EA032337B1

EA032337B1 - Применение 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата для лечения сексуальных расстройств

Info

Publication number: EA032337B1
Application number: EA201700038A
Authority: EA
Inventors: Юрий Владимирович ХМЕЛЬЩИКОВ; Дмитрий Сергеевич НОСКОВ
Original assignee: Общество С Ограниченной Ответственностью "Консорциум-Пик"
Priority date: 2014-07-04
Filing date: 2015-07-01
Publication date: 2019-05-31
Also published as: ES2747995T3; EP3165223A4; RU2600845C2; WO2016003327A9; US20170202809A1; EP3165223B1; EA201700038A1; WO2016003327A1; PL3165223T3; EP3165223A1; RU2014127279A; US9795593B2

Abstract

Применение 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата для лечения сексуальных расстройств. Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к созданию нового средства для лечения сексуальных расстройств, и может быть использовано в биохимии, физиологии и медицине.

Description

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к созданию нового средства для лечения сексуальных расстройств, и может быть использовано в биохимии, физиологии и медицине.

032337 Β1

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к созданию нового средства для лечения сексуальных расстройств, и может быть использовано в биохимии, физиологии и медицине.

Уровень техники

О самостоятельной роли сосудистого эндотелия в регуляции сосудистого тонуса было заявлено в статье Еигейдой и Ζ;·ι\ν;·ιάζ1<ί. опубликованной в журнале №11игс в 1980 г. [1]. Авторы статьи обнаружили способность изолированной артерии к самостоятельному изменению своего мышечного тонуса в ответ на ацетилхолин без участия центральных (нейрогуморальных) механизмов.

Последующие исследования доказали, что эндотелий - это не пассивный барьер между кровью и тканями, а активный орган, дисфункция которого является обязательным компонентом патогенеза практически всех сердечно-сосудистых заболеваний, включая атеросклероз, гипертонию, ишемическую болезнь сердца (ИБС), хроническую сердечную недостаточность (ХСН). Также он участвует в воспалительных реакциях, аутоиммунных процессах, диабете, тромбозе, сепсисе, росте злокачественных опухолей и т.д. [1].

В нормальных условиях клетки эндотелия реагируют усилением синтеза веществ, вызывающих расслабление гладкомышечных клеток сосудистой стенки, и в первую очередь, азота оксида (N0) и его дериватов (эндотелиальные факторы релаксации), а также простациклина и эндотелийзависимого фактора гиперполяризации. Важно отметить, что влияние N0 не ограничивается дилатацией локального участка, а оказывает также антипролиферативное влияние на гладкомышечные клетки сосудистой стенки. Кроме того, в просвете сосуда влияние N0 оказывает ряд важных системных эффектов, направленных на защиту сосудистой стенки и предупреждение тромбообразования: блокирование агрегации тромбоцитов, окисления липопротеидов низкой плотности (ЛНП), экспрессии молекул адгезии, прилипания моноцитов и тромбоцитов к стенке сосуда, продукции эндотелина. В определенных ситуациях клетки эндотелия становятся причиной вазоконстрикции, как за счет снижения продукции N0, так и вследствие усиленного синтеза веществ с вазоконстрикторным эффектом - эндотелиальных факторов констрикции: сверхокисленных анионов, вазоконстрикторных простаноидов типа тромбоксана А2, а также эндотелиина-1 (ЕТ-1). При длительном воздействии различных повреждающих факторов (гипоксия, интоксикация, воспаление, гемодинамическая перегрузка) происходит постепенное истощение и извращение компенсаторной дилатирующей способности эндотелия и преимущественным ответом эндотелиальных клеток на обычные стимулы становится вазоконстрикция и пролиферация. Важнейшим фактором эндотелиальной дисфункции является хроническая гиперактивация ренин-ангиотензин-альдостероновой системы (РААС) [1].

Основным вазодилатирующим агентом является молекула оксида азота (N0). В нормально функционирующем эндотелии низкие уровни N0 постоянно высвобождаются для поддержания кровеносных сосудов в состоянии дилатации. Поиск эффективных средств коррекции нарушенной эндотелиальной функции у больных с ИБС остается одним из важных направлений современной кардиологии. В связи с этим имеет место интерес к изучению физиологического феномена, названного прекондиционированием со стороны как экспериментальной, так и практической медицины. Обнаружена устойчивость тканей к ишемии в результате прекондиционирования, вызванного короткими эпизодами ишемии - реперфузии. Существуют разные методы прекондиционирования. С клинической точки зрения прекондиционирование фармакологическими средствами выглядит предпочтительнее, так как технологически проще и лишено потенциальной опасности ишемических эпизодов для патологически измененных тканей. В фармакологическом аспекте одним из наиболее перспективных гуморальных агентов, принимающих участие в реализации феномена прекондиционирования, является никорандил. Никорандил выгодно отличается от прочих препаратов отсутствием побочных эффектов, а также сам по себе является донатором оксида азота [2].

