EA022430B1 - Пиразолохинолины в качестве ингибиторов серин/треонин-протеинкиназ - Google Patents

Пиразолохинолины в качестве ингибиторов серин/треонин-протеинкиназ Download PDF

Info

Publication number
EA022430B1
EA022430B1 EA201300073A EA201300073A EA022430B1 EA 022430 B1 EA022430 B1 EA 022430B1 EA 201300073 A EA201300073 A EA 201300073A EA 201300073 A EA201300073 A EA 201300073A EA 022430 B1 EA022430 B1 EA 022430B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compounds
ethyl acetate
tlc
methyl
hptlc
Prior art date
Application number
EA201300073A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201300073A1 (ru
Inventor
Томас Фуксс
Вернер Медерски
Франк Ценке
Original Assignee
Мерк Патент Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Мерк Патент Гмбх filed Critical Мерк Патент Гмбх
Publication of EA201300073A1 publication Critical patent/EA201300073A1/ru
Publication of EA022430B1 publication Critical patent/EA022430B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4738—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4745—Quinolines; Isoquinolines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems condensed with ring systems having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. phenantrolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/496—Non-condensed piperazines containing further heterocyclic rings, e.g. rifampin, thiothixene or sparfloxacin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/18—Halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D215/00—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems
    • C07D215/02—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D215/16—Heterocyclic compounds containing quinoline or hydrogenated quinoline ring systems having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen atoms or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D215/38—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/99—Enzyme inactivation by chemical treatment

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединениям формул (I)-(III):где R, R, R, R, R, R, R, Rи X имеют значение, указанное в пунктах формулы, и/или их физиологически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях. Соединения формулы (I) могут применяться для ингибирования серин/треонин-протеинкиназ и для сенсибилизации раковых клеток к противораковым препаратам и/или ионизирующему излучению. Изобретение также относится к применению соединений формулы (I) для профилактики, лечения или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов или нарушений ангиогенеза в комбинации с лучевой терапией и/или противораковым препаратом. Кроме того, изобретение относится к процессу получения соединений формулы (I) с помощью реакции соединений формулы (II) или (III) и необязательного превращения соединений-оснований и кислот соединений формулы (I) в одну из их солей.

Description

<p>Изобретение относится к соединениям формул (I)-(III):</p><a name="caption3"></a><p>022430 B1</p><p>022430 B1</p> <p>где <sub>R</sub><sup>1<sub></sup>, R</sub><sup>2<sub></sup>, R</sub><sup>3<sub></sup>, R</sub><sup>4<sub></sup>, R</sub><sup>5<sub></sup>, R</sub><sup>8<sub></sup>, R</sub><sup>9<sub></sup>, R</sub><sup>10</sup> и X имеют значение, указанное в пунктах формулы, и/или их физиологически приемлемым солям, таутомерам и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях. Соединения формулы (I) могут применяться для ингибирования серин/треонин-протеинкиназ и для сенсибилизации раковых клеток к противораковым препаратам и/или ионизирующему излучению. Изобретение также относится к применению соединений формулы (I) для профилактики, лечения или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов или нарушений ангиогенеза в комбинации с лучевой терапией и/или противораковым препаратом. Кроме того, изобретение относится к процессу получения соединений формулы (I) с помощью реакции соединений формулы (II) или (III) и необязательного превращения соединений-оснований и кислот соединений формулы (I) в одну из их солей.</p> <p>022430</p> <p>Изобретение относится к соединениям формул (1)-(Ш):</p> <p>в которых R<sup>1</sup>, R<sup>2</sup>, R<sup>3</sup>, R<sup>4</sup>, R<sup>5</sup>, R<sup>8</sup>, R<sup>9</sup>, R<sup>10</sup> и X имеют значение, указанное в пунктах формулы, и/или их физиологически приемлемым солям.</p> <p>Соединения формулы (I) могут применяться для ингибирования серин/треонин-протеинкиназ и для сенсибилизации раковых клеток к противораковым препаратам и/или ионизирующему излучению. Изобретение также относится к применению соединений формулы (I) для профилактики, лечения или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов или нарушений ангиогенеза в комбинации с лучевой терапией и/или противораковым препаратом. Изобретение кроме того относится к способу получения соединений формулы (I) с помощью реакции соединений формул (II) и (III) и необязательному превращению соединений-оснований или кислот соединений формулы (I) в одну из их солей.</p> <p>ДНК-зависимая протеинкиназа (ДНК-ПК) является серин/треонин протеинкиназой, которая активируется при взаимодействии с ДНК. Биохимические и генетические данные показывают, что ДНК-ПК состоит из (а) каталитической подъединицы, которую называют ДНК-ПКкп, и (b) двух регулятивных компонентов (Ku70 и Ku80). В функциональном выражении ДНК-ПК является ключевой составной частью, с одной стороны, восстановления ДНК двухнитевых разрывов (ДНР) и, с другой стороны, соматической или V(D)J рекомбинации. Кроме того, ДНК-ПК и ее компоненты связывают с рядом дальнейших физиологических процессов, включая модуляцию структуры хроматина и сохранение теломер (Smith &amp; Jackson (1999) Genes и Dev. 13: 916; Goytisolo et al. (2001), Mol. Cell. Biol. 21: 3642; Williams et al. (2009), Cancer Res. 69:2100).</p> <p>Генетическое вещество человека в виде ДНК постоянно подвергается воздействию активных форм кислорода (АФК), которые образуются главным образом в качестве побочных продуктов окислительного метаболизма. АФК способны вызывать ДНК повреждение в виде однонитевых разрывов. Двухнитевые разрывы могут возникать, если предшествующие однонитевые разрывы происходят в непосредственной близости. Кроме того, одно- и двухнитевые разрывы могут возникать в случае, если ДНК репликативная вилка встречает поврежденные основные структуры. Кроме того, внешние влияния, такие как ионизирующее излучение (например, облучение гамма-лучами или тяжелыми ионами), и определенные противораковые лекарственные средства (например, блеомицин) способны вызывать ДНК двухнитевые разрывы. ДНР могут, кроме того, встречаться в форме промежуточных продуктов соматической рекомбинации, процесса, который является важным для образования функциональной иммунной системы всех позвоночных животных. Если ДНК двухнитевые разрывы не устраняются или устраняются с ошибками, могут происходить мутации и/или хромосомные аберрации, которые могут в результате приводить к некрозу клеток. Для того чтобы противостоять серьезным опасностям в результате ДНК двухнитевых разрывов, эукариотические клетки развили ряд механизмов их восстановления. Высших эукариоты используют преимущественно так называемое негомологичное соединение концов (НГСК), в котором ДНК-зависимая протеинкиназа принимает ключевую роль. Биохимические исследования показали, что ДНК-ПК активируется наиболее эффективно наличием ДНК-ДНР. Клеточные линии, чьи ДНК-ПК компоненты мутировали и являются нефункциональными, оказались чувствительными к облучению (Smith и Jackson, 1999).</p> <p>Из-за каталитического домена, который находится на С-концевой каталитической подъединице (ДНК-ПКкп), которая насчитывает около 500 аминокислот, ДНК-ПК относят к семейству фосфатидилинозитол-3-киназа-зависимых киназ (ФИКК), где ДНК-ПК не является липидкиназой (Hartley et al. (1995),</p> <p>Cell, 82: 849; Smith &amp; Jackson (1999), Genes и Dev. 13: 916; Lempiainen &amp; Halazonetis (2009), EMBO J. 28: 3067).</p> <p>Протеинкиназу ATM (атаксии-телеангиэктазии-мутировавшая киназа) подобным образом относят к ФИКК семейству. Она тоже имеет центральное значение в распознавании ДНК повреждения. Пациенты, страдающие от атаксии-телеангиэктазии, демонстрируют, среди прочего, повышенную чувствительность</p> <p>к ионизирующему излучению. (Lavin &amp; Shiloh (1997), Annu. Rev. Immunol. 15: 177; Rotman &amp; Shiloh (1998), Hum. Mol. Genet. 7: 1555).</p> <p>Исследователем Izzard et al. (1999), Cancer Res. 59: 2581, было описано, что PI3 киназный ингибитор LY294002 ингибирует функцию ДНК-ПК в in vitro экспериментах. Значение IC50 (концентрация, при которой 50% активности фермента ингибируется) указывает на низкую эффективность, 1,25 мкМ (5,0 мМ</p> <p>- 1 022430</p> <p>АТФ). Хотя доказательства того, что ингибитор LY294002 позволяет клеткам млекопитающего стать более чувствительными к облучению, т.е. цитотоксичность ионизирующего излучения увеличивается, в принципе подразумевают применение для лучевой терапии, например терапии солидных раковых опухолей, лишь слабое увеличение чувствительности к ионизирующему излучению было продемонстрировано для LY294002 в клеточных условиях (Rosenzweig et al. (1999), Clin. Cancer Res. 3: 1149). В KuDOS Pharmaceuticals Ltd. оптимизировали направляющую структуру LY294002 и представили различные ингибиторы ДНК-ПК. Введение дибензотиофенильной группы приводит к ингибитору NU-7441, АТФ-конкурентному соединению, обладающему значением IC<sub>50</sub> 20,0 нМ (Hardcastle et al. (2005), J. Med. Chem. 48: 7829). KU-0060648 сочетает в себе ингибирующие свойства по отношению к ДНК-ПК с улучшенным профилем растворимости в водной среде, но подобным образом и киназы PI3K изоферментного семейства сильно ингибируются KU-0060648. Следовательно, давно существующая потребность в сильных и селективных ингибиторах ДНК-ПК, не удовлетворена до настоящего времени.</p> <p>Изобретение основано на цели преодоления недостатков, указанных в известном уровне техники, и разработке эффективных ингибиторов ДНК-ПК, которые являются селективными в отношении зависимых киназ семейства ФИКК, обладают небольшим размером молекул и, в частности, обеспечивают возможность эффективного применения в терапии рака в качестве радио- и хемосенсибилизаторов с целью повышения терапевтической эффективности при одновременном уменьшении побочных действий.</p> <p>Цель изобретения достигается в соответствии с независимыми пунктами формулы. Зависимые пункты содержат предпочтительные варианты. В соответствии с изобретением обеспечиваются соединения формулы (I)</p> <p>в которой R<sup>1</sup> означает Y, -Alk-OY, -Alk-NYY или -Alk-Ar;</p> <p>R<sup>2</sup> означает Y, -Alk-OY, -Alk-NYY, -C(Y)(R<sup>6</sup>)(R<sup>7</sup>), -C(Hal)(R<sup>6</sup>)(R<sup>7</sup>), -SO2A, -SO2-Ar или -POOH-Ar;</p> <p>R<sup>3</sup> означает Н, Hal, CN, -Alk-CN, -Alk-NYY, Het<sup>1</sup> или Het<sup>2</sup>;</p> <p>R<sup>4</sup> означает Hal, Y, Cyc, CN, -Alk-CN, -Alk-COOY, -Alk-CO-NYY или Het<sup>1</sup>;</p> <p>R<sup>5</sup> означает Hal, Y, OY, NYY, -NY-COY, COOY, -CO-NYY, -CO-NY-Alk-OY, -Alk-CO-NYY, -Alk-OY, -Alk-NYY, Ar, Het<sup>1</sup> или Het<sup>2</sup>;</p> <p>R<sup>3</sup>, R<sup>5</sup> вместе также означают -Alk-CO-NY-;</p> <p>R<sup>6</sup> означает Hal, Y, -COOY, -CO-NYY, -CO-NY-OY, -CO-NY-C(=NH)-NYY, -CO-NY-Alk-OY, -CO-NY-Alk-NYY, -CO-NY-Alk-SO2-NYY, -CO-NY-Alk-Ar, -CO-NY-Alk-Het<sup>2</sup> или -CO-NY-O-Alk-CN;</p> <p>R<sup>7</sup> означает Ar, Het<sup>1</sup> или -Het<sup>1</sup>-Het<sup>1</sup>;</p> <p>X означает CH2, O, S или Het<sup>1</sup>;</p> <p>Y означает Н или А;</p> <p>А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где независимо друг от друга 1-7 атомов Н могут быть заменены на Hal и/или независимо друг от друга одна или две</p> <p>смежные группы СН<sub>2</sub> могут быть заменены на -СН=СН- и/или -С^С-группу, Alk означает алкилен, содержащий 1-6 атомов С, где независимо друг от друга 1-4 атома Н могут быть заменены на Hal и/или OY, Cyc означает циклический алкил, содержащий 3-7 атомов С, где независимо друг от друга 1-4 атома Н могут быть заменены на Hal и/или OY;</p> <p>Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A,</p> <p>CN, OY, NYY, -NY-COY, COOY, Het<sup>1</sup>, Het<sup>2</sup>, -Alk-OY, -Alk-NYY, -Alk-Het<sup>1</sup> или Alk-Het<sup>2</sup>;</p> <p>Het<sup>1</sup> означает моно- или бициклический гетероарил, содержащий 2-9 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN, OY, NYY, -NY-COY, COOY, -Alk-OY или -Alk-NYY;</p> <p>Het<sup>2</sup> означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 2-7 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и</p> <p>Hal означает F, Cl, Br или I,</p> <p>и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.</p> <p>Неожиданно было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением обладают ингибирующими свойствами в отношении серин/треонин протеинкиназ. Соединения формулы (I) разработаны таким образом, чтобы благодаря своей структуре, ядру пиразолохинолина, к которому присоединены по</p> <p>- 2 022430</p> <p>крайней мере один алкоксизаместитель, предпочтительно два алкоксизаместителя, и необязательно замещенный фенил, происходило сильное и селективное ингибирование ДНК-ПК. Соединения в соответствии с изобретением, таким образом, открывают совершенно новые возможности относительно антиканцерогенного действия противораковых препаратов. Примечательно, что соединения формулы (I) играют терапевтическую роль радио- и хемосенсибилизаторов при лечении рака.</p> <p>На сегодняшний день в основном из WO 1992/07844 известно, что производные</p> <p>2,4-диаминохиназолина являются усилителями химиотерапевтических агентов при лечении рака. Производные адресованы на множественную устойчивость опухолевых клеток как следствие сверхэкспрессии гена mdr1, чей генный продукт Р гликопротеиновый эффлюксный насос поддерживает низкой внутриклеточную концентрацию активного соединения. Ингибиторы фосфатидилинозитол-3-киназы также описаны в общем в WO 2009/155527, которые не обладают ни специфической структурой формулы (I) в соответствии с изобретением, ни алкоксизаместителем. Ни один из двух предыдущих документов уровня техники не раскрывает физико-химические или фармакологические данные. На рынке лекарственный препарат также не известен. В противоположность этому настоящее изобретение показывает, что определенные соединения формулы (I) способны специфически ингибировать серин/треонин протеинкиназы, такие как ДНК-ПК. Соединения в соответствии с изобретением и их соли, следовательно, обладают ценными фармакологическими свойствами и в то же время хорошо переносятся.</p> <p>В целях изобретения соединения формулы (I) определяются таким образом, чтобы под ними также подразумевались фармацевтически применимые производные, соли, гидраты, сольваты, предшественники соединений, таутомеры и оптически активные формы (такие как, например, стереоизомеры, диастереоизомеры, энантиомеры, рацематы). Под сольватами соединений подразумевают аддукции молекул инертного растворителя на соединениях, которые образуются благодаря их взаимной силе притяжения. Сольватами являются, например, моно- или дигидраты или алкоголяты. Под фармацевтически применимыми производными подразумевают, например, соли соединений в соответствии с изобретением и так называемые предшественники соединений. Под предшественниками подразумевают, например, соединения формулы (I), модифицированные с помощью алкильной или ацильной групп, сахаров или олигопептидов, которые быстро расщепляются в организме с получением действующих соединений в соответствии с изобретением. Они также включают поддающиеся биологическому разложению полимерные производные соединений в соответствии с изобретением, как описано, например, в Int. J. Pharm. 115, 6167 (1995). Любое соединение, которое может превращаться in vivo в биологически активный агент, т.е. соединения формулы (I), является предшественником в смысле данного изобретения. Любое биологически активное соединение, которое получается вследствие in vivo метаболизирования соединения в соответствии с изобретением, является метаболитом в смысле настоящего изобретения. Соединения формулы (I) могут иметь один или несколько хиральных центров и вследствие этого встречаются в различных стереоизомерных формах.</p>

Claims (16)

Формула (I) охватывает все такие формы. Изобретение также относится к применению смесей соединений формулы (I), например смесей двух диастереоизомеров, например, в соотношении 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:10, 1:100 или 1:1000. Особое предпочтение отдают в данном случае смесям стереоизомерных соединений. Выше и ниже радикалы R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y, A, Alk, Cyc, Ar, Het1, Het2 и Hal принимают значения, указанные для формулы (I), если явно не указано иное. Если отдельные радикалы встречаются несколько раз в рамках соединения или радикала, радикалы принимают независимо друг от друга указанные значения, если явно не указано иное. Например, радикалы YY в радикале R1, в котором они встречаются несколько раз, являются одинаковыми или разными, но предпочтительно в каждом случае их выбирают независимо друг от друга из значений, указанных выше и/или ниже (например, метила и/или этила), если явно не указано иное. Термины, использованные в данном случае для определения соединений, обычно базируются на правилах организации ИЮПАК для химических соединений, в частности органических соединений. Термины для пояснения вышеупомянутых соединений изобретения всегда имеют следующие значения, если не указано иное в описании или формуле изобретения. Термин "незамещенный" означает, что радикал, группа или осадок не несет заместителей. Термин "замещенный" означает, что радикал, группа или осадок несет один или несколько заместителей. "Алкил" или "А" в смысле изобретения означает нециклический, насыщенный или ненасыщенный углеводородный радикал, который является неразветвленным (линейным) или разветвленным и предпочтительно содержит 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 атомов С, т.е. С1-10алканил. Примерами алкильных радикалов являются метил, этил, пропил, изопропил, 1,1-, 1,2- или 2,2-диметилпропил, 1-этилпропил, 1этил-1-метилпропил, 1-этил-2-метилпропил, 1,1,2- или 1,2,2-триметилпропил, бутил, изобутил, вторбутил, трет-бутил, 1-, 2- или 3-метилбутил, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутил, 1- или 2этилбутил, пентил, изопентил, неопентил, трет-пентил, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентил, гексил. В предпочтительном варианте осуществления изобретения "А" означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где независимо друг от друга 1-7 атомов Н могут быть заменены на Hal и/или независимо друг от друга одна или две смежные СН2 группы могут быть заменены на -СН=СН- и/или -С^С-группу. "А" особенно предпочтительно означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-6 атомов С, где 1-5 атомов Н могут быть заменены независимо друг от
1. Соединение формулы (I)
в которой R1 означает Y, -Alk-OY или -Alk-NYY;
R2 означает Y, -Alk-NYY, -C(Y)(R6)(R7), -C(Hal)(R )(R ), -SO2-Ar или -POOH-Ar;
R3 означает Н, Hal, CN, -Alk-CN, Het1 или Het2;
R4 означает Y, Cyc, CN, -Alk-CN, -Alk-COOY или -Alk-CO-NYY;
R5 означает Hal, Y, COOY, -CO-NYY, -CO-NY-Alk-OY, -Alk-CO-NYY, -Alk-OY, Ar, Het1 или Het2; R3, R5 вместе также означают -Alk-CO-NY-;
R6 означает Y, -COOY, -CO-NYY, -CO-NY-OY, -CO-NY-C(=NH)-NYY, -CO-NY-Alk-OY, -CO-NYAlk-NYY, -CO-NY-Alk-SO2-NYY, -CO-NY-Alk-Het2 или -CO-NY-O-Alk-CN;
R7 означает Ar, Het1 или -Het1-Het1;
X означает О или Het1;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-10 атомов С, где независимо друг от друга 1-7 атомов Н могут быть заменены на Hal и/или независимо друг от друга одна или две смежные СН2 группы могут быть заменены на -СН=СН- группу;
Alk означает алкилен, содержащий 1-6 атомов С, где независимо друг от друга 1-4 атома Н могут быть заменены на Hal и/или OY;
Cyc означает циклический алкил, содержащий 3-7 атомов С;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN, NYY, Het1, Het2, -Alk-OY, -Alk-NYY, -Alk-Het1 или Alk-Het2;
Het1 означает моно- или бициклический гетероарил, содержащий 2-9 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN или NYY;
Het2 означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 2-7 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и
Hal означает F, Cl, Br или I, и/или его физиологически приемлемые соли.
