EA032293B1 - Конденсированные с тетрагидрофураном производные аминогидротиазина, пригодные для лечения болезни альцгеймера - Google Patents

Abstract

В настоящем изобретении предложено соединение формулы I или его фармацевтически приемлемая соль.

Description

Настоящее изобретение относится к новым селективным ингибиторам ВАСЕ1, к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, к способам применения таких соединений для лечения физиологических расстройств и к промежуточным соединениям и способам, пригодным для синтеза указанных соединений.

Настоящее изобретение относится к области лечения болезни Альцгеймера и других заболеваний и расстройств, затрагивающих β-амилоидный (АЬе1а) пептид, нейротоксичный и в высокой степени агрегирующий пептидный сегмент белка-предшественника амилоида (АРР). Болезнь Альцгеймера представляет собой изнуряющее нейродегенеративное расстройство, поражающее миллионы пациентов во всем мире. С учетом одобренных в настоящее время агентов, присутствующих на рынке, которые обеспечи вают лишь временное, симптоматическое улучшение для пациента, а не остановку, замедление или реверсирование заболевания, существует значительная неудовлетворенная потребность в лечении болезни Альцгеймера.

Болезнь Альцгеймера характеризуется выработкой, агрегацией и отложением АЬе!а в головном мозге. Показано, что полное или частичное ингибирование β-секретазы (фермент расщепления β-сайта белка-предшественника амилоида; ВАСЕ) оказывает значительный эффект на связанные с тромбоцитами и зависимые от тромбоцитов патологии в моделях на мышах, что позволяет предположить, что даже небольшое снижение уровней пептида АЬе!а может приводить к долговременному значительному снижению объему бляшки и синаптической недостаточности, обеспечивая значительный терапевтический эффект, в частности при лечении болезни Альцгеймера. Кроме того, идентифицированы два гомолога ВАСЕ, которые называют ВАСЕ1 и ВАСЕ2, и полагают, что ВАСЕ1 является наиболее клинически важным для развития болезни Альцгеймера. ВАСЕ1 экспрессируется главным образом в нейронах, а ВАСЕ2, как было показано, экспрессируется главным образом на периферии (см. Ώ. ОеЫпсН, Вюогд. Меб. СБеш. Ьей., 24, 2033-2045 (2014)). Кроме того, ВАСЕ2 может быть важным для пигментации, поскольку было установлено, что он играет роль в процессировании белка меланоцита, специфического для пигментных клеток (см. Ь. КосЫп, е! а1., Ргос. Ναίΐ. Асаб. 8с1. И8А, 110(26), 10658-10663 (2013)). Необходимы ингибиторы ВАСЕ, проникающие в центральную нервную систему (ЦНС), в частности ингибиторы, которые являются селективными в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2, для обеспечения средства лечения расстройств, опосредованных пептидом АЬе!а, таких как болезнь Альцгеймера.

В патенте США № 8158620 описаны конденсированные производные аминодигидротиазина, которые обладают ингибирующей активностью в отношении ВАСЕ1, и они дополнительно описаны как пригодные терапевтические агенты для лечения нейродегенеративного заболевания, вызванного пептидом АЬе!а, такого как деменция типа Альцгеймера. Кроме того, в патенте США № 8338407 описаны некоторые конденсированные производные аминодигидротиазина, обладающие ингибирующим действием в отношении ВАСЕ1, пригодные при лечении некоторых нейродегенеративных заболеваний, таких как деменция типа Альцгеймера.

В настоящем изобретении предложены некоторые новые соединения, которые являются ингибиторами ВАСЕ. Кроме того, в настоящем изобретении предложены некоторые новые соединения, которые являются селективными ингибиторами ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2. Кроме того, в настоящем изобретении предложены некоторые новые соединения, которые проникают в ЦНС. В настоящем изобретении предложены также некоторые новые соединения, которые обладают потенциалом для улучшенного профиля побочных эффектов, например благодаря селективному ингибированию ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2.

Соответственно в настоящем изобретении предложено соединение формулы I

или его фармацевтически приемлемая соль.

Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение формулы 1а:

или его фармацевтически приемлемая соль.

- 1 032293

В настоящем изобретении предложен также способ лечения болезни Альцгеймера у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I или 1а или его фармацевтически приемлемой соли.

В настоящем изобретении дополнительно предложен способ лечения прогрессирования умеренного когнитивного нарушения у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I или 1а или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении предложен также способ ингибирования ВАСЕ у пациента, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I или 1а или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении предложен также способ ингибирования ВАСЕ-опосредованного расщепления белка-предшественника амилоида, включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I или 1а или его фармацевтически приемлемой соли. В настоящем изобретении дополнительно предложен способ ингибирования выработки пептида АЬс1а. включающий введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, эффективного количества соединения формул I или I; или его фармацевтически приемлемой соли.

Кроме того, в настоящем изобретении предложено соединение формул I или I; или его фармацевтически приемлемая соль для применения в терапии, в частности для лечения болезни Альцгеймера или для предупреждения прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера. Кроме того, в настоящем изобретении предложено применение соединения формул I или I; или его фармацевтически приемлемой соли для производства лекарственного средства для лечения болезни Альцгеймера.

В настоящем изобретении дополнительно предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формул I или I; или его фармацевтически приемлемую соль с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами. В настоящем изобретении дополнительно предложен способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения формул I или I; или его фармацевтически приемлемой соли с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами. Настоящее изобретение включает также новые промежуточные соединения и способы синтеза соединений формул I и I;.

Умеренное когнитивное нарушение определяют как потенциальную продромальную фазу деменции, связанную с болезнью Альцгеймера, на основании клинической картины и прогрессирования пациентов, демонстрирующих умеренное когнитивное нарушение, до деменции Альцгеймера с течением времени. (Мотлк, е! а1., Агсй. Ыеиго1., 58, 397-405 (2001); Ре1ет8еп, е! а1., Агсй. №игой, 56, 303-308 (1999)). Термин предупреждение прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера включает ограничение, замедление, остановку или реверсирование прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера у пациента.

В данном контексте термины лечение или лечить включают ограничение, замедление, остановку или реверсирование прогрессирования или тяжести существующего симптома или расстройства.

В данном контексте термин пациент относится к человеку.

Термин ингибирование выработки пептида Айе1а означает снижение ш νίνο уровней пептида Айе1а у пациента.

В данном контексте термин эффективное количество относится к количеству или дозе соединения согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которое при введении однократной или многократной дозы пациенту обеспечивает требуемый эффект у пациента, которому поставлен диагноз или который проходит лечение.

Эффективное количество может быть легко установлено лечащим врачом-диагностиком, таким как специалист в данной области техники, с применением известных методик и посредством наблюдения результатов, полученных при аналогичных обстоятельствах. При определении эффективного количества для конкретного пациента лечащий врач-диагностик учитывает ряд факторов, включая, но не ограничиваясь ими: вид пациента; его массу, возраст и общее состояние здоровья; конкретное заболевание или расстройство; степень или вовлечение в патологический процесс или тяжесть заболевания или расстройства; ответ конкретного пациента; конкретное введенное соединение; способ введения; характеристики биодоступности введенного препарата; выбранная схема введения; применение сопутствующих лекарственных препаратов; другие релевантные обстоятельства.

Соединения согласно настоящему изобретению в целом эффективны в широком диапазоне доз. Например, суточные дозы обычно входят в диапазон от около 0,01 до около 20 мг/кг массы тела. В некоторых случаях могут быть более уместны уровни доз ниже нижнего предела вышеуказанного диапазона, а в других случаях могут быть использованы еще более высокие дозы с допустимыми побочными эффектами и, следовательно, указанный выше диапазон доз никоим образом не предназначен для ограничения границ объема настоящего изобретения.

Соединения согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют в фармацевтические композиции, которые вводят любым способом, который обеспечивает биодоступность соединения, включая пероральный и трансдермальный способы. Наиболее предпочтительно такие композиции пред

- 2 032293 назначены для перорального введения. Такие фармацевтические композиции и способы их получения хорошо известны в данной области техники (см., например, К.етт§1оп: ТЬе 8с1епсе апб Ргасбсе о£ Рйагтасу, Ь.У. А11еп, ред., 22 издание, Рйагтаееибеа1 Ргезз, 2012).

Соединения формул I и 1а или их фармацевтически приемлемые соли особенно пригодны в способах лечения согласно настоящему изобретению, но предпочтительны некоторые группы, заместители и конфигурации. В следующих абзацах описаны такие предпочтительные группы, заместители и конфигурации. Следует понимать, что указанные предпочтения применимы к способам лечения и к новым соединениям согласно настоящему изобретению.

Так, предпочтительным является соединение формулы I, в котором конденсированное бициклическое кольцо находится в цис-конфигурации, или его фармацевтически приемлемая соль. Например, специалистам в данной области техники понятно, что соединение формулы 1а находится в цисконфигурации относительно центров, обозначенных 4а и 7а, как показано на следующей схеме А. Кроме того, на схеме А представлена предпочтительная относительная конфигурация трех хиральных центров формулы 1а, где дифторэтильный заместитель в положении 5 находится в цис-конфигурации относительно водорода в положении 4а и замещенного фенильного заместителя в положении 7а.

Схема А

Дополнительные соединения согласно настоящему изобретению включают:

Е

и их фармацевтически приемлемые соли.

Несмотря на то, что настоящее изобретение предусматривает все отдельные энантиомеры и диастереомеры, а также смеси энантиомеров указанных соединений, включая рацематы, особенно предпочтительными являются соединения с абсолютной конфигурацией, указанной ниже:

- 3 032293

ТЧ-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид и фармацевтически приемлемые соли.

его

Кроме того, Т4-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-ά][1,3 ]тиазин-7 а-ил]-4-фторфенил] -5 -цианопир идин-2-карбоксамид;

^-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида метансульфонат;

метилбензолсульфоната полугидрат являются наиболее предпочтительными.

Специалистам в данной области техники понятно, что соединения согласно настоящему изобретению могут существовать в таутомерных формах, как показано ниже на схеме В. При упоминании в настоящей заявке одного из конкретных таутомеров соединений согласно настоящему изобретению следует понимать, что оно охватывает обе таутомерные формы, а также их смеси.

Схема В

Ν^ΝΗ Нс

Кроме того, некоторые промежуточные соединения, описанные в следующих способах получения, могут содержать одну или более азотзащитных групп. Следует понимать, что защитные группы могут варьироваться, как известно специалистам в данной области техники, в зависимости от конкретных условий реакции и конкретных производимых превращений. Условия защиты и снятия защиты хорошо известны специалистам в данной области техники и описаны в литературе (см., например, Стеепе'з Рго!есйуе Огоирз ίη Огдашс 8уп!йе818, четвертое издание, Ре1ег С.М. \Си18 апб ТНеобога Стеепе, .Ιοίτη ^йеу апб 8опз, 1пс. 2007).

Отдельные изомеры, энантиомеры и диастереомеры могут быть выделены или разделены специалистами в данной области техники в любом удобном месте синтеза соединений согласно настоящему изобретению с помощью таких методов как технология селективной кристаллизации или хиральная хроматография (см., например, I. йасциез, е! а1., Епапйотегз, Касета!ез, апб ВезоШйопз, 1ойп \УПеу апб 8опз, 1пс., 1981, и Е.Ь. Ейе1 апб 8.Н. \УПеп, 81егеосйет181гу оГ Огдашс Сотроипбз, ^11еу-1п1егзс1епсе, 1994).

Фармацевтически приемлемая соль соединений согласно настоящему изобретению, такая как гидрохлоридная соль, может быть образована, например, взаимодействием подходящего свободного основания соединения согласно настоящему изобретению, подходящей фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, в подходящем растворителе, таком как диэтиловый эфир, в стандартных условиях, известных в данной области техники. Кроме того, образование таких солей может происходить одновременно со снятием азотзащитной группы. Образование таких солей хорошо известно и признано в данной области техники. См., например, 8а1! зе1ес!юп Гог Ьа81с бгидз, 1п!егпа!юпа1 1оигпа1 оГ РНагтасеийсз, 33: 201-217 (1986); Вазйп, Κ.Ι., е! а1. 8а1! 8е1ес!юп апб Орйпл/айоп Ргосебигез Гог РНагтасеийса1 \е\у СНет1са1 Епййез, Огдашс Ргосезз КезеагсН апб [)еуе1ортепг 4: 427-435 (2000); Вегде, 8.М., е! а1., РНагтасеийса1 8а1!з, 1оигпа1 оГ РНагтасеийса1 8с1епсез, 66: 1-19, (1977).