В работе Старосельцевой О.А. было установлено, что ишемическое прекондиционирование проявило выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Ь-ХАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выразилось в снижении коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД) до 2,5±0,3 усл.ед., предупреждении снижения концентрации N0 (4,8±0,29 мкмоль/л) и повышения концентрации Среактивного белка (0,74±0,05 мг/дл), предотвращении развития гиперадренореактивности, а также в повышении сократимости миокарда до 87,1±6,4% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением; прекондиционирование никорандилом в дозе 4 мг/кг проявило выраженное эндотелио- и кардиопротективное действие на модели Е-ХАМЕ-индуцированного дефицита N0, что выразилось в снижении КЭД до 1,76±0,18 усл.ед., полном предупреждении снижения концентрации N0 (6,2±0,25 мкмоль/л) и повышения концентрации С-реактивного белка (0,6±0,1 мг/дл), предотвращении развития гиперадренореактивности, а также в повышении сократимости миокарда до 77,2±8,3% при проведении пробы на нагрузку сопротивлением. Морфологические исследования обнаружили снижение развития мембранозной гломерулопатии, гипертрофии кардиомиоцитов и их некроза, деструктивных изменений эндотелия сосудов и признаков гипертрофии их стенок в почках и миокарде. Глибенкламид в дозе 4 мг/кг блокировал АТФзависимые калиевые каналы и нивелировал эндотелио- и кардиопротективные эффекты дистантного

- 1 032337 ишемического прекондиционирования, прекондиционирования инертным газом гелием, фармакологического прекондиционирования никорандилом при Ь-ЫАМЕ-индуцированной модели дефицита оксида азота. Это выразилось в повышении КЭД до значений, близких к группе с введением Ь-ΝΑΜΕ, снижении концентраций N0 и повышении концентраций С-реактивного белка во всех группах [2].

Известно, что блокада ΝΟ-синтазы, вызванная семидневным введением Ь-ΝΑΜΕ, приводит к выраженной артериальной гипертензии (средние значения: СД -191,3±7,1, ДД - 146,0±4,2 мм рт.ст.), и увеличению коэффициента эндотелиальной дисфункции в 5 раз. Установлена эффективность комбинированного применения донатора N0 -Ь-аргинина и ингибиторов аргиназы - Ь-норвалина и пог-ΝΟΝΑ для коррекции Ε-ΝΑΜΕ-индупированной эндотелиальной дисфункции, выражающейся в снижении КЭД и артериального давления. Наиболее эффективной оказалась комбинация Ь-аргинина 70 мг/кг и Ьнорвалина 10 мг/кг в виде ретардной формы с профилем высвобождения 12 ч.

Одним из основных физиологических механизмов расслабления гладких мышц сосудов является увеличение концентрации циклического нуклеотида - цГМФ. В настоящее время хорошо изучен ΝΟцГМФ-зависимый путь расслабления сосудов, опосредуемый активацией фермента растворимой гуанилатциклазой (рГЦ). В этом случае используются препараты, способные генерировать ΝΟ, что приводит к быстрому нарастанию концентрации цГМФ в гладкомышечных клетках сосудов на короткое время. Однако при повторяющемся приеме ΝΟ-доноров наблюдается десенситизация ΝΟ-цГМФ-зависимого пути и возникает толерантность, что делает их неэффективными при хроническом применении. Таким образом, поиск механизмов и препаратов, способных активировать рГЦ на длительный период, является одним из перспективных направлений в физиологии и фармакологии сердечно-сосудистой системы. В 1966 году впервые был обнаружен гипотензивный эффект препаратов производных оксатриазола на наркотизированных собаках. Механизм гипотензивного действия производных оксатриазолиум-5-олата исследован не был.

Одно из производных оксатриазолий-5-олата - 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олат (АС-6) вызывает длительный гипотензивный эффект у бодрствующих животных линий 8НК и νίδΐατ. В данной работе для выяснения биохимического механизма действия АС-6 была исследована степень активации очищенного фермента рГЦ из легких кролика. В условиях ίη νίίτο 100 мкМ АС-6 активирует рГЦ в 30 раз по сравнению с базальной активностью фермента. Активация рГЦ увеличивается при увеличении концентрации АС-6, то есть эффект носит дозозависимый характер. АС-6 также приводит к активации синтеза цГМФ в аорте крыс линии ХУЩаг в 13 раз по сравнению с базальным уровнем. Таким образом, АС-6 активирует синтез цГМФ как очищенным ферментом рГЦ, так и рГЦ в ткани аорты. Активация рГЦ носит дозозависимый характер [3].

В последнее время большое значение в генезе эректильной дисфункции придается дисфункции эндотелия [4, 5]. Этот феномен выражается в утрате эндотелием регуляторных свойств, прежде всего способности изменять тонус гладкой мускулатуры, граничащей с эндотелием, из-за снижения локальной продукции ΝΟ. Известно, что ключевая роль в возникновении, развитии и поддержании эрекции принадлежит усиленному выбросу ΝΟ [6].

