например, комбикормов).The term feed additive means an ingredient, premix, additive that can be used to obtain feed compositions (for example, compound feed).

Термин животное в описании данного изобретения относится к млекопитающим, преимущественно сельскохозяйственным животным, однако не ограничиваясь ими (включая, в том числе крупный рогатый скот, свиней, лошадей, вьючных животных, пушных зверей, домашних животных, диких животных, содержащихся в неволе).The term animal as used herein refers to mammals, primarily but not limited to farm animals (including, but not limited to, cattle, swine, horses, beasts of burden, fur-bearing animals, domestic animals, captive wild animals).

Если не определено отдельно, технические и научные термины в данной заявке имеют стандартные значения, общепринятые в научной и технической литературе.Unless otherwise defined, technical and scientific terms in this application have their standard meanings commonly accepted in the scientific and technical literature.

В состав разработанной пробиотической композиции на основе культур микроорганизмов рода Bacillus входят штаммы бактерий Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н, отобранные на основе изучения морфологических, физиолого-биохимических, генетических и других биологических свойств и неожиданно проявившие синергетический эффект.The developed probiotic composition based on cultures of microorganisms of the genus Bacillus includes bacterial strains Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H, selected based on the study of morphological, physiological-biochemical, genetic and other biological properties and unexpectedly exhibiting a synergistic effect.

Штамм В. subtilis 1719, депонированный в ГИСК им. Л.А. Тарасевича под № 277, обладает пробиотическими свойствами, проявляющимися в элиминации условно-патогенных и патогенных микроорганизмов (проявляет антагонизм против условно-патогенных и патогенных микроорганизмов различных таксономических групп), с восстановлением количественного и качественного состава нормальной микрофлоры при экспериментальном дисбиозе, оказывает иммуномодулирующее действие на макроорганизм, обладает низкой адгезивной активностью, устойчив к гентамицину, полимиксину и эритромицину. Штамм B. subtilis 3Н, депонированный в ГКПМ под № 248, обладает антагонистической активностью, подавляя рост патогенных и условно-патогенных бактерий: стафилококков, протея, клебсиелл, кишечной палочки, стрептококков, синегнойной палочки и дрожжевых грибов, устойчив к римфапицину. Благодаря продуцированию ферментов, он способствует расщеплению белков, жиров, углеводов и клетчатки, улучшая переваривание и усвоение пищи. Штаммы B. subtilis 1719 и B. subtilis 3Н абсолютно безопасны - обладают низкой токсичностью, токсигенностью и вирулентностью.Strain B. subtilis 1719, deposited in GISC named after. L.A. Tarasevich under No. 277, has probiotic properties, manifested in the elimination of opportunistic and pathogenic microorganisms (shows antagonism against opportunistic and pathogenic microorganisms of various taxonomic groups), with the restoration of the quantitative and qualitative composition of normal microflora in experimental dysbiosis, has an immunomodulatory effect on the macroorganism , has low adhesive activity, resistant to gentamicin, polymyxin and erythromycin. Strain B. subtilis 3H, deposited in the State Medical University under No. 248, has antagonistic activity, inhibiting the growth of pathogenic and opportunistic bacteria: staphylococci, Proteus, Klebsiella, Escherichia coli, streptococci, Pseudomonas aeruginosa and yeast fungi, and is resistant to rimphapicin. Thanks to the production of enzymes, it promotes the breakdown of proteins, fats, carbohydrates and fiber, improving the digestion and absorption of food. Strains B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H are absolutely safe - they have low toxicity, toxigenicity and virulence.

В некоторых вариантах изобретения пробиотическая композиция содержит также защитную среду для обеспечения сохранности бактерий в процессе технологической переработки, получения конечной рецептурной формы и последующего хранения. В качестве защитной среды композиция может содержать, например сахарозо-желатиновую среду, сухое молоко, желатозу, лактозу, сахарозу и т.п.In some embodiments of the invention, the probiotic composition also contains a protective environment to ensure the safety of bacteria during technological processing, obtaining the final formulation and subsequent storage. As a protective medium, the composition may contain, for example, sucrose-gelatin medium, milk powder, gelatin, lactose, sucrose, etc.

Пробиотическая композиция по изобретению может дополнительно содержать растворитель. В качестве растворителя может быть использована, например, дистиллированная вода, физиологический раствор и т.п.The probiotic composition of the invention may further comprise a solvent. For example, distilled water, saline solution, etc. can be used as a solvent.

Пробиотическая композиция по изобретению может дополнительно также содержать наполнитель, обычно применяемый при изготовлении различных рецептурных форм. При формовании таблетированных форм она может содержать, например, декстраны, полиглюкин, крахмал, поливинилпирролидон, сахарозу, лактозу, стеарат кальция, глюкозу, гидрокарбонат натрия, гидроокись алюминия, метилцеллюлозу, тальк и т.п.The probiotic composition of the invention may additionally also contain an excipient commonly used in the manufacture of various formulations. When formed into tablet forms, it may contain, for example, dextrans, polyglucin, starch, polyvinylpyrrolidone, sucrose, lactose, calcium stearate, glucose, sodium bicarbonate, aluminum hydroxide, methylcellulose, talc, etc.

В некоторых вариантах изобретения пробиотическая композиция может быть представлена в формеIn some embodiments, the probiotic composition may be in the form

- 3 043409 лиофилизата. Такие лиофильно высушенные пробиотические препараты также могут дополнительно содержать наполнитель и/или диспергатор. В качестве наполнителя используют, например, лактозу, сахарозу, обезжиренное сухое молоко, в качестве диспергатора, например Твин-80. Диспергатор в состав композиции вводят с целью равномерного распределения композиции (кормовой добавки) в основном рационе. Диспергатор также необходим для регулирования седиментационных характеристик водного раствора пробиотической композиции. Наличие диспергатора способствует однородности водного раствора композиции, что очень важно при применении пробиотической кормовой добавки путем выпаивания.- 3 043409 lyophilisate. Such freeze-dried probiotic preparations may also further contain an excipient and/or dispersant. For example, lactose, sucrose, skimmed milk powder are used as a filler; for example, Tween-80 is used as a dispersant. A dispersant is introduced into the composition in order to uniformly distribute the composition (feed additive) in the main diet. A dispersant is also necessary to regulate the sedimentation characteristics of the aqueous solution of the probiotic composition. The presence of a dispersant contributes to the homogeneity of the aqueous solution of the composition, which is very important when using a probiotic feed additive by feeding.

Пробиотический препарат также может быть представлен в виде суспензии, содержащей пробиотическую композицию в виде суспензии в 7%-ном растворе натрия хлорида. Такой препарат также может содержать эксципиенты, такие как например крахмал, твин, диспергирующие агенты, ацесульфам и/или сахарин.The probiotic preparation may also be presented in the form of a suspension containing the probiotic composition in the form of a suspension in a 7% sodium chloride solution. Such a preparation may also contain excipients such as, for example, starch, Tween, dispersing agents, acesulfame and/or saccharin.

Пробиотический препарат может быть инкапсулирован или иммобилизирован на различных типах носителей или сорбентах, например, на аэросиле, целлюлозе, активированном угле, карбоксиметилцеллюлозе, гидроксиэтилцеллюлозе, хитозане и т.п. Сорбированные формы пробиотиков ускоряют дезинтоксикацию и репаративные процессы в организме. В частных вариантах изобретения в качестве сорбента используют угольный энтеросорбент, например, активированный уголь марки БАУ-А, БАУ или ОУ-ВК.The probiotic preparation can be encapsulated or immobilized on various types of carriers or sorbents, for example, aerosil, cellulose, activated carbon, carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, chitosan, etc. Sorbed forms of probiotics accelerate detoxification and reparative processes in the body. In private embodiments of the invention, a carbon enterosorbent is used as a sorbent, for example, activated carbon of the BAU-A, BAU or OU-VK brands.