Ί. Соединение по п.1, которое имеет подформулу (ΙΑ)
в которой R1, R4 означают Y;
R2 означает Y или -CH(R6)(R7);
R5 означает Hal, Y, COOY, Alk-OA или Het2;
R6 означает -CO-NYY, -CO-NY-OY, -CO-NY-C(=NH)-NYY или -СО-NY-Alk-OY;
R7 означает Ar или Het1;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal и/или
ОН;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal;
Het1 означает моно- или бициклический гетероарил, содержащий 2-9 атомов С и 1-3 атома N и/или
- 64 022430
S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN или NYY;
Het2 означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 3-5 атомов С и 1-2 атома N
и/или О, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и Hal означает F, Cl, Br или I,
и/или его физиологически приемлемые соли.
1 мМ пирувата натрия и 2 мМ глутамина при 37°С и 10% СО2. Клетки отделили из основания сосудов для культивирования с помощью трипсина/ЭДТК, отцентрифугировали в пробирке для центрифуги и переносили в свежую среду. Плотность клеток была последовательно определена. 50000 клеток на выемку высевали в 96-луночном планшете для культивирования клеток в 0,1 мл питательной среды и культивировали в течение ночи. На следующий день 10 мкМ блеомицина и тестируемые вещества в свежей
- 62 022430
питательной среде добавляли к клеткам и культивировали в течение последующих 6 ч. После лизиса клеток фосфотреонин 68 CHK2 киназы был обнаружены в лизатах с помощью фосфо-СНК2 (Thr68)специфической системы выявления ELISA (Каталог № 7037, Cell Signaling Technologies, США). Цветовая реакция ELISA была измерена спектрофотометрически при 450 нм. Исчезновение нестимулированого контроля (контроль растворителем без блеомицина) был вычтен из показателей снижения в лечебных группах. Контроли, обработанные блеомицином, были установлены в значении, равном 100%, и все остальные показатели снижения были определены исходя из этого. IC50 значения были определены с помощью статистической программы GraphPad Prism statistics program (GraphPad Software, США) или Assay Explorer (Symyx Technologies Inc., США).
№ Структурная формула Название 1C» [м к Μ] 91 f νΛ?ν \ 2-[1-(4-Циано-2-фтор-фенил)-7-метокси-3метил-ЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]2-фенил-ацетамид 0.1 0.5
Пример 14. Фармацевтические композиции.
Пример А. Флаконы для инъекций.
Значение рН раствора 100 г активного соединения в соответствии с изобретением и 5 г Na2HPO4 в 3 л бидистиллированной воды устанавливали на 6,8, используя 2н. соляную кислоту, стерилизовали фильтрацией, переносили во флаконы для инъекций, лиофилизировали в стерильных условиях и запечатывали в стерильных условиях. Каждый флакон для инъекций содержал 5 мг активного соединения в соответствии с изобретением.
Пример В. Суппозитории.
Смесь 20 г активного соединения в соответствии с изобретением расплавляли с 100 г соевого лецитина и 1400 г масла какао, разливали в формы и позволяли охладиться. Каждый суппозиторий содержал 20 мг активного соединения в соответствии с изобретением.
Пример С. Раствор.
Раствор приготовляли из 1 г активного соединения в соответствии с изобретением, 9,38 г NaH2PO4-2H2G, 28,48 г Na2HPO4-12H2O и 0,1 г бензалконийхлорида в 940 мл бидистиллированной воды. Значение рН устанавливали на 6,8 и объем раствора доводили до 1 л и стерилизовали путем облучения. Этот раствор может использоваться в форме глазных капель.
Пример D. Мазь.
500 мг активного соединения в соответствии с изобретением смешивали с 99,5 г вазелина в асептических условиях.
Пример Е. Таблетки.
Смесь 1 кг активного соединения в соответствии с изобретением, 4 кг лактозы, 1,2 кг картофельного крахмала, 0,2 кг талька и 0,1 кг стеарата магния спрессовывали обычным способом с получением таблеток таким образом, чтобы каждая таблетка содержала 10 мг активного соединения в соответствии с изобретением.
Пример F. Драже.
Таблетки спрессовывали аналогично примеру Е и затем покрывали обычным способом покрытием из сахарозы, картофельного крахмала, талька, трагаканта и красителя.
Пример G. Капсулы.
1-[4-(4-этилпиперазин-1 -ил)фенил] -7,8-диметокси-3 -метил-3Н-пиразоло [3,4-
30 мг 1-бром-7,8-диметокси-3-метил-3H-пиразоло[3,4-с]хинолина (93 мкмоль) растворяли в 1,0 мл диоксана под аргоном. Последовательно добавляли 5,2 мг KOH (93 мкмоль), 83 мг трет-бутил 4-[4-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборонал-2-ил)фенил]пиперазин-1-карбоксилат (214 мкмоль), 10,4 мг транс-бис-(трициклогексилфосфин)палладий(П) дихлорида (14 мкмоль) и 50 мкл воды. Реакционную суспензию последовательно нагревали при 110°С (микроволновая печь) в течение 90 мин. Смесь последовательно вливали в воду, перемешивали в течение 15 мин и полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием. Остаток на фильтре затем обрабатывали в 2,5 мл муравьиной кислоты при комнатной температуре в течение 18 ч, последовательно разбавляли водой и экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические фазы промывали водой, сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Осадок очищали хроматографией (рВЭЖХ, градиент растворителей воды/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты) и фракции продукта лиофилизировали, получая 22 мг 7,8-диметокси-3-метил-1-(4-пиперазин-1-ил)фенил)-3H-пиразоло[3,4-с]хинолина (55 мкмоль) в виде твердого вещества.
МС: 404,1 (М+Н+). ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,19 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли).
28 мг 7,8-диметокси-3-метил-1-(4-пиперазин-1-ил)фенил)-3H-пиразоло[3,4-с]хинолина (70 мкмоль) (пробел) в 3,0 мл безводного Ν,Ν-диметилформамида 19 мг карбоната калия (136 мкмоль) и 6 мкл йодистого этила (74 мкмоль) добавляли при комнатной температуре. Реакционную смесь последовательно перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Когда реакция завершилась, смесь вливали в воду и экстрагировали дважды этилацетатом. Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, фильтровали и упаривали досуха в вакууме. Осадок лиофилизировали из воды/ацетонитрила, получая 6,6 мг целевого соединения 1-[4-(4-этилпиперазин-1-ил)фенил]-7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4с]хинолина (15,3 ммоль) в виде твердого вещества.
МС: 432,2 (М+Н+). ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,35 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли).
Соединения, которые получены в соответствии с методом синтеза из примера 8, показаны в табл. 9.
- 58 022430
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
Таблица 9
№ Структурная формула Название Анализ 1С50 днкПК[мкМ] 75 ci ΤίΓ/’ 1-[4-(4-Этилпилеразин1-ил)фенил]-7,8диметокси-З-метил-ЗНп и разоло[3,4-с]хинол и н (Пример 8) 0.1 -0.5 76 1 -(2-Фторфенил)-7,8диметокси-З-метил-ЗНлиразоло[3,4-с]хинолин МС: 338.2 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.48 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) <0.1
Соединения следующих структурных формул (табл. 9а) могут быть методически получены в соответствии с методами синтеза для примера 8, начиная с соединения формулы 3-2.
Таблица 9а
Соединения формул (I) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ 80 9 о УТ? \ 3-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)-2фторбензонитрил МС: 439.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.49 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 81 А НфС \ 6-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)-1,3-дигидроиндол2-он МС: 451.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.34 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 82 I о о \ 5-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-З Нпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ΗΗ)-2-φτορ-Ν-(2гидроксиэтил)бензамцд МС: 501.2 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.20 (этилацетат/эта нол 8:1, объемные доли) 83 2^ О \ [4-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1ил )фен ил]ацетон итрил МС: 435.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.44 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 84 А о \ 3-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил)-2-фторбензойная кислота МС: 458.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.44 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли)
- 59 022430
85 9 > N-M о У/ к -Ογ-Ц hVAi \ 8-Бензилокси-7метокси-З-метил-1 -[3(1 Н-тетразол-5ил)фенил]-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин МС: 464.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.20 (дихлорметан/этано л 5:1, объемные доли) 86 Я·,. ijTA \ 2-[3-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил)фенил]ацетамид МС: 453.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.58 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 87 нфЛ1 \ 3-(8-Бензилокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)-14-метил бензамид МС: 453.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.42 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли)
Соединение следующей структурной формулы (табл. 9b) может методически быть получено методами синтеза для примеров 1, 8 и 9, начиная с соединения формулы 3-2.
Таблица 9b
Соединение формулы (I) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ 1С50 ДНКПК[мкМ] 88 н N-N V-NH \ 7-Метокси-3-метил-8(1 Н-пиразол-4-ил)-1 -[4(2Н-пиразол-3ил)фенил]-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин МС: 422.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf=0.40 (дихлорметан/этанол 6:1, объемные доли) <0.1
Пример 9. ил)бензонитрила
Синтез 3 -фтор-4-(7-метокси-3 -метил-8-хинолин-3 -ил-3Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-1-
192 мг 3 -фтор-4-(8-гидрокси-7 -метокси-3 -метил-3H-пиразоло [3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (550 мкмоль), 393 мг N-фенилтрифторметансульфонимида (1,10 ммоль) и 374 мкл основания Хюнига (2,20 ммоль) растворяли в 22 мл ^^диметилформамида. Смесь последовательно перемешивали при
- 60 022430
комнатной температуре в течение 30 мин. Для выделения продукта реакции смесь вливали в 100 мл воды и перемешивали в течение последующих 30 мин. Образовавшийся осадок затем отфильтровывали с отсасыванием и промывали водой. Осадок на фильтре последовательно суспендировали в небольшом количестве 2-пропанола, опять отфильтровывали с отсасыванием и сушили в течение ночи при комнатной
температуре в высоком вакууме, получая 195 мг [1-(4-циано-2-фторфенил)-7-метокси-3-метил-3Нпиразоло[3,4-с]хинолин-8-ил] трифторметансульфоната (406 мкмоль) в виде твердого вещества.
МС: 481,0 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,56 (этилацетат/этанол 2:1, объемные доли).
64 мг [1-(4-циано-2-фторфенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-ил] трифторметансульфоната (133 мкмоль), 272 мг 3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборонал-2-ил)хинолина (1,07 ммоль), 58 мг трикалийфосфата (267 мкмоль) и 30 мг транс-бис-(трициклогексилфосфин)палладий(П) дихлорида (41 мкмоль) растворяли в 3,9 мл бескислородного М,Ы-диметилформамида. Смесь последовательно нагревали при 130°С (микроволновая печь) в течение 90 мин. Реакционную смесь затем фильтровали с отсасыванием, фильтрат разбавляли водой и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Образовавшийся осадок отфильтровывали с отсасыванием и промывали водой. Осадок растворяли в смеси диметилсульфоксида и тетрагидрофурана и хроматографировали (рВЭЖХ, градиент растворителей воды/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты), получая после лиофилизации 28 мг целевого соединения 3-фтор-4-(7-метокси-3-метил-8хинолин-3-ил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрил (61 мкмоль) в виде лиофилизата.
МС: 460,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,32 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Соединения, которые получены в соответствии с методом синтеза из примера 9, показаны в
табл. 10.
Таблица 10
Соединения формул (I) и (IA)
№ Структурная формула Название Анализ ICso ДНКПК[мкМ] 77 О / Т|Г/* 3-Фтор-4-(7-метокси-3метил-8-пиридин-З-илЗНпиразоло[3,4-с]хинолию 1 -ил)бензонитрил 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ = 9.49 (s, 1Н), 8.65 (s, 1Н), 8.56 (d, »7=4,1, 1Н), 8,16 (dd, »7=9.9, 1.4, 1H), 7.98 (dd, J=7.6, 7.6, 1H), 7.93 -7.84(m, 2H), 7.81 (S, 1H), 7.65 (d, J=3.1, 1H), 7.47 (dd, J=7.7, 4.7,1H), 4.38 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), MC: 410.1 (M+Hf TCX (ВЭТСХ): Rf = 0.30 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 78 VS / \ 3-Фтор-4-(7-метокси-3метил-8-хинолин-З-илЗНпи разоло[3,4-с]хинол и н1 -ил)бензон итри л (Пример 9) <0.1 89 \ 3-Фтор-4-[7-метокси-3метил-8-( 1 Н-пиррол-3ил)-ЗНпиразоло[3,4'С]хинолин1 -ил]бензонитрил MC: 398.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.49 (этилацетат) <0.1
Пример 10. ДНК-ПК/биохимический анализ.
Киназный анализ проводили в 348-луночном микротитрационном, покрытом стрептавидином FlashPlates®. С этой целью 1,5 мкг комплекса ДНК-ПК/белок и 100 нг биотинилированного субстрата,
- 61 022430
такого как, например, PESQEAFADLWKK 6hothh-NH2 ("биотин-ДНК-ПК пептид"), в общем объеме 36,5 мкл (34,25 мМ HEPES/KOH, 7,85 мМ Tris-HCl, 68,5 мМ KCl, 5 мкМ АТФ, 6,85 мМ MrCl2, 0,5 мМ
EDTA, 0,14 мМ EGTA, 0,69 мМ DTT, рН 7,4), инкубировали при комнатной температуре в течение 90 мин с 500 нг ДНК из тимуса теленка, 0,1 мкКи 33Р-АТФ и 1,8% ДМСО на лунку с тестируемым соединением или без него. Реакцию останавливали с использованием 50 мкл/лунку 200 мМ EDTA. После инкубирования в течение дополнительных 30 мин при комнатной температуре жидкость удаляли. Каждую лунку промывали три раза 100 мкл 0,9% раствора хлорида натрия. Неспецифическую реакцию (значение для холостой пробы) определяли с использованием 10 мкМ собственного ингибитора киназы. Измерение радиоактивности проводили с помощью прибора TopCount. Значения IC50 вычисляли в RS1. Литература: Kashishian et al. (2003), Molecular Cancer Therapeutics, 1257.
