EA030733B1 - Жидкая композиция для сохранения виросом и способ сохранения виросом - Google Patents

Жидкая композиция для сохранения виросом и способ сохранения виросом Download PDF

Info

Publication number
EA030733B1
EA030733B1 EA201691270A EA201691270A EA030733B1 EA 030733 B1 EA030733 B1 EA 030733B1 EA 201691270 A EA201691270 A EA 201691270A EA 201691270 A EA201691270 A EA 201691270A EA 030733 B1 EA030733 B1 EA 030733B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
concentration
composition
virosome
virosomes
preserving
Prior art date
Application number
EA201691270A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201691270A1 (ru
Inventor
Яник Адриансен
Франческо Доро
Original Assignee
Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В. filed Critical Янссен Вэксинс Энд Превеншн Б.В.
Publication of EA201691270A1 publication Critical patent/EA201691270A1/ru
Publication of EA030733B1 publication Critical patent/EA030733B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5123—Organic compounds, e.g. fats, sugars
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
    • A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
    • A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/5176—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
    • A61K9/5184—Virus capsids or envelopes enclosing drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5258—Virus-like particles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16211—Influenzavirus B, i.e. influenza B virus
    • C12N2760/16234—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к жидкой композиции для сохранения виросом, содержащей a) виросомы; b) буфер KHPO/NaHPOс концентрацией фосфата от примерно 15 до 30 мМ; c) соль с концентрацией от 65 до 85 мМ; d) трегалозу с концентрацией от 2 до 10% (вес./вес.), где указанная композиция имеет pH от 6,5 до 8. Также раскрывается способ сохранения виросом, включающий получение описанной выше композиции.

