EA040603B1

EA040603B1 - ТРИАЗОЛ-КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИПЕРАЗИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В КАЧЕСТВЕ МОДУЛЯТОРОВ mGLU5 РЕЦЕПТОРОВ

Info

Publication number: EA040603B1
Application number: EA202091787
Authority: EA
Inventors: Давиде Грациани; Карло Рива; Серджо Менегон; Валерио Таццари
Original assignee: Рекордати Индустрия Кимика Э Фармасеутика С.П.А
Priority date: 2018-01-26
Filing date: 2019-01-17
Publication date: 2022-07-01

Description

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к триазол-конденсированным пиперазиновым производным и их применению в качестве аллостерических модуляторов активности mGlu₅ рецептора, фармацевтическим композициям, включающим такие соединения, и способам лечения с их использованием. Соединения по изобретению можно использовать для лечения и/или профилактики неврологических и психических расстройств, связанных с нарушением глутаматергической передачи сигналов, таких как шизофрения или снижение когнитивных функций, деменция или когнитивные нарушения или других патологий, которые могут быть прямо или косвенно связаны с нарушением глутаматергической передачи сигналов, т.е. расстройств, которые лечатся положительной аллостерической модуляцией (PAM) или отрицательной аллостерической модуляцией (NAM) mGluR5.

Глутамат является основной возбуждающей аминокислотой в центральной нервной системе млекопитающих, проявляющей свои эффекты как на ионотропные, так и на метаботропные глутаматные рецепторы. Было показано, что нейротрансмиссия, опосредованная глутаматом, является критической во многих физиологических процессах, таких как синаптическая пластичность, долговременная потенциация, связанная с обучением памятью, а также сенсорное восприятие (Riedel et al., Behav. Brain Res. (2003), Vol. 140, p. 1-47, Rose et al. J. Neurosci., November 8, 2006, 26(45):11582-11587). Кроме того, было продемонстрировано, что дисбаланс нейротрансмиссии глутамата играет критическую роль в патофизиологии различных неврологических и психических заболеваний.

Возбуждающая нейротрансмиссия глутамата опосредуется по меньшей мере двумя различными классами рецепторов: ионотропными глутаматными рецепторами, такими как рецептор N-метил-Dаспартата (NMDA), рецептор а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (AMPA) или каинитовый рецептор; и метаботропными глутаматными рецепторами (mGluR). Ионотропные рецепторы представляют собой лиганд-управляемые ионные каналы и считаются ответственными за регулирование быстрой нейрональной передачи между двумя нейронами. Метаботропные глутаматные рецепторы представляют собой сопряженные с G-белком рецепторы (GPCR), которые предположительно опосредуют не только синаптическую передачу, но также регулируют степень высвобождения нейротрансмиттеров, а также активацию постсинаптических рецепторов. Метаботропные глутаматные рецепторы (mGluRs) принадлежат к семейству C (также известному как семейство 3) сопряженных с G-белком рецепторов (GPCR). Они характеризуются семью α-спиральными трансмембранными (7TM) доменами, соединенными через богатую цистеином область с большим двудольным внеклеточным аминоконцевым доменом, с которым связывается глутаматный лиганд. Семейство mGluR включает восемь известных типов рецепторов mGluR (обозначенных как mGluR1-mGluR₈). Некоторые типы рецепторов экспрессируются как специфические варианты сплайсинга, например mGluR_5a и mGluR_5b или mGluR_8a, mGluR_8b и mGluR_8c. Это суперсемейство далее подразделяется на три группы (группы I, II и III) на основе гомологии аминокислот, а также внутриклеточных сигнальных каскадов, которые они регулируют (Schoepp et al., Neuropharma, (1999), Vol. 38, p. 1431-1476), и фармакологического профиля. Рецепторы группы I (mGluR1 и mGluR₅) связываются с Ga_q, процесс, который приводит к стимуляции фосфолипазы C и увеличению уровней внутриклеточного кальция и инозитолфосфата. Рецепторы группы II (mGluR₂ и mGluR₃) и рецепторы группы III (mGluR₄, mGluR₆, mGluR₇ и mGluR₈) связываются с Gai, что приводит к снижению уровней циклического аденозинмонофосфата (cAMP). В то время как рецепторы группы I преимущественно расположены постсинаптически и обычно усиливают постсинаптическую передачу сигналов, рецепторы группы II и III расположены пресинаптически и обычно оказывают ингибирующее действие на высвобождение нейромедиаторов.

Нарушение регуляции глутаматергической нейротрансмиссии, например, из-за измененного высвобождения глутамата или активации постсинаптического рецептора было продемонстрировано при различных неврологических, а также психических расстройствах. Гипофункция рецептора NMDA не только была продемонстрирована у пациентов с болезнью Альцгеймера, но и все чаще рассматривается как предполагаемая причина шизофрении (Farber et al., Prog. Brain Res., (1998), Vol. 116, p. 421-437, Coyle et al., Cell, and Mol. Neurobiol., (2006), Vol. 26, p. 365-384). Это подтверждается клиническими исследованиями, показывающими, что антагонисты рецептора NMDA вызывают симптомы, неотличимые от симптомов, которыми страдают пациенты с шизофренией (Javitt et al., Am. J. Psychiatry, (1991), Vol. 148, p. 1301-1308; Meltzer H.Y., Biol. Psychiatry, (1999), Vol. 46(10), p. 1321-1327). Следовательно, подходы, которые могут усиливать или нормализовать передачу сигналов рецептора NMDA, имеют потенциал для лечения неврологических и психических расстройств.

Было продемонстрировано, что mGluR₅, кодируемый геном GRM5, экспрессируется в центральной нервной системе (ЦНС), главным образом в коре головного мозга, гиппокампе, прилежащем ядре и дорсальной части стриатума. Эти области мозга, как известно, участвуют в формировании памяти и когнитивных функциях, а также в эмоциональной реакции. Было показано, что mGluR₅ локализуется постсинаптически, рядом с постсинаптическим уплотнением (Lujan et al., Eur. J. Neurosci. (1996), Vol. 8, p. 14881500). Также было продемонстрировано функциональное взаимодействие между mGluR₅ и рецептором NMDA, где активация mGluR5 потенцирует состояние активации рецептора NMDA (Mannaioni et al.,

- 1 040603

NeuroSci., (2001), Vol. 21, p. 5925-5924, Rosenbrock et al., Eur. J. Pharma., (2010), Vol. 639, p. 40-46). Кроме того, активация mGluR₅ была продемонстрирована на доклинических моделях in vivo для устранения когнитивных нарушений, а также психического нарушения, индуцированного антагонистами рецептора NMDA (Chan et al., Psychopharma. (2008), Vol. 198, p. 141-148). Следовательно, активация mGluR₅ и, таким образом, потенцирование или нормализация передачи сигналов рецептора NMDA является потенциальным механизмом для лечения психических и неврологических расстройств.

Большинство агонистов mGluR₅ связываются с ортостерическим сайтом связывания глутамата. Поскольку сайт связывания глутамата между членами семейства mGluR является высококонсервативным, было сложно разработать селективные агонисты mGlu₅, которые имеют приемлемое проникновение в ЦНС и демонстрируют активность in vivo.

Альтернативный подход к достижению селективности между членами семейства mGluR заключается в разработке соединений, которые связываются с аллостерическим сайтом, который не является столь высококонсервативным между членами семейства. Эти аллостерические связывающие соединения не будут мешать естественному связыванию глутамата и передаче сигналов, но модулируют состояние активации рецептора. Аллостерические лиганды, которые обладают агонистической или обратной агонистической активностью в отсутствие ортостерических лигандов, называются аллостерическими агонистами или антагонистами соответственно. Аллостерические лиганды, не обладающие эффектом в отсутствие ортостерических лигандов, называются модуляторами (отрицательными или положительными).

Положительные аллостерические модуляторы mGluR₅ были недавно идентифицированы (O'Brien et al., Mol. Pharma. (2003), Vol. 64, p. 731-740, Lindsley et al., J. Med. Chem. (2004), Vol. 47, p. 5825-5828), где было определено, что эти соединения усиливают активность mGluR₅ в присутствии связанного глутамата. В отсутствие связанного глутамата положительные модуляторы mGlu₅ не демонстрируют никакой собственной активности.

Следовательно, эти соединения усиливают естественную передачу сигналов mGluR₅ в отличие от агонистов, которые активируют рецептор постоянным неестественным образом. Таким образом, положительные аллостерические модуляторы mGluR₅ представляют собой подход к потенцированию передачи сигналов mGluR₅, что, в свою очередь, потенцирует и нормализует гипофункцию рецептора NMDA, обнаруживаемую при неврологических и психических расстройствах. Отрицательные аллостерические модуляторы mGluR₅ полезны для подавления передачи сигналов mGluR₅, что, в свою очередь, снижает и нормализует гиперфункцию рецептора NMDA, обнаруживаемую при некоторых неврологических, психических расстройствах и более общих расстройствах ЦНС. Не желая ограничиваться какой-либо конкретной теорией, метаботропные глутаматные рецепторы, включая mGluR₅, вовлечены в широкий спектр биологических функций, что указывает на потенциальную роль рецептора mGluR₅ в различных патологических процессах у млекопитающих. Лиганды метаботропных глутаматных рецепторов можно использовать для лечения или профилактики острых и/или хронических неврологических и/или психических расстройств, связанных с нарушением глутаматергической передачи сигналов, таких как психоз, шизофрения, связанное с возрастом снижение когнитивных функций и подобные. Кроме того, не желая ограничиваться конкретной теорией, все больше данных указывает на то, что рецепторы mGlu играют важную роль в долговременных изменениях синаптической трансмиссии, а исследования синаптической пластичности у мышей с нокаутом FMR1 выявили связь между фенотипом ломкой X-хромосомы и передачей сигналов mGluR. Оба типа аллостерического модулятора также могут быть связаны с некоторыми редкими заболеваниями, например, без каких-либо ограничений, синдромом ломкой Х-хромосомы, синдромом Ретта, синдромом Фелан-МакДермида или туберозным склерозом.

Идентификация низкомолекулярных агонистов mGluR, которые связываются в ортостерическом сайте, значительно расширила понимание роли, которую играют эти рецепторы, и их соответствующей связи с заболеванием. Поскольку большинство этих агонистов были разработаны как аналоги глутамата, они обычно не обладают желаемыми характеристиками для лекарственных средств, нацеленных на mGluR, такими как пероральная биодоступность и/или распределение в центральную нервную систему (ЦНС). Более того, из-за высококонсервативной природы сайта связывания глутамата большинство ортостерических агонистов страдает недостаточной селективностью среди различных mGluR.

Сайты аллостерического связывания топографически отличаются от сайта связывания эндогенного лиганда (ортостерического). Совместное занятие рецептора эндогенным лигандом и аллостерическим модулятором на обоих сайтах может привести к разным результатам. Аллостерические лиганды, усиливающие эффект эндогенного лиганда (положительная кооперативность), определены как положительные аллостерические модуляторы (PAM), в то время как аллостерические лиганды, уменьшающие или блокирующие эффект эндогенного лиганда (отрицательная кооперативность), определены как отрицательные аллостерические модуляторы (NAM). (Christopoulos A., Advances in G protein-coupled receptor allostery: from function to structure, Mol. Pharmacol. 2014; 86(5):463-78.).

Таким образом, как PAM, так и NAM являются привлекательным механизмом для модуляции соответствующих физиологических ответов рецепторов.

К сожалению, не хватает избирательных положительных аллостерических модуляторов рецептора mGluR₅. Кроме того, обычные модуляторы рецептора mGluR₅ типично не обладают удовлетворительной

- 2 040603 растворимостью в воде и демонстрируют плохую пероральную биодоступность. Следовательно, остается потребность в способах и композициях, которые преодолевают эти недостатки и которые эффективно обеспечивают селективные положительные, но также и отрицательные аллостерические модуляторы для рецептора mGluR5.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает соединение, выбранное из соединений, представленных в таблице.

