EA038940B1 - Менингококковые вакцины - Google Patents
Менингококковые вакцины Download PDFInfo
- Publication number
- EA038940B1 EA038940B1 EA201692554A EA201692554A EA038940B1 EA 038940 B1 EA038940 B1 EA 038940B1 EA 201692554 A EA201692554 A EA 201692554A EA 201692554 A EA201692554 A EA 201692554A EA 038940 B1 EA038940 B1 EA 038940B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- polypeptide
- fhbp
- amino acid
- acid sequence
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 43
- 101710186862 Factor H binding protein Proteins 0.000 claims abstract description 137
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 204
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 200
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 199
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 96
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 72
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 58
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 31
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 17
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 13
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 9
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 7
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 6
- 208000034762 Meningococcal Infections Diseases 0.000 claims description 5
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 5
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 claims description 4
- 241001212279 Neisseriales Species 0.000 claims description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 3
- 101710154607 Azurocidin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000043635 human AZU1 Human genes 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 21
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229960005037 meningococcal vaccines Drugs 0.000 abstract description 3
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 abstract description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 74
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 72
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 72
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 70
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 69
- 108700007374 Neisseria meningitidis NHBA Proteins 0.000 description 37
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 31
- 229940090821 bexsero Drugs 0.000 description 30
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 30
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 19
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 16
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 10
- 241000040340 Oat mosaic virus Species 0.000 description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 8
- 102220005136 rs33918778 Human genes 0.000 description 8
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid group Chemical group C(CCCCC(=O)O)(=O)O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 7
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 7
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 7
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 7
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 6
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 6
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 6
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 6
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 6
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 6
- 238000011270 sentinel node biopsy Methods 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 102000016550 Complement Factor H Human genes 0.000 description 5
- 108010053085 Complement Factor H Proteins 0.000 description 5
- -1 Opc Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 4
- 239000001361 adipic acid Substances 0.000 description 4
- 235000011037 adipic acid Nutrition 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 4
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N (3beta,5beta,7alpha)-3,7-Dihydroxycholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 RUDATBOHQWOJDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Chemical compound CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- STGOXLCCKKFIGD-UHFFFAOYSA-N 1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3,3-disulfonic acid Chemical compound ON1C(=O)CC(S(O)(=O)=O)(S(O)(=O)=O)C1=O STGOXLCCKKFIGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 description 2
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010062212 Neisseria infection Diseases 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 description 2
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 description 2
- 239000004147 Sorbitan trioleate Substances 0.000 description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 2
- 241000193990 Streptococcus sp. 'group B' Species 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000001948 anti-meningococcal effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 229940009976 deoxycholate Drugs 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000005315 distribution function Methods 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Substances O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 108010094020 polyglycine Proteins 0.000 description 2
- 229920000232 polyglycine polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 2
- 238000006268 reductive amination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009666 routine test Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N (2r)-3-[(2r)-2,3-di(hexadecanoyloxy)propyl]sulfanyl-2-(hexadecanoylamino)propanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CSC[C@H](OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PZFZLRNAOHUQPH-DJBVYZKNSA-N 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZXKALLRCOCGBV-UHFFFAOYSA-N 1-phenyl-2-(propan-2-ylamino)hexan-1-one Chemical compound CCCCC(NC(C)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 AZXKALLRCOCGBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 3h-imidazo[4,5-h]quinoline Chemical class C1=CN=C2C(N=CN3)=C3C=CC2=C1 RHKWIGHJGOEUSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AIHDUTVBOYDXOW-UHFFFAOYSA-N 4-(dimethylamino)pyridin-1-ium-1-carbonitrile Chemical compound CN(C)C1=CC=[N+](C#N)C=C1 AIHDUTVBOYDXOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-N 4-nitrobenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 OTLNPYWUJOZPPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030009 Azurocidin Human genes 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 231100000699 Bacterial toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 description 1
- 241001529572 Chaceon affinis Species 0.000 description 1
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 description 1
- 241000193163 Clostridioides difficile Species 0.000 description 1
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 101000874355 Escherichia coli (strain K12) Outer membrane protein assembly factor BamA Proteins 0.000 description 1
- 108010084884 GDP-mannose transporter Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000737574 Homo sapiens Complement factor H Proteins 0.000 description 1
- 108010035210 Iron-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008133 Iron-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N Leu-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O NFNVDJGXRFEYTK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N Lithocholsaeure Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)CC2 SMEROWZSTRWXGI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003231 Lowry assay Methods 0.000 description 1
- 238000009013 Lowry's assay Methods 0.000 description 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 229940124904 Menactra Drugs 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 206010027249 Meningitis meningococcal Diseases 0.000 description 1
- 201000010924 Meningococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001086520 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) Outer membrane protein class 4 Proteins 0.000 description 1
- 101100446533 Neisseria meningitidis serogroup B (strain MC58) fhbP gene Proteins 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 101710171321 Neuraminyllactose-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 1
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010081690 Pertussis Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 101710084578 Short neurotoxin 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000269319 Squalius cephalus Species 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241001505901 Streptococcus sp. 'group A' Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710182223 Toxin B Proteins 0.000 description 1
- 101710182532 Toxin a Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960002684 aminocaproic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000000688 bacterial toxin Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N chenodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-BSWAIDMHSA-N 0.000 description 1
- 229960001091 chenodeoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000007398 colorimetric assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940028617 conventional vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000011536 extraction buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229930186900 holotoxin Natural products 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000045512 human CFH Human genes 0.000 description 1
- 229940042795 hydrazides for tuberculosis treatment Drugs 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N lithocholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 SMEROWZSTRWXGI-HVATVPOCSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- RYRIMPODRHVEIW-UHFFFAOYSA-N n-(2-phenylethyl)nitramide Chemical compound [O-][N+](=O)NCCC1=CC=CC=C1 RYRIMPODRHVEIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002868 norbornyl group Chemical group C12(CCC(CC1)C2)* 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000001312 palmitoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 1
- 238000012503 pharmacopoeial method Methods 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-UTLSPDKDSA-N ursocholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-UTLSPDKDSA-N 0.000 description 1
- RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N ursodeoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)CC1 RUDATBOHQWOJDD-UZVSRGJWSA-N 0.000 description 1
- 229960001661 ursodiol Drugs 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Менингококковые вакцины могут быть улучшены посредством включения совокупности аллелей или вариантов fHbp для обеспечения более широкого покрытия разнообразия, известного для данного белка, и/или посредством уменьшения количества OMV-компонента в каждой дозе.
Description
Предшествующий уровень техники
Neisseria meningitidis представляет собой грамотрицательную инкапсулированную бактерию, колонизирующую верхние дыхательные пути приблизительно 10% человеческой популяции. Существуют конъюгатные вакцины против серогрупп А, С, W135 и Y, но единственной доступной вакциной для защиты от серогруппы В в целом является продукт BEXSERO™, утвержденный в 2013 г. Этот продукт содержит четыре основных иммуногенных компонента: белок, связывающийся с фактором Н, fHbp; гепарин-связывающий белок, NHBA; нейссериальный адгезии A, NadA; и везикулы наружной мембраны (OMV).
Краткое изложение сущности изобретения
Один аспект изобретения представляет собой иммуногенную композицию, содержащую слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1 (вариант 1), v2 (вариант 2) и v3 (вариант 3) fHbp в комбинации с одним или более чем одним из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) менингококковых везикул наружной мембраны.
Другой аспект изобретения представляет собой иммуногенную композицию, содержащую менингококковые везикулы наружной мембраны в комбинации с одним или более чем одним из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) слитого полипептида, содержащего все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp; где везикулы наружной мембраны (OMV) присутствуют в концентрации 5-30 мкг/мл. Конкретно, слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp, представляет собой стабилизированный и/или несвязывающийся слитый полипептид fHbp. Конкретнее, v1 fHbp содержит мутацию в положении R41, например мутацию R41S. Еще конкретнее, полипептиды v2 и v3 fHbp содержат одну или более чем одну стабилизирующую мутацию и/или мутацию, препятствующую связыванию с фактором Н (fH), в следующих положениях, пронумерованных в соответствии с полноразмерными последовательностями (SEQ ID NO: 2 и 3), а также в соответствии с AG-последовательностями (SEQ ID NO: 8 и 9)
| Стабилизирующие | Препятствующие связыванию c fH | |||
| v2 | SEQ ID NO:2 | Ser-58 | Leu-149 | Glu-266 |
| SEQ ID NO:8 | Ser-32 | Leu-123 | Glu-240 | |
| v3 | SEQ ID NO:3 | Ser-63 | Leu-157 | Glu-274 |
| SEQ ID NO:9 | Ser-32 | Leu-126 | Glu-243 |
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой иммуногенную композицию, содержащую слитый полипептид, имеющий аминокислотную последовательность формулы
NH2-A-[-X-L]3-B-COOH, где каждый X представляет собой последовательность конкретного варианта fHbp, L представляет собой возможную линкерную аминокислотную последовательность, А представляет собой возможную N-концевую аминокислотную последовательность и В представляет собой возможную С-концевую аминокислотную последовательность.
Другой аспект настоящего изобретения представляет собой способ защиты млекопитающего, такого как человек, от менингококковой инфекции, включающий введение иммуногенной композиции по изобретению.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показана RCD (обратная функция распределения) - кривая с долей по оси у (от 0,0 до 1,0) и SBA (сывороточный бактерицидный анализ) - титром по оси х (от 0 до 256 с шагом 16). Верхняя кривая соответствует группе С; группой, достигающей 0,0 раньше всех, является группа S;
на фиг. 2 представлена схема стабилизирующих мутаций и мутаций, препятствующих связыванию с фактором Н (fH), вводимых в полипептиды v1, v2 и v3 fHbp с получением слитых белков 731 S и 731 SNB;
на фиг. 3(а)-(g) показано, что композиции, содержащие слитый полипептид 741-231 (SEQ ID NO: 10) и 1/4OMV, обеспечивают более высокие GMT (средние геометрические титры), чем BEXSERO™, против семи включенных в анализ штаммов (3а-v2, 3b-v2, 3c-v3, 3d-v3, 3е-v2, 3f-v2, 3g-v3).
Подробное описание изобретения
Для усиления продукта BEXSERO™ было бы предпочтительным дополнительно расширить спектр действия BEXSERO™ против различных менингококковых штаммов (в случае потенциальных сдвигов и мутаций по мере все более широкого применения вакцины), а также снизить частоту редких случаев лихорадки, иногда наблюдаемых при введении вакцины совместно с обычными вакцинами для детей [1]. С этими целями авторы изобретения модифицировали BEXSERO™ двумя способами: (1) включив совокупность аллелей или вариантов fHbp для обеспечения более широкого покрытия разнообразия, известного для данного белка; и (2) уменьшив количество OMV-компонента в каждой дозе. Как показано здесь, эти две модификации действительно приводят к улучшению вакцины.
- 1 038940
Таким образом, в первом воплощении согласно изобретению предложена иммуногенная композиция, содержащая слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp в комбинации с одним или более чем одним из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) менингококковых везикул наружной мембраны.
Кроме того, во втором воплощении согласно изобретению предложена иммуногенная композиция, содержащая менингококковые везикулы наружной мембраны в комбинации с одним или более чем одним из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) слитого полипептида, содержащего все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp, где везикулы наружной мембраны присутствуют в концентрации 5-30 мкг/мл.
Сходным образом, объединяя оба эти воплощения, согласно изобретению предложена иммуногенная композиция, содержащая (1) слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp, (2) полипептид NHBA, (3) полипептид NadA и (4) менингококковые везикулы наружной мембраны в концентрации 5-30 мкг/мл.
Белок, связывающийся с фактором Н (fHbp).
Композиция по изобретению может содержать иммуногенный полипептид fHbp. Продукт BEXSERO™ содержит полипептид fHbp, также известный как 741 (SEQ ID NO: 2536 в ссылке 2; SEQ ID NO: 1 в данной заявке), NMB1870, GNA1870 [3-5], Р2086, LP2086 или ORF2086 [6-8]. 3Dструктура данного белка известна [9, 10], и белок имеет две β-бочки, соединенные коротким линкером. Во многих публикациях сообщено о защитной эффективности этого белка в менингококковых вакцинах, например, см. ссылки 11-15. Этот белок экспрессирован в липидированной форме у многих штаммов во всех серогруппах. Последовательности fHbp сгруппированы в три варианта [3] (обозначенные здесь v1, v2 и v3), и обнаружено, что обычно сыворотка, полученная против одного варианта, является бактерицидной против штаммов, экспрессирующих этот вариант, но неактивна против штаммов, экспрессирующих один из двух других вариантов, т.е. присутствует внутривариантная перекрестная защита, но не межвариантная перекрестная защита (за исключением перекрестной реактивности некоторых v2 и v3).
Для повышения межвариантной перекрестной реактивности последовательность fHbp была конструирована таким образом, чтобы содержать специфичные элементы всех трех вариантов [16]. Тем не менее, вместо применения этого способа в изобретении использован слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp.
v1 fHbp.
Полноразмерный v1 fHbp штамма МС58 имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 1):
MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKL AAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQ DSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIE HLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHI GLAAKQ.
У зрелого липопротеина нет первых 19 аминокислот SEQ ID NO: 1 (подчеркнуты, их удаление приводит к получению SEQ ID NO: 4, начиная с Cys-20). Продукт BEXSERO™ содержит ΔG-форму v1 fHbp, в которой полноразмерная последовательность усечена до остатка 26 (т.е. с удалением полиглицинового участка, и начинается вместо этого с Val-27) с получением SEQ ID NO: 7.
Менингококковый v1 fHbp, используемый в изобретении, будет содержать аминокислотную последовательность, (1) по меньшей мере на i% идентичную SEQ ID NO: 7, и/или (2) содержащую фрагмент SEQ ID NO: 7.
Значение i может быть выбрано из 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более. Предпочтительно, оно составляет 90 (т.е. аминокислотная последовательность по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 7) и более предпочтительно 95.
Длина фрагмента (2) будет обычно составлять по меньшей мере 7 аминокислот, например 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 24, 26, 28, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 или более расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 7. Фрагмент будет обычно содержать по меньшей мере один эпитоп из SEQ ID NO: 7. Идентификация и картирование эпитопов fHbp описаны в литературе [12, 1721]. Обычно полипептид будет содержать по меньшей мере 30 расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 7, и аминокислотная последовательность v1 fHbp будет обычно содержать несколько (например 2, 3, 4, 5 или более) фрагментов SEQ ID NO: 7.
В целом, аминокислотная последовательность может быть по меньшей мере на i% идентична SEQ ID NO: 7 и содержать несколько ее фрагментов.
Последовательность v1 fHbp обычно содержит по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 2, и/или по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 3.
Полипептид, используемый в изобретении и содержащий последовательность v1, способен, после введения подходящему млекопитающему-хозяину (такому как мышь или человек), приводить к выработке антител, способных распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ
- 2 038940
ID NO: 4. Эти антитела будут включать некоторые антитела, не распознающие полипептиды v2 или v3 (например, не будут распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 5, и менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 6), хотя они могут также включать некоторые антитела, перекрестно взаимодействующие с полипептидами v2 и/или v3. В идеальном случае, эти антитела являются бактерицидными для менингококкового штамма, экспрессирующего v1 fHbp, например для штамма МС58 (см. ниже).
v2 fHbp.
Полноразмерный v2 fHbp штамма 2996 имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 2):
MNRTAFCCLSLTAALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKL AAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKIN NPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEH LKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIG IAGKQ.
У зрелого липопротеина нет первых 19 аминокислот SEQ ID NO: 2 (подчеркнуты, их удаление приводит к получению SEQ ID NO: 5), и у ΔG-формы SEQ ID NO: 2 нет первых 26 аминокислот (SEQ ID NO: 8).
Менингококковый v2 fHbp, используемый в изобретении, будет содержать аминокислотную последовательность, (1) по меньшей мере на j% идентичную SEQ ID NO: 8, и/или (2) содержащую фрагмент SEQ ID NO: 8.
Значение у может быть выбрано из 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более. Предпочтительно, оно составляет 90 (т.е. аминокислотная последовательность по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 8) и более предпочтительно 95.