Известно так же фармацевтическое средство, используемое для улучшения потенции [7].

Однако такое фармацевтическое средство не может быть применено именно для лечения сексуальных расстройств, а его назначение носит профилактический характер.

Известно фармацевтическое средство, используемое для улучшения потенции [8].

Однако такое фармацевтическое средство применяется только по мере необходимости и его применение не носит лечебного характера.

За ближайший аналог принято фармацевтическое средство, используемое для лечения сексуальных расстройств [9].

Однако такое фармацевтическое средство не обладает достаточно высокой биодоступностью (всего ~20%), что требует увеличения дозировки и приводит к возникновению нежелательных побочных эффектов, при приеме, связанных с возникновением метаболитов из-за высокой пресистемной элиминации (биотрасформации в печени и ЖКТ).

Раскрытие изобретения

В связи с вышесказанным задачей настоящего изобретения является создание средства для лечения сексуальных расстройств.

Технический результат достигается за счет применения, по меньшей мере, 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата в качестве средства для лечения сексуальных расстройств.

Варианты осуществления настоящего изобретения относятся к применению 3-(3-[1,2,4]-триазоло) оксатриазолий-5-олата в качестве средства для лечения сексуальных расстройств.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 - график зависимости абсорбции эндотелина-1 (ЕТ-1) от концентрации аналита.

Фиг. 2 - график зависимости абсорбции сосудисто-эндотелиального фактора роста крысы (УЕОЕ) от концентрации аналита.

Фиг. 3 - график зависимости абсорбции свободного азота оксида (ΝΟχ) от концентрации аналита.

- 2 032337

Варианты осуществления изобретения

Соответственно, одним из аспектов осуществления настоящего изобретения является применение 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата для лечения сексуальных расстройств.

Другим аспектом осуществления настоящего изобретения является применение 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата для лечения сексуальных расстройств, характеризующееся тем, что сексуальные расстройства выбраны из группы: отсутствие или потеря сексуального влечения, недостаточность генитальной реакции, оргазмическая дисфункция.

Осуществление изобретения

Получение фармацевтических композиций, содержащих по меньшей мере одно фармацевтически приемлемое производное оксатриазолий-5-олата известно из уровня техники и не нуждается в подробном описании. Такие композиции могут быть получены известными способами по известным технологиям (например, таблетирование) и могут представлять собой любые известные из уровня техники лекарственные формы (например, таблетки, жидкие формы, капсулы с наполнителем).

Для проверки правильности и применимости настоящего технического решения была проведена научно-исследовательская работа, направленная на изучение специфической фармакологической активности соединений. Результаты далее будут представлены на примере 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата (азасиднон, АС-6).

В соответствии со ст.11 Федерального закона Об обращении лекарственных средств, № 61-Ф3, Доклиническое исследование лекарственного средства для медицинского применения проводится путем применения научных методов оценок в целях получения доказательств безопасности, качества и эффективности лекарственного средства.

В тексте используются следующие сокращения:

ЕТ-1 - эндотелии-1 крысы;

Ь-ΝΆΜΕ - Ν-омега-нитро-Ь-аргинин метилэстер, гидрохлорид;

N0 - азота оксид;

ΝΟχ - свободный азота оксид;

УЕСЕ - сосудисто-эндотелиальный фактор роста крысы;

АГ - артериальная гипертензия;

в/ж - внутрижелудочный путь введения;

ДД - диастолическое артериальное давление;

ЛПС - латентный период садки;

РААС - ренин-ангиотензин-альдостероновая система;

СД - систолическое артериальное давление;

ЧСС - частота сердечных сокращений;

ЭД - эндотелиальная дисфункция.

Материалы и методы экспериментальных исследований

Материалы и методы, используемые при оценке специфической активности АС-6 на экспериментальной модели артериальной гипертензии с эндотелиальной дисфункцией.

При моделировании артериальной гипертензии с эндотелиальной дисфункцией вводили блокатор эндотелиальной N08 Ν-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир (Ь-ΝΛΜΕ), который применялся внутрибрюшинно 7 дней один раз в сутки, в дозе 25 мг/кг [2,3]. Блокатор вводили на 3 % растворе натрия хлорида из расчета 1 мл на 100 г массы тела. В такой комбинации ингибитора ΝΟ-синтазы с гипертоническим раствором происходит формирование активации РААС, выброс альдостерона, развитие задержки натрия и воды, поражение функций сосудистого эндотелия.

Для экспериментального моделирования использовали Ν-ω-нитро-Ь-аргинин метиловый эфир, гидрохлорид состава С₇Н₁₅ЩО₄-НС1, Μ.\ν. 269.7 фирмы 8фта-А1бпс11 (США) и хлорид натрия фирмы Реахим (Россия).

В воде очищенной приготовляли раствор блокатора 250 мг в 100 мл 3% раствора натрия хлорида. Взвешивание реактивов осуществляли на аналитических весах СН-300 фирмы Α&Ό (Япония).