трет-бутил 3-(2-фенилэтинил)-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат
N--N Н₃С трет-бутил 3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат	Ν---Ν метил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат
Ν---Ν Н₃С о этил 3 -[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро- 5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин-7карбоксилат	Ν--Ν J к yJ δγ-ν⁴HjC о Х-метокси-Х-метил-3-[2-(м-толил)этинил]- 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 - а] пиразин-7-карбоксамид
Н,С О этил 3 -[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро- 5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат	Н₃С о Х-метокси-Х-метил-3-[2-(м-толил)этинил]6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 а] пиразин-7-карбоксамид

- 3 040603

N---Ν у H₃c N, N-диметил-З - [2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксамид	Ν---Ν # А СН₃ 1 о н₃с Ν, N-диэтил-З -[2-(м-толил)этинил]-6,8- дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин7-карбоксамид
Н₃С 2-фурил-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин- 7-ил] метанон	Ν--Ν / о Н₃С ([3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(1пиперидил)метанон
N--N Н₃С [3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8-д игидро-5Н- [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]пирролидин-1 -ил-метанон	Ν---Ν 1 j \\ А. Н₃С (3-хлорфенил)-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин7-ил] метанон
Н₃С морфолино- [3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] метанон	Ν---Ν J[^ 1 Н₃С 1 -пиперидил 3 -[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин7-карбоксилат

- 4 040603

трет-бутил 3 - [2-(3 -хлорфенил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат

- [2-(3 -хлорфенил )этинил] -N, N-д иметил6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -

а] пиразин-7-карбоксамид

[3 -[2-(3 -хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]пирролидин-1 -ил-метанон

3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-К

6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3а] пиразин-7-карбоксамид

[3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(1пиперидил)метанон

[3 -[2-(3 -хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]морфолино-метанон

трет-бутил

3-[2-(1трет-бутил пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат гидроксициклогексил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат

- 5 040603

у/ cf ° метил 3 - [2-(3 -хлорфенил)этинил] -6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат	Ν---Ν у ^γ^ ci ° этил 3-(2-(3 -хлорфенил)этинил]-6,8- дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин7-карбоксилат
у ^V·'” Cl ⁰ 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-Н-метокси-Н- метил-6,8-дигидро-5Н- [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид	ςκΛΟγ / о CI [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(2фурил)метанон
N---N <^СНз / 1 I к /^снз ν Н₃С Ν, Н-диэтил-3-[2-(6-метил-2- пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид	ν^Νγ^^^α Cl (3-хлорфенил)-[3-[2-(3-хлорфенил)этинил]- 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 - а] пиразин-7-ил]метанон
Н₃С 0 этил 3 - [2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат	/ о Н₃С метил 3 -[2-(6-метил-2-пиридил)этинил] - 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 - а] пиразин-7-карбоксилат

- 6 040603

метил 3 - [2-(4-хлор-2-пиридил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат

(3-хлорфенил)-[3-(2-фенилэтинил)-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] метанон этил 3 - [2-(4-хлор-2-пиридил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а] пиразин7-карбоксилат

фенил )этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат

этил 3-[2-(3-циано-5-фтор-фенил)этинил]6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 а] пиразин-7-карбоксилат

М-этил-М-метил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а] пиразин7-карбоксамид

М-(2-метоксиэтил)-М-метил-3-[2-(мтолил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид

- [2-(3 -хлорфенил )этинил] -М-этил-Nметил-6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3а] пиразин-7-карбоксамид

- 7 040603

N--Ν Ci / 0 3-(2-(3-хлорфенил )этинил]-Т4-(2- метоксиэтил)-М-метил-6,8-дигидро-5Н- [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7- карбоксамид	^υΥ Н_ЭС О СНз М-15Опропил-М-метил-3-[2-(мтолил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид
Г'’''''''НзС / п । 1 Щсн₃ Л 1 Λ JC у—СН₃ CI о 2,2-диметилпропил 3-(2-(3- хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат	Ν---Ν II н L·^0Нз Ct о 3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -N-(2,2диметилпропил)-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид
М к, CI ο-δ,ά О (3-хлорфенил)-[3-(2-циклогексилэтинил)- 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 а] пиразин-7-ил]метанон	ρ^όγΟ Cl о [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]фенил-метанон
Ν---Ν Cl о [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро- 5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(м- толил)метанон	N--N ? F О (3 -хлорфенил)-[3 -(2-(3 -фторфенил )этинил]- 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 - а] пиразин-7-ил]метанон

- 8 040603

(3-хлорфенил)-[3-[2-(4-хлор-2пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пираз ин-Уил] метанон

Cl о ^F

[3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-У-ил]-[3(трифторметил)фенил]метанон

-(2-(7-(3 -хлорбензоил)-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-3ил]этинил]бензонитрил

(3 -хлорфенил)-[3 -[2-(6-метил-2пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пираз ин-Уил] метанон тетрагидропиран-4-ил 3-(2-(3хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-Укарбоксилат

Cl

3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -N-(2-и ир ид ил )6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3-

а] пиразин-У-карбоксамид

[3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н- [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-У-ил]· (4,5 -диметил-2-фурил)метанон

3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -N-(2изопропокси-1,1 -диметил-этил)-6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло(4,3 -а] пиразинУ-карбоксамид

- 9 040603

[3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(4метил-2-фурил)метанон трет-бутил 3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1,5-а]пиразин-7карбоксилат (3 -хлорфенил)-|3 -12-(3 хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро-5Нимидазо[ 1,5 -а] пиразин-7-ил]метанон

[3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил](2,2-диметилморфолин-4-ил)метанон

CI трет-бутил 3 -[2-(3 -хлорфенил)этинил] -6,8дигидро-5Н-имидазо[1,5-а]пиразин-7карбоксилат

CI

[3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-имидазо[1,5-а]пиразин-7-ил]-(2,5диметил-3 -фурил)метанон

3-[2-[7-(3 -хлорбензоил)-6,8-дигидро-5Нимидазо[ 1,5 -а] пиразин-3 ил]этинил]бензонитрил

- [2- [7-(2,5 -диметил фуран-3 -карбонил)-6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1, 5-а]пиразин-3 ил]этинил]бензонитрил

- 10 040603

Н₃с этил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро5Н-имидазо[ 1,2-а] пиразин-7-карбоксилат

трет-бутил дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-7карбоксилат

3-(2-(3 -хлорфенил)этинил]-Н N-диэтил6,8-дигидро-5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7карбоксамид

7-(6-метил-З -нитро-2-пирид ил)-3 -(2фенилэтинил)-6,8-дигидро-5Нимидазо[ 1,2-а]пиразин этил

3-(2-(3 -хлорфенил)этинил] -6,8N, N-диметил-З - [2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-7карбоксамид

Н₃С

Ν, N-диэтил-З -[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-7карбоксамид

3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -Ν, N-д иметил6,8-дигидро-5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7карбоксамид

-[2-(м-толил)этинил]-6,8 дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-7карбоксилат

- 11 040603

трет-бутил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-7карбоксилат

- [2-(3 -хлорфенил )этинил] -N-m6tokch-Nметил-6,8-дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-

а] пиразин-7-карбоксамид

Х-метокси-Х-метил-3-[2-(мтолил)этинил] -6,8-дигидро-5Нимидазо[ 1,2-а] пиразин-7-карбоксамид

CI (3 -хлорфенил)- [3 -[2-(3 хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро-5Нимидазо[ 1,2-а] пиразин-7-ил] метанон

[3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7-ил]-(2,5диметил-3 -фурил)метанон

- [3 - [2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7карбонил] бензонитрил

трет-бутил 3 -[2-(3-цианофенил )этинил]6,8-дигидро-5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7карбоксилат

- [2- [7-(2,5 -диметил фуран-3 -карбонил)-6,8дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-3 ил]этинил]бензонитрил

-[2- [7-(4,5 -диметилфуран-2-карбонил)6,8-дигидро-5Н-имидазо[ 1,2-а]пиразин-3 ил]этинил]бензонитрил

[3 -[(Z)-1 -хлор-2-(3 -хлорфенил)винил]-6,8дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] -морфолино-метанон

Подробное описание изобретения

Термин лечение и т.п. в контексте настоящего документа охватывает устранение или облегчение симптомов и/или маркеров mGluR₅-опосредованных заболеваний или расстройств или предотвращение их ухудшения (стабилизацию) и, в более общем смысле, достижение желаемого физиологического или фармакологического эффекта.

Термин профилактика и т.п. в контексте настоящего документа охватывает ингибирование или замедление проявления симптомов таких заболеваний или расстройств или снижение (или усиление, в зависимости от случая) или устранение аномальных значений в их маркерах.

Фармацевтические композиции, включающие соединение по изобретению.

Хотя возможно введение соединения по изобретению в виде нерасфасованного вещества, предпочтительно, когда активный ингредиент представлен в фармацевтической композиции, например, в которой он находится в смеси с фармацевтически приемлемым носителем, выбранным с учетом предпола

- 12 040603 гаемого пути введения и стандартной фармацевтической практики.

Соответственно, соединения по настоящему изобретению также могут быть включены в фармацевтическую композицию, включающую соединение по изобретению в смеси с фармацевтически приемлемым носителем. Термин носитель относится к разбавителю, эксципиенту и/или растворителю, с которым вводят активное соединение.

Соединение по изобретению можно использовать в комбинации с другими терапиями и/или активными веществами. Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает, в следующем аспекте, фармацевтическую композицию, включающую соединение по изобретению, второе активное вещество и фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтические композиции могут включать, помимо носителя, любое подходящее связующее, смазывающее вещество, суспендирующий агент, агент покрытия и/или солюбилизирующий агент.

Консерванты, стабилизаторы, красители и ароматизаторы также могут быть включены в фармацевтическую композицию. Также можно использовать антиоксиданты и суспендирующие агенты.

Соединения по изобретению можно довести до мелкодисперсной формы (например, измельчить с использованием известных процедур измельчения, таких как мокрый помол) для получения размера частиц, подходящего для образования таблеток и другого типа лекарственных форм. Мелкодисперсные (в форме наночастиц) препараты соединений по настоящему изобретению могут быть получены способами, известными в данной области, например, см. WO 02/00196, включенную в настоящий документ посредством ссылки.

Пути введения и стандартные лекарственные формы.

Пути введения включают пероральный (например, в виде таблетки, капсулы или в виде раствора для приема внутрь), местный, мукозальный (например, в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции), назальный, парентеральный (например, в форме для инъекций), желудочно-кишечный, интраспинальный, интраперитонеальный, внутримышечный, внутривенный, внутриматочный, внутриглазной, интрадермальный, интракраниальный, интратекальный, интратрахеальный, интравагинальный, интрацеребровентрикулярный, интрацеребральный, подкожный, офтальмологический (включая интравитреальный или внутрикамерный), трансдермальный, ректальный, буккальный, эпидуральный и сублингвальный. Композиции по изобретению могут быть специально сформулированы для любого из этих путей введения. В предпочтительных вариантах осуществления фармацевтические композиции по изобретению формулируют в форму, подходящую для пероральной доставки.

В зависимости от разных систем доставки могут быть разные требования к композиции/лекарственной форме. Следует понимать, что не все соединения необходимо вводить одним и тем же путем. Аналогичным образом, если композиция включает более одного активного компонента, то эти компоненты можно вводить разными путями. В качестве примера фармацевтическая композиция по изобретению может быть сформулирована для доставки с использованием мини-насоса или через слизистую оболочку, например, в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции или раствора для приема внутрь, или парентерально, где композиция сформулирована в виде инъекционной формы для доставки, например, внутривенным, внутримышечным или подкожным путем. Альтернативно, композиция может быть разработана для доставки несколькими путями.

Если средство должно доставляться через слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта, оно должно оставаться стабильным во время транзита через желудочно-кишечный тракт; например, оно должно быть устойчивым к протеолитическому расщеплению, стабильным при кислом pH и устойчивым к детергентным эффектам желчи. Например, соединение формулы I может быть покрыто слоем энтеросолюбильного покрытия. Материал слоя энтеросолюбильного покрытия может быть диспергирован или растворен либо в воде, либо в подходящем органическом растворителе. В качестве полимеров слои энтеросолюбильного покрытия можно использовать один или несколько, по отдельности или в комбинации, из следующих: например, растворы или дисперсии сополимеров метакриловой кислоты, ацетатфталат целлюлозы, ацетобутират целлюлозы, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, ацетат-сукцинат гидроксипропилметилцеллюлозы, поливинилацетат фталат, ацетат-тримеллитат целлюлозы, карбоксиметилэтилцеллюлоза, шеллак или другой подходящий полимер(полимеры) слоя энтеросолюбильного покрытия. По экологическим причинам может быть предпочтительным способ нанесения покрытия на водной основе. В таких водных процессах наиболее предпочтительны сополимеры метакриловой кислоты.

При необходимости фармацевтические композиции можно вводить путем ингаляции, в форме суппозитория или пессария, местно в форме лосьона, раствора, крема, мази или присыпки, с использованием кожного пластыря, перорально в форме таблеток, содержащих эксципиенты, такие как крахмал или лактоза, или в капсулах или вагинальных суппозиториях, отдельно или в смеси с эксципиентами, или в форме эликсиров, растворов или суспензий, содержащих ароматизаторы или красители, или их можно вводить парентерально, например внутривенно, внутримышечно или подкожно. Для буккального или сублингвального введения композиции можно вводить в форме таблеток или лепешек, которые можно приготовить обычным способом.

Когда композицию по изобретению следует вводить парентерально, такое введение включает одно или несколько из следующего: внутривенное, интраартериальное, интраперитонеальное, интратекальное,

- 13 040603 интравентрикулярное, интрауретральное, интрастернальное, интракраниальное, внутримышечное или подкожное введение средства; и/или с использованием методов инфузии.

Фармацевтические композиции по изобретению можно вводить парентерально, например путем инфузии или инъекции. Фармацевтические композиции, подходящие для инъекции или инфузии, могут быть в форме стерильного водного раствора, дисперсии или стерильного порошка, который содержит активный ингредиент, приспособленного, если необходимо, для приготовления такого стерильного раствора или дисперсии, подходящей для инфузии или инъекции. Этот препарат необязательно может быть инкапсулирован в липосомы. Во всех случаях конечный препарат должен быть стерильным, жидким и стабильным в условиях производства и хранения. Для улучшения стабильности при хранении такие препараты могут также содержать консервант для предотвращения роста микроорганизмов. Предотвращение действия микроорганизмов может быть достигнуто путем добавления различных антибактериальных и противогрибковых средств, например парабена, хлорбутанола, ацетата натрия, лактата натрия, цитрата натрия или аксорбиновой кислоты. Во многих случаях рекомендуют изотонические вещества, например сахара, буферы и хлорид натрия, для обеспечения осмотического давления, как у жидкостей организма, особенно крови. Пролонгированная абсорбция таких смесей для инъекций может достигаться путем введения агентов, замедляющих всасывание, таких как моностеарат алюминия или желатин.