Длина фрагмента по (2) будет обычно составлять по меньшей мере 7 аминокислот, например 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 24, 26, 28, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 или более расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 8. Фрагмент будет обычно содержать по меньшей мере один эпитоп из SEQ ID NO: 8. Идентификация и картирование эпитопов fHbp описаны в литературе (см. выше). Обычно полипептид будет содержать по меньшей мере 30 расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 8, и аминокислотная последовательность v2 fHbp будет обычно содержать несколько (например 2, 3, 4, 5 или более) фрагментов SEQ ID NO: 8.
В целом, аминокислотная последовательность v2 fHbp может быть по меньшей мере на j% идентична SEQ ID NO: 8 и содержать несколько ее фрагментов.
Последовательность v2 fHbp обычно содержит по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 1, и/или по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 3.
Полипептид, используемый в изобретении и содержащий последовательность v2, способен, после введения подходящему млекопитающему-хозяину (такому как мышь или человек), приводить к выработке антител, способных распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 5. Эти антитела будут включать некоторые антитела, не распознающие полипептиды v1 или v3 (например, не будут распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 4, и менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 6), хотя они могут также включать некоторые антитела, перекрестно взаимодействующие с полипептидами v1 и/или v3. В идеальном случае, эти антитела являются бактерицидными для менингококкового штамма, экспрессирующего v2 fHbp, например для штамма М2091 (см. ниже).
v3 fHbp.
Полноразмерный v3 fHbp штамма М1239 имеет следующую аминокислотную последовательность (SEQ ID NO: 3)
MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSI
PQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHS AVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDF TKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSAT VKIGEKVHEIGIAGKQ.
У зрелого липопротеина нет первых 19 аминокислот SEQ ID NO: 3 (подчеркнуты, их удаление приводит к получению SEQ ID NO: 6), и у ΔG-формы SEQ ID NO: 3 нет первой 31 аминокислоты (SEQ ID NO: 9).
Менингококковый v3 fHbp, используемый в изобретении, будет содержать аминокислотную последовательность, (1) по меньшей мере на k% идентичную SEQ ID NO: 9, и/или (2) содержащую фрагмент SEQ ID NO: 9.
Значение k может быть выбрано из 80, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 или более. Предпочтительно, оно составляет 90 (т.е. аминокислотная последовательность по меньшей мере на 90% идентична SEQ ID NO: 9) и более предпочтительно 95.
- 3 038940
Длина фрагмента (2) будет обычно составлять по меньшей мере 7 аминокислот, например 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 24, 26, 28, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 или более расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 9. Фрагмент будет обычно содержать по меньшей мере один эпитоп из SEQ ID NO: 9. Идентификация и картирование эпитопов fHbp описаны в литературе (см. выше). Обычно полипептид будет содержать по меньшей мере 30 расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 9, и аминокислотная последовательность v3 fHbp будет обычно содержать несколько (например 2, 3, 4, 5 или более) фрагментов SEQ ID NO: 9.
В целом, аминокислотная последовательность v3 fHbp может быть по меньшей мере на k% идентична SEQ ID NO: 9 и содержать несколько ее фрагментов.
Последовательность v3 fHbp обычно содержит по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 1, и/или по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, не присутствующую в SEQ ID NO: 2.
Полипептид, используемый в изобретении и содержащий последовательность v3, способен, после введения подходящему млекопитающему-хозяину (такому как мышь или человек), приводить к выработке антител, способных распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 6. Эти антитела будут включать некоторые антитела, не распознающие полипептиды v1 или v2 (например, не будут распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 4, и менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 5), хотя они могут также включать некоторые антитела, перекрестно взаимодействующие с полипептидами v1 и/или v2. В идеальном случае, эти антитела являются бактерицидными для менингококкового штамма, экспрессирующего v3 fHbp, например для штамма М01-240355 (см. ниже).
Слитый полипептид.
В изобретении использован слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp. В результате слитый полипептид может содержать по меньшей мере один эпитоп от каждой из SEQ ID NO: 7, 8 и 9 и после введения млекопитающему-хозяину способен приводить к выработке антител, способных распознавать все три из (1) менингококкового полипептида дикого типа, состоящего из SEQ ID NO: 4, (2) менингококкового полипептида дикого типа, состоящего из SEQ ID NO: 5, и (3) менингококкового полипептида дикого типа, состоящего из SEQ ID NO: 6. В идеальном случае, эти антитела являются бактерицидными для менингококкового штамма, экспрессирующего v1 fHbp, менингококкового штамма, экспрессирующего v2 fHbp, а также менингококкового штамма, экспрессирующего v3 fHbp (например, для каждого из штаммов МС58, М2091 и М01-240355).
Относительно определений, данных выше, там, где это применимо, для слитого полипептида предпочтительно, чтобы i=j=k.
В целом, слитый полипептид fHbp по изобретению имеет аминокислотную последовательность формулы
NH2-A-[-X-L-]3-B-COOH, где каждый X представляет собой последовательность конкретного варианта fHbp, L представляет собой возможную линкерную аминокислотную последовательность, А представляет собой возможную N-концевую аминокислотную последовательность и В представляет собой возможную С-концевую аминокислотную последовательность.
Три группировки X представляют собой последовательности v1, v2 и v3, как обсуждено выше. Они могут присутствовать в любом порядке от N- к С-концу, т.е. v1-v2-v3, v1-v3-v2, v2-v1-v3, v2-v3-v1, v3v1-v2 или v3-v2-v1. Наиболее предпочтительным порядком является v2-v3-v1.
В каждом случае [-X-L-] линкерная аминокислотная последовательность -L- может присутствовать или отсутствовать. Линкерная(ые) последовательность(и) -L- будет(ут) обычно короткой(ими) (например, 20 аминокислот или менее, т.е. 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают короткие пептидные последовательности, облегчающие клонирование, полиглициновые линкеры (т.е. Glyn, где n составляет 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более) и гистидиновые метки (т.е. Hisn, где n составляет 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более). Другие подходящие линкерные аминокислотные последовательности будут очевидны специалистам в данной области. Одним полезным линкером является GSGGGG (SEQ ID NO: 22) с дипептидом Gly-Ser, образующимся из сайта рестрикции BamHI, что способствует клонированию и манипуляциям. Другим полезным линкером является SEQ ID NO: 23, которой может возможно предшествовать дипептид Gly-Ser (SEQ ID NO: 24, из BamHI) или дипептид Gly-Lys (SEQ ID NO: 25, из HindIII).
-А- представляет собой возможную N-концевую аминокислотную последовательность. Она будет обычно короткой (например, 40 аминокислот или менее, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают лидерные последовательности для управления транспортом белков. Если в X1 нет своего собственного N-концевого метионина, -А- может обеспечивать такой метиониновый остаток в транслируемом полипептиде (например, -А- представляет собой одиночный остаток Met). Met может быть расположен на Nконце линкерной последовательности, такой как SEQ ID NO: 23 (т.е. SEQ ID NO: 26), или на N-конце короткой последовательности (например, SEQ ID NO: 27).
- 4 038940
-В- представляет собой возможную С-концевую аминокислотную последовательность. Она будет обычно короткой (например, 40 аминокислот или менее, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают последовательности для управления транспортом белков, короткие пептидные последовательности, облегчающие клонирование или очистку (например, содержащие гистидиновые метки, т.е. Hisn, где n составляет 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более), или последовательности, повышающие стабильность полипептида. Другие подходящие С-концевые аминокислотные последовательности будут очевидны специалистам в данной области. Одной подходящей группировкой -В- является SEQ ID NO: 28, в которой Leu-Glu выше гистидиновой метки имеет происхождение из сайта рестрикции XhoI.
Один слитый полипептид, подходящий для использования в изобретении, содержит SEQ ID NO: 10. В соответствии с приведенной выше формулой в SEQ ID NO: 10 -А- представляет собой SEQ ID NO: 26, X1 представляет собой последовательность v2 fHbp (SEQ ID NO: 8), -L1- представляет собой SEQ ID NO: 24, Х2 представляет собой последовательность v3 fHbp (SEQ ID NO: 9), -L2- представляет собой SEQ ID NO: 22, X3 представляет собой последовательность v1 fHbp (SEQ ID NO: 7) и L3 и В отсутствуют. Три последовательности fHbp в SEQ ID NO: 10 подчеркнуты ниже:
MG Р D S D RLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDS LNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSF LVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAE LKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGPDSDRL QQRRVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGK LKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGL GGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADE
KSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAG LADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQI EVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGR ATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQ AEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ.
Более предпочтительный слитый полипептид для использования в изобретении содержит SEQ ID NO: 29. В соответствии с приведенной выше формулой в SEQ ID NO: 29 -А- представляет собой SEQ ID NO: 26, Х1 представляет собой последовательность v2 fHbp (SEQ ID NO: 8), -Lj-представляет собой SEQ ID NO: 22, X2 представляет собой последовательность v3 fHbp (SEQ ID NO: 9), -L2- представляет собой SEQ ID NO: 22, X3 представляет собой последовательность v1 fHbp (SEQ ID NO: 7) и L3 и В отсутствуют. Три последовательности fHbp в SEQ ID NO: 29 подчеркнуты ниже:
MG P D S D RLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDS LNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSF LVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAE LKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAA DIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKIS RFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTA PLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLI TLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTA FGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYS LGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ.
Таким образом, в идеальном случае в изобретении использован полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 29, но в изобретении может также быть использован полипептид, содержащий SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 29, но модифицированный с использованием до 10 одиночных аминокислотных изменений (т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 отдельных аминокислотных замен, делеций и/или вставок), при условии, что полипептид способен приводить к выработке антител, способных распознавать все три из менингококковых полипептидов дикого типа SEQ ID NO: 4-6, как обсуждено выше. Кроме того, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 29 могут быть модифицированы с изменением их группировки -А- (например, с использованием альтернативы SEQ ID NO: 26); таким образом, полипептид, используемый в изобретении, может содержать SEQ ID NO: 30, возможно модифицированную с использованием до 10 одиночных аминокислотных изменений (как обсуждено выше).
Например, SEQ ID NO: 30 может быть модифицирована для введения точечных мутаций, снижающих способность каждого fHbp взаимодействовать с fH. Например, возможны мутации SEQ ID NO: 30 по остаткам Е240, Е496 и R543 с получением посредством этого SEQ ID NO: 31 (содержащей мутации Е240Х, Е496Х и R543X, где X представляет собой любую аминокислоту, отличающуюся от указанной аминокислоты, т.е. Е240Х относится к любой аминокислоте, отличной от Е, в положении остатка 240).
- 5 038940
Предпочтительным воплощением SEQ ID NO: 31 является SEQ ID NO: 32 (содержащая мутации Е240А,
Е496А, R543S). В изобретении может быть использована SEQ ID NO: 31 (например, SEQ ID NO: 32), возможно модифицированная с использованием до 5 одиночных аминокислотных изменений (как обсуждено выше), при условии, что остатки Е240, Е496 и R543 не присутствуют.
Кроме того, SEQ ID NO: 30 может быть модифицирована для введения точечных мутаций, повышающих стабильность fHbp. Например, возможны мутации SEQ ID NO: 30 по остаткам S32, L123, S285 и L379 с получением посредством этого SEQ ID NO: 33 (содержащей мутации S32X, L123X, S285X и L379X). Предпочтительным воплощением SEQ ID NO: 33 является SEQ ID NO: 34 (содержащая мутации S32V, L123R, S285V, L379R). В изобретении может быть использована SEQ ID nO: 33 (например, SEQ ID NO: 34), возможно модифицированная с использованием до 5 одиночных аминокислотных изменений (как обсуждено выше), при условии, что остатки S32, L123, S285 и L379 не присутствуют. Одним таким полипептидом является SEQ ID NO: 35, в которой последовательность v1 модифицирована для включения мутации, указанной в ссылке 22, например мутации R41S (SEQ ID NO: 36). SEQ ID NO: 35 содержит мутации S32X, L123X, S285X, L379X и R543X и SEQ ID NO: 36 содержит мутации S32V, L123R, S285V, L379R и R543S. Нумерация в названии R41S соответствует зрелому полипептиду v1 (SEQ ID NO: 4), таким образом, например, эта мутация присутствует в слитом полипептиде SEQ ID NO: 35 как R543X и в SEQ ID NO: 36 как R543S.
Эти различные подходы можно комбинировать; таким образом, в изобретении может быть использован полипептид, содержащий SEQ ID NO: 37 (например, полипептид имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 38). SEQ ID NO: 37 и SeQ ID NO: 38 содержат мутации S32V, L123R, Е240А, S285V, L379R, Е496А и R543S. SEQ ID NO: 38 дополнительно содержит SEQ ID NO: 26 на Nконце.
В другом воплощении в изобретении может быть использована SEQ ID NO: 39 (содержащая мутации L123X и L379X), например SEQ ID NO: 40 (содержащая мутации L123R и L379R). Сходным образом, в изобретении может быть использована SEQ ID NO: 39 (например, SEQ ID NO: 40), возможно модифицированная с использованием до 5 одиночных аминокислотных изменений (как обсуждено выше), при условии, что остатки L123 и L379 не присутствуют (например, см. SEQ ID NO: 34, отличающуюся от SEQ ID NO: 40 включением двух замен S/V, как указано выше). Одним таким полипептидом является SEQ ID NO: 41, в которой последовательность v1 модифицирована для включения мутации R41S, и, таким образом, содержит L123R, L379R и R543S. В других воплощениях, когда такие слитые белки присутствуют в композициях по изобретению, OMV могут присутствовать в концентрациях от 2,5 мкг/мл до 12,5 мкг/мл.
Аминокислотные остатки, отмеченные для мутаций выше, указаны относительно конкретных начальных последовательностей. Соответствующие аминокислотные остатки в любой другой последовательности fHbp могут быть легко определены посредством выравнивания последовательностей, например, такой остаток представляет собой аминокислоту, которая, при выравнивании с применением алгоритма попарного выравнивания (например, алгоритма Needleman-Wunsch для выравнивания по всей длине, как подробно описано ниже), соответствует аминокислоте, указанной здесь. Часто аминокислота будет такой же, но выравнивание позволит легко определить, если это будет не так.
В естественных условиях у N.meningitidis fHbp является липопротеином. Также было обнаружено, что он липидирован при экспрессии в Е.соН с его нативной лидерной последовательностью или с гетерологичными лидерными последовательностями. Полипептиды по изобретению могут иметь N-концевой цистеиновый остаток, который может быть липидирован, например содержать пальмитоиловую группу, обычно с образованием трипальмитоил-S-глицерилцистеина. Тем не менее, в обычных воплощениях слитый полипептид по изобретению не липидирован (обычно ввиду того, что N-концевая группировка -А- не приводит к липидированию) у хозяина, используемого для экспрессии.
Нейссериальный гепарин-связывающий антиген (NHBA).
Композиция по изобретению может содержать иммуногенный полипептид NHBA. Антиген NHBA был включен в опубликованную последовательность генома менингококкового штамма серогруппы В МС58 [23] как ген NMB2132 (регистрационный номер в GenBank GL7227388; SEQ ID NO: 11 здесь). После этого были опубликованы последовательности антигена NHBA многих штаммов. Например, аллельные формы NHBA показаны на фиг. 5 и 15 ссылки 24 и в Примере 13 и на фиг. 21 ссылки 2 (SEQ ID NO: 3179-3184 в ссылке 2). Было также сообщено о различных иммуногенных фрагментах антигена NHBA, содержащих ΔG-фрагмент SEQ ID NO: 12. Предпочтительные антигены NHBA для использования в изобретении содержат аминокислотную последовательность: (а) на 60% или более идентичную (например, на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5% или более) SEQ ID NO: 12; и/или (б) содержащую фрагмент из по меньшей мере n расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 12, где n представляет собой 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 или более). Предпочтительные фрагменты (б) содержат эпитоп SEQ ID NO: 12.
Наиболее полезные антигены NHBA по изобретению способны приводить к выработке антител, которые, после введения подходящему млекопитающему-хозяину (такому как мышь или человек), способны связываться с менингококковым полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности
- 6 038940
SEQ ID NO: 13. Предпочтительные антигены NHBA для использования в изобретении способны приводить к выработке бактерицидных противоменингококковых антител после введения субъектумлекопитающему.