Животные и их содержание, экспериментальные группы.

Работа с лабораторными животными была организована в соответствии с Санитарными правилами по устройству, оборудованию и содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев) (РФ, утв. 06.04.1973); Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных (И8А, Να!юиа1 Асабету Рге§5, АаПппЦоп. Э.С.. 1996); Руководством по содержанию и использованию лабораторных животных (ЕЕЬА8А, 2010); Лабораторные животные (положение и руководство, Российская Академия Медицинских Наук, Москва, 2003).

Эксперименты выполнены на 40 белых крысах самцах линии Αίδΐατ с исходной массой тела 220-240 г и 20 белых виргинных крысах самках массой 180-200 г. Животные поступили из питомника Рапполово, РАМН, Санкт-Петербург. Рацион грызунов, помимо комбикорма, включал хлеб.

Длительность карантина (акклиматизационного периода) для всех животных составляла 14 дней. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние),

- 3 032337 дважды в день животных наблюдали в клетках (заболеваемость и смертность). Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, были распределены на группы с помощью метода рандомизации. Животные, не соответствующие критериям, были исключены из исследования в течение карантина.

Клетки с животными были помещены в отдельные комнаты. Контроль параметров окружающей среды осуществляли ежедневно на всем протяжении исследования. Это включало в себя контроль температуры и влажности. Фотопериод 12 ч ночь - 12 ч день при искусственном освещении лампами дневного света. Температура воздуха поддерживалась в пределах 20-22°С, относительная влажность -50-70%. Был установлен режим воздухообмена, обеспечивающий около 15 объемов помещения в час, концентрацию СО₂ не более 0,15 об.%, аммиака - не более 0,001 мг/л.

В течение исследования каждое животное осматривали ежедневно. Осмотр включал в себя оценку общего поведения и состояния животных. Метку каждому животному присваивали путем нанесения пикриновой кислоты на шерсть в случае крыс. Данные отражены в лабораторных записях.

В работе использовали субстанцию АС-6 серии 080909, содержащую 101,0% активного вещества согласно протоколу анализа № 80-Пр от 25.09.09 (КАЛ ОКК ФГУП СКТБ Технолог). Из субстанции приготовляли растворы для ежедневного перорального введения на физиологическом растворе натрия хлорида.

В качестве плацебо использовали физиологический раствор натрия хлорида. Введение растворов осуществляли 1 раз в сутки через атравматический металлический зонд с оплавленной оливой с помощью дозирующего шприца.

Животные были разделены на группы: 1 - интактные животные; 2 - контроль патологии, самцы (БИАМЕ+ИаС1; плацебо - физиологический раствор), 3 - крысы самцы, которым вводили АС-6 в дозе 0.5 мг/кг (доза 1); 4 - крысы самцы, которым вводили АС-6 в дозе 5 мг/кг (доза 2); 5 - крысы самцы, которым вводили АС-6 в дозе 10 мг/кг (доза 3); 6 группа - виргинные крысы самки (только в оценке сексуальной активности). В каждую группу включали по 8 особей.

Материалы и методы, используемые при оценке показателей функционального состояния сердечнососудистой системы.

Определение артериального давления у крыс проводили с помощью системы неинвазивного измерения кровяного давления у мелких животных в составе комплекса для электрофизиологических исследований (Полиграф) МР150Ш8Ш В1ОРАС 8уз1еш8, 1пс. (США).

Процедура. Крыс помещали в специальные пеналы. ЧСС и артериальное давление (ДД и СД) регистрировали спустя несколько минут после стабилизации показателей. Показатели регистрировали на хвосте крысы с помощью пьезоэлектрического датчика и манжетки соответствующего размера через несколько минут после помещения животного на термостатированную пластинку, обеспечивающую поддержание температуры в клетке в пределах 26-27°С. Функциональные тесты сердечнососудистой системы проводили до (фон) и после введения блокатора N08 и в конце терапии.

Материалы и методы, используемые при оценке показателей эндотелия.

Биохимические показатели определяли с помощью готовых наборов фирм υ^Ν РР'е 8с1епсе 1пс. (США), Вепбег Меб8у81ешз СшЪН (Австрия), Κ&Ό 8у81ешз (США). Измерения проводили на мультифункциональном фотометре 8упегду-2 фирмы ВюТек 1п81гишеп18, 1пс. (США). Все исследования проводили в соответствии с современными правилами клинико-лабораторной диагностики [12-13].

Определение уровня эндотелина-1, сосудисто-эндотелиального фактора роста и азота оксида проводили в сыворотке крови крыс в конце эксперимента методом иммуноферментного и спектрофотометрического (азота оксид) анализа с использованием видоспецифичных (для крыс) антител.