Description

Изобретение относится к жидкой композиции для сохранения виросом, содержащей а) виросомы;
b) буфер KH2PO4/Na2HPO4 с концентрацией фосфата от примерно 15 до 30 мМ; с) соль с концентрацией от 65 до 85 мМ; d) трегалозу с концентрацией от 2 до 10% (вес./вес.), где указанная композиция имеет pH от 6,5 до 8. Также раскрывается способ сохранения виросом, включающий получение описанной выше композиции.
030733
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к составам, содержащим виросомы, и родственным фармацевтическим препаратам для применения в терапевтических целях и вакцинах. В данном документе раскрыты, в частности, жидкие составы, содержащие виросомы, которые позволяют расширить температурный интервал, в котором не нарушается стабильность виросом. Эта цель достигается путем сохранения количества виросом и физических и химических свойств виросом, а также белковых компонентов и целостности структуры при хранении в интервале температур 2-8°C или выше, в то же время предотвращая повреждения, возникающие при непреднамеренном замораживании, и обеспечивая совместимость с парентеральным введением.
Предпосылки изобретения
Виросома представляет собой везикулу, содержащую однослойную фосфолипидную мембрану, включающую в себя белки вирусного происхождения; такая комбинация позволяет виросоме сливаться с клетками-мишенями. Виросомы вследствие этого отличаются от липосом и считаются высокоэффективными системами целевой доставки лекарственных средств или вакцин.
Актуальной задачей в области исследования доставки лекарственных средств и вакцин является разработка жидких составов виросом, в которых виросомы остаются стабильными в течение длительного времени и в широком температурном интервале. По сути, любое непреднамеренное замораживание (например, во время хранения или транспортировки) имеет разрушительное действие на целостность продукта, а вследствие этого - и на его эффективность. Любой непреднамеренный нагрев также вреден, поскольку он нарушает стабильность продукта и вызывает снижение эффективности (например, вследствие образования агрегатов). Более длительная стабильность в широком интервале температур при хранении, например, от приблизительно 2 до приблизительно 8°C, приводящая к более длинному сроку хранения, как правило, желательна для любых инъекционных жидких составов.
Биологическая активность виросомных частиц зависит от конформационной целостности частицы и от качества антигенных молекул, которые связаны с ее мембраной. В отличие от традиционных органических и неорганических лекарственных средств виросомные частицы сложны и построены из многих специфических фосфолипидов и белков, и незначительные химические или физические стресс-факторы могут способствовать разложению виросомной частицы. Соответственно, для обеспечения длительного срока хранения определяющее значение имеет стабильная композиция виросомных препаратов, однако задача стабилизации виросом представляет собой определенные трудности. Виросомы могут утрачивать эффективность вследствие физической нестабильности, в том числе денатурации встроенных белков, агрегации (образования как растворимых, так и нерастворимых агрегатов) или слияния частиц, диссоциации, осаждения и адсорбции, а также химической нестабильности, в том числе, например, гидролиза, дезамидирования и окисления. Кроме того, липиды, являющиеся структурными компонентами виросом, склонны подвергаться гидролизу и окислению. Любой из этих путей разложения может приводить к снижению биологической активности, но потенциально также может приводить к образованию побочных продуктов или производных, обладающих повышенной токсичностью и/или измененной иммуногенностью.
Таким образом, необходим специализированный подход к нахождению надежной композиции, содержащей виросомы, обеспечивающей стабильность в широком диапазоне условий. Тип буфера, pH и специальные наполнители необходимо составлять в индивидуальные комбинации и тщательно оптимизировать для сохранения химической, физической и биологической стабильности виросомы. С учетом всех факторов, которые могут изменяться, нахождение оптимальных условий для составления рецептуры с виросомами осложняется проблемами, и композицию хорошей комбинации априори предсказать невозможно.
Рецептуры составов, содержащих липосомы, были раскрыты ранее. Несмотря на то что липосомы фундаментально отличаются от виросом, эти рецептуры можно рассматривать как родственный предшествующий уровень техники. В продаже есть много лиофилизированных составов с липосомами, как, например, AmBisome®, (Gilead Sciences, Inc, San Dimas, CA), Amphotec® (Ben Venue Laboratories, Inc, Bedford, OH), Myocet, Visudyne® (Novartis Pharma AG, Basel, Switzerland) и LEP-ETU (простой в использовании захваченный липосомами паклитаксел; NeoPharm, Inc, Lake Bluff, IL; Freixeiro et al.; Meunier et al.), и они относительно стабильны, однако их стоимость высока, и перед введением они отнимают много времени при обращении с ними с высокой вероятностью совершения ошибки. Таким образом, жидкая композиция, пригодная к хранению при температурах 2-8 или <-65°C, была бы предпочтительной продуктовой формой для виросом. Особенно, если указанная композиция позволит виросомам проявлять устойчивость к непреднамеренному замораживанию во время их транспортировки или хранения.
В предшествующем уровне техники раскрыто только небольшое количество примеров, в которых исследовалось применение моно- или дисахаридов в жидких составах, содержащих липосомы. Интересно, что обнаруженный эффект от таких моно- или дисахаридов был оценен как вредный, поскольку они приводят к значительному увеличению ущерба при замораживании и размораживании (Hincha et al) или снижению стабильности при хранении при 2-8°C (Freixeiro et al).
- 1 030733
Жидкие составы, содержащие виросомы, были раскрыты ранее и в продолжение многих лет использовались в коммерческих продуктах, таких как Inflexal®V и Epaxal®. В данном документе было показано, что указанные составы не являются оптимальными в том смысле, что они не способны поддерживать стабильность виросом после замораживания. Несмотря на тот факт, что эти составы уже доступны в продаже в продолжение многих лет, производящие их компании не смогли сделать виросомные составы устойчивыми к непреднамеренной заморозке или к длительному хранению при низких температурах (т.е. <-65°C).
Установление рецептуры состава, в котором предотвращалось бы повреждение структуры содержащихся в нем виросом и антигенов при непреднамеренном замораживании и при этом обеспечивающего оптимальную стабильность во время хранения при 2-8°C, по-прежнему представляет собой проблему, и могло бы привести к значительному преимуществу благодаря снижению затрат и облегчению применения указанного состава в клинической практике.
Соответственно, в уровне техники существует потребность создать жидкие составы, в которых поддерживалась бы стабильность виросом при непреднамеренном замораживании во время хранения или транспортировки. Такие усовершенствованные составы будут сохранять качество и количество содержащихся в них виросом во время хранения в течение длительного периода. Кроме того, составы должны быть пригодны для парентерального введения, должны хорошо переноситься и предпочтительно должны иметь простую композицию. Целью настоящего изобретения является получение таких составов, содержащих виросомы.
Краткое описание изобретения
Авторы изобретения обнаружили и описали в данном документе композиции, которые позволяют сохранять неизмененной стабильность виросом при непреднамеренном замораживании и, как следствие этого, улучшать виросомную стабильность путем сохранения количества и качества виросом по сравнению с ранее раскрытыми композициями (или составами). Неожиданно комбинация комбинированного буфера KH2PO4/Na2HPO4, имеющего значение pH в интервале от 6,5 до 8 с дисахаридом привела к выдающейся композиции, позволяющей сохранять количество и качество виросом после замораживания, таким образом улучшая общую виросомную стабильность по сравнению с другими композициями, известными из уровня техники.
Настоящее изобретение, таким образом, относится к композиции для сохранения виросом.
Композиция согласно данному изобретению содержит:
a) виросомы;
b) буфер KH2PO4/Na2HPO4 с концентрацией фосфата от 15 до 30 мМ;
c) соль с концентрацией от 65 до 85 мМ;
d) трегалозу с концентрацией от 2до 10% (вес./вес.),
где указанная композиция имеет pH от 6,5 до 8, в частности pH от 6,5 до 7,8.
В предпочтительном варианте осуществления композиция имеет значение pH, равное 7,5, и содержит трегалозу с концентрацией от 3 до 5% (вес./вес.).
Составы, содержащие виросомы, по настоящему изобретению подлежат длительному хранению при 2-8 или <-65°C в течение более 6 месяцев, 1 года, 1,5 лет, 2 лет или более. Композиция согласно настоящему изобретению предпочтительно содержит виросомы с общей концентрацией антигенов от примерно 20 до 300 мкг/мл.
В другом предпочтительном варианте осуществления указанная соль представляет собой NaCl.
В другом предпочтительном варианте осуществления композиции согласно настоящему изобретению являются жидкими композициями.
В одном варианте осуществления композиции согласно настоящему изобретению содержатся во флаконе. В другом варианте осуществления композиции содержатся в пакете. В еще одном варианте осуществления композиции содержатся в (предварительно наполненном) шприце или картридже.
Настоящее изобретение также относится к способу сохранения виросомы, включающему получение композиции согласно настоящему изобретению.
Еще в одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к способу сохранения виросомы, включающему получение композиции, как описано в данном документе, и хранение указанной композиции при температуре, изменяющейся в интервале от 2 до 8°C. В некоторых вариантах осуществления указанную композицию хранят в течение более чем 6 месяцев, 1 года, 1,5 лет, 2 лет или более.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу сохранения виросомы, включающему получение композиции, описанной в данном документе, и хранение указанной композиции при температуре, изменяющейся в интервале от -15 до -30°C.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу сохранения виросомы, включающему получение композиции, описанной в данном документе, и хранение указанной композиции при температуре, изменяющейся в интервале от -80 до -65°C.
Повышенная длительная стабильность в широком интервале температур приводит к увеличению срока хранения композиций (или составов), содержащих виросомы, раскрытых в данном документе, по- 2 030733
зволяя хранить и в последующем вводить эти композиции реципиенту в течение периода, составляющего примерно 1-2 года, при допустимых показателях снижения концентрации активного одновалентного антигена (т.е. не более чем 27% снижение концентрации НА при 2-8°C). Помимо этого, композиции настоящего изобретения стабильны, когда они находятся под воздействием повышенных температур, циклов замораживания и размораживания или длительного хранения при низкой температуре (т.е. <-65°C).
Описание фигур
Фиг. 1 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе вируса гриппа (A/California) виросом до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 2 (А и В). Полученные на основе вируса гриппа (A/California) виросомы хранили при 5±3°C в течение 12 недель. Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 3 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе вируса гриппа (B/Brisbane) виросом до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 4 (А и В). Полученные на основе вируса гриппа (B/Brisbane) виросомы хранили при 5±3°C в течение 12 недель. Среднюю величину диаметра измеряли в моменты времени t=0, t=4, t=12 и t=24 недель, а концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12.