Особенно предпочтительный полипептид NHBA для использования в изобретении содержит SEQ ID NO: 12, возможно модифицированную с использованием до 3 одиночных аминокислотных изменений (т.е. 1, 2 или 3 одиночных аминокислотных замен, делеций и/или вставок), при условии, что полипептид способен приводить к выработке антител, способных связываться с SEQ ID NO: 13, как обсуждено выше.
Как и в случае продукта BEXSERO™, полипептид NHBA может полезным образом быть представлен в форме слитого полипептида, например слитым с полипептидом NMB1030. Предпочтительно, в таких слитых полипептидах NMB1030 расположен ниже NHBA. NMB1030 штамма МС58 имеет регистрационный номер в GenBank GL7226269 (SEQ ID NO: 14 здесь). Последовательность NMB1030 для использования в изобретении может содержать аминокислотную последовательность: (а) на 60% или более идентичную (например, на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5% или более) SEQ ID NO: 14; и/или (б) содержащую фрагмент из по меньшей мере n расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 14, где n представляет собой 30 или более. Одним полезным фрагментом NMB1030 является SEQ ID NO: 15.
Один такой слитый полипептид NHBA-NMB1030 имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16. Таким образом, в изобретении может быть использована SEQ ID NO: 16, возможно модифицированная с использованием до 3 одиночных аминокислотных изменений (т.е. 1, 2 или 3 одиночных аминокислотных замен, делеций и/или вставок), при условии, что полипептид способен приводить к выработке антител, способных связываться с SEQ ID NO: 13, как обсуждено выше.
Нейссериальный адгезин A (NadA).
Композиция по изобретению может содержать иммуногенный полипептид NadA. Антиген NadA был включен в опубликованную последовательность генома менингококкового штамма серогруппы В МС58 [23] как ген NMB1994 (регистрационный номер в GenBank GL7227256; SEQ ID NO: 17 здесь). После этого были опубликованы последовательности антигена NadA многих штаммов, и активность белка в качестве адгезина нейссерий была хорошо задокументирована. Было также сообщено о различных иммуногенных фрагментах NadA. Предпочтительные антигены NadA для использования в изобретении содержат аминокислотную последовательность: (а) на 60% или более идентичную (например, на 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5% или более) SEQ ID NO: 17; и/или (б) содержащую фрагмент по меньшей мере из n расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 17, где n представляет собой 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 или более). Предпочтительные фрагменты (б) содержат эпитоп SEQ ID NO: 17.
Наиболее полезные антигены NadA по изобретению способны приводить к выработке антител, которые после введения млекопитающему-хозяину способны связываться с менингококковым полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18. Предпочтительные антигены NadA для использования в изобретении способны приводить к выработке бактерицидных противоменингококковых антител после введения млекопитающему-хозяину.
Особенно предпочтительный полипептид NadA для использования в изобретении имеет SEQ ID NO: 19, возможно модифицированную с использованием до 3 одиночных аминокислотных изменений (т.е. 1, 2 или 3 одиночных аминокислотных замен, делеций и/или вставок), при условии, что полипептид способен приводить к выработке антител, способных связываться с SEQ ID NO: 18, как обсуждено выше.
Менингококковые везикулы наружной мембраны (OMV).
Композиции по изобретению содержат менингококковые OMV, т.е. любые протеолипосомные везикулы, полученные посредством разрыва наружной мембраны менингококков или образования пузырьков из нее с формированием из нее везикул, сохраняющих белковые компоненты наружной мембраны (например, PorA, PorB, RmpM, Opa, Opc, Omp85, FetA/FrpB, NspA и так далее), имеющих диаметр в диапазоне 50-200 нм. Таким образом, термин может включать OMV (иногда называемые пузырьками), а также везикулы, называемые микровезикулами (MV [25]) или нативными OMV (NOMV [26]). См. также ссылки 27-33. Типичные везикулы наружной мембраны получают из бактерий искусственно, и они могут быть получены с применением обработки детергентами (например, дезоксихолатом) или при помощи недерегентных средств (например, см. ссылку 37). Методики получения OMV включают обработку бактерий детергентом на основе солей желчных кислот (например, солей литохолевой кислоты, хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, дезоксихолевой кислоты, холевой кислоты, урсохолевой кислоты и так далее, при этом для обработки нейссерий предпочтителен дезоксихолат натрия [34 и 35]) при рН, достаточно высоком для отсутствия осаждения детергента [36]. Другие методики могут быть осуществлены практически в отсутствие детергентов [37, 38] с применением таких методов, как обработка ультразвуком, гомогенизация, микрофлуидизация, кавитация, осмотический шок, измельчение, френч-пресс, перемешивание и так далее. Методы без использования детергентов или с использованием небольшого количества детергентов позволяют сохранять полезные антигены, такие как NspA и fHbp [37]. Таким образом, OMV, используемые в изобретении, могут быть получены с использованием буфера для экстрагирования OMV, имеющего приблизительно 0,5% дезоксихолата или менее, например
- 7 038940 приблизительно 0,2%, приблизительно 0,1%, менее 0,05% или даже ноль.
Везикулы, известные как MV и NOMV, представляют собой природные мембранные везикулы, образующиеся спонтанно при росте бактерий и высвобождаемые в культуральную среду. MV могут быть получены посредством культивирования нейссерий в жидкой культуральной среде, отделения целых клеток от менее крупных MV в жидкой культуральной среде (например, посредством фильтрации или центрифугирования на низких скоростях для осаждения только клеток, но не более мелких везикул) с последующим сбором MV из среды без клеток (например, посредством фильтрации, дифференциальной преципитации или агрегации MV, центрифугирования на высоких скоростях для осаждения MV). Штаммы для использования в получении MV могут обычно быть отобраны по количеству MV, образуемых в культуре, например, в ссылках 45 и 46 описаны нейссерий с высоким уровнем образования MV.
Везикулы могут быть получены из бактерий, с которыми были проведены генетические манипуляции [39-42], например для повышения иммуногенности (например, сверхэкспрессия иммуногенов), для снижения токсичности, для ингибирования синтеза капсульных полисахаридов, для понижающей регуляции экспрессии PorA и так далее. Они могут быть получены из штаммов с повышенным образованием пузырьков [43-46]. Могут быть использованы везикулы от бактерий с разными подтипами белков наружной мембраны класса I, например шесть разных подтипов [47, 48] при использовании двух разных генетически конструированных популяций везикул, в каждой из которых представлено по три подтипа, или девять разных подтипов при использовании трех разных генетически конструированных популяций везикул, в каждой из которых представлено по три подтипа, и так далее. Полезные подтипы включают Р1.7,16; Р1.5-1,2-2; Р1.19,15-1; Р1.5-2,10; Р1.12-1,13; Р1.7-2,4; Р1.22,14; Р1.7-1,1; Р1.18-1,3,6. Тем не менее, в целом для настоящего изобретения предпочтительно получение OMV из менингококкового штамма дикого типа.
Везикулы для использования в изобретении могут, таким образом, быть получены из любого менингококкового штамма дикого типа. Везикулы будут обычно получать из штамма серогруппы В, но их возможно получать из серогрупп, отличных от серогруппы В (например, в ссылке 36 раскрыт способ для серогруппы А), таких как А, С, W135 или Y. Штамм может представлять собой штамм любого серотипа (например, 1, 2а, 2b, 4, 14, 15, 16 и так далее), любого сероподтипа (например, Р1.4) и любого иммунотипа (например, L1; L2; L3; L3,7; L3,7,9; L10 и так далее). Менингококки могут представлять собой менингококков любой подходящей линии, включая гиперинвазивные и гипервирулентные линии, например любую из следующих семи гипервирулентных линий: подгруппа I; подгруппа III; подгруппа IV-1; комплекс ЕТ-5; комплекс ЕТ-37; кластер А4; линия 3. Наиболее предпочтительно, OMV получают из штамма NZ98/254 или другого штамма с сероподтипом PorA Р1.4. Предпочтительно, в изобретении используют те же OMV, что использованы в продуктах BEXSERO™ и MENZB™, полученные из штамма NZ98/254.
Везикулы будут обычно содержать менингококковые LOS (также известные как LPS), но пирогенный эффект LOS в OMV значительно меньше, наблюдают при таком же количестве очищенных LOS, и адсорбция OMV на гидроксиде алюминия дополнительно снижает пирогенность. Уровни LOS выражают в международных единицах (IU) эндотоксина, и они могут быть оценены с помощью LAL-анализа (лизат амебоцитов мечехвоста). Предпочтительно, LOS присутствуют в количестве менее 2000 IU на мкг белка OMV.
При наличии LOS в везикуле она может быть обработана для связывания ее LOS и белковых компонентов (внутрипузырьковое конъюгирование [49]).
Полезный способ очистки OMV описан в ссылке 50 и включает ультрафильтрацию неочищенных OMV вместо центрифугирования на высоких скоростях. Способ может включать стадию ультрацентрифугирования по завершении ультрафильтрации. OMV могут также быть очищены с применением двухстадийного способа фильтрации по размеру, описанного в ссылке 51.
После получения OMV они могут быть полезным образом суспендированы в растворе сахарозы. Комбинации.
Композиция по изобретению может содержать каждое из: (а) слитого полипептида, содержащего все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp, (б) полипептида NHBA, (в) полипептида NadA и (г) OMV.
В таких комбинациях: (а) слитый полипептид fHbp в идеальном случае содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, но возможно модифицированную с использованием до 10 одиночных аминокислотных изменений, как обсуждено выше; (б) полипептид NHBA в идеальном случае содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12, но возможно модифицированную с использованием до 3 одиночных аминокислотных изменений, как обсуждено выше; и (в) полипептид NadA в идеальном случае содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, но возможно модифицированную с использованием до 3 одиночных аминокислотных изменений, как обсуждено выше.
Более предпочтительно: (а) слитый полипептид fHbp имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; (б) полипептид NHBA содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; и (в) полипептид NadA имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
Еще более предпочтительно: (а) слитый полипептид fHbp имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10; (б) полипептид NHBA имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16;
- 8 038940 и (в) полипептид NadA имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
Полипептиды в композициях по изобретению могут присутствовать в любой концентрации, приводящей к эффективному иммунологическому ответу у хозяина. Эти дозы могут быть определены с помощью обычных тестов, особенно с учетом ориентиров, обеспеченных продуктом BEXSERO™, имеющим полипептиды fHbp, NHBA и NadA, каждый из которых присутствует в количестве 100 мкг/мл. Таким образом, каждый из полипептидов fHbp, NHBA и/или NadA может присутствовать в композиции по изобретению в концентрации от 20 до 400 мкг/мл, например 50-150, 80-120 мкг/мл или приблизительно 100 мкг/мл. Концентрации антигенов легко оценивают количественно с помощью стандартных анализов определения белков.
Сходным образом, OMV в композициях по изобретению могут присутствовать в любой концентрации, приводящей к эффективному иммунологическому ответу у хозяина. Эти дозы могут быть определены с помощью обычных тестов, особенно с учетом ориентиров, обеспеченных продуктом BEXSERO™, в котором OMV присутствуют в количестве 50 мкг/мл. Таким образом, согласно первому воплощению изобретения, OMV могут присутствовать в композиции в концентрации от 20 до 100 мкг/мл, например 30-75, 40-60 мкг/мл или, в идеальном случае, приблизительно 50 мкг/мл. Тем не менее, во втором воплощении изобретения OMV присутствуют в более низкой концентрации, конкретно от 5 до 30 мкг/мл, например от 10 до 15 мкг/мл или, в идеальном случае, приблизительно 12,5 мкг/мл. В определенных воплощениях OMV присутствуют в более низких концентрациях от 2,5 до 12,5, например 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0, 9,5 и 10 мкг/мл.
Количества и концентрации OMV в композициях по изобретению определены таким же образом, как в продукте BEXSERO™, а именно по общему содержанию белка в них. Его можно оценить с применением различных анализов, например, в ссылке 29 раскрыто применение анализа Фолина-Лоури. Общее содержание белка можно анализировать в соответствии с Европейской фармакопеей (European Pharmacopoeia, Ph. Eur), анализ 2.5.33, с применением любого из семи фармакопейных методов. В методе 2 представлен тест Лоури, являющийся предпочтительным. Таким образом, композиция по второму воплощению изобретения содержит OMV при общем содержании белка 5-30 мкг/мл.
Полипептиды.
Полипептиды по изобретению могут быть получены различными способами, например химическим синтезом (по меньшей мере, частично), расщеплением более длинных полипептидов с использованием протеаз, трансляцией с РНК, очисткой из клеточной культуры (например, в результате рекомбинантной экспрессии или из культуры N. meningitidis) и т.д. Предпочтительным способом экспрессии является гетерологичная экспрессия в хозяине Е.coli.
В идеальном случае, длина полипептидов по изобретению составляет по меньшей мере 100 аминокислот, например 150, 175, 200, 225 аминокислот или более. Например, длина слитого полипептида fHbp будет обычно составлять по меньшей мере 500 аминокислот, длина полипептида NHBA будет обычно составлять по меньшей мере 400 аминокислот, и длина полипептида NadA будет обычно составлять по меньшей мере 250 аминокислот.
Полипептиды предпочтительно получают, по существу, в чистой или, по существу, выделенной форме (т.е., по существу, свободными от других полипептидов нейссерий или клеток-хозяев). В целом, полипептиды представлены в среде, не встречающейся в природе, например, они выделены из той среды, в которой они встречаются в природе. В определенных воплощениях полипептид присутствует в композиции, имеющей повышенное содержание этого полипептида по сравнению с исходным материалом. Таким образом, предложен очищенный полипептид, где очищенный означает, что полипептид присутствует в композиции, которая по существу свободна от других экспрессированных полипептидов, где по существу, свободна означает, что более 50% (например, 75% или более, 80% или более, 90% или более, 95% или более или 99% или более) всех полипептидов в композиции представлено полипептидом по изобретению.
Полипептиды могут принимать разные формы (например, нативные, слитые, негликозилированные, липидированные полипептиды, полипептиды с дисульфидными связями и так далее).
Такие последовательности, как SEQ ID NO: 19, не содержат N-концевой метионин. При получении полипептида по изобретению посредством трансляции в биологическом хозяине необходим инициирующий кодон, который у большинства хозяев будет приводить к N-концевому метионину. Таким образом, полипептид по изобретению будет, по меньшей мере, на стадии роста цепи содержать метиониновый остаток выше указанной SEQ ID NO: последовательности.
В некоторых воплощениях полипептид в композиции по изобретению может содержать Nконцевую последовательность выше (по необходимости) последовательности полипептида fHbp, NHBA или NadA. В некоторых воплощениях полипептид имеет одиночный метионин на N-конце, за которым сразу следует аминокислотная последовательность соответствующего иммуногена; в других воплощениях может быть использована более длинная последовательность, находящаяся выше по течению. Такая последовательность, находящаяся выше по течению, может быть короткой (например, 40 аминокислот или менее, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14,
- 9 038940
13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают лидерные последовательности для управления транспортом белков или короткие пептидные последовательности, облегчающие клонирование или очистку (например, гистидиновые метки, т.е. Hisn, где n составляет 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более).
Полипептид по изобретению может также содержать аминокислоты ниже последней аминокислоты аминокислотной последовательности fHbp, NHBA или NadA (по необходимости). Такие С-концевые удлинения могут быть короткими (например, 40 аминокислот или менее, т.е. 39, 38, 37, 36, 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1). Примеры включают последовательности для управления транспортом белков, короткие пептидные последовательности, облегчающие клонирование или очистку (например, содержащие гистидиновую метку, т.е. Hisn, где n составляет 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или более), или последовательности, повышающие стабильность полипептида. Другие подходящие С-концевые аминокислотные последовательности будут очевидны специалистам в данной области.