Фармацевтически приемлемый носитель, растворитель и/или наполнитель подразумевает, что применяемые носитель, растворитель и наполнитель не являются токсичными или вредными для субъекта при применении в пробиотических композициях по данному изобретению, включая пероральное применение способами, представленными в данном документе.Pharmaceutically acceptable carrier, solvent and/or excipient means that the carrier, solvent and excipient used are not toxic or harmful to a subject when used in the probiotic compositions of this invention, including oral administration by the methods presented herein.

Способ приготовления пробиотической композиции по изобретению.Method for preparing a probiotic composition according to the invention.

Технология получения ветеринарного средства на основе штаммов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н осуществляется в несколько стадий:The technology for obtaining a veterinary product based on the strains of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H is carried out in several stages:

1) получение биомассы бактерий Bacillus subtilis 3Н;1) obtaining biomass of bacteria Bacillus subtilis 3H;

2) получение биомассы бактерий Bacillus subtilis 1719;2) obtaining biomass of bacteria Bacillus subtilis 1719;

3) получение готового продукта.3) receipt of the finished product.

1. Получение биомассы бактерий Bacillus subtilis 3Н.1. Obtaining biomass of bacteria Bacillus subtilis 3H.

Для максимального накопления биомассы наиболее эффективным субстратом для культивирования штамма является модифицированная среда № 9 следующего состава: сульфат железа - 0,01 г/л; сульфат магния - 0,1 г/л; хлорид марганца - 0,01 г/л; хлорид кальция - 0,08 г/л; триптон - 5 г/л; гидроортофосфат калия - 0,3 г/л; цитрат аммония - 2,0 г/л; дрожжевой экстракт - 3,0 г/л; лактоза - 10,0 г/л; агар микробиологический - 3,0 г/л; рН 7,3±0,2.For maximum accumulation of biomass, the most effective substrate for cultivating the strain is modified medium No. 9 of the following composition: iron sulfate - 0.01 g/l; magnesium sulfate - 0.1 g/l; manganese chloride - 0.01 g/l; calcium chloride - 0.08 g/l; tryptone - 5 g/l; potassium hydrogen orthophosphate - 0.3 g/l; ammonium citrate - 2.0 g/l; yeast extract - 3.0 g/l; lactose - 10.0 g/l; microbiological agar - 3.0 g/l; pH 7.3±0.2.

Выращивание бактерий проводят при периодическом культивировании в течение 72 ч в условиях постоянной аэрации при температуре 37°С, рН среды 7,3±0,2.The cultivation of bacteria is carried out by periodic cultivation for 72 hours under conditions of constant aeration at a temperature of 37°C, pH 7.3±0.2.

Продукт на выходе - суспензия клеток, содержащая живые бактерии и их споры в среде культивирования.The output product is a cell suspension containing live bacteria and their spores in a culture medium.

2. Получение биомассы бактерий Bacillus subtilis 1719.2. Obtaining biomass of bacteria Bacillus subtilis 1719.

Для максимального накопления биомассы наиболее эффективным субстратом для культивирования штамма является среда ВК-2 с добавлением глюкозы или сахарозы. Состав среды ВК-2 на один литр дистиллированной воды составляет: марганец хлористый - 0,01 г/л; кальций хлористый - 0,05 г/л; натрий хлористый - 5,0 г/л; натрий фосфорнокислый двузамещенный 12-водный - 2,0 г/л; калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный - 2,0 г/л; глюкоза - 10,0 г/л; пептон сухой ферментативный для бактериологических целей - 10,0 г/л.For maximum accumulation of biomass, the most effective substrate for cultivating the strain is VK-2 medium with the addition of glucose or sucrose. The composition of the VK-2 medium per liter of distilled water is: manganese chloride - 0.01 g/l; calcium chloride - 0.05 g/l; sodium chloride - 5.0 g/l; sodium phosphate disubstituted 12-water - 2.0 g/l; potassium phosphate disubstituted 3-water - 2.0 g/l; glucose - 10.0 g/l; dry enzymatic peptone for bacteriological purposes - 10.0 g/l.

Выращивание бактерий проводят при периодическом культивировании в течение 72 ч в условиях постоянной аэрации при температуре 37°С, рН среды 7,3+0,2.The cultivation of bacteria is carried out by periodic cultivation for 72 hours under conditions of constant aeration at a temperature of 37°C, pH 7.3+0.2.

Продукт на выходе - суспензия клеток, содержащая живые бактерии и их споры в среде культивирования.The output product is a cell suspension containing live bacteria and their spores in a culture medium.

3. Получение готового продукта.3. Receiving the finished product.

Полученные суспензии клеток Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H доводят водой до концентрации 1-1,5x108 КОЕ/мл каждого из штаммов и затем их смешивают, получая пробиотическую композицию.The resulting cell suspensions of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H are adjusted with water to a concentration of 1-1.5x108 CFU/ml of each strain and then mixed to obtain a probiotic composition.

Для получения пробиотического препарата в форме суспензии для перорального применения полученную пробиотическую композицию разводят в 7%-ном растворе NaCl.To obtain a probiotic preparation in the form of a suspension for oral administration, the resulting probiotic composition is diluted in a 7% NaCl solution.

Для получения пробиотического препарата в форме лиофилизата полученную пробиотическую композицию смешивают с криопротектором (например, сахарозо-желатиновой защитной средой), затем стабилизированную микробную суспензию разливают в ампулы по 1-3 см3, замораживают при -40°С в течение 24 ч и лиофилизируют в течение 36 ч до остаточной влажности 3-4%.To obtain a probiotic preparation in the form of a lyophilisate, the resulting probiotic composition is mixed with a cryoprotector (for example, sucrose-gelatin protective medium), then the stabilized microbial suspension is poured into ampoules of 1-3 cm 3 , frozen at -40°C for 24 hours and lyophilized in for 36 hours until the residual humidity is 3-4%.

Для получения пробиотического препарата в форме иммобилизата на угольном энтеросорбенте порошковидный активированный уголь, состоящий из частиц размером до 30 мкм, смешивают с пробиотической композицией в соотношении 0,1 г угля на 1 мл суспензии. Полученную смесь выдерживают приTo obtain a probiotic preparation in the form of an immobilizate on a carbon enterosorbent, powdered activated carbon, consisting of particles up to 30 microns in size, is mixed with the probiotic composition in a ratio of 0.1 g of carbon per 1 ml of suspension. The resulting mixture is kept at

- 4 043409- 4 043409

4°С в течение 40-60 мин при постоянном перемешивании до полной иммобилизации бактериальных клеток на энтеросорбенте. Далее продукт однократно промывают в изотоническом растворе NaCl, переносят в емкости, в которых полученный биопрепарат подвергают лиофильной сушке, замораживают при -40°С в течение 24 ч и лиофилизируют в течение 36 ч до остаточной влажности 3-4%.4°C for 40-60 minutes with constant stirring until bacterial cells are completely immobilized on the enterosorbent. Next, the product is washed once in an isotonic NaCl solution, transferred to containers in which the resulting biological product is freeze-dried, frozen at -40°C for 24 hours and lyophilized for 36 hours to a residual moisture content of 3-4%.

Предлагаемая пробиотическая композиция может применяться в виде кормовых добавок, предназначенных для введения в кормовые композиции (например, комбикорма, концентраты, премиксы или любые другие сухие или жидкие корма). В состав таких кормовых добавок могут включаться также дополнительные компоненты. Например, растительные, минеральные, технологические и/или балансирующие добавки, в количествах, предусмотренных рецептурой для конкретного вида животных или птиц.The proposed probiotic composition can be used in the form of feed additives intended for introduction into feed compositions (for example, feed, concentrates, premixes or any other dry or liquid feed). The composition of such feed additives may also include additional components. For example, herbal, mineral, technological and/or balancing additives, in quantities specified in the recipe for a specific type of animal or bird.