- 4 032293

Ниже представлено определение некоторых сокращений: АРР относится к белкупредшественнику амилоида; В8А относится к альбумину бычьей сыворотки; ΟΌΙ относится к 1,1'карбонилдимидазолу; кДНК относится к комплементарной дезоксирибонукленовой кислоте; ΌΑ8Τ относится к трифториду диэтиламиносеры; ОСС относится к 1,3-дициклогексилкарбодиимиду; Э1С относится к 1,3-диизопропилкарбодиимиду; ΌΙΡΕΑ относится к Ν,Ν-диизопропилэтиламину; ΌΜΑΡ относится к 4-диметиламинопиридину; ДМСО относится к диметилсульфоксиду; ЕВ88 относится к сбалансированному солевому раствору Эрла; ЕЭС1 относится к 1-(3-диметиламинопропил)-3этилкарбодиимида гидрохлориду; ИФА относится к твердофазному иммуноферментному анализу; Е12 относится к среде Хэма Е12; ЕВ8 относится к эмбриональной бычьей сыворотке; Ее относится к кристаллизующемуся фрагменту; ΕΕϋΟΕΕΑΌ^ΤΜ относится к трифториду 4-трет-бутил-2,6диметилфенилсеры; ΕΒΕΤ относится к резонансному переносу энергии флуоресценции; ΗΑΤϋ относится к (диметиламино)-Х№диметил(3Н-[1,2,3]триазоло[4,5-Ь]пиридин-3-илокси)метаниминия гексафторфосфату; ΗΒΤϋ относится к (1Н-бензотриазол-1-илокси)(диметиламино)^Х-диметилметаниминия гексафторфосфату; НЕК относится к первичной почке человека; НЕ-пиридин относится к гидрофториду пиридина или реагенту Олаха или к поли(пиридинфториду); НОВТ относится к гидрату 1гидроксибензотриазола; 1С₅₀ относится к концентрации агента, которая вызывает 50% от максимального ингибирующего ответа, возможного для данного агента; НИР относится к пероксидазе хрена; 1§С₁ относится к Ес-гамма-рецептору иммуноглобулин-подобного домена; МВР относится к мальтозасвязывающему белку; ΜΕΜ относится к минимальной необходимой среде; РВ8 относится к фосфатно-солевому буферному раствору; ΡΌΑΡΡ относится к белку-предшественнику амилоида, полученному из тромбоцитов; РуВОР относится к (бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония гексафторфосфату); ΡуΒ^ΟΡ относится к бром(трипирролидинил)фосфония гексафторфосфату; ΒΕϋ относится к относительной единице флуоресценции; ОТ-ПЦР относится к полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией; ДНС-ПААГ относится к электрофорезу в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия; ТГФ относится к тетрагидрофурану; ТМВ относится к тетраметилбензидину; ТМЕМ относится к трансмембранному белку; Τπδ относится к трис(гидроксиметил)аминометану; тритил относится к группе формулы (Т11)₃С-; РПД относится к рентгеновской порошковой дифракции; Х1а1Е1иог-Е® или ΌΑ8Τ дифторсульфиниевая соль относится к (диэтиламино)дифторсульфония тетрафторборату или Х^диэтил-8,8-дифторсульфилиминия тетрафторборату; Χΐα1Ε1ιιθΓ-Μ® или морфо-ΌΑδΤ дифторсульфиниевая соль относится к дифтор(морфолино)сульфония тетрафторборату или дифтор-4-морфолинилсульфония тетрафторборату.

Специалистам в данной области техники понятно, что термины тозилат, толуолсульфоновая кислота, η-толуолсульфоновая кислота и 4-метилбензолсульфоновая кислота относятся к соединению следующей структуры:

Ο=δ=Ο

ОН

Соединения согласно настоящему изобретению или их соли могут быть получены различными способами, известными специалистам в данной области техники, некоторые из которых представлены на следующих схемах, в следующих способах получения и примерах. Специалистам в данной области техники понятно, что конкретные стадии синтеза для каждого из описанных способов могут быть поразному комбинированы или в использованы в сочетании со стадиями из других схем для получения соединений согласно настоящему изобретению или их солей. Продукты каждой стадии на представленных ниже схемах могут быть выделены стандартными способами, хорошо известными в данной области техники, включая экстракцию, выпаривание, осаждение, хроматографию, фильтрацию, истирание в порошок и кристаллизацию. На представленных ниже схемах все заместители являются такими, как описано выше, если не указано иное. Реагенты и исходные материалы легко доступны специалистам в данной области техники. Не ограничивая объем настоящего изобретения, следующие схемы, способы получения и примеры представлены для дополнительной иллюстрации изобретения.

- 5 032293

Схема 1

Стадия Ь

На схеме 1, стадии А йодид триметилсульфония обрабатывают органическим основанием, таким как н-бутиллитий, при температуре около -50°С в растворителе, таком как ТГФ. Затем защищенный оксиметилоксиран, защищенный подходящей защитной группой, такой как тритильная группа, добавляют к щелочному раствору при -10°С и оставляют перемешиваться в течение около 2 ч с получением защищенного продукта схемы 1, стадии А. РС представляет собой защитную группу, разработанную для аминогруппы или кислородной группы, такой как карбаматы, амиды или простые эфиры. Такие защитные группы хорошо известны и признаны в данной области техники.

Защищенный продукт стадии А приводят во взаимодействие со сложным α-галогенэфиром, таким как трет-бутоксибромацетат, используя тетра-Ы-бутиламмония сульфат или другие катализаторы фазового переноса на основе четвертичных солей аммония, в растворителе, таком как толуол, и в водном растворе неорганического основания, такого как гидроксид натрия, примерно при комнатной температуре с получением соединения схемы 1, стадии В. Такие реакции алкилирования хорошо известны в данной области техники. Альтернативно для получения защищенного продукта стадии В может быть использовано основание, такое как 60% гидрид натрия в масле, с растворителями, такими как Ν,Νдиметилформамид или ТГФ, и в диапазоне температур от 0 до 100°С. Трет-бутоксикарбонилацетат превращают в оксим в 2-стадийном процессе. По каплям добавляют восстановительный агент, такой как гидрид изобутилалюминия в гексанах, при температуре около -70°С, затем по каплям добавляют водный раствор кислоты, такой как хлористоводородная кислота, при температуре около -60°С. Выделение продукта осуществляют органической экстракцией с получением промежуточного вещества. Это вещество растворяют в органическом растворителе, таком как дихлорметан, и обрабатывают ацетатом натрия, затем гидрохлоридом гидроксиламина с получением оксимного продукта стадии С. Оксимный продукт схемы 1, стадии 1 может быть превращен в бициклический 4,5-дигидроизоксазольный продукт стадии Ό посредством 3+2 циклизации с помощью нескольких способов, таких как применение водного раствора гипохлорита натрия или альтернативного окислителя, такого как Ν-хлорсукцинимид, и в растворителе,

- 6 032293 таком как трет-бутил-метиловый эфир, толуол, дихлорметан или ксилол, при температуре около 10-15°С или при нагревании. 2-фтор-5-бромфенильная группа может быть присоединена к дигидроизоксазолу с помощью металлорганического реагента. Металлорганический реагент может быть получен из 4-бром-1фтор-2-йодбензола с применением обмена галогена на металл с помощью таких реагентов как нбутиллитий или комплекс изопропилмагнийхлорида с хлоридом лития, которые добавляют по каплям в диапазоне температур от около -78 до 15°С растворителе, таком как ТГФ. Затем добавляют кислоту Льюиса, такую как диэтилэтерат трифторида бора, с получением продукта схемы 1, стадии Е. Полученный бициклический тетрагидроизоксазол можно обработать цинком в уксусной кислоте с получением продукта раскрытия кольца схемы 1, стадии Е. В альтернативном способе раскрытия изоксазольного кольца используют никель Ренея в полярном растворителе, таком как этанол, под давлением в условиях гидрирования. Затем продукт стадии Е может быть приведен во взаимодействие с бензоилизотиоцианатом в растворителе, таком как дихлорметан или ТГФ, при температуре от около 5°С до комнатной температуры с получением тиомочевинного соединения стадии С. Тиазиновое кольцо может быть образовано с помощью трифторметансульфонового ангидрида и органического основания, такого как пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре около -20°С с получением продукта стадии Н. Гидроксиметильная защитная группа, такая как тритильная группа, может быть удалена на схеме 1, стадии I, с применением способов, хорошо известных в данной области техники, таких как использование муравьиной кислоты при комнатной температуре с получением соединения стадии I. Гидроксиметил может быть окислен до карбоновой кислоты с помощью окислительных агентов, таких как 2йодоксибензойная кислота (ΙΒΧ), при комнатной температуре в растворителе, таком как ДМСО, или посредством добавления по частям (диацетоксийод)бензола в растворителе, таком как ацетонитрил, при перемешивании при температуре около 5°С с получением соединения схемы 1, стадии 1. Амид Вайнреба получают на схеме 1, стадии К из кислотного продукта стадии I посредством добавления N,0диметилгидроксиламина гидрохлорида, органического основания, такого как триэтиламин, и связующего реагента, такого как НАТи. Смесь перемешивают при комнатной температуре с получением продукта стадии К. Другие связующие агенты, которые могут быть использованы, включают ί,ΌΙ. карбодиимиды, такие как ОСС, ΌΙΕ или ΕΌΟΙ, или другие урониевые или фосфониевые соли ненуклеофильных анионов, такие как НВТи, РуВОР и РуВгОР. Затем амид Вайнреба превращают в кетон, используя металлорганический реагент, такой как реактив Гриньяра, или литийорганический реагент на стадии Ь в растворителе, таком как ТГФ. В частности, метилмагнийбромид в виде раствора в растворителях, таких как эфир или 2метилтетрагидрофуран, можно добавить к амиду Вайнреба при температуре от около -78 до -40°С с получением кетона стадии Ь. На схеме 1, стадии М, метилкетоновую группу соединения стадии Ь превращают в дифторэтильную группу, используя дифтор(морфолина)сульфония тетрафторборат в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре около 0°С, затем по каплям добавляют тригидрофторид триэтиламина и перемешивают при температуре от 0°С до комнатной температуры с получением соединения схемы 1, стадии М. Альтернативно другие фторирующие агенты, которые могут быть использованы, которые хорошо известны в данной области техники, представляют собой Пеохо-Е1иог®, ΌΑ8Τ, Х!а1Е1иог-Е® или Х1а1Е1иог-М® с добавкой, такой как триэтиламина тригидрофторид или ЕЬиОЕЕАО^ТМ с использованием добавки, такой как НЕ-пиридин. 5-бром в фениле превращают в амин, используя (1К,2К.)^№-диметил-1,2-циклогександиамин в растворителе, таком как этанол, и добавляя азид натрия, затем аскорбат натрия и сульфат меди (II). Реакционную смесь нагревают до температуры около 80°С в течение нескольких часов, затем выделяют продукт экстракцией, используя растворитель, такой как этилацетат. Затем промежуточное соединение восстанавливают в условиях гидрирования, используя палладий на углероде, такой как 10% палладий, в растворителях, таких как этанол и ТГФ, при давлении водорода около 50 ρδΐ с получением анилинового продукта схемы 1, стадии N.

- 7 032293

Схема 1а

Вг

Стадия С

Альтернативно на схеме 1а защищенный продукт схемы 1, стадии А можно обработать 4-(2хлорацетил)морфолино-соединением и основанием, таким как гидросульфат тетрабутиламмония, в растворителе, таком как толуол, при температуре около 5°С с получением продукта схемы 1а, стадии А. Затем морфолино-группа может служить в качестве уходящей группы на схеме 1а, стадии В. Например, продукт схемы 1а, стадии А можно обработать подходящим реактивном Гриньяра, который может быть получен ίη 811и из комплекса изопропилмагнийхлорида с хлоридом лития и 4-бром-1-фтор-2-йодбензола или при наличии подходящего реактива Гриньяра этот реагент можно добавить непосредственно к продукту схемы 1а, стадии А при температуре около 5°С с получением продукта схемы 1а, стадии В. Карбонилацетат может быть превращен в оксим с помощью гидрохлорида гидроксиламина и ацетата натрия при нагревании до температуры около 50°С образованием продукта схемы 1а, стадии С. Оксимный продукт схемы 1а, стадии С может быть затем превращен в продукт схемы 1а, стадии Ό (тот же продукт, который получают на схеме 1, стадии Е) с применением гидрохинона в растворителе, таком как толуол, и при нагревании до кипения с обратным холодильником. Аминный продукт схемы 1а, стадии Ό можно ацилировать ацетилхлоридом, используя органическое основание, такое как ΌΜΑΡ и пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, при температуре около 0-5°С с получением продукта схемы 1а, стадии Е. Продукт схемы 1а, стадии Е можно затем превратить в продукт схемы 2, стадии А, как показано ниже.