Термин полипептид относится к аминокислотным полимерам любой длины. Полимер может быть линейным или разветвленным, он может содержать модифицированные аминокислоты, и он может прерываться неаминокислотными компонентами. Термин также включает аминокислотный полимер, модифицированный естественным или искусственным образом; например образованием дисульфидных связей, гликозилированием, липидированием, ацетилированием, фосфорилированием или любой другой манипуляцией или модификацией, такой как конъюгирование с компонентом, содержащим метку. В определение также включены, например, полипептиды, содержащие один или более чем один аналог аминокислот (включая, например, искусственные аминокислоты и так далее), а также другие модификации, известные в данной области. Полипептиды могут иметь форму отдельных цепей или связанных цепей.
Предпочтительно, полипептиды по изобретению экспрессируют рекомбинантно в гетерологичном хозяине (например, Е.coli), затем очищают и затем комбинируют и включают в композицию вместе с OMV с получением композиции по изобретению.
В некоторых воплощениях полипептид содержит аминокислотную последовательность, как описано выше, за исключением того, что до 10 аминокислот (т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) на N-конце и/или до 10 аминокислот (т.е., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10) на С-конце удалены.
Бактерицидные ответы.
Как указано выше, предпочтительные полипептиды и композиции по изобретению способны вызывать гуморальные иммунные ответы, которые являются бактерицидными для менингококков. Бактерицидные гуморальные иммунные ответы обычно измеряют после иммунизации у мышей, и они являются стандартным индикатором эффективности вакцин (см., например, примечание 14 в ссылке 52, а также ссылку 53). Таким образом, антитела будут бактерицидными для анализируемого штамма в подходящем сывороточном бактерицидном анализе (SBA).
Предпочтительно, слитый полипептид fHbp способен вызывать гуморальный иммунный ответ, который является бактерицидным для менингококкового штамма, экспрессирующего v1 fHbp, менингококкового штамма, экспрессирующего v2 fHbp, а также менингококкового штамма, экспрессирующего v3 fHbp. Подходящим v1-штаммом для SBA-анализа является МС58, который широко доступен (например, АТСС ВАА-335) и был штаммом, секвенирование которого описано в ссылке 23. Подходящим штаммом v2 для SBA-анализа является М2091 (АТСС 13091). Подходящим штаммом v3 для SBA-анализа является М01-240355, представляющий собой референсный штамм MLST (мультилокусное типирование последовательности) Neisseria (идентификатор 19265 в ссылке 54), который был полностью секвенирован (см. EMBL ID CP002422 [55]).
Таким образом, предпочтительные слитые полипептиды fHbp способны приводить к выработке у мыши антител, которые являются бактерицидными для каждого из штаммов МС58, М2091 и М01-240355 в сывороточном бактерицидном анализе. Например, композиция по изобретению способна обеспечивать сывороточный бактерицидный титр 1:4 или более при применении анализа Гольдшнайдера (Goldschneider) с человеческим комплементом [56-58] и/или сывороточный бактерицидный титр 1:128 или более при использовании комплемента крольчонка.
Иммунизация.
Полипептиды, как обсуждено выше, могут быть использованы в качестве активного(ых) ингредиента(ов) иммуногенных композиций, и, таким образом, согласно изобретению предложена иммуногенная композиция (например, вакцина) по изобретению, содержащая полипептиды, как обсуждено выше.
Согласно изобретению также предложен способ вызывания гуморального иммунного ответа у млекопитающего, такого как мышь или человек, включающий введение млекопитающему иммуногенной композиции по изобретению. Предпочтительно, гуморальный иммунный ответ представляет собой защитный и/или бактерицидный гуморальный иммунный ответ. Согласно изобретению также предложены композиции по изобретению для использования в таких способах.
Согласно изобретению также предложен способ защиты млекопитающего, такого как мышь или человек, от инфекции, вызываемой нейссериями (например, менингококковой), включающий введение млекопитающему иммуногенной композиции по изобретению.
Согласно изобретению предложены композиции по изобретению для использования в качестве ле- 10 038940 карственных средств (например, в качестве иммуногенных композиций или в качестве вакцин). В одном воплощении согласно изобретению также предложено применение слитого полипептида, содержащего все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp и одно или более чем одно из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) менингококковых везикул наружной мембраны, в изготовлении лекарственного средства для предотвращения инфекции, вызываемой нейссериями (например, менингококковой) у млекопитающего. В другом воплощении согласно изобретению предложено применение менингококковых везикул наружной мембраны и одного или более чем одного из (1) полипептида NHBA, (2) полипептида NadA и/или (3) слитого полипептида, содержащего все три из менингококковых v1, v2 и v3 fHbp, в изготовлении лекарственного средства для предотвращения инфекции, вызываемой нейссериями (например, менингококковой инфекции) у млекопитающего, где концентрация везикул наружной мембраны в лекарственном средстве составляет 5-30 мкг/мл.
Предпочтительно, млекопитающее представляет собой человека. Человек может представлять собой взрослого или, предпочтительно, ребенка. Там, где вакцина предназначена для профилактического применения, человек предпочтительно представляет собой ребенка (например, ребенка младшего возраста или младенца); там, где вакцина предназначена для терапевтического применения, человек предпочтительно представляет собой взрослого. Вакцину, предназначенную для детей, можно также вводить взрослым, например для оценки безопасности, дозы, иммуногенности и так далее.
Предложенные применения и способы особенно полезны для предотвращения/лечения заболеваний, включая, без ограничения, менингит (в частности бактериальный, такой как менингококковый менингит) и бактериемию. Например, они подходят для активной иммунизации индивидов против инвазивной менингококковой инфекции, вызываемой N.meningitidis (например, серогруппы В).
Эффективность терапевтического лечения можно оценивать посредством мониторинга инфекции, вызываемой нейссериями, после введения композиции по изобретению. Эффективность профилактического лечения можно оценивать посредством мониторинга иммунных ответов против fHbp, NHBA, NadA и PorA (по необходимости) после введения композиции.
Иммуногенность композиций по изобретению может быть определена посредством введения их испытуемым субъектам (например, детям в возрасте 12-16 месяцев, или в моделях на животных) с последующим определением стандартных параметров, включая сывороточные бактерицидные антитела (SBA) и титры ELISA (твердофазный иммуноферментный анализ) (GMT (средние геометрические титры)). Эти иммунные ответы будут обычно определять приблизительно через 4 недели после введения композиции и сравнивать их со значениями, определенными до введения композиции. Предпочтительно повышение SBA по меньшей мере в 4 раза или в 8 раз. Там, где вводят более одной дозы композиции, возможно проведение более чем одного определения после введения.
Предпочтительные композиции по изобретению могут обеспечивать у пациента титр антител, превосходящий критерий серологической защиты для каждого антигенного компонента, у приемлемого процента субъектов-людей. Антигены с ассоциированными титрами антител, превышение которых у хозяина указывает на сероконверсию против рассматриваемого антигена, хорошо известны, и такие титры опубликованы такими организациями, как WHO (Всемирная организация здравоохранения). Предпочтительно, сероконверсия происходит более чем у 80% статистически значимой выборки субъектов, более предпочтительно у более чем 90%, еще более предпочтительно у более чем 93% и наиболее предпочтительно у 96-100%.
Изобретение может быть применено для обеспечения системного иммунитета и/или иммунитета слизистых оболочек.
Композиции по изобретению будут обычно вводить непосредственно пациенту. Прямая доставка может быть осуществлена посредством парентеральной инъекции (например, подкожно, внутрибрюшинно, внутривенно, внутримышечно или в интерстициальное пространство ткани) или ректального, перорального, вагинального, местного, трансдермального, интраназального, глазного, ушного, легочного или другого введения через слизистые оболочки. Предпочтительно внутримышечное введение в бедро или верхнюю часть плеча. Инъекция может представлять собой инъекцию через иглу (например, иглу для подкожных инъекций), но, альтернативно, может быть применена безыгольная инъекция. Типичная доза для внутримышечного введения составляет приблизительно 0,5 мл (например, как у продукта BEXSERO™).
Схема введения может представлять собой однодозовую схему или многодозовую схему. Несколько доз может быть использовано в схеме первичной иммунизации и/или в схеме повторной иммунизации. За схемой первичного введения может следовать схема повторного дозирования. Подходящий интервал между первичными дозами (например, 4-16 недель) и между первичными и повторными дозами может быть определен рутинным образом. Например, продукт BEXSERO™ вводят в форме двух или трех доз, вводимых с интервалом не менее 1 месяца или не менее 2 месяцев друг от друга в зависимости от субъекта (например, дети или другие).
Иммуногенная композиция по изобретению будет обычно содержать фармацевтически приемлемый носитель, который может представлять собой любое вещество, само по себе не индуцирующее выработ
- 11 038940 ку антител, вредных для пациента, получающего композицию, и которое может быть введено без чрезмерной токсичности. Фармацевтически приемлемые носители могут включать жидкости, такие как вода, физиологический раствор, глицерин и этанол. В таких наполнителях могут также присутствовать вспомогательные вещества, такие как смачивающие агенты или эмульгаторы, рН-забуферивающие вещества и тому подобное. Подробное обсуждение подходящих носителей представлено в ссылке 59. Например, продукт BEXSERO™ содержит хлорид натрия, гистидин, сахарозу, гидроксид алюминия и воду для инъекций.
Инфекции, вызываемые нейссериями, поражают различные области тела, и поэтому композиции по изобретению могут быть изготовлены в различных формах. Например, композиции могут быть изготовлены в формах для инъекций в виде жидких растворов или суспензий. Также могут быть изготовлены твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких наполнителях перед инъекцией. Наиболее предпочтительны композиции, подходящие для парентеральной инъекции (например, в мышцу).
Предпочтительно, композиция является стерильной. Предпочтительно, она свободна от пирогенов. Предпочтительно, она забуферена, например, при рН от 6 до 8, обычно при рН приблизительно 7. Там, где композиция содержит соль гидроксид алюминия, предпочтительно использовать гистидиновый буфер [60]. Композиции по изобретению могут быть изотоническими для людей.
Иммуногенные композиции содержат иммунологически эффективное количество иммуногена, а также, по необходимости, любые другие из других указанных компонентов. Под иммунологически эффективным количеством понимают, что введение этого количества индивиду, в одной дозе или в качестве части серии, эффективно для лечения или предотвращения. Это количество варьирует в зависимости от здоровья и физического состояния подлежащего лечению индивида, возраста, таксономической группы подлежащего лечению индивида (например, примат, не являющийся человеком, примат и так далее), способности иммунной системы индивида синтезировать антитела, желаемой степени защиты, состава вакцины, оценки медицинской ситуации лечащим врачом и других имеющих значение факторов. Ожидают, что это количество будет входить в относительно широкий диапазон, который может быть определен путем рутинных исследований. Дозирование лечения может представлять собой однодозовую схему или многодозовую схему (например, включая повторные дозы). Композиция может быть введена в сочетании с другими иммунорегуляторными агентами.
Адъюванты, которые могут быть использованы в композициях по изобретению, включают, без ограничения, нерастворимые соли металлов, эмульсии типа масло в воде (например, MF59 или AS03, оба содержат сквален), сапонины, нетоксичные производные LPS (липополисахариды) (такие как монофосфориллипид А или 3-О-деацилированный MPL (монофосфориллипид)), иммуностимулирующие олигонуклеотиды, детоксифицированные бактериальные ADP (аденозиндифосфат)рибозилирующие токсины, микрочастицы, липосомы, имидазохинолины или их смеси. Другие вещества, действующие как иммуностимулирующие агенты, раскрыты в главе 7 ссылки 61.
Особенно предпочтительно использование адъюванта гидроксида алюминия и/или фосфата алюминия, и полипептиды обычно адсорбированы на этих солях. Эти соли включают оксигидроксиды и гидроксифосфаты (например, см. главы 8 и 9 ссылки 45). Соли могут иметь любую подходящую форму (например, гелевую, кристаллическую, аморфную и так далее). Al+++ должен присутствовать в количестве 1 мг на дозу или более.
Наиболее предпочтительным адъювантом является гидроксид алюминия, используемый в продукте BEXSERO™. Полипептиды и OMV в композиции по изобретению могут быть адсорбированы на этом адъюванте, как в продукте BEXSERO™. Гидроксид алюминия может быть включен в количестве приблизительно 1 мг Al~ на мл (т.е. 0,5 мг на дозу объемом 0,5 мл).
Другие антигенные компоненты.
В дополнение к fHbp, NHBA, NadA и/или OMV композиция по изобретению может содержать другие менингококковые полипептидные иммуногены. Например, она может содержать одно или более чем одно из NspA, App, NhhA, HmbR и так далее.
Композиция по изобретению может также содержать антиген 936. Антиген 936 был включен в опубликованную последовательность генома менингококкового штамма серогруппы В МС58 [23] как ген NMB2091 (SEQ ID NO: 20 здесь). Предпочтительные антигены 936 для использования в изобретении содержат аминокислотную последовательность: (а) на 50% или более идентичную (например, на 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99,5% или более) SEQ ID NO: 21; и/или (б) содержащую фрагмент из по меньшей мере n расположенных друг за другом аминокислот SEQ ID NO: 21, где n представляет собой 7 или более (например, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250 или более). Предпочтительные фрагменты (б) содержат эпитоп SEQ ID NO: 21. Наиболее полезные антигены 936 по изобретению способны приводить к выработке антител, которые после введения млекопитающему-хозяину способны связываться с менингококковым полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 20. Антиген 936 является хорошим партнером по слиянию для fHbp (например, см. ссылки 62 и 63).
- 12 038940
В дополнение к менингококковым полипептидным антигенам композиция может содержать антигены для иммунизации против других заболеваний или инфекций. Например, композиция может содержать один или более чем один из следующих дополнительных антигенов:
сахаридный антиген из N.meningitidis серогруппы А, С, W135 и/или Y, такой как сахарид серогруппы С, раскрытый в ссылке 64 (см. также ссылку 65) или в ссылке 66;
сахаридный антиген из Streptococcus pneumoniae [например, 67, 68, 69];
антиген из вируса гепатита А, такой как инактивированный вирус [например, 70, 71];
антиген из вируса гепатита В, такой как поверхностные и/или внутренние антигены [например, 71, 72];
дифтерийный антиген, такой как дифтерийный анатоксин [например, глава 3 ссылки 73], например, мутант CRM197 [например, 74];
столбнячный антиген, такой как столбнячный анатоксин (например, глава 4 ссылки 73);
антиген из Bordetella pertussis, такой как коклюшный голотоксин (РТ) и филаментный гемагглютинин (FHA) В.pertussis, возможно также в комбинации с пертактином и/или аггллютиногенами 2 и 3 (например, ссылки 75 и 76);
сахаридный антиген из Haemophilus influenzae В [например, 65];
антиген(ы) полиомиелита [например, 77, 78], такой(ие) как IPV;
антигены кори, эпидемического паротита и/или краснухи (например, главы 9, 10 и 11 ссылки 73);
антиген(ы) гриппа (например, глава 19 ссылки 73), такой(ие) как поверхностные белки гемагглютинин и/или нейраминидаза;
антиген из Moraxella catarrhalis [например, 79];
белковый антиген из Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В) [например, 80, 81];
сахаридный антиген из Streptococcus agalactiae (стрептококк группы В);
антиген из Streptococcus pyogenes (стрептококк группы А) [например, 81, 82, 83];
антиген из Staphylococcus aureus [например, 84].
Композиция может содержать один или более чем один из этих дополнительных антигенов.
По необходимости, токсичные белковые антигены могут быть детоксифицированы (например, детоксификация коклюшного токсина химическими и/или генетическими способами [76]).
Там, где в композицию включен дифтерийный антиген, предпочтительно также включать столбнячный антиген и коклюшные антигены. Сходным образом, там, где в композицию включен столбнячный антиген, предпочтительно также включать дифтерийные и коклюшные антигены. Сходным образом, там, где в композицию включен коклюшный антиген, предпочтительно также включать дифтерийные и столбнячные антигены. Таким образом, предпочтительны комбинации DTP (дифтерийные, столбнячные, коклюшные антигены).
Предпочтительно, сахаридные антигены имеют форму конъюгатов. Белки-носители для конъюгатов обсуждены более подробно ниже.
Каждый из антигенов композиции будет обычно присутствовать в концентрации по меньшей мере 1 мкг/мл. В целом, концентрация любого заданного антигена будет достаточной для вызывания иммунного ответа против данного антигена.