Растительные добавки представляют собой части растений или их производные, в том числе травы, различные экстракты, эфирные масла, шрот, жмых. Такие добавки обычно улучшают вкус корма, положительно влияя на аппетит и плодотворность животных и птицы.Herbal additives are parts of plants or their derivatives, including herbs, various extracts, essential oils, meal, cake. Such additives usually improve the taste of the feed, having a positive effect on the appetite and fertility of animals and poultry.

К минеральным добавкам относятся такие элементы как кальций, фосфор, магний, железо, цинк, йод; минеральные добавки могут быть выбраны, например, из группы, состоящей из карбоната кальция, мела кормового, монокальцийфосфата, костной муки, сера, но не ограничиваясь ими.Mineral supplements include elements such as calcium, phosphorus, magnesium, iron, zinc, iodine; mineral additives can be selected, for example, from the group consisting of, but not limited to, calcium carbonate, chalk, monocalcium phosphate, bone meal, sulfur.

Технологические добавки предназначены, в первую очередь, для увеличения гигиены корма и улучшения его показателей, в том числе пищевые показатели - для улучшения здоровья и продуктивности животных и птицы, сенсорные - для улучшения кормопотребления, зоотехнические - для быстрого переваривания питательных элементов. К технологическим добавкам относятся, например, органические кислоты (муравьиная, молочная, кремниевая, пропионовая), сорбат калия, бензоат натрия, уротропин, пиросульфит натрия и другие.Technological additives are intended, first of all, to increase feed hygiene and improve its performance, including nutritional performance – to improve the health and productivity of animals and poultry, sensory – to improve feed consumption, zootechnical – to quickly digest nutrients. Technological additives include, for example, organic acids (formic, lactic, silicon, propionic), potassium sorbate, sodium benzoate, methenamine, sodium pyrosulfite and others.

Балансирующие добавки предназначены для того, чтобы сбалансировать корма, поступающие животным и птице. К балансирующим добавкам относятся белковые, белково-витаминные, белкововитаминно-минеральные и другие концентраты, например карбамидный пищеконцентрат.Balancing additives are designed to balance the feed supplied to animals and poultry. Balancing additives include protein, protein-vitamin, protein-vitamin-mineral and other concentrates, such as urea food concentrate.

Разработанные пробиотические композиции могут быть использованы для профилактики и/или лечения пищевых расстройств, профилактики и/или лечения различных заболеваний (в том числе заболеваний желудочно-кишечного тракта), патогенез которых связан с воздействием инфекционных агентов, в том числе одновременно с применением антибиотиков, в животноводстве, птицеводстве и звероводстве.The developed probiotic compositions can be used for the prevention and/or treatment of eating disorders, prevention and/or treatment of various diseases (including diseases of the gastrointestinal tract), the pathogenesis of which is associated with exposure to infectious agents, including simultaneously with the use of antibiotics, in livestock, poultry and fur farming.

В результате проведенных исследований было неожиданно установлено, что комбинация штаммов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H обладает высокой эффективностью при подавлении активности патогенных микроорганизмов в организме животного (птицы), проявляя более выраженный эффект, чем при воздействии указанных штаммов, взятых по отдельности.As a result of the studies, it was unexpectedly found that the combination of strains Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H is highly effective in suppressing the activity of pathogenic microorganisms in the body of an animal (bird), showing a more pronounced effect than when exposed to these strains taken separately.

Проведенные исследования показали, что входящие в состав пробиотической композиции штаммы бактерий Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H не конкурируют друг с другом, а вступают в синергидные отношения, комплексно воздействуя на макроорганизм:The conducted studies showed that the bacterial strains Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H included in the probiotic composition do not compete with each other, but enter into a synergistic relationship, having a complex effect on the macroorganism:

проявляют антагонистическую активность против патогенных и условно-патогенных микроорганизмов за счет образования антибиотиков, бактериоцинов, лизоцима, а также вследствие конкуренции за места обитания и питательные вещества;exhibit antagonistic activity against pathogenic and opportunistic microorganisms due to the formation of antibiotics, bacteriocins, lysozyme, as well as due to competition for habitats and nutrients;

продуцируют аминокислоты, витамины и другие биологически активные вещества, потребляемые макроорганизмом;produce amino acids, vitamins and other biologically active substances consumed by the macroorganism;

оказывают иммуномодулирующее действие; осуществляют деструкцию токсинов, аллергенов.have an immunomodulatory effect; carry out the destruction of toxins and allergens.

Угнетая рост нежелательных микроорганизмов, пробиотическая композиция по изобретению создает условия для развития нормальной микрофлоры кишечника, которая играет чрезвычайно важную и многофункциональную роль в жизнедеятельности организма-хозяина: обеспечивает колонизационную резистентность и активизирует работу кишечника, участвуя в пищеварительной, синтетической, иммуномодулирующей, детоксикационной функциях. Все это позволяет достичь повышения неспецифической резистентности макроорганизма. Синтезируемые штаммами Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н протеолитические ферменты (включая липазы, лизоцим, амилазы и другие) способствуют расщеплению жиров, белков, клетчатки, углеводов, улучшают переваривание и усвоение пищи, что повышает биодоступность кормов и положительно отражается на приросте массы тела животных и птиц.By inhibiting the growth of undesirable microorganisms, the probiotic composition according to the invention creates conditions for the development of normal intestinal microflora, which plays an extremely important and multifunctional role in the life of the host organism: it provides colonization resistance and activates the intestines, participating in digestive, synthetic, immunomodulatory, and detoxification functions. All this makes it possible to achieve an increase in the nonspecific resistance of the macroorganism. Proteolytic enzymes synthesized by the strains of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H (including lipases, lysozyme, amylases and others) promote the breakdown of fats, proteins, fiber, carbohydrates, improve the digestion and absorption of food, which increases the bioavailability of feed and has a positive effect on the increase in body weight of animals and birds.

Наиболее удобной формой применения пробиотической композиции по изобретению является ее использование в виде кормовой или питьевой добавок, также она может применяться и самостоятельно, например, за 20-30 мин перед кормлением.The most convenient form of use of the probiotic composition according to the invention is its use in the form of feed or drinking additives; it can also be used independently, for example, 20-30 minutes before feeding.

Как уже указывалось, точное требуемое количество пробиотической композиции для введения может меняться от субъекта к субъекту в зависимости от вида животного (птицы), возраста, массы тела, общего состояния, тяжести заболевания, методики введения композиции, комбинированного лечения с другими препаратами и т.п. Как правило, количество пробиотической композиции выбирают из расчета 0,5-2 мл на 10 кг массы животного или птицы, более предпочтительно, из расчета 1 мл на 10 кг массы животного или птицы.As already indicated, the exact required amount of probiotic composition for administration may vary from subject to subject depending on the species of animal (bird), age, body weight, general condition, severity of the disease, method of administration of the composition, combination treatment with other drugs, etc. . Typically, the amount of probiotic composition is selected at the rate of 0.5-2 ml per 10 kg of animal or bird weight, more preferably at the rate of 1 ml per 10 kg of animal or bird weight.

Так, например, при применении в профилактических целях для крупного рогатого скота (КРС) иFor example, when used for preventive purposes for cattle (cattle) and

- 5 043409 свиней пробиотическую композицию по изобретению используют в дозе 200 г на тонну корма, при поражении поголовья микотоксинами - от 400 г до 2,5 кг на тонну корма.- 5 043409 pigs, the probiotic composition according to the invention is used in a dose of 200 g per ton of feed, when the livestock is affected by mycotoxins - from 400 g to 2.5 kg per ton of feed.

При применении в профилактических целях для птицы пробиотическую композицию по изобретению используют в дозе 1-1,5 кг на тонну корма. При повышенной контаминации корма микотоксинами до 5 кг на 1 тонну корма.When used for preventive purposes for poultry, the probiotic composition according to the invention is used in a dose of 1-1.5 kg per ton of feed. With increased contamination of feed with mycotoxins up to 5 kg per 1 ton of feed.