Пример 11. Клеточное ДНК-ПК фосфорилирование по серину 2056.
НСТ116 клетки культивировали в альфа-MEM среде с 10% эмбриональной телячьей сывороткой, 1 мМ пирувата натрия и 2 мМ глутамина при 37°С и 10% СО2. Клетки отделили из основания сосудов для культивирования с помощью трипсина/ЭДТК, отцентрифугировали в пробирке для центрифуги и переносили в свежую среду. Плотность клеток была последовательно определена. 200000 клеток на выемку высевали в 12-луночном планшете для культивирования клеток в 1 мл питательной среды и культивировали в течение ночи. На следующий день 10 мкМ блеомицина и тестируемые вещества в свежей питательной среде добавляли к клеткам и культивировали в течение последующих 6 ч. Последовательно осуществляли клеточный лизис. Клеточные лизаты были исследованы SDS гелем-электрофорезом полиакриламидов с помощью ДНК-РК-специфических антител (Abcam ab13852: общее ДНК-ПК; ab18192: фосфосерин 2056 ДНК-ПК) и вестерн-блоттинга. Ферментативная реакция была разработана с помощью хемилюминесценции реагента. Хемилюминесценция была записана с помощью системы документации (VersaDocTM, Bio-Rad, США) и оценена денситометрически с помощью инструментов специального программного обеспечения (Quantity One). Сигналы с фосфо-ДНК-ПК-специфическими антителами были стандартизированы к сигналу с антителом против общего белка ДНК-ПК. IC50 значения и процентные данные ингибирования определяли, ссылаясь на уровень сигнала контрольной группы, которая получала блеомицин.
Пример 12. Исследование роста клеточной колонии.
Линию клеток колоректального рака НСТ116 культивировали в альфа-МЕМ среде с 10% эмбриональной телячьей сывороткой, 1 мМ пирувата натрия и 2 мМ глутамина при 37°С и 10% СО2. Клетки отделили из основания сосудов для культивирования с помощью трипсина/ЭДТК, отцентрифугировали в пробирке для центрифуги и переносили в свежую среду. Плотность клеток была последовательно определена. 300 клеток высевали в 6-луночные планшеты для культивирования клеток в 2 мл питательной среды и культивировали в течение ночи. На следующий день клетки обрабатывали тестируемыми веществами за 1 ч до того, как планшеты для культивирования клеток обрабатывали определенными дозами рентгеновских лучей (в общем 0, 2,4, 4,8, 12 Грей; инструмент облучения: Faxitron RX-650; Faxitron X Ray LLC, США). Для того чтобы определить зависимость "доза-эффект", клетки были обработаны различными концентрациями исследуемого вещества. После облучения клетки культивировали в течение последующих 24 ч в присутствии тестируемого вещества, питательная среда была заменена питательной средой без испытуемого вещества и клетки культивировали в течение последующих 6-8 дней. Сформированные клеточные колонии последовательно были окрашены с помощью Кристаллического Фиолетового и подсчитаны в пластинке для счетчика колоний (Gelcount, Oxford Optronics, Великобритания). Кривые зависимости "доза-эффект", в частности значений IC50, были определены с помощью функции адаптации кривой для нелинейной зависимости "доза-эффект".
№ Структурная формула Название 1С50 [мкМ] (4-8 Гр) Показатель значений 1C» С облучением и без 90 J \ 4-(7,8-Диметокси-3метил-ЗНп иразоло[3,4-с]хинол и н1-ил)-3фторбензон итрил 0.1 -0.5 >75
Пример 13. Клеточное CHK2 фосфолирование по треонину 68 (Symyx Technologies Inc., USA). HCT116 клетки культивировали в альфа-MEM среде с 10% эмбриональной телячьей сывороткой,
1,28 г нитрита натрия (18,60 ммоль), растворяли в 2,5 мл воды, добавляли в раствор 2,70 г 3-амино6,7-диметокси-4-метилхинолина (12,39 ммоль) в 90 мл ледяной уксусной кислоты. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Когда реакция завершилась, смесь выпаривали в вакууме. Осадок растворяли в воде, фильтровали и промывали водой. Фильтрат выпаривали досуха в вакууме. Полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием несколько раз через небольшое количество силикагеля для флэш-хроматографии на фритте с циклогексаном/этилацетатом 4:1 (объемные доли) для того, чтобы убрать примеси. Фильтрат удаляли. Осадок на фильтре последовательно промывали этилацетатом/0-10 об.% этанола, и фильтрат упаривали досуха в вакууме, получая 2,29 г 7,8-диметокси3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (чистота 85%, 8,48 ммоль) в виде твердого вещества.
МС: 230,0 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,45 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
500 мг 7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (2,18 ммоль) растворяли в 40 мл воды. 220 мкл брома (4,36 ммоль) последовательно добавляли по каплям при комнатной температуре с отсутствием света. Реакционный раствор затем перемешивали в течение 1 ч. Когда реакция завершилась, смесь упаривали досуха в вакууме, получая 752 мг 1-бром-7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (чистота 85%, 2,07 ммоль) в виде твердого вещества.
МС: 308,0 / 310,0 (М+Н+, распределение монобром изотопов), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,50 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
270 мг карбоната калия (1,95 ммоль) и 78 мкл йодистого метила (1,27 ммоль) добавляли при комнатной температуре в раствор 300 мг 1-бром-7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (972 мкмоль) в 36 мл безводного N.N-диметилформамида. Реакционную смесь последовательно перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Когда реакция завершилась, смесь вливали в 150 мл воды и разбавляли 150 мл этилацетата. Фазы разделяли и водную фазу экстрагировали несколько раз этилацетатом. Объ- 42 022430
единенные органические фазы сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием, фильтрат выпаривали досуха в вакууме, получая 282 мг (876 мкмоль) смеси целевого соединения (Rf = 0,45) и 1-бром-7,8диметокси-2-метил-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолина (Rf = 0,55) в соотношении 3:1. Для очищения региоизомерную смесь растворяли в горячем этилацетате таким образом, чтобы минимального объема растворителя было достаточно для полного растворения. Раствор последовательно медленно охлаждали до 0°С, получая 125 мг осадка чистого 1-бром-7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина. После фильтрации с отсасыванием фильтрат (региоизомерная смесь приблизительно 1:1), выпаривали в вакууме, опять растворяли в горячем этилацетате, и небольшое количество циклогексана добавляли в раствор. После 24 ч полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием, далее получая 31 мг 1-бром-7,8диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолина. Объединенные порции кристаллов сушили в высоком вакууме, получая 156 мг целевого соединения 1-бром-7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4с]хинолина (484 мкмоль) с температурой плавления 235,5°С.
МС: 322,0/324,0 (М+Н+, распределение монобром-изотоп), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,45 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Соединения, которые получены в соответствии с методами синтеза из примеров 1 и 2, показаны в табл. 3.
Таблица 3
Соединения формулы (III)
№ Структурная формула Название Анализ 3-1 s' ТрС 1 -Бром-7,8-диметокси-Зметил-ЗНпиразоло[3,4-с}хинолин МС: 322.0 / 324.0 (М+Н+) ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.45 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 3-2 9, г Xq 8-Бензилокси-1 -бром-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин МС: 398.0/400.0 (М-Ч-Г) ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.62 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли)
Пример 3. Синтез 2-[1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-2(4-фторфенил)ацетамида
97,7 мг 4-(8-гидрокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (296 мкмоль) растворяли в 3,7 мл ИН-диметилфюрмамида. 102 мг карбоната калия (738 мкмоль) и 170 мг 2-бром-2-(4-фторфенил)ацетамида (733 мкмоль) последовательно добавляли. Реакционную смесь перемешивали при 120°С в течение 18 ч. Когда реакция завершилась, смесь вливали в 50 мл воды и экстрагировали трижды этилацетатом (50 мл каждый раз). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали в вакууме. Осадок потом суспендировали в небольшом количестве 2-пропанола, отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме, получая 68 мг 2-[1(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-2-(4-фторфенил)ацетамида (141 мкмоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 249,2°С.
МС: 482,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,31 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Соединения, которые методически получены в соответствии с методом синтеза из примера 3, показаны в табл. 4.
- 43 022430
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
Таблица 4
№ Структурная формула Название Анализ ICSO ДНКПК [мкМ] δ У?' 7 ΤιΓ> \ 2-[1-(4-Цианофенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-илокси]-2-(4фторфенил)ацетамид 1Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ = 9.30 (s, 1Н), 8.08 (d, 7=8.4, 2Н), 7.88 (d, 7=8.4, 2Н), 7.68 (s, 1Н), 7.59 (S, 1Н), 7.49 (s, 1Н), 7.47 - 7.39 (т, 2Н), 7.36 (s, 1Н), 7.18 (d, 7=8.9,1Н), 7.16 (d, 7=8.9,1Н), 5.44 (s, 1Н), 4.30 (s, ЗН), 3.97 (s, ЗН). МС: 482.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R,= 0.31 (этилацетат/этанол 1:1, объемные доли) <0.1 9 Μ-γ (R)-2-[1-(4Цианофенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-илокси]-2-(4фторфенил)ацетамид МС: 482.1 (М+Н+) [□f°D = -184 (с 4 мг/2 мл ТГФ) <0.1 10 и> (S)-2-[1-{4Цианофенил)-7метокси-З-метил-ЗНп и разоло[3,4-с]хинол и н8-илокси]-2-(4фторфенил)ацетамцд МС: 482.1 (М+Н+) [П)2% = +130 (с 4 мг/2 мл ТГФ) <0.1
- 44 022430
1,0 М раствора трехбромистого бора в дихлорметане (38,2 мл, 38,2 ммоль) медленно добавляли по каплям в раствор 3,82 г 4-(8-бензилокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1ил)бензонитрила (9,09 ммоль) в 38 мл трифторуксусной кислоты в атмосфере азоте с охлаждением на водяной бане. Когда добавление завершено, смесь последовательно перемешивали в течение последующих 30 мин. Когда реакция завершилась (ВЭЖХ-МС проверка), реакционную смесь аккуратно добавляли в 800 мл воды и экстрагировали дважды этилацетатом (200 мл каждый раз). Объединенные органические фазы промывали 150 мл воды и 200 мл полунасыщенного раствора NaHCO3, последовательно сушили с использованием Na2SO4 и фильтровали с отсасыванием. Фильтрат упаривали в вакууме, суспендировали в маленьком количестве этанола, отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме, получая 2,86 г целевого соединения 4-(8-гидрокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4с]хинолин-1-ил)бензонитрил (8,66 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 288,9°С.
МС: 331,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,34 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Соединения, полученные в соответствии с примером 1, показаны в табл. 2.
- 40 022430
Таблица 2
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ 1C» ДНКПК [мкМ] 1 н 4-(7,8-Диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)бензонитрил МС: 330.9 (М+Н4), ТСХ (ВЭТСХ): Rf= 0.37 (этилацетат) <0.1 2 CN "чЛи 4-(7,8-Диметокси-3метил-3/7пиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)6ензоннтрил МС: 345.2 (М+Н4), ТСХ (ВЭТСХ): R,= 0.21 (этилацетат) <0.1 3 uQ 2-Бром-4-(7,8диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)бензонитрил МС: 423.0/425.0 (М+Н4), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.44 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 4 CN uQ 4-(7-Г идрокси-8метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)бензонитрил МС: 331.1 (М+Н4), ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.44 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 5 CN 0 ΐ" θ “чХу* 4-(8-Г идрокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)бензонитрил 'Н ЯМР (400 МГц, ДМСО) δ = 9.43 (s, 1Н), 8.09-8.07 (d, J = 8 Hz, 2Н), 7.93 7.91 (d, J = 8 Hz, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 4.33 (s, ЗН), 3.95 (s, ЗН) <0.1 6 сн Г(Г> \ 3-Фтор-4-(8-гидрокси-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-о]хинолин1 -ил)бензонитрил МС: 349.1 (М+Н*), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.33 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 7 CN "^4“ 2-Хлор-4-(7,8диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хиколин1-ил)бензонитрил МС: 365.0 (М+Н*, распределение монохлор изотопов), ТСХ (ВЭТСХ): Ri = 0.49 (этилацетат) <0.1
- 41 022430
Пример 2. Синтез 1-бром-7,8-Диметокси-3-метил-ЗН-пиразоло[3,4-с]хинолина
1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7- или -8-хинолил, 1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5-, -6-, -7или -8-изохинолил, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-3,4-дигидро-2Н-бензо-1,4-оксазинил, 2,3-метилендиоксифенил,
1,2,3,4-тетрагидро-1-, -2-, -3-, -4-, -5- или -6-пиридил, 1-, 2-, 3- или 4-пиперидинил, 2-, 3- или 4-морфолинил, тетрагидро-2-, -3- или -4-пиранил, 1,4-диоксанил, 1,3-диоксан-2-, -4- или -5-ил, гексагидро-1-, -3- или -4-пиридазинил, гексагидро-1-, -2-, -4- или -5-пиримидинил, 1-, 2- или 3-пиперазинил,
1.2.2- триметилпропилен. Примерами пригодных алкенилов являются аллил, винил, пропенил (-СН2СН=СН2; -СН=СН-СН3; -С(=СН2)-СН3), 1-, 2- или 3-бутенил, изобутенил, 2-метил-1- или 2-бутенил,
1.1.1- трифторэтил или бромметил, наиболее предпочтительно метил, этил или трифторметил. Само собой разумеется, что соответствующие значения "А" являются независимыми друг от друга в радикалах формулы в соответствии с изобретением.
"Циклоалкил" или "Cyc" в смысле изобретения означает насыщенные и частично ненасыщенные неароматические циклические углеводородные группы, которые содержат 1-3 колец, которые включают
2 кг активного соединения в соответствии с изобретением помещали в твердые желатиновые капсулы обычным способом таким образом, чтобы каждая капсула содержала 20 мг активного соединения в соответствии с изобретением.
Пример Н. Ампулы.
Раствор 1 кг активного соединения в соответствии с изобретением в 60 л бидистиллированной воды стерилизовали фильтрацией, переносили в ампулы, лиофилизировали в стерильных условиях и запечатывали в стерильных условиях. Каждая ампула содержала 10 мг активного соединения в соответствии с изобретением.
Пример I. Ингаляционный аэрозоль.
2,50 г 4-(8-бензилокси-7-метокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (6,15 ммоль) растворяли в 72 мл N.N-диметилформамида. 1,70 г K2CO3 (12,3 ммоль) и 421 мкл, йодметана (6,76 ммоль) последовательно добавляли при комнатной температуре, реакционную смесь перемешивали в течение 18 ч (ТСХ (ВЭТСХ) мониторинг). Смесь затем добавляли в 500 мл воды и перемешивали в течение 30 мин. Полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием и осуществляли флэш-хроматографию на силикагеле (120 г, градиент растворителей циклогексан/0-100 об.% этилацетат/0-40 об.% этанола). Осадок фракций продукта суспендировали в 2-пропаноле, отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме, получая 1,79 г 4-(8-бензилокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1ил)бензонитрила (4,27 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 230,4°С.
МС: 421,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,44 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
(Примечание: 4-(8-бензилокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрил/4(8-бензилокси-7-метокси-2-метил-2Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрил приблизительно 3:1, пропорции твердого вещества).
3. Соединение по п.1 или 2, выбранное из группы:
- 65 022430
- 66 022430
- 67 022430
- 68 022430
- 69 022430
- 70 022430
- 71 022430
- 72 022430
- 73 022430
- 74 022430
- 75 022430
- 76 022430
- 77 022430
- 78 022430
- 79 022430
72 -V", xx V /// 0 fyV ο Η 73 у/ pH (1 J он L·! О N Н 74 I ΐ °Ύη (XX) ο, V > й 75 лА г о N— О LA Х> --^'N \ 76 \ ο 7^Α°\ 4*
- 80 022430
- 81 022430
- 82 022430
и/или его физиологически приемлемые соли.
3,4-метилендиоксифенил, 2,3-этилендиоксифенил, 3,4-этилендиоксифенил, 3,4-(дифторметилендиокси)фенил, 2,3-дигидробензофуран-5- или 6-ил, 2,3-(2-оксометилендиокси)фенил или также 3,4-дигидро-2Н1,5-бензодиоксепин-6- или -7-ил, 2,3-дигидробензофуранил или 2,3-дигидро-2-оксофуранил.
"Гетероарил" в смысле "Het1" предпочтительно означает моно- или бициклический ароматический гетероцикл, содержащий 2-9 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN, OY, NYY, -NY-COY, COOY, -Alk-OY или -Alk-NYY. Особенно предпочтительно, если "Het1" означает моно- или бициклический гетероарил, содержащий 2-9 атомов С и 1-3 атомов N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN или NYY. "Het1" чрезвычайно предпочтительно означает пиразол, пиррол или тиазол. Само собой разумеется, что соответствующие значения "Het1" являются независимыми друг от друга в радикалах формулы в соответствии с изобретением.