- 8 032293

Схема 2

В альтернативном способе, как показано на схеме 2, изоксазольный атом азота соединения схемы 1, стадии Е защищают ацетильной группой, а защитную группу гидроксиметила удаляют двухстадийным способом. Например, тетрагидроизоксазол обрабатывают органическим основанием, таким как ΏΜΆΡ и пиридин, в растворителе, таком как дихлорметан, и добавляют ацетилхлорид. Температуру поддерживают ниже чем около 10°С, а затем оставляют перемешиваться при температуре около комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют водой и экстрагируют растворителем, таким как дихлорметан. Органические экстракты промывают водным раствором кислоты, таким как 1 н. хлористоводородная кислота, и снова экстрагируют водный слой растворителем, таким как дихлорметан, затем промывают водой. Органический растворитель частично удаляют и добавляют кислоту, такую как муравьиная кислота, для снятия защиты гидроксиметила. Затем смесь можно перемешивать при комнатной температуре или нагревать до температуры около 40°С до завершения снятия защиты гидрокси-группы с получением соединения схемы 2, стадии А. Гидроксиметильный продукт схемы 2, стадии А может быть окислен до продукта карбоновой кислоты схемы 2, стадии В способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии I, и амид Вайнреба может быть дополнительно получен способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии К, с использованием связующего агента, такого как СО1, посредством порционного добавления с растворителем, таким как дихлорметан, охлаждения до -20°С и перемешивания в течение около 1 ч и порционного добавления гидрохлорида Ν,Ο-диметилгидроксиламина. Следующие порции СО! и Ν,Ο-диметилгидроксиламина можно добавлять до завершения реакции с получением продукта амида Вайнреба Схемы 2, стадии С. Кетон схемы 2, стадии I) можно получить из амида Вайнреба способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии Б. Кетон стадии Ώ может быть превращен в дифторэтильную группу способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии М, с получением продукта схемы 2, стадии Е. Защиту с ацетилтетрагидроизоксазола можно снять в кислотных условиях, хорошо известных в данной области техники, например с применением хлористоводородной кислоты и нагревания до около 100°С с получением продукта схемы 2, стадии Р. Бициклический тетрагидроизоксазол можно обработать цинком в уксусной кислоте с получением продукта раскрытия кольца схемы 2, стадии С способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии Р. Тиазиновый продукт схемы 2, стадии Н может быть получен 2-стадийной реакцией в одном реакторе с применением бензоилизотиоцианата способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии С и Н. Смесь выпаривают до остатка и добавляют циклогексан. Смесь нагревают до около 60°С и добавляют метил-трет-бутиловый эфир для растворения остатка. Раствор фильтруют и концентрируют досуха. Затем может быть образовано тиазиновое кольцо способом, аналогичным процедуре, описанной на схеме 1, стадии Н, с получением продукта схемы 2, стадии Н.

- 9 032293

Схема 3

На схеме 3, стадии А анилиновый продукт схемы 1, стадии N можно связать с гетероароматической карбоновой кислотой, используя условия конденсации, хорошо известные в данной области техники. Специалистам в данной области техники понятно, что существует множество способов и реагентов для образования амида, получаемого в результате взаимодействия карбоновых кислот и аминов. Например, реакция подходящего анилина с подходящей кислотой в присутствии связующего реагента и аминного основания, такого как 01РЕА или триэтиламин, приводит к образованию соединения схемы 3, стадии А. Связующие реагенты включают карбодиимиды, такие как ОСС, 1Ж'. ЕОС1. и ароматические оксимы, такие как ΗΘΒΐ и ΗΘΑΐ. Кроме того, вместо более традиционных связующих реагентов могут быть использованы урониевые или фосфониевые соли ненуклеофильных анионов, такие как ΗΒΤϋ, ΗΑΤϋ, РуВОР и РуВгОР, или циклический фосфорный ангидрид, такой как пропилфосфоновый ангидрид (Т3Р®). Для усиления реакции могут быть использованы добавки, такие как ОМАР. Альтернативно амин анилина можно ацилировать с использованием замещенных бензоилхлоридов в присутствии основания, такого как триэтиламин или пиридин. Затем на схеме 3, стадии В с защищенного тиазинамина может быть снята защита с помощью органического основания, такого как пиридин и О-метилгидроксиламина гидрохло рид, в растворителях, таких как ТГФ и этанол, и в органическом основании, таком как пиридин, с получением соединения формулы 1а. Альтернативно для снятия защиты с тиазина может быть использовано неорганическое основание, такое как гидроксид лития в метаноле, с получением соединения формулы 1а.

Схема 4

Стадия А о I 1

X ² г

Η₂Ν

1а

Альтернативно на схеме 4, стадии А анилиновый продукт, полученный на схеме 1, стадии Ν, может быть подвержен снятию защиты в стандартных условиях, хорошо известных в данной области техники, например с органическим основанием, таким как пиридин и гидрохлорид О-метилгидроксиламина, в растворителях, таких как ТГФ и этанол, с получением диаминосоединения со снятой защитой. Альтернативно для снятия защиты с получением диаминосоединения со снятой защитой может быть использовано

- 10 032293 неорганическое основание, такое как гидроксид лития в метаноле.

Затем на схеме 4, стадии В диаминосоединение со снятой защитой может быть селективно связано по анилиновой аминогруппе с гетероароматической карбоновой кислотой с применением условий конденсации, хорошо известных в данной области техники, с получением соединения формулы 1а. Специалистам в данной области техники понятно, что существует множество способов и реагентов для образования амида, получаемого в результате взаимодействия карбоновых кислот и аминов. Например, реакция подходящего амина с подходящей кислотой в присутствии связующего реагента и аминного основания, такого как ΏΙΡΕΆ или триэтиламин, приводит к образованию соединения формулы 1а. Связующие реагенты включают карбодиимиды, такие как ОСС, О!С, ЕОС1, и ароматические оксимы, такие как НОВ! и ΗΘΆΐ. Кроме того, вместо более традиционных связующих реагентов могут быть использованы урониевые или фосфониевые соли ненуклеофильных анионов, такие как ΗΒΤϋ, НАТи, РуВОР и РуВгОР, или циклический фосфорный ангидрид, такой как пропилфосфоновый ангидрид (Т3Р®). Для усиления реакции могут быть использованы добавки, такие как ОМАР.

Схема 5

Альтернативно на схеме 5 бромидный продукт схемы 1, стадии М превращают в защищенный анилин, используя трифторацетамид, йодид меди, диамин, такой как рацемический транс-ММ-диметил-1,2циклогександиамин, неорганическое основание, такое как карбонат калия, и йодид натрия при нагревании до около 100-130°С с получением защищенного анилинового продукта схемы 5, стадии А. Затем может быть осуществлено поэтапное снятие защиты с защищенного анилина и тиазинамина. Трифторацетамид можно гидролизовать с использованием основания, такого как 7 н. аммиак в метаноле, с получением анилина и защищенного тиазина, такого же продукта, как на схеме 1, стадии N. Затем с тиазина можно снять защиту в условиях, хорошо известных в данной области техники и описанных на схеме 4, стадии А, с применением гидрохлорида О-метилгидроксиламина в растворителе, таком как этанол и ТГФ, с органическим основанием, таким как пиридин, с последующим нагреванием до около 55°С или перемешиванием при комнатной температуре с последующим концентрированием и очисткой с получением продукта схемы 5, стадии В. Альтернативно порядок снятия защиты может быть изменен, при этом сначала снимают защиту с тиазина, а затем снимают защиту с анилина.

Следующие способы получения и примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Способ получения 1.

(28)-1-тритилоксибут-3-ен-2-ол:

Схема 1, стадия А. Перемешивали йодид триметилсульфония (193,5 г, 948,2 ммоль) в ТГФ (1264 мл) при комнатной температуре в течение 75 мин. Охлаждали смесь до -50°С и через канюлю добавляли нбутиллитий (2,5 моль/л в гексанах, 379 мл, 948,2 ммоль) в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь постепенно нагреваться до -30°С и перемешивали в течение 60 мин. По частям добавляли (28)-2

- 11 032293 тритилоксиметилоксиран (100 г, 316,1 ммоль), поддерживая температуру ниже -10°С. После завершения добавления оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Выливали реакционную смесь в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью метил-трет-бутилового эфира : гексанов (градиент 10-15%), с получением указанного в заголовке соединения (56,22 г, 54%). ЭР/МС т/ζ 353 (М+Ыа).

Альтернативный способ получения 1.

(28)-1-Тритилоксибут-3-ен-2-ол.

Схема 1а, стадия А. Исходное вещество: добавляли трифенилметилхлорид (287 г, 947,1 ммоль), ЭМАР (7,71 г, 63,1 ммоль) и триэтиламин (140 г, 1383,5 ммоль) к раствору (28)-бут-2-ен-1,2-диола (полученного так, как описано в 1АС8, 1999, 121, 8649) (64,5 г, 631 ммоль) в дихлорметане (850 мл). Перемешивали в течение 24 ч при 24°С. Добавляли 1 н. водный раствор лимонной кислоты (425 мл). Разделяли слои и концентрировали органический экстракт при пониженном давлении досуха. Добавляли метанол (900 мл) и охлаждали до 5°С в течение 1 ч. Собирали твердое вещество фильтрацией и промывали метанолом (50 мл) при 5°С. Отбрасывали твердое вещество и концентрировали маточный раствор при пониженном давлении досуха. Добавляли толуол (800 мл) и концентрировали до массы 268 г с получением указанного в заголовке соединения (129 г, 67%) в виде 48 мас.% раствора в толуоле.

Способ получения 2.

1-Морфолино-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанон:

Схема 1а, стадия А. Добавляли гидросульфат тетрабутиламмония (83,2 г, 245,0 ммоль) и 4-(2хлорацетил)морфолин (638,50 г, 3902,7 ммоль) к раствору 1-тритилоксибут-3-ен-2-ола (832,4, 2519 ммоль) в толуоле (5800 мл), охлажденному до температуры 0-5°С. Добавляли раствор гидроксида натрия (1008,0 г, 25202 ммоль) в воде (1041 мл). Перемешивали в течение 19 ч при 0-5°С. Добавляли воду (2500 мл) и толуол (2500 мл). Разделяли слои и промывали органический экстракт водой (2x3500 мл). Концентрировали органический экстракт при пониженном давлении досуха. К остатку добавляли толуол (2500 мл), а затем медленно добавляли н-гептан (7500 мл). Перемешивали в течение 16 ч. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией и промывали н-гептаном (1200 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (1075,7 г, 98%).

Способ получения 3.

1-(5-бром-2-фторфенил)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанон:

Вг

Схема 1а, стадия В. Добавляли 1,3 М раствор комплекса изопропилмагнийхлорида с хлоридом лития (3079 мл, 2000 ммоль) в ТГФ к раствору 4-бром-1-фтор-2-йодбензола (673,2 г, 2237,5 ммоль) в толуоле (2500 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру реакции ниже 5°С. Перемешивали в течение 1 ч. Добавляли полученный раствор реактива Гриньяра (5150 мл) к раствору 1-морфолино-2[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанона (500 г, 1093 ммоль) в толуоле (5000 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру реакции ниже 5°С. Перемешивали в течение 3 ч, поддерживая температуру ниже 5°С. Добавляли дополнительное количество полученного раствора реактива Гриньяра (429 мл) и перемешивали в течение 1 ч. Добавляли 1 н. водный раствор лимонной кислоты (5000 мл) с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру ниже 5°С. Разделяли слои и промывали органический экстракт водой (5000 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении досуха. К остатку добавляли метанол (2000 мл) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения в виде остатка (793 г, эффективность 73,4%, 83%).

Способ получения 4.

1-(5-бром-2-фторфенил)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этаноноксим:

- 12 032293

Схема 1а, стадия С. Добавляли гидрохлорид гидроксиламина (98,3 г) к 1-(5-бром-2-фторфенил)-2[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этанону (450 г, 707 ммоль) и ацетату натрия (174 г) в метаноле (3800 мл). Нагревали раствор до 50°С в течение 2 ч. Охлаждали до 24°С и концентрировали. К остатку добавляли воду (1000 мл) и толуол (1500 мл). Разделяли слои и экстрагировали водную фазу толуолом (500 мл). Объединяли органический экстракт и промывали водой (2x400 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде остатка (567 г, эффективность 61,4%, 88%).

Способ получения 5.

Трет-бутил-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетат:

Схема 1, стадия В. Добавляли (28)-1-тритилоксибут-3-ен-2-ол (74,67 г, 226,0 ммоль) к раствору тетра-Х-бутиламмония сульфата (13,26 г, 22,6 ммоль) в толуоле (376 мл). Добавляли гидроксид натрия (50% по массе) в воде (119 мл), затем трет-бутил-2-бромацетат (110,20 г, 565,0 ммоль). Перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч при комнатной температуре. Выливали в воду, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Филь тровали смесь и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (77,86 г, 77%). ЭР/МС т/ζ 467 (Μ+Να).