Иммуногенные композиции по изобретению можно использовать терапевтически (т.е. для лечения существующей инфекции) или профилактически (т.е. для предотвращения инфекции в будущем).
В качестве альтернативы использованию белковых антигенов в иммуногенных композициях по изобретению может быть использована нуклеиновая кислота (которая может представлять собой РНК, такую как самореплицирующаяся РНК, или ДНК, такую как плазмида).
В некоторых воплощениях композиция по изобретению содержит конъюгированные капсульные сахаридные антигены 1, 2, 3 или 4 из менингококковых серогрупп А, С, W135 и Y. В других воплощениях композиция по изобретению содержит по меньшей мере один конъюгированный пневмококковый капсульный сахаридный антиген.
Менингококковые серогруппы Y, W135, С и А.
Существующие вакцины против серогруппы С (MENJUGATE™ [64, 77], MENINGITEC™ и NEISVAC-C™) содержат конъюгированные сахариды. MENJUGATE™ и MENINGITEC™ имеют олигосахаридные антигены, конъюгированные с носителем CRM197, в то время как в NEISVAC-C™ использован полный полисахарид (де-О-ацетилированный), конъюгированный носителем в виде столбнячного анатоксина. Вакцина MENACTRA™ содержит конъюгированные капсульные сахаридные антигены каждой из серогрупп Y, W135, С и А.
Композиции по настоящему изобретению могут содержать капсульные сахаридные антигены из одной или более чем одной из менингококковых серогрупп Y, W135, С и А, где антигены конъюгированы белком(ами)-носителем(ями) и/или представляют собой олигосахариды. Например, композиция может содержать капсульный сахаридный антиген из: серогруппы С; серогрупп А и С; серогрупп А, С и W135; серогрупп А, С и Y; серогрупп С, W135 и Y; или всех четырех из серогрупп А, С, W135 и Y.
Типичное количество каждого менингококкового сахаридного антигена на одну дозу составляет от
- 13 038940 мкг до 20 мкг, например приблизительно 1 мкг, приблизительно 2,5 мкг, приблизительно 4 мкг, приблизительно 5 мкг или приблизительно 10 мкг (выраженное в расчете на сахарид).
Там, где смесь содержит капсульные сахариды из обеих серогрупп А и С, соотношение (масс/масс.) сахарид MenA:сахарид MenC может составлять более 1 (например 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более). Там, где смесь содержит капсульные сахариды из серогруппы Y и одной или обеих из серогрупп С и W135, соотношение (мас./мас.) сахарид MenY:сахарид MenW135 может составлять более 1 (например, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1 или более) и/или соотношение (мас./мас.) сахарид MenY:сахарид MenC может составлять менее 1 (например 1:2, 1:3, 1:4, 1:5 или менее). Предпочтительные соотношения (мас./мас.) сахаридов из серогрупп A:C:W135:Y составляют: 1:1:1:1; 1:1:1:2; 2:1:1:1; 4:2:1:1; 8:4:2:1; 4:2:1:2; 8:4:1:2; 4:2:2:1; 2:2:1:1; 4:4:2:1; 2:2:1:2; 4:4:1:2 и 2:2:2:1. Предпочтительные соотношения (мас./мас.) сахаридов из серогрупп C:W135:Y составляют: 1:1:1; 1:1:2; 1:1:1; 2:1:1; 4:2:1; 2:1:2; 4:1:2; 2:2:1 и 2:1:1. Предпочтительно использовать по существу равные массы каждого сахарида.
Капсульные сахариды можно использовать в форме олигосахаридов. Их удобно получать посредством фрагментации очищенного капсульного полисахарида (например, гидролизом), после чего обычно проводят очистку фрагментов желаемого размера.
Предпочтительно, фрагментацию полисахаридов проводят до конечной средней степени полимеризации (DP) олигосахарида менее 30 (например, от 10 до 20, предпочтительно приблизительно 10 для серогруппы А; от 15 до 25 для серогрупп W135 и Y, предпочтительно приблизительно 15-20; от 12 до 22 для серогруппы С; и так далее). DP можно удобно посредством ионообменной хроматографии или колориметрических анализов [86].
Если осуществляют гидролиз, то гидролизат, как правило, будет подвергнут сортировке по размеру, чтобы удалить короткие олигосахариды [65]. Это может быть осуществлено разными способами, такими как ультрафильтрация с последующей ионообменной хроматографией. В случае серогруппы А предпочтительно удаляют олигосахариды со степенью полимеризации приблизительно 6 или менее, и в случае серогрупп W135 и Y предпочтительно удаляют олигосахариды со степенью полимеризации приблизительно менее 4.
Предпочтительные сахаридные антигены MenC раскрыты в ссылке 85, как они использованы в MEN JUGATE™.
Ковалентное конъюгирование.
Капсульные сахариды в композициях по изобретению будут обычно конъюгированы с белком(ами)-носителем(ями) В целом, конъюгирование повышает иммуногенность сахаридов, превращая их из Т-независимых антигенов в Т-зависимые антигены и обеспечивая, таким образом, возможность формирования иммунологической памяти. Конъюгирование особенно полезно для педиатрических вакцин и является хорошо известной методикой.
Типичные белки-носители представляют собой бактериальные токсины, такие как дифтерийные или столбнячные токсины или их анатоксины или мутанты. Полезным вариантом является мутант дифтерийного токсина CRM197 [87], используемый в качестве носителя в продукте PREVNAR™. Другие подходящие белки-носители включают комплекс белков наружной мембраны N.meningitidis [88], синтетические пептиды [89, 90], белки теплового шока [91, 92], коклюшные белки [93, 94], цитокины [95], лимфокины [95], гормоны [95], факторы роста [95], искусственные белки, содержащие множество человеческих CD4+ Т-клеточных эпитопов из различных антигенов, имеющих происхождение от патогенов [96], такие как N19 [97], белок D из Н.influenzae [98-100], пневмолизин [101] или его нетоксичные производные [102], пневмококковый поверхностный белок PspA [103], железосвязывающие белки [104], токсинА или В из С.difficile [105], рекомбинантный экзопротеин А P. aeruginosa (rEPA) [106] и так далее.
Может быть использована любая подходящая реакция конъюгирования, по необходимости с любым подходящим линкером.
Перед конъюгированием сахарид будет обычно активирован или функционализирован. Активация может включать, например, цианилирующие реагенты, такие как CDAP (например, тетрафторборат 1циано-4-диметиламинопиридиния [107, 108 и так далее]). В других подходящих методиках используют карбодиимиды, гидразиды, активные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, N-гидроксисукцинимид, S-NHS (сульфо-N-гидроксисульфосукцинимид), EDC (1-этил-3-[3-диметиламинопропил]карбодиимид), TSTU (О-(N-суkцинимидил)-1,1,3,3-тетраметилуроний тетрафторборат) и т.д.
Связывание через линкерную группу может быть осуществлено с применением любой известной методики, например методик, описанных в ссылках 109 и 110. Один тип связывания включает восстановительное аминирование полисахарида, сочетание полученной аминогруппы с одним концом линкерной группы на основе адипиновой кислоты с последующим сочетанием белка с другим концом линкерной группы на основе адипиновой кислоты [111, 112]. Другие линкеры включают В-пропионамидо [113], нитрофенилэтиламин [114], галоацилгалогениды [115], гликозидные связи [116], 6-аминокапроновую кислоту [117], ADH [118], группировки С4-С12 [119] и так далее. В качестве альтернативы использованию линкера может быть применено прямое связывание. Прямое связывание с белком может включать окисление полисахарида с последующим восстановительным аминированием с использованием белка, как
- 14 038940 описано, например, в ссылках 120 и 121.
Предпочтителен способ, включающий введение аминогрупп в сахарид (например, посредством замены концевых групп =O группами -NH2) с последующей дериватизацией сложным диэфиром адипиновой кислоты (например, сложным N-гидроксисукцинимидодиэфиром адипиновой кислоты) и взаимодействия с белком-носителем. В другой предпочтительной реакции используют CDAP для активации и белок D в качестве носителя, например для MenA или MenC.
Общие положения.
Термин содержащий охватывает включающий, а также состоящий, например композиция содержащая X, может состоять исключительно из X или может содержать что-либо дополнительное, например X + Y. Ссылки на содержащий (или содержит и так далее) могут возможно быть заменены ссылками на состоящий из (или состоит из и так далее).
Термин приблизительно в связи с числовым значением х является дополнительным и означает, например, х±10%.
Термин по существу не исключает полностью, например композиция, по существу, свободная от Y может быть полностью свободной от Y. По необходимости, выражение по существу в определении по изобретению может быть опущено.
Идентичность последовательностей предпочтительно определяют с помощью алгоритма выравнивания Needleman-Wunsch для выравнивания по всей длине [122] с использованием параметров по умолчанию (например, штраф при начале разрыва 10,0 и штраф при продолжении разрыва 0,5 с использованием матрицы замен EBLOSUM62). Этот алгоритм удобным образом воплощен в инструменте needle в пакете программ EMBOSS [123]. Там, где в заявке приведена ссылка на идентичность определенной SEQ ID, идентичность следует рассчитывать по всей длине этой SEQ ID.
После серогруппы классификация менингококков включает серотип, сероподтип и затем иммунотип, и в стандартной номенклатуре указывают серогруппу, серотип, сероподтип и иммунотип, разделяя их двоеточием, например В:4:Р1.15±3,7,9. В серогруппе В некоторые линии вызывают заболевание часто (гиперинвазивные), некоторые линии вызывают более тяжелые формы заболевания, чем другие (гипервирулентные), а другие вообще редко вызывают заболевание. Известно семь гипервирулентных линий, а именно подгруппы I, III и IV-1, комплекс ЕТ-5, комплекс ЕТ-37, кластер А4 и линия 3. Они были определены с помощью мультилокусного ферментативного электрофореза (MLEE), но для классификации менингококков было также применено мультилокусное типирование последовательностей (MLST). Четырьмя основными гипервирулентными кластерами являются комплексы ST32, ST44, ST8 и ST11.
Примеры
Пример 1. Вакцина BEXSERO™ (для сравнения).
Продукт BEXSERO™ безопасен и эффективен и был утвержден для применения у человека в Европе и других регионах. Он содержит следующие иммуногенные ингредиенты в дозе объемом 0,5 мл:
| Иммуноген | Количество | Примечания |
| fHbp | 50 мкг | Слитый полипептид с NMB2091 на N-конце |
| NHBA | 50 мкг | Слитый полипептид с NMB1030 на С-конце |
| NadA | 50 мкг | - |
| OMV | 25 мкг (общее содержание белков) | Штамм NZ98/254 (В:4:Р1.7-2,4, L1,3) |
Эти иммуногены адсорбированы на адъюванте гидроксиде алюминия (0,5 мг Al++ на дозу). Композиция также содержит NaCl, гистидиновый буфер и сахарозу.
Пример 2. Стабилизированные и стабилизированные несвязывающиеся слитые полипептиды.
Авторы изобретения изучили два разных типа мутаций в v2 и v3: во-первых, они определили остатки в SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 3, которые могут быть модифицированы для повышения стабильности полипептида. Во-вторых, они определили остатки, уменьшающие связывание с человеческим фактором Н (fH). Мутантные полипептиды fHbp, содержащие мутации обоих типов, имеют улучшенные свойства. Особенно предпочтительны мутанты fHbp, не связывающиеся с фактором Н, но сохраняющие иммуногенность, поскольку получаемые гуморальные иммунные ответы направлены против эпитопов в сайте связывания fH или рядом с ним. После вакцинации с использованием вакцинных антигенов fHbp дикого типа такие эпитопы могут быть скрыты связыванием с фактором Н. Далее приведены аминокислоты, представляющие наибольший интерес, пронумерованные в соответствии с полноразмерными последовательностями (SEQ ID NO: 2 и 3), а также ΔG-последовательностями (SEQ ID NO: 8 и 9).
- 15 038940
| Стабильность** | Связывание cfH | |||
| v2 | SEQ ID NO:2 | Ser-58 | Leu-149 | Glu-266 |
| SEQ ID NO:8 | Ser-32 | Leu-123 | Glu-240 | |
| v3 | SEQ ID NO:3 | Ser-63 | Leu-157 | Glu-274 |
| SEQ ID NO:9 | Ser-32 | Leu-126 | Glu-243 |
В случаях мутации только одного из этих остатков этим остатком предпочтительно является лейцин.
Мутации, влияющие на стабильность и связывание fHbp, сочетали в мутантных формах v2 и v3 и проводили слияние с мутантной последовательностью v1, содержащей R41S. Слияние мутантов проводили в порядке v2-v3-v1 и соединяли их с использованием линкеров, получая 731 SNB (SEQ ID NO: 38). По сравнению с тремя последовательностями дикого типа этот слитый полипептид содержит в общей сложности 7 точечных мутаций (фиг. 2).
Отдельно, мутации для повышения стабильности v2 и v3 сливали с мутантной последовательностью v1 R41S v1 в порядке v2-v3-v1 и соединяли с использованием линкеров, получая 731 S (SEQ ID NO: 40). Таким образом, по сравнению с тремя последовательностями дикого типа этот слитый полипептид содержит в общей сложности 5 точечных мутаций (фиг. 2).
Способность не связывающихся с fH форм fHbp обеспечивать SBA-титры оценивали у трансгенных (Tg) мышей
| Антиген | rSBA-титры, полученные против штаммов-прототипов | ||
| Var 1.1 | Var 2.16 | Var 3.42 | |
| Слитый полипептид fHbp SEQ ID NO:10 | 1024* | 4096 | 8192 |
| Слитый полипептид fHbp SEQ ID NO:38 | 16384 | 32768 | более 32768 |
Эти данные показывают, что несвязывающиеся формы fHbp могут быть более иммуногенными. Пример 3. Замена слитого полипептида NMB2091-fHbp.
Продукт BEXSERO™ модифицировали, заменяя слитый полипептид NMB2091-fHbp тройным слитым полипептидом из вариантов fHbp в порядке v2-v3-v1 от N- к С-концу. Этот слитый полипептид имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Кроме того, удаляли OMV-компонент. Две вакцины сравнивали у мышей, иммунизированных в 0, 21 и 35 сутки, анализируя сыворотку на 34 и 49 сутки против панели из 15 штаммов серогруппы В с различными клональными комплексами, MLST и ЕТ-классификацией. Антигены вводили в количестве 20 мкг на дозу с использованием адъюванта в количестве 3 мг/мл.
Доли штаммов с SBA-титрами выше различных пороговых значений были следующими:
| Пороговое значение | Исходная вакцина | Модифицированная вакцина |
| больше или равно 128 | 100% | 100% |
| больше или равно 1024 | 93% | 80% |
| больше 4096 | 53% | 60% |
Таким образом, использование слитого полипептида v2-v3-v1 позволяет обеспечить спектр действия против большей части панели (60% против 53%) при высоком SBA-титре против MenB (больше 4096).
Пример 4. 4-кратное снижение дозы OMV.