Термин "гетероцикл" в смысле изобретения означает моно- или пол и циклическую систему, содержащую 3-20 атомов в кольце, предпочтительно 3-14 атомов в кольце, особенно предпочтительно 3-10 атомов в кольце, включающий атомы С и 1, 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, в частности азот, кислород и/или серу, где гетероатомы являются одинаковыми или разными. Циклическая система может быть насыщенной или моно- или полиненасыщенной. Термин "гетероарил" включает системы, в которых ароматическое кольцо является частью би- или полициклической насыщенной, частично ненасыщенной и/или ароматической системы, например, когда ароматическое кольцо приконденсировано к "арилу", "циклоалкилу", "гетероарилу" или "гетероциклилу" через любой желаемый член кольца гетероцикла. Присоединение к основной структуре формулы (I) может происходить через любой член кольца гетероцикла. Примерами пригодных гетероциклов являются пирролидинил, тиапирролидинил, пиперидинил, пиперазинил, оксапиперазинил, оксапиперидинил, оксадиазолил, тетрагидрофурил, имидазолидинил, тиазолидинил, тетрагидропиранил, морфолинил, тетрагидротиофенил, дигидропиранил.
3- метил-1-бутенил, 1,3-бутадиенил, 2-метил-1,3-бутадиенил, 2,3-диметил-1,3-бутадиенил, 1-, 2-, 3- или
3-20, предпочтительно 3-12, особенно предпочтительно 3-9 атомов С. Присоединение к основной структуре формулы (I) может происходить через любой член кольца циклоалкильной группы. Примерами пригодного циклоалкила являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил, циклооктил, циклодецил, циклопентенил, циклогексенил и циклооктадиенил.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения "Cyc" означает циклический алкил, содержащий 3-7 атомов С, где 1-4 атома Н могут быть заменены независимо друг от друга на A, Hal и/или OY. Особое предпочтение отдают циклическому алкилу, содержащему 3-6 атомов С.
Основная структура формулы (I) в данном случае означает любую родовую или неродовую структуру, к которой любой радикал в смысле изобретения, такой как, например, Cyc, Ar, Het1 или Het2, может быть присоединен с целью получения соединения формулы (I) в соответствии с изобретением.
Термин "Alk" в смысле изобретения означает неразветвленный или разветвленный алкилен, алкенил или алкинил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов С, т.е. C1-6алкилены, С2-6алкенилы и С2-6алкинилы. Алкенилы содержат по меньшей мере одну С-С двойную связь, а алкинилы содержат по меньшей мере одну С-С тройную связь. Алкинилы могут дополнительно содержать по меньшей мере одну С-С двойную связь. Примерами пригодных алкиленов являются метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен, гексилен, изопропилен, изобутилен, втор-бутилен, 1-, 2- или 3-метилбутилен, 1,1-, 1,2или 2,2-диметилпропилен, 1-этилпропилен, 1-, 2-, 3- или 4-метилпентилен, 1,1-, 1,2-, 1,3-, 2,2-, 2,3- или 3,3-диметилбутилен, 1- или 2-этилбутилен, 1-этил-1-метилпропилен, 1-этил-2-метилпропилен, 1,1,2- или
- 3 022430
друга на Hal. Более особое предпочтение отдают Ц-4алкилу, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal. Ц^алкил этого типа означает, например, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, фторметил, дифторметил, трифторметил, пентафторэтил,
4. Промежуточное соединение формулы (II)
в которой R8 означает CN или =O;
R9 означает NO2 или NYY и
R1, R2, R5 и Y имеют значение, указанное в п.1,
и/или его соли.
4-пиридил, 2-, 4-, 5- или 6-пиримидинил, 1,2,3-триазол-1-, -4- или -5-ил, 1,2,4-триазол-1-, -3- или 5-ил, 1или 5-тетразолил, 1,2,3-оксадиазол-4- или -5-ил, 1,2,4-оксадиазол-3- или -5-ил, 1,3,4-тиадиазол-2- или -5-ил, 1,2,4-тиадиазол-3- или -5-ил, 1,2,3-тиадиазол-4- или -5-ил, 3- или 4-пиридазинил, пиразинил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-индолил, 4- или 5-изоиндолил, 1-, 2-, 4- или 5-бензимидазолил, 1-, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-индазолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензопиразолоил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензоксазолил, 3-, 4-, 5-, 6- или 7-бензизоксазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензотиазолил, 2-, 4-, 5-, 6- или 7-бензизотиазолил, 4-, 5-, 6- или 7-бенз-2,1,3-оксадиазолил, 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хинолил, 1-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-изохинолил, 3-, 4-,
4- пентенил и гексенил. Примерами пригодных алкинилов являются этинил, пропинил (-СН2-С^СН; -CH^CH-CH3), 1-, 2- или 3-бутинил, пентинил, гексинил или пент-3-ен-1-инил, в частности пропинил.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения "Alk" означает алкилен, содержащий 1-6 атомов С, т.е. метилен, этилен, пропилен, бутилен, пентилен или гексилен, где 1-4 атома Н могут быть заменены независимо друг от друга на Hal и/или OY. Особенно предпочтительно, если "Alk" означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal и/или ОН. Отдельные примеры алкила представляют собой метилен, этилен и пропилен. Само собой разумеется, что соответствующие значения "Alk" являются независимыми друг от друга в радикалах формулы в соответствии с изобретением.
Термин "арил", "карбоарил" или "Ar" в смысле изобретения означает моно- или полициклическую ароматическую углеводородную систему, содержащую 3-14, предпочтительно 4-10, особенно предпочтительно 5-8 атомов С, которая необязательно может быть замещенной. Термин "арил" включает системы, в которых ароматическое кольцо является частью би- или полициклической насыщенной, частично ненасыщенный и/или ароматической системы, например, когда ароматическое кольцо приконденсировано к "арилу", "циклоалкилу", "гетероарилу" или "гетероциклилу" через любой желаемый член кольца арильного радикала. Присоединение к основной структуре формулы (I) может происходить через любой член кольца арильной группы. Примерами пригодного "арила" являются фенил, бифенил, нафтил, 1-нафтил, 2-нафтил, антраценил, инданил, инденил, 1,2,3,4-тетрагидронафтил, в частности фенил, о-, мили п-толил, о-, м- или п-этилфенил, о-, м- или п-пропилфенил, о-, м- или п-изопропилфенил, о-, м- или п-трет-бутилфенил, о-, м- или п-трифторметилфенил, о-, м- или п-фторфенил, о-, м- или п-бромфенил, о-, м- или п-хлорфенил, о-, м- или п-гидроксифенил, о-, м- или п-метоксифенил, о-, м- или п-метилсульфонилфенил, о-, м- или п-нитрофенил, о-, м- или п-аминофенил, о-, м- или п-метиламинофенил, о-, м- или п-диметиламинофенил, о-, м- или п-аминосульфонилфенил, о-, м- или п-метиламиносульфонилфенил, о-, м- или п-аминокарбонилфенил, о-, м- или п-карбоксифенил, о-, м- или п-метоксикарбонилфенил, о-, м- или п-этоксикарбонилфенил, о-, м- или п-ацетилфенил, о-, м- или п-формилфенил, о-, м- или п-цианофенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дифторфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дихлорфенил, 2,3-, 2,4-, 2,5-, 2,6-, 3,4- или 3,5-дибромфенил, 2,3,4-, 2,3,5-, 2,3,6-, 2,4,6или 3,4,5-трихлорфенил, п-йодфенил, 4-фтор-3-хлорфенил, 2-фтор-4-бромфенил, 2,5-дифтор-4бромфенил или 2,5-диметил-4-хлорфенил.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения "Ar" означает фенил, который незамещен или монозамещен посредством Hal, A, CN, OY, NYY, -NY-COY, COOY, Het1, Het2, -Alk-OY, -Alk-NYY, -Alk-Het1 или Alk-Het2. Особенно предпочтительно, если "Ar" означает фенил, который явля- 4 022430
ется незамещенным или монозамещенным посредством Hal.
Термин "гетероарил" в смысле изобретения означает 2-15, предпочтительно 2-9, особенно предпочтительно 5-, 6- или 7-членный моно- или полициклический ароматический углеводородный радикал, который содержит по меньшей мере 1, при необходимости также 2, 3, 4 или 5 гетероатомов, в частности азот, кислород и/или серу, где гетероатомы являются одинаковыми или разными. Число атомов азота предпочтительно составляет 0, 1, 2, 3 или 4, а число атомов кислорода и серы составляет независимо друг от друга 0 или 1. Термин "гетероарил" включает системы, в которых ароматическое кольцо является частью би- или полициклической насыщенной, частично ненасыщенной и/или ароматической системы, например, когда ароматическое кольцо приконденсировано к "арилу", "циклоалкилу", "гетероарилу" или "гетероциклилу" через любой желаемый член кольца гетероарильного радикала. Присоединение к основной структуре формулы (I) может происходить через любой член кольца гетероарильной группы при условии, что оно представляется разумным с взгляда на законы химии, причем присоединение через атомы С предпочтительно.
"Гетероарил" означает, независимо от дальнейших замещений, например? 2- или 3-фурил, 2- или 3-тиенил, 1-, 2- или 3-пирролил, 1-, 2-, 4- или 5-имидазолил, 1-, 3-, 4- или 5-пиразолоил, 2-, 4- или
5. Промежуточное соединение по п.4, которое имеет подформулу (IIA)
- 83 022430
в которой R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal; и R5, А, Ar и Hal имеют значение, указанное в п.2,
и/или его соли.
5,80 г 6,7-диметокси-4-метил-3-нитрохинолина (23,36 ммоль) растворяли в 60 мл тетрагидрофурана. 2,90 г палладия на угле (5%, увлажненный водой) последовательно добавляли и суспензию перемешивали турбулентно в атмосфере азота при комнатной температуре в течение 16 ч. Когда реакция завершилась, твердое вещество отфильтровывали с отсасыванием через кизельгур и промывали тетрагидрофураном. Фильтрат упаривали досуха в вакууме, получая 4,05 г 3-амино-6,7-диметокси-4-метилхинолина (18,56 ммоль) в виде твердого вещества.
МС: 219,0 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,35 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
- 5 022430
В одном варианте осуществления изобретения "Het2" означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 2-7 атомов С и 1-4 атома N, О и/или S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А. Предпочтительно, если "Het2" означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 2-5 атомов С и 1-2 атомов N и/или О, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А. Само собой разумеется, что соответствующие значения "Het2" являются независимыми друг от друга в радикалах формулы в соответствии с изобретением.
Термин "галоген", "атом галогена", "галогенный заместитель" или "Hal" в смысле изобретения означает один или несколько атомов фтора (F), брома (Br), хлора (Cl) или йода (I). Термины "дигалоген", "тригалоген" и "пергалоген" относятся к двум, трем или четырем заместителям, где каждый заместитель может быть выбран независимо друг от друга из группы, включающей F, Cl, Br или I. "Галоген" предпочтительно означает F, Cl или Br. F и Cl являются особенно предпочтительными, в частности, если галогены являются заместителями на алкильной (галогеналкил) или алкоксигруппе (например, CF3 и CF3O).
Радикал R1 предпочтительно означает Н или А, особенно предпочтительно А. Радикал R2 предпочтительно означает Н, А или -CH(R6)(R7).
Радикал R3 предпочтительно означает CN или Het1, особенно предпочтительно CN или пиразол, наиболее предпочтительно CN.
Радикал R4 предпочтительно означает Н, А или CN, особенно предпочтительно А.
Радикал R5 предпочтительно означает Н, A, Hal, COOY, Alk-OA, Ar или Het2, особенно предпочтительно Н, Hal, Alk-OA или Het2.
Если радикалы R3 и R5 образуют общий радикал, они предпочтительно расположены на смежных атомах С.
Радикал R6 предпочтительно означает -CO-NYY, -CO-NY-OY, -CO-NY-C(=NH)-NYY или -CO-NY-Alk-OY.
Радикал R7 предпочтительно означает Ar или Het1, особенно предпочтительно Ar.
Радикал X предпочтительно означает О или Het1, особенно предпочтительно О, пиразол или пиррол, более особенно предпочтительно О.
Соответственно, изобретение относится к соединениям формулы (I), в которой по меньшей мере один из вышеуказанных радикалов имеют одно из значений, указанных выше. Подразумевается, что радикалы, которые не отмечены более подробно в рамках варианта осуществления формулы (I), ее подформулы или любого остатка на ней, имеют значение, указанное для формулы (I), как раскрыто в данном документе, с целью достижения цели изобретения. Это означает, что упомянутые радикалы могут принимать все значения, определенные для них, как описано выше или ниже, включая любые предпочтительные варианты осуществления, без ограничения последними, и независимо от их присутствия в другом определенном контексте. Самой собой разумеется, в частности, что каждый вариант осуществления определенного радикала можно комбинировать с каждым вариантом осуществления одного или нескольких других радикалов.
В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются
производные пиразолохинолина подформулы (IE)
в которой R1-R5 и X имеют значение, указанное выше.
В особенно предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются
производные пиразолохинолина подформулы (IA)
5-, 6-, 7- или 8-цинолинил, 2-, 4-, 5-, 6-, 7- или 8-хиназолинил, 5- или 6-хиноксалинил, 2-, 3-, 5-, 6-, 7- или 8-2Н-бензо-1,4-оксазинил, 1,3-бензодиоксол-5-ил, 1,4-бензодиоксан-6-ил, 2,1,3-бензотиадиазол-4- или -5-ил, 2,1,3-бензоксадиазол-5-ил, имидазолил, триазинил, фталазинил, индолизинил, птеридинил, карбазолил, феназинил, феноксазинил, фенотиазинил или акридинил.
Гетероциклические радикалы также могут быть частично или полностью гидрированными. Незамещенный гетероарил может, таким образом, например, также означать 2,3-дигидро-2-, -3-, -4- или -5-фурил, 2,5-дигидро-2-, -3-, -4- или 5-фурил, тетрагидро-2- или -3-фурил, 1,3-диоксолан-4-ил, тетрагидро-2- или -3-тиенил, 2,3-дигидро-1-, -2-, -3-, -4- или -5-пирролил, 2,5-дигидро-1-, -2-, -3-, -4- или -5-пирролил, 1-, 2- или 3-пирролидинил, тетрагидро-1-, -2- или -4-имидазолил, 2,3-дигидро-1-, -2-, -3-, -4или -5-пиразолоил, тетрагидро-1-, -3- или -4-пиразолоил, 1,4-дигидро-1-, -2-, -3- или -4-пиридил,
5-оксазолил, 3-, 4- или 5-изоксазолил, 2-, 4- или 5-тиазолил, 3-, 4- или 5-изотиазолил, 2-, 3- или
6. Промежуточное соединение формулы (III)
в которой R10 означает Н или Hal;
R1, R2, R4 и Hal имеют значение, указанное в п.1, и/или его соли.
- 6 022430
в которой R1, R4 означают Y;
R2 означает Y или -CH(R6)(R7);
R5 означает Hal, Y, COOY, Alk-OA или Het2;
R6 означает -CO-NYY, -CO-NY-OY, -CO-NY-C(=NH)-NYY или -CO-NY-Alk-OY;
R7 означает Ar или Het1;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal и/или
ОН;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal;
Het1 означает моно- или бициклический гетероарил, содержащий 2-9 атомов С и 1-3 атома N и/или
S, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством Hal, A, CN или NYY;
Het2 означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 3-5 атомов С и 1-2 атома N
и/или О, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и Hal означает F, Cl, Br или I,
и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая из смеси во всех соотношениях.
Особое предпочтение отдают соединениям формул (I), (IA) и (IE), которые включены в табл. 1. Таблица 1
Особенно предпочтительные соединения формул (I), (IA) и/или (IE)
7. Промежуточное соединение по п.6, в котором
R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
R10 означает Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal; и R4, А, Ar и Hal имеют значение, указанное в п.2,
и/или его физиологически приемлемые соли.
- 7 022430
8. Способ получения соединения формулы (I) по п.1, его подформул и/или его физиологически приемлемых солей, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения подформулы (ПА)
в которой R1, R2 и R5 имеют значение, указанное в п.5,
в кислой среде с восстановителем и с соединением E-NO2, в котором Е означает элемент из 1 главной
группы, с получением соединения подформулы (IB)
в которой R1, R2 и R5 имеют значение, указанное в п.5; и необязательно
(b') реакция соединения подформулы (IB) с соединением Hal-R4, в котором R4 и Hal имеют значение, указанное в п.1, с получением соединения подформулы (IC)
- 84 022430
в которой R1, R2 и R5 имеют значение, указанное в п.5, и R4 имеет значение, указанное в п.1;
(b") превращение R1, -O-R2, R4, R5 и/или CN группы соединения подформулы (IC) с получением соединения подформулы (IE)
в которой R1, R2, R3, R4, R5 и X имеют значение, указанное в п.1; и/или
(b'") превращение соединений-оснований или кислот соединений подформулы (IE) или подформул
(IB) или (IC) в одну из их физиологически приемлемых солей.