Дисперсии можно получить в жидком носителе или промежуточном продукте, таком как глицерин, жидкие полиэтиленгликоли, триацетиновые масла и их смеси. Жидкий носитель или промежуточный продукт может быть растворителем или жидкой диспергирующей средой, которая содержит, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и т.п.), растительные масла, нетоксичные сложные эфиры глицерина и их подходящие смеси. Подходящую текучесть можно поддерживать путем образования липосом, введения частиц подходящего размера в случае дисперсий или путем добавления поверхностно-активных веществ.

Для парентерального введения соединение лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например достаточное количество солей или глюкозы, чтобы сделать раствор изотоническим с кровью. При необходимости водные растворы должны быть подходящим образом забуферены (предпочтительно до pH от 3 до 9). Получение подходящих парентеральных композиций в стерильных условиях легко осуществить стандартными фармацевтическими методами, хорошо известными специалистам в данной области.

Стерильные растворы для инъекций можно получить путем смешивания соединения формулы I с подходящим растворителем и одним или несколькими вышеуказанными носителями с последующей стерильной фильтрацией. В случае стерильных порошков, подходящих для использования при получении стерильных растворов для инъекций, предпочтительные методы получения включают сушку в вакууме и лиофилизацию, которые обеспечивают порошкообразные смеси антагонистов рецепторов альдостерона и желаемых эксципиентов для последующего приготовления стерильных растворов.

Соединения в соответствии с изобретением могут быть сформулированы для использования в медицине или ветеринарии путем инъекции (например, путем внутривенной болюсной инъекции или инфузии или внутримышечным, подкожным или интратекальным путями) и могут быть представлены в форме стандартной дозы, в ампулах или других однодозовых контейнерах или в многодозовых контейнерах, с добавлением консерванта при необходимости. Композиции для инъекций могут быть в форме суспензий, растворов или эмульсий в масляных или водных носителях и могут содержать агенты для составления рецептур, такие как суспендирующие, стабилизирующие, солюбилизирующие и/или диспергирующие агенты. В качестве альтернативы активный ингредиент может быть в форме стерильного порошка для восстановления подходящим носителем, например стерильной апирогенной водой, перед использованием.

Соединения по изобретению можно вводить (например, перорально или местно) в форме таблеток, капсул, вагинальных суппозиториев, эликсиров, растворов или суспензий, которые могут содержать ароматизаторы или красители, для немедленного, отсроченного, модифицированного, замедленного, прерывистого или контролируемого высвобождения при применении.

Соединения по изобретению также могут быть представлены для использования в лечении человека или в ветеринарии в форме, подходящей для перорального или трансбуккального введения, например в форме растворов, гелей, сиропов, жидкостей для полоскания рта или суспензий или сухого порошка для разведения водой или другим подходящим растворителем перед использованием, необязательно с ароматизаторами и красителями. Также можно использовать твердые композиции, такие как таблетки, капсулы, лепешки, пастилки, пилюли, болюсы, порошок, пасты, гранулы, шарики или препараты в виде предварительно приготовленных смесей. Твердые и жидкие композиции для перорального применения можно получить способами, хорошо известными в данной области. Такие композиции также могут содержать один или несколько фармацевтически приемлемых носителей и эксципиентов, которые могут быть в твердой или жидкой форме.

Таблетки могут содержать эксципиенты, такие как микрокристаллическая целлюлоза, лактоза, цитрат натрия, карбонат кальция, двухосновный фосфат кальция и глицин, разрыхлители, такие как крахмал (предпочтительно кукурузный, картофельный или тапиоковый крахмал), натрий крахмалгликолят, на

- 14 040603 трий кроскармеллоза и некоторые сложные силикаты, и связующие для гранулирования, такие как поливинилпирролидон, гидроксипропилметилцеллюлоза (HPMC), гидроксипропилцеллюлоза (HPC), сахароза, желатин и аравийская камедь.

Дополнительно могут быть включены смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота, глицерилбегенат и тальк.

Композиции можно вводить перорально в форме таблеток с быстрым или контролируемым высвобождением, микрочастиц, мини-таблеток, капсул, саше и пероральных растворов или суспензий или порошков для их приготовления. В дополнение к новым твердым формам пантопразола по изобретению в качестве активного вещества, пероральные препараты могут необязательно включать различные стандартные фармацевтические носители и эксципиенты, такие как связующие, наполнители, буферы, смазывающие вещества, глиданты, красители, разрыхлители, отдушки, подсластители, поверхностноактивные вещества, смазки для форм, антиадгезивные вещества и покрытия. Некоторые эксципиенты могут выполнять несколько ролей в композициях, например действовать как связующие и дезинтегрирующие вещества.

Примеры фармацевтически приемлемых разрыхлителей для пероральных композиций включают крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, натрий крахмалгликолят, натрий карбоксиметилцеллюлозу, натрий кроскармеллозу, микрокристаллическую целлюлозу, альгинаты, смолы, поверхностно-активные вещества, шипучие композиции, водные силикаты алюминия и сшитый поливинилпирролидон.

Примеры фармацевтически приемлемых связующих веществ для пероральных композиций включают аравийскую камедь; производные целлюлозы, такие как метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, гидроксипропилцеллюлоза или гидроксиэтилцеллюлоза; желатин, глюкозу, декстрозу, ксилит, полиметакрилаты, поливинилпирролидон, сорбит, крахмал, предварительно желатинизированный крахмал, трагакант, ксантановую смолу, альгинаты, алюмосиликат магния, полиэтиленгликоль или бентонит.

Примеры фармацевтически приемлемых наполнителей для пероральных композиций включают лактозу, ангидролактозу, моногидрат лактозы, сахарозу, декстрозу, маннит, сорбит, крахмал, целлюлозу (особенно микрокристаллическую целлюлозу), дигидро- или ангидрофосфат кальция, карбонат кальция и сульфат кальция.

Примеры фармацевтически приемлемых смазывающих веществ, используемых в композициях по изобретению, включают стеарат магния, тальк, полиэтиленгликоль, полимеры этиленоксида, лаурилсульфат натрия, лаурилсульфат магния, олеат натрия, стеарилфумарат натрия и коллоидный диоксид кремния.

Примеры подходящих фармацевтически приемлемых отдушек для пероральных композиций включают синтетические ароматизаторы и натуральные ароматические масла, такие как экстракты масел, цветов, фруктов (например, банана, яблока, вишни, персика) и их комбинации, а также аналогичные ароматы. Их использование зависит от многих факторов, наиболее важным из которых является органолептическая приемлемость для популяции, которая будет принимать фармацевтические композиции.

Примеры подходящих фармацевтически приемлемых красителей для пероральных композиций включают синтетические и натуральные красители, такие как диоксид титана, бета-каротин и экстракты кожуры грейпфрута.

Примеры полезных фармацевтически приемлемых покрытий для пероральных композиций, как правило, используемых для облегчения проглатывания, изменения свойств высвобождения, улучшения внешнего вида и/или маскирования вкуса композиций, включают гидроксипропилметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу и акрилат-метакрилатные сополимеры.

Примеры фармацевтически приемлемых подсластителей для пероральных композиций включают аспартам, сахарин, натрий сахарин, цикламат натрия, ксилит, маннит, сорбит, лактозу и сахарозу.

Примеры фармацевтически приемлемых буферов включают лимонную кислоту, цитрат натрия, бикарбонат натрия, двухосновный фосфат натрия, оксид магния, карбонат кальция и гидроксид магния.

Примеры фармацевтически приемлемых поверхностно-активных веществ включают лаурилсульфат натрия и полисорбаты.

Твердые композиции подобного типа также можно использовать в качестве наполнителей в желатиновых капсулах. Предпочтительные эксципиенты в этом отношении включают лактозу, крахмал, целлюлозу, молочный сахар или высокомолекулярные полиэтиленгликоли. Для водных суспензий и/или эликсиров средство может быть объединено с различными подсластителями или ароматизаторами, красящими веществами или красителями, с эмульгирующими и/или суспендирующими агентами и с разбавителями, такими как вода, этанол, пропиленгликоль и глицерин, и их комбинации.

Соединения по изобретению также могут быть сформулированы, например, в виде суппозиториев, например, содержащих обычные основы для суппозиториев, для использования в медицине или ветеринарии или в виде пессариев, например, содержащих обычные основы для пессариев.

Соединения в соответствии с изобретением могут быть сформулированы для местного применения, для использования в медицине и ветеринарии в форме мазей, кремов, гелей, гидрогелей, лосьонов, рас

- 15 040603 творов, шампуней, порошков (включая спреи или присыпки), пессариев, тампонов, спреев, растворов для окунания, аэрозолей, капель (например, глазных и назальных капель) или орошающих растворов.

Для местного нанесения на кожу средство по изобретению может быть сформулировано в виде подходящей мази, содержащей активное соединение, суспендированное или растворенное, например, в смеси с одним или несколькими из следующих компонентов: минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтиленполиоксипропиленовое соединение, эмульгирующий воск, сорбитанмоностеарат, полиэтиленгликоль, жидкий парафин, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и вода. Такие композиции могут также содержать другие фармацевтически приемлемые эксципиенты, такие как полимеры, масла, жидкие носители, поверхностно-активные вещества, буферы, консерванты, стабилизаторы, антиоксиданты, увлажнители, смягчающие вещества, красители и отдушки.

Примеры фармацевтически приемлемых полимеров, подходящих для таких композиций для местного применения, включают акриловые полимеры; производные целлюлозы, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза или гидроксипропилцеллюлоза; природные полимеры, такие как альгинаты, трагакант, пектин, ксантан и цитозан.

Примеры подходящих фармацевтически приемлемых масел, которые являются полезными для такого применения, включают минеральные масла, силиконовые масла, жирные кислоты, спирты и гликоли.

Примеры подходящих фармацевтически приемлемых жидких носителей включают воду, спирты или гликоли, такие как этанол, изопропанол, пропиленгликоль, гексиленгликоль, глицерин и полиэтиленгликоль, или их смеси, в которых псевдополиморф растворяют или диспергируют, необязательно с добавлением нетоксичных анионных, катионных или неионных поверхностно-активных веществ и неорганических или органических буферов.

Примеры фармацевтически приемлемых консервантов включают бензоат натрия, аскорбиновую кислоту, сложные эфиры п-гидроксибензойной кислоты и различные антибактериальные и противогрибковые агенты, такие как растворители, например этанол, пропиленгликоль, бензиловый спирт, хлорбутанол, соли четвертичного аммония и парабены (такие как метилпарабен, этилпарабен и пропилпарабен).

Примеры фармацевтически приемлемых стабилизаторов и антиоксидантов включают этилендиаминтетрауксусную кислоту (EDTA), тиомочевину, токоферол и бутилгидроксианизол.

Примеры фармацевтически приемлемых увлажнителей включают глицерин, сорбит, мочевину и полиэтиленгликоль.

Примеры фармацевтически приемлемых смягчающих веществ включают минеральные масла, изопропилмиристат и изопропилпальмитат.

Соединения также можно вводить дермально или трансдермально, например, с использованием кожного пластыря.

Для офтальмологического применения соединения могут быть сформулированы в виде микронизированных суспензий в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным pH или предпочтительно в виде растворов в изотоническом стерильном физиологическом растворе с установленным pH, необязательно в комбинации с консервантом, таким как бензилалконийхлорид.

Как указано, соединения по настоящему изобретению можно вводить интраназально или путем ингаляции, и их удобно доставлять в форме ингалятора сухого порошка или аэрозольного спрея из контейнера под давлением, насоса, спрея или небулайзера с использованием подходящего пропеллента, например дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана, гидрофторалкана, такого как 1,1,1,2-тетрафторэтан (HFA 134AT) или 1,1,1,2,3,3,3-гептафторпропан (HFA 227EA), диоксида углерода или другого подходящего газа. В случае аэрозоля под давлением однократная дозировка может определяться путем обеспечения клапана для доставки отмеренного количества. Контейнер под давлением, насос, спрей или небулайзер могут содержать раствор или суспензию активного соединения, например, с использованием смеси этанола и пропеллента в качестве растворителя, который может дополнительно содержать смазывающее вещество, например сорбитантриолеат.

Капсулы и картриджи (изготовленные, например, из желатина) для использования в ингаляторе или инсуффляторе могут быть сформированы для содержания порошковой смеси соединения и подходящей порошковой основы, такой как лактоза или крахмал.

Для местного введения путем ингаляции соединения по изобретению можно доставлять для применения для человека или в ветеринарии через небулайзер.

Фармацевтические композиции по изобретению могут содержать от 0,01 до 99 мас.% активного вещества на единицу объема. Для местного введения, например, композиция обычно содержит 0,01-10%, более предпочтительно 0,01-1% активного вещества.

Активные вещества также можно вводить в форме липосомных систем доставки, таких как моноламеллярные везикулы, большие моноламеллярные везикулы и мультиламеллярные везикулы. Липосомы могут быть образованы из множества фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Фармацевтическую композицию или стандартную лекарственную форму по изобретению можно

- 16 040603 вводить в соответствии с режимом дозирования и введения, определенным рутинным тестированием в свете приведенных выше руководящих принципов, чтобы получить оптимальную активность при минимизации токсичности или побочных эффектов для конкретного пациента. Однако такая точная настройка терапевтического режима является обычным делом в свете приведенных в настоящем документе руководящих принципов.