Фиг. 5 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе вируса гриппа (A/Victoria) виросом до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 6 (А и В). Полученные на основе вируса гриппа (A/Victoria) виросомы хранили при 5±3°C в течение 12 недель. Среднюю величину диаметра измеряли в моменты времени t=0 и t=4 недель, а концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 7 (А, В и С). Кривая температурной зависимости в разных исследуемых составах, полученная путем измерения изменения размера виросом в зависимости от температуры для определения температуры начала образования агрегатов и общего изменения размера виросом, полученных из трех разных штаммов гриппа.
Фиг. 8. Кривая титрования, измеряющая изменения размера виросом на основе A/Victoria, полученных из клетки, в зависимости от концентрации соли, для определения точки начала образования агрегатов и общего изменения размера при снижении концентрации соли.
Фиг. 9 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у культивированных в клетках виросом на основе A/California до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 10 (А и В). Культивированные в клетках виросомы на основе A/California хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 11 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у культивированных в клетках виросом на основе B/Brisbane до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 12 (А и В). Культивированные в клетках виросомы на основе B/Brisbane хранили при 5±3°C в течение 4 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 13 (А и В). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе A/Victoria виросом до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 14 (Аи В). Виросомы на основе A/Victoria хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 15 (А, В, С и D). Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у смешанных трехвалентных виросом до и после одного цикла замораживания и размораживания.
Фиг. 16 (А, В, С и D). Смешанные трехвалентные виросомы хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель.
Фиг. 17 (А, В, С и D). Смешанные трехвалентные виросомы хранили при температуре менее -65°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0 и t=12 недель.
Подробное описание изобретения
Составы по настоящему изобретению содержат по меньшей мере одну виросому. Виросома представляет собой механизм доставки лекарственного средства или вакцины, который включает в себя везикулу с однослойной фосфолипидной мембраной, содержащую белки вирусного происхождения, что позволяет виросоме сливаться с клетками-мишенями. Виросомы не способны к репликации и представляют собой способные сливаться везикулы.
Виросомы представляют собой восстановленные фосфолипидные (PL) мембраны, содержащие белки вирусного происхождения, например гемагглютинин (НА) и нейраминидазу (NA) из вируса гриппа. НА и NA антигены предпочтительно получены на основе штаммов гриппа, таких как, но не ограничиваясь этим, штамм A/California, штамм B/Brisbane или штамм A/Victoria. В предпочтительном варианте осуществления штаммы вируса гриппа, используемые в настоящем изобретении, выбирают из группы, состоящей из штамма A/California, B/Brisbane и A/Victoria.
Виросомы в композициях (или составах) настоящего изобретения могут быть получены из вирусов
- 3 030733
гриппа или из других оболочечных вирусов, таких как, но не ограничиваясь ими, следующие семейства: flaviviridae (например, вирус денге, вирус гепатита С HEV, вирус японского энцефалита, вирус желтой лихорадки, вирус лихорадки Западного Нила), Poxviridae (т.е. вирус коровьей оспы, вирус обезьяньей оспы, вирус осповакцины, вирус натуральной оспы), Retroviridae (т.е. вирусы иммунодефицита HIV/SIV), paramyxoviridae (т.е. вирус кори, вирус эпидемического паротита, вирусы парагриппа, метапневмовирус, респираторный синцитиальный вирус RSV) и Orthomyxoviridae (т.е. вирусы гриппа). Поскольку виросомы не содержат вирусный геномный материал (например, вирусные РНК или ДНК), они по своей природе не способны к репликации, и как следствие этого они безопасны для животных и человека при введении в виде иммуногенной композиции (например, в виде вакцины) или вспомогательного вещества, или в качестве везикулы для доставки лекарственного средства (белка) вместе с нацеленными лигандами или без них. Таким образом, виросомы особенно полезны в области вакцинации, где требуется стимулировать иммунную ответную реакцию на антиген или антигены, связанные с определенным заболеванием или расстройством. В таких случаях антиген (или антигены) обычно инкапсулируют или встраивают в виросому или связывают с виросомой, которая затем доставляет этот антиген или антигены в иммунную систему хозяина - субъекта, проходящего вакцинацию.
Виросомы, таким образом, представляют собой новаторскую, широкого применения систему носителей, имеющую полезные свойства для будущих применений в областях, находящихся за пределами обычных вакцин. Виросомы считаются высокоэффективными и широко используемыми системами доставки для лекарственных средств и вакцин.
Виросомы, как правило, получают из растворенных фракций вирусов, используя любой из двух разных подходов: один подход заключается в добавлении экзогенных липидов к растворенной фракции вируса (как описано, например, в патентных заявках US 2009/0263470, US 2009/0087453) перед восстановлением виросомальных мембран, а другой подход основан на восстановлении вирусной мембраны без добавления экзогенных липидов (например, как описано в патенте US 7901920). Построение виросом хорошо изучено в области техники и заключается в использовании стандартных методик, таких как описаны, например, в работах авторов Stegmann et al., Mishler et al. и Herzog et al. Способ введения может быть, но не ограничен этим, внутримышечным, чрескожным и интраназальным.
Термин "стабильность", используемый в данном документе, относится к проявлению виросомной частицей устойчивости к разложению в составе, тем самым сохраняя ее биологическое действие в течение периода времени ее ожидаемой применимости.
Виросом "сохраняет свою физическую стабильность" в композиции или фармацевтическом составе, если он, среди прочего, проявляет минимальное уменьшение в том, что касается количества (т.е. уменьшение не более чем на 27% в пересчете на концентрацию НА) и биологической активности, и не демонстрирует существенных модификаций белков. Дополнительно, при визуальном исследовании не должны наблюдаться признаки агрегации, диссоциации, осаждения, изменения цвета и/или прозрачности.
В контексте настоящего изобретения "приблизительно" означает ±10%, если не указано иное.
Под "фармацевтически приемлемым наполнителем" подразумевают любое инертное вещество, которое объединяют с активной молекулой, такой как виросома, для получения приемлемой или удобной лекарственной формы. "Фармацевтически приемлемый наполнитель" представляет собой наполнитель, который не является токсичным для реципиентов в используемых дозировках и концентрациях и является совместимым с другими ингредиентами композиции, содержащей виросомный препарат. Примерами фармацевтически приемлемых наполнителей являются криопротекторы, неионные ПАВ, буферы, соли, ингибиторы свободно радикального окисления, одобренные Администрацией по делам продовольствия и медикаментов (FDA).
Термин "побочный продукт" включает нежелательные продукты, которые уменьшают или снижают долю активных виросом в данном составе. Типичные побочные продукты включают в себя агрегированные виросомы. Они представляют собой растворимые или нерастворимые комплексы, имеющие размер частиц больше, чем виросомы. Кроме агрегированных виросом, продукты разложения виросом могут включать в себя, например, бесструктурные виросомы, агрегированные белки или выпавший в осадок материал.
Композиция (взаимозаменяемо называемая составом), улучшающая стабильность виросом, также называемая "стабильным составом", в контексте данного документа представляет собой композицию, в которой виросомы, по существу, сохраняют свою физическую и/или химическую целостность и/или биологическую активность при хранении. Стабильность можно оценить путем определения различных характеристик, таких как концентрация белка(белков), содержащихся в виросомном составе, содержание липидов, эффективность и/или другие качественные аспекты виросом в композиции, в течение определенного периода времени и при определенных условиях хранения. В частности, средний размер частиц можно измерять в качестве индикации агрегированного состояния виросом, он должен быть в интервале от примерно 50 до 300 нм, а лучше - от 100 до 250 нм. Характеристики композиции, содержащей виросомы, можно измерять при повышенных температурах или в других стрессовых условиях, например, составы можно подвергать инкубированию при 25°C или подвергать циклам замораживания/размораживания и перемешиванию в целях изучения действия различных составов на срок годности.
- 4 030733
Указанные характеристики, определяющие стабильность, можно определять по меньшей мере одним из способов, выбранных из группы, состоящей из визуального обследования, способа одномерной радиальной иммунодиффузии (SRID) и измерений Zetasizer или других подходящих способов.
Способ одномерной радиальной иммунодиффузии (SRID).
Способ одномерной радиальной иммунодиффузии, как описано в работе Wood et al., 1977, приводит к количественному и качественному определению НА в виросомных образцах. Антигены солюбилизированы в ПАВ (цвиттер-ионный ПАВ 3-14 ПАВ, VWR), чтобы позволить им диффундировать в агаровом геле, содержащем специфические к штамму антитела. Антиген и антитела связываются друг с другом с образованием малых растворимых комплексов антиген-антитело, если антиген находится в избытке. Благодаря диффузии в гель большее число антител будет связываться, пока не установится равновесие и образуется нерастворимое кольцо из выпавшего осадка. Количество нерастворимого антиген-антитело комплекса во внешнем крае кольца со временем повышается, и поэтому диаметр кольца со временем растет. Величина диаметра кольца, возведенного в квадрат, (и площадь) прямо пропорциональна первоначальной концентрации антигена и обратно пропорциональна концентрации антигена в геле. Измерение величины диаметра и сравнение его со стандартной кривой позволяют определить концентрацию активного антигена в образце.
В качестве внутреннего контроля использовали полученный из яиц инактивированный вирус гриппа соответствующих штаммов. Каждый образец для внутреннего контроля калибровали относительно внутреннего стандарта.
Диаметры колец из выпавшего осадка (в мм) измеряют, используя программное обеспечение Immulab, или в альтернативном случае их можно измерять визуально, используя увеличительное стекло Scale 10X.
Препараты согласно международным стандартам растворяют в PBSA, используя соответствующую концентрацию, и добавляют 10% цвиттер-ионного ПАВ до достижения конечной концентрации, равной 1%. После 30 мин инкубирования (чтобы позволить цвиттер-ионному ПАВ прореагировать с образцами) можно получить стандартную кривую, проводя серию разбавлений. Образцы предварительно разбавляют в PBSA и добавляют цвиттер-ионный ПАВ до конечной концентрации, равной 1%. После 30 мин инкубирования проводят серию разбавлений для получения различных концентраций образца для исследования.
Чтобы приготовить агарозный гель для использования в анализе, раствор агара нужно расплавить и затем охладить до 60°C.
Необходимо добавить достаточное количество сыворотки (в зависимости от штамма и согласно сертификату NIBSC) и раствор необходимо перенести в камеру для желирования. После образования геля лунки получают с помощью вырезания цилиндром.
Процедура испытания.:
Образцы пипетируют в двойном экземпляре в лунки, которые затем инкубируют в течение 18-24 ч во влажной камере. Гель затем промывают дистиллированной водой и вымачивают в окрашивающем растворе в течение 15 мин. После этого гель вымачивают в обесцвечивающем растворе в течение 4 мин, сушат 12 ч и затем он готов к проведению исследования. Проводят оценку отсканированного изображения геля, используя программное обеспечение Immulab. Величины измеренных диаметров колец переносят в программу Combistats для получения количественных данных.
Измерения методом Zetasizer.
Среднюю величину диаметра виросомы измеряют, используя Malvern's Z-sizer Nano ZS, с целью проверки качества виросом в стрессовых условиях и при хранении. Неразбавленные образцы загружают в кювету для Z-size и проводят измерения непосредственно с помощью He-Ne лазера (λ=633 нм) и 173° переднего детектора.
Прибор измеряет присущее частицам свойство на основе броуновского движения в жидкости с известными параметрами, поэтому внутренний контроль или стандартные кривые не нужны. Измерение среднего диаметра проводят, применяя метод кумулянтного анализа (в соответствии с Международным стандартом ISO13321:1996).
Температурное профилирование выполняли на приборе Malvern Z-sizer ZS, линейно поднимая температуру от 35 до 75°C, что было выполнено согласно инструкции к прибору, в то же время измеряя размер частиц при тех же параметрах, которые описаны выше.
Титрацию NaCl для культивированных в клетках виросом A/Victoria выполняли на приборе Malvern Z-sizer ZS, чтобы раздавить концентрацию соли NaCl от 130 до 33 мМ, что было выполнено согласно инструкции к прибору, в то же время измеряя размер частиц при тех же параметрах, которые описаны выше.
Настоящее изобретение относится к составам, стабилизирующим виросомы, и к родственным фармацевтическим препаратам, предпочтительно для применения в генной терапии и/или в вакцинах. Предпочтительная композиция, содержащая стабилизированные виросомы, раскрытая в данном документе, представляет собой жидкую композицию, которая демонстрирует улучшенную стабильность виросом при хранении в температурном интервале примерно 2-8°C и устойчивость к непреднамеренному замора- 5 030733
живанию или нагреванию и при этом также совместима с парентеральным введением. Эти составы можно, однако, также хранить при более низких температурах, например -20°C или ниже, -40°C или ниже, -65°C или ниже, -80°C или ниже. Они также могут быть более стабильными при температурах выше 8°C, например, составляющих 25°C или даже более высоких. Эти композиции, способные стабилизировать виросомы, включают в себя комбинированный KH2PO4/Na2HPO4 буфер и дисахарид в качестве стабилизатора, который усиливает термическую стабильность виросом. Значение pH указанного буфера находится между 6,5 и 8.
В предпочтительном варианте осуществления согласно настоящему изобретению композиция имеет pH, значение которого находится в интервале от примерно 6,5 до 8; содержит буфер KH2PO4/Na2HPO4, где концентрация фосфата изменяется в пределах от 15 до 30 мМ; содержит соль, концентрация которой выше чем 60 мМ; и дополнительно содержит дисахарид, концентрация которого изменяется в пределах от 2 до 10% (вес./вес.).
Композиции настоящего изобретения обеспечивают стабильность виросом при различных уровнях концентраций и могут вводиться различным позвоночным организмам, предпочтительно млекопитающим и особенно людям. Стабилизированные составы по настоящему изобретению представляют собой композиции на основе виросом, которые можно, например, вводить в виде вакцины, которая может предоставлять профилактическое преимущество, например против гриппа, ранее не инфицированным индивидуумам.
Предпочтительным аспектом изобретения является содержащая виросомы композиция, которая демонстрирует свойства повышенной стабильности, описанные в данном документе, причем концентрация встроенных в виросому НА находится в интервале от примерно 25 до примерно 300 мкг/мл. Более предпочтительный интервал составляет от приблизительно 25 до примерно 100 мкг/мл, при этом особенно предпочтительная концентрация НА составляет от примерно 30 до 40 мкг/мл. Профилактические композиции составов настоящего изобретения можно вводить индивидууму в количествах, достаточных для предупреждения соответствующего нарушения. Эффективное количество для введения человеку может изменяться в зависимости от различных факторов, таких как состояние, масса тела, пол и возраст индивидуума. Другие факторы включают способ введения.
Композиции согласно настоящему изобретению содержат а) виросому в b) комбинированном буфере KH2PO4/Na2HPO4 со значением pH в интервале от 6,5 до 8, где концентрация фосфата изменяется в пределах от 15 до 30 мМ, с) соль, концентрация которой выше чем 60 мМ; и дополнительно содержат d) дисахарид. Указанная комбинация неожиданно оказалась превосходной композицией для сохранения количества и качества виросом.
В предпочтительном варианте осуществления концентрация фосфата KH2PO4/Na2HPO4 в буфере изменяется в пределах от примерно 15 до 30 мМ, например от примерно до 25 мМ, например составляет примерно 20 мМ.
Другим существенным компонентом в этих составах, способствующим стабилизации виросом в больших интервалах температур и увеличению длительности периода хранения, является дисахарид. В предпочтительном варианте осуществления концентрация дисахарида изменяется в пределах от примерно 2 до 10% (вес./вес.), например от примерно 3 до 8% (вес./вес.), например от примерно 3 до 5% (вес./вес.), например составляет примерно 4% (вес./вес.), например составляет примерно 3% (вес./вес.).
Дисахарид для данных составов предпочтительно выбирают из группы, включающей трегалозу и сахарозу.
В предпочтительном варианте осуществления композиция согласно настоящему изобретению забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH в интервале от 6,5 до 8 и содержит трегалозу или сахарозу в качестве дисахарида. Предпочтительно, чтобы концентрация трегалозы или сахарозы в указанной композиции изменялась от примерно 2 до 10% (вес./вес.), например от примерно 3 до 8% (вес./вес.), например от примерно 3 до 5% (вес./вес.), например составляла примерно 4% (вес./вес.).
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера, содержащего 20 мМ фосфата, до значения pH в интервале от 7 до 7,8 и содержит трегалозу или сахарозу, концентрация которой изменяется от примерно 2 до 6% (вес./вес.).
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера, содержащего 20 мМ фосфата, до значения pH, равного примерно 7,5, а концентрация трегалозы или сахарозы составляет примерно 4% (вес./вес.).
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера, содержащего 20 мМ фосфата, до значения pH, равного примерно 7,5, а концентрация трегалозы составляет примерно 4% (вес./вес.).
В данном документе было показано, что для виросом, содержащих антигены из штаммов гриппа A/Victoria, полученных из клеток, для поддержания размера виросом в пределах приемлемого интервала (300 мМ) требуется минимальная концентрация 60 мМ NaCl, что само по себе предполагает, что для повышения стабильности виросом минимальная концентрация добавляемого к конечной композиции NaCl должна составлять 65 мМ.
- 6 030733
Поэтому концентрация соли в композициях согласно настоящему изобретению предпочтительно должна превышать 60 мМ. В предпочтительном варианте осуществления концентрация соли изменяется в пределах, например, от 60 до 85 мМ, например от 65 до 75 мМ, например от 65 до 70 мМ, например составляет примерно 65 мМ.
Это количество соли будет достаточно для достижения изотоничности состава. В предпочтительном варианте осуществления указанная соль представляет собой NaCl. Другие типы соли, известные в данной области техники, также в равной степени пригодны для составов согласно настоящему изобретению. Специалист в данной области осведомлен о том, какую соль следует выбрать.
В свете приведенной выше дискуссии настоящее изобретение относится к композициям, содержащим виросому, которые можно, например, применять в генной терапии и/или при генной вакцинации, которые демонстрируют улучшенные свойства стабильности и которые содержат, по меньшей мере, KH2PO4/Na2HPO4 буфер со значением pH от 6,5 до 8, где концентрация фосфата изменяется от 15 до 30 мМ; дисахарид и дополнительно содержат соль, концентрация которой находится в пределах от 60 до 85 мМ.
Определенный вариант осуществления настоящего изобретения относится к такой композиции, которая содержит виросомы, забуференные с помощью KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH в интервале от примерно 6,5 до pH 8; дисахарид, концентрация которого изменяется от 2 до 10% (вес./вес.); и дополнительно содержит соль, концентрация которой находится в пределах от 60 до 85 мМ.
Определенный вариант осуществления настоящего изобретения относится к такой композиции виросом, которая забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH в интервале от примерно 7 до pH 7,8, где концентрация фосфата изменяется от 15 до 30 мМ; дисахарид, выбранный из группы, включающей трегалозу и сахарозу, концентрация которого изменяется от 2 до 10% (вес./вес.); и дополнительно содержит соль, концентрация которой находится в пределах от 60 до 85 мМ.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера до значения pH, равного примерно 7,5, где концентрация фосфата составляет 20 мМ, а концентрация трегалозы или сахарозы составляет примерно 4% (вес./вес.); и композиция дополнительно содержит соль, концентрация которой находится в пределах от 60 до 85 мМ. Дополнительно, можно применять комбинации вышеупомянутых факторов.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера до значения pH, равного примерно 7,5, где концентрация фосфата составляет 20 мМ; концентрация трегалозы или сахарозы составляет примерно 4% (вес./вес.); а концентрация NaCl составляет 65 мМ.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения композиция забуферена с помощью KH2PO4/Na2HPO4 буфера до значения pH, равного примерно 7,5, где концентрация фосфата составляет 20 мМ; концентрация трегалозы составляет примерно 4% (вес./вес.); а концентрация NaCl составляет 65 мМ. Дополнительно, можно применять комбинации вышеупомянутых факторов.
В одном варианте осуществления композиции согласно настоящему изобретению содержатся во флаконе, таком как, например, флакон DIN 2R из боросиликатного стекла типа I. В другом варианте осуществления составы содержатся в пакете. Пакеты, содержащие составы по настоящему изобретению, могут иметь в своем составе слои, изготовленные из, например, сополимера этилена и винилацетата (EVA) или этилвинилового спирта (EVOH). В еще одном варианте осуществления настоящего изобретения составы содержатся в шприце, таком как, например, стеклянный, полипропиленовый или поликарбонатный предварительно наполненный шприц.
Составы на основе виросом, описанные в данном документе, можно вводить позвоночному реципиенту (предпочтительно реципиенту-млекопитающему и, в частности, реципиенту-человеку) любым способом, известным из уровня техники, таким как парентеральный или назальный путь.
В соответствии с составами, раскрытыми в данном документе, настоящее изобретение также относится к способам сохранения виросомы, включающим получение содержащих виросомы составов, раскрытых в данном документе, причем таких составов, которые приводят к улучшению стабильности виросом при хранении ниже -65°C и в интервале примерно 2-8°C и, возможно, при более высоких
температурах, при этом они также совместимы с парентеральным введением, особенно с парентеральным введением людям.
Таким образом, другой аспект настоящего изобретения относится к способам сохранения виросом, включающим получение композиции, раскрытой в данном документе, и хранение указанной композиции при температуре, изменяющейся в интервале от 2 до 8°C.
Следующие примеры представлены для иллюстрации настоящего изобретения, однако изобретение не ограничивается ими.