8,82 г 4-(6-бензилокси-7-метокси-3-нитрохинолин-4-карбонил)бензонитрила (20,07 ммоль), 11,21 г железного порошка (200,7 ммоль) и 2,0 М соляной кислоты (22,76 мл) суспендировали в 455 мл метанола (реактор с мешалкой) и нагревали при 66°С в течение 18 ч. Когда реакция завершилась (ТСХ (ВЭТСХ) мониторинг), твердое вещество отфильтровывали через кизельгур с отсасыванием и промывали 500 мл тетрагидрофурана. Фильтрат выпаривали до половины его объема в вакууме. 300 мл полунасыщенного раствора NaCl последовательно добавляли и смесь экстрагировали дважды этилацетатом (300 мл каждый раз). Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Полученный осадок растворяли в этилацетате и фильтровали через небольшое количество силикагеля для флэш-хроматографии. Фильтрат упаривали в вакууме, осадок суспендировали в 70 мл этилацетата и 20 мл этанола, последовательно отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме, получая 5,83 г 4-(3-амино-6-бензилокси-7-метоксихинолин-4карбонил)бензонитрила (14,23 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 192,6°С.
МС: 410,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,36 (этилацетат).
Раствор 483 мг нитрита натрия (6,99 ммоль) в 2,5 мл воды добавляли по каплям в течение 1,5 ч при (-)10°С к суспензии 2,60 г 4-(3-амино-6-бензилокси-7-метокси-хинолин-4-карбонил)бензонитрила (6,35 ммоль) в 50 мл концентрированной соляной кислоты. Смесь последовательно перемешивали в течение последующих 30 мин. Раствор 5,02 г дигидрата хлорида олова(11) (22,23 ммоль) в 3,8 мл концентрированной соляной кислоты затем добавляли при (-)5°С. Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, последовательно разбавляли 500 мл воды, перемешивали в течение 30 мин и фильтровали с отсасыванием. Осадок на фильтре промывали водой и сушили в высоком вакууме, получая 2,42 г 4-(8-бензилокси-7-метокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (5,95 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 222,8°С (разложение).
МС: 407,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,27 (этилацетат).
- 8 022430
9. Способ получения соединения формулы (I) по п.1, его подформул и/или его физиологически приемлемых солей, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения формулы (III)
R3
в которой R1, R2, R4 и R10 имеют значение, указанное в п.7,
с соединением формулы (IV)
D
(IV)
в которой D означает борную кислоту, эфир борной кислоты или оловоорганическое соединение или бортрифторметансульфонат;
R3 и R5 имеют значение, указанное в п.1, с получением соединения подформулы (ID)
- 85 022430
в которой R1, R2 и R4 имеют значение, указанное в п.7, и R3 и R5 имеют значение, указанное в п.1; и необязательно
(b') превращение R1, -O-R2, R3, R4 и/или R5 соединения подформулы (ID) с получением соединения
формулы (I)
в которой R1, R2, R3, R4, R5 и X имеют значение, указанное в п.1; и/или (b") превращение соединений-оснований или кислот соединений формулы (I) или подформулы (ID) в одну из их физиологически приемлемых солей.
9,10 г 6-бензилокси-7-метокси-3-нитро-1Н-хинолин-4-она (27,89 ммоль, cf. Acta Pharmacologica
Sinica (2008), 29(12): 1529) суспендировали в 70 мл сухого Ν,Ν-диметилформамида. 2,82 мл хлорокиси фосфора (30,68 ммоль) последовательно добавляли и смесь нагревали при 100°С в течение 30 мин. После охлаждения реакционную смесь добавляли в 500 мл ледяной воды и перемешивали и смесь перемешивали в течение последующих 30 мин. Образовавшийся осадок отфильтровывали с отсасыванием, промывали водой и сушили в вакууме с выделением 9,57 г 6-бензилокси-4-хлор-7-метокси-3-нитрохинолина (27,76 ммоль) в виде светло-бежевого твердого вещества с температурой плавления 169,6°С.
МС: 345,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,44 (циклогексан/этилацетат 2:1 объемные доли).
В атмосфере азота 3,86 г 4-цианофенилацетонитрила (27,12 ммоль) растворяли в 185 мл сухого тетрагидрофурана. 2,17 г гидрида натрия (60%-ного в парафиновом масле, 54,25 ммоль) последовательно добавляли частями с охлаждением на водяной бане и смесь перемешивали в течение последующих 30 мин. Суспензию 9,35 г 6-бензилокси-4-хлор-7-метокси-3-нитрохинолина (27,12 ммоль) затем добавляли в 50 мл Ν,Ν-диметилформамида при комнатной температуре и смесь последовательно перемешивали в течение последующих 2 ч. Когда реакция завершилась, смесь добавляли в 2,5 л воды и нейтрализовали с помощью 1,0 М соляной кислоты при интенсивном перемешивании. После перемешивания в течение 30 мин суспензию окисляли до приблизительного значения рН 2 и после последующих 30 мин полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием, промывали водой и сушили в течение ночи в высоком вакууме. Сырой продукт последовательно очищали флэш-хроматографией на силикагеле (градиент растворителя циклогексана/0-50 об.% этилацетата), получая 11,31 г 4-[(6-бензилокси-7-метокси-3нитрохинолин-4-ил)цианометил]бензонитрила (25,11 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 147,9°С.
МС: 451,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ) (ВЭТСХ): Rf = 0,68 (циклогексан/этилацетат 1:1 объемные доли). 5,0 г 4-[(6-бензилокси-7-метокси-3-нитрохинолин-4-ил)цианометил]бензонитрила (11,1 ммоль) суспендировали в 250 мл воды и нагревали до кипения. 5,26 г перманганата калия (33,3 ммоль) последовательно добавляли частями при такой скорости, чтобы последующее добавление проводилось только после того, как предыдущее обесцвечивалось (необходимое время: приблизительно 2,5 ч). Смесь затем нагревали с обратным холодильником в течение последующих 2 ч. После охлаждения до приблизительно 60°С смесь фильтровали с отсасыванием. Водный фильтрат удаляли, осадок на фильтре суспендировали четыре раза в N.N-диметилформамиде (250 мл каждый раз) и отфильтровывали с отсасыванием (ТСХ (ВЭТСХ) мониторинг продукта). Комбинированные ДМФА растворы окисляли до приблизительно значения рН 4 с помощью 1,0 М соляной кислоты (изменение цвета) и выпаривали досуха в вакууме, получая масло. Осадок растворяли в 5,0 мл тетрагидрофурана и 100 мл этилацетата последовательно добавляли, смесь перемешивали в течение 30 мин и последовательно охлаждали на водяной бане. Полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме, получая 3,61 г 4-(6-бензилокси-7метокси-3-нитрохинолин-4-карбонил)бензонитрила (8,22 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 262°С.
- 39 022430
МС: 440,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ) (ВЭТСХ): Rf = 0,44 (циклогексан/этилацетат 1:1 объемные доли).
- 9 022430
10. Способ получения промежуточного соединения формулы (II) по п.4 и/или его солей, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения формулы (V)
в которой Hal означает F, Cl, Br или I;
R1, R2 и R9 имеют значение, указанное в п.4,
с соединением формулы (VI)
в которой R5 и R8 имеют значение, указанное в п.4,
с получением соединения формулы (II)
(II)
в которой R1, R2, R5, R8 и R9 имеют значение, указанное в п.4; и необязательно
(b) превращение соединений-оснований или кислот соединений формулы (II) в одну из их солей.
- 10 022430
11. Способ получения промежуточного соединения формулы (III) по п.6, его подформул и/или его
- 86 022430
солей, включающий следующие стадии:
в которой R1 и R2 имеют значение, указанное в п.6,
в кислой среде с соединением E-NO2, в котором Е означает элемент из 1 главной группы, с получением
соединения подформулы (ША)
в которой R1 и R2 имеют значение, указанное в п.6; и необязательно
(Ь1) галогенизация соединения подформулы (ША) с получением соединения подформулы (ШВ)
в которой R1, R2 и Hal имеют значение, указанное в п.6;
(b") реакция соединения формулы (IIIA) или (IIIB) с соединением Hal-R4, в котором R4 и Hal имеют
значение, указанное в п.6, с получением соединения формулы (III)
в которой R1, R2, R4 и R10 имеют значение, указанное в п.6; и/или
(b''') превращение соединений-оснований или кислот соединений формулы (III) в одну из их солей.
11 4-[7-Метокси-3-метил-8(пиридин-4-илметокси)ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрил МС: 421.8 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.41 (этанол) <0.1 12 J 4-[7-Метокси-3-метил-8(пиридин-3-илметокси)ЗНп и разоло[3,4-с]хи нолин1-ил]бензонитрил МС: 421.8 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.49 (этилацетат/ этанол 1:1, объемные доли) <0.1 13 τιΓ> n'sV^L~-N/ 4-[7-Метокси-3-метил-8(пиридин-2-илметокси)ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил]бензонитрил МС: 422.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R( = 0.35 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) >0.5 14 χ9 f '' ' 4-[8-(2Цианобензилокси)-7метокси-З-метил-8-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил]бензонитрил МС: 446.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R( = 0.45 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) 0.1 -0.5 15 4-[8-(4Фторбензилокси)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинол и н1 -ил]бензонитрил МС: 439.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rt = 0.44 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) <0.1 16 I j Хк о Хо \ 4-(8-Дифторметокси-7 метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинол и н1-ил)бензонитрил МС: 381.1 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.37 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) <0.1
- 45 022430
17 L Х·. s'? ά Ό f' о A _ / Λ 4-[8-(Д ифторфен илметокси)-7-метокси-3метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрип МС: 457.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.47 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) 0.1 -0.5 И Метил 1-(4- МС: 497.1 (М+Н)+ Λ f цианофенип)-7- ТСХ (ВЭТСХ): 18 X0' ΪΊ О метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин- Rf = 0.47 (этилацетат/ 0.1 -0.5 LA 8-илокси]-(4- этанол 8:1, u x> фторфенил)ацетат объемные доли) H [1 -(4-Цианофенил)-7 - 19 HO )>>·. ά / О метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-илокси]-(4фторфенил)уксусная МС: 483.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.11 (этанол) <0.1 M ,N \ кислота HO p о [1 -(4-Цианофенил}-7- МС: 451.1 (М+Н)+ 20 o> S’- X метокси-З-метил-ЗНлиразоло[3,4-с]хинолин8ппокси)фенилуксусная ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.20 < 0.1 Cl Xj (этилацетат/ этанол 1:1, X кислота объемные доли) J $ [1 -(4-Цианофенил)-7- МС :471.1 (М+Н)+ ) Λ о метокси-З-метил-ЗН- ТСХ (ВЭТСХ): 21 -T<4 пиразоло[3,4-с]хинолин- Rf = 0.35 <0.1 IX 8-илокси)тиофен-2- (этилацетат/ V X илуксусная кислота этанол 1:1, объемные доли) P / о A 2-[1-(4-Цианофенил)-7- 22 У X A T I метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-илокси]-2фенилпропановая МС: 479.2 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.44 (этанол) >0.5 -N \ кислота
- 46 022430
23 F 241 -(4-Циано-2-фторфенил)-7-метокси-3метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-илокси]-2-(4фторфенил)ацетамид МС: 457.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.27 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) <0.1 24 1-(4-Цианофенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-ил толуол-4сульфонат МС: 485.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf=0.64 (этилацетат/этанол 1:1, объемные доли) 0.1 -0.5 25 9 , HQ—P=0 Г 1-(4-Цианофенил)-7метокси-З'Метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин8-ил фенилфосфонат МС: 471.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.68 (этанол) 0.1-0.5 26 F' ^F ^Лу 4-(7-Дифторметокси-8метокси-З-метил-ЗНпиразоло!3,4-с]хинолин1-ил)бензонитрил МС: 381.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rt = 0.64 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) >0.5 27 "W 4-[8-(4-Гидроксиметилбензилокси)-7-метоксиЗ-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил]бензонитрил МС: 451.1 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.34 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 28 9 kX9- 4-[7-Метокси-З-метил-8(З-морфолин-4илметил-бензилокси)ЗНпиразоло[3,4-с)хинолин1 -ил]бензонитрил МС: 520.2 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.36 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) 0.1 -0.5
- 47 022430
29 О 4-[7-Метокси-3-метил-8(6-пиразол-1илпиридин-3илметокси)-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрил МС: 488.2 {M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.36 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) >0.5 Ά V о 31 тл 4-[7-Метокси-3-метил-8- МС: 461.1 (М+Н)+ (1Н-пирроло[2,3- ТСХ (ВЭТСХ): 30 о Ь]пиридин-5илметокси)-ЗН- Rf = 0.27 (этилацетат/этанол 0.1 -0.5 О, пиразоло[3,4-с]хинолин- 8:1, объемные V > л 1-ил]бензонитрил доли) V О $ 4-[7-Метокси-3-метил-8(4-1,2,4-триазол-1- МС: 488.2 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = η 23 31 <%А О илбензилокси)-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/эта нол >0.5 LX V 3 1 -ил]бензонитрил доли) MHj τΊ 4-[8-(3-Аминометил- МС: 450.5 (М+Н)+ ч.. j / бензилокси)-7-метокси- ТСХ (ВЭТСХ): 32 З-метил-ЗН- Rf = 0.23 (метанол/ 0.1 -0.5 -As пиразоло[3,4-с!хинолин- Основание |l 1 ΤιΓ 1-ил]бензонитрил Хюнига) 99:1, kJ > "Μ \ хлоргидрат объемные доли) 33 A АЛ M f о А \ 4-[8-(2-Аминопиридин4-илметокси)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинол и н1-ил]бензонитрил МС: 437.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf= 0.13 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 34 Ά о 4-[7-Метокси-3-метил-8(тиофен-2-илметокси)ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин- МС: 427.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.43 (этилацетат/этанол <0.1 1-ил]бензонитрил доли)
- 48 022430
ft о Ά T 4-[7-Метокси-3-метил-8(тиофен-3-ил метокси)- МС: 427.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0 41 35 | о \ ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрил (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) <0.1 МС. 505.0/507.0 т ft 4-[8-(4-Бромтиофен-2- (М+Н)+ к илметокси)-7-метокси- ТСХ (ВЭТСХ): 36 З-метил-ЗН- Rf = 0.56 <0.1 Τι пиразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/ ΊΟ 'Λ 1 -ил]бензонитрил этанол 8:1, объемные доли) ft 4-[8-(Бензо[Ь]тиофен-2илметокси)-7-метокси- МС: 477.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.52 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) 37 лк и о > З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрил >0.5 Ύϊ 4-[1-(4-Цианофенил)-7- МС: 447.1 (М+Н)+ τ / метокси-З-метил-ЗН- ТСХ (ВЭТСХ): 38 к О пиразоло[3,4-с]хинолин- Rf = 0.53 0.1-0.5 Λί 8- (этилацетат/ LA ϊτΆ. илоксиметил]пиридин- этанол 8:1, 2-нитрил объемные доли) 39 Λ о $ о 5 л 4-(7-Метокси-3-метил-8(тиазол-2-илметокси)ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил]бензонитрил МС: 428.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.42 (этилацетат/ этанол 8:1, объемные доли) <0.1
Синтез 4-[8-(2-диметиламиноэтокси)-7-метокси-3 -метил-3Н-пиразоло [3,4-с]хинолин-1 Пример 4.
ил]бензонитрила
132 мг 4-(8-гидрокси-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (398 мкмоль) растворяли в 3,3 мл тетрагидрофурана. 251 мг трифенилфосфина (956 мкмоль) и 56 мкл 2-(диметиламино)этанола (558 мкмоль) последовательно добавляли. 125 мкл диизопропил азодикарбоксилата (637 мкмоль) затем добавляли по каплям при 5°С, охлаждая. Когда добавление завершено, смесь перемешивали при комнатной температуре в течение последующих 2 ч. Реакционный раствор последовательно упаривали досуха в вакууме и осуществляли флэш-хроматографию на силикагеле (градиент растворителей циклогексан/0-100 об.% этилацетата/0-40 об.% этанола), получая после упаривания фракций продукта и сушки в высоком вакууме 81 мг целевого соединения 4-[8-(2-диметиламиноэтокси)-7метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил]бензонитрила (202 мкмоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 212,2°С.
МС: 401,9 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,09 (этилацетат/этанол 1:1, объемные доли).
Соединения, которые методически получены в соответствии с методом синтеза из примера 4, показаны в табл. 5.