Продукт BEXSERO™ модифицировали, заменяя слитый полипептид NMB2091-fHbp тройным слитым полипептидом fHbp v2-v3-v1 (SEQ ID NO: 10), а также или (1) снижая дозу OMV в 4 раза до 12,5 мкг/мл, или (2) удаляя OMV-компонент. Таким образом, получали три композиции
- 16 038940
Для оценки иммуногенности этих трех вакцин субъекты-люди получали по три дозы с месячными интервалами (0, 1,2 месяцы). Сыворотку получали в 0, 1, 2 и 3 месяцы и затем через 6 месяцев после третьей дозы (месяц 8) для оценки против панели соответствующих штаммов. Титры (GMT) были следующими:
| Группа | Белковые иммуногены | OMV | ||
| М | NMB2091-fHbp | NHBA-NMB1030 | NadA | 50 мкг/мкл |
| С | fHbp v2-v3-v1 | NHBA-NMB1030 | NadA | 12,5 мкг/мл |
| S | fHbp v2-v3-v1 | NHBA-NMB1030 | NadA | - |
| М | С | S | |
| Штамм H44/76 | |||
| Момент времени ноль | 1,36 | 2,16 | 1,55 |
| 1 месяц | 30 | 52 | 15 |
| 2 месяца | 97 | 91 | 48 |
| 3 месяца | 102 | 99 | 59 |
| 8 месяцев | 25 | 33 | 12 |
| Штамм 5/99 | |||
| Момент времени ноль | 2,47 | 3,01 | 2,17 |
| 1 месяц | 70 | 75 | 56 |
| 2 месяца | 173 | 140 | 157 |
| 3 месяца | 237 | 236 | 365 |
| 8 месяцев | 77 | 83 | 106 |
| Штамм NZ98/254 | |||
| Момент времени ноль | 1,21 | 2,04 | 1,73 |
| 1 месяц | 9,45 | 29 | 3,19 |
| 2 месяца | 13 | 12 | 4,4 |
| 3 месяца | 16 | 24 | 6,49 |
| 8 месяцев | 3,55 | 8,02 | 3,55 |
| Штамм М14459 | |||
| Момент времени ноль | 1,86 | 2,48 | 2,16 |
| 2 месяца | 30 | 24 | 16 |
| 3 месяца | 34 | 31 | 19 |
| Штамм UK364 | |||
| Момент времени ноль | 1,35 | 1,97 | 2,07 |
| 2 месяца | 37 | 72 | 70 |
| 3 месяца | 56 | 113 | 112 |
Объединенную сыворотку пациентов использовали для оценки спектра действия против панели из 7 MenB-штаммов, экспрессирующих v1 fHbp. Спектр действия адекватным образом включал сходное число штаммов в каждой группе, но титры (GMT) были наиболее высокими в группе С
| М | С | S | |
| Момент времени ноль | меньше 10 | меньше 10 | меньше 10 |
| 3 месяца | 70 | 140 | 40 |
| 8 месяцев | 15 | 50 | 10 |
Сыворотку отдельных пациентов анализировали против панели из 6 MenB-штаммов, экспрессирующих v2 или v3 fHbp (один штамм анализировали дважды). Титры (GMT) снова были наиболее высокими в группе С
- 17 038940
| М | С | S | |
| Штамм М14549 (v2) | |||
| Момент времени ноль | 1,4 | 1,5 | 1,1 |
| 2 месяца | 3,8 | 15,0 | 6,2 |
| 3 месяца | 3,6 | 21,4 | 6,6 |
| Штамм М12566 (v2) | |||
| Момент времени ноль | 6,0 | 10,7 | 14,8 |
| 2 месяца | 40,4 | 80,0 | 60,1 |
| 3 месяца | 47,1 | 94,8 | 69,7 |
| Штамм UK355 (v3) | |||
| Момент времени ноль | 2,7 | 4,0 | 5,0 |
| 2 месяца | 22,1 | 43,7 | 38,4 |
| 3 месяца | 21,3 | 55,0 | 41,7 |
| Штамм М1239 (v3) | |||
| Момент времени ноль | 2,3 | 3,0 | 2,1 |
| 2 месяца | 5,0 | 15,7 | 5,9 |
| 3 месяца | 5,7 | 21,9 | 5,9 |
| Штамм М1239 (v3) | |||
| Момент времени ноль | 1,2 | 1,6 | 1,1 |
| 2 месяца | 5,9 | 18,4 | 2,8 |
| 8 месяцев | 1,9 | 4,1 | 1,6 |
| Штамм UK293 (v2) | |||
| Момент времени ноль | 1,6 | 2,7 | 2,2 |
| 2 месяца | 9,2 | 52,0 | 7,0 |
| 8 месяцев | 4,3 | 11,7 | 5,9 |
| Штамм UK414 (v2) | |||
| Момент времени ноль | 1,4 | 2,1 | 1,6 |
| 2 месяца | 5,1 | 22,6 | 8,3 |
| 8 месяцев | 3,1 | 10,9 | 6,3 |
Кроме того, доля иммунизированных субъектов с SBA-титром выше 1:8 была обычно выше в группе С по сравнению с группами М и S, например 80% или более для штамма М1239 после 3 введений в сравнении с 50% или менее в двух других группах.
RCD-кривые (обратная функция распределения) SBA-титров также показали лучший профиль, например на фиг. 1 показана кривая для сыворотки, полученной на 3 месяц, против штамма UK293, при этом группа С отчетливо превосходит остальные.
Объединенную сыворотку пациентов использовали для оценки спектра действия против панели из 26 MenB-штаммов, экспрессирующих v2 или v3 fHbp. Титры (GMT) снова были наиболее высокими в группе С
I м I с I s
| 3 месяца | 23 | 91 | 25 |
| 8 месяцев | 7 | 43 | 9 |
Таким образом, эти данные показывают, что вакцина С, в которой иммуноген fHbp заменен и доза OMV снижена в 4 раза, не уступает вакцине BEXSERO™. Действительно, как сыворотки отдельных субъектов, так и объединенные сыворотки демонстрируют лучшие показатели серологического ответа, более высокие GMT и более широкий спектр покрытия штаммов у вакцины С по сравнению с вакциной BEXSERO™ .
Пример 5. Авидность антител.
- 18 038940
Авидность антител от пациентов в группах С и S сравнивали с использованием системы на основе Gyrolab, которая включает стадию отмывки с использованием хаотропного агента для отсоединения низкоаффинных антител от антигена, получая индекс авидности как процент высокоаффинных антител против v1 fHbp от общего количества v1 fHbp-специфичных антител. По двадцать отдельных сывороток анализировали через 1 месяц после первого введения и через 1 месяц после третьего введения. Кроме того, оценивали SBA-титры против штамма Н44/76 и определяли корреляцию между индексом авидности и SBA-титрами (log2).
Результаты (R и р при оценке корреляции Пирсона) были следующими:
| 1 месяц после 1 | 1 месяц после 3 | |||
| R | Р | R | Р | |
| С | 0,693 | 0,001 | 0,4667 | 0,0381 |
| S | 0,3565 | 0,1229 | 0,101 | 0,6718 |
Таким образом, значимая корреляция между SBA-титром и индексом авидности была отмечена в группе С в обеих временных точках, но не в группе S. У субъектов, получавших вакцину с 12,5 мкг/мл OMV, индекс авидности коррелирует с SBA-титрами, показывая, что присутствие OMV оказывает положительное влияние на качество индуцируемых антител. В целом, у субъектов, получавших OMV, отмечена тенденция к более высоким бактерицидным титрам, коррелирующим с авидностью антител, индуцируемых вакцинной композицией.
Подпанель из штаммов var2/3 была выбрана для анализа сывороток отдельных субъектов на основании следующих критериев: (1) штаммы не входят в спектр действия Bexsero в предшествующих клинических исследованиях; (2) штаммы принадлежат к значимым клональным комплексам; (3) штаммы экспрессируют эпидемиологически значимые подварианты fHbp; (4) уровень экспрессии fHbp является умеренным; (5) 741-231 специфично уничтожает выбранные штаммы (конкурентный hSBA). Результаты показаны на фиг. 3(a)-3(g) и демонстрируют, что 741-231+1/4OMV+alum обеспечивает более высокие GMT против 7 включенных в анализ штаммов. Таким образом, hSBA-анализ показывает, что композиции, содержащие слитый полипептид 741-231, не уступают Bexsero. Действительно, как анализ сывороток отдельных субъектов, так и анализ объединенных сывороток демонстрируют лучшие показатели серологического ответа, более высокие GMT-титры и более широкий спектр покрытия штаммов у композиции, содержащей 741-231+1/4OMV+alum.
Пример 6. Снижение дозы OMV и использование 731 S и 731 SNB.
Продукт BEXSERO™ модифицировали, заменяя слитый полипептид NMB2091-fHbp тройными слитыми стабилизированными или стабилизированными несвязывающимися полипептидами fHbp v2v3-v1 (SEQ ID NO: 40 и 38, соответственно), а также снижая дозу OMV до 10 или 2,5 мкг/мл
| Группа | Белковые иммуногены | OMV | ||
| 1 | NMB2091-fHbp | NHBA-NMB1030 | NadA | 10 мкг/мл |
| 2 | fHbp-v2-v3-v1 SNB | NHBA-NMB1030 | NadA | 2,5 мкг/мл |
| 3 | fHbp-v2-v3-v1 S | NHBA-NMB1030 | NadA | 2,5 мкг/мл |
Для получения мышиных антисывороток использовыали по 20 мкг NadA, NHBA-NMB1030 и NMB2091-fHbp, fHbp 231S или fHbp 231 SNB с 10 мкг или 2,5 мкг OMV, имеющих происхождение из штамма NZ98/254, иммунизируя ими самок мышей CD1 (Charles River) в возрасте 6 недель. Использовали по восемь мышей на группу. Антигены вводили внутрибрюшинно вместе с гидроксидом алюминия (3 мг/мл) в сутки 0, 21 и 35. Сыворотки получали через 2 недели после последнего забора крови и проводили их термоинактивацию в течение 30 мин при 56°С перед анализом.
Сывороточный бактерицидный анализ с использованием сывороток животных и человеческого комплемента.
Бактерицидную активность сыворотки против Nm-штаммов оценивали, как описано ранее. В качестве источника комплемента использовали человеческую сыворотку или плазму здорового взрослого (без собственной бактерицидной активности при анализе в конечной концентрации 25 или 50%). Бактерицидные титры в сыворотке определяли как разведение сыворотки, приводившее к уменьшению числа колониеобразующих единиц (CFU) на мл после 60 мин инкубации бактерий с реакционной смесью на 50% по сравнению с контрольным CFU на мл в момент времени 0.
Наименьшее анализируемое разведение каждой сыворотки составляло 1:16 (предел выявления). Для задач анализа титры ниже предела выявления определяли как половину этого предела и положительное пороговое значение определяли как 4-кратное повышение по сравнению с этим значением (т.е. 32). Объединенные сыворотки, полученные от мышей, иммунизированных композицией Bexsero, были ниже положительного порогового значения для 14 штаммов из 34 штаммов, включенных в анализ, в то время как объединенные сыворотки, полученные при использовании композиции 2-го поколения, были ниже предела выявления только для 1 штамма в случае вакцинной композиции, содержащей fHbp 231SNB, и для 1 штамма в случае композиции, содержащей fHbp 231S.
- 19 038940 hSBA-данные, представленные в таблице ниже, продемонстрировали увеличение спектра действия вакцинных композиций, содержащих fHbp 231S или fHbp 231SNB, по сравнению с Bexsero в панели из штаммов, включенных в анализ
| МепВ-штаммы | hSBA-результаты при использовании различных композиций | ||||
| Идентификатор | Под вариант fHbp | Bexsero | 741-231 SNB + 961с + 287953 + 1/4 OMV | 741-231 S + 961с + 287-953 + 1/4 OMV | |
| Контрольные | NVD000007 | 2,23 | больше 8192 | больше 8192 | больше 8192 |
| штаммы Bexsero | NVD000005 | 2,16 | 2048 | 4096 | 2048 |
| NVD000023 | 3,31 | 4096 | 4096 | 8192 | |
| NVD002240 | 2,553 | 32 | 512 | 128 | |
| NVD000025 | 1,1 | больше 8192 | больше 8192 | больше 8192 | |
| NVD001491 | 1,180 | 1024 | 1024 | 512 | |
| NVD000049 | 1,14 | 4096 | 4096 | 2048 | |
| МепВштаммы, несущие var1 fHbp | NVD001706 | 1,1 | 4096 | 4096 | 4096 |
| NVD001889 | 1,4 | 1024 | 2048 | 2048 | |
| NVD001402 | 1,4 | 512 | 1024 | 1024 | |
| NVD001908 | 1,13 | 512 | 1024 | 1024 | |
| NVD001244 | 1,14 | 2048 | 2048 | 2048 | |
| NVD003213 | 1,15 | 2048 | 1024 | 2048 | |
| NVD001080 | 1,15 | 512 | 512 | 512 | |
| NVD000185 | 1,15 | 512 | 512 | 512 | |
| NVD000758 | 1,256 | меньше 16 | 64 | меньше 16 | |
| МепВштаммы, несущие var2 fHbp | NVD002368 | 2,16 | 64 | 1024 | 512 |
| NVD002500 | 2,16 | меньше 16 | 512 | 512 | |
| NVD000926 | 2,16 | 8192 | больше 8192 | 4096 | |
| NVD002552 | 2,19 | 16 | 512 | 1024 | |
| NVD001277 | 2,19 | меньше 16 | 1024 | 2048 | |
| NVD001057 | 2,19 | 32 | 1024 | 512 | |
| NVD001342 | 2,19 | 64 | 2048 | 1024 | |
| NVD001391 | 2,19 | меньше 16 | 512 | 512 | |
| NVD001288 | 2,21 | меньше 16 | 512 | 512 | |
| NVD002690 | 2,24 | меньше 16 | 256 | 256 | |
| NVD001287 | 2,24 | 16 | 128 | 256 | |
| МепВштаммы, несущие var3 fHbp | NVD000038 | 3,28 | меньше 16 | 64 | 64 |
| NVD000084 | 3,30 | меньше 16 | 1024 | 2048 | |
| NVD003212 | 3,31 | меньше 16 | 512 | 256 | |
| NVD003364 | 3,42 | меньше 16 | 2048 | 2048 |
| NVD002424 | 3,42 | меньше 16 | 1024 | 1024 | |
| NVD003727 | 3,42 | меньше 16 | меньше 16 | меньше 16 |
Следует понимать, что изобретение описано выше лишь посредством примеров и возможны модификации без выхода за рамки объема и сущности изобретения.
- 20 038940
Ссылки
[1] Carter (2013) BioDrugs 27:263-74.
[2] WO 99/57280.
[3] Masignani et al. (2003) J Exp Med 197:789-799.
[4] Welsch et al. (2004) J Immunol 172:5605-15.
[5] Hou et al. (2005) J Infect Dis 192(4):580-90.
[6] WO 03/063766.
[7] Fletcher et al. (2004) Infect Immun 72:2088-2100.
[8] Zhu et al. (2005) Infect Immun 73(10):6838-45.
[9] Cendron et al. (2011) Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun. 67:531-5.
[10] Mascioni et al. (2009) J Biol Chem 284:8738-46.
[11] Pizza et al. (2008) Vaccine 26 Suppl 8:146-8.
[12] Malito et al. (2013) PNAS USA 110:3304-9.
[13] Marshall et al. (2012) Pediatr Infect Dis J 31:1061 -8.
[14] McNeil et al. (2013) Microbiol Mol Biol Rev 77:234-52.
[15] Serruto et al. (2012) Vaccine 30 Suppl 2: B87-97.
[16] Scarselli et al. (2011) Sci Transl Med 3:91 ra62.
[17] Beernink et al. (2008) Infect Immun 76:4232-40.
[18] Scarselli et al. (2009) J Mol Biol 386:97-108.
[19] Giuntini et al. (2012) PLoS One 7:e34272.
[20] Vu et al. (2012) Sci Rep 2:341.
[21] Faleri et al. (2013) FASEB J fj. 13-239012.
[22] Beernink et al. (2011) J Immunol 186:3606-14.
[23] Tettelin et al. (2000) Science 287:1809-1815.
[24] WO 00/66741.
[25] WO 02/09643.
[26] Katial et al. (2002) Infect Immun 70:702-707.
- 21 038940
[27] WO 01/52885.
[28] Европейский патент 0301992.
[29] Frasch etal. (2001) глава 7 в Methods in Molecular Medicine, volume 66 (‘Meningococcal Vaccines: Methods and Protocols’, eds. Pollard & Maiden).
[30] Bjune etal. (1991) Lance/338(8775):1093-1096.
[31] Fukasawa et al. (1999) Vaccine 17:2951-2958.
[32] WO 02/09746.
[33] Rosenqvist etal. (1998) Dev. Biol. Stand. 92:323-333.
[34] Европейский патент 0011243.
[35] Fredriksen et al. (1991) NIPH Ann. 14(2):67-80.
[36] WO 01/91788.
[37] WO 2004/019977.
[38] Патент США 6558677.
[39] WO 01/09350.
[40] Европейский патент 0449958.
[41] EP-A-0996712.
[42] EP-A-0680512.
[43] WO 02/062378.
[44] WO 99/59625.
[45] Патент США6180111.
[46] WO 01/34642.
[47] Peeters et al. (1996) Vaccine 14:1008-1015.