Способ получения 6.

(1Е)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетальдегидоксим:

ОН

Схема 1, стадия С. Охлаждали раствор трет-бутил-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетата (77,66 г, 174,7 ммоль) в дихлорметане (582,2 мл) до -78°С. По каплям добавляли раствор диизобутилалюминийгидрида в гексанах (1 моль/л, 174,7 мл) в течение 35 мин и поддерживали температуру ниже 70°С. Перемешивали при -78°С в течение 5 ч. К реакционной смеси по каплям добавляли водный раствор хлористоводородной кислоты (2 моль/л, 192,1 мл), поддерживая температуру ниже -60°С. Оставляли реакционную смесь постепенно нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 60 мин. Отделяли органический экстракт и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Сушили раствор над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в дихлорметане. Добавляли ацетат натрия (28,66 г, 349,3 ммоль), затем гидрохлорид гидроксиламина (18,21 г, 262,0 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выливали в воду, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органические слои и сушили над сульфатом магния. Фильтровали смесь и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (68,38 г, 101%). ЭР/МС т/ζ 386 (МН).

Способ получения 7.

(3аК,48)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол:

- 13 032293

Схема 1, стадия Ό. Охлаждали раствор (1Е)-2-[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]ацетальдегидоксима (55,57 г, 143,4 ммоль) в трет-бутил-метиловом эфире (717 мл) до 5°С. По каплям добавляли гипохлорит натрия (5% в воде, 591 мл, 430,2 ммоль), поддерживая температуру ниже 10°С. Перемешивали при 10°С в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь нагреваться до 15°С в течение 18 ч. Разбавляли реакционную смесь этилацетатом и промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия. Разделяли фазы, промывали органическую фазу 5% раствором гидросульфита натрия и насыщенным солевым раствором. Сушили раствор над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью 50% метил-трет-бутилового эфира/дихлорметана: гексанов (градиент 20-27%), с получением указанного в заголовке соединения (35,84 г, 65%). ЭР/МС т/ζ 408 (Μ+Να).

Способ получения 8.

(3аК,48,6аК)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изокса зол:

Схема 1, стадия Е. Охлаждали раствор 4-бром-1-фтор-2-йодбензола (86,94 г, 288,9 ммоль) в ТГФ (144,5 мл) и толуоле (1445 мл) до -78°С. По каплям добавляли н-бутиллитий (2,5 М в гексанах, 120 мл, 288,9 ммоль), поддерживая температуру ниже -70°С. Перемешивали в течение 30 мин при -78°С. По каплям добавляли диэтилэтерат трифторида бора (36,5 мл, 288,9 ммоль), поддерживая температуру ниже -70°С. Перемешивали раствор в течение 30 мин при -78°С. К реакционной смеси по каплям добавляли раствор (3аК,48)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (55,69 г, 144,5 ммоль) в ТГФ (482 мл) в течение 30 мин, поддерживая температуру ниже -65°С. Перемешивали при -78°С в течение 90 мин. Быстро добавляли насыщенный раствор хлорида аммония, поддерживая температуру ниже -60°С. Выливали в насыщенный солевой раствор и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя градиентом от 100% гексанов до 30% гексанов/70% диэтилового эфира, с получением указанного в заголовке соединения (36,52 г, 45%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 560/562 [М+Н].

Альтернативный способ получения 8.

Схема 1а, стадия Ό. Нагревали раствор 1-(5-бром-2-фторфенил)-2[(18)-1-(тритилоксиметил)аллилокси]этаноноксима (458 г, 502 ммоль) и гидрохинона (56,3 г, 511 ммоль) в толуоле (4000 мл) с обратным холодильником до кипения в атмосфере азота в течение 27 ч. Охлаждали раствор до 24°С и добавляли водный раствор карбоната натрия (800 мл). Разделяли слои и экстрагировали водную фазу толуолом (300 мл). Объединяли органический экстракт и промывали водой (2x500 мл). Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли изопропиловый спирт (1500 мл) и нагревали с обратным холодильником до кипения. Охлаждали до 24°С и собирали твердое вещество фильтрацией. Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (212 г, 75%).

Способ получения 9.

1-[(3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанон:

- 14 032293

Схема 1а, стадия Е. Добавляли ацетилхлорид (35,56 г, 503,9 ммоль) к раствору (3аК,48,6аК)-6а-(5бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (235,3 г, 420 ммоль), ОМАР (5,13 г, 42,0 ммоль) и пиридина (66,45 г, 840,1 ммоль) в дихлорметане (720 мл) в атмосфере азота, поддерживая внутреннюю температуру ниже 5°С. Перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли воду (300 мл) и 1 М серную кислоту (300 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин и оставляли для разделения слоев. Собирали органический экстракт и промывали насыщенным раствором карбоната натрия (500 мл) и водой (500 мл). Сушили раствор над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 1-[(3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанона (235 г, 93%) в виде серого твердого вещества.

Способ получения 10.

1-[(3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)тетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с][1,2]оксазол-1-ил]этанон:

НО_ ,,

Схема 2, стадия А. В реакторе объемом 2 л с рубашкой добавляли ацетилхлорид (290 мл, 4075 ммоль) к раствору (3аК,48,6аК)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазола (1996 г, 3384 ммоль), ОМАР (56,0 г, 458 ммоль), пиридина (500 мл, 6180 ммоль) в дихлорметане (10 л) в атмосфере азота, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С. После завершения добавления (1 ч) нагревали до 20°С и перемешивали в течение ночи. Если реакция не была завершена, добавляли ацетилхлорид, ОМАР, пиридин и дихлорметан до завершения реакции по результатам наблюдения. Охлаждали реакционную смесь до 0°С и медленно добавляли воду (5 л), перемешивали реакционную смесь при 10°С в течение 30 мин и оставляли для разделения слоев. Собирали органический экстракт и промывали водный экстракт дихлорметаном (1 л). Промывали объединенные органические экстракты 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (2x4 л), экстрагировали водный слой дихлорметаном (2x1л). Промывали объединенные органические экстракты водой (4 л) и удаляли растворитель при пониженном давлении с получением общего объема приблизительно 5 л. Добавляли 90% муравьиную кислоту (1800 мл) и оставляли стоять при комнатной температуре в течение 3 дней. Нагревали до 40°С в течение 2 ч, затем удаляли растворитель при пониженном давлении. Разбавляли остаток метанолом (4 л) и медленно добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия (3 л). Добавляли твердый карбонат натрия (375 г), чтобы довести рН до 8-9. Перемешивали при 45°С в течение 1 ч, затем охлаждали до комнатной температуры. Удаляли твердое вещество фильтрацией, промывая метанолом (4x500 мл), затем обрабатывали 2 н. водным раствором гидроксида натрия (100 мл) и оставляли стоять при комнатной температуре в течение 1 ч. Удаляли твердое вещество фильтрацией, промывая метанолом (2x100 мл). Выпаривали растворитель при пониженном давлении и разделяли остаток между этилацетатом (5 л) и водой (2 л). Экстрагировали водный слой этилацетатом (2 л) и промывали объединенные органические экстракты насыщенным солевым раствором (2х 1 л). Удаляли растворитель при пониженном давлении, добавляли метил-трет-бутиловый эфир (2,5 л) и выпаривали досуха. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (4 л) и перемешивали при 65°С в течение 1 ч, охлаждали до комнатной температуры и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая метил-трет-бутиловым эфиром (3x500 мл). Сушили под вакуумом до бежевого твердого вещества. Нагревали полученное твердое вещество в толуоле (7,5 л) до 110°С до полного растворения, охлаждали до 18°С в течение 1 ч и перемешивали при этой температуре в течение 1 ч. Нагревали до 40°С и после образования осадка снова охлаждали до 18°С. Перемешивали в течение 45 мин, затем собирали твердое вещество фильтрацией, промывая то луолом (2x500 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (443,1 г, 36%, чистота по ЖХМС 95%). Выпаривали фильтрат под вакуумом с получением остатка. Очищали остаток флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя смесью от 20 до 100% этилацетата в изогексане. Суспендировали фракции, содержащие продукт, в метил-трет-бутиловом эфире (2 л) при

- 15 032293

60°С в течение 30 мин, охлаждали до комнатной температуры и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая метил-трет-бутиловым эфиром (2x200 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого кристаллического вещества (304 г, 24%, чистота по ЖХМС 88%). Выпаривали фильтрат под вакуумом до остатка. Очищали остаток флэшхроматографией на силикагеле, элюируя смесью от 20 до 100% этилацетата в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения (57,8 г, 5%, чистота по ЖХМС 88%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 360,0/362,0 [М+Н].

Альтернативный способ получения 10.

Схема 2, стадия А. Добавляли 1-[(3аВ_,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанон (69 г, 114,5 ммоль) к охлажденному до 15°С раствору моногидрата η-толуолсульфоновой кислоты (2,2 г, 11,45 ммоль), дихлорметана (280 мл) и метанола (700 мл). Перемешивали в течение 18 ч, а затем удаляли растворитель при пониженном давлении. Разбавляли остаток дихлорметаном (350 мл) и добавляли 1 М водный раствор карбоната натрия (140 мл) и воду (140 мл). Разделяли слои и выпаривали органический слой при пониженном давлении. К остатку добавляли толуол (350 мл) и нагревали с обратным холодильником до кипения в течение 1 ч. Охлаждали до 10-15°С со скоростью 10°С/ч. Собирали твердое вещество фильтрацией и промывали толуолом (70 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (30 г, 65%) в виде серого твердого вещества.

Способ получения 11.

(3аВ_,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4карбоновая кислота:

О ^Н0-+ н

Схема 2, стадия В. Добавляли воду (2 л) к суспензии 1-[(3аВ_,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4(гидроксиметил)тетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4-с][1,2]оксазол-1-ил]этанона (804,9 г, 2177 ммоль), (2,2,6,6тетраметилпиперидин-1-ил)оксила (40,0 г, 251 ммоль) в ацетонитриле (4,5 л) в реакторе объемом 20 л с рубашкой и охлаждали до внутренней температуры 5°С. По частям добавляли (диацетоксийод)бензол (1693 г, 4993,43 ммоль) в течение 30 мин. Контролировали экзотерму, используя охлаждение реактора, а затем поддерживали при 20°С до завершения реакции по данным ЖХМС. Медленно добавляли суспензию бисульфита натрия (70 г, 672,68 ммоль) в воде (300 мл) при комнатной температуре, поддерживая внутреннюю температуру ниже 25°С. Перемешивали в течение 30 мин, а затем охлаждали до 5°С. Добавляли воду (2 л), затем медленно добавляли 47 мас.% водный раствор гидроксида натрия (780 мл) в течение 1 ч, поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С. Добавляли этилацетат (2 л) и изогексан (5 л), энергично перемешивали и разделяли слои. Экстрагировали двухфазные органические слои водой (1 л) и промывали объединенный водный слой метил-трет-бутиловым эфиром (2,5 л). Охлаждали водные экстракты до 5°С и медленно добавляли 37% хлористоводородную кислоту (1,4 л) в течение 30 мин, поддерживая внутреннюю температуру около 5°С. Добавляли этилацетат (5 л), разделяли слои и промывали органический слой насыщенным солевым раствором (3x1 л). Экстрагировали объединенные водные экстракты этилацетатом (2,5 л), промывали объединенные органические слои насыщенным солевым раствором (1 л), затем сушили сульфатом натрия и фильтровали. Разбавляли органический слой гептаном (2,5 л) и выпаривали досуха при пониженном давлении. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (1,5 л) и гептан (1,5 л) и выпаривали досуха. Дважды добавляли гептан (2,5 л) и выпаривали досуха. Добавляли гептан (500 мл) и метил-трет-бутиловый эфир (500 мл) и перемешивали при 40°С в течение 30 мин, затем собирали осадок фильтрацией, промывали смесью гептана/метил-трет-бутилового эфира (1:1,1 л), затем метил-трет-бутиловым эфиром (3x300 мл) и сушили на воздухе с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого кристаллического вещества (779 г, 91%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 374,0/376,0 [М+Н].

[α]_ο ²⁰= -19,0° (С=1,004, хлороформ).

Альтернативный способ получения 11.