- 49 022430
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
Таблица 5
№ Структурная формула Название Анализ ICsQ ДНКПК[мкМ] ! ч f 4-[8-(2-Диметиламино- МС: 401.9 (М+Н)+ о этокси)-7-метокси-3- ТСХ (ВЭТСХ): 40 метил-ЗН- Rf = 0.09 > 0.1 [I I пиразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/этанол С 0“ \ 1-ил]бензонитрил 1:1, объемные доли) / 4-[8-(3-Диметиламино- МС: 464.2 (М+Н)+ бензилокси)-7-метокси- ТСХ (ВЭТСХ): 41 Г? З-метил-ЗН- Rf=0.36 0.1 -0.5 \ί=> п иразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/этанол r> •^Ы 1-ил]бензонитрил 8:1, объемные доли) /Л $ 4-[7-Метокси-3-метил-8- МС: 428.1 (М+Н)+ >> о (тиазол-4-илметокси)- ТСХ (ВЭТСХ): 42 ЗН- Rf=0.37 <0.1 ΓΙ пиразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/этанол А 1 -ил]бензонитри л 8:1, объемные доли) τ 4-[7-Метокси-3-метил-8- МС: 428.1 (М+Н)+ с о (тиазол-5-илметокси)- ТСХ (ВЭТСХ): 43 "°"Ai ЗН- Rf = 0.37 <0.1 kA пиразол о[3,4-с]хинолин- (этилацетат/этанол U 6 Y \ 1 -ил]бензонитрил 8:1, объемные доли) 4-{7-Метокси-3-метил-8- МС: 523.2 (M+Hf /А [3-(4-метилпиперазин-1- ТСХ (ВЭТСХ): 44 v? J ил метил)бензилокси]- Rf = 0.10 >0,5 ό ЗН- (дихлор метан/ I I пиразоло[3,4-с]хинолин- этанол 1:1, I 1 XX У л 1-ил}бензонитрил объемные доли) A 4-{7-Метокси-3-метил-8- МС: 518.1 (М+Н)+ $ [3-(2-метилтиазол-4- ТСХ (ВЭТСХ): 45 О ил)бензилокси]-ЗН- Rf = 0.53 0.1-0.5 A пиразоло[3,4-с]хинолин- (этилацетат/этанол UL 1*^ х> 1-ил}бензонитрил 8:1, объемные доли) Y . у 4-[7-(2-Диметиламино- J Y А этокси)-8-метокси-3- МС: 402.2 (М+Н)+ 46 T'l метил-ЗН- ТСХ (ВЭТСХ): >0.5 kA T ГЛ пиразоло[3,4-с]хинолин- Rf = 0.05 (метанол) 1-ил]бензонитрил 47 Λ N-4 у/ о Х> \ 4-[7-(2,3Дигидроксипропокси)-8метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил]бензонитрил МС: 405.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.46 (дихлорметан/этанол 5:1, объемные доли) >0.5
Соединение следующей структурной формулы (табл. 5а) может быть методически получено в соответствии с методами синтеза для примеров 1, 4 и 8, начиная с соединения формулы 3-2.
- 50 022430
Таблица 5а
Соединение формул (I) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ ICeo ДНКПК[мкМ] 79 /=N J \ γ рн Sr о Ϊ|Γ> 7-Метокси-3-метил-1 !4-(2Н-пиразол-3ил)фенил]-8-(тиазол-5илметокси)-ЗНпиразоло[3,4-с]хинол ин МС: 469.0 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.24 (этилацетат/этано л 5:1, объемные доли) <0.1
Пример 5. Синтез 2-[1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-М[2-(4-этилпиперазин-1-ил)этил]-2-(4-фторфенил)ацетамида
260 мг метил [1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-(4фторфенил)ацетата (524 мкмоль) растворяли тетрагидрофуране и метаноле (66 мл каждого). 1,58 мл раствора гидрооксида натрия (1,0 М, 1,58 ммоль) последовательно добавляли по каплям. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Когда реакция завершилась, смесь выпаривали досуха в вакууме и полученный осадок растворяли в 100 мл воды. Смесь аккуратно окисляли до значения рН 5 путем добавления соляной кислоты (1,0 М) и перемешивали в течение последующих 30 мин. Образовавшийся осадок отфильтровывали с отсасыванием и промывали водой. Осадок на фильтре последовательно суспендировали в 5 мл 2-пропанола, опять отфильтровывали с отсасыванием и осадок сушили в течение ночи в высоком вакууме, получая 235 мг [1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-(4-фторфенил)уксусной кислоты (488 мкмоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 211,6°С.
МС: 483,1 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,11 (этанол).
190 мг [1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-8-илокси]-(4фторфенил)уксусной кислоты (394 мкмоль) растворяли в 2,0 мл тионилхлорида и нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. Смесь затем упаривали досуха в вакууме и упаривали дважды с дистиллированным безводным толуолом, получая 195 мг [1-(4-цианофенил)-7-метокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4с]хинолин-8-илокси]-(4-фторфенил)ацетилхлорид (389 мкмоль). 35 мг (69,9 мкмоль) полученного хлорангидрида последовательно растворяли в 2,0 мл безводного N.N-диметилформамида в сухой атмосфере азота, и 22 мг 2-(4-этилпиперазин-1-ил)этиламина (140 мкмоль) добавляли с охлаждением на водяной бане. Реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь затем вливали в 30 мл воды и экстрагировали четыре раза этилацетатом (30 мл каждый раз). Объединенные органические фазы промывали дважды водой (20 мл каждый раз), последовательно сушили с помощью Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и фильтрат упаривали досуха в вакууме. Осадок растворяли в диметилсульфоксиде и осуществляли хроматографию (рВЭЖХ, градиент растворителей вода/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты), получая после лиофилизации 21 мг целевого соединения 2-[1(4-цианофенил)-7-метокси-3 -метил-ЗН-пиразоло [3,4-с]хинолин-8-илокси] ^-[2-(4-этилпиперазин-1 ил)этил]-2-(4-фторфенил)ацетамида (33,8 мкмоль) в виде лиофилизата с диапазоном температуры плавления 110-112°С.
- 51 022430
МС: 622,3 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,40 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли).
Соединения, которые получены в соответствии с методом синтеза из примера 5, показаны в табл. 6. Таблица 6
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ 1Сю днкПК[мкМ] 48 \ 2-[1 -(4-Цианофенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-8илокси)-Л/-(2-{4этилпилеразин-1-ил)этил]2-(4-фторфенил)ацетамид 'Н ЯМР (500 МГц, ДМСО) б = 9.33 (S, 1Н), 8.24 - 8.08 (т, 1Н), 8.05(6, 7=8.3, 2Н), 7.89 (d, 7=8.3, 2Н), 7.71 (s, 1Н), 7.41 (dd, 7=8.6, 5.5, 2Н), 7.34 (s, 1Н), 7.19 (d, 7=8.9, 1H), 7.17 (d, 7=8.8, 1H), 5.53 (s, 1H), 4.31 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 3.40 (bm, 2H), 3.19 (bm, 2H), 3.01 (bm, 4H), 2.81 (bm, 3H), 2,33 (bm, 3H), 1.17 (t. 7=7.3, 3H). MC: 622.3 (M+H)’ TCX (ВЭТСХ): R, = 0.40 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли) 0.1 -0.5 49 у ; чГ> ычАу 2-[1 -(4-Циан о-фенил )-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с)хинолин-8илокси]-Л/-(2диметиламиноэтил)-2-(4фторфенил)ацетамид MC: 553.2 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.27 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли) 0.1 - 0.5 50 2-(1 -(4-Циано-фенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразопо[3,4-с]хинолин-8илокси]-2-(4-фтор-фенил)Ь1-(2-пиперазин-1 ипэтил)ацетамид MC; 594.2 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): Rf=0.09 (метанол/основание Хюнига 99:1, объемные доли) >0.5 51 7 Т|Г~% «чАу М-Цианометокси-2-[1-(4цианофенил)-7-метокси-3метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-8илокси]-2-(4фторфенил)ацетамид МС: 539.9 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.49 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) 0.1 -0.5
- 52 022430
52 •"4 и „ 2-[1-(4-Циано-фенил)-7метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинопин-8илокси]-2-(4-фтор-фенил)N-(2сульфамоилэтил)ацетамид МС: 588.9 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.45 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) 0.1 -0.5 о f о 4 0 2-[1 -(4-Циано-фенил)-7метокси-З-метил-ЗН- МС: 497.9 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): R,= 0.24 (этилацетат/этанол 5:1, объемные 53 χ’-γ- Ί о пиразоло[3,4-с]хинолин-8илокси]-2-(4-фтор-фенил)- <0.1 > N-гидрокси-ацетамид доли) 4 М-[2-[1-(4-Циано-фенил)-7- МС: 524.2 (М+Н)* 54 HN О о о метокси-З-метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-8- ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.29 (этанол) <0.1 V Άι /* илокси]-2-(4-фторфенил)ацетил]гуанидин К. d 2-[1 -(4-Циано-фенил)-7- МС: 540.2 (М+Н)* У у / метокси-З-метил-ЗН- ТСХ (ВЭТСХ): 55 о пиразоло[3,4-с]хинолин-8- Rf = 0.28 <0.1 х°- ΊΤ4) илокси]-2-(4-фтор-фенил)- (этилацетат/этанол О, N-(2- 8:1, объемные ο \ метоксиэтил)ацетамид доли)
Пример 6. Синтез 4-(7,8-диметокси-3-этил-ЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила
132 мг 4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (400 мкмоль) растворяли в 5 мл N.N-диметилформамида. 111 мг карбоната калия (800 мкмоль) и 37 мкл йодистого этила (440 мкмоль) последовательно добавляли. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Смесь последовательно вливали в 100 мл воды и экстрагировали дважды этилацетатом (100 мл каждый раз). Объединенные органические фазы промывали один раз 50 мл воды. сушили над Na2SO4. фильтровали с отсасыванием. полученный фильтрат выпаривали досуха в вакууме. Осадок флэш-хроматографировали на силикагеле (градиент растворителей н-гептана/0-100 об.% этилацетата/этанола 0-30 об.%). После упаривания фракций продукта осадок растворяли в небольшом количестве тетрагидрофурана. добавляли 5 мл 2-пропанола и смесь упаривали. Полученный осадок отфильтровывали с отсасыванием и сушили в высоком вакууме. получая 49 мг целевого соединения 4-(7.8-диметокси-3этил-3Н-пиразоло[3.4-с]хинолин-1-ил)бензонитрил (136 ммоль) в виде твердого вещества с температурой плавления 227.4°С.
МС: 359.0 (М+Н+). ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.51 (этилацетат/этанол 8:1. объемные доли).
Соединения. которые получены в соответствии с методом синтеза из примера 6. показаны в табл. 7.
- 53 022430
Соединения формул (I), (ΙΑ) и (IE)
Таблица 7
№ Структурная формула Название Анализ 1Ся> днкПК[мкМ] 56 J" 4-(7,8-ДиметокСи-З-этил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 359.0 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ); R, = 0.51 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1 57 4-(3-Этип-7,8-диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-3фторбензонитрил МС: 376.9 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.62 (дихлорметак/этанол 10:1, объемные доли) 0.1 -0.5 58 Ί 4-(3-Бутил-7,8-диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 387.0 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.42 (этила цетат) >0.5 59 4-(7,8-Диметокси-3-лропил-ЗНлиразоло(3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 372.8 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.34 (этилацетат) 0.1 -0.5 60 λ 4-(3-Изопропил-7,8-диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 373.0 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): Rf=0.35 (этилацетат) 0.1 -0.5 61 j 4-(3-Изобутил-7,8-диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 387.0 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.47 (этилацетат) >0.5 62 νθ_) —С 4-(3-Ци клоп рол ил-7,8-диметоксиЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 372.0 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R,= 0.50 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) 0.1 -0.5 63 J 4-(3-Аллил-7,8-диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хиколин-1 ип)бензонитрил МС: 371,1 (М+Н)4 ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.46 (этилацетат) 0.1-05
- 54 022430
64 Чэ 4-(7,8-Диметокси-3-пиридин-3илметил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин-1 -ип)-3фтор-бензонитрил МС: 439.9 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R( = 0.16 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) >0.5 65 л 1 -(4-Цианофенил )-7,8диметоксипиразоло[3,4-с]хинолин3-карбонитрил МС: 356.1 (М+Н)’ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.70 (этилацетат) 0.1 -0.5 66 N 4-(3-Цианометил-7,8-диметоксиЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-1ил)бензонитрил МС: 369.8 (М+Н/ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.42 (этилацетат) <0.1 67 О- [1 -(4-Цианофенил)-7,8диметоксипиразоло[3,4-с]хинолин3-ил]уксусная кислота МС: 389.1 (М+Н)‘ ТСХ (ВЭТСХ): R,= 0.55 (этанол) 0.1 -0.5 68 —0 2-[1-(4-Цианофенил)-7,8диметоксипиразоло[3,4-с]хинолин3-ил]ацетамид МС: 388.1 (М+Н/ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.36 (этилацетат) 0.1 -0.5 69 о— глУл * '-^f1' ^Я*х 4-(3-Дифторметил-7,8-диметоксиЗК-пиразоло[3,4-с]хинолин-1 ил)бензонитрил МС: 381.1 (M+Hf ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.49 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли) <0.1
- 55 022430
Пример 7А. Синтез 4-(7,8-диметокси-ЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-пирролидин-бензонитрила
90 мг 2-бром-4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (220 мкмоль) растворяли в 3,0 мл N.N-диметилформамида. 1,0 мл пирролидина (12,1 ммоль) и 61 мг карбоната калия (440 мкмоль) последовательно добавляли. Реакционную смесь нагревали при 180°С (микроволновая печь) в течение 20 мин. Для выделения продукта реакции смесь экстрагировали этилацетатом и полунасыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Осадок очищали хроматографией (рВЭЖХ, градиент растворителей вода/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты), получая 23 мг 4-(7,8-диметокси-3Нпиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-пирролидинбензонитрила (58 мкмоль) в виде твердого вещества с
температурой плавления 291°С (разложение).
МС: 400,2 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,41 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Пример 7В. Синтез 4-(7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2метоксиметилбензонитрила.
540 мг 2-бром-4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила (1,32 ммоль) растворяли в 4,0 мл N.N-диметилформамида в защитной газовой атмосфере аргона. 578 мг трикалийфосфата (2,64 ммоль), 67 мг KOH (1,19 ммоль), 9,0 мл 1,2-диметоксиэтана и 50 мкл воды. 942 мкл пинаколового эфира винилбороновой кислоты (5,28 ммоль) и 98 мг транс-бис-(трициклогексилфосфин)палладий(11) дихлорида (132 мкмоль) последовательно добавляли. Полученную суспензию нагревали при 150°С (микроволновая печь) в течение 30 мин. Для выделения продукта реакции смесь экстрагировали этилацетатом и полунасыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Осадок очищали флэх-хроматографией на силикагеле (градиент растворителя циклогексана /0-80 об.% этилацетата), получая 247 мг 4-(7,8-диметокси-3Нпиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-винилбензонитрила (693 мкмоль) в виде твердого вещества.
МС: 357,2 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,47 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
247 мг 4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-винилбензонитрила (693 мкмоль) растворяли в 1,5 мл ^^диметилформамида, 6,0 мл тетрагидрофурана и 9,0 мл этанола и охлаждали до (-)78°С. Реакционный раствор последовательно обрабатывали озоном (поток кислорода генератора озона 50 л/ч) в течение 4 мин, затем пропускали азот (2 мин). После ЖХ-МС проверки (альдегид промежуточного соединения) добавляли 24 мг NaBH4 (624 мкмоль), реакционную смесь перемешивали при (-)78°С в течение 20 мин. Охлаждающую баню последовательно удаляли, чтобы реакционный раствор нагрелся до комнатной температуры. Для очищения, смесь экстрагировали этилацетатом и полунасыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и выпаривали досуха при 40°С в вакууме. Осадок очищали хроматографией (рВЭЖХ, градиент растворителей воды/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты) и фракции продукта лиофилизировали, получая 46 мг 4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-гидроксиметилбензонитрила
- 56 022430
(128 мкмоль) в виде твердого вещества.
МС: 361,4 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,38 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
78 мг 4-(7,8-диметокси-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-гидроксиметилбензонитрил (216 мкмоль) растворяли в 1,0 мл N.N-диметилформамида под аргоном, и последовательно добавляли 34 мкл йодистого метила (541 мкмоль) и 60 мг карбоната калия (433 мкмоль). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Для очищения смесь экстрагировали этилацетатом и полунасыщенным раствором хлористого натрия. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Осадок очищали хроматографией (рВЭЖХ, градиент растворителей воды/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты) и фракции продукта лиофилизировали, получая 41 мг 4-(7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2гидроксиметилбензонитрила (110 мкмоль) в виде твердого вещества.
МС: 375,2 (М+Н+).
17 мг 4-(7,8-диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-гидроксиметилбензонитрила (44 мкмоль) растворяли в 2,1 мл N.N-диметилформамида под аргоном и последовательно добавляли 8,2 мкл йодистого метила (131 мкмоль) и 2,4 мг гидрида натрия (95%, 96 мкмоль). Реакционный раствор перемешивали при 0°С в течение 2 ч. После добавления небольшого количества воды смесь экстрагировали этилацетатом и полунасыщенным раствором хлористого натрия для выделения продукта реакции. Органическую фазу сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха при 40°С в вакууме. Осадок очищали хроматографией (рВЭЖХ, градиент растворителей воды/1-30 об.% ацетонитрила, 0,1 об.% муравьиной кислоты) и фракции продукта лиофилизировали, получая 4 мг 4-(7,8диметокси-3-метил-3Н-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)-2-метоксиметилбензонитрила (10,3 мкмоль) в виде бесцветного твердого вещества.
МС: 389,2 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,41 (этилацетат/этанол 8:1, объемные доли).
Соединения, которые получены в соответствии с методами синтеза из примера 7А и 7В, показаны в табл. 8.