Пробиотическую композицию по изобретению, иммобилизованную на угольном энтеросорбенте, можно, например, использовать как отдельный лекарственный препарат для лечения отравлений и пищевых интоксикаций (например, при кормовых интоксикациях, отравлениях алкалоидами, солями тяжелых металлов, метеоризме, остром расширении желудка) 2-3 раза в день (с водой или в виде таблеток) в следующих дозах (на одно животное): крупный рогатый скот - 50-200 г; овцы - 10-50 г; свиньи - 5-10 г; куры - 0,2-1 г. При отравлении для промывания желудка можно, например, использовать 10-15% взвесь смеси в воде, состоящей из пробиотической композиции по изобретению, иммобилизованной на угольном энтеросорбенте (2 части), танина и магния окиси (по 1 части).The probiotic composition according to the invention, immobilized on a carbon enterosorbent, can, for example, be used as a separate drug for the treatment of poisoning and food intoxication (for example, for feed intoxication, poisoning with alkaloids, heavy metal salts, flatulence, acute dilatation of the stomach) 2-3 times a day day (with water or in tablet form) in the following doses (per animal): cattle - 50-200 g; sheep - 10-50 g; pigs - 5-10 g; chickens - 0.2-1 g. In case of poisoning, for gastric lavage, you can, for example, use a 10-15% suspension of the mixture in water, consisting of a probiotic composition according to the invention, immobilized on a carbon enterosorbent (2 parts), tannin and magnesium oxide (according to 1 part).

При применении пробиотической композиции по изобретению вне кормления, она может быть использована, например, в виде суспензии для перорального применения из расчета 0,5-2 мл суспензии на 10 кг животного (например, для КРС, овец, поросят, кур). Суспензию задают животному (птице) перорально перед кормлением. Такой пробиотический препарат также может применяться и вместе с кормом (орошение корма препаратом за 20-30 мин до кормления, чтобы бактерии успели раскрыться) или питьевой водой (препарат разводят в воде, предварительно взболтав флакон с препаратом).When using the probiotic composition according to the invention outside of feeding, it can be used, for example, in the form of a suspension for oral administration at the rate of 0.5-2 ml of suspension per 10 kg of animal (for example, for cattle, sheep, piglets, chickens). The suspension is given to the animal (bird) orally before feeding. Such a probiotic preparation can also be used together with food (irrigate the food with the drug 20-30 minutes before feeding, so that the bacteria have time to open up) or drinking water (the drug is diluted in water, after shaking the bottle with the drug).

В некоторых вариантах изобретения применение пробиотической композиции осуществляют в виде лиофилизированной микробной массы в дозе по 0,5-2 мл на 10 кг веса животного. Приготовление препарата к употреблению проводят следующим образом: небольшое количество корма засыпается в мешалку, туда же вливается предварительно разведенный в воде пробиотический препарат по изобретению и перемешивается несколько минут.In some embodiments of the invention, the use of a probiotic composition is carried out in the form of a lyophilized microbial mass in a dose of 0.5-2 ml per 10 kg of animal weight. The preparation for use is prepared as follows: a small amount of food is poured into a mixer, a probiotic preparation according to the invention, previously diluted in water, is poured into it and mixed for several minutes.

В некоторых других вариантах изобретения применение пробиотической композиции осуществляют в виде иммобилизата на угольном энтеросорбенте в дозе по 0,5-2 мг на 10 кг веса животного. Приготовление препарата к употреблению проводят следующим образом: небольшое количество корма засыпается в мешалку, туда же вливается предварительно разведенный в воде пробиотический препарат по изобретению и перемешивается несколько минут.In some other embodiments of the invention, the use of a probiotic composition is carried out in the form of an immobilizer on a carbon enterosorbent in a dose of 0.5-2 mg per 10 kg of animal weight. The preparation for use is prepared as follows: a small amount of food is poured into a mixer, a probiotic preparation according to the invention, previously diluted in water, is poured into it and mixed for several minutes.

Пробиотические композиции по изобретению могут применяться как в качестве монотерапии, так и вводиться субъекту, нуждающемуся в соответствующей терапии или профилактике, в комбинации с одним или более других терапевтических средств. Например, наряду с воздействием на основное заболевание и повышением резистентности организма при коррекции дисбиотических нарушений показано: нормализация моторной функции кишечника, применение энтеросорбентов, назначение антибактериальных препаратов, пре- и пробиотиков, синбиотиков. Пробиотические композиции по изобретению могут быть эффективно использованы как часть такой комплексной терапии. В некоторых неограничивающих вариантах с лечебной целью пробиотическую композицию предполагается применять два раза в сутки утром и вечером в течение 10-14 дней. С профилактической целью - один раз в день в течение 7-10 дней.The probiotic compositions of the invention can be used either as monotherapy or administered to a subject in need of appropriate therapy or prophylaxis, in combination with one or more other therapeutic agents. For example, along with the effect on the underlying disease and increasing the body’s resistance, the correction of dysbiotic disorders shows: normalization of intestinal motor function, the use of enterosorbents, the prescription of antibacterial drugs, pre- and probiotics, and synbiotics. The probiotic compositions of the invention can be effectively used as part of such complex therapy. In some non-limiting embodiments, for therapeutic purposes, the probiotic composition is intended to be administered twice daily, morning and evening, for 10-14 days. For preventive purposes - once a day for 7-10 days.

Возможность объективного проявления технического результата при использовании изобретения подтверждена достоверными данными, приведенными в примерах, содержащих сведения экспериментального характера, полученные в процессе проведения исследований по методикам, принятым в данной области.The possibility of objective manifestation of a technical result when using the invention is confirmed by reliable data given in examples containing experimental information obtained in the process of conducting research using methods accepted in this field.

Следует понимать, что приведенные в материалах заявки примеры не являются ограничивающими и приведены только для иллюстрации настоящего изобретения.It should be understood that the examples given in the application materials are not limiting and are provided only to illustrate the present invention.

Пример 1. Изучение пробиотических свойств.Example 1. Study of probiotic properties.

Проведена предварительная оценка перспективности пробиотической композиции (ПК) по изобретению. Изучение пробиотических свойств ПК при пероральном введении проводили на белых мышах с начальной массой тела 16-18 г. В исследовании использовали животных, разброс по массе которых не превышал 10%. Лабораторных мышей делили на группы по 5 животных в каждой группе соответственно.A preliminary assessment of the prospects of the probiotic composition (PC) according to the invention was carried out. The study of the probiotic properties of PC when administered orally was carried out on white mice with an initial body weight of 16-18 g. The study used animals whose weight variation did not exceed 10%. Laboratory mice were divided into groups of 5 animals in each group, respectively.

Объекты исследований.Objects of research.

Пробиотическая композиция штаммов B. subtilis 1719 и B. subtilis 3H в виде суспензии.Probiotic composition of strains B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H in the form of a suspension.

Пробиотическая композиция штаммов B. subtilis 1719 и B. subtilis 3H в виде лиофилизата.Probiotic composition of strains B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H in the form of lyophilisate.

Штаммы B. subtilis 1719 и B. subtilis 3H иммобилизованные на угольном энтеросорбенте.Strains B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H immobilized on carbon enterosorbent.

Количество каждого из штаммов в ПК при проведении исследования 1х108 КОЕ/мл.The amount of each strain in the PC during the study was 1x10 8 CFU/ml.

В качестве объектов сравнения при анализе воздействия ПК на микрофлору мышей использовались индивидуальные добавки: штаммы B. subtilis 1719 и B. subtilis 3H, которые вводились в дозе 1х108 КОЕ/мл каждого из штаммов.Individual supplements were used as comparison objects when analyzing the effects of PC on the microflora of mice: strains B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H, which were administered at a dose of 1x10 8 CFU/ml of each strain.

Дизайн исследования.Study design.