Схема 2, стадия В. Добавляли воду (150 мл) и ацетонитрил (150 мл) к 1-[(48,6а8)-6а-(5-бром-2фторфенил)-4-(гидроксиметил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-1-ил]этанону (30 г, 73,3 ммоль), ΤΕΜΡΟ (1,14 г, 7,30 ммоль) и (диацетоксийод)бензолу (51,9 г, 161 ммоль). Охлаждали до 15°С и перемешивали в течение 2 ч. Медленно добавляли тиосульфат натрия (21 г) и карбонат калия (22 г) в воде (150 мл) при комнатной температуре. Перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли метил-третбутиловый эфир (150 мл). Разделяли слои и доводили рН водного слоя до 2-3 с помощью концентрированной серной кислоты. Добавляли этилацетат (150 мл) и разделяли слои. Выпаривали органический

- 16 032293 слой досуха при пониженном давлении. Добавляли н-гептан (90 мл) и нагревали с обратным холодильником до кипения в течение 1 ч. Охлаждали до 15°С, а затем собирали осадок фильтрацией, промывая нгептаном (90 мл). Сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (27 г, 98%).

Способ получения 12.

(3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)^-метокси-№метилтетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с][1,2] оксазол-4-карбоксамид:

Схема 2, стадия С. В реакторе объемом 10 л с рубашкой охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-карбоновой кислоты (771 г, 2019 ммоль) в дихлорметане (7,0 л) до 0°С в атмосфере азота и по частям добавляли С^I (400 г, 2421 ммоль) в течение 40 мин. Охлаждали рубашку реактора до -20°С и перемешивали в течение 1 ч, а затем по частям добавляли гидрохлорид ХО-диметилгидроксиламина (260,0 г, 2612 ммоль) в течение около 30 мин. Перемешивали при -20°С в течение 1 ч, при 0°С в течение 2 ч и при 10°С в течение 7 ч. Добавляли С'.^ (175 г, 1058 ммоль) и перемешивали при 10°С в течение ночи. Добавляли дополнительное количество С'.^ (180 г, 1088 ммоль) при 10°С и перемешивали в течение 1 ч, затем добавляли гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (140 г, 1407 ммоль) и продолжали перемешивать при 10°С. Если реакция не была завершена, можно добавить дополнительное количество СЭф затем гидрохлорида Ν,Οдиметилгидроксиламина до завершения реакции по результатам наблюдения. Охлаждали реакционную смесь до 5°С и промывали 1 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л), затем 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л). Экстрагировали объединенный водный раствор дихлорметаном (1 л), объединяли органический экстракт и промывали водой (2,5 л), 1 н. водным раствором гидроксида натрия (2,5 л) и водой (2,5 л), сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (3 л) и выпаривали при пониженном давлении. Добавляли дополнительное количество метил-трет-бутилового эфира (2 л) и перемешивали при 50°С в течение 1 ч, охлаждали до 25°С и перемешивали в течение 30 мин. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (2x500 мл) и сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (760 г, 88%) в виде белого твердого вещества. ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 417,0/419,0 [М+Н].

Альтернативный способ получения 12.

Схема 2, стадия С. Охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-карбоновой кислоты (27 г, 70,7 ммоль) в Ν,Ν-диметилформамиде (135 мл) до 0°С в атмосфере азота и добавляли С'.^ (14,9 г, 91,9 ммоль). Перемешивали в течение 1 ч, а затем добавляли гидрохлорид Ν,Ο-диметилгидроксиламина (9,0 г, 92 ммоль) и триэтиламин (14,3 г, 141 ммоль). Перемешивали при 15°С в течение 16 ч. Охлаждали реакционную смесь до 0°С и добавляли 0,5 М водный раствор серной кислоты (675 мл). Перемешивали в течение 1 ч. Собирали полученное твердое вещество фильтрацией. Суспендировали твердое вещество в метил-трет-бутиловом эфире (90 мл) в течение 1 ч. Собирали твердое вещество фильтрацией, промывали метил-трет-бутиловым эфиром (30 мл). Сушили под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения (23 г, 78%) в виде твердого вещества.

Способ получения 13.

1-[(3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4ил]этанон:

Н

Схема 2, стадия I). В реакторе объемом 20 л с рубашкой охлаждали раствор (3аК,48,6а8)-1-ацетил6а-(5-бром-2-фторфени.1)-\-метокси-\ -метилтетрагидро-1 Н,3Н-фуро[3,4-с] [1,2] оксазол-4-карбоксамида (654,0 г, 1536 ммоль) в ТГФ (10 л) до -60°С и по каплям добавляли 3,2 М раствор метилмагнийбромида в 2-метилтетрагидрофуране (660 мл, 2110 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру ниже -40°С. Пе

- 17 032293 ремешивали реакционную смесь при -40°С в течение 30 мин, затем охлаждали до -50°С и добавляли раствор 1 н. водной хлористоводородной кислоты (2 л) в ТГ Ф (2 л), поддерживая внутреннюю температуру ниже -38°С. Повышали температуру до 10°С и добавляли этилацетат (5 л) и воду (1 л), перемешивали, оставляли достигать внутренней температуры 5°С и разделяли слои. Экстрагировали водный слой этилацетатом (1 л) и объединяли органические экстракты. Промывали органические экстракты водой (2 л) и экстрагировали водный слой этилацетатом (1 л). Объединяли органический экстракт и промывали насыщенным солевым раствором (3x2 л), затем сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении до остатка. Добавляли циклогексан (2,5 л) перемешивали при 60°С в течение 1 ч, затем при 20°С в течение 30 мин и собирали твердое вещество фильтрацией, промывая циклогексаном (500 мл). Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (565 г, 99%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 372,0/374,0 [М+Н], [α]_ο ²⁰= -58,0° (С=1,000, хлороформ).

Альтернативный способ получения 13.

Схема 2, стадия Ό. Охлаждали раствор (3аВ,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-Х метокси-Х-метилтетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4-с][1,2]оксазол-4-карбоксамида (4,0 г, 9,59 ммоль) в ТГФ (60 мл) до -5°С и по каплям добавляли 3,0 М раствор метилмагнийбромида в 2-метилтетрагидрофуране (5,0 мл, 15 ммоль), поддерживая внутреннюю температуру от -5 до 0°С. Перемешивали реакционную смесь при температуре от -5 до 0°С в течение 60 мин, затем добавляли насыщенный раствор хлорида аммония (20 мл). Добавляли метил-трет-бутиловый эфир (40 мл), оставляли внутреннюю температуру достигать 5°С и разделяли слои. Выпаривали органический слой при пониженном давлении до остатка. Добавляли н-гептан (50 мл), перемешивали и собирали твердое вещество фильтрацией. Сушили твердое вещество под вакуумом с получением указанного в заголовке соединения в виде твердого вещества (3,0 г, 77%).

Способ получения 14. 1-[(3аВ,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)тетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с] [1,2]оксазол-1 -ил]этанон:

Схема 2, стадия Е. Одной порцией добавляли 1-[(3аК,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4-ил]этанон (5,08 г, 13,6 ммоль) к перемешанной суспензии дифтор(морфолино)сульфония тетрафторбората (10,02 г, 39,18 ммоль) в безводном дихлорметане (100 мл) при 0-5°С. Перемешивали смесь в течение 10 мин и по каплям добавляли тригидрофторид триэтиламина (4,5 мл, 27 ммоль) в течение 10 мин. Перемешивали реакционную смесь на ледяной бане в течение 8 ч, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Добавляли насыщенный водный раствор карбоната натрия (100 мл) и перемешивали в течение 1 ч. Разделяли слои и экстрагировали водную фазу дихлорметаном (2x50 мл). Объединяли органические экстракты и промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (100 мл), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (2x100 мл) и насыщенным солевым раствором (100 мл). Выпаривали досуха до светлокоричневого твердого вещества и растворяли в метил-трет-бутиловом эфире (300 мл) при 60°С. Фильтровали горячий раствор и выпаривали фильтрат с получением коричневого твердого вещества (5,3 г, 71%, чистота по ЖХМС 82%), которое использовали без дополнительной очистки. ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 393,8/395,8 [М+Н].

Альтернативный способ получения 14.

Схема 2, стадия Е. По частям добавляли Х(а1Г1иог-М® (1,21 кг, 4,73 моль) к перемешанному раствору 1-[(3аВ,48,6а8)-1-ацетил-6а-(5-бром-2-фторфенил)-3,3а,4,6-тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол-4ил]этанона (565 г, 1,51 моль) в безводном дихлорметане (5 л) при -14°С. Перемешивали смесь в течение 10 мин и по каплям добавляли тригидрофторид триэтиламина (550 г, 3,34 моль) в течение 20 мин. Перемешивали реакционную смесь при -10°С в течение примерно 10 ч, затем нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Медленно добавляли 50% водный раствор гидроксида натрия (750 мл), поддерживая внутреннюю температуру ниже 10°С, затем добавляли воду (1,5 л) и насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия (1 л) и перемешивали в течение 30 мин. Разделяли слои и экстрагировали водную фазу дихлорметаном (1 л). Объединяли органические экстракты и промывали насыщенным солевым раствором (3 л), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (5 л) и насыщенным солевым раствором (3 л). Выпаривали с получением остатка и очищали хроматографией на силикагеле, элюируя 50-100% дихлорметаном в изогексане, затем 10% метил-трет-бутиловым эфиром в ди

- 18 032293 хлорметане, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого порошка (467 г, 73%, чистота по ЖХМС 94%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 393,8/395,8 [М+Н].

Способ получения 15. (3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)-3,3а,4,6-тетрагидро-1Н-фуро[3,4с]изоксазол:

Схема 2, стадия Г. Добавляли 37 мас.% водный раствор хлористоводородной кислоты (1,3 л, 16 моль) к раствору 1-[(3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)тетрагидро-1Н,3Н-фуро[3,4с][1,2]оксзаол-1-ил]этанона (570 г, 1,45 моль) в 1,4-диоксане (5 л) в реакторе объемом 10 л с рубашкой и перемешивали при 100°С в течение около 3 ч или до завершения реакции по данным ЖХМС. Охлаждали реакционную смесь до 10°С, разбавляли водой (1 л) и медленно добавляли смесь 50 мас.% водного раствора гидроксида натрия (800 мл) и воды (1 л), поддерживая внутреннюю температуру ниже 20°С. Добавляли этилацетат (2,5 л) и энергично перемешивали, затем разделяли слои и промывали органическую фазу насыщенным солевым раствором (2 л), дополнительным количеством насыщенного солевого раствора (1 л) и водой (1 л). Сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха при пониженном давлении с получением остатка. Добавляли циклогексан (2,5 л) и выпаривали досуха, затем повторяли процесс получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого маслянистого вещества (527 г, 89%, чистота по ЖХМС 86%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 351,8/353,8 [М+Н].

Способ получения 16. [(28,3К,48)-4-Амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил]метанол:

Е

Схема 2, стадия О. Добавляли цинковый порошок (6,0 г, 92 ммоль) к раствору (3аК,48,6а8)-6а-(5бром-2-фторфенил)-4-(1,1 -дифторэтил)-3,3 а,4,6-тетрагидро-1 Н-фуро[3,4-с]изоксазола (5,06 г, 13,4 ммоль) в уксусной кислоте (100 мл) при комнатной температуре и перемешивали в течение ночи. Разбавляли смесь этилацетатом (200 мл) и водой (300 мл) и энергично перемешивали, добавляя карбонат натрия (97 г, 915 ммоль). Разделяли слои и промывали органический слой насыщенным солевым раствором (2x200 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью от 0 до 100% метил-трет-бутилового эфира в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде воскообразного вещества (4,67 г, 89%, чистота по ЖХМС 90%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 354,0/356,0 [М+Н].

Альтернативный способ получения 16.

Схема 2, стадия О. Частями добавляли цинковый порошок (200 г, 3,06 моль) к раствору (3аК,48,6а8)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(1,1-дифторэтил)-3,3а,4,6-тетрагидро-1Н-фуро[3,4-с]изоксазола (304 г, чистота 75%, 647 ммоль) в уксусной кислоте (2 л) и воде (2 л) при 20°С, затем нагревали до 40°С и перемешивали в течение ночи. Разбавляли смесь водой (2 л) и энергично перемешивали, добавляя карбонат натрия (4 кг, 43,4 моль), затем доводили до рН 8-9, используя дополнительное количество карбоната натрия. Добавляли этилацетат (5 л) и воду (2,5 л), перемешивали в течение 30 мин и фильтровали через диатомовую землю, промывая 2:1 смесью ацетонитрила/воды. Разделяли слои, экстрагировали водный слой этилацетатом (2x2,5 л) и промывали объединенные органические экстракты насыщенным солевым раствором (2x2,5 л), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток сверхкритической жидкостной хроматографией, колонка СЫга1рак АО-Н (5), 50x250 мм; элюент - 12% этанол (0,2% диэтилметиламина в СО₂; скорость потока 340 г/мин при УФ 220 нм, с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (197,7 г, 84%).

[α]_ο ²⁰= -6,93° (С=0,678, хлороформ). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 354,0/356,0 [М+Н].

Способ получения 17.