Таблица 8
Соединения формул (I), (IA) и (IE)
№ Структурная формула Название Анализ 1Сю ДНКПК[мкМ] 70 Му 4-(7,8-Диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)-2-пирролидин-1ил-бензонитрил (Пример 7А) <0.1 71 Т|сС ч-чА-,/ \ 4-(7,8-Диметокси-3метил-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1 -ил)-2-метоксиметилбензонитрил (Пример 7В) <0.1 72 2-Циано-5-(7,8диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил (метиловый эфир бензойной кислоты МС: 389.1 (М+Н)* ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.56 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) <0.1 73 О о \ 2-Циано-5-(7,8диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с)хинолин1-ил)бензойная кислота МС: 375.1 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0.30 (этилацетат/этанол 5:1, объемные доли) <0.1 74 if ИгО му 5-(7,8-Диметокси-ЗНпиразоло[3,4-с]хинолин1-ил)бифенил-2карбонитрил МС; 407.4 (М+Н)+ ТСХ (ВЭТСХ): R, = 0.24 (этилацетат) > 0.5
- 57 022430
Пример 8. Синтез с]хинолина
- 11 022430
12. Применение соединения по одному из пп.1-3 и/или его физиологически приемлемых солей для ингибирования серин/треонин-протеинкиназ.
- 12 022430
26 IL /Я s' "ί Ό ό 5 \ НО. Λ Ύ / 27 ο ]( 3 ^Ν \ и > 28 ? f ΙίΊ ό Τ^4 ο \ ? 29 ό /ΟίΑ J Ο μ V 5 ^•Ν \
13. Применение по меньшей мере одного соединения по одному из пп.1-3 и/или его физиологически приемлемых солей для сенсибилизации раковых клеток к противораковым препаратам и/или ионизирующему излучению при условии, что сенсибилизация не происходит in vivo в теле человека.
- 13 022430
14. Лекарственное средство, обладающее ингибирующей активностью в отношении серин/треонинпротеинкиназ, включающее по меньшей мере одно соединение по одному из пп.1-3 и/или его физиологически приемлемые соли.
14 г активного соединения в соответствии с изобретением растворяли в 10 л изотонического раствора NaCl и раствор помещали в стандартные коммерчески доступные емкости для аэрозолей с насосным механизмом. Раствор можно впрыскивать в рот и нос. Одно впрыскивание аэрозоля (приблизительно 0,1 мл) соответствовало дозе приблизительно 0,14 мг.
- 63 022430
- 14 022430
15. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении серин/треонин-протеинкиназ, включающая в качестве активного соединения эффективное количество по меньшей мере одного соединения по одному из пп.1-3 и/или его физиологически приемлемых солей вместе с фармацевтически переносимыми вспомогательными средствами.
15,35 мл Zn(CH3)2(1-2 М в толуоле, 18,43 ммоль) и 2,28 г Pd(dppf)Cl2 (2,92 ммоль) добавляли в раствор 7,5 г 4-хлор-6,7-диметокси-3-нитрохинолина (27,92 ммоль) в 200 мл безводного и бескислородного диоксана (предварительная обработка: газообразный азот пропускается в течение 30 мин). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 8 ч, получая раствор. После охлаждения до комнатной температуры медленно добавляли 65 мл воды и смесь экстрагировали 60 мл этилацетата. После разделения органическую фазу промывали небольшим количеством соляной кислоты (1,0 М, 5 мл). Водную фазу экстрагировали трижды этилацетатом (60 мл каждый раз). Объединенные органические фазы сушили над Na2SO4, фильтровали с отсасыванием и упаривали досуха в вакууме. Осадок очищали флэш-хроматографией на силикагеле (растворитель циклогексан/этилацетат 2:1, объемные доли), получая 5,82 г 6,7-диметокси-4метил-3-нитрохинолина (23,44 ммоль) в виде твердого вещества.
МС: 249,0 (М+Н+), ТСХ (ВЭТСХ): Rf = 0,45 (циклогексан/этилацетат 1:1, объемные доли).
- 15 022430
- 16 022430
- 17 022430
48 чк ί о V 0 А> к.» 0 If 49 у Τι О [I XX л Z N \ F О А f 50 0 yS о LA Ои \ / N=- d °’У- г f 51 0 Т о Ха А А \
- 18 022430
52 °ΐ о τιΓ> "Αν 53 / °ΐ θ ТТЛ Ν<Ρ·ν \ 54 Α ΥιΓ% Άν 55 А л °ο\ Ο ΤΓ> Άϊ \ 56 ιαΡν<Ά"νζ А
- 19 022430
- 20 022430
- 21 022430
67 J тТ? он 68 у НН, 69 о— Г^р~°\ ’Г^О^ 70 (ιΓ> к*Лн' н 71 Τ'!) мчЛ-г/ \
- 22 022430
72 jl "JL/ к 73 С/ '™ Ό7 74 0— 75 r о TipT \ 76 SiT> 77 О / XX/
- 23 022430
- 24 022430
- 25 022430
88 Η Ν-Ν Ο /=*N yNH О \n N \ Окис Η N ο m 89 'Τι 0 Λ |Ι I Г F 'τί "'-'τ "V Η N \ ,N III 0 (l 90 ΊιΊ y=\ Ok / F Μ Ά \ ΛΛ π2γ Ρ j 91 0 η 0 vS LX Г SF vkl I I N '"N \
Соединения формулы (I) и ее подформулы, а также исходные вещества для их получения получают методами, сами по себе известными, как описано в литературе (например, в стандартных работах, таких как Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie [Методы органической химии], Georg-Thieme-Verlag, Штутгарт) и/или методами, известными специалисту в данной области техники, и при реакционных условиях, которые известны и пригодны для упомянутых реакций. Также можно применять варианты, которые сами по себе известны и не упомянуты здесь более подробно.
В зависимости от применяемых условий время протекания реакций находится в диапазоне от нескольких минут до 14 дней, реакционная температура находится между -15 и 150°С, обычно между 10 и 100°С, особенно предпочтительно между 20 и 70°С.
Реакцию проводят в инертном растворителе и обычно в присутствии связывающего кислоту агента, предпочтительно органического основания, такого как DIPEA, триэтиламин, диметиланилин, пиридин, хинолин, пиперидин или диэтаноламин. Также может быть благоприятным добавление гидроксида щелочного металла или щелочно-земельного металла, карбоната или бикарбоната или другой соли слабой кислоты и щелочного или щелочно-земельного металла, предпочтительно калия, натрия, кальция или цезия. Пригодными основаниями являются оксиды металлов, такие как, например, оксид алюминия, гидроксиды щелочных металлов (включая гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития), гидроксиды щелочно-земельных металлов (например, гидроксид бария и гидроксид кальция) и алкоголяты щелочных металлов (например, этилат калия и пропилат натрия).
Пригодными инертными растворителями являются, среди прочего, углеводороды, такие как гексан, петролейный эфир, бензол, толуол или ксилол; хлорированные углеводороды, такие как трихлорэтилен, 1,2-дихлорэтан, четыреххлористый углерод, хлороформ или дихлорметан; спирты, такие как метанол, этанол, изопропанол, н-пропанол, н-бутанол или трет-бутанол; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран (ТГФ) или диоксан; простые эфиры гликолей, такие как монометиловый или моноэтиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир этиленгликоля (диглим); кетоны, такие как ацетон или бутанон; амиды, такие как ацетамид, диметилацетамид или диметилформамид (ДМФА); нитрилы, такие как ацетонитрил; сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид (ДМСО); сероуглерод; карбоновые кислоты, такие как муравьиная кислота или уксусная кислота; нитросоединения, такие как нитрометан или нитробензол; сложные эфиры, такие как этилацетат, или смеси указанных растворителей. Особое предпочтение отдают простым эфирам гликолей, таким как монометиловый эфир этиленгликоля, ТГФ, дихлорметан и/или ДМФА.
Способ и последующая обработка реакционной смеси в основном осуществляются в виде серий реакций или в непрерывной процедуре реакции. Непрерывная процедура реакции включает в себя, например, реакцию в котлообразном реакторе непрерывного действия с мешалкой, котлообразном каскадном
- 26 022430
реакторе с мешалкой, петлей или реактором поперечного потока, расходомерной трубой или реакцию в микрореакторе. Реакционные смеси необязательно обрабатывали, по мере необходимости, путем фильтрации посредством твердых фаз, хроматографии, разделения между несмешивающимися фазами (например, выделение), адсорбции на твердых носителях, удаления растворителя и/или азеотропных смесей с помощью дистиллирования, селективного дистиллирования, сублимации, кристаллизации, сокристаллизации или нанофильтрации на мембранах.
Соединения формулы (IE) предпочтительно могут быть получены с помощью реакции соединения формулы (IIA) или альтернативно соединения формулы (III). Таким образом, настоящее изобретение также относится к способу получения соединений формулы (IE) и/или их физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения подформулы (ПА)
(ИА)
в которой R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
R5 означает Hal, Y, COOY, Alk-OA или Het2;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal;
Het2 означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 3-5 атомов С и 1-2 атома N
и/или О, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и Hal означает F, Cl, Br или I в кислой среде с восстановителем и с соединением E-NO2, в котором Е
означает элемент из 1 главной группы,
(b') реакция соединений подформулы (IB) с соединением Hal-R4, в котором R4 и Hal имеют значение, указанное выше, с получением соединений подформулы (1C)
в которой R1, R2 и R5 имеют значение, указанное выше в подформуле (IIA), и R4 имеет значение, указанное выше;
(b") превращение R1, -O-R2, R4, R5 и/или CN группы соединений подформулы (IC) с получением соединений формулы (IE)
- 27 022430
в которой R1, R2, R3, R4, R5 и X имеют значение, указанное выше; и/или
(b''') превращение соединений-оснований или кислот соединений формулы (IE) или подформул (IB)
или (IC) в одну из их физиологически приемлемых солей.
Настоящее изобретение также относится к альтернативному способу получения соединений формулы (I), ее подформул и/или их физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения формулы (III)
в которой R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
R4 означает Y;
R10 означает Hal;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal; и Hal означает F, Cl, Br или I,
с соединением формулы (IV)
в которой D означает борную кислоту, эфир борной кислоты, оловоорганическое соединение или бортрифторметансульфонат;
R3 и R5 имеют значение, указанное выше,
с получением соединений подформулы (ID)
в которой R1, R2 и R4 имеют значение, указанное выше в формуле (III); R3 и R5 имеют значение, указанное выше, и необязательно
- 28 022430
(b') превращение R1, -O-R2, R3, R4 и/или R5 соединений подформулы (ID) с получением соединений
формулы (I)
в которой R1, R2, R3, R4, R5 и X имеют значение, указанное выше; и/или (b") превращение соединений-оснований и кислот соединений формулы (I) или подформулы (ID) в одну из их физиологически приемлемых солей.
Изобретение также относится к промежуточным соединениям формулы (II)
в которой R8 означает CN или =O;
R9 означает NO2 или NYY и
R1, R2, R5 и Y имеют значение, указанное выше,
и/или их соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, обеспечиваются промежуточные соединения подформулы (ПА)
в которой R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
R5 означает Hal, Y, COOY, Alk-OA или Het2;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal;
Het2 означает моноциклический насыщенный гетероцикл, содержащий 3-5 атомов С и 1-2 атома N
и/или О, который может быть незамещенным или монозамещенным посредством А; и Hal означает F, Cl, Br или I,
и/или их соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.
- 29 022430
Изобретение также относится к способу получения промежуточных соединений формулы (II) и/или их солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, включающее следующие стадии:
(а) реакция соединения формулы (V)
в которой R1, R2, R9 и Hal имеют значение, указанное выше,
с соединением формулы (VI)
в которой R5 и R8 имеют значение, указанное выше,
с получением соединений формулы (II)
(II)
в которой R1, R2, R5, R8 и R9 имеют значение, указанное выше, и необязательно
(b) превращение соединений-оснований и кислот соединений формулы (II) в одну из их солей.
Кроме того, изобретение относится к промежуточным соединениям формулы (III)
в которой R10 означает Н или Hal и
R1, R2, R4 и Hal имеют значение, указанное выше,
и/или их соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.
В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечиваются промежуточные соединения формулы(Ш) в которой
R1, R2 независимо друг от друга означают А или -Alk-Ar;
R4 означает Y;
R10 означает Hal;
Y означает Н или А;
А означает неразветвленный или разветвленный алкил, содержащий 1-4 атома С, где независимо друг от друга 1-3 атома Н могут быть заменены на Hal;
Alk означает алкилен, содержащий 1-3 атома С, где 1-2 атома Н могут быть заменены на Hal;
Ar означает фенил, который является незамещенным или монозамещенным посредством Hal; и Hal означает F, Cl, Br или I,
и/или их соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях.
- 30 022430
Изобретение также относится к способу получения промежуточных соединений формулы (III), ее подформул и/или их солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, который включает следующие стадии:
(а) реакция соединения формулы (VII)
в которой R1 и R2 имеют значение, указанное выше,
в кислой среде с соединением E-NO2, в котором Е означает элемент из 1 главной группы,
с получением соединений подформулы (ША)
в которой R1 и R2 имеют значение, указанное выше, и необязательно
(Ь1) галогенизация соединений подформулы (ША) с получением соединений подформулы (ШВ)
в которой R1, R2 и Hal имеют значение, указанное выше;
(b") реакция соединений формулы (IIIA) или (IIIB) с соединением Hal-R4, в котором R4 и Hal имеют
значение, указанное выше, с получением соединений формулы (III)
в которой R1, R2, R4 и R10 имеют значение, указанное выше; и/или
(b'") превращение соединений-оснований и кислот соединений формулы (III) в одну из их солей.
Исходные соединения обычно известны. Если они являются новыми, они могут быть получены с помощью способами, которые сами по себе известны. Соединения формул (IV), (V), (VI) и (VII) могут быть получены с помощью известных способов. При желании, исходные вещества могут быть образованы in situ таким образом, что их не выделяют из реакционной смеси, а вместо этого тотчас далее превращают в соединения в соответствии с изобретением. Подобным образом можно проводить реакцию постадийно.
Вышеуказанные соединения в соответствии с изобретением могут применяться в своей заключительной, несолевой форме. С другой стороны, настоящее изобретение также охватывает применение таких соединений в виде их фармацевтически приемлемых солей, которые могут быть получены из разнообразных органических и неорганических кислот и оснований в соответствии с методиками, известными в данной области техники. Фармацевтически приемлемые солевые формы соединений формул (I), (II) и (III) и их подформул получают, главным образом, с использованием обычных способов. В случае если
- 31 022430
соединения содержат карбоксильную группу, то одна из их приемлемых солей может быть образована с помощью реакции соединения с пригодным основанием с получением соответствующей соли присоединения основания. Такими основаниями являются, например, гидроксиды щелочных металлов (например, гидроксид калия, гидроксид натрия и гидроксид лития), гидроксиды щелочно-земельных металлов (например, гидроксид бария и гидроксид кальция), алкоголяты щелочных металлов (например, этилат калия и пропилат натрия) и различные органические основания, такие как пиперидин, диэтаноламин и N-метилглутамин. Основание формул (I), (II) и (III) и их подформул может быть превращено в ассоциативную соль присоединения кислоты с использованием кислоты, например по реакции эквивалентных количеств основания и кислоты в инертном растворителе, таком как, например, этанол, с последующим упариванием. Пригодными кислотами для этой реакции являются, в частности, те кислоты, которые дают физиологически приемлемые соли, такие как, например, галогеноводороды (например, хлороводород, бромоводород или йодоводород), другие минеральные кислоты и их соответствующие соли (например, сульфат, нитрат или фосфат и т.п.), алкил- и моноарилсульфонаты (например, этансульфонат, толуолсульфонат и бензолсульфонат) и другие органические кислоты и их соответствующие соли (например, ацетат, трифторацетат, тартрат, малеат, малеатсукцинат, цитрат, бензоат, салицилат, аскорбат и т.п. Соли с физиологически неприемлемыми кислотами, например пикратами, могут применяться для выделения и/или очистки соединений формулы (I).
Что касается изложенного выше, можно видеть, что выражение "фармацевтически приемлемая соль" в данной связи следует понимать в значении активного соединения, которое включает соединение формулы (I) в форме одной из ее солей, в частности, если эта солевая форма придает улучшенные фармакокинетические свойства активному соединению, по сравнению со свободной формой активного соединения. Фармацевтически приемлемая солевая форма активного соединения также может обеспечивать впервые это активное соединение желаемыми фармакокинетическими свойствами и может даже оказать положительное влияние на фармакодинамику этого активного соединения, что касается его терапевтической эффективности в организме.
Соединения в соответствии с изобретением могут быть хиральными благодаря их молекулярной структуре и могут, соответственно, встречаться в различных энантиомерных формах. Они вследствие этого могут находиться в рацемической или оптически активной форме. Так как фармацевтическая эффективность рацематов или стереоизомеров соединений формулы (I) может отличаться, может быть желательным применение энантиомеров. В этих случаях конечный продукт, или даже промежуточный продукт, может быть разделен на энантиомерные соединения с помощью химических или физических мер, известных специалисту в данной области техники или уже использованных в качестве таковых в синтезе.