Количественное определение эндотелина-1 (ЕТ-1) проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием набора фирмы υ8СN РР'е 8с1епсе 1пс. (США). В лунки планшета вносили по 50 мкл образцов сыворотки крови опытных животных и стандарты с известными концентрациями. Затем добавляли по 50 мкл детектирующего реактива А. Через 1 ч инкубации при 37°С осуществляли 3-х кратную промывку и вносили в каждую лунку по 100 мкл детектирующего раствора В и снова инкубировали планшет в течение 30 мин при 37°С. Планшет промывали 5 раз промывочным буфером и в лунки вносили по 90 мкл субстрата ТМБ. Инкубировали 15 мин при 37°С и добавляли по 50 мкл стопраствора. Реакцию учитывали при 450 нм. График зависимости абсорбции от концентрации аналита и параметры уравнения представлены на фиг. 1 и в табл. 1.

Таблица 1. Параметры уравнения зависимости концентрации эндотелина

Сигуе Цате	Сигуе Еогти1а	А	В	С	ϋ	К2
ЕТ-1	Υ = (Α-ϋ)/(1+(Χ/Ο)^ΛΒ) + ϋ	3,93	1,03	9,25	0,0328	0,995

Количественное определение сосудисто-эндотелиального фактора роста (УЕСБ) проводили методом твердофазного ИФА с использованием набора фирмы Вепбег Меб8уз1еш8 СшЪН (Австрия). В лунки планшета вносили по 100 мкл калибровочных растворов; 50 мкл образцов сыворотки крови опытных

- 4 032337 животных и 50 мкл растворителя образцов. Затем добавляли по 50 мкл биотинового конъюгата. Через 2 ч инкубации при 20°С осуществляли 6-кратную промывку и вносили в каждую лунку по 100 мкл конъюгата стрептавидин-пероксидаза хрена и снова инкубировали планшет в течение 1 ч при 20°С. Планшет промывали 6 раз промывочным буфером и в лунки вносили по 100 мкл субстрата ТМБ. Инкубировали 30 мин при 20°С и добавляли по 100 мкл стоп-раствора. Реакцию учитывали при 450 и 620 нм. График зависимости абсорбции от концентрации аналита и параметры уравнения представлены на фиг. 2 и в табл. 2.

Таблица . 2. Параметры уравнения зависимости концентрации УБОГ

Сигуе Чате	Сигуе Рогти1а	А	В	С	ϋ	Е	К2
УЕСР	Υ = (Α-ϋ)/(1+(Χ/ϋ)^ΛΒ)^ΛΕ + ϋ	0,0209	1,86	1,60Е+0 4	4,27	10,8	1

Количественное определение свободного азота оксида проводили методом спектрофотометрии с использованием набора фирмы Ρ&Ι) 8у81етз (США). Белки крови осаждали сульфатом цинка - гидроксидом натрия. В лунки планшета вносили по 50 мкл образцов супернатанта сыворотки крови опытных животных и стандарты с известными концентрациями. Затем добавляли по 50 мкл растворителя образцов, реактива Грисса 1 и реактива Грисса 2. Через 10 мин инкубации при 37°С реакцию учитывали при 540 и 690 нм. График зависимости абсорбции от концентрации аналита и параметры уравнения представлены на фиг. 3 и в табл. 3.

Таблица 3. Параметры уравнения зависимости концентрации ΝΟ

Сигуе Иате	Сигуе Рогти1а	А	В	С	ϋ	К2
ΝΟχ	Υ = (А-О)/(1+(Х/С)^лВ) + ϋ	0,00145	1,23	125	0,904	1

Материалы и методы, используемые при оценке сексуальной активности.

Тестирование сексуальной активности животных проводили после окончания курсового введения препарата. Тестируемого самца помещали в испытательную камеру (размером 40x40x30 см) за 5 мин до предъявления сексуально восприимчивой самки. К каждому самцу подсаживали по 1 самке. Исследование сексуального поведения проводили в темной комнате при тусклом красном освещении. Компоненты сексуальной активности регистрировали визуально в течение 30 мин: латентный период (ЛПС - время от момента посадки самки в клетку к самцу до момента первой садки самца) и количество садок, интромиссий и эякуляций [14-15].

Материалы и методы, используемые при статистической обработке данных.

Результаты наблюдений за животными, занесенные в лабораторные записи, результаты измерений и показания приборов при тестировании физиологических, и биохимических показателей вносили в матрицу первичных данных в программе Мзегозой Ехсе1 2003. Составляли многоуровневую таблицу, распределяя животных под номерами и соответствующими дозами препаратов.

Статистический анализ проводили с помощью пакета программ 81а11811са 8.0. При анализе данных, прежде всего, проводили проверку согласия показателей с нормальным распределением (критерий Шапиро-Уилка). Эта проверка установила, что показатели не являются нормально распределенными. Поэтому использовали непараметрические критерии - ранговый дисперсионный анализ Краскела-Уоллеса Уровень значимости везде был выбран 0,05 [16-17].

Результаты исследований.

Результаты влияния азасиднона на показатели артериального давления у крыс на модели гипертензии с эндотелиалъной дисфункцией.

Результаты влияния различных доз АС-6 на показатели сердечнососудистой системы крыс на модели артериальной гипертензии с эндотелиальной дисфункцией отражены в табл. 4.