Доза активных веществ по изобретению может варьироваться в зависимости от множества факторов, таких как основное заболевание, состояние индивидуума, масса тела, пол и возраст, а также способа введения. Эффективное количество для лечения расстройства легко можно определить эмпирическими методами, известными специалистам в данной области, например путем установления матрицы дозировок и частоты введения и сравнения группы экспериментальных единиц или субъектов в каждой точке матрицы. Точное количество, которое следует вводить пациенту, будет варьироваться в зависимости от состояния и тяжести расстройства и физического состояния пациента. Измеряемое улучшение любого симптома или параметра может быть определено специалистом в данной области или сообщено пациентом врачу.

Количество вводимого средства может составлять от около 0,01 до около 25 мг/кг/день, предпочтительно от около 0,1 до около 10 мг/кг/день и наиболее предпочтительно от 0,2 до около 5 мг/кг/день. Следует понимать, что фармацевтические композиции по изобретению необязательно должны содержать все количество средства, которое эффективно при лечении расстройства, поскольку такие эффективные количества могут достигаться путем введения множества доз таких фармацевтических композиций. В общем, эффективное количество относится к количеству фармацевтической композиции, вводимой для улучшения, ингибирования или облегчения заболевания или расстройства или состояния субъекта, или симптома заболевания или расстройства клинически значимым образом. Любое клинически значимое улучшение у субъекта считается достаточным для достижения лечения. Предпочтительно количество, достаточное для лечения, представляет собой количество, которое предотвращает возникновение или один или несколько симптомов инфекции, или представляет собой количество, которое снижает тяжесть или продолжительность времени, в течение которого субъект страдает от или у него происходит развитие одного или нескольких симптомов инфекции, относительно контрольного субъекта, который не лечится композицией по изобретению.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения соединения по изобретению формулируют в виде капсул или таблеток, предпочтительно содержащих от 10 до 200 мг соединений по изобретению, и предпочтительно вводят пациенту в общей суточной дозе от 10 до 300 мг, предпочтительно от 20 до 150 мг и наиболее предпочтительно около 50 мг.

Фармацевтическая композиция для парентерального введения содержит от около 0,01 до около 100 мас.% активных веществ по изобретению в расчете на 100% массы всей фармацевтической композиции.

Обычно трансдермальные лекарственные формы содержат от около 0,01 до около 100 мас.% активных веществ в расчете на 100% общей массы лекарственной формы.

Фармацевтическую композицию или стандартную лекарственную форму можно вводить в виде однократной суточной дозы или общую суточную дозу можно вводить раздельными дозами. Кроме того, может быть желательно совместное или последовательное введение другого соединения для лечения расстройства. С этой целью комбинированные активные вещества формулируют в простую единицу дозирования.

Для комбинированного лечения, когда соединения находятся в отдельных лекарственных формах, соединения можно вводить одновременно или каждое можно вводить через определенные интервалы времени. Например, соединение по изобретению можно вводить утром, а антимускариновое соединение можно вводить вечером, или наоборот. Дополнительные соединения также можно вводить с определенными интервалами. Порядок введения будет зависеть от множества факторов, включая возраст, массу тела, пол и состояние здоровья пациента; тяжесть и этиологию расстройств, подлежащих лечению, способ введения, функцию почек и печени пациента, историю лечения пациента и реакцию пациента. Определение порядка введения может быть точным, и такая точная настройка является рутинной в свете приведенных в настоящем документе руководящих принципов.

Синтез.

Соединения по изобретению можно получить общими способами, описанными ниже.

Соединения настоящего изобретения можно получить с использованием реакций, показанных на следующих схемах, в дополнение к другим стандартным манипуляциям, которые известны в литературе, проиллюстрированы в экспериментальном разделе или понятны специалисту в данной области. Исходные вещества, которые не описаны в настоящем документе, либо коммерчески доступны, либо могут быть получены с использованием реакций, описанных в литературе, или понятны специалисту в данной области. Следующие примеры представлены для более полного понимания изобретения, являются только иллюстративными и не должны рассматриваться как ограничивающие.

Специалистам в данной области будет понятно, что может быть желательно использовать защищенные производные промежуточных соединений, используемых для получения соединений по изобретению. Защиту и снятие защиты функциональных групп можно осуществлять способами, известными в

- 17 040603 данной области (см., например, Green and Wuts Protective Groups in Organic Synthesis. John Wiley and Sons, New York, 1999).

Аббревиатура PG описывает защитную группу, которую вводят в реакционноспособную группу перед осуществлением определенных манипуляций и которую позже удаляют. Примеры PG для защиты реакционноспособной группы включают: ацетил-, трифторацетил-, бензоил-, этоксикарбонил-, N-трет-бутоксикарбонил-(BOC), N-бензилоксикарбонил-(Cbz), бензил-, метоксибензил-, 2,4-диметоксибензил- и для аминогрупп, дополнительно группа фталил- для аминоалкиламино- или иминогрупп; N-метоксиметил-(MOM), N-бензилоксиметил-(BOM), N-(триметилсилил)этоксиметил(SEM), N-трет-бутилдиметилсилоксиметил-, N-трет-бутилдиметилсилил-(TBDMS), N-триизопропилсилил-(TIPS), N-бензил-, N-4-метоксибензил (PMB), N-трифенилметил-(Tr), N-трет-бутоксикарбонил(BOC), N-бензилоксикарбонил-(Cbz) или N-триметилсилилэтилсульфонил-(SES) для амидных групп; группы метокси-, бензилокси-, триметилсилил-(TMS), ацетил-, бензоил-, трет-бутил-, тритил-, бензилили тетрагидропиранил (THP) для гидрокси групп; или группы триметилсилил-(TMS), метилэтил-, третбутил-, бензил- или тетрагидропиранил (THP) для карбоксильных групп.

Соединения по изобретению обычно получают в соответствии со следующей схемой.

Схема 1

В некоторых вариантах осуществления конечный продукт может быть дополнительно модифицирован, например, путем манипуляции с заместителями. Эти манипуляции могут включать, но не ограни чиваются этим, реакции восстановления, окисления, алкилирования, ацилирования и гидролиза, которые хорошо известны специалистам в данной области. В некоторых вариантах осуществления порядок осуществления вышеуказанных схем реакций может варьироваться, чтобы облегчить реакцию или избежать нежелательных продуктов реакции. Следующие примеры представлены для более полного понимания изобретения. Эти примеры являются только иллюстративными и никоим образом не должны рассматриваться как ограничивающие изобретение.

Как показано на Схеме 1, коммерчески доступное исходное вещество 1 можно легко преобразовать в N-защищенный 3-бром-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин (2) с использованием консолидированных методологий, хорошо известных специалистам в данной области. Затем соединение 2 подвергают взаимодействию с использованием реакции сочетания Соногашира или Соногашира-Хека с подходящим монозамещенным алкинильным производным с получением соединений 3. На следующей стадии N-защищенные соединения 3 затем подвергают реакции снятия защиты известными способами с получением соединений 4, которые непосредственно подвергают взаимодействию с промежуточным соединением R₅-B-R4-LG с получением соединений IA, IB или IC. LG представляет собой отщепляемую группу, такую как галоген, мезилат, тозилат, алкилсульфонат, трифлат или другие, без ограничения. Эту последнюю процедуру дериватизации можно осуществить с использованием стандартных методов, таких как, например, реакции Бухвальда, реакции ацилирования, реакция с алкил/арилизоцианатами, алкил/арилхлорформиатом, хлороформамидами, активированными карбонатами или мочевинами, восстановительное аминирование, алкилирование или любой вид реакции N-дериватизации, полезных для образования соединений формулы IA, IB или IC и очень хорошо известных специалистам в данной области. Эту последнюю реакцию можно осуществить также путем предварительного образования подходящих промежуточных соединений, например хлорсульфонил или хлоркарбонил 1-имидазолилкарбонил N-производных промежуточного соединения 4.

- 18 040603

Альтернативно, соединения по изобретению также можно получить в соответствии со схемой 1 путем непосредственной дериватизации соединений 1 аналогично тому, как описано выше, с получением соединений 5, которые, в свою очередь, можно преобразовать в соединения IA, IB или IC с использованием тех же процедур алкинилирования, которые описаны выше для соединений 3.

Синтезы других соединений, не описанные в этом общем описании, документально подтверждены в экспериментальной части настоящего изобретения, которая следует ниже.

Свободные основания соединений по изобретению, их диастереомеры или энантиомеры можно преобразовать в соответствующие фармацевтически приемлемые соли при стандартных условиях, хорошо известных в данной области. Например, свободное основание растворяют в подходящем органическом растворителе, таком как метанол, обрабатывают, например, одним эквивалентом малеиновой или щавелевой кислоты, одним или двумя эквивалентами хлористоводородной кислоты или метансульфоновой кислоты, а затем концентрируют в вакууме с получением соответствующей фармацевтически приемлемой соли. Затем остаток можно очистить перекристаллизацией из подходящего органического растворителя или смеси органических растворителей, такой как метанол/диэтиловый эфир.

Получение соединений по изобретению.

Если не указано иное, одна или несколько таутомерных форм соединений примеров, описанных ниже, могут быть получены in situ и/или выделены. Все таутомерные формы соединений примеров, описанных ниже, следует рассматривать как раскрытые.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами, в которых могут использоваться следующие аббревиатуры:

АсОН	уксусная кислота
MeCN	ацетонитрил
Водн.	водный
ВОС	трет-бутилоксикарбонил
КОНЦ.	концентрированный
DCM	дихлорметан
DCE	1,2-дихлорэтан
DIPEA	N, N-диизопропилэтиламин
DMF	N, N-диметилформамид
DMSO	диметилсульфоксид
EI	электронная ионизация
ESI	ионизация электрораспылением
EtOAc	этилацетат
EtOH	этанол
НС1	хлористоводородная кислота
HCOOH	муравьиная кислота
MeOH	метанол
MS	масс-спектрометрия
MW	молекулярная масса
NaOH	гидроксид натрия
NH₄OH	гидроксид аммония (30% аммиака в воде)
PE	петролейный эфир
R_f	Значение удерживания (в тонкослойной хроматографии)
KT или k.t.	комнатная температура
Rt	время удерживания (в ВЭЖХ)
THF	тетрагидрофуран
TEA	триэтиламин
TFA	трифторуксусная кислота
СВЭЖХ	сверхэффективная жидкостная

- 19 040603 хроматография

СВЭЖХ-МС СВЭЖХ в сочетании с массспектрометрией

Следующие ниже примеры иллюстрируют некоторые из соединений общей формулы I, описанной выше. Эти примеры являются только иллюстративными и не предназначены для ограничения объема изобретения. Реагенты и исходные вещества легко доступны для специалистов в данной области.

Пример 1.

трет-Бутил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Смесь трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилата (1,65 ммоль, 500 мг), 1-хлор-3-этинилбензола (3,3 ммоль, 450,5 мг, 0,406 мл), Pd тетракис (0,083 ммоль, 95,3 мг) и ацетата натрия (3,3 ммоль, 448,9 мг) в безводном DMF (10 мл) перемешивали при 120°C в печи MW Biotage Robot 8 в течение 10 мин, охлаждали до комнатной температуры, выливали в воду и экстрагировали при помощи EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Na₂SO₄. Растворитель удаляли в вакууме и неочищенный остаток очищали при помощи автоматической флэш-хроматографии (Biotage Isolera, SNAP25 картридж), элюируя с градиентом петролейный эфир/EtOAc от 30% до 100% EtOAc. Указанный в заголовке продукт (280 мг, 47% выход) выделяли в виде бледно-желтого твердого вещества.

Альтернативное получение.

К раствору трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилата (3 г, 9,90 ммоль) в безводном DMF (15 мл) в сосуде для микроволновой печи добавляли 1-хлор-3этинилбензол (1,622 г, 11,88 ммоль, 1,2 экв., 1,462 мл), с последующим добавлением дихлорида бис-(трифенилфосфин)палладия(П) (0,278 г, 0,396 ммоль, 0,04 экв.), йодида меди(I) (0,057 г, 0,297 ммоль, 0,03 экв.) и TEA (1,302 г, 12,87 ммоль, 1,30 экв., 1,80 мл). Сосуд для микроволновой печи продували азотом, герметично закрывали и нагревали при 110°C при микроволновом облучении в течение 11 мин в аппарате Biotage Initiator Robot8®. Затем добавляли 0,02 экв. палладиевого катализатора и 0,02 экв. йодида меди и раствор нагревали при микроволновом облучении еще в течение 6 мин. После охлаждения при комнатной температуре добавляли воду и EtOAc, две фазы разделяли, органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали на устройстве для флэш-хроматографии Biotage Isolera® One, тип картриджа SNAP50, используя градиент петролейный эфирЖЮАс от 3:7 до 0:1, с получением 1,4 г желтого порошка, содержащего, помимо желаемого продукта, трифенилфосфин оксид, как обнаружено методом ЖХ-МС. Таким образом, образец повторно очищали на том же устройстве для колоночной хроматографии с обращенной фазой (SNAP60), используя градиент NH4HCO₃ буфер:MeCN от 2:8 до 1:1, выделяя после упаривания собранных фракций 1,175 г указанного в заголовке соединения.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 359,58, 361,61, 362,63.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,45 (с, 9H), 3,82 (т, 2H), 4,14 (т, 2H), 4,74 (с, 2H), 7,49-7,56 (м, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 2.