- 7 030733
Примеры
Пример 1.
План и методика проведения эксперимента.
Составы, содержащие виросомы, полученные из разных штаммов гриппа, каждый содержащий молекулы НА из разных штаммов гриппа, получали в контрольной композиции и проводили повторную буферизацию в 8 экспериментальных составах (табл. 1), используя инструментарий UF/DF системы "Cogent pSCALE TFF system" (Millipore). Элюаты стерилизовали фильтрованием (0,22 мкм) и брали аликвоты в стеклянные ампулы (по 3 мл на ампулу). Контрольная композиция представляет собой имеющуюся в настоящий момент в продаже композицию Inflexal®V, которая забуферена с использованием 50 мМ KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH, равного 7,4; и которая содержит NaCl, концентрация которого составляет примерно 82 мМ.
Вслед за этим ампулы подвергали 1 циклу замораживания/размораживания (F/T) или инкубировали при 5±3°C с целью изучения стабильности (в течение одного и трех месяцев), оба эксперимента имитировали условия в реальном времени. Ампулы хранили вместе с соответствующими контрольными образцами в аликвотах при 5±3°C до проведения анализа образца, который проводили в двух повторностях. Образцы анализировали с помощью: одномерной радиальной иммунодиффузии (SRID) для количественного определения НА и методом Z-sizer Nano (ZS) для измерения диаметра виросомных частиц, как описано в описании выше.
Таблица 1
Перечень составов, отобранных для данного исследования
Состав буфера Концентрация буферного раствора pH Стабилизатор Концентрация стабилизатора
КН2РО4/ ИазНРОд 20 мМ 7,0 маннит 4%
КН2РО4/ NazHPCb 20 мМ 7,5 трегалоза 8%
КН2РО4/ NazHPCN 20 мМ 7,0 нет н.д.
КН2РО4/ NazHPCb 20 мМ 7,0 трегалоза 8%
КН2РО4/ ИазНРОд 20 мМ 7,5 нет н.д.
КН2РО4/ NazHPCb 20 мМ 7,5 сахароза 8%
КН2РО4/ NazHPCU 20 мМ 7,0 сахароза 8%
КН2РО4/ Na2HPO4 20 мМ 7,5 маннит 4%
Контольный состав 53 мМ 7,4 NaCl 82 мМ
Результаты и выводы.
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе A/California виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 1). Было обнаружено, что после одного цикла замораживания/размораживания, состав контрольной композиции оказывает отрицательное влияние на стабильность виросом, как с точки зрения величины диаметра (фиг. 1A), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 1B).
Неожиданно у исследованных экспериментальных составов были обнаружены отличные свойства с точки зрения средней величины диаметра и дополнительно был обнаружен явный положительный эффект при введении моно- или дисахарида, особенно при pH 7,0 (фиг. 1А). Действительно, в этих составах не наблюдалось значимого изменения размера виросом при измерении методом динамического рассеяния света. Хороший профиль стабильности наблюдали у экспериментальных составов, испытанных в отношении изменения концентрации НА после замораживания/размораживания (фиг. 1В).
Виросомы на основе A/California хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель (фиг. 2). Значительного изменения в отношении размера виросом с течением времени обнаружено не было ни в одном из проанализированных составов (фиг. 2А). Такая же тенденция была обнаружена в отношении изменения концентрации НА с течением времени для исследованных контрольных образцов и экспериментальных составов (фиг. 2В).
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе B/Brisbane виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 3). Было обнаружено, что после одного цикла замораживания/размораживания, состав контрольной композиции оказывает отрицательное влияние на стабильность виросом, как с точки зрения величины диаметра (фиг. 3A), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 3B).
Неожиданно у исследованных альтернативных составов были обнаружены отличные свойства как с точки зрения средней величины диаметра (фиг. 3A), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 3A): значительных изменений величины диаметра виросом или концентрации НА после замораживания/размораживания обнаружено не было. Явный положительный эффект в предотвращении изменений
- 8 030733
величины диаметра после замораживания/размораживания наблюдали при введении моно- или дисахарида.
Виросомы на основе B/Brisbane хранили при 5±3°C в течение 24 недель и измеряли среднюю величину диаметра в моменты времени t=0, t=4, t=12 и t=24 недель, а концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12 (фиг. 4). Значительного изменения в отношении величины диаметра виросом (фиг. 4А) и в отношении концентрации НА (фиг. 4В) с течением времени обнаружено не было ни в одном из проанализированных составов. Вместе взятые, эти данные предполагают хорошую сопоставимость экспериментальных составов с контрольными составами.
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе A/Victoria виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 5). Контрольная композиция явно не была оптимальной для обеспечения стабильности после этой стрессовой ситуации, особенно с точки зрения концентрации НА. У всех исследованных экспериментальных составов были обнаружены хорошие свойства с точки зрения среднего размера (за исключением фосфатного состава без сахара с pH 7,0) (фиг. 5А): значимого изменения величины диаметра виросом при измерении методом динамического рассеяния света не наблюдалось. Неожиданно у всех экспериментальных составов, содержащих моноили дисахариды, были обнаружены отличные свойства в отношении изменения концентрации НА после замораживания/размораживания (фиг. 5В). Виросомы на основе A/Victoria хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра в моменты времени t=0 и t=4 недель, а концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель (фиг. 6). Значительного изменения в отношении размера виросом (фиг. 6А) и в отношении концентрации НА (фиг. 6В) с течением времени не было обнаружено ни в одном из проанализированных экспериментальных составов за исключением фосфатного состава без сахара с pH 7,0, что говорит о положительном вкладе от присутствия моно- или дисахарида в этом буфере. Вместе взятые, эти данные предполагают хорошую сопоставимость альтернативных составов с контрольными составами.
Эксперименты с замораживанием/размораживанием (фиг. 1, 3 и 5) показывают, что составы в соответствии с данным изобретением удивительно хорошо подходят для защиты виросом от непреднамеренного замораживания и, таким образом, придают виросомам большую стабильность.
С учетом всего вышесказанного исследования стабильности (12 недель при 5±3°C), в которых измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА (фиг. 2, 4 и 6), показали хорошую сопоставимость между экспериментальными составами и контрольным составом, который представляет собой композицию, опробованную и одобренную с точки зрения надежности и эффективности в течение уже многих лет и по-прежнему используемую в коммерческих масштабах для сохранения виросом.
С учетом всех полученных данных, описанных выше, и после статистического анализа определенная комбинация переменных ясно продемонстрировала способность придавать виросомам наилучшую стабильность. Композиция, которая показала самую высокую способность придавать виросомам стабильность, представляла собой забуференную композицию, содержащую 20 мМ Na2HPO4/KH2PO4 со значением pH, равным 7,5 и дополнительно содержащую 8% трегалозы.
Пример 2.
План и методика проведения эксперимента.
Температурный профиль получали измерением изменения величины диаметра виросом от температуры для определения начала агрегации и изменения общего размера при повышении температуры в различных исследуемых составах. Линейное изменение температуры от 35 до 75°C получали с помощью прибора Z-sizer ZS (Malvern) и размер виросом измеряли каждый раз при изменении температуры на 3°C непосредственно в той же кювете.
Результаты и выводы.
Зависящий от температуры профиль, который указывает на температуру начала агрегации, и изменение общего размера виросом в различных исследованных составах показаны на фиг. 7 (А, В и С). Для трех проанализированных штаммов контрольная композиция не была оптимальной для обеспечения термической стабильности после ускоренного термического стресса. Действительно, для всех штаммов величина диаметра виросом возрастала значительно (вплоть до более чем 300 нм) в температурном интервале от 52 до 62°C. Для B/Brisbane (фиг. 7В) почти во всех исследованных новых составах температура начала агрегации возрастала, а в содержащей трегалозу композиции при pH 7,5 наблюдался положительный эффект на достижение максимального размера при высоких температурах, т.е. величина максимального диаметра не превысила 300 нм.
В случаях A/California (фиг. 7А) и A/Victoria (фиг. 7С) повышение температуры начала агрегации было менее выражено, однако все исследованные новые составы неожиданно показали явный положительный эффект на снижение увеличения величины диаметра виросом.
Конечный результат этого эксперимента подтвердил результаты, полученные в примере 1, предполагая то, что композиция, забуференная с использованием 20 мМ Na2HPO4/KH2PO4 при значении pH, равном 7,5, и дополнительно содержащая 8% трегалозы, является наиболее многообещающей комбинацией для повышения стабильности виросом.
- 9 030733
Пример 3.
План и методика проведения эксперимента.
Получали кривую титрования, которую получали на виросомах на основе A/Victoria, полученных из клетки, путем измерения изменения размера виросом в зависимости от концентрации соли, для определения точки начала образования агрегатов и общего изменения размера при снижении концентрации соли. Линейное снижение концентрации соли (NaCl) от 130 до 33 мМ выполняли в приборе Z-sizer ZS (Malvern) и размер виросом измеряли девятнадцать раз в той же кювете при уменьшающихся концентрациях NaCl.
Результаты и выводы.
Зависящая от концентрации NaCl кривая, которая отображает точку начала агрегации при определенной концентрации NaCl, и изменение общего размера виросом A/Victoria показаны на фиг. 8.
Концентрацию NaCl снижали со 130 до 33 мМ автоматическим разбавлением композиции, содержащей 20 мМ Na2HPO4/KH2PO4 при значении pH, равном 7,5, и 130 мМ NaCl. Величина диаметра виросом A/Victoria увеличивалась значительно (вплоть до 300 нм) при концентрации NaCl ниже 65 мМ. Тот же эффект наблюдали в сходном эксперименте, в котором вносили 8% трегалозы (данные не приведены).
Конечный результат этого эксперимента показал, что для штамма гриппа A/Victoria, полученного из клеток, для поддержания размера виросом в пределах приемлемого интервала (300 мМ) требуется минимальная концентрация 65 мМ NaCl, что само по себе предполагает, что для повышения стабильности виросом минимальная концентрация добавляемого к конечной композиции NaCl должна составлять 65 мМ.
Пример 4.
План и методика проведения эксперимента.
Три разных состава, содержащих виросомы на основе групп, каждый из которых содержит молекулы НА из разных штаммов гриппа, получали в контрольном составе и проводили повторную буферизацию в 2 экспериментальных составах (табл. 2), используя инструментарий UF/DF системы "Cogent pSCALE TFF system" (Millipore). В контрольной композиции также проводили повторную буферизацию, используя ту же самую систему, чтобы исключить влияние от смены буфера.
Таблица 2
Композиция буферных растворов, использованных в эксперименте.
Название
буферного раствора KH2PO4/Na2HPO4 (мМ) pH Трегалоза (% вес/вес) Сахароза (% вес/вес) NaCl (мМ)
Буфер Т 20 7,5 4 75
Буфер S 20 7,5 4 75
Элюаты стерилизовали фильтрованием (0,22 мкм) и брали аликвоты в стеклянные ампулы (по 3 мл на ампулу) или их объединяли в трехвалентный продукт, а затем брали аликвоты в стеклянные ампулы. Указанный трехвалентный продукт (также для краткости называемый "тривалент") представляет собой смесь трех разных виросом, причем каждая содержит антигены от отдельного штамма гриппа. В данном эксперименте тривалент содержит три разные виросомы, которые имеют антигены либо от штамма A/Victoria, либо от штамма B/Brisbane или от A/California.