[(28,3К,48)-4-амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]метанол:

- 19 032293

Схема 1, стадия Г. Добавляли (3аК,48,6аК)-6а-(5-бром-2-фторфенил)-4-(тритилоксиметил)-3,3а,4,6тетрагидрофуро[3,4-с]изоксазол (31,30 г, 55,9 ммоль) к уксусной кислоте (186 мл) с получением суспензии. Добавляли цинк (25,6 г, 391 ммоль) и энергично перемешивали реакционную смесь в течение 18 ч. Разбавляли смесь толуолом и фильтровали через диатомовую землю. Концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Солюбилизировали остаток этилацетатом, промывали насыщенным солевым раствором и насыщенным раствором бикарбоната натрия. Разделяли фазы, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (31,35 г, 99%) ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 562/564 [М+Н].

Способ получения 18.

№[[(38,4К,58)-3-(5-бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)-5-(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3ил]карбамотиоил]бензамид:

Схема 1, стадия О: Растворяли [(28,3К,48)-4-амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]метанол (31,35 г, 55,73 ммоль) в дихлорметане (557 мл) и охлаждали до 5°С. Добавляли бензоилизотиоцианат (9,74 мл, 72,45 ммоль). По окончании добавления оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Выливали в насыщенный раствор бикарбоната натрия, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (42,95 г, 106%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 747/749 [М+Να].

Способ получения 19.

№[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4б] [ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид:

Е

Схема 2, стадия Н. Добавляли бензоилизотиоцианат (1,80 мл, 13,3 ммоль) к раствору [(28,3К,48)-4амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил]метанола (4,67 г, 11,9 ммоль) в дихлорметане (20 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч до завершения реакции по данным ЖХМС. Выпаривали реакционную смесь до остатка под вакуумом. Добавляли циклогексан (50 мл), нагревали до 60°С и добавляли метил-трет-бутиловый эфир до полного растворения осадка (100 мл). Фильтровали горячий раствор, охлаждали до комнатной температуры и медленно выпаривали при пониженном давлении до образования белого осадка. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли остаток в безводном дихлорметане (30 мл), добавляли пиридин (2,4 мл, 30 ммоль) и охлаждали раствор до -25°С. По каплям добавляли трифторметансульфоновый ангидрид (2,2 мл, 13 ммоль) в течение 30 мин и оставляли нагреваться до 0°С в течение 1 ч. Промывали реакционную смесь водой (25 мл), 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (25 мл), водой (25 мл), насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (25 мл) и водой (25 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 5% смесью метил-трет

- 20 032293 бутилового эфира в дихлорметане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светложелтого пенистого вещества (5,0 г, 76%, чистота по ЖХМС 90%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 499,0/501,0 [М+Н].

Альтернативный способ получения 19.

Схема 2, стадия Н. Добавляли бензоилизотиоцианат (98 мл, 724,9 ммоль) к раствору [(28,3К,48)-4амино-4-(5-бром-2-фторфенил)-2-(1,1-дифторэтил)тетрагидрофуран-3-ил]метанола (197,6 г, 546,7 ммоль) в дихлорметане (1,2 л) при 30°С в течение 1 ч. Добавляли ί',ΌΙ (101 г, 610,4 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Для полного расходования тиомочевинного промежуточного соединения можно добавить дополнительное количество СО1. Нагревали до 90°С в течение 42 ч и охлаждали раствор до комнатной температуры. Разбавляли реакционную смесь этилацетатом (2 л) и добавляли 2 н. водный раствор хлористоводородной кислоты (2 л), перемешивали, добавляли насыщенный солевой раствор (1 л) и разделяли слои. Промывали органический слой 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (0,5 л), насыщенным солевым раствором (2x1 л) и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (1 л). Сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 0-100% смесью этилацетата в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества (234 г, 83%). ЭР/МС т/ζ (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 499,0/501,0 [М+Н].

Способ получения 20.

№[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(тритилоксиметил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4ά] [ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид:

Схема 1, стадия Н. Растворяли №[[(38,4К,58)-3-(5-бром-2-фторфенил)-4-(гидроксиметил)-5(тритилоксиметил)тетрагидрофуран-3-ил]карбамотиоил]бензамид (42,95 г, 59,18 ммоль) в дихлорметане (591 мл) и охлаждали до -20°С. Добавляли пиридин (12,0 мл, 148,0 ммоль), затем трифторметансульфоновый ангидрид (10,97 мл, 65,10 ммоль). Контролировали добавление, поддерживая температуру ниже -20°С. Перемешивали реакционную смесь при -20°С в течение 30 мин. Оставляли реакционную смесь нагреваться до комнатной температуры. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу дихлорметаном. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (45,24 г, 108%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 707/709 [М+Н].

Способ получения 21. №[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(гидроксиметил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4ά] [ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид:

Схема 1, стадия I. Растворяли №[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(тритилоксиметил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-0][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (45,24 г, 63,93 ммоль) в муравьиной кислоте (160 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Добавляли воду (29 мл) в течение 5 мин. Перемешивали в течение 50 мин. Концентрировали смесь при пониженном давлении до остатка. Растворяли остаток в метаноле (639 мл), добавляли триэтиламин (26,7 мл, 191,8 ммоль) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Выливали в насыщенный солевой раствор, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу хлороформом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью ацетона : гексанов (градиент 25-38%), с получением указанного в заголовке соединения (16,04 г, 54%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 465/467 [М+Н].

Способ получения 22.

(4а8,58,7а8)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-0][1,3]тиазин-5карбоновая кислота:

- 21 032293

Схема 1, стадия I. Добавляли Ы-[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(гидроксиметил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-д][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (16,04 г, 34,47 ммоль) к ДМСО (172 мл). Добавляли 2йодоксибензойную кислоту (35,56 г, 120,70 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Разбавляли реакционную смесь хлороформом (300 мл) и выливали в насыщенный раствор хлорида аммония (400 мл). Отделяли органическую фазу и сушили над сульфатом магния. Фильтровали раствор и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в этилацетате (400 мл) и промывали насыщенным раствором хлорида аммония (2x250 мл). Отделяли органическую фазу, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Растворяли остаток в смеси дихлорметана : метанола и добавляли диэтиловый эфир до образования твердого осадка. Собирали осадок фильтрацией и сушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (5,78 г, 35%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 479/481 [М+Н].

Способ получения 23.

(4а8,58,7а8)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-Ы-метокси-Ы-метил-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-ά][1,3 ]тиазин-5 -карбоксамид:

Схема 1, стадия К. Растворяли (4а8,58,7а8)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-д][1,3]тиазин-5-карбоновую кислоту (5,78 г, 12,1 ммоль) в дихлорметане (201 мл) и гидрохлориде Ν,Ο-диметилгидроксиламина (1,76 г, 18,1 ммоль). Добавляли триэтиламин (5,29 мл, 36,2 ммоль), затем НАТИ (7,02 г, 18,1 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 3 дней. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органические экстракты и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата : дихлорметана (градиент 0-50%), с получением указанного в заголовке соединения (4,15 г, 66%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 522/524 [М+Н].

Способ получения 24.

Ы-[(4а8,58,7а8)-5-ацетил-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-д][1,3]тиазин-2ил]бензамид:

Схема 1, стадия Ь. К охлажденному до -78°С раствору (4а8,58,7а8)-2-бензамидо-7а-(5-бром-2фторфенил)-Ы-метокси-Ы-метил-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-д][1,3]тиазин-5-карбоксамида (1,51 г, 2,89 ммоль) в ТГФ (57,8 мл) по каплям добавляли метилмагнийбромид (3,0 моль/л в диэтиловом эфире, 4,8 мл, 14,5 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при -78°С в течение 5 мин и оставляли постепенно нагреваться до комнатной температуры. Перемешивали в течение 30 мин. Гасили реакцию метанолом (4 мл), разбавляли насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата : гексанов (градиент 0-100%), с получением указанного в заголовке соединения (1,28 г, 93%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 477/479 [М+Н].

Способ получения 25.

Ы-[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4ά] [ 1,3]тиазин-2-ил] бензамид:

- 22 032293

Схема 1, стадия М. Вместе добавляли дихлорметан (34 мл), трифторид бис(2метоксиэтил)аминосеры (1,52 мл, 6,88 ммоль) и диэтилэтерат трифторида бора (0,89 мл, 6,88 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Одной порцией добавляли Ν[(4а8,58,7а8)-5-ацетил-7а-(5-бром-2-фторфенил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-2ил]бензамид (0,821 г, 1,72 ммоль), затем тригидрофторид триэтиламина (1,13 мл, 6,88 ммоль). Перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выливали в насыщенный раствор хлорида аммония, разделяли фазы и экстрагировали водную фазу этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом магния. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью дихлорметана : гексанов (градиент 80-100%), с получением указанного в заголовке соединения (0,552 г, 64%). ЭР/МС т/е (⁷⁹Вг/⁸¹Вг) 499/501 [М+Н].

Способ получения 26.

№[(58,7а8)-5-(1,1-дифторэтил)-7а-{2-фтор-5-[(трифторацетил)амино]фенил}-4а,5,7,7а-тетрагидро4Н-фуро[3,4-ά] [ 1,3]тиазин-2-ил]бензамид:

Е

Е

Схема 5, стадия А. растворяли ^[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (234 г, 454,6 ммоль) в 1,4-диоксане (92 л) и добавляли молекулярные сита 4 А (37 г), 2,2,2-трифторацетамид (91 г, 780,9 ммоль), тонко измельченный карбонат калия (114 г, 824,9 ммоль), йодид натрия (117 г, 780,6 ммоль), йодид меди (I) (17,5 г, 91,9 ммоль) и рацемический транс-№,Х-диметил-1,2-циклогександиамин (20 г, 140,6 ммоль) под потоком азота. 3 раза продували сосуд, чередуя вакуум и азот, и нагревали до 123°С в течение 18 ч. Охлаждали до комнатной температуры и фильтровали раствор через диатомовую землю, и промывали этилацетатом. Добавляли насыщенный водный раствор хлорида аммония (2 л) и энергично перемешивали в течение 45 мин. Разделяли слои и промывали органический слой насыщенным водным раствором хлорида аммония (3x1 л), насыщенным солевым раствором (300 мл), сушили над сульфатом магния, фильтровали и выпаривали с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя 0-100% смесью этилацетата в изогексане, с получением указанного в заголовке соединения в виде светло-желтого твердого вещества (297,9 г, 95%, чистота 81%). ЭР/МС т/ζ 532,0 [М+Н].

Способ получения 27. №(4а8,58,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4ά] [ 1,3]тиазин-2-ил] бензамид:

Схема 1, стадия Ν. Смешивали ^[(4а8,58,7а8)-7а-(5-бром-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (0,372 г, 0,74 ммоль) и (1Κ,2Κ)-Ν,Ν'диметил-1,2-циклогександиамин (0,037 мл, 0,22 ммоль) в этаноле (30 мл). Добавляли азид натрия (0,194 г, 2,98 ммоль), затем аскорбат натрия (0,66 М раствор, 0,50 мл, 0,33 ммоль). Продували верхнюю часть колбы азотом и добавляли сульфат меди (II) (0,33 М раствор, 0,68 мл, 0,22 ммоль). Нагревали реакционную смесь до 80°С и перемешивали в течение 5 ч. Охлаждали реакционную смесь и добавляли хо

- 23 032293 лодную воду. Экстрагировали смесь этилацетатом. Объединяли органический экстракт и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Смешивали остаток с палладием (10 мас.% на углероде, 0,35 г, 0,16 ммоль) в этаноле (50 мл) и ТГФ (10 мл). Продували смесь азотом и водородом. Перемешивали при комнатной температуре при давлении водорода 50 ρδί в течение 1 ч. Отфильтровывали катализатор и промывали этилацетатом. Концентрировали раствор при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью этилацетата : дихлорметана (градиент 0-20%), с получением указанного в заголовке соединения (0,2184 г, 67%). ЭР/МС т/ζ 436 (М+Н).

Альтернативный способ получения 27.

Схема 5, стадия В. Добавляли 7 н. раствор аммиака в метаноле (600 мл, 4,2 моль) к перемешанной суспензии №[(58,7а8)-5-(1,1-дифторэтил)-7а-{2-фтор-5-[(трифторацетил)амино]фенил}-4а,5,7,7а-тетрагидро4Н-фуро[3,4-0][1,3]тиазин-2-ил]бензамида (250 г, чистота 80%, 376,3 ммоль) в метаноле (9200 мл) при комнатной температуре и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Выпаривали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого смолистого вещества (190 г, 375,2 ммоль, чистота 86%). ЭР/МС т/ζ 436,0 [М+Н].