{3-[(3-Хлорфенил)этинил]-5,6-дигидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7(8H)-ил}(4-метилфуран-2ил)метанон.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин (Соединение 2a).

К охлажденному на ледяной бане раствору конечного соединения Примера 1 (1,170 г, 3,26 ммоль) в CHCl₃ (50 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (7,436 г, 5,02 мл, 65,22 ммоль) и полученную смесь перемешивали при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин. После охлаждения при комнатной температуре хлороформ и избыток TFA удаляли при пониженном давлении. Добавляли насыщенный водный раствор карбоната калия; две фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали досуха в вакууме с получением 840 мг указанного в заголовке соединения в виде светло-коричневого порошка, который использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Раствор 4-метилфуран-2-карбонилхлорида (45 мг, 0,311 ммоль), 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина (60 мг, 0,232 ммоль) и DIPEA (59,95 мг, 0,464 ммоль, 2 экв., 0,081 мл) в хлороформе без этанола (3 мл) перемешивали в течение 3 ч. Реакционную смесь промывали водой. Органический слой снова промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄ и растворитель выпаривали с получением неочищенного соединения, которое очищали дважды при помощи автоматической флэш-хроматографии в сочетании с масс-детекцией (Biotage Isolera-Dalton®) с картриджем SNAP10, элюируя сначала с градиентом EtOAc:MeOH от 10:0 до 9:1, затем с картриджем SNAP12 RP, элюируя с градиентом H2O/ACN от 8:2 до 7:3, с получением 17 мг указанного в заголовке соедине

- 20 040603 ния (Выход: 20%).

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 367,20.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 8,75 (шир.д, 1H), 7,82 (т, 1H), 7,58-7,71 (м, 4H), 7,49-7,56 (м, 1H), 7,07 (с, 1H), 5,06 (шир.с, 2H), 4,10-4,34 (м, 4H), 2,05 (д, 3H), 1,21-1,37 (м, 14H).

В соответствии с тем же способом, который описан выше, следующие соединения получали из Соединения 2a путем ацилирования/ароилирования с использованием подходящего ацила/ароилхлорида:

Пример 3.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(4,5-диметил-2фурил)метанон.

Из Соединения 2a и 4,5-диметил-2-фуроилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 381,25.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ млн.д. 7,57-7,62 (м, 1H), 7,42-7,53 (м, 2H), 7,32-7,40 (м, 1H), 7,00 (с, 1H), 5,32 (с, 2H), 4,14-4,30 (м, 4H), 2,32 (с, 3H), 2,01 (с, 3H).

Пример 4.

[3-[2-(3-Хлорфенил]этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-[3-(трифторметил)фенил]метанон

Из Соединения 2a и 3-трифторметилбензоилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 431,21.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ млн.д. 7,74-7,86 (м, 2H), 7,60-7,72 (м, 2H), 7,57 (т, 1H), 7,48 (дт, 1H), 7,41-7,46 (м, 1H), 5,01 (д, 2H), 4,00-4,33 (м, 4H).

Пример 5.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(м-толил)метанон.

Из Соединения 2a и 3-метилбензоилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 377,11.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,81 (т, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,49-7,56 (м, 1H), 7,26-7,42 (м, 4H), 4,92 (с, 2H), 4,22 (т, 2H), 3,69-4,06 (м, 2H), 2,37 (с, 3H).

Пример 6.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]фенилметанон.

Из Соединения 2a и бензоилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 363,15.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,81 (т, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,59-7,64 (м, 1H), 7,44-7,58 (м, 6H), 4,93 (с, 2H), 4,23 (т, 2H), 3,58-4,13 (м, 2H).

Пример 7.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(2-фурил)метанон.

Из Соединения 2a и 2-фуроилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 353,35, 355,38, 356,36.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 4,18 (д, 2H), 4,23-4,33 (м, 2H), 5,09 (шир.с, 2H), 6,70 (дд, J=1,8 Гц, 1H), 7,20 (д, 1H), 7,54 (т, 1H), 7,61 (дд, 1H), 7,67 (дт, 1H), 7,82 (т, 1H), 7,93 (д, 1H).

Пример 8.

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7ил]метанон.

Из Соединения 2a и 3-хлорбензоилхлорида.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 397,09, 399,07, 400,06.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,81 (т, 1H), 7,45-7,70 (м, 8H), 4,94 (с, 2H), 4,21 (т, 2H), 3,584,11 (м, 2H).

В соответствии с тем же способом, который описан выше для соединения Примера 2, следующие соединения получали из Соединения 2a путем взаимодействия с подходящим хлорформамидом, или хлорформиатом, или изоцианатом, или реактивным карбонатом, или другими ацилирующими реагентами.

Пример 9.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]морфолинометанон.

Из Соединения 2a и 4-морфолинкарбонилхлорида. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 372,57, 374,52, 375,54.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 3,21-3,28 (м, 4H), 3,56-3,63 (м, 4H), 3,66 (т, 2H), 4,18 (т, 2H), 4,57 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, J=1,0 Гц, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 10.

[3-[(Z)-1 -Хлор-2-(3 -хлорфенил)винил] -6,8-дигидро-5Н-[1 ,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7ил]морфолинометанон.

Из Соединения 2a и 4-морфолинкарбонилхлорида. Получен как побочный продукт соединения Примера 9.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 408,40, 410,43, 411,37.

- 21 040603 ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 3,26 (т, 4H), 3,57-3,68 (м, 6H), 4,18 (т, 2H), 4,58 (с, 2H), 7,33 (с, 1H), 7,51-7,58 (м, 2H), 7,79-7,85 (м, 1H), 7,92-7,96 (м, 1H).

Пример 11.

[3-[2-(3 -Хлорфенил)этинил] -6,8-дигидро-5Н-[1 ,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7 -ил]-(1 пиперидил)метанон.

Из Соединения 2a и 4-пиперидинкарбонилхлорида. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 370,61, 372,57, 373,58.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,44-1,62 (м, 6H), 3,19-3,27 (м, 4H), 3,61 (т, 2H), 4,17 (т, 2H), 4,52 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 12.

[3-[2-(3 -Хлорфенил)этинил] -6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7 -ил] -пирролидин-1 -илметанон.

Из Соединения 2a и 1-пирролидинкарбонилхлорида. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 356,54, 358,57, 359,58.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,73-1,85 (м, 4H), 3,32-3,40 (м, 4H), 3,68 (т, 2H), 4,16 (т, 2H), 4,56 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 13.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N-(2,2-диметилпропил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин7-карбоксамид.

Из Соединения 2a и 1-изоцианато-2,2-диметилпропана. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 372,15, 374,13, 375,13.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 7,79-7,86 (м, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,58-7,63 (м, 1H), 7,48-7,56 (м, 1H), 6,78 (т, 1H), 4,79 (с, 2H), 4,11 (т, 2H), 3,85 (т, 2H), 2,93 (д, 2H), 0,83 (с, 9H).

Пример 14.

2,2-Диметилпропил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Из Соединения 2a и 2,2-диметилпропилкарбонохлоридата. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 373,14, 375,13.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,81 (т, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,58-7,63 (м, 1H), 7,50-7,57 (м, 1H), 4,81 (с, 2H), 4,18 (т, 2H), 3,90 (т, 2H), 3,79 (с, 2H), 0,95 (с, 9H).

Пример 15.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N,N-диэтил-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 2a и диэтиламинокарбонилхлорида. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 358,57, 360,60, 361,61.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,09 (т, 6H), 3,22 (кв., 4H), 3,60 (т, 2H), 4,16 (т, 2H), 4,48 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 16.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N,N-диметил-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 2a и диметиламинокарбонилхлорида. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 330,57, 332,53, 333,55.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,84 (с, 6H), 3,62 (т, 2H), 4,17 (т, 2H), 4,51 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 17.

Метил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Из Соединения 2a и метилхлороформиата, с получением соединение Примера 17 в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 317,3, 319,3, 320,4.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 3,69 (с, 3H), 3,87 (т, 2H), 4,16 (т, 2H), 4,79 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 18.

[3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(2,2-диметилморфолин-4-ил)метанон.

Из Соединения 2a и 2,2-диметилморфолин-4-карбонилхлорида.

Пример 19.

Тетрагидропиран-4-ил-3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Из Соединения 2a и (2,5-диоксопирролидин-1-ил)тетрагидропиран-4-илкарбоната (US 2016/0250276). Получен в виде белого твердого вещества.

- 22 040603

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 387,28, 389,26, 390,25.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,81 (т, 1H), 7,59-7,70 (м, 2H), 7,50-7,57 (м, 1H), 4,76-4,89 (м, 3H), 4,17 (т, 2H), 3,89 (т, 2H), 3,76-3,84 (м, 2H), 3,49 (ддд, 2H), 1,82-1,95 (м, 2H), 1,60 (дтд, 2H).

Пример 20.

3-[2-(3 -Хлорфенил)этинил] -N-(2-изопропокси-1,1 -диметилэтил)-6,8-дигидро-5H-[ 1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксамид.

Белое твердое вещество, из Соединения 2a и (2,5-диоkсоnирролидин-1-ил)-N-(2-изопроnоkси-1,1диметилэтил)карбамата, который, в свою очередь, получали следующим образом.

К перемешиваемому раствору бис-(2,5-диоксопирролидин-1-ил)карбоната (0,99 ммоль, 253,8 мг) в безводном MeCN (5 мл) при комнатной температуре добавляли 1-изопропокси-2-метилпропан-2-амин (0,76 ммоль, 100 мг) и полученную смесь перемешивали в тех же условиях в течение 2 ч. ЖХ/МС показала полную конверсию, так что смесь концентрировали при пониженном давлении и остаток разбавляли водным раствором NaHCO₃ и экстрагировали при помощи EtOAc. Объединенные экстракты промывали насыщенным солевым раствором и сушили над Na₂SO₄. Выпаривание растворителя давало 2,5-диоксопирролидин-1-ил) N-(2-изопропокси-1,1-диметилэтил)карбамат 200 мг в виде белого твердого вещества, которое использовали без дополнительной очистки.

Пример 20.

Аналитические данные:

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 416,18, 418,16, 419,15.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 7,79-7,83 (м, 1H), 7,59-7,68 (м, 2H), 7,53 (дд, 1H), 6,14 (с, 1H), 4,72 (с, 2H), 4,10 (т, 2H), 3,81 (т, 2H), 3,47 (спт, 1H), 3,42 (с, 2H), 1,23 (с, 6H), 1,03 (д, 6H).

Пример 21.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N-(2-пиридил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 2a и (2,5-диоксопирролидин-1-ил)-N-(2-пиридил)карбамата (US 20070049618, с. 110). Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 379,27, 381,25, 382,24.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 9,63 (с, 1H), 8,28 (дт, 1H), 7,82 (т, 1H), 7,77-7,81 (м, 1H), 7,697,76 (м, 1H), 7,67 (дт, 1H), 7,58-7,64 (м, 1H), 7,50-7,57 (м, 1H), 7,02 (ддд, 1H), 4,92 (с, 2H), 4,16-4,25 (м, 2H), 4,01 (т, 2H).

Пример 22.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N-(2-метоксиэтил)-N-метил-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триαзоло[4,3a]пиразин-7-карбоксамид.

Из Соединения 2a и N-(2-метоксиэтил)-N,3-диметилимидазол-3-ий-1-карбоксамид йодида (закупленный). Получен в виде коричневатого масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 374,0, 376,06, 377,12.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,90 (с, 3H), 3,25 (с, 3H), 3,36 (т, 2H), 3,49 (т, 2H), 3,62 (т, 2H), 4,16 (т, 2H), 4,50 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

Пример 23.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N-этил-N-метил-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 2a и 1-[этил(метил)карбамоил]-3-метил-1H-имидазол-3-ий йодида. Получен в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 344,11, 346,12, 347,22.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,09 (т, 3H), 2,84 (с, 3H), 3,21 (кв., 2H), 3,61 (дд, 2H), 4,17 (дд, 2H), 4,49 (с, 2H), 7,53 (дд, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,66 (ддд, 1H), 7,81 (дд, 1H).

Пример 24.

3-[2-(3-Хлорфенил)этинил]-N-метокси-N-метил-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 2a и N-метокси-N-метилкарбамоилхлорида. Продукт выделяли в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 346,38, 348,41, 349,42.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,94 (с, 3H), 3,63 (с, 3H), 3,85 (т, 2H), 4,18 (т, 2H), 4,76 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,61 (ддд, 1H), 7,67 (дт, 1H), 7,82 (т, 1H).

Пример 25.

Этил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Из Соединения 2a и этилхлороформиата. Продукт выделяли в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 331,4, 333,4, 334,4.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,24 (т, 3H), 3,87 (т, 2H), 4,12 (т, 2H), 4,16 (дд, 2H), 4,79 (с, 2H), 7,53 (т, 1H), 7,59-7,64 (м, 1H), 7,66 (дт, 1H), 7,81 (т, 1H).

- 23 040603

Пример 26.

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7ил]метанон.

3-Бром-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил)-(3-хлорфенил)метанон (Соединение 26a).