Контрольная композиция представляет собой одну из имеющихся в настоящий момент в продаже композиций Inflexal®V, которая забуферена с использованием 50 мМ KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH, равного 7,4; и которая содержит NaCl, концентрация которого составляет примерно 82 мМ. Вслед за этим ампулы подвергали 1 циклу замораживания/размораживания (F/T) или инкубировали при 5±3°C с целью изучения стабильности (в течение одного и трех месяцев), оба эксперимента имитировали условия в реальном времени. Ампулы хранили вместе с соответствующими контрольными образцами в аликвотах при 5±3°C до проведения анализа образцов, который проводили в трех повторностях. Образцы анализировали с помощью: одномерной радиальной иммунодиффузии (SRID) для количественного определения НА и методом Z-sizer Nano (ZS) для измерения диаметра виросомных частиц, как описано выше.
Результаты и выводы.
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных из клеток виросом A/California до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 9). Было обнаружено, что после одного цикла замораживания/размораживания контрольные составы оказывают отрицательное влияние на стабильность виросом как с точки зрения величины диаметра (фиг. 9А), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 9В).
Неожиданно у исследованных экспериментальных составов были обнаружены отличные свойства с точки зрения средней величины диаметра (буфер T и буфер S) и был обнаружен явный положительный эффект при введении дисахарида (фиг. 9А). Действительно, в этих составах не наблюдалось значимого изменения размера виросом при измерении методом динамического рассеяния света. Очень хороший профиль стабильности наблюдали у экспериментальных составов, испытанных в отношении изменения
- 10 030733
концентрации НА после замораживания/размораживания (фиг. 9В).
Полученные из клеток виросомы A/California хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель (фиг. 10).
Значительного изменения в отношении размера виросом с течением времени обнаружено не было ни в одном из проанализированных составов (фиг. 10А). Такая же тенденция была обнаружена в отношении изменения концентрации НА с течением времени для исследованных контрольных образцов и экспериментальных составов (фиг. 10В).
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе B/Brisbane виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 11). Было обнаружено, что после одного цикла замораживания/размораживания, контрольные составы оказывают отрицательное влияние на стабильность виросом как с точки зрения величины диаметра (фиг. 11A), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 11В).
Неожиданно у исследованных альтернативных составов были обнаружены отличные свойства как с точки зрения средней величины диаметра (фиг. 11H), так и с точки зрения концентрации НА (фиг. 11А) (буфер T и буфер S): значительных изменений величины диаметра виросом или концентрации НА после замораживания/размораживания обнаружено не было. Явный положительный эффект в предотвращении изменений величины диаметра после замораживания/размораживания наблюдали при введении дисахарида.
Виросомы на основе B/Brisbane хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель, а концентрацию НА измеряли в моменты времени t=0, t=4 и t=12 (фиг. 12). Значительного изменения в отношении величины диаметра виросом (фиг. 12А) и в отношении концентрации НА (фиг. 12В) с течением времени обнаружено не было ни в одном из проанализированных составов. Вместе взятые, эти данные предполагают хорошую сопоставимость экспериментальных составов с контрольной композицией (фиг. 12).
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у полученных на основе A/Victoria виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 13). Контрольная композиция явно не была оптимальной для обеспечения стабильности после этой стрессовой ситуации, особенно с точки зрения изменения размера. У обоих исследованных экспериментальных составов были обнаружены хорошие свойства с точки зрения среднего размера (фиг. 13А): значимого изменения величины диаметра виросом при измерении методом динамического рассеяния света не наблюдалось. Неожиданно у экспериментальных составов, содержащих дисахарид (буфер T и S), были обнаружены отличные свойства в отношении изменения концентрации НА после замораживания/размораживания (фиг. 13B).
Виросомы на основе A/Victoria хранили при 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель (фиг. 14). Значительного изменения в отношении размера виросом (фиг. 14A) и в отношении концентрации НА (фиг. 14B) с течением времени не было обнаружено в проанализированных экспериментальных составах, что говорит о положительном вкладе от присутствия дисахарида в этом буфере.
Среднюю величину диаметра и концентрацию НА измеряли у трехвалентных смесей виросом до и после одного цикла замораживания/размораживания (фиг. 15). Контрольная композиция явно не была оптимальной для обеспечения стабильности после этой стрессовой ситуации, как с точки зрения концентрации НА, так и размера. У обоих исследованных экспериментальных составов были обнаружены хорошие свойства с точки зрения среднего размера (фиг. 15А): значимого изменения величины диаметра виросом при измерении методом динамического рассеяния света не наблюдалось. Неожиданно у экспериментальных составов, содержащих дисахарид, были обнаружены отличные свойства в отношении изменения концентрации НА после замораживания/размораживания (фиг. 15В, 15С, 15D).
Трехвалентные виросомы хранили при температуре 5±3°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0, t=4 и t=12 недель (фиг. 16). Значительного изменения в отношении размера виросом (фиг. 16А) и в отношении концентрации НА (фиг. 16В, 16С и 16D) с течением времени не было обнаружено в проанализированных экспериментальных составах, что говорит о положительном вкладе от присутствия дисахарида в этом буфере.
Вместе взятые, эти данные предполагают хорошую сопоставимость альтернативных составов с контрольным составом. Эксперименты с замораживанием/размораживанием (фиг. 9, 11, 13 и 15) показывают, что составы в соответствии с настоящим изобретением удивительно хорошо подходят для защиты виросом при непреднамеренном замораживании и таким образом придают виросомам большую стабильность.
С учетом всего вышесказанного исследования стабильности (12 недель при 5±3°C), в которых измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА (фиг. 10, 12, 14 и 16), показали хорошую сопоставимость между экспериментальными составами и контрольным составом, которой представляет собой композицию, опробованную и одобренную с точки зрения надежности и эффективности в течение уже многих лет, и которую по-прежнему используют в коммерческих масштабах для сохранения виросом.
- 11 030733
С учетом всех полученных данных, описанных выше, и после статистического анализа определенная комбинация переменных ясно продемонстрировала способность придавать виросомам наилучшую стабильность. Композиция, которая показала самую высокую способность придавать виросомам стабильность, представляла собой забуференную композицию, содержащую 20 мМ Na2HPO4/KH2PO4, со значением pH, равным 7,5, 75 мМ NaCl и дополнительно содержащую 4% трегалозы.
Пример 5.
План и методика проведения эксперимента.
Три разных состава, содержащих виросомы на основе групп, каждый из которых содержит молекулы НА из разных штаммов гриппа, получали в контрольном составе и проводили повторную буферизацию в двух экспериментальных составах (как приведено в табл. 1), используя инструментарий UF/DF системы "Cogent pSCALE TFF system" (Millipore). В контрольной композиции также проводили повторную буферизацию, используя ту же самую систему, чтобы исключить влияние от смены буфера.
Элюаты стерилизовали фильтрованием (0,22 мкм) и объединяли в трехвалентный продукт, а затем брали аликвоты в стеклянные ампулы (по 3 мл на ампулу). Контрольная композиция представляет собой одну из имеющихся в настоящий момент в продаже композиций Inflexal®V, которая забуферена с использованием 50 мМ KH2PO4/Na2HPO4 до значения pH, равного 7,4; и которая содержит NaCl, концентрация которого составляет примерно 82 мМ. Вслед за этим ампулы инкубировали при температуре менее -65°C с целью изучения стабильности (в течение 12 недель). Ампулы хранили вместе с соответствующими контрольными образцами в аликвотах при температуре менее -65°C до проведения анализа образцов, которые проводили в трех повторностях. Образцы анализировали с помощью: одномерной радиальной иммунодиффузии (SRID) для количественного определения НА и методом Z-sizer Nano (ZS) для измерения диаметра виросомных частиц, как описано в описании анализа выше.
Результаты и выводы.
Трехвалентные виросомы хранили при температуре менее -65°C в течение 12 недель и измеряли среднюю величину диаметра и концентрацию НА в моменты времени t=0 и t=12 недель (фиг. 17).
Значительного изменения в отношении размера виросом с течением времени обнаружено не было ни в одном из новых исследованных составов (фиг. 17А). Новые исследованные составы смогли стабилизировать виросомы при температуре менее -65°C в течение 12 недель, в то время как в контрольных образцах (используемый в настоящее время состав) наблюдалось явное увеличение размера виросом.
Концентрацию НА измеряли в каждом из трех штаммов, включенных в трехвалентную композицию (фиг. 17В, 17С и 17D), в моменты времени t=0 и t=12 недель хранения при температуре менее -65°C. Наблюдали явное улучшение в двух исследованных новых составах по сравнению с контрольными (используемый в настоящее время состав), особенно в случае B/Brisbane и A/California. Концентрация НА этих двух штаммов снижается значительно после хранения при температуре менее -65°C в течение 12 недель в контрольных составах, в то время как она поддерживается практически постоянной, если виросомы входят в состав исследованных двух новых составов.
С учетом полученных данных, описанных выше, и после статистического анализа определенная комбинация переменных ясно продемонстрировала способность придавать виросомам наилучшую стабильность во время хранения при температуре менее -65°C. Композиция, которая показала самую высокую способность придавать виросомам стабильность после хранения при температуре менее -65°C представляла собой забуференную композицию, содержащую 20 мМ Na2HPO4/KH2PO4, со значением pH, равным 7,5, 75 мМ NaCl и дополнительно содержащую 4% трегалозы.
Ссылки
Freixeiro et al., "Study of the stability of proteoliposomes as vehicles for vaccines against Neisseria meningitidis based on recombinant porin complexes", Int. J. Pharm. 25 февраля 2013 г.; 443(1-2):1-8. doi: 10.1016/j.ijpharm.2012.12.046. Электронная публикация 7 января 2013 г.
Herzog et al., "Eleven years of Inflexal V-a virosomal adjuvanted influenza vaccine", Vaccine. 16 июля 2009 г.;27(33):4381-7. doi: 10.1016/j.vaccine.2009.05.029. Электронная публикация 29 мая 2009 г.
Hincha et al., "Trehalose Increases Freeze-Thaw Damage in Liposomes Containing Chloroplast Glycolipids", Cryobiology. Май 1998; 36(3):245-9.
Meunier F. et al. "Liposomal amphotericin B(AmBisome): safety data from a phase II/III clinical trial". J. Antimicrob. Chemother. 1991; 28 Suppl B:83-91.
Mishler et al., "Inflexal®V a trivalent virosome subunit influenza vaccine: production", Vaccine 20 (2002), B17-B23.
Stegmann et al., "Functional reconstitution of influenza virus envelopes." EMBO J. Сентябрь 1987; 6(9):2651-9.
Wood et al., "An improved single-radial-immunodiffusion technique for the assay of influenza haemagglutinin antigen: application for potency determinations of inactivated whole virus and subunit vaccines", J. Biol. Stand. 1977; 5(3):237-47.
- 12 030733