Дизайн исследования предполагает использование экспериментальных групп животных, получающих пробиотические препараты, а также группу контроля, которая не получала пробиотических добавок.The study design involves the use of experimental groups of animals receiving probiotic supplements, as well as a control group that did not receive probiotic supplements.

Лабораторных мышей делили на группы по 5 животных в каждой группе соответственно. ВведениеLaboratory mice were divided into groups of 5 animals in each group, respectively. Introduction

- 6 043409 соответствующих доз кормовых добавок осуществляли перорально в течение 14 суток на фоне экспериментального дисбиоза. Экспериментальный дисбиоз вызывали введением опытным мышам антибиотика (доксициклина гидрохлорида) в количестве 0,01% от массы тела в течение 7 дней.- 6 043409 corresponding doses of feed additives were administered orally for 14 days against the background of experimental dysbiosis. Experimental dysbiosis was caused by administering an antibiotic (doxycycline hydrochloride) to experimental mice in an amount of 0.01% of body weight for 7 days.

Таблица 1Table 1

Сравнительная оценка микрофлоры опытных мышейComparative assessment of the microflora of experimental mice

Микроорганизмы Microorganisms Количество микроорганизмов, КОЕ/г фекалий Number of microorganisms, CFU/g feces до дисбиоза before dysbiosis мыши с дисбиозом mice with dysbiosis E.colilac+ E. colilac + 105-106 10 5 -10 6 109 10 9 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. менее 103 less than 10 3 не обнаружены not detected Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. 1011 10 11 менее 103 less than 10 3

Анализ просветной микрофлоры проводили по 3-м пробам асептически взятых фекальных масс от 5 мышей через 7 и 14 дней эксперимента. Бактериологические исследования проводили с использованием соответствующих стандартных дифференциально-диагностических сред (агар Клиглера, кровяной агар, среда Кларка и т.д.).Analysis of luminal microflora was carried out using 3 samples of aseptically taken fecal matter from 5 mice after 7 and 14 days of the experiment. Bacteriological studies were carried out using appropriate standard differential diagnostic media (Kligler agar, blood agar, Clarke's medium, etc.).

На протяжении всего эксперимента через каждые 7 дней осуществляли контроль массы тела опытных животных для подтверждения положительного влияния ПК на прирост массы тела.Throughout the experiment, the body weight of the experimental animals was monitored every 7 days to confirm the positive effect of PC on body weight gain.

Таблица 2table 2

Сравнительное влияние ПК и индивидуальных добавок на микрофлору мышей на фоне экспериментального дисбиозаComparative effects of PC and individual supplements on the microflora of mice against the background of experimental dysbiosis

Микроорганизмы Microorganisms Содержание микроорганизмов в пробах, КОЕ/г фекалий на фоне экспериментальных препаратов Content of microorganisms in samples, CFU/g feces against the background of experimental preparations Контроль Control В. subtil is 1719 V. subtil is 1719 В. subtilis ЗН B. subtilis ZN Суспензия Suspension Лиофилизат Lyophilisate Энтеросорбент Enterosorbent контрольное время - 7 суток control time - 7 days Е. colilac* E. colilac* 109 10 9 107 10 7 109 10 9 106 10 6 106 10 6 106 10 6 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. менее 103 less than 10 3 менее 103 less than 10 3 не обнаружены Not discovered менее 103 less than 10 3 103 10 3 104 10 4 Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. менее 103 less than 10 3 105 10 5 103 10 3 1011 10 11 1011 10 11 КГ0 KG 0 контрольное время - 14 суток control time - 14 days E.coli lac* E. coli lac* 109 10 9 107 10 7 108 10 8 105 10 5 105 10 5 104 10 4 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. менее 103 less than 10 3 менее 103 less than 10 3 не обнаружены Not discovered 104 10 4 105 10 5 10е 10th Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. менее 103 less than 10 3 108 10 8 106 10 6 1011 10 11 ю11 Yu 11 КГ0 KG 0

Таблица 3Table 3

Динамика массы тела мышей в период введения экспериментальных добавокDynamics of body weight of mice during the period of introduction of experimental additives

Кормовая добавка Feed additive Масса тела, г Body weight, g Исходная Original 7 дней 7 days 14 дней 14 days 21 день 21 day 28 дней 28 days Контроль Control 16,8 16.8 17,3 17.3 17,8 17.8 18,2 18.2 18,6 18.6 Bacillus subtilis 1719 Bacillus subtilis 1719 16,5 16.5 17,4 17.4 18,3 18.3 19,1 19.1 20,0 20.0 Bacillus subtilis ЗН Bacillus subtilis ZN 17,1 17.1 17,8 17.8 18,3 18.3 18,9 18.9 19,5 19.5 ПК (суспензия) PC (suspension) 16,9 16.9 17,5 17.5 18,7 18.7 19,9 19.9 21,3 21.3 ПК (лиофилизат) PC (lyophilisate) 16,9 16.9 17,6 17.6 18,2 18.2 19,3 19.3 21,2 21.2 ПК (угольный энтеросорбент) PC (carbon enterosorbent) 16,7 16.7 17,4 17.4 18,3 18.3 19,5 19.5 21,3 21.3

- 7 043409- 7 043409

Таблица 4Table 4

Прирост массы тела опытных животныхBody weight gain in experimental animals

Кормовая добавка Feed additive Прирост массы тела за 28 дней, % Body weight gain over 28 days, % Контроль Control 10,8 10.8 Bacillus subtilis 1719 Bacillus subtilis 1719 21,2 21.2 Bacillus subtilis ЗН Bacillus subtilis ZN 14,0 14.0 Π П (суспензия) Π P (suspension) 26,0 26.0 ΠΠ (лиофилизат) ΠΠ (lyophilisate) 26,6 26.6 ΠΠ (угольный энтеросорбент) ΠΠ (carbon enterosorbent) 27,5 27.5

Исследования показали, что у животных опытных и контрольных групп на протяжении всего периода наблюдения не заболело и не пало ни одной лабораторной мыши. Кроме того, не выявлено отклонений в их физиологическом и функциональном состоянии. Аппетит, водопотребление были сохранены.Research has shown that throughout the entire observation period, not a single laboratory mouse fell ill or died in the animals of the experimental and control groups. In addition, no deviations in their physiological and functional state were identified. Appetite and water consumption were preserved.

Изучение нормальной микрофлоры интактных мышей показало наличие Escherichia coli, Bifidobacterium bifidum и Lactobacillus acidophilus в количестве 105-106 КОЕ/см3, менее 103 и 1011 КОЕ/см3 соответственно. После введения антибиотика в течение 7 дней у мышей наблюдали гибель нормальной микрофлоры и контаминацию кишечника условно-патогенными микроорганизмами. Содержание в фекалиях E.coli повысилось до 109 КОЕ/см3, В. bifidum не обнаруживали совсем, а количество L acidophilus снизилось до 102 КОЕ/см3г (табл. 1).A study of the normal microflora of intact mice showed the presence of Escherichia coli, Bifidobacterium bifidum and Lactobacillus acidophilus in an amount of 105-10 6 CFU/cm 3 , less than 10 3 and 10 11 CFU/cm 3 , respectively. After administration of the antibiotic for 7 days, the death of normal microflora and contamination of the intestines with opportunistic microorganisms was observed in mice. The content of E. coli in feces increased to 10 9 CFU/cm 3 , B. bifidum was not detected at all, and the amount of L acidophilus decreased to 10 2 CFU/cm 3 g (Table 1).