К раствору 3-бром-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразингидрохлорида (4,18 ммоль, 1 г) в CH₂Cl₂ (30 мл), охлажденному при 0°C, добавляли TEA (12,53 ммоль, 1,268 г, 1,61 мл) с последующим добавлением 3-хлорбензоилхлорида (6,26 ммоль, 0,80 мл, 1,096 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3ч. Затем добавляли воду, две фазы разделяли, органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали при помощи Biotage Isolera One, тип картриджа SNAP50, используя градиент от EtOAc 100% до EtOAc:MeOH 8:2. Собирали 1320 г указанного в заголовке соединения (желтое масло).

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7ил]метанон.

К раствору соединения 26a (150 мг, 0,44 ммоль) в DMF (1 мл) в MW сосуде добавляли 2-этинил-6метилпиридин (0,88 ммоль, 102,9 мг) с последующим добавлением ацетата натрия 3H2O (0,88 ммоль, 119,5 мг) и тетракис-(трифенилфосфин)палладия (0,022 ммоль, 25,38 мг) и смесь нагревали при микроволновом облучении в микроволновой печи Biotage Initiator 8® при 120°C в течение 15 мин. Затем добавляли воду, две фазы разделяли, органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали при помощи Biotage Isolera Four (соединенного с детектором Dalton MS), тип картриджа SNAP25 (для всех режимов), используя градиент от EtAcO 100% до EtAcO:MeOH 8:2. Собирали 20 мг указанного в заголовке соединения (коричневое масло) вместе с примесями. Затем образец повторно очищали колоночной хроматографией с обращенной фазой, тип картриджа SNAP12, используя градиент от NH4HCO3 буфер:MeCN 85:15 до NH4HCO3 буфер:MeCN 1:1. Собирали 9 мг желаемого соединения (белый порошок).

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 378,28, 380,17, 381,34.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,62-7,71 (м, 1H), 7,45-7,55 (м, 3H), 7,43 (т, 1H), 7,31-7,39 (м, 1H), 7,23 (д, 1H), 5,02 (шир.с, 2H), 4,23-4,37 (м, 2H), 3,94-4,21 (м, 2H), 2,62 (с, 3H).

Используя способ, описанный выше для примера 26, и заменяя 2-этинил-6-метилпиридин подходящим алкином, получали следующие соединения.

Пример 27.

3-[2-[7-(3-Хлорбензоил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-3-ил]этинил]бензонитрил.

Из Соединения 26a и 3-этинилбензонитрила. Получен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 388,18, 390,25, 391,06.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 7,88 (т, 1H), 7,83 (дт, 1H), 7,75 (дт, 1H), 7,55-7,63 (м, 1H), 7,48-7,55 (м, 2H), 7,45 (т, 1H), 7,35-7,40 (м, 1H), 5,04 (с, 2H), 3,96-4,31 (м, 4H).

Пример 28.

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(4-хлор-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7ил]метанон.

Из Соединения 26a и 4-хлор-2-этинилпиридина, с использованием бис-(трифенилфосфин)палладий(П) дихлорида вместо тетракис-(трифенилфосфин)палладия. Продукт выделяли в виде темного порошка.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 398,21, 400,19, 401,10.

1H ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ млн.д. 8,58 (д, 1H), 7,66 (д, 1H), 7,32-7,57 (м, 6H), 5,04 (с, 2H), 4,22-4,36 (м, 2H), 4,12 (с, 1H).

Пример 29.

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(3-фторфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 26a и 1-этинил-3-фторбензола. Получен в виде белого твердого вещества.

Пример 30.

(3-Хлорфенил)-[3-(2-циклогексилэтинил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 26a и циклогексилацетилена. Выделен в виде желтого светлого масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 369,18, 371,25.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 7,43-7,63 (м, 4H), 4,58-5,09 (м, 2H), 3,96-4,14 (м, 2H), 3,593,95 (м, 2H), 2,75-2,87 (м, 1H), 1,26-1,93 (м, 10H).

Пример 31.

(3-Хлорфенил)-[3-(2-фенилэтинил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 26a и фенилацетилена. Выделен в виде желтого масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 363,15, 365,13.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ млн.д. 7,32-7,64 (м, 9H), 5,02 (д, 2H), 4,03-4,26 (м, 4H).

- 24 040603

Пример 32.

трет-Бутил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-карбоксилат.

Используя способ, описанный выше для Примера 1 и заменяя 1-хлор-3-этинилбензол 3-толилацетиленом, получали указанное в заголовке соединение в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 339,64.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,45 (с, 9H), 2,36 (с, 3H), 3,82 (т, 2H), 4,11 (т, 2H), 4,73 (с, 2H), 7,31-7,42 (м, 2H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 33.

[3-[2-(м-Толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(1-пиперидил)метанон гидрохлорид.

3-[2-(м-Толил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин(Соединение 33a).

Раствор соединения Примера 32 (187 мг, 0,553 ммоль) в 4,4 М HCl в изопропаноле (5,03 мл, 22,1 ммоль) перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после этого его упаривали досуха в вакууме с получением 170 мг указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества, используемого на следующей стадии без дополнительной очистки.

[3-[2-(м-Толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]-(1-пиперидил)метанон.

К суспензии соединения 33a (50 мг, 0,21 ммоль) добавляли TEA (87,5 мкл, 0,63 ммоль) при перемешивании с последующим добавлением 1-пиперидинкарбонилхлорида. Раствор перемешивали в течение 16 ч. Затем неочищенный продукт, полученный выпариванием растворителя, очищали при помощи автоматизированной флэш-хроматографии (Biotage Isolera One®), используя градиент от EtOAc 100% до EtOAc:MeOH 8:2, получая 32 мг смолистого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 359,59.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,39-1,61 (м, 6H), 2,35 (с, 3H), 3,06-3,26 (м, 4H), 3,60 (т, 2H), 4,14 (т, 2H), 4,50 (с, 2H), 7,34 (д, 1H), 7,38 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,49-7,52 (м, 1H).

Следуя методу синтеза, описанному для соединения Примера 33, и заменяя 1-пиперидинкарбонилхлорид подходящим ацилирующим реагентом, получали следующие соединения.

Пример 34.

2-Фурил-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 33a и 2-фуроилхлорида. Выделен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 333,46.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 2,35 (с, 3H), 4,16 (шир.с, 2H), 4,23 (д, 2H), 5,07 (шир.с, 2H), 6,69 (дд, 1H), 7,19 (дд, 1H), 7,32-7,36 (м, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H), 7,92 (дд, 1H).

Пример 35.

N,N-Диэтил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксамид.

Из Соединения 33a и диэтиламинокарбонилхлорида. Выделен в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 338,55.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,08 (т, 6H), 2,35 (с, 3H), 3,21 (кв., 4H), 3,58 (т, 2H), 4,13 (т, 2H), 4,45 (с, 2H), 7,34 (д, 1H), 7,38 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,50 (с, 1H).

Пример 36.

N,N-Диметил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло [4,3-a]пиразин-7-карбоксамид.

Из Соединения 33a и диметиламинокарбонилхлорида. Продукт выделяли в виде смолистого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 310,49.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,36 (с, 3H), 2,84 (с, 6H), 3,62 (т, 2H), 4,15 (т, 2H), 4,50 (с, 2H), 7,35 (д, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,48 (д, 1H), 7,52 (с, 1H).

Пример 37.

N-Метокси-N-метил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 33a и К-метокси-К-метилкарбамоилхлорида. Продукт выделяли в виде смолистого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 326,51.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 2,36 (с, 3H), 2,94 (с, 3H), 3,62 (с, 3H), 3,85 (т, 2H), 4,15 (т, 2H), 4,75 (с, 2H), 7,35 (д, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,48 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 38.

N-Изопропил-N-метил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 33a и К-изопропил-К,3-диметилимидазол-3-ий-1-карбоксамид йодида. Продукт выделяли в виде бледно-желтого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 338,43.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ млн.д. 1,19 (д, 6H), 2,38 (с, 3H), 2,79 (с, 3H), 3,68 (т, 2H), 4,04-4,17 (м, 1H), 4,20 (т, 2H), 4,65 (с, 2H), 7,19-7,33 (м, 2H), 7,35-7,43 (м, 2H).

- 25 040603

Пример 39.

N-(2-Метоксиэтил)-N-метил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 33a и N-(2-Метоксиэтил)-N,3-диметилимидазол-3-ий-1-карбоксамид йодида (закупленный). Продукт выделяли в виде желтого масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 354,26.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 2,36 (с, 3H), 2,90 (с, 3H), 3,25 (с, 3H), 3,34-3,39 (м, 2H), 3,463,52 (м, 2H), 3,62 (с, 2H), 4,14 (т, 2H),4,49 (с, 2H), 7,32-7,36 (м, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 40.

N-Этил-N-метил-3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксамид.

Из Соединения 33a и 1-[этил(метил)карбамоил]-3-метил-1H-имидазол-3-ий йодида. Продукт, отрицательный аллостерический модулятор, выделяли в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 324,28.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,09 (т, 3H), 2,36 (с, 3H), 2,84 (с, 3H), 3,21 (кв., 2H), 3,61 (т, 2H), 4,14 (т, 2H), 4,48 (с, 2H) 7,31-7,37 (м, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 41.

1-Пиперидил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

К раствору соединения 33a (140 мг, 0,588 ммоль) в DCM (15 мл) и DIPEA (206 мкл, 1,18 ммоль) по каплям добавляли при комнатной температуре раствор трифосгена (69,8 мг, 0,235 ммоль) в 5 мл DCM. Через 5 мин добавляли раствор 1-гидроксипиперидина (89,2 мг, 0,882 ммоль) и DIPEA (103 мкл, 0,59 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли при помощи DCM, органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и упаривали досуха. Очистка автоматической флэш-хроматографией на колонке Biotage Isolera, FLASH 12+, с использованием градиента от PE:EtOAc 2:8 до EtOAc 100% давала 13 мг белого смолистого твердого вещества, которое повторно очищали на колонке SNAP 12 RP с градиентом от NH4HCO3 буфер:ACN 6:4 до NH4HCO3 буфер:ACN 1:1. Получали 6 мг указанного в заголовке соединения в виде смолистого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]⁺ = 366,79.

% ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ млн.д. 1,28 (с, 1H), 1,65 (шир.с, 1H), 1,74-1,88 (м, 4H), 2,39 (с, 3H), 2,70 (шир.с, 2H), 3,46 (шир.с, 2H), 3,97 (т, 2H), 4,14 (т, 2H), 4,91 (с, 2H), 7,20-7,36 (м, 2H), 7,36-7,46 (м, 2H).

Пример 42.

Морфолино-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 33a и 1-морфолинокарбонилхлорида, с выделением продукта в виде белого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]⁺ = 352,48.

% ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,35 (с, 3H), 3,25 (т, 4H), 3,59 (т, 4H), 3,65 (т, 2H), 4,15 (т, 2H), 4,55 (с, 2H), 7,34 (д, 1H), 7,38 (т, 1H), 7,46 (д, 1H), 7,49-7,52 (м, 1H).

Пример 43.

(3-Хлорфенил)-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-ил]метанон.

Из Соединения 33a и бензоилхлорида, с выделением продукта в виде бежевого твердого вещества. СВЭЖХ-МС [M+H]⁺ = 377,43.

% ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,36 (с, 3H), 3,68-4,00 (м, 2H), 4,19 (т, 2H), 4,61-5,33 (м, 2H), 7,33-7,42 (м, 2H), 7,45-7,57 (м, 4H), 7,57-7,64 (м, 2H).

Пример 44.

[3-[2-(м-Толил)этинил] -6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7 -ил]пирролидин-1 -илметанон.

Из Соединения 33a и 1-пирролидинкарбонилхлорида, с выделением продукта в виде смолистого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]⁺ = 336,52.

% ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,74-1,81 (м, 4H), 2,34 (с, 4H), 3,21-3,46 (м, 2H), 3,66 (т, 3H), 4,12 (т, 2H), 4,52 (с, 2H), 7,33 (д, 1H), 7,37 (т, 1H), 7,46 (д, 1H), 7,49 (с, 1H).

Пример 45.

Этил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Из Соединения 33a и этилхлороформиата, с выделением продукта в виде белого твердого вещества. СВЭЖХ-МС [M+H]⁺ = 311,58.

% ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,24 (т, 3H), 2,36 (с, 3H), 3,86 (т, 2H), 4,06-4,20 (м, 4H), 4,78 (с, 2H), 7,35 (д, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 46.

Метил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-карбоксилат.

Из Соединения 33a и метилхлороформиата, с выделением продукта в виде белого твердого вещест

- 26 040603 ва.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 297,61.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 2,36 (с, 3H), 3,69 (с, 3H), 3,86 (т, 2H), 4,13 (т, 2H), 4,78 (с, 2H), 7,35 (д, 1H), 7,39 (т, 1H), 7,47 (д, 1H), 7,51 (с, 1H).

Пример 47.

трет-Бутил 3-[2-(3-циано-5-фторфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Получен с использованием способа, описанного выше для Примера 1, и с заменой 1-хлор-3этинилбензола на 3-циано-5-фторфенилацетилен.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 368,35.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ млн.д. 1,53 (с, 9H), 3,89-4,00 (м, 2H), 4,09-4,16 (м, 2H), 4,90 (с, 2H), 7,45 (ддд, 1H), 7,51-7,56 (м, 1H), 7,66-7,69 (м, 1H).

Пример 48.