Claims (8)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Жидкая композиция для сохранения виросом, содержащая:
    a) виросомы;
    b) буфер KH2PO4/Na2HPO4 с концентрацией фосфата от 15 до 30 мМ;
    c) соль с концентрацией от 65 до 85 мМ;
    d) трегалозу с концентрацией от 2 до 10% (вес./вес.), где указанная композиция имеет pH от 6,5 до 8.
  2. 2. Композиция по п.1, имеющая pH от 7 до 7,8.
  3. 3. Композиция по п.1, имеющая значение pH, равное 7,5, и содержащая трегалозу с концентрацией от 3 до 5% (вес./вес.).
  4. 4. Композиция по п.1, где соль представляет собой NaCl.
  5. 5. Способ сохранения виросом, включающий получение композиции по любому из пп.1-4.
  6. 6. Способ сохранения виросом по п.5, дополнительно включающий хранение указанной композиции при температуре от 2 до 8°С.
  7. 7. Способ сохранения виросом по п.5, дополнительно включающий хранение указанной композиции при температуре от -80 до -65°C.
  8. 8. Способ сохранения виросом по п.5, дополнительно включающий хранение указанной композиции при температуре от -15 до -30°C.
    - 13 030733
    A/California „ ,
    Замораживание/размораживание
    Заморж1ваниефазморав1вание Концентрация НА - 5W
    Р'ПНЦ^НЦ.ЛЦИА на ιινψ-ΡΜπ;.
    t снтрочаный Φο·;φατι·Η? фосфат μ нт i о фосфат!>Н’го фжфзтрнтго фосфат рю,5 фосфат рнт,5 го фосфатрн?,5 го фхф-ат рн?,5 го состав замЛ мН мачнит 4Ъ мГЛса-ароэа Л мМтеегалом 5Л> гомМ мНмачнитчЬ мМеа.арои S’« мН трегалоза гч
    □ До замораживания/размораживания
    После
    замораживания/размораживания
EA201691270A 2013-12-19 2014-12-18 Жидкая композиция для сохранения виросом и способ сохранения виросом EA030733B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP13198296 2013-12-19
PCT/EP2014/078463 WO2015091798A2 (en) 2013-12-19 2014-12-18 Improved formulations for virosomes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201691270A1 EA201691270A1 (ru) 2016-12-30
EA030733B1 true EA030733B1 (ru) 2018-09-28