Результаты исследования микрофлоры мышей после коррекции экспериментального дисбиоза с помощью ПК и препаратов сравнения представлены в табл. 2. Применение ПК во всех испытанных формах приводило к увеличению количества бифидобактерий и молочнокислых бактерий уже на 7 сутки после введения, в то время как предложенные для сравнения индивидуальные компоненты не показывали такого действия. Таким образом, выявлены существенная бифидогенная и лактогенная активности ПК. Введение пробиотической композиции по изобретению в условиях индуцированного дисбиоза, способствующее увеличению количества бифидо- и лактобактерий, свидетельствует о ее выраженном пробиотическом действии.The results of the study of the microflora of mice after correction of experimental dysbiosis using PC and comparison drugs are presented in Table. 2. The use of PC in all tested forms led to an increase in the number of bifidobacteria and lactic acid bacteria already on the 7th day after administration, while the individual components proposed for comparison did not show such an effect. Thus, significant bifidogenic and lactogenic activities of PC were revealed. The introduction of the probiotic composition according to the invention under conditions of induced dysbiosis, which promotes an increase in the number of bifidobacteria and lactobacilli, indicates its pronounced probiotic effect.

В связи с тем, что при использовании пробиотической композиции по изобретению получен результат, по численным показателям превышающий результаты (табл. 3 и 4), полученные при испытании штаммов B. subtilis 1719 и B. subtilis 3H по отдельности, это свидетельствует о наличии синергетического эффекта, за счет которого достигается наиболее высокая бифидогенная и лактогенная активности, что способствует повышению иммунитета, улучшению обмена веществ, лучшей усвояемости необходимых организму витаминов и, как следствие, увеличению прироста массы тела в короткие сроки.Due to the fact that when using the probiotic composition according to the invention, a result was obtained that was numerically superior to the results (Tables 3 and 4) obtained when testing the B. subtilis 1719 and B. subtilis 3H strains separately, this indicates the presence of a synergistic effect , due to which the highest bifidogenic and lactogenic activity is achieved, which helps to increase immunity, improve metabolism, better absorption of vitamins necessary for the body and, as a result, increase body weight gain in a short time.

Пример 2. Определение эффективной дозы пробиотической композиции.Example 2. Determination of the effective dose of the probiotic composition.

Изучение эффективной дозы на основе штаммов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н при пероральном введении проводили на белых мышах с начальной массой тела 18-20 г. В исследовании использовали животных, разброс по массе которых не превышал 10%. Лабораторных мышей делили на группы по 5 животных в каждой группе соответственно.The study of the effective dose based on the strains of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H when administered orally was carried out on white mice with an initial body weight of 18-20 g. The study used animals whose weight range did not exceed 10%. Laboratory mice were divided into groups of 5 animals in each group, respectively.

Дизайн исследования.Study design.

Использовались экспериментальные группы животных, получавших пробиотические композиции в различных концентрациях, вводимых перорально, а также группа контроля. В эксперименте использовали один вид животных: белые беспородные мыши. Мыши опытных групп получали пробиотическую композицию в виде суспензии, содержащую указанное количество каждого из штаммов 1 раз день 0,01 мл/100 г массы животного в следующих дозах: 1 х 107, 1х108, 1,5 х108 и 1 х 109 КОЕ/мл. Для удобства введения необходимое количество композиции доводили до объема 0,5 мл физиологическим раствором. Мыши контрольной группы не получали никаких препаратов.Experimental groups of animals were used that received probiotic compositions in various concentrations administered orally, as well as a control group. One type of animal was used in the experiment: white outbred mice. Mice in the experimental groups received a probiotic composition in the form of a suspension containing the specified amount of each strain once a day, 0.01 ml/100 g of animal weight in the following doses: 1 x 10 7 , 1 x 10 8 , 1.5 x 10 8 and 1 x 10 9 CFU/ml. For ease of administration, the required amount of the composition was adjusted to a volume of 0.5 ml with physiological solution. Mice in the control group did not receive any drugs.

Введение пробиотической композиции осуществляли после 24-часовой голодной выдержки перорально в течение 14 суток на фоне экспериментального дисбиоза, вызванного введением опытным мышам доксициклина гидрохлорида в количестве 0,01% от массы тела в течение 7 дней.The administration of the probiotic composition was carried out after a 24-hour fast orally for 14 days against the background of experimental dysbiosis caused by the administration of doxycycline hydrochloride to experimental mice in an amount of 0.01% of body weight for 7 days.

Анализ просветной микрофлоры проводили по трем пробам асептически взятых фекальных масс от 5 мышей через 7 и 14 дней эксперимента. Бактериологические исследования проводили с использованием соответствующих стандартных дифференциально-диагностических сред (агар Клиглера, кровяной агар, среда Кларка и т.д.).Analysis of luminal microflora was carried out on three samples of aseptically taken fecal matter from 5 mice after 7 and 14 days of the experiment. Bacteriological studies were carried out using appropriate standard differential diagnostic media (Kligler agar, blood agar, Clarke's medium, etc.).

Результаты исследования.Research results.

Установлено, что после введения антибиотика в течение 7 дней у мышей наблюдалась антибиотикоассоциированная диарея. Анализ просветной микрофлоры фекальных масс показал ухудшение состояния нормальной микрофлоры животных и контаминацию кишечника условно-патогенными микроорганизмами. Данные анализа микрофлоры представлены в табл. 5.It was found that after administration of the antibiotic for 7 days, antibiotic-associated diarrhea was observed in mice. Analysis of the luminal microflora of fecal matter showed a deterioration in the state of the normal microflora of animals and contamination of the intestines with opportunistic microorganisms. Microflora analysis data are presented in table. 5.

- 8 043409- 8 043409

Таблица 5Table 5

Сравнительная оценка микрофлоры опытных мышейComparative assessment of the microflora of experimental mice

Микроорганизмы Microorganisms Количество микроорганизмов, КОЕ/г фекалий Number of microorganisms, CFU/g feces до дисбиоза before dysbiosis мыши с дисбиозом mice with dysbiosis E.coli lac E. coli lac 105-106 10 5 -10 6 ю9 u 9 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. менее 103 less than 10 3 не обнаружены not detected Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. 1010 10 10 103 10 3

Результаты исследования микрофлоры мышей после коррекции экспериментального дисбиоза представлены в табл. 6. Применение пробиотической композиции во всех испытанных дозах приводило к увеличению количества бифидобактерий и молочнокислых бактерий уже на 7 сутки после введения. Результаты при введении препаратов с содержанием микроорганизмов 1х107 КОЕ/мл не удовлетворяют показателям нормы, при содержании микроорганизмов 1,5х108 и 1х109 КОЕ/мл данные сопоставимы с 1х108 КОЕ/мл. При сравнении предлагаемых дозировок можно сделать вывод о том, что оптимальным количеством для проявления должного эффекта пробиотической композиции необходимым и достаточным является содержание микроорганизмов 1-1,5х108 КОЕ/мл.The results of the study of the microflora of mice after correction of experimental dysbiosis are presented in table. 6. The use of the probiotic composition in all tested doses led to an increase in the number of bifidobacteria and lactic acid bacteria already on the 7th day after administration. The results when administering drugs with a microorganism content of 1x10 7 CFU/ml do not meet the norm; with a microorganism content of 1.5x10 8 and 1x10 9 CFU/ml, the data are comparable to 1x10 8 CFU/ml. When comparing the proposed dosages, we can conclude that the optimal amount for the manifestation of the proper effect of the probiotic composition is necessary and sufficient, the content of microorganisms being 1-1.5x10 8 CFU/ml.