Способ получения 28. (4а8,58,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4а,5,7,7а-тетрагидро-4Н-фуро[3,4ά] [ 1,3]тиазин-2-амин:

Схема 4, стадия А. Растворяли №[(4а8,58,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-0][1,3]тиазин-2-ил]бензамид (216,4 г, чистота 88%, 435,9 ммоль) в пиридине (400 мл), этаноле (100 мл) и ТГФ (300 мл). Добавляли гидрохлорид О-метилгидроксиламина (190 г, 2275,0 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Разбавляли 2метилтетрагидрофураном (1 л) и промывали водой (2x300 мл). Выделяли органический слой и добавляли к водному слою 35% водный раствор гидроксида аммония (100 мл). Экстрагировали 2метилтетрагидрофураном (300 мл), затем насыщали хлоридом натрия и экстрагировали 2метилтетрагидрофураном (2x300 мл). Объединяли органические экстракты, промывали насыщенным солевым раствором (300 мл) и выпаривали до остатка. Растворяли в метаноле (200 мл), добавляли 7 н. раствор аммиака в метаноле (100 мл, 700 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Если осталась примесь трифторацетамида, можно добавить дополнительное количество аммиака. Удаляли растворитель при пониженном давлении и растворяли остаток в 2 н. водном растворе хлористоводородной кислоты (1,5 л). Экстрагировали дихлорметаном (6x500 мл), объединяли органические слои и удаляли растворитель при пониженном давлении до общего объема около 1 л. Промывали 2 н. водным раствором хлористоводородной кислоты (300 мл) и объединяли все водные промывочные растворы. Добавляли 2-метилтетрагидрофуран (1 л) и энергично перемешивали, доводя рН до щелочного значения с помощью бикарбоната натрия до прекращения выделения газа. Разделяли слои и экстрагировали водную фазу 2-метилтетрагидрофураном (2x500 мл). Сушили объединенные органические экстракты сульфатом магния, фильтровали и выпаривали с получением коричневого твердого вещества. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью 0-100% дихлорметана в ТГФ. Выпаривали фракции, содержащие продукт, с этилацетатом/гептаном с получением указанного в заголовке соединения в виде тонкодисперсного бежевого порошка (106 г, 70%, чистота 95%). ЭР/МС т/ζ 332,0 [М+Н], [α]_ο ²⁰= +42,11° (С=0,532, хлороформ).

Способ получения 29.

№[3-[(4а8,58,7а8)-2-бензамидо-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-0][1,3]тиазин-7а-

Схема 3, стадия А. Добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,032 мл, 0,1837 ммоль) к смеси Ν[(4а8,58,7а8)-7а-(5-амино-2-фторфенил)-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-0][1,3]тиазин-2- 24 032293 ил]бензамида (0,040 г, 0,09185 ммоль) 5-цианопиридин-2-карбоновой кислоты (0,0203 г, 0,1378 ммоль) и 1гидрокси-7-азабензотриазола (0,0191 г, 0,1378 ммоль) в дихлорметане (2 мл) и диметилформамиде (0,5 мл). Одной порцией добавляли 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида гидрохлорид (0,026 г, 0,1378 ммоль). Перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Разбавляли этилацетатом и промывали водой и насыщенным солевым раствором. Экстрагировали этилацетатом. Объединяли органические экстракты и сушили над сульфатом натрия. Фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью метил-трет-бутилового эфира : дихлорметана (градиент 0-10%), с получением указанного в заголовке соединения (0,0465 г, 90%). ЭР/МС т/ζ 566 (М+1).

Пример 1. №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид:

р-Л/н

Схема 3, стадия В. Нагревали смесь №[3-[(4а8,58,7а8)-2-бензамидо-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида (0,0465 г, 0,0822 ммоль), гидрохлорида О-метилгидроксиламина (0,0687 г, 0,8220 ммоль) и пиридина (0,066 мл, 0,8220 ммоль) в ТГФ (1,5 мл) и этаноле (1,5 мл) при 50°С в течение 18 ч. Концентрировали смесь при пониженном давлении с получением остатка. Очищали остаток хроматографией на силикагеле, элюируя смесью 7 н. ΝΗ₃ в метаноле : дихлорметане (градиент 0-2%), с получением указанного в заголовке соединения (0,026 г, 68%). ЭР/МС т/ζ 462 (М+1).

Пример 1а.

№[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфоната полугидрат (1:1:0,5):

Смешивали №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид (150 мг, 0,33 ммоль) и ТГФ (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре до растворения. Добавляли гидрат η-толуолсульфоновой кислоты (0,095 г, 0,5 ммоль) и нагревали раствор до 50°С. Добавляли воду аликвотами по 200 мкл и наблюдали образование осадка после добавления, в целом около 2 мл. Перемешивали при 50°С в течение нескольких часов с получением густой суспензии. Добавляли дополнительное количество ТГФ (1 мл) для облегчения перемешивания. Охлаждали до комнатной температуры в течение нескольких часов и фильтровали вакуумной фильтрацией. Промывали минимальным количеством ТГФ. Оставляли сушиться на воздухе в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения.

Альтернативный способ получения примера 1а. №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфоната полугидрат (1:1:0,5).

Смешивали №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид (1,5 г, 3,3 ммоль) и ТГФ (12 мл) и перемешивали при комнатной температуре до растворения. Нагревали до 60°С и добавляли гидрат ηтолуолсульфоновой кислоты (0,75 г, 3,96 ммоль) и воду (5 мл). Через 5 мин перемешивания образовался белый осадок.

Перемешивали при 60°С в течение нескольких часов с получением густой суспензии. Охлаждали до комнатной температуры в течение нескольких часов и фильтровали вакуумной фильтрацией. Оставляли сушиться на воздухе в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения.

Рентгеновская порошковая дифракция (РПД).

Диаграммы РПД кристаллических веществ записывали на рентгеновском порошковом дифрактометре Вгикег Ό4 Епбеауог, оснащенном источником излучения СиКа, λ=1,54060 А) и датчиком Уап1ес,

- 25 032293 работающем при 35 кВ и 50 мА. Образец сканировали от 4 до 40° 2θ с шагом 0,009° 2θ, скоростью сканирования 0,5 с/шаг и с дивергенцией 0,6 мм, фиксированной антирассеивающей щелью 5,28 мм и щелью детектора 9,5 мм. Сухой порошок упаковывали на кварцевый держатель образца и создавали гладкую поверхность с помощью предметного стекла. Диаграммы дифракции кристаллической формы записывали при температуре и относительной влажности окружающей среды. В области кристаллографии хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы относительная интенсивность пиков дифракции может варьироваться вследствие предпочтительной ориентации, обусловленной такими факторами как морфология габитуса кристалла. При наличии эффекта предпочтительной ориентации интенсивности пиков изменяются, но положения характеристических пиков полиморфа остаются неизменными. См., например, фармакопею США №23, национальный формуляр №18, страницы 1843-1844, 1995. Кроме того, в области кристаллографии также хорошо известно, что для любой данной кристаллической формы угловые положения пиков могут незначительно варьироваться. Например, положения пиков могут смещаться вследствие колебаний температуры или влажности, при которых анализируют образец, вследствие смещения образца или наличия или отсутствия внутреннего стандарта. В данном случае вариабельность положения пика, составляющая ±0,2° 2θ, учитывает такие возможные отклонения, не препятствуя бесспорной идентификации указанной кристаллической формы. Подтверждение кристаллической формы может быть сделано на основе любой уникальной комбинации характеристических пиков (в единицах ° 2θ), обычно наиболее выраженных пиков. Диаграммы дифракции кристаллической формы, записанные при температуре и относительной влажности окружающей среды, корректировали по стандартным пикам ΝΙ8Τ 675 при 8,853 и 26,774° 2θ.

Полученный образец кристаллического №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида 4-метилбензолсульфоната полугидрата (1:1:0.5) характеризовали диаграммой РПД, используя излучение СиКа, как имеющий пики дифракции (значения 2θ), описанные в табл. 1, и, в частности, имеющий пики при 6,8° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 19,7°, 14,9° и 10,3°, с допуском для углов дифракции 0,2°.

Таблица 1. Пики рентгеновской порошковой дифракции кристаллического примера 1а

Пример 1Ь.

№[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-б][1,3]тиазин-7а-ил]-4фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида метансульфонат:

Смешивали №[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4б][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид (150 мг, 0,33 ммоль) и ТГФ (2 мл) и перемешивали при комнатной температуре до растворения. Добавляли метансульфоновую кислоту (0,095 г, 0,5 ммоль) и нагревали раствор до 50°С. Добавляли воду аликвотами по 200 мкл до общего объема добавления 2 мл. Перемешивали при 25°С и не наблюдали образование осадка. Концентрировали в атмосфере азота до +₂ объема и наблюдали образование осадка. Нагревали суспензию до 60°С и примерно через 10 мин наблюдали образование прозрачного раствора.

Нагревали при 60°С в течение 1 ч. Охлаждали до комнатной температуры с получением белой сус

- 26 032293 пензии и перемешивали смесь в течение нескольких часов. Выделяли твердое вещество вакуумной фильтрацией и промывали минимальным количеством воды. Оставляли сушиться на воздухе в течение ночи с получением указанного в заголовке соединения в виде кристаллического вещества.

Процедуры анализов ίη νίίτο.

Для оценки селективности в отношении ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2 исследуемое соединение испытывали в анализе ЕКЕТ и в базовых иммунологических ферментных анализах с применением специфических субстратов для ВАСЕ1 и ВАСЕ2, как описано ниже. Для ίη νίίτο ферментных и клеточных анализов исследуемое соединение получали в ДМСО в виде исходного раствора с концентрацией 10 мМ. Исходный раствор серийно разбавляли в ДМСО с получением десятиточечной кривой разбавления с конечными концентрациями соединения от 10 мкМ до 0,05 нМ в 96-луночном круглодонном планшете перед проведением ίη νίίτο ферментных и цельноклеточных анализов.

Анализы ингибирования протеазы ίη νίίτο.

Экспрессия 1иВАСЕ1:Рс и 1иВАСЕ2:Рс.

Человеческий ВАСЕ1 (номер доступа АР190725) и человеческий ВАСЕ2 (номер доступа АР 204944) клонировали из общей кДНК головного мозга с помощью ОТ-ПЦР. Нуклеотидные последовательности, соответствующие аминокислотным последовательностям №1-460, вставляли в кДНК, кодирующую полипептид 1дС| (Рс) человека (Уаззаг е1 а1., 8с1снсс. 286, 735-742 (1999)). Полученные белки слияния ВАСЕ1(1-460) или ВАСЕ2(1-460) и человеческого Рс, получившие название 1иВАСЕ1:Рс и 1шВАСЕ2:Рс соответственно, конструировали в вектор р1В02. Человеческий ВАСЕ1(1-460):Рс (1шВАСЕ1:Рс) и человеческий ВАСЕ2(1-460):Рс (1иВАСЕ2:Рс) транзиентно экспрессировали в клетках НЕК293. кДНК (250 мкг) каждого конструкта смешивали с Радене 6 и добавляли к 1 л клеток НЕК293. Через четыре дня после трансфекции собирали кондиционированную среду для очистки. 1шВАСЕ1:Ес и 1шВАСЕ2:Ес и очищали хроматографией с белком А, как описано ниже. Ферменты хранили при -80°С в небольших аликвотах. (См. Упад, е1. а1., 1. №игосйет1з^, 91(6) 1249-59(2004).

Очистка 1и1ВАСЕ1:Рс и 1иВАСЕ2:Рс.

Собирали кондиционированную среду клеток НЕК293, транзиентно трансфицированную с применением 1иВАСЕ1:Рс или 1иВАСЕ2:Рс с^NА. Клеточный дебрис удаляли фильтрацией кондиционированной среды через стерильный фильтр 0,22 мкм. К 4 л кондиционированной среды добавляли 5 мл белка А-агарозы (объем слоя). Полученную смесь осторожно перемешивали в течение ночи при 4°С. Смолу белка А-агарозы собирали и упаковывали в хроматографическую колонку низкого давления. Колонку промывали 20х объемами слоя РВ8 при скорости потока 20 мл/ч. Связанный белок 1иВАСЕ1:Рс или 1шВАСЕ2:Рс элюировали с помощью 50 мМ уксусной кислоты, рН 3,6, при скорости потока 20 мл/ч. Фракции элюента по 1 мл сразу нейтрализовали ацетатом аммония (0,5 мл, 200 мМ), рН 6,5. Чистоту конечного продукта оценивали электрофорезом в ДНС-ПААГ с 4-20% трис-глицина. Фермент хранили при -80°С в небольших аликвотах.

Анализ РЕЕТ ВАСЕ1.