Family

ID=49880456

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201691270A EA030733B1 (ru) 2013-12-19 2014-12-18 Жидкая композиция для сохранения виросом и способ сохранения виросом

Country Status (11)

Country Link
US (2) US20160317646A1 (ru)
EP (1) EP3082769B1 (ru)
JP (1) JP6469698B2 (ru)
KR (1) KR102391228B1 (ru)
CN (1) CN105899220B (ru)
AU (1) AU2014368594B2 (ru)
BR (1) BR112016013920B1 (ru)
CA (1) CA2934434C (ru)
EA (1) EA030733B1 (ru)
SG (1) SG11201604136PA (ru)
WO (1) WO2015091798A2 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US11523988B2 (en) 2018-11-29 2022-12-13 Catalent U.K. Swindon Zydis Limited Oral dispersible vaccine comprising virosomes

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6393727A (ja) * 1986-10-09 1988-04-25 Kokuritsu Yobou Eisei Kenkyusho インフルエンザワクチン凍結乾燥製剤
US20040028687A1 (en) * 2002-01-15 2004-02-12 Waelti Ernst Rudolf Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues
WO2004045582A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-03 Pevion Biotech Ltd. High-efficiency fusogenic vesicles, methods of producing them, and pharmaceutical compositions containing them
EP1676569A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-05 Pevion Biotech Ltd. Lyophilization of virosomes
WO2011090712A2 (en) * 2009-12-28 2011-07-28 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Methods for stabilizing influenza antigen enveloped virus-based virus-like particle solutions

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1564500A (en) * 1975-09-29 1980-04-10 Wellcome Found Biological preparations
US4148876A (en) * 1975-09-29 1979-04-10 Burroughs Wellcome Co. Biological preparations
US7253262B2 (en) * 1995-01-19 2007-08-07 Quandrant Drug Delivery Limited Dried blood factor composition comprising trehalose
GB9501040D0 (en) * 1995-01-19 1995-03-08 Quadrant Holdings Cambridge Dried composition
WO2001066137A1 (en) * 2000-03-07 2001-09-13 Merck & Co., Inc. Adenovirus formulations
US6653062B1 (en) * 2000-07-26 2003-11-25 Wisconsin Alumni Research Foundation Preservation and storage medium for biological materials
GB0218821D0 (en) * 2002-08-13 2002-09-18 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel compositions
KR101130948B1 (ko) * 2002-11-01 2012-03-30 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 건조 공정
WO2012073257A2 (en) * 2010-11-30 2012-06-07 Bharat Biotech International Limited Vaccine formulation for prophylaxis and treatment of chandipura virus infections in mammals

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS6393727A (ja) * 1986-10-09 1988-04-25 Kokuritsu Yobou Eisei Kenkyusho インフルエンザワクチン凍結乾燥製剤
US20040028687A1 (en) * 2002-01-15 2004-02-12 Waelti Ernst Rudolf Methods and compositions for the targeted delivery of therapeutic substances to specific cells and tissues
WO2004045582A1 (en) * 2002-11-21 2004-06-03 Pevion Biotech Ltd. High-efficiency fusogenic vesicles, methods of producing them, and pharmaceutical compositions containing them
EP1676569A1 (en) * 2004-12-30 2006-07-05 Pevion Biotech Ltd. Lyophilization of virosomes
WO2011090712A2 (en) * 2009-12-28 2011-07-28 Ligocyte Pharmaceuticals, Inc. Methods for stabilizing influenza antigen enveloped virus-based virus-like particle solutions

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREAS R. KAMMER, MARIO AMACKER, SILVIA RASI, NICOLE WESTERFELD, CHRISTEL GREMION, DANIELLE NEUHAUS, RINALDO ZURBRIGGEN: "A new and versatile virosomal antigen delivery system to induce cellular and humoral immune responses", VACCINE, ELSEVIER, vol. 25, no. 41, 1 October 2007 (2007-10-01), pages 7065 - 7074, XP055109819, ISSN: 0264410X, DOI: 10.1016/j.vaccine.2007.07.052 *
HINCHA D K, CROWE J H: "Trehalose Increases Freeze-Thaw Damage in Liposomes Containing Chloroplast Glycolipids.", CRYOBIOLOGY., ACADEMIC PRESS INC., US, vol. 36, no. 3, 1 May 1998 (1998-05-01), US, pages 245 - 249, XP002722282, ISSN: 0011-2240, DOI: 10.1006/cryo.1998.2074 *
MISCHLER, R. METCALFE, I.C.: "Inflexal^(R)V a trivalent virosome subunit influenza vaccine: production", VACCINE, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 20, 20 December 2002 (2002-12-20), AMSTERDAM, NL, pages B17 - B23, XP004397481, ISSN: 0264-410X, DOI: 10.1016/S0264-410X(02)00512-1 *
PAULA FREIXEIRO, ERNESTO DI�GUEZ-CASAL, LILIANA COSTOYA, BEGO�A SEIJO, CARLOS M. FERREIR�S, MAR�A TERESA CRIADO, SANDRA S�NCHEZ: "Study of the stability of proteoliposomes as vehicles for vaccines against Neisseria meningitidis based on recombinant porin complexes", INTERNATIONAL JOURNAL OF PHARMACEUTICS, ELSEVIER, vol. 443, no. 1-2, 1 February 2013 (2013-02-01), pages 1 - 8, XP055108675, ISSN: 03785173, DOI: 10.1016/j.ijpharm.2012.12.046 *
WILSCHUT JAN; DE JONGE JØRGEN; HUCKRIEDE ANKE; AMORIJ JEAN-PIERRE; HINRICHS WOUTER L J; FRIJLINK HENDERIK W: "Preservation of influenza virosome structure and function during freeze-drying and storage.", JOURNAL OF LIPOSOME RESEARCH., TAYLOR & FRANCIS, PHILADELPHIA, PA., US, vol. 17, no. 3-4, 1 January 2007 (2007-01-01), US, pages 173 - 182, XP009177150, ISSN: 0898-2104, DOI: 10.1080/08982100701536883 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN105899220B (zh) 2020-01-10
US20160317646A1 (en) 2016-11-03
CA2934434A1 (en) 2015-06-25
KR20160098452A (ko) 2016-08-18
CA2934434C (en) 2022-05-24
JP6469698B2 (ja) 2019-02-13
BR112016013920B1 (pt) 2023-02-07
EA201691270A1 (ru) 2016-12-30
AU2014368594B2 (en) 2020-03-05
JP2017502012A (ja) 2017-01-19
AU2014368594A1 (en) 2016-06-16
EP3082769A2 (en) 2016-10-26
US20200360510A1 (en) 2020-11-19
SG11201604136PA (en) 2016-07-28
KR102391228B1 (ko) 2022-04-28
CN105899220A (zh) 2016-08-24
WO2015091798A3 (en) 2015-08-27
WO2015091798A2 (en) 2015-06-25
EP3082769B1 (en) 2018-01-31
BR112016013920A2 (ru) 2017-08-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Dumpa et al. Stability of vaccines
ES2390104T3 (es) Emulsión inmuno-adyuvante termorreversible
Kim et al. Formulation and coating of microneedles with inactivated influenza virus to improve vaccine stability and immunogenicity
US10736840B2 (en) Thermally stable vaccine formulations and microneedles
CA2680193C (en) Lyophilized preparation comprising influenza vaccine, and method for preparation thereof
Magnusson et al. Diluents for stabilization of tuberculin
JP2024029053A (ja) ビロソームを含む経口分散性ワクチン
US20200360510A1 (en) Formulations for virosomes
BE1024160B9 (fr) Formulation immunogène
Platenburg et al. Carbohydrate fatty acid monosulphate ester is a potent adjuvant for low-dose seasonal influenza vaccines
RU2808276C2 (ru) Перорально диспергируемая вакцина, содержащая виросомы
Hassett Ultra stable glassy state vaccines containing adjuvants

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KZ KG TJ TM