- 5 032337

Таблица 4. Влияние азасиднона на показатели артериального давления у крыс

Экспериментальные группы (п=8)	Изучаемые показатели (М±т)
Фон (0 сут)	После введения Ь-ΝΑΜΕ (7 сут)	После терапии (14 сут)
СД	ДД	чсс	СД	ДД	ЧСС	СД	ДД	ЧСС
Интактные	128,4 ±6,4	96,2 ± 5,4	429,1 ± 13,5	126,1 ±3,4	91,1 ±3,3	400,5 ± 11,8	124,6 ±3,7	96,1 ± 2,4	390,6 ±6,2
Контроль	128,1 ±6,4	99,6 ± 4,8	397,1 ± 15,0	149,0 ±2,7 /*	111,0 ±6,2	358,6 ±6,7	145,4 ±4,4 /*	109,8 ±9,1	389,8 ± 13,4
АС-6, 0,5 мг/кг	126,2 ±2,5	98,7 ± 2,2	417,6 ± 17,6	145,0 ±3,1 /*	113,8 ±4,6 /*	351,8 ±8,7	153,1 ±7,3 /*	111,9 ±5,2 /*	420,0 ± 13,7
АС-6, 5,0 мг/кг	123,8 ±3,4	97,9 ± 3,2	428,2 ±22,1	148,6 ±4,5 /*	117,0 ±4,4 /*	376,0 ± 15,3	141,9 ±7,1 **	111,5 ±7,9	435,9 ±28,9
АС-6, 10,0 мг/кг	130,5 ±4,6	98,5 ± 4,7	393,6 ± 19,1	149,1 ±3,4 /*	120,1 ±5,0 /*	357,1 ± 14,8	123,4 ±4,2	102,0 ±3,2	404,4 ± 17,6

Примечания к таблице 4: *-р<0,05, различия значимы по сравнению с интактными животными; **-р<0,05, различия значимы по сравнению с фоном.

На фоне экспериментальной модели происходило увеличение систолического артериального давления в среднем на 20 мм рт.ст. и диастолического на 10 мм рт.ст. АС-6 дозозависимо снижал повышенное артериальное давление, максимально выраженное при введении дозы 10 мг/кг в течение 7 дней. Не выявлено достоверного изменения частоты сердечных сокращений, как в контрольной, так и в опытных группах животных.

В дозе 0,5 мг/кг АС-6 не влиял на уровень СД и ДД (р>0,05=1). С увеличением дозы в 10 раз до 5 мг/кг происходило снижение повышенного уровня ДД при сохранении повышенного СД (р<0,05). В дозе 10 мг/кг АС-6 приводил к нормализации уровня артериального давления по сравнению с фоновыми значениями и экспериментальной моделью (различия значимы при р<0,05).

Результаты влияния АС-6 на показатели эндотелиальной дисфункции.

Показатели, характеризующие состояние эндотелия на модели артериальной гипертензии с эндотелиальной дисфункцией в зависимости от дозы азасиднона, приведены в табл. 5.

Таблица 5. Влияние азасиднона на показатели эндотелия

Изучаемые показатели	Экспериментальные группы (п=8; М±ш)
Интактные	Контроль	АС-6, 0,5 мг/кг	АС-6, 5,0 мг/кг	АС-6, 10,0 мг/кг
ЕТ-1, пг/мл	1,28±0,22	3,45±0,72*	2,48±0,50	1,75±0,48	0,78±0,29^л#
УЕОР, пг/мл	123,33±31,97	41,66±5,34	46,01±2,42	79,49±19,75	91,95±21,84
ΝΟ, мкмоль/л	9,61±0,58	5,26±0,51*	8,83±1,06	10,75±0,55^л	14,08±1,25*^л

Примечания к таблице 5: *-р<0,05, различия значимы по сравнению с интактными животными;

^Л- р<0,05, различия значимы по сравнению с контрольными животными;

#-р<0,05, различия значимы по сравнению с группой АС-6, 0,5 мг/кг.

В контрольной группе животных, в условиях введения гипертонического раствора соли и блокатора ΝΟ-синтазы, происходило повреждение сосудистого эндотелия, что сопровождалось значимой и достоверной гиперэкспрессией эндотелина-1 - основного вазоконстриктора (р=0,0201 по сравнению с интактными крысами самцами), снижением продукции эндотелиального сосудистого фактора релаксации ΝΟ (р=0,0000 по сравнению с интактными крысами самцами) и тенденцией к снижению продукции сосудистоэндотелиального фактора роста УЕСТ (р=0,071 по сравнению с интактными крысами самцами).

Терапевтическая схема введения АС-6 способствовала достоверному позитивному изменению уровня эндотелина-1 (наиболее выраженные изменения отмечали при воздействии АС-6 в максимальной дозе 10 мг/кг: р=0,010 по сравнению с животными из контрольной группы патологии и р=0,015 по сравнению с 1 дозой АС-6 0,5 мг/кг). Также выявлена дозозависимая тенденция к нормализации продукции сосудистоэндотелиального фактора роста УЕСТ (доза 10 мг/кг: р=0,116 по сравнению с контрольной группой крыс самцов).