[48] Vermont et al. (2003) Infect Immun 71:1650-1655.
[49] WO 2004/014417.
[50] WO 2005/004908.
[51] WO 2011/036562.
[52] Pizza et al. (2000) Science 287:1816-1820.
[53] WO 2007/028408.
[54] http://pubmlst. org/ neisseria/.
[55] Budroni etal. (2011) PNAS USA 108:4494-99.
[56] Goldschneider et al. (1969) J. Exp. Med. 129:1307-26.
[57] Santos etal. (2001) Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 8:616-23.
- 22 038940
[58] Frasch et al. (2009) Vaccine 27S:B112-6.
[59] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. 20th edition, ISBN: 0683306472.
[60] WO 03/009869.
[61] Vaccine Design... (1995) eds. Powell & Newman. ISBN: 030644867X. Plenum.
[62] Giuliani et al. (2006) Proc Natl Acad Sci U S A. 103:10834-9.
[63] WO 2004/032958.
[64] Costantino etal. (1992) Vaccine 10:691-698.
[65] Costantino et al. (1999) Vaccine 17:1251-1263.
[66] WO 03/007985.
[67] Watson (2000) Pediatr Infect Dis J 19:331 -332.
[68] Rubin (2000) Pediatr Clin North Am 47:269-285, v.
[69] Jedrzejas (2001) Microbiol Mol Biol Rev 65:187-207.
[70] Bell (2000) Pediatr Infect Dis 719:1187-1188.
[71] Iwarson (1995) APMIS 103:321-326.
[72] Gerlich et al. (1990) Vaccine 8 Suppl:S63-68 & 79-80.
[73] Vaccines (1988) eds. Plotkin & Mortimer. ISBN 0-7216-1946-0.
[74] Del Guidice etal. (1998) Molecular Aspects of Medicine 19:1-70.
[75] Gustafsson etal. (1996) N. Engl. J. Med. 334:349-355.
[76] Rappuoli etal. (1991) TIBTECH 9:232-238.
[77] Sutter et al. (2000) Pediatr Clin North Am 47:287-308.
[78] Zimmerman & Spann (1999) Am Fam Physician 59:113-118, 125-126.
[79] McMichael (2000) Vaccine 19 Suppl 1 :S101 -107.
[80] Schuchat (1999) Lancet 353(9146):51-6.
[81] WO 02/34771.
[82] Dale (1999) Infect Dis Clin North Am 13:227-43, viii.
[83] Ferretti et al. (2001) PNAS USA 98: 4658-4663.
[84] Kuroda etal. (2001) Lancet 357(9264): 1225-1240; см. также стр. 12181219.
[85] Jones (2001) Curr Opin Investig Drugs 2:47-49.
[86] Ravenscroft etal. (1999) Vaccine 17:2802-2816.
[87] Research Disclosure, 453077 (Jan 2002).
- 23 038940
[88] EP-A-0372501.
[89] EP-A-0378881.
[90] EP-A-0427347.
[91] WO 93/17712.
[92] WO 94/03208.
[93] WO 98/58668.
[94] EP-A-0471177.
[95] WO 91/01146.
[96] Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824.
[97] Baraldo et al. (2004) Infect Immun 72(8):4884-7.
[98] EP-A-0594610.
[99] Ruan et al. (1990) J Immunol 145:3379-3384.
[100] WO 00/56360.
[101 ] Kuo et al. (1995) Infect Immun 63:2706-13.
[102] Michon et al. (1998) Vaccine. 16:1732-41.
[103] WO 02/091998.
[104] WO 01/72337.
[105] WO 00/61761.
[106] WO 00/33882.
[107] Lees et al. (1996) Vaccine 14:190-198.
[108] WO 95/08348.
[109] Патент США 4882317.
[110] Патент США 4695624.
[111] Porro etal. (1985) Mol Immunol 22:907-919.s.
[112] EP-A-0208375.
[113] WO 00/10599.
[114] Geveretal. Med. Microbiol. Immunol, 165: 171-288 (1979).
[115] Патент США 4057685.
[116] Патенты США 4673574; 4761283; 4808700.
[117] Патент США 4459286.
[118] Патент США 4965338.
[119] Патент США 4663160.
[120] Патент США 4761283.
[121] Патент США 4356170.
[122] Needleman & Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48, 443-453.
[123] Rice etal. (2000) Trends Genet 16:276-277.
- 24 038940
Перечень последовательностей
SEQ ID NO:1 [MC58, v1]
MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKL AAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQ DSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIE HLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHI GLAAKQ
SEQ ID NO:2 [2996, v2]
MNRTAFCCLSLTAALILTACSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKL AAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKIN NPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEH LKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIG IAGKQ
SEQ ID NO:3 [M1239, v3]
MNRTAFCCLSLTTALILTACSSGGGGSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQN GTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVV ALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKK QGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKI GEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:4 [MC58, v1, зрелый]
CSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGK LKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDI AGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPD GKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:5 [2996, зрелый]
CSSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGK LKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGL GGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADE KSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:6 [M1239, зрелый]
CSSGGGGSGGGGVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDK DNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQ RSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELA AAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:7 [MC58, AG]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSF DKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVI SGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
- 25 038940
SEQ ID NO:8 [2996 AG]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:9 [M1239, AG]
VAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKND KISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEH TAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHA VILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQ
SEQ ID NO:10 [Слитый полипептид fHbp]
MGPDSDRLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDS LNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSF LVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAE LKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGPDSDRL QQRRVAADIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGK LKNDKISRFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGL GGEHTAFNQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADE KSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAG LADALTAPLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQI EVDGQLITLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGR ATYRGTAFGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQ AEKGSYSLGIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:11 [NHBA, MC58]
MFKRSVIAMACIFALSACGGGGGGSPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQ GSQDMAAVSEENTGNGGAVTADNPKNEDEVAQNDMPQNAAGTDSSTPNHTPDPNMLAGNMENQATDA GESSQPANQPDMANAADGMQGDDPSAGGQNAGNTAAQGANQAGNNQAAGSSDPIPASNPAPANGGSN FGRVDLANGVLIDGPSQNITLTHCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDKFV GLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHS GNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGSYALRVQGEPAKGEMLAGAAVYNGEVLHFHTENGRPYPTRGRFA AKVDFGSKSVDGIIDSGDDLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGSGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYR P T DAE KGG FGV FAG KKE Q D
SEQ ID NO:12 [Фрагмент NHBA]
SPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGSQDMAAVSEENTGNGGAVTADNP KNEDEVAQNDMPQNAAGTDSSTPNHTPDPNMLAGNMENQATDAGESSQPANQPDMANAADGMQGDDP SAGGQNAGNTAAQGANQAGNNQAAGS S DPIPASNPAPANGGSNFGRVDLANGVLIDGP SQNITLT HC KGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIFYKPKPT SFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAEKLPGGS YALRVQGEPAKGEMLAGAAVYNGEVLHFHTENGRPYPTRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGDDLHMGT QKFKAAIDGNGFKGTWTENGSGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQD
SEQ ID NO:13 [NHBA, зрелый]
CGGGGGGSPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGSQDMAAVSEENTGNGG AVTADNPKNEDEVAQNDMPQNAAGTDSSTPNHTPDPNMLAGNMENQATDAGESSQPANQPDMANAAD GMQGDDPSAGGQNAGNTAAQGANQAGNNQAAGSSDPIPASNPAPANGGSNFGRVDLANGVLIDGPSQ NITLTHCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYII FYKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGA EKLPGGSYALRVQGEPAKGEMLAGAAVYNGEVLHFHTENGRPYPTRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSG DDLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGSGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKE QD
- 26 038940
SEQ ID NO:14 [NMB1030, MC58]
MKKIIFAALAAAAISTASAATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDI TIPIANLQSGSQHFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAE KFNCYQ S PME KT EVCGGD FSTTIDRTKWGMDYLVNVGMT KSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO:15 [Фрагмент NMB1030]
ATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPIANLQSGSQHFTDHLK SADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMEKTEVCGGDF S ТТIDRT KWGMDYLVNVGMT KSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO:16 [Слитый полипептид NHBA]
MASPDVKSADTLSKPAAPVVSEKETEAKEDAPQAGSQGQGAPSAQGGQDMAAVSEENTGNGGAAATD KPKNEDEGAQNDMPQNAADTDSLTPNHTPASNMPAGNMENQAPDAGESEQPANQPDMANTADGMQGD DPSAGGENAGNTAAQGTNQAENNQTAGSQNPASSTNPSATNSGGDFGRTNVGNSVVIDGPSQNITLT HCKGDSCSGNNFLDEEVQLKSEFEKLSDADKISNYKKDGKNDGKNDKFVGLVADSVQMKGINQYIIF YKPKPTSFARFRRSARSRRSLPAEMPLIPVNQADTLIVDGEAVSLTGHSGNIFAPEGNYRYLTYGAE KLPGGSYALRVQGEPSKGEMLAGTAVYNGEVLHFHTENGRPSPSRGRFAAKVDFGSKSVDGIIDSGD GLHMGTQKFKAAIDGNGFKGTWTENGGGDVSGKFYGPAGEEVAGKYSYRPTDAEKGGFGVFAGKKEQ DGSGGGGATYKVDEYHANARFAIDHFNTSTNVGGFYGLTGSVEFDQAKRDGKIDITIPVANLQSGSQ HFTDHLKSADIFDAAQYPDIRFVSTKFNFNGKKLVSVDGNLTMHGKTAPVKLKAEKFNCYQSPMAKT EVCGGDFSTTIDRTKWGVDYLVNVGMTKSVRIDIQIEAAKQ
SEQ ID NO:17 [NadA, MC58]
MSMKHFPSKVLTTAILATFCSGALAATSDDDVKKAATVAIVAAYNNGQEINGFKAGETIYDIGEDGT ITQKDATAADVEADDFKGLGLKKVVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADT DAALDETTNALNKLGENITTFAEETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEA VKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKADI AKNSARIDSLDKNVANLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVGRFNVTAAVGGYKSESAVAIGTGFRFT EN FAAKAGVAVGT S SG S SAAY HVGVNY EW
SEQ ID NO:18 [NadA]
LAATSDDDVKKAATVAIVAAYNNGQEINGFKAGETIYDIGEDGTITQKDATAADVEADDFKGLGLKK VVTNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDETTNALNKLGENITTFAE ETKTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVK AAETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKADIAKNSARIDSLDKNVANLRKETRQ GLAEQAALSGLFQPYNVGRFNVTAAVGGYKSESAVAIGTGFRFTENFAAKAGVAVGTSSGSSAAYHV GVNYEW
SEQ ID NO:19 [Фрагмент NadA]
ATNDDDVKKAATVAIAAAYNNGQEINGFKAGETIYDIDEDGTITKKDATAADVEADDFKGLGLKKVV TNLTKTVNENKQNVDAKVKAAESEIEKLTTKLADTDAALADTDAALDATTNALNKLGENITTFAEET KTNIVKIDEKLEAVADTVDKHAEAFNDIADSLDETNTKADEAVKTANEAKQTAEETKQNVDAKVKAA ETAAGKAEAAAGTANTAADKAEAVAAKVTDIKADIATNKDNIAKKANSADVYTREESDSKFVRIDGL NATTEKLDTRLASAEKSIADHDTRLNGLDKTVSDLRKETRQGLAEQAALSGLFQPYNVG
SEQ ID NQ:20 [NMB2091, MC58]
MKPKPHTVRTLIAAIFSLALSGCVSAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQ NNQTKGYTPQISVVGYNRHLLLLGQVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGD TWNTSKVRATLLGISPATQARVKIVTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQ R
- 27 038940
SEQ ID NO:21 [NMB2091]
SAVIGSAAVGAKSAVDRRTTGAQTDDNVMALRIETTARSYLRQNNQTKGYTPQISVVGYDRHLLLLG QVATEGEKQFVGQIARSEQAAEGVYNYITVASLPRTAGDIAGDTWNTSKVRATLLGISPATRARVKI VTYGNVTYVMGILTPEEQAQITQKVSTTVGVQKVITLYQNYVQR
SEQ ID NO:22 [Линкер]
GSGGGG
SEQ ID NO:23 [Линкер]
GPDSDRLQQRR
SEQ ID NO:24 [Линкер]
GSGPDSDRLQQRR
SEQ ID NO:25 [Линкер]
GKGPDSDRLQQRR
SEQ ID NO:26 [N-концевая последовательность]
MGPDSDRLQQRR
SEQ ID NO:27 [N-концевая последовательность]
MAS
SEQ ID NO:28 [Линкер]
LEHHHHHH
SEQ ID NO:29 [Слитый полипептид fHbp]
MGPDSDRLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDS LNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSF LVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAE LKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAA DIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKIS RFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTA PLDHKDKGLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLI TLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTA FGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYS L GIFGG KAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:30 [Слитый полипептид fHbp]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
- 28 038940
SEQ ID NO:31 [Слитый полипептид fHbp, связывание c fH нарушено]
Где X в положении 240 представляет собой любую аминокислоту, кроме Е, X в положении 496 представляет собой любую аминокислоту, кроме Е, и X в положении 543 представляет собой любую аминокислоту, кроме R.
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHXIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHXIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVXKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SАЕVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:32 [Слитый полипептид fHbp, связывание с fH нарушено]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFLVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFLVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVSKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:33 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный]
Где X в положении 32 представляет собой любую аминокислоту, кроме S, X в положении 123 представляет собой любую аминокислоту, кроме L, X в положении 285 представляет собой любую аминокислоту, кроме S, и X в положении 379 представляет собой любую аминокислоту, кроме L.
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQXVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFXVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDXIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFXVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SАЕVKTVNGIRHIGLAAKQ
- 29 038940
SEQ ID NO:34 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQVVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDVIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:35 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный и R41]
Где X в положении 32 представляет собой любую аминокислоту, кроме S, X в положении 123 представляет собой любую аминокислоту, кроме L, X в положении 285 представляет собой любую аминокислоту, кроме S, X в положении 379 представляет собой любую аминокислоту, кроме L, и X в положении 543 представляет собой любую аминокислоту, кроме R.
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQXVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFXVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDXIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFXVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVXKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:36 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный и R41S]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQVVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDVIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVSKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
- 30 038940
SEQ ID NO:37 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный, связывание c fH нарушено, и R41]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQVVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDVIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVSKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:38 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный, связывание c fH нарушено, и R41]
MGPDSDRLQQRRVAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQVVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDS LNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSF RVSGLGGEHTAFNQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAE LKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAA DIGTGLADALTAPLDHKDKGLKSLTLEDVIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKIS RFDFVQKIEVDGQTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPGGKAEYHGKAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHAIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTA PLDHKDKGLQSLTLDQSVSKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLI TLESGEFQVYKQSHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTA FGSDDAGGKLTYTIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYS L GIFGGKAQEVAGSAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:39 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный]
Где X в положении 123 представляет собой любую аминокислоту, кроме L, и X в положении 379 представляет собой любую аминокислоту, кроме L.