трет-Бутил 3-[2-(4-хлор-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Получен с использованием способа, описанного выше для Примера 1, и с заменой 1-хлор-3этинилбензола на 4-хлор-2-этинилпиридин. Продукт выделяли в виде бежевого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 360,38.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ млн.д. 1,53 (с, 9H), 3,92 (т, 2H), 4,17 (т, 2H), 4,90 (с, 2H)7,39 (дд, 1H), 7,61-7,69 (м, 1H), 8,57 (д, 1H).

Пример 49.

трет-Бутил 3-[2-(1-гидроксициклогексил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Получен с использованием способа, описанного выше для Примера 1, и с заменой 1-хлор-3этинилбензола на 1-ацетиленциклогексанол. Продукт выделяли в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 347,62.

1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,26 (дд, 1H), 1,39-1,62 (м, 5H), 1,44 (с, 9H), 1,63-1,74 (м, 2H), 1,85-1,95 (м, 2H), 3,80 (т, 2H), 3,98 (т, 2H), 4,68 (шир.с, 2H), 5,72 (с, 1H).

Пример 50.

трет-Бутил 3-(2-фенилэтинил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Получен с использованием способа, описанного выше для Примера 1, и с заменой 1-хлор-3этинилбензола на фенилацетилен.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 325,43.

Пример 51.

трет-Бутил 3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Получен с использованием способа, описанного выше для Примера 1, и с заменой 1-хлор-3этинилбензола на 6-метил-2-пиридилацетилен.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 340,58.

Следующие соединения получали кислотным расщеплением трет-бутоксикарбонильной группы соединений Примеров 47, 48 и 50, 51, как описано выше, трифторуксусной кислотой, или с использованием HCl в EtOAc или i-PrOH и с последующим ацилированием этил- или метилхлороформиатом или Ν,Ν-диэтилкарбамоилхлоридом, или арилированием 2-хлор-6-метилпиридином, используя стандартную процедуру.

Пример 52.

Этил 3-[2-(3-циано-5-фторфенил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Это соединение можно получить из 3-фтор-5-[2-(5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-3ил)этинил]бензонитрила и этилхлороформиата.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 340,45.

Пример 53.

Этил 3-[2-(4-хлор-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7-карбоксилат.

Из 3-[(4-хлорпиридин-2-ил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина и этилхлороформиата. Продукт выделяли в виде желтоватого масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 332,33, 320,07, 321,08.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl·,) δ млн.д. 1,33 (т, 3H), 3,97 (т, 2H), 4,19 (т, 2H), 4,25 (кв., 2H), 4,95 (с, 2H), 7,39 (дд, 1H), 7,66 (д, 1H), 8,57 (д, 1H).

Пример 54.

Метил 3-[2-(4-хлор-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Из 3-[(4-хлорпиридин-2-ил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразина и метилхло

- 27 040603 роформиата. Продукт выделяли в виде бежевого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 318,05, 334,35, 335,36.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ млн.д. 3,83 (с, 3H), 3,98 (д, 2H), 4,16-4,23 (м, 2H), 4,95 (с, 2H), 7,39 (дд, 1H), 7,66 (д, 1H), 8,58 (д, 1H).

Пример 55.

Метил 3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Из 3-[(6-метилпиридин-2-ил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина и метилхлороформиата. Продукт выделяли в виде коричневатого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 298,38.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 2,52 (с, 3H), 3,69 (с, 3H), 3,87 (т, 2H), 4,15 (т, 2H), 4,79 (с, 2H), 7,39 (д, 1H), 7,60 (д, 1H), 7,78-7,85 (м, 1H).

Пример 56.

Этил 3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин-7карбоксилат.

Из 3-[(6-метилпиридин-2-ил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина и этилхлороформиата. Продукт выделяли в виде коричневатого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 312,38.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ млн.д. 1,24 (т, 3H), 2,52 (с, 3H), 3,87 (т, 2H), 4,08-4,19 (м, 4H), 4,79 (с, 2H), 7,39 (д, 1H), 7,60 (д, 1H), 7,82 (т, 1H).

Пример 57.

N,N-Диэтил-3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триαзоло[4,3-a]пирαзин-7карбоксамид.

Из 3-[(6-метилпиридин-2-ил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина и диэтиламинокарбонилхлорида. Продукт выделяли в виде желтоватого твердого вещества.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 339,42.

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн.д. 1,09 (т, 6H), 2,52 (с, 3H), 3,22 (кв., 4H), 3,60 (т, 2H), 4,16 (т, 2H), 4,48 (с, 2H), 7,39 (д, 1H), 7,60 (д, 1H), 7,82 (т, 1H).

Пример 58.

7-(6-Метил-3-нитро-2-пиридил)-3-(2-фенилэтинил)-6,8-дигидро-5H-[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразин.

Получен путем взаимодействия 3-(фенилэтинил)-5,6,7,8-тетрагидро[1,2,4]триазоло[4,3-a]пиразина и 2-хлор-6-метил-3 -нитропиридина.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 361,18.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCI3) δ млн.д. 2,56 (с, 3H), 3,92 (т, 2H), 4,36 (т, 2H), 4,88 (с, 2H), 6,85 (д, 1H), 7,39-7,50 (м, 3H), 7,60-7,65 (м, 2H), 8,24 (д, 1H).

Пример 59.

трет-Бутил 3-[(3-цианофенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,5-a]пиразин-7(8H)-карбоксилат.

К раствору трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5H-имидазо[1,5-a]пиразин-7-карбоксилата (0,662 ммоль, 200 мг) в безводном DMF (1 мл) в сосуде для микроволновой печи добавляли 3-этинилбензонитрил (0,993 ммоль, 126,23 мг) с последующим добавлением ацетата натрия 3H₂O (1,324 ммоль, 180,14 мг) и тетракис-(трифенилфосфин)палладия (0,033 ммоль, 38,24 мг), сосуд герметично закрывали, продували азотом и смесь нагревали в условиях микроволнового облучения при 120°C в течение 15 мин. Затем добавляли воду, две фазы разделяли, органический слой промывали водой и насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO=, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали при помощи Biotage Isolera One, тип картриджа SNAP25, используя градиент петролейный эфир:EtOAc 1:1 до петролейный эфир:EtOAc 2:8. Собирали 105 мг указанного в заголовке соединения (темное масло).

ВЭЖХ-МС [M+H]+ = 349,4.

Пример 60.

3-({7-[(2,5-Диметилфуран-3-ил)карбонил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-а]пиразин-3-ил}этинил)бензонитрил.

3-[2-(5,6,7,8-Тетрагидроимидазо[1,5-а]пиразин-3-ил)этинил]бензонитрил (Соединение 60а).

К охлажденному на ледяной бане раствору соединения Примера 59 в CHC13 (5 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (6,028 ммоль, 687,3 мг, 0,464 мл) и полученную смесь перемешивали при 60°C в течение 30 мин. После охлаждения при комнатной температуре хлороформ и избыток TFA удаляли при пониженном давлении. Добавляли насыщенный раствор бикарбоната натрия и DCM, две фазы разделяли и водный слой экстрагировали при помощи DCM. Объединенные органические фазы промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Собирали 50 мг указанного в заголовке соединения (коричневатое масло) и использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

ВЭЖХ-МС [M+H]+ = 249,3.

3-({7-[(2,5-Диметилфуран-3-ил)карбонил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-а]пиразин-3-ил}этинил)

- 28 040603 бензонитрил.

К охлажденному на ледяной бане раствору соединения 60a в не содержащем этанола хлороформе (5 мл) добавляли TEA (0,031 г, 0,302 ммоль, 3,00 экв., 0,0422 мл) с последующим добавлением 2,5-диметилфуран-3-карбонилхлорида (0,121 ммоль, 0,016 мл, 0,019 г) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакцию гасили водой, две фазы разделяли, органический слой промывали насыщенным солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и упаривали. Неочищенный остаток очищали при помощи Biotage Isolera One, тип картриджа SNAP10, используя градиент петролейный эфир:EtOAc 6:4 до EtOAc 100%. Собирали 31 мг указанного в заголовке соединения (светло-желтый порошок).

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 371,4.

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ млн.д. 7,83 (т, 1H), 7,78 (дт, 1H), 7,64-7,71 (м, 1H), 7,47-7,56 (м, 1H), 6,98 (с, 1H), 5,98 (с, 1H), 4,88 (с, 2H), 4,17-4,26 (м, 2H), 4,03-4,13 (м, 2H), 2,40 (с, 3H), 2,30 (т, 3H).

Пример 61.

3-{[7-(3-Хлорбензоил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-a]пиразин-3-ил]этинил}бензонитрил.

Получен из соединения 60a и бензоилхлорида способом, описанным выше для соединения Примера 60. Светло-желтый порошок.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 387,8.

1H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ млн.д. 7,82-7,88 (м, 1H), 7,76-7,81 (м, 1H), 7,65-7,71 (м, 1H), 7,47-7,57 (м, 3H), 7,41-7,46 (м, 1H), 7,33-7,39 (м, 1H), 6,98 (br d, 1H), 4,63-5,09 (м, 2H), 3,72-4,38 (м, 4H).

Пример 62.

трет-Бутил 3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,5-a]пиразин-7(8H)-карбоксилат.

Получен способом, описанным выше для соединения Примера 59, с заменой 3-этинилбензонитрила на 3-хлорфенилацетилен. Продукт выделяли в виде темного масла.

СВЭЖХ-МС [M+H]+ = 358,02, 359,99, 361,08.

1H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ млн.д. 1,53 (с, 9H), 3,88 (т, 2H), 4,14 (т, 2H), 4,70 (с, 2H), 6,97 (с, 1H), 7,32 (т, 1H), 7,36-7,40 (м, 1H), 7,45 (дт, 1H), 7,55 (т, 1H).

После снятия BOC защиты с соединения Примера 62 (см. Соединение 60a для способа синтеза) полученное промежуточное соединение 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5a]пиразин подвергали взаимодействию с указанными реагентами, как описано для соединения Примера 60, и получали следующие соединения.

Пример 63.

{3-[(3-Хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,5-a]пиразин-7(8H)-ил}(2,5-диметилфуран-3ил)метанон.

Из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-a]пиразина и 2,5-диметилфуран-3карбонилхлорида. Продукт выделяли в виде бледно-желтого порошка.

Пример 64.

(3-Хлорфенил){3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,5-a]пиразин-7(8H)-ил}метанон.

Из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-a]пиразина и 3-хлорбензоилхлорида. Получен в виде светло-желтого порошка.

Пример 65.

Этил 3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,5-a]пиразин-7(8H)-карбоксилат.

Из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,5-a]пиразина и этилхлороформиата.

Пример 66.

трет-Бутил 3-[(3-цианофенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-карбоксилат.

Получен способом, описанным выше для соединения Примера 59, с использованием трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5H-имидазо[1,2-a]пиразин-7-карбоксилата вместо трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро5H-имидазо[1,5-a]пиразин-7-карбоксилата.

После снятия BOC защиты соединения Примера 66 (см. Соединение 60a для способа синтеза) полученное промежуточное соединение 3-[2-(5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил)этинил]бензонитрил подвергали взаимодействию, как описано для соединения Примера 60, с указанными реагентами и получали следующие соединения:

Пример 67.

3-{[7-(3-Хлорбензоил)-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил]этинил}бензонитрил.

Из 3-[2-(5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил)этинил]бензонитрила и 3-хлорбензоилхлорида.

Пример 68.

3-({7-[(4,5-Диметилфуран-2-ил)карбонил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил}этинил)бензонитрил.

Из 3-[2-(5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил)этинил]бензонитрила и 4,5-диметилфуран-2карбонилхлорида.

- 29 040603

Пример 69.

3-({7-[(2,5-Диметилфуран-3-ил)карбонил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразин-3-ил}этинил)бензонитрил.

Из 3-[2-(5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин-3-ил)этинил]бензонитрила и 2,5-диметилфуран-3карбонилхлорида.

Пример 70.

трет-Бутил 3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-карбоксилат.

Получен по способам, описанным выше для соединения Примера 59, с использованием трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5H-имидазо[1,2-a]пиразин-7-карбоксилата вместо трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро5H-имидазо[1,5-a]пиразин-7-карбоксилата и с использованием 3-хлорфенилацетилена вместо 3-этинилбензонитрила.

После снятия BOC защиты соединения Примера 70 (см. Соединение 60a для способа синтеза) полученное промежуточное соединение 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразин подвергали взаимодействию, как описано для соединения Примера 60, с указанными реагентами и получали следующие соединения.

Пример 71.

3-({3-[(3-Хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-ил}карбонил)бензонитрил.

Из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразина и 3-цианобензоилхлорида.

Пример 72.

{3-[(3-Хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-ил}(2,5-диметилфуран-3ил)метанон.

Из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразина и 2,5-диметилфуран-3карбонилхлорида.

Пример 73.

(3-Хлорфенил){3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-ил}метанон.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразина и 3-хлорбензоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 74.

3-[(3-Хлорфенил)этинил]-N-метокси-N-метил-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-a]пиразина и К-метокси-К-метилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 75.

3-[(3-Хлорфенил)этинил]-К,К-диметил-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и Ν,Ν-диметилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 76.

3-[(3-Хлорфенил)этинил]-К,К-диэтил-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и Ν,Ν-диэтилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 77.