Серийные разбавления исследуемого соединения получали так, как описано выше. Соединение дополнительно разбавляли 20х в буфере КН₂РО₄, 10 мкл каждого разбавления добавляли в каждую лунку рядов А-Н соответствующего черного планшета с низким связыванием белка, содержащего реакционную смесь (25 мкл 50 мМ КН₂РО₄, рН 4,6, 1 мМ ΤΕΙΤΟΝ® Х-100, 1 мг/мл В8А и 15 мкМ субстрата РЕЕТ на основании последовательности АРР) (см. Уапд, е1. а1., 1. Nеи^οсйет^зί^у, 91(6) 1249-59 (2004)). Содержимое тщательно перемешивали на встряхивателе планшетов в течение 10 мин. На планшет, содержащий субстрат и исследуемое соединение, добавляли 15 мкл раствора человеческого ВАСЕ1(1-460):Рс (см. Уаззег, е1 а1., 8с1епсе, 286, 735-741 (1999)) в буфере КН₂РО₄ с концентрацией 200 пМ для инициации реакции. ЕРИ смеси в момент времени 0 записывали при длине волны возбуждения 355 нм и длине волны испускания 460 нм после быстрого перемешивания на встряхивателе планшетов. Реакционный планшет закрывали алюминиевой фольгой и выдерживали в темной увлажненной камере при комнатной температуре в течение 16-24 ч. ЕРИ по окончании инкубации записывали при тех же настройках возбуждения и испускания, которые использовали в момент времени 0. Разность ЕРИ в момент времени 0 и по окончании инкубации отражает активность ВАСЕ1 при обработке соединением. Разность ЕРИ наносили на график в зависимости от концентрации ингибитора и выравнивали кривую по четырехпараметрическому логистическому уравнению с получением значения 1С₅₀. (Мау, е1 а1., 1οιιγπ;ι1 οί №игозс1епсе, 31, 1650716516 (2011)).

Соединение из примера 1 испытывали, по существу, так, как описано выше, и оно демонстрировало 1С₅₀ для ВАСЕ1 0,509 нМ±0,104, η=4 (среднее ± стандартная ошибка среднего). Полученные данные демонстрируют, что соединение примера 1 ингибирует активность очищенного рекомбинантного фермента ВАСЕ1 ίη νίίτο.

Анализ МВР-С 1258^е ВАСЕ2.

Получали 10-точечные серийные разбавления исследуемых соединений в соответствующем диапазоне. Соединения дополнительно разбавляли 6х в ацетатно-аммонийном аналитическом буфере (50 ммоль ацетата аммония, рН 4,6, 1 мМ Ττίίοη Х-100, 1 мг/мл В8А), 10 мкл каждого разбавления

- 27 032293 добавляли в каждую лунку в ряду А-Н соответствующего планшета с низким связыванием белка, в который предварительно добавляли 10 мкл аффинно очищенного субстрата из Ексйепсйпа сой (МВРС125кте, 1 мкг/мл) для оценки активности ВАСЕ2. Содержимое тщательно перемешивали на встряхивателе планшетов в течение 10 мин. На планшет, содержащий субстрат и исследуемые соединения, добавляли 10 мкл 200 пикомолярного раствора человеческого ВАСЕ2 (1-460):Гс в том же реакционном буфере, который описан выше, для инициации реакции. Через 4 ч реакцию останавливали добавлением останавливающего буфера (40 мкл). Количество продукта измеряли твердофазным иммуноферментным анализом, используя стандарт МВР-С26§те. Анти-МВР антитело иммобилизовали на поверхности полистирольного планшета с высоким связыванием и блокировали, используя блокирующий буфер казеин/РВ8. Образец стандарта (40 мкл) добавляли на планшет для твердофазного иммуноферментного анализа и инкубировали при 4°С в течение ночи. Затем планшеты промывали и добавляли 40 мкл детекторного антитела, специфичного к расщеплению (ΟΝ405), и оставляли стоять в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем несвязанный ΟΝ405 удаляли промыванием, добавляли на планшет 40 мкл конъюгата козьего антикроличьего НКР (8ои1йегп Вю!есй, 4010-05) и оставляли стоять в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет снова промывали и добавляли субстрат ТМВ (40 мкл). Соответствующее количество высвобожденного продукта является мерой активности ВАСЕ2 в растворе при любой испытанной концентрации ингибитора. Вычерчивали 10-точечную кривую ингибирования и выравнивали по четырехпараметрическому логистическому уравнению для получения значений ЕС₅₀ и Κ₅₀. (См. 81пйа, е! а1., №11иге, 402, 537-540 (2000)).

Соединение из примера 1 испытывали, по существу, так, как описано выше, и оно демонстрировало ГС50 для ВАСЕ2 17,6 нМ ± 7,4, п=6 (среднее ± стандартная ошибка среднего). Отношение ВАСЕ1 (ферментный анализ Κ.’₅₀ ГКЕТ) к ВАСЕ2 (клеточный анализ МВР-С1258^е) составляло примерно 35 раз, указывая на функциональную селективность ингибирования фермента ВАСЕ1. Данные, представленные выше, демонстрируют, что соединение примера 1 является селективным для ВАСЕ1 по сравнению с ВАСЕ2.

Цельноклеточный анализ 8Н-8У5УАРР695\У1.

В стандартном цельноклеточном анализе для измерения ингибирования активности ВАСЕ1 используют клеточную линию нейробластомы человека 8Н-8У5У (номер доступа АТСС СКЙ2266), стабильно экспрессирующую кДНК АРР695\У1 человека. Обычно используют клетки до 6 пересева, а затем отбрасывают.

Клетки 8Н-8У5УАРР695\У1 помещали в 96-луночный планшет для тканевых культур в концентрации 5,0х10⁴ клеток/лунку в 200 мкл культуральной среды (50% МЕМ/ЕВ88 и среда Хэма Г12, 1х каждого из пирувата натрия, заменимых аминокислот и NаНСОз, содержащего 10% ГВ8). На следующий день среду удаляли из клеток, добавляли свежую среду, затем инкубировали при 37°С в течение 24 ч в присутствии/в отсутствие исследуемого соединения в требуемом диапазоне концентрации.

По окончании инкубации кондиционированную среду анализировали на признаки активности бетасекретазы, используя анализ пептидов 1-40 и 1-42 Айе!а с применением специальных сэндвичевых твердофазных иммуноферментных анализов. Для измерения указанных конкретных изоформ Айе1а использовали моноклональное 2С3 в качестве захватывающего антитела для Айе!а 1-40 и моноклональное 21Г12 в качестве захватывающего антитела для Айе!а 1-42. В твердофазных иммуноферментных анализах Айе1а 1-40 и Айе!а 1-42 использовали биотинилированное 3Ό6 в качестве репортерного антитела (описание антител представлено в публикации 1ойи5оп-^ооб, е! а1., Ргос. Ν;11. Асаб. 8с1. И8А 94, 15501555 (1997)). Концентрация Айе1а, высвобожденного в кондиционированной среде после обработки соединением, соответствует активности ВАСЕ1 в таких условиях. Вычерчивали 10-точечную кривую ингибирования и выравнивали по четырехпараметрическому логистическому уравнению для получения значений Κ.’₅₀ эффекта снижения Айе1а.

Соединение примера 1 испытывали, по существу, так, как описано выше, и оно демонстрировало ^50 0,157 нМ ± 0,048, п=4 для твердофазного иммуноферментного анализа А-йе1а (1-40) 8Н8У5УАРР695\У1 ЕЫ8А и Ю₅₀ 0,177 нМ ± 0,050, п=4 для твердофазного иммуноферментного анализа Айе!а (1-42) 8Н-8У5УАРР695\У1 (среднее ± стандартная ошибка среднего). Данные, представленные выше, демонстрируют, что соединение примера 1 ингибирует ВАСЕ1 в цельноклеточном анализе.

Ингибирование бета-секретазы ш νί\Ό.

Для проверки ингибирования активности бета-секретазы ш νί\Ό после обработки соединением можно использовать несколько моделей на животных, включая мышей, морских свинок, собак и обезьян. Животные, используемые в настоящем изобретении, могут быть дикого типа, трансгенными или животными с нокаутным геном. Например, мышиная модель РОАРР, полученная так, как описано в публикации Сашек е! а1., №Шге 373, 523-527 (1995), и другие нетрансгенные животные или животные с нокаутным геном, подходят для анализа ш νί\Ό ингибирования выработки Айе!а и кАРРЬе!а в присутствии ингибирующих соединений. Как правило, 2-месячным мышам РОАРР, мышам с нокаутным геном или нетрансгенным животным вводят соединение, составленное в виде композиции в носителях, таких как кукурузное масло, бета-циклодекстран, фосфатные буферы, РНАКМА8ОЬУЕ® или другие подходящие носители, посредством перорального, подкожного, внутривенного введения, введения с кормом или ино

- 28 032293 го введения. Через 1-24 ч после введения соединения животных усыпляют и извлекают головной мозг для проведения анализа АЬе1а 1-х. ЛЬе1а 1-х в данном контексте относится к сумме частиц ЛЬе1а. которые начинаются с 1 остатка и заканчиваются С-концом более 28 остатка. В результате обнаруживают большинство частиц ЛЬе1а и зачастую называют общим ЛЬе1а. Уровень общих пептидов ЛЬе1а (ЛЬе1а 1-х) измеряют сэндвичевым твердофазным иммуноферментным анализом, используя моноклональное антитело 266 в качестве захватывающего антитела и биотинилированное антитело 3Ό6 в качестве репортерного антитела. (См. Мау, е1 а1., 1оигпа1 о£ №иго8С1епсе, 31, 16507-16516 (2011)).

Для испытания острого воздействия вводили соединение или соответствующий носитель и усыпляли животных примерно через 3 ч после введения дозы. У выбранных животных извлекали ткань головного мозга и анализировали на присутствие ЛЬе1а 1-х. Также можно анализировать ткани головного мозга более взрослых АРР трансгенных животных после постоянного введения доз, исследуя количество бетаамилоидных бляшек после лечения соединением.

Животные (ΡΌΆΡΡ или другие АРР трансгенные или нетрансгенные мыши), которым вводили ингибирующее соединение, могут демонстрировать снижение ЛЬе1а в тканях головного мозга по сравнению с контрольными образцами, обработанными носителем, или с контрольными образцами в нулевой момент времени. Например, пероральная доза 0,1, 0,3 и 1 мг/кг примера 1, введенная молодым самкам мышей ΡΌΆΡΡ, приводила к снижению уровней пептида ЛЬе1а 1-х в гиппокампе головного мозга на 32, 40 и 55% (для всех значений р<0,01) соответственно. В корковой ткани головного мозга дозы 0,1, 0,3 и 1 мг/кг примера 1 приводили к снижению уровней ЛЬе1а 1-х на 38, 50 и 67% (для всех значений р<0,01) по сравнению с мышами, обработанными носителем, через 3 ч после введения дозы.

С учетом активности соединения примера 1 против фермента ВАСЕ 1 ίη νίΐτο такое действие снижения АЬе1а согласуется с ингибированием ВАСЕ 1 ίη νίνο и дополнительно демонстрирует проникновение соединения примера 1 в ЦНС.

Представленные исследования демонстрируют, что соединения согласно настоящему изобретению ингибируют ВАСЕ 1 и, следовательно, подходят для снижения уровней АЬе1а.

Claims (16)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы или его фармацевтически приемлемая соль.
2. 2. Соединение или его соль по п.1, представляющее собой
3. 3. Соединение или его соль по любому из пп. 1 или 2, представляющее собой
4. 4. Соль по п.3, представляющая собой

   - 29 032293
5. 5. Соль по п.3, представляющая собой
6. 6. Соль по п.3, представляющая собой
7. 7. Соединение или его соль по любому из пп.1-3, представляющее собой Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5цианопиридин-2-карбоксамид.
8. 8. Соединение по п.3, представляющее собой Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)4,4а,5,7-тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамид.
9. 9. Соль по п.4, представляющая собой Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7- тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида 4метилбензолсульфонат.
10. 10. Соль по п.5, представляющая собой Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7- тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида 4метилбензолсульфоната гемигидрат.
11. 11. Соль по п.10, характеризующаяся значительным пиком на диаграмме рентгеновской дифракции при угле дифракции 2θ 6,8° в комбинации с одним или более пиками, выбранными из группы, состоящей из 19,7, 14,9 и 10,3°, с допуском для углов дифракции 0,2°.
12. 12. Соль по п.6, представляющая собой Ы-[3-[(4а8,58,7а8)-2-амино-5-(1,1-дифторэтил)-4,4а,5,7тетрагидрофуро[3,4-й][1,3]тиазин-7а-ил]-4-фторфенил]-5-цианопиридин-2-карбоксамида метансульфонат.
13. 13. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 для лечения болезни Альцгеймера.
14. 14. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 для лечения прогрессирования умеренного когнитивного нарушения до болезни Альцгеймера.
15. 15. Фармацевтическая композиция для лечения болезни Альцгеймера, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп.1-12 с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами.
16. 16. Способ получения фармацевтической композиции, включающий смешивание соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп.1-12 с одним или более фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями или вспомогательными веществами.