Таблица 6Table 6

Сравнительное влияние различных дозировок пробиотической композиции на микрофлору мышей при экспериментальном дисбиозеComparative effect of different dosages of probiotic composition on the microflora of mice with experimental dysbiosis

Микроорганизмы Microorganisms Содержание микроорганизмов в пробах Content of microorganisms in samples Дозировка, КОЕ/мл Dosage, CFU/ml Контроль Control 1*107 1*10 7 1*108 1*10 8 1,5*10® 1.5*10® 1*1 о9 1*1 about 9 контрольное время - 7 суток control time - 7 days E.coli 1ас+ E. coli 1ac+ 109 10 9 108 10 8 106 10 6 10е 10th ю5 u 5 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. не обнаружены not detected 101 10 1 103 10 3 103 10 3 103 10 3 Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. 103 10 3 105 10 5 1011 10 11 ю10 10 1011 10 11 контрольное время - 14 суток control time - 14 days E.coli lac+ E. coli lac+ 109 10 9 107 10 7 ю5 u 5 ю5 u 5 ю5 u 5 Bifidobacterium spp. Bifidobacterium spp. не обнаружены not detected 102 10 2 104 10 4 ю5 u 5 ю5 u 5 Lactobacillus spp. Lactobacillus spp. 102 10 2 109 10 9 ю11 Yu 11 ю10 10 1011 10 11

Исследования показали, что оптимальным количеством для проявления должного эффекта пробиотической композиции необходимым и достаточным является содержание микроорганизмов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H в композиции 1-1,5х108 КОЕ/мл.Studies have shown that the optimal amount for the manifestation of the proper effect of a probiotic composition is necessary and sufficient to contain the microorganisms Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H in the composition 1-1.5x10 8 CFU/ml.

Пример 3. Характеристика антагонистической активности.Example 3. Characteristics of antagonistic activity.

В ходе проведенных исследований были изучены морфологические, физиолого-биохимические, генетические и другие биологические свойства различных штаммов Bacillus subtilis, а также их сочетаний в различных комбинациях.In the course of the studies, the morphological, physiological-biochemical, genetic and other biological properties of various strains of Bacillus subtilis, as well as their combinations in various combinations, were studied.

Важнейшим критерием отбора пробиотических штаммов является изучение их антагонистической активности по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам (УПМ), которая обеспечивает колонизационную резистентность желудочно-кишечного тракта. Цель исследования - охарактеризовать и сравнить антагонистическую активность различных сочетаний штаммов Bacillus subtilis, часто используемых в качестве пробиотиков, и предлагаемой пробиотической композиции.The most important criterion for the selection of probiotic strains is the study of their antagonistic activity towards pathogenic and opportunistic microorganisms (OPM), which ensures colonization resistance of the gastrointestinal tract. The purpose of the study was to characterize and compare the antagonistic activity of various combinations of Bacillus subtilis strains often used as probiotics and the proposed probiotic composition.

Объекты исследований.Objects of research.

Штамм: Bacillus subtilis 1719, Коллекция Государственной научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича, № 277.Strain: Bacillus subtilis 1719, Collection of the State Research Institute for Standardization and Control of Medical Biological Preparations named after. L.A. Tarasevich, No. 277.

Штамм: Bacillus subtilis 3H, Государственная коллекция патогенных микроорганизмов, № 248.Strain: Bacillus subtilis 3H, State collection of pathogenic microorganisms, No. 248.

Штамм: Bacillus subtilis 534, Всероссийская коллекция микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН; ВКМ № 1666 Д.Strain: Bacillus subtilis 534, All-Russian collection of microorganisms of the Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms named after. G.K. Scriabin RAS; VKM No. 1666 D.

Штамм: Bacillus subtilis 12B, Споровит, Коллекция чистых культур микроорганизмов ВГНКИ.Strain: Bacillus subtilis 12B, Sporovit, Collection of pure cultures of microorganisms VGNKI.

Ветеринарная пробиотическая композиция на основе штаммов Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H по изобретению.Veterinary probiotic composition based on Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H strains according to the invention.

Штаммы тест-культур из Государственной коллекции патогенных микроорганизмов ФГБУ НЦЭСМП, используемые для определения антагонистической активности: Staphylococcus aureus Филиппов, Shigella Sonnei 170, Proteus mirabilis 24a, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa 9022, Staphylococcus aureus 29213, Candida albicans 690.Test culture strains from the State Collection of Pathogenic Microorganisms of the Federal State Budgetary Institution NTsESMP used to determine antagonistic activity: Staphylococcus aureus Filippov, Shigella Sonnei 170, Proteus mirabilis 24a, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa 9022, Staphylococcus aureus 29213, Candida albicans 690.

--

Claims (10)