Неожиданно было обнаружено, что соединения в соответствии с изобретением вызывают специфическое ингибирование серин/треонин-протеинкиназ. Вследствие этого изобретение также относится к применению соединений формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, для ингибирования серин/треонин-протеинкиназ, предпочтительно ФИКК, особенно предпочтительно ДНК-ПК. Термин "ингибирование" относится к любому снижению активности, которое основано на действии специфических соединений в соответствии с изобретением в том смысле, что последние способны взаимодействовать с целевой молекулой таким образом, что делается возможным распознавание, связывание и блокировка. Соединения отличаются высоким сродством по меньшей мере к одной из серин/треонин протеинкиназ, обеспечивающим надежное связывание и предпочтительно полную блокировку киназной активности. Эти соединения особенно предпочтительно являются моноспецифическими, что гарантирует исключительное и прямое распознавание выбранной киназы. Термин "распознавание" относится в данном случае к любому типу взаимодействия между соединением и указанными целевыми молекулами, в частности ковалентным или нековалентным связям, таким как, например, ковалентная связь, гидрофобные/гидрофильные взаимодействия, силы Ван-дер-Ваальса, притяжение ионов, водородные связи, лиганд/рецепторные взаимодействия, взаимодействия пар оснований нуклеотидов или взаимодействия между эпитопом и сайтом связывания антитела.
Соединения в соответствии с изобретением демонстрируют полезную биологическую активность, которая может быть продемонстрирована в ходе тестов, описанных в данной заявке, таких как, например, ферментные анализы. Измерение киназной активности представляет собой способ, хорошо известный специалисту в данной области техники. Общие тестовые системы для определения киназной активности с использованием субстратов, например гистона (Alessi et al. (1996), FEBS Lett. 399(3): 333) или основного миелинового белка, описаны в литературе (Campos-Gonzalez & Glenney (1992), JBC, 267: 14535). Различные системы для анализа доступны для идентификации ингибиторов киназы. В анализе сцинтилляционной схожести (Sorg et al. (2002), J. Biomolecular Screening, 7: 11) и анализе флэшпланшетов, радиоактивное фосфорилирование белка или пептида в качестве субстрата измеряют с использованием АТФ. В присутствии ингибиторного соединения, выявляется снижение радиоактивного сигнала, или не выявляется никакого сигнала вообще. Кроме того, в качестве аналитических методов полезны методы гомогенного переноса энергии флуоресцентного резонанса с разрешением во времени (HTR-FRET) и флуоресцентной поляризации (FP) (Sills et al. (2002), J. Biomolecular Screening, 191). В
- 32 022430
других нерадиоактивных методах анализа на основе ELISA используются специфические фосфоантитела (фосфо-АТ). Фосфо-АТ связываются только с фосфорилированным субстратом. Это связывание может быть определено с помощью хемолюминисценции с использованием вторичного антиовечьего антитела, конъюгированного с пероксидазой.
Вышеупомянутое применение соединений может иметь место в in vitro или in vivo моделях. Восприимчивость конкретной клетки к обработке соединениями в соответствии с изобретением может быть определена путем тестирования in vitro. Как правило, культуру клеток инкубируют соединением в соответствии с изобретением при различных концентрациях в течение времени, которого достаточно для индуцирования активными агентами некроза клеток или ингибирования пролиферации клеток, жизнеспособности клеток или миграции, обычно в диапазоне между 1 ч и 1 неделей. Для тестирования in vitro могут быть использованы культивируемые клетки из биопсийного образца.
Затем определяют количество клеток, оставшихся после обработки. Применение in vitro имеет место, в частности, на образцах видов млекопитающих, которые страдают от рака, опухолей, метастазов, нарушений ангиогенеза, ретровирусных заболеваний, иммунопатологических заболеваний и/или патогенных процессов старения. Организм "хозяина" или пациента может принадлежать к любому виду млекопитающих, например, приматам, в частности людям, а также грызунам (включая мышей, крыс и хомячков), кроликам, лошадям, коровам, собакам, кошкам и т.д. Животные модели представляют интерес для экспериментальных исследований, обеспечивая модель для лечения заболевания человека.
Тестирование множества специфических соединений позволяет выбрать активное соединение, которое представляется наиболее пригодным для лечения пациента. Дозу in vivo выбранного соединения преимущественно подбирают исходя из восприимчивости киназы и/или тяжести заболевания пациента с учетом данных in vitro, в результате чего терапевтическая эффективность заметно возрастает. Доза варьирует в зависимости от конкретно используемого соединения, конкретного заболевания, состояния пациента и т.д. Терапевтической дозы обычно достаточно для существенного уменьшения популяции нежелательных клеток в целевой ткани, в то время как жизнеспособность пациента сохраняется. Следующая идея изобретения и ее варианты, относящиеся к применению соединений формулы (I) с получением лекарственного средства для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием, являются действенными и могут применяться без ограничения для применения соединений для ингибирования киназной активности, если это представляется подходящим.
Лечение, как правило, продолжают до достижения значительного сокращения, например по меньшей мере около 50% сокращения клеточной нагрузки, и может быть продолжено до тех пор, пока в организме, по существу, не обнаруживаются нежелательные клетки. В тестах этого типа соединения в соответствии с изобретением демонстрируют и вызывают ингибирующее действие, которое, как правило, подтверждается значениями IC50 в пригодном диапазоне, предпочтительно в микромолярном диапазоне и более предпочтительно в наномолярном диапазоне. Киназа ингибируется, в частности, до степени 50%, если концентрация соединений составляет менее чем 1 мкМ, предпочтительно менее чем 0,5 мкМ, особенно предпочтительно менее чем 0,1 мкМ. Эту концентрацию называют значением IC50.
Изобретение также относится к лекарственному средству, включающему по меньшей мере одно соединение формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, включающей в качестве активного соединения эффективное количество по меньшей мере одного соединения формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, вместе с фармацевтически переносимыми вспомогательными средствами.
"Лекарственное средство", "лекарство" и "фармацевтическая композиция" или "фармацевтический состав" в данном случае означает любую композицию, которая может использоваться для профилактики, лечения, борьбы с развитием или дополнительного лечения пациентов, которые, по меньшей мере, временно, демонстрируют патогенное изменение общего состояния или состояния отдельных частей организма, предпочтительно в результате рака, опухолей, метастазов, нарушений ангиогенеза, ретровирусных заболеваний, иммунопатологических заболеваний и/или ускоренных процессов старения, особенно предпочтительно в результате рака, опухолей, метастазов и/или нарушений ангиогенеза.
С целью усиления защитного или лечебного действия соединений в соответствии с изобретением, могут быть добавлены фармацевтически переносимые адъюванты. В целях изобретения любое вещество, которое содействует, усиливает или модифицирует действие соединений в соответствии с изобретением, является "адъювантом". Известными адъювантами являются, например, соединения алюминия, такие как, например, гидроксид алюминия или фосфат алюминия, сапонины, такие как, например, QS 21, мурамил-дипептид или мурамил-трипептид, белки, такие как, например, гамма интерферон или TNF, MF 59, фосфатидилхолин, сквален или полиолы. Совместно применение яичного альбумина в полном адъюванте Фрейнда может подобным образом приводить к повышенному клеточно-опосредованному иммунитету и таким образом поддерживать действие сформированных нейтрализующих антител. Кроме того, ДНК, которая обладает иммуностимулирующим свойством, или которая кодирует белок с адъювантным действием, такой как, например, цитокин, может применяться параллельно или в конструкции.
- 33 022430
Введение фармацевтической композиции в клетку или организм можно провести в соответствии с изобретением любым способом, который обеспечивает контактирование киназ с соединениями, присутствующими в композиции, в результате чего вызывается ответ. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть введена перорально, трансдермально, чресслизисто, трансуретрально, вагинально, ректально, пульмонально, энтерально и/или парентерально. Путь введения выбирают в зависимости от показаний, дозы, подлежащей введению, индивидуально-специфических параметров и т.д. В частности, различные пути введения облегчают сайт-специфическую терапию, что сводит к минимуму побочные действия и снижает дозу активного соединения. Чрезвычайно предпочтительными инъекциями являются внутрикожные, подкожные, внутримышечные или внутривенные инъекции. Введение может осуществляться, например, с помощью так называемых прививочных пистолетов или с помощью шприцев. Кроме того, можно приготовить вещество в виде аэрозоля, который вдыхают организмом, предпочтительно пациентом-человеком.
Лекарственные формы фармацевтической композиции приготовляют соответствующими желаемому типу введения в пригодной дозировке и способом, самим по себе известным, с использованием обычных твердых или жидких носителей и/или разбавителей и обычно используемых вспомогательных средств. Таким образом, фармацевтически приемлемые эксципиенты, известные специалисту в данной области техники, могут в основном формировать часть фармацевтической композиции в соответствии с изобретением, где количество эксципиента - вещества, которое комбинируют с активным соединением с целью приготовления разовой дозы, варьируется в зависимости от представителя, подвергающегося лечению, и пути введения. Такие фармацевтически переносимые добавки включают соли, буфера, наполнители, стабилизаторы, комплексообразующие вещества, антиоксиданты, растворители, связующие вещества, смазывающие вещества, покрытия для таблеток, вкусовые ароматизирующие вещества, красители, консерванты, регуляторы и т.п. Примерами эксципиентов этого типа являются вода, растительные масла, бензиловые спирты, алкиленгликоли, полиэтиленгликоль, триацетат глицерина, желатин, углеводы, такие как, например, лактоза или крахмал, стеарат магния, тальк и вазелин.
Фармацевтический состав может находиться в форме таблетки, таблетки с пленочной оболочкой, драже, пастилки, капсулы, пилюли, порошка, гранул, сиропа, сока, капель, раствора, дисперсии, суспензии, суппозитория, эмульсии, имплантата, крема, геля, мази, пасты, лосьона, сыворотки, масла, спрея, аэрозоля, адгезива, пластыря или повязки. Приготовляемыми пероральными лекарственными формами предпочтительно являются таблетки, таблетки с пленочной оболочкой, драже, пастилки, капсулы, пилюли, порошки, гранулы, сиропы, соки, капли, растворы, дисперсии или суспензии - в том числе в форме депо. Кроме того, следует рассматривать парентеральные формы лекарственных средств, такие как, например, суппозитории, суспензии, эмульсии, имплантаты или растворы, предпочтительно масляные или водные растворы. Для местного применения, активное соединение лекарственного средства вводят в состав обычным способом по меньшей мере с одним фармацевтически приемлемым носителем, таким как, например, микрокристаллическая целлюлоза, и необязательно дополнительными вспомогательными средствами, такими как, например, увлажняющие вещества, с получением твердых составов, которые можно наносить на кожу, таких как, например, кремы, гели, мази, пасты, порошки или эмульсии, или с получением жидких составов, которые можно наносить на кожу, таких как, например, растворы, суспензии, лосьоны, сыворотки, масла, спреи или аэрозоли. Фармацевтическая композиция предпочтительно находится в форме раствора для инъекции. С получением раствора для инъекции можно использовать водную среду, такую как, например, дистиллированная вода или физиологические растворы, где последние включают дополнительные кислые и основные соли. Фармацевтическая композиция также может находиться в виде твердой композиции, например в лиофилизированном состоянии, и может быть позже, перед применением, приготовлена в конечной форме путем добавления растворяющего агента, такого как, например, дистиллированная вода. Специалист в данной области техники знаком с основными принципами приготовления лиофилизатов.
Концентрация активного соединения в составе может составлять от 0,1 до 100 мас.%. Ключевым является то, что фармацевтическая композиция включает в качестве активного соединения эффективное количество соединения вместе с фармацевтически переносимыми вспомогательными средствами. Термины "эффективное количество" или "эффективная доза" используются здесь взаимозаменяемо и означают количество фармацевтического активного соединения, которое имеет профилактически или терапевтически подходящее действие на заболевание или патологическое изменение в клетке, ткани, органе или млекопитающем. "Профилактическое действие" предотвращает появление заболевания или даже заражение патогеном, после проникновения отдельных представителей таким образом, что последующее их распространение значительно уменьшается или они даже полностью деактивируются. "Профилактическое действие" также включает усиление нормальной физиологической функции. Профилактика является целесообразной, в частности, если у отдельного представителя есть предрасположенность к возникновению вышеупомянутых заболеваний, такая как, например, семейный анамнез, генный дефект или недавно перенесенное заболевание. "Терапевтически подходящее действие" освобождает частично или полностью от одного, более чем одного или всех симптомов заболевания или приводит к частичной или полной реверсии одного, более чем одного или всех физиологических или биохимических параметров,
- 34 022430
которые связаны с или причинно участвуют в заболевании или патологическом изменении, в нормальное состояние. Борьба с развитием также считается типом терапевтического лечения, если соединения вводят в определенные промежутки времени, например, для того, чтобы полностью устранить симптомы заболевания. Соответствующая доза или диапазон доз для введения соединений в соответствии с изобретением является достаточно большой(им) для достижения желаемого профилактического или терапевтического эффекта индукции биологического или медицинского ответа. В общем доза варьируется в зависимости от возраста, конституции и пола пациента, но также принимается во внимание и тяжесть заболевания. Само собой разумеется, что конкретная доза, частота и длительность введения, кроме того, зависят от ряда факторов, таких как, например, нацеливающая и связывающая способность соединений, особенности питания отдельного представителя, подвергающегося лечению, тип введения, скорость экскреции и комбинация с другими лекарствами. Индивидуальная доза может быть установлена как в отношении первичного заболевания, так и в связи с возникновением любых осложнений. Точная доза может быть установлена специалистом в данной области техники с помощью известных средств и методов. Эта идея изобретения действенна и может применяться без ограничения к фармацевтической композиции, включающей соединения формулы (I), если это представляется подходящим.
В одном варианте осуществления изобретения, соединения вводят в дозе от 0,01 мг до 1 г на единицу дозирования, предпочтительно от 1 до 700 мг, особенно предпочтительно от 5 до 100 мг. Суточная доза находится, в частности, в диапазоне от 0,02 до 100 мг/кг веса тела.
С целью поддержки лечебного действия фармацевтическая композиция может в одном варианте осуществления изобретения также включать одно или несколько дополнительных активных соединений, причем является возможным одновременное или последовательное введение. Терапевтический эффект фармацевтической композиции в соответствии с изобретением может заключаться, например, в определенных противораковых препаратах, обладающих лучшим действием посредством ингибирования ДНКПК, в виде желаемого побочного действия или в ряде побочных действий этих лекарственных средств, уменьшаемом снижением дозы.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения фармацевтическую композицию в соответствии с изобретением комбинируют с противораковым препаратом. В данном контексте термин "противораковый препарат" относится к любому препарату, который вводят пациенту, имеющему рак, опухоли, метастазы и/или нарушения ангиогенеза, с целью лечения рака. Противораковый препарат особенно предпочтительно выбирают из группы, включающей цитокины, хемокины, проапоптозные агенты, интерфероны, радиоактивные соединения, модуляторы эстрогеновых рецепторов, модуляторы андрогенных рецепторов, модуляторы ретиноидных рецепторов, цитотоксических агентов, цитостатиков, ингибиторов пренил-протеин трансферазы и ингибиторов ангиогенезы или их комбинаций. Предпочтительно противораковый препарат модифицирует, в частности снижает, метаболизм нуклеиновых кислот и/или белков, клеточное деление, репликацию ДНК, биосинтез пуринов, пиримидинов и/или аминокислот, экспрессию генов, процессинг мРНК, синтеза белков, апоптоз или их комбинации.
Изобретение также может быть осуществлено в виде набора, который включает соединения в соответствии с изобретением. Набор состоит из отдельных пакетов (а) эффективного количества соединения формулы (I) и/или его физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, и (b) эффективного количества дополнительного активного соединения. Набор включает пригодные контейнеры, такие как, например, коробочки или картонные коробки, отдельные бутылки, пакеты или ампулы. Набор может, например, включать отдельные ампулы, каждая из которых содержит эффективное количество соединения формулы (I) и/или его фармацевтически применимые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и эффективное количество дополнительного активного соединения лекарственного средства в растворенной или лиофилизированной форме. Набор изобретения также может содержать вкладыш, который содержит письменные инструкции или указывает потребителю на письменные инструкции, которые разъясняют обращение с соединениями изобретения.
В соответствии с изобретением соединения формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, применяют для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием заболеваний, которые вызываются, стимулируются и/или распространяются активностью серин/треонин протеинкиназ. Настоящее изобретение вследствие этого также относится к применению соединений формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, с получением лекарственного средства для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием заболеваний, которые вызываются, стимулируются и/или распространяются активностью серин/треонинпротеинкиназ. В соответствии с изобретением соединения формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, пригодны для применения для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием заболеваний, которые вызываются, стимулируются и/или распространяются активностью серин/треонин-протеинкиназ. Для определения соответствующего пути передачи сигналов и с целью обнаружения взаимодействия между различными путями передачи сигналов, были разработаны пригодные модели или модельные си- 35 022430
стемы, например модели культур клеток (Khwaja et al. (1997), ЕМВО, 16: 2783) и модели трансгенных животных (White et al. (2001), Oncogene, 20: 7064). С целью определения определенных стадий в сигнальном каскаде взаимодействующие соединения могут применяться с целью модулирования сигнала (Stephens et al. (2000), Biochemical., J. 351: 95). Кроме того, соединения в соответствии с изобретением также могут применяться в качестве реагентов для тестирования зависимых от киназ путей передачи сигналов в животных моделях и/или в модели культур клеток или при клинических заболеваниях, упомянутых в этой заявке. Как уже было указано здесь, эти пути передачи сигналов являются важными для различных заболеваний. Соответственно, соединения в соответствии с изобретением