В отношении азота оксида ΝΟ на фоне введения АС-6 установлено также дозозависимое увеличение его продукции, превосходящее в случае дозы 10 мг/кг уровень даже интактных животных (р=0,0024 по отношению к интактным крысам самцам, р=0,0000 по отношению к контрольной группе, р=0,058 по отношению к дозе 0,5 и 5 мг/кг).

Анализ полученных результатов позволяет говорить о том, что АС-6 является косвенным донором азота оксида в организме животных (ίη νίνο), так как это сопровождается достоверным изменением уровня определяемого нитрита в сыворотке крови, а также эндотелиопротекторным веществом, что выражается в нормализации продукции как эндотелина, так и тенденции к нормализации сосудистоэндотелиального фактора роста крыс.

- 6 032337

Результаты влияния азасиднона на сексуальную активность самцов.

Результаты опытов представлены в табл. 6.

У самцов из контрольной группы основные показатели сексуальной активности были снижены по сравнению с интактными животными. У большинства особей регистрировалось по 1 серии сексуальной активности в течение эксперимента. Период между сессиями сексуальной активности у этих крыс незначительно повышался по сравнению с интактными. Лишь у 12% самцов контрольной группы наблюдались интромиссии. В тоже время практически у всех интактных животных отмечалось по 2 сессии сексуальной активности и у 25% наблюдали интромиссии.

Таблица 6. Влияние азасиднона на сексуальное поведение крыс самцов

Изучаемые показатели	Интактные	Экспериментальные группы (п=8; М±ш)	Азасиднон, 10,0 мг/кг
Контроль	Азасиднон, 0,5 мг/кг	Азасиднон, 5,0 мг/кг
Обнюхивание, облизывание самок	+	+	+	+	+
Количество садок	4,4±1,5	2,4±0,5	6,6±2,8	7,4±3,1	8,6±2,6
Количество интромиссий	0,4±0,3	0,1±0,1	1,6±1,4	1,4±1,1	3,1±1,5
Количество эякуляций	-	-	-	-	-
Латентный период садки, мин	11,3±1,0	8,7±1,2	3,9±0,9*^л	4,2±1,9*^л	3,2±1,4*^л
Период между сессиями, мин	10,6±1,2	15,0±1,0	8,8±0,9	10,2±2,2	7,5±1,9

Примечания к таблице 6: *-р<0,05, различия значимы по сравнению с интактными животными; ^л-р<0,05, различия значимы по сравнению с контрольными животными;

+ - наличие; - - отсутствие.

У крыс, получавших АС-6 во всех трех изученных дозах, отмечалась активация всех показателей нарушенного сексуального поведения: повышение количества садок и интромиссии, значимое уменьшение латентного периода садки (ЛПС). Период между сессиями сексуальной активности у животных оставался на уровне интактных.

По сравнению с контролем применение АС-6 в дозе 0,5 и 5 мг/кг привело к увеличению количества садок у 40% особей, интромиссии, наблюдаемых у 25% крыс, а также к снижению в 1,5 раза ЛПС.

Наиболее выраженный терапевтический эффект в отношении изучаемых показателей отмечался у животных, которым вводили препарат в дозе 10 мг/кг. Количество особей, у которых регистрировались интромиссии, увеличилось до 50% (у интактных крыс; животных, которым вводили препарат в дозах 0,5 и 5 мг/кг - 25%). Наблюдалось сокращение длительности ЛПС по сравнению с интактными и контрольными животными и тенденция снижения периода между сессиями сексуальной активности.

Введение АС-6 не повлияло на такой показатель сексуальной функции как эякуляция. У всех самцов из опытных и контрольных групп он отсутствовал, также как и у интактных особей в данных методических условиях изучения сексуальной активности.

Таким образом, введение АС-6 снижало длительность латентного периода садки и незначительно увеличивало их количество. Максимальный эффект отмечали при введении субстанции в дозе 10 мг/кг, в результате чего повышалось число животных, у которых наблюдались интромиссии (в 4 раза по сравнению с контролем), увеличение количества сессий сексуальной активности, сокращение длительности ЛПС и интервала между садками.

На модели артериальной гипертензии с эндотелиальной дисфункцией в лаборатории лекарственной токсикологии изучена специфическая фармакологическая активность субстанции АС-6. Установлена дозозависимая гипотензивная активность субстанции, а также эндотелиопротекторные свойства, связанные с нормализацией продукции эндотелина-1 и увеличением уровня азота оксида в условиях блокады эндотелиальной ΝΟ-синтазы с помощью Τ-ΝΑΜΕ.

По влиянию на сексуальную активность самцов дозовой зависимости не выявлено. Отмечено увеличение сексуальной активности в виде снижения латентного периода садок, периода между сессиями копуляций, увеличения числа интромиссии.