Дизайн исследования.Study design. Исследования 20-часовых бактериальных культуральных жидкостей штаммов осуществляли методом отсроченного антагонизма. Исследуемые образцы содержали 1х108 КОЕ/мл каждого из штаммов. Культуру штаммов высевали петлей по диагонали в центре чашки Петри с агаризованной мясопептонной средой. Посевы инкубировали в термостате при 37°С в течение 24 ч. Затем к выросшей культуре подсевали штрихом тест-микроорганизмы (500-миллионные суспензии суточных культур в физиологическом растворе). Учет результатов проводили через 18 ч инкубирования при 37°С по величине зон отсутствия роста тест-культур. Контролем роста тест-культур служило параллельное выращивание их на чашках с агаризованной средой без культуры исследуемого штамма.Studies of 20-hour bacterial culture liquids of strains were carried out using the delayed antagonism method. The studied samples contained 1x10 8 CFU/ml of each strain. The strain culture was sown in a loop diagonally in the center of a Petri dish with agarized meat-peptone medium. The crops were incubated in a thermostat at 37°C for 24 hours. Then test microorganisms (500 million suspensions of daily cultures in physiological solution) were streak-sown onto the grown culture. The results were recorded after 18 hours of incubation at 37°C according to the size of the zones of no growth of test cultures. The growth of the test cultures was controlled by their parallel cultivation on plates with an agar medium without a culture of the test strain. Результаты.Results. Полученные данные результатов испытания представлены в табл. 7.The obtained test results are presented in table. 7. Таблица 7Table 7 Антагонистическая активность комбинаций штаммов бактерий B. subtilisAntagonistic activity of combinations of B. subtilis strains Тест-штамм Задержка роста тест-культур, мм (М±т)Test strain Growth retardation of test cultures, mm (M±t) В. subtilis зн + в. В. subtilis ЗН + В. В. Subtilis 1719 + В. В. Subtilis 1719 +В. Subtilis 12В В. subtilis ЗН В. Subtilis 1719 В. Subtilis 1719 + В.V. subtilis zn + v. V. subtilis ZN + V. IN. Subtilis 1719 + V. B. Subtilis 1719 +B. Subtilis 12V B. subtilis ZN B. subtilis 1719 B. subtilis 1719 + IN. Subtilis 534 Subtilis 12В subtilis 534 subtilis ЗНSubtilis 534 Subtilis 12V subtilis 534 subtilis ZN S. aureus «Филиппов» 19±2,6 18+ 2,0 20 ± 1,2 18 ± 1,1 20±0,9 22±1,8 24± 1,6S. aureus "Filippov" 19±2.6 18+ 2.0 20 ± 1.2 18 ± 1.1 20±0.9 22±1.8 24± 1.6 S. sonnei 170 23± 1,6 20± 1,2 22 ± 1,7 20 + 1,8 22±1,3 24±2,2 26± 0,9S. sonnei 170 23± 1.6 20± 1.2 22 ± 1.7 20 + 1.8 22±1.3 24±2.2 26±0.9 Р. mirabilis 24а 17± 1,9 17± 1,9 18 ± 1,5 19 ±2,5 18±2,0 19±2,0 22± 2,3R. mirabilis 24a 17± 1.9 17± 1.9 18 ± 1.5 19 ±2.5 18±2.0 19±2.0 22± 2.3 Е. соЛ АТСС 25922 14±1,0 13±2,1 18 ± 1,6 22 ± 1,2 15±2,1 24±0,7 26± 1,5E. soL ATCC 25922 14±1.0 13±2.1 18 ± 1.6 22 ± 1.2 15±2.1 24±0.7 26± 1.5 Р. aeruginosa 9022 16 ± 1,8 15 ± 1,7 18 ± 1,5 20 ±1,9 17±3,3 23±2,8 27± 1,8R. aeruginosa 9022 16 ± 1.8 15 ± 1.7 18 ± 1.5 20 ±1.9 17±3.3 23±2.8 27± 1.8 S. aureus 29213 15± 1,6 18±2,2 19 ± 1,5 19 ±3,0 16±1,5 21±0,8 22± 2,1S. aureus 29213 15± 1.6 18±2.2 19 ± 1.5 19 ±3.0 16±1.5 21±0.8 22± 2.1 С. albicans 690 29±3,1 30±2,0 28+2,2 29±1,7 31±2,8 29±1,1 30±3,8C. albicans 690 29±3.1 30±2.0 28+2.2 29±1.7 31±2.8 29±1.1 30±3.8 Как видно из табл. 7, различные комбинации пробиотических штаммов бактерий рода Bacillus subtilis проявляют антагонистическую активность к широкому классу условно-патогенных микроорганизмов. Наилучшие показатели зон торможения роста выявлены у комбинации Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3H, что свидетельствует о более выраженном их синергетическом действии.As can be seen from table. 7, various combinations of probiotic strains of bacteria of the genus Bacillus subtilis exhibit antagonistic activity against a wide class of opportunistic microorganisms. The best indicators of growth inhibition zones were found in the combination of Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H, which indicates their more pronounced synergistic effect. Таким образом, пробиотическая композиция по изобретению обладает ингибирующим действием по отношению к патогенным и условно-патогенным микроорганизмам, повышает биодоступность кормов, не подавляя при этом микрофлору кишечника, активизирует работу кишечника, повышает устойчивость микрофлоры к негативным микробиологическим воздействиям за счет активации функции иммунной системы и литического (детоксицирующего) действия синтезируемых ферментов.Thus, the probiotic composition according to the invention has an inhibitory effect against pathogenic and opportunistic microorganisms, increases the bioavailability of feed without suppressing the intestinal microflora, activates intestinal function, increases the resistance of microflora to negative microbiological influences by activating the function of the immune system and lytic (detoxifying) action of synthesized enzymes. Применение пробиотической композиции по изобретению позволит существенно уменьшить расходы на лечение заболеваний у животных и птицы, повысить их продуктивность.The use of the probiotic composition according to the invention will significantly reduce the cost of treating diseases in animals and poultry and increase their productivity. Несмотря на то что изобретение описано со ссылкой на раскрываемые варианты воплощения, для специалистов в данной области должно быть очевидно, что конкретные подробно описанные эксперименты приведены лишь в целях иллюстрирования настоящего изобретения и их не следует рассматривать как каким-либо образом ограничивающие объем изобретения. Должно быть понятно, что возможно осуществление различных модификаций без отступления от сути настоящего изобретения.Although the invention has been described with reference to the disclosed embodiments, it will be apparent to those skilled in the art that the specific experiments detailed are provided for purposes of illustrating the present invention only and should not be construed as limiting the scope of the invention in any way. It should be understood that various modifications can be made without departing from the spirit of the present invention. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯCLAIM 1. Пробиотическая композиция, включающая смесь биомассы живых и споровых форм бактерий штаммов Bacillus subtilis 1719 в титре 1-1,5х108 КОЕ/мл и Bacillus subtilis 3H в титре 1-1,5 х108 КОЕ/мл.1. Probiotic composition, including a mixture of biomass of live and spore forms of bacteria of the strains Bacillus subtilis 1719 in a titer of 1-1.5x10 8 CFU/ml and Bacillus subtilis 3H in a titer of 1-1.5 x10 8 CFU/ml. 2. Пробиотическая композиция по п.1, дополнительно включающая фармакологически приемлемый носитель, растворитель и/или наполнитель.2. The probiotic composition according to claim 1, further comprising a pharmacologically acceptable carrier, solvent and/or excipient. 3. Пробиотическая композиция по п.1 в форме суспензии для перорального применения.3. Probiotic composition according to claim 1 in the form of a suspension for oral use. 4. Пробиотическая композиция по п.1 в форме лиофилизата.4. Probiotic composition according to claim 1 in the form of a lyophilisate. 5. Пробиотическая композиция по п.1, в которой бактерии Bacillus subtilis 1719 и Bacillus subtilis 3Н иммобилизованы на угольном энтеросорбенте.5. Probiotic composition according to claim 1, in which the bacteria Bacillus subtilis 1719 and Bacillus subtilis 3H are immobilized on a carbon enterosorbent. 6. Способ профилактики и/или лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта в ветеринарии, включающий применение пробиотической композиции по любому из пп.1-5.6. A method for the prevention and/or treatment of diseases of the gastrointestinal tract in veterinary medicine, including the use of a probiotic composition according to any of claims 1-5. 7. Способ по п.6, в котором пробиотическую композицию вводят перорально перед кормлением или вместе с кормом или питьевой водой из расчета 0,5-2 мл на 10 кг массы животного или птицы.7. The method according to claim 6, in which the probiotic composition is administered orally before feeding or along with food or drinking water at the rate of 0.5-2 ml per 10 kg of animal or bird weight. - 10 043409- 10 043409 8. Способ по п.7, в котором пробиотическую композицию вводят из расчета 1 мл на 10 кг массы животного или птицы.8. The method according to claim 7, in which the probiotic composition is administered at the rate of 1 ml per 10 kg of animal or poultry weight. 9. Кормовая добавка, включающая пробиотическую композицию по любому из пп.1-5.9. Feed additive, including a probiotic composition according to any one of claims 1-5. 10. Кормовая добавка по п.9, дополнительно включающая растительные, минеральные, технологические и/или балансирующие добавки.10. Feed additive according to claim 9, additionally including plant, mineral, technological and/or balancing additives. Евразийская патентная организация, ЕАПВEurasian Patent Organization, EAPO Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2Russia, 109012, Moscow, Maly Cherkassky lane, 2 --
EA202000310 2020-09-28 VETERINARY PROBIOTIC PRODUCT EA043409B1 (en)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EA043409B1 true EA043409B1 (en) 2023-05-23

Family

ID=

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110964655B (en) Bifidobacterium lactis BL-99 and application thereof
TWI687224B (en) Preventive or therapeutic agent for ruminant mastitis
US11998576B2 (en) Direct-fed microbials
JP2020508696A (en) Microbial cells, methods for producing them, and uses thereof
RU2708161C1 (en) Fodder complex biologically active additive for animals and birds
RU2652836C1 (en) Fodder additive with probiotic activity for farm animals, birds, horses and fish
US20220295828A1 (en) Methods of inhibition with microbial strains and antibiotics
Aleksandrova et al. Intestinal microbiocenosis and fodder digestibility in broiler chickens when using probiotics
RU2723411C2 (en) Bacillus cereus strain rcam04578, a biologically active compounds producer having probiotic properties
US8414878B2 (en) Irilis biopreparation based on bacillus-strain bacteria, bacillus subtilis and bacillus licheniformis contained therein
EA043409B1 (en) VETERINARY PROBIOTIC PRODUCT
RU2538116C2 (en) Acellular probiotic based biologically active complex, fodder composition containing such complex, method for farm animals and poultry feeding
RU2063755C1 (en) Dry probiotic for ruminant animals
RU2819889C1 (en) Method of producing fodder composition with functional properties for poultry farming
RU2808208C1 (en) Feed additive for farm animals and birds
US20230321162A1 (en) Microbial strains and antibiotics
US20230346854A1 (en) Microbials and antibiotics
GAVRILOVA et al. The effectiveness of dry probiotic in the treatment and prevention of salmonellosis
Rudoy et al. Review of studies on the use of synbiotic feed additives in compound feeds
RU2221582C2 (en) Dysbacteriosis treatment agent and a method for preparation thereof
EA043167B1 (en) SYNBIOTIC DRUG FOR VETERINARY USE
RU2236147C2 (en) Method for feeding in farm animals
KR20230062277A (en) Novel strain of Mitsuokella multacida producing carbohydrase and use thereof
JP2000325027A (en) Gain-promoter for animal
WO2023009705A1 (en) Methods of treating pododermatitis