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFXVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFXVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:40 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA
- 31 038940
PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
SEQ ID NO:41 [Слитый полипептид fHbp, стабилизированный, R41S]
VAADIGAGLADALTAPLDHKDKSLQSLTLDQSVRKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVS RFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQIYKQDHSAVVALQIEKINNPDKIDSLINQRSFRVSGLGGEHTAF NQLPDGKAEYHGKAFSSDDAGGKLTYTIDFAAKQGHGKIEHLKTPEQNVELAAAELKADEKSHAVIL GDTRYGSEEKGTYHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGTGLADALTA PLDHKDKGLKSLTLEDSIPQNGTLTLSAQGAEKTFKAGDKDNSLNTGKLKNDKISRFDFVQKIEVDG QTITLASGEFQIYKQNHSAVVALQIEKINNPDKTDSLINQRSFRVSGLGGEHTAFNQLPGGKAEYHG KAFSSDDPNGRLHYSIDFTKKQGYGRIEHLKTLEQNVELAAAELKADEKSHAVILGDTRYGSEEKGT YHLALFGDRAQEIAGSATVKIGEKVHEIGIAGKQGSGGGGVAADIGAGLADALTAPLDHKDKGLQSL TLDQSVSKNEKLKLAAQGAEKTYGNGDSLNTGKLKNDKVSRFDFIRQIEVDGQLITLESGEFQVYKQ SHSALTAFQTEQIQDSEHSGKMVAKRQFRIGDIAGEHTSFDKLPEGGRATYRGTAFGSDDAGGKLTY TIDFAAKQGNGKIEHLKSPELNVDLAAADIKPDGKRHAVISGSVLYNQAEKGSYSLGIFGGKAQEVA G SAEVKTVNGIRHIGLAAKQ
Claims (10)
1. Иммуногенная композиция для защиты млекопитающего от менингококковой инфекции, содержащая слитый полипептид, содержащий все три из менингококковых v1 (вариант 1), v2 (вариант 2) и v3 (вариант 3) fHbp в комбинации с (1) полипептидом NHBA (нейссериальный гепарин-связывающий белок), (2) полипептидом NadA (нейссериальный адгезии А) и (3) менингококковыми везикулами наружной мембраны, полученными из штамма NZ98/254, где слитый fHbp полипептид имеет аминокислотную последовательность формулы
NH2-A-[-X-L]3-B-COOH, где каждый X представляет собой последовательность конкретного варианта fHbp, L представляет собой возможную линкерную аминокислотную последовательность, А представляет собой возможную N-концевую аминокислотную последовательность и В представляет собой возможную С-концевую аминокислотную последовательность, и где последовательности вариантов fHbp находятся в порядке v2-v3v1 от N-конца к С-концу, и где последовательность v1 содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 90% идентичность последовательности с SEQ ID NO: 7 и v1 способен после введения млекопитающему приводить к выработке антител, способных распознавать менингококковый полипептид дикого типа, состоящий из SEQ ID NO: 4; последовательность v2 fHbp содержит SEQ ID NO: 8, но модифицирована с введением стабилизирующих мутаций по остаткам S32 и L123; и последовательность v3 содержит SEQ ID NO: 9, но модифицирована с введением стабилизирующих мутаций по остаткам S32 и L126.
2. Композиция по п.1, где слитый полипептид содержит по меньшей мере один эпитоп из каждой из SEQ ID NO: 7, 8 и 9 и после введения мыши способен приводить к выработке антител, способных распознавать все три из: (а) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 4; (б) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 5; (в) полипептида, состоящего из SEQ ID NO: 6.
3. Композиция по п.1 или 2, где полипептид NHBA способен приводить к выработке антител, которые после введения мыши способны связываться с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13.
4. Композиция по любому из пп.1-3, где полипептид NadA способен приводить к выработке антител, которые после введения мыши способны связываться с полипептидом, состоящим из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 18.
5. Композиция по любому из пп.1-4, где слитый полипептид содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 33, 34, 35, 36, 37 и 38.
6. Композиция по любому из пп.1-5, где: (а) слитый полипептид fHbp имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 или SEQ ID NO: 38; (б) полипептид NHBA содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12; и (в) полипептид NadA имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19.
7. Композиция по любому из пп.1-6, где полипептиды fHbp, NHBA и NadA присутствуют в концентрации 50-150 мкг/мл.
8. Композиция по любому из пп.1-7, дополнительно содержащая адъювант гидроксид алюминия.
9. Способ защиты млекопитающего от менингококковой инфекции, включающий введение млекопитающему иммуногенной композиции по любому из пп.1-8.
10. Способ по п.9, где указанное млекопитающее представляет собой человека.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP14177563 | 2014-07-17 | ||
| PCT/EP2015/066229 WO2016008961A1 (en) | 2014-07-17 | 2015-07-16 | Meningococcus vaccines |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201692554A1 EA201692554A1 (ru) | 2017-07-31 |
| EA038940B1 true EA038940B1 (ru) | 2021-11-12 |
Family
ID=51178811
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201692554A EA038940B1 (ru) | 2014-07-17 | 2015-07-16 | Менингококковые вакцины |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11707513B2 (ru) |
| EP (1) | EP3169358A1 (ru) |
| JP (2) | JP6687597B2 (ru) |
| KR (2) | KR20230012100A (ru) |
| CN (2) | CN113827712A (ru) |
| AR (1) | AR101225A1 (ru) |
| AU (2) | AU2015289193A1 (ru) |
| BE (1) | BE1022878B1 (ru) |
| BR (1) | BR112017000519A2 (ru) |
| CA (1) | CA2954729C (ru) |
| EA (1) | EA038940B1 (ru) |
| IL (1) | IL249823B (ru) |
| MX (1) | MX2017000775A (ru) |
| SG (2) | SG11201610946YA (ru) |
| WO (1) | WO2016008961A1 (ru) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LT3110442T (lt) | 2014-02-28 | 2020-12-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modifikuoti meningokokinio fhbp polipeptidai |
| SG11201610945PA (en) | 2014-07-17 | 2017-01-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| IL249823B (en) | 2014-07-17 | 2022-07-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Meningococcus vaccines |
| WO2017075189A1 (en) * | 2015-10-27 | 2017-05-04 | University Of Massachusetts | Factor h-fc immunotherapy |
| CN107961370B (zh) * | 2017-03-22 | 2020-08-11 | 武汉博沃生物科技有限公司 | 多价肺炎球菌缀合疫苗及其制备方法 |
| CN108939061A (zh) * | 2018-08-03 | 2018-12-07 | 北京智飞绿竹生物制药有限公司 | 一种多组分b群脑膜炎球菌疫苗及其制备方法 |
| EP3607967A1 (en) * | 2018-08-09 | 2020-02-12 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
| US11014736B2 (en) | 2019-04-18 | 2021-05-25 | Altria Client Services Llc | Sliding packs with flip top hinged lids |
| CN110804101A (zh) * | 2019-11-08 | 2020-02-18 | 苏州微超生物科技有限公司 | B群脑膜炎球菌相关融合蛋白、疫苗及其制备方法与应用 |
| EP4065595A4 (en) * | 2019-11-25 | 2023-12-20 | Griffith University | IMMUNOGENE PROTEIN AGAINST GONOCOCCAL INFECTION |
| GB202115151D0 (en) | 2021-10-21 | 2021-12-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Methods |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004048404A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | Chiron Srl | Multiple variants of meningococcal protein nmb1870 |
| WO2006024954A2 (en) * | 2004-09-01 | 2006-03-09 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Domains and epitopes of meningococcal protein nmb1870 |
| WO2007060548A2 (en) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Chimeric, hybrid and tandem polypeptides of meningococcal nmb1870 |
| WO2011110634A1 (en) * | 2010-03-10 | 2011-09-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine composition |
| WO2013186753A1 (en) * | 2012-06-14 | 2013-12-19 | Novartis Ag | Vaccines for serogroup x meningococcus |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6747137B1 (en) | 1998-02-13 | 2004-06-08 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid sequences relating to Candida albicans for diagnostics and therapeutics |
| US6551795B1 (en) | 1998-02-18 | 2003-04-22 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to pseudomonas aeruginosa for diagnostics and therapeutics |
| DK1897555T3 (da) * | 2000-01-17 | 2014-10-13 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Kompletteret OMV-vaccine mod meningococcus |
| GB0419627D0 (en) * | 2004-09-03 | 2004-10-06 | Chiron Srl | Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins |
| AR064642A1 (es) | 2006-12-22 | 2009-04-15 | Wyeth Corp | Polinucleotido vector que lo comprende celula recombinante que comprende el vector polipeptido , anticuerpo , composicion que comprende el polinucleotido , vector , celula recombinante polipeptido o anticuerpo , uso de la composicion y metodo para preparar la composicion misma y preparar una composi |
| CN110845585A (zh) | 2010-03-30 | 2020-02-28 | 奥克兰儿童医院及研究中心 | 改性的h因子结合蛋白（fhbp）及其使用方法 |
| GB201215005D0 (en) | 2012-08-23 | 2012-10-10 | Isis Innovation | Stabilised meningitis vaccine |
| LT3110442T (lt) | 2014-02-28 | 2020-12-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modifikuoti meningokokinio fhbp polipeptidai |
| EP2916512B1 (en) | 2014-03-07 | 2016-08-24 | Mitsubishi Electric R&D Centre Europe B.V. | Method for classifying a TCP connection carrying HTTP traffic as a trusted or an untrusted TCP connection |
| IL249823B (en) | 2014-07-17 | 2022-07-01 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Meningococcus vaccines |
| SG11201610945PA (en) | 2014-07-17 | 2017-01-27 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Modified meningococcal fhbp polypeptides |
-
2015
- 2015-07-16 IL IL249823A patent/IL249823B/en unknown
- 2015-07-16 CA CA2954729A patent/CA2954729C/en active Active
- 2015-07-16 BR BR112017000519A patent/BR112017000519A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2015-07-16 SG SG11201610946YA patent/SG11201610946YA/en unknown
- 2015-07-16 KR KR1020237001115A patent/KR20230012100A/ko not_active Application Discontinuation
- 2015-07-16 BE BE2015/5455A patent/BE1022878B1/fr not_active IP Right Cessation
- 2015-07-16 CN CN202111134597.5A patent/CN113827712A/zh active Pending
- 2015-07-16 US US15/319,665 patent/US11707513B2/en active Active
- 2015-07-16 KR KR1020177004245A patent/KR102626831B1/ko active IP Right Grant
- 2015-07-16 WO PCT/EP2015/066229 patent/WO2016008961A1/en active Application Filing
- 2015-07-16 MX MX2017000775A patent/MX2017000775A/es unknown
- 2015-07-16 JP JP2017502625A patent/JP6687597B2/ja active Active
- 2015-07-16 EA EA201692554A patent/EA038940B1/ru unknown
- 2015-07-16 SG SG10201900041VA patent/SG10201900041VA/en unknown
- 2015-07-16 AU AU2015289193A patent/AU2015289193A1/en not_active Abandoned
- 2015-07-16 AR ARP150102269A patent/AR101225A1/es unknown
- 2015-07-16 CN CN201580038773.1A patent/CN106659776A/zh active Pending
- 2015-07-16 EP EP15738900.8A patent/EP3169358A1/en active Pending
-
2019
- 2019-02-18 AU AU2019201131A patent/AU2019201131C1/en active Active
-
2020
- 2020-04-02 JP JP2020066808A patent/JP7074793B2/ja active Active
-
2023
- 2023-06-06 US US18/329,701 patent/US20230414736A1/en active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004048404A2 (en) * | 2002-11-22 | 2004-06-10 | Chiron Srl | Multiple variants of meningococcal protein nmb1870 |
| WO2006024954A2 (en) * | 2004-09-01 | 2006-03-09 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Domains and epitopes of meningococcal protein nmb1870 |
| WO2007060548A2 (en) * | 2005-11-25 | 2007-05-31 | Novartis Vaccines And Diagnostics Srl | Chimeric, hybrid and tandem polypeptides of meningococcal nmb1870 |
| WO2011110634A1 (en) * | 2010-03-10 | 2011-09-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine composition |
| WO2013186753A1 (en) * | 2012-06-14 | 2013-12-19 | Novartis Ag | Vaccines for serogroup x meningococcus |
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| "Assessment report Bexsero; Procedure No. EMEA/H/C/002333", 15 November 2012 (2012-11-15), XP055157250, Retrieved from the Internet: URL: http://www.ema.europa.eu/docs/en_GB/document_library/EPAR_-_Public_assessment_report/human/002333/WC500137883.pdf [retrieved on 2014-12-08], the whole document, * see in particular pages 1/102-2/102, 9/102-10/102, 20/102, 21/102, table 1 on page 22/102 * * |
| "Vaccines (6th Edition) ", 1 January 2013, ELSEVIER , ISBN: 9781455700905, article DAN M GRANOFF, PELTON STEPHEN, HARRISON LEE H: "Chapter 21 SECTION TWO: Licensed vaccines - Meningococcal vaccines", pages: 388 - 418, XP055150061, DOI: 10.1016/B978-1-4557-0090-5.00029-X * |
| D. M. GRANOFF, S. RAM, P. T. BEERNINK: "Does Binding of Complement Factor H to the Meningococcal Vaccine Antigen, Factor H Binding Protein, Decrease Protective Serum Antibody Responses?", CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, vol. 20, no. 8, 1 August 2013 (2013-08-01), pages 1099 - 1107, XP055150093, ISSN: 15566811, DOI: 10.1128/CVI.00260-13 * |
| ESPOSITO SUSANNA; PRYMULA ROMAN; ZUCCOTTI GIAN VINCENZO; XIE FANG; BARONE MICHELANGELO; DULL PETER M; TONEATTO DANIELA: "A phase II randomized controlled trial of a multicomponent meningococcal serogroup B vaccine, 4CMenB, in infants (II).", HUMAN VACCINES & IMMUNOTHERAPEUTICS, TAYLOR & FRANCIS, US, vol. 10, no. 7, 1 July 2014 (2014-07-01), US , pages 2005 - 2014, XP009181621, ISSN: 2164-554X, DOI: 10.4161/hv.29218 * |
| KOEBERLING OLIVER; GIUNTINI SERENA; SEUBERT ANJA ET AL: "Meningococcal outer membrane vesicle vaccines derived from mutant strains engineered to express factor H binding proteins from antigenic variant groups 1 and 2", CLINICAL AND VACCINE IMMUNOLOGY, AMERICAN SOCIETY FOR MICROBIOLOGY, vol. 16, no. 2, 1 February 2009 (2009-02-01), pages 156 - 162, XP009137318, ISSN: 1556-6811, DOI: 10.1128/CVI.00403-08 * |
| PETER T. BEERNINK, JUTAMAS SHAUGHNESSY, ROLANDO PAJON, EMILY M. BRAGA, SANJAY RAM, DAN M. GRANOFF: "The Effect of Human Factor H on Immunogenicity of Meningococcal Native Outer Membrane Vesicle Vaccines with Over-Expressed Factor H Binding Protein", PLOS PATHOGENS, vol. 8, no. 5, pages e1002688, XP055157328, DOI: 10.1371/journal.ppat.1002688 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2019201131A1 (en) | 2019-03-07 |
| JP7074793B2 (ja) | 2022-05-24 |
| BR112017000519A2 (pt) | 2017-11-21 |
| AU2019201131C1 (en) | 2021-03-18 |
| AR101225A1 (es) | 2016-11-30 |
| KR20230012100A (ko) | 2023-01-25 |
| AU2015289193A1 (en) | 2017-02-02 |
| US11707513B2 (en) | 2023-07-25 |
| SG11201610946YA (en) | 2017-01-27 |
| IL249823B (en) | 2022-07-01 |
| SG10201900041VA (en) | 2019-02-27 |
| US20230414736A1 (en) | 2023-12-28 |
| WO2016008961A1 (en) | 2016-01-21 |
| KR20170029615A (ko) | 2017-03-15 |
| AU2019201131B2 (en) | 2020-08-27 |
| CA2954729C (en) | 2023-08-22 |
| MX2017000775A (es) | 2017-05-04 |
| EP3169358A1 (en) | 2017-05-24 |
| CA2954729A1 (en) | 2016-01-21 |
| JP2017522319A (ja) | 2017-08-10 |
| IL249823A0 (en) | 2017-03-30 |
| EA201692554A1 (ru) | 2017-07-31 |
| JP2020117523A (ja) | 2020-08-06 |
| CN106659776A (zh) | 2017-05-10 |
| JP6687597B2 (ja) | 2020-04-22 |
| US20180214531A1 (en) | 2018-08-02 |
| BE1022878B1 (fr) | 2016-09-30 |
| BE1022878A1 (fr) | 2016-09-30 |
| KR102626831B1 (ko) | 2024-01-22 |
| CN113827712A (zh) | 2021-12-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230414736A1 (en) | Meningococcus vaccines | |
| US11939357B2 (en) | Modified meningococcal fHbp polypeptides | |
| US11932671B2 (en) | Modified meningococcal fHbp polypeptides | |
| US11708394B2 (en) | Modified meningococcal FHBP polypeptides | |
| US20240132550A1 (en) | Modified meningococcal fhbp polypeptides | |
| EA043165B1 (ru) | МОДИФИЦИРОВАННЫЕ МЕНИНГОКОККОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ fHbp |