Полученные данные позволяют судить, что фармацевтически приемлемые производные оксатриазолий-5-олата позволяют применять его для лечения сексуальных расстройств (дисфункций), таких как: отсутствие или потеря сексуального влечения, недостаточность генитальной реакции, оргазмическая дисфункция.

Список цитируемых источников

1. Агеев Ф.Т., Овчинников А.Г., Мареев В.Ю., Беленков Ю.Н. Эндотелиальная дисфункция и сердечная недостаточность: патогенетическая связь и возможности терапии ингибиторами ангиотензинпревращающего фермента//Сопы1шт тебюит том 3, η 2, 2001. - теб1а/сопы1шт/01_02/61.8Ыт1:: Зипбау, 22-арг-2001 15:01:07

- 7 032337

2. Старосельцева О.А. Использование фармакологического прекондиционирова-ния никорандилом...Автореф. дисс.к.м.н., Курск. -2012.

3. Патент РФ Κυ 2351328 С1 (Общество с ограниченной ответственнотью Консорциум-ПИК), 10.04.2009.

4. В1уа1асупа Τ.Ι., Ша М.Е., СЬашрюп Н.С. е! а1.//1. Апбго1. - 2003. - ν.24, № 6. -Р. 17-37.

5. Бо1отоп Н., Мап !М., 1аскзоп О. // Неагк - 2003.- V. 89. - Р. 251-253.

6. Пырочкин В.М., Мирончик Е.В. Эректильная дисфункция - новый симптом для кардиолога?// Медицинские новости. №10, 2010. - илхлу.тебпосози.Ьу.

7. Международная заявка ΑΟ 2013100340 А1 (ΙΕΟΝΝΑΜ ΒΙΟΙΝϋυδΤΚΥ ΕΟυΝΏΑΤΙΟΝ), 04.07.2013.

8. Заявка США υδ 2012277200 А1 (ΕΜΟΤΙΟΝΑΕ ΒΚΑΙΝ Βν), 01.11.2012.

9. Международная заявка ΑΟ 2011161655 А1 (ΗΟΚΡΗΑΟ ΚΕδ ΙΡ ΡΚΕ кТЭ е! а1.), 29.12.2011.

10. ТБ. Иютаз, М. Еебогскик, Β.ν. 8ке!!у, Ε.Ε. Атбегзоп. 'Гке 8уп!ке818 апб Асйуйу ок Боте 38иЬз!1!и!еб 1,2,3,4-Рзеибооха!па7о1-5-опе8 апб Τ^ϊγ Ргесигзогз апб Ке1а!еб Сотроипб8'Реппма11 СогрогаЙоп, Ркагтасеи!1са1 П1У18юп, ЭераПтеп! ок ()гцап1с Скет1з!гу, Коскез!ег, Αν Υо^к, 11.08.1969.

11. Магу р. Бипб, Бетоп! В. К1ег, Рзскагб А. О1еппоп, 1окп Б. ΕβΚ, 1г. РгеНттагу 8!иб1ез ок Мезоюшс 3-(5иЬ8!1!и!еб-агу1)^-оха!па7о1е8 аз Ро!еп!1а1 Ап!1курег!епз1уе А§еп!з ЭераПтегП ок Ркагтасеи!1са1 Скет1з!гу, Бскоо1 ок Ркагтасу, апб ЭераПтеп! ок Ркагтасо1о§у, Меб1са1 Со11еде ок V^^β^п^а, νίί§1та Соттоп^еа1!к ишуегзЛу, Рзсктопб, V^^β^п^а 23298, 12.04.1982.

12. Медицинские лабораторные технологии. Том 2/ Под редакцией проф.А.И. Карпищенко. - СПб: Интермедика, 2002.-600 с.

13. Меньшиков В.В. Клиническая лабораторная аналитика: Т.1,Т.2.,Частные аналитические технологии в клинической лаборатории. - М: Лабиринформ-РАМЛД, 1999. - 352 с. в 2-х томах.

14. Байрамов А.А., Зайченко И.Н., Богданова Л.А., Сапронов Н.С.. Роль холи-нэргических механизмов в регуляции сексуальной активности при остром и хроническом стрессе.//Фармакология, Т. 7, 2006. - С. 18-28.

15. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П.. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения./Под. ред. Батуева А.С. - М.: Высшая школа, 1991. -399 с.

16. Гланц С. Медико-биологическая статистика. - М.: Изд-во Практика, 1998. -459 с.

17. Статистика: Фирменное руководство по программе 8!а!1з!1са 6.0. 8!а!8ок!, 1999. -3756 с.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение 3-(3-[1,2,4]-триазоло)оксатриазолий-5-олата для лечения сексуальных расстройств.
2. Применение по п.1, характеризующееся тем, что сексуальные расстройства выбраны из группы: отсутствие или потеря сексуального влечения, недостаточность генитальной реакции, оргазмическая дисфункция.

- 8 032337