Этил 3-[(3-хлорфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-карбоксилат.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и этилхлороформиата, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 78.

трет-Бутил 3-[(3-метилфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-карбоксилат.

Получали способом, описанным выше для соединения Примера 59, используя трет-бутил 3-бром6,8-дигидро-5Н-имидазо[1,2-а]пиразин-7-карбоксилат вместо трет-бутил 3-бром-6,8-дигидро-5Нимидазо[1,5-а]пиразин-7-карбоксилата и используя 3-метилфенилацетилен вместо 3-этинилбензонитрила.

После снятия BOC защиты соединения Примера 78 (см. Соединение 60а для способа синтеза) полученное промежуточное соединение 3-[2-(м-толил)этинил]-5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразин подвергали взаимодействию, как описано для соединения Примера 60, с указанными реагентами и получали следующие соединения:

Пример 79.

К-Метокси-К-метил-3-[(3-метилфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(м-толил)этинил]-5,6,7,8- 30 040603 тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и N-метокси-N-метилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 80.

N,N-Диметил-3-[(3-метилфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(м-толил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и Ν,Ν-диметилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 81.

Этил 3-[(3-метилфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-а]пиразин-7(8Н)-карбоксилат.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(м-толил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и этилхлороформиата, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 82.

N,N-Диэтил-3-[(3-метилфенил)этинил]-5,6-дигидроимидазо[1,2-a]пиразин-7(8H)-карбоксамид.

Соединение получали другим способом, но его получение из 3-[2-(м-толил)этинил]-5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиразина и Ν,Ν-диэтилкарбамоилхлорида, как предполагается, является предпочтительным.

Пример 83.

Биологический анализ.

Стабильно трансфицированные клеточные линии были созданы с использованием индуцибельных векторов экспрессии, кодирующих рецептор mGlu₅ человека, с использованием ТетрациклинРегулируемой Экспрессирующей системы, (система Т-REx™, Invitrogen, Life Technologies). Открытую рамку считывания (ORF) mGluR5 человека, охватывающую стоп-кодон, клонировали в вектор pcDNA4/TO/myc-His™ A, несущий TetO2. Инсерционный сайт представлял собой HindIII-PstI для рецепторов mGluR5. Полученные конструкции затем трансфицировали в клеточную линию T-REx СНО™ с использованием протокола FuGENE (Roche); клеточная линия СНО T-REx™ стабильно экспрессирует репрессор Tet (из плазмиды pcDNA6/TR) при селекции с использованием бластицидина 10 мкг/мл. Стабильные клоны получали путем селекции с зеоцином 1 мг/мл и выдерживания в среде ULTRA СНО (LONZA) с добавлением диализованного FBS, зеоцина, бластицидина при 37°C, в атмосфере 5% СО₂. Экспрессию рецепторов h-mGluR5 вновь активировали при помощи тетрациклина 1 мкг/мл в течение 18 ч перед экспериментом по связыванию, в то время как экспрессию рецепторов h-mGluR5 вновь активировали при помощи соответственно 3 и 10 нг/мл тетрациклина в течение 18 ч перед экспериментом по определению флуоресценции кальция.

Пример 84.

Анализ связывания радиолиганда на нативном mGluR5 и подтипах рецептора mGluR5.

Сродство к подтипам трансмембранного глутаматного метаботропного рецептора mGluR5 оценивали в соответствии с методами Андерсона (Anderson et а1., J. Pharmacol. Exp. Ther., (2002), Vol. 303(3), p. 1044-51) с некоторыми модификациями. Клонированный mG1uR5 получали путем ресуспендирования клеток СНО T-REx h-mG1uR5 (50 мкг/лунка) в 20 мМ HEPES, 2 мМ MgC1₂, 2 мМ СаС1₂, pH 7,4, которые затем инкубировали в конечном объеме 1 мл в течение 60 мин при 25°C с 4 нМ [³H]MPEP в отсутствие или в присутствии конкурирующих лекарственных средств. Неспецифическое связывание определяли в присутствии 10 мкМ MPEP. Инкубацию останавливали добавлением холодного трис-буфера pH 7,4 и быстрой фильтрацией через фильтры Fi1termat 1204-401 (Perkin E1mer), предварительно обработанные 0,2% полиэтиленимином. Затем фильтры промывали холодным буфером и радиоактивность, оставшуюся на фильтрах, подсчитывали с помощью жидкостной сцинтилляционной спектрометрии (Betap1ate 1204 BS-Wa11ac). Сродство (Ki) соединений по настоящему изобретению к рецептору mG1u₅ составляет от 0,1 до 1000 нМ. Например, соединение Примера 8 имеет Ki=33,75 нМ, а соединение Примера 40 имеет Ki=32 нМ.

Пример 85.

Определение функциональной активности рецептора mG1u₅ путем измерения флуоресценции кальция.

Клетки высевали в 96-луночные планшеты с черными стенками и прозрачным дном при плотности 80000 клеток/лунка в RPMI (без фенолового красного, без L-глутамина; Gibco LifeTechno1ogies, CA) с добавлением 10% диализованного FBS. После 18-часовой инкубации с тетрациклином клетки нагружали 2 мМ Са²⁺-чувствительным флуоресцентным красителем F1uo-4/AM (Mo1ecu1ar Probes) в сбалансированном физиологическом растворе Хэнкса (HBSS, Gibco LifeTechno1ogies, CA) с 20 мкМ Hepes (Sigma) и 2,5 мМ пробенецида (Sigma) в течение 1 ч при 37°C. Клетки промывали три раза HBSS для удаления внеклеточного красителя. Сигналы флуоресценции измеряли с использованием микропланшет-ридера для определения флуоресценции F1exstation III (Mo1ecu1ar Devices) с интервалами отбора проб 1,5 с в течение 60 с.

Эффективность антагониста определяли с использованием EC₈₀ квисквалата, используемого в качестве агониста, и потенцирование активации mG1u₅ определяли с использованием EC₂₀ агониста (квисква

-

Claims

лата или глутамата). Соединения наносили за 10 мин до нанесения агониста. Для исследований связывания и анализа кальция соединения растворяли в DMSO или деминерализованной воде в зависимости от их растворимости. Все указанные дозы были дозами соответствующих солей или оснований. Соединения по настоящему изобретению показали активность положительных или отрицательных аллостерических модуляторов. Например, соединение Примера 8 показало положительную аллостерическую активность EC5₀, равную 294,5 нМ. Например, соединение Примера 40 обладает активностью отрицательного аллостерического модулятора IC₅₀=60,9 нМ.

Статистический анализ.

Кривые ингибирования для тестируемых соединений на нативных и клонированных подтипах mGluR1 и mGluR5 определяли при помощи нелинейного регрессионного анализа с использованием программного обеспечения Prism 4.0 (Graphpad, San Diego, CA). Значения IC₅₀ и псевдо-угловые коэффициенты Хилла определяли при помощи программы. Значения константы ингибирования Ki рассчитывали в соответствии с уравнением K_i=IC₅₀/(1+[L]/K_d), где [L] представляет концентрацию радиолиганда, a K_dпредставляет равновесную константу диссоциации комплекса радиолиганд-рецептор (Cheng et al., Biochem. Pharmacol. (1973), Vol. 22, p. 3099-3108).

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Соединение, выбранное из группы, состоящей из:

ДУ трет-бутил 3-(2-фенилэтинил)-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат

N--N Н₃С трет-бутил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат Ν--Ν Н₃С ° метил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат

N--N Н_ЭС О этил 3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат у/ Н₃С О N-MeTOKCH-N-метил-3 - [2-(м-тол ил)этинил ] - 6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3- а] пиразин-7-карбоксамид

Ν---Ν ° Н₃С Ν,Ν-д иметил-3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксамид N--N Г СТ Н₃С ° Ν,Ν -диэтил-3 - [2-(м-тол ил)этинил ] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксамид

- 32 040603

Ν--Ν ςτ^δ/) Н₃С 2-фурил-[3-[2-(м-толил)этинил]-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] метанон Ν---Ν Н₃С ([3-[2-(м-толил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а]пиразин-7-ил]-( 1 пиперидил)метанон

9^δγ^ο Н₃С [3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8-д игидро-5Н- [1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]- пирролидин-1 -ил-метанон N---Ν 1 j \V А / ⁰ НзС (3 -хлорфенил)- [3 -[2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил]метанон _χχ о Н₃С морфолино- [3 - [2-(м-толил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] метанон Ν---Ν ςτ^δγ-ο Н₃С 1 -пиперидил 3 -[2-(м-толил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат rvAX / ip ί ' ⁴ А |^снз / О А CI трет-бутил 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат Ν---Ν J к 1 о Cl 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-Н N-диметил- 6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3- а] пиразин-7-карбоксамид

- 33 040603 <^СН1 Г ⁰ Cl 3-(2-(3 -хлорфенил)этинил]-Н N-диэтил- 6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3- а] пиразин-7-карбоксамид Cl О [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]пирролидин-1 -ил-метанон ρ^δ_γ0 о [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро- 5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(1- пиперидил)метанон N--N О CI [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]морфолино-метанон

ГУ А’ о Cl трет-бутил 3-[2-(4-хлор-2- пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат oAS Af ^^СНэ К СНз трет-бутил 3-(2-(1- гидроксициклогексил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат

A ii 1 ' уА А/ у/ ^снз CI ° метил 3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат °'^/^СНэ о ° этил 3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат

- 34 040603

Ν--Ν 7/ к (χ Μ 1 ν к у Αγ^ CI ⁰ 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]^-метокси-№метил-6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3а] пиразин-7-карбоксамид / 0 Cl [3 - [2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(2фурил)метанон <^снз у НзС N, Х-диэтил-3-[2-(6-метил-2- пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид CI (3 -хлорфенил)- [3 -[2-(3 - хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7ил] метанон уу Н₃С 0 этил 3-[2-(6-метил-2-пиридил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат ^α^ν'^^ζ°'^°^Η3/ 0 Н₃С метил 3 -[2-(6-метил-2-пиридил)этинил] - 6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3- а] пиразин-7-карбоксилат уу CI о метил 3-[2-(4-хлор-2-пиридил)этинил]-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат АА· CI этил 3 - [2-(4-хлор-2-пиридил)этинил] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксилат

- 35 040603

Cl ο-Ά о (3-хлорфенил)-[3-(2-фенилэтинил)-6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-ил] метанон А К. /// сн₃ Ν трет-бутил 3-[2-(3-циано-5-фтор- фенил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат у Оу' Г ° /// Ν этил 3 - [2-(3 -циано-5 -фтор-фенил)этинил] - 6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 - а] пиразин-7-карбоксилат ГгА ·ί Н₃С ⁰ N-этил-N-метил-3 - [2-(м-тол ил)этинил ] -6,8дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин7-карбоксамид

Ν--Ν н_}с ° ^(2-метоксиэтил)-М-метил-3-[2-(мтолил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид N--N ''н-Д А А X N Ns_x^^CH3 Cl О 3 - [2-(3 -хлорф енил)этинил ] -N-этил-N - метил-6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3- а]пиразин-7-карбоксамид

Ν--Ν г ° 3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-Х-(2метоксиэтил)-Х-метил-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид N-—N С ^Н3 уА МаД’ Н₃С У СНз Ν-изопроп ил-N-метил-3 - [2-(мтолил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид

- 36 040603 ci о 2,2-диметилпропил 3-[2-(3- хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат N---N Л 1 г Т 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-М-(2,2диметилпропил)-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксамид (3-хлорфенил)-[3-(2-циклогексилэтинил)6,8-дигидро-5Н-[ 1,2,4]триазоло[4,3 а] пиразин-7-ил]метанон N— N ρ^Ύχο Cl 0 [3 - [2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]фенил-метанон

N--N Cl О [3 -[2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(мтолил)метанон N--N V А F О (3 -хлорфенил)- [3 -[2-(3 - фторфенил )этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7ил] метанон . JL CI о (3 -хлорфенил)-[3 - [2-(4-хлор-2пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7ил] метанон Cl О ^F [3 - [2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-[3(трифторметил)фенил]метанон

- 37 040603

Ст OyU [ N 3 -(2-(7-(3 -хлорбензоил)-6,8-дигидро-5Н[ 1,2,4]триазоло[4,3 -а] пиразин-3 ил]этинил]бензонитрил Cl тетрагидропиран-4-ил 3-(2-(3- хлорфенил)этинил]-6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7карбоксилат

Н₃С о (3 -хлорфенил)-[3 - [2-(6-метил-2пиридил)этинил] -6,8-дигидро-5Н[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7ил] метанон N---N 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-М-(2-пиридил)6,8-дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3а]пиразин-7-карбоксамид

N--_N - J \\ р 1 Γν \=» L ' А /—^СНз а || [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро- 5Н- [1,2,4]триазоло[4,3 -а] пиразин-7-ил] - (4,5 -диметил-2-фурил)метанон ^С| ° сн₃ 3-[2-(3-хлорфенил)этинил]-М-(2- изопропокси-1,1 -диметил-этил)-6,8- дигидро-5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин- 7-карбоксамид рл А’ [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил]-6,8-дигидро- 5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил]-(4- метил-2-фурил)метанон CI 0 [3-(2-(3 -хлорфенил )этинил] -6,8-дигидро5Н-[1,2,4]триазоло[4,3-а]пиразин-7-ил](2,2-диметилморфолин-4-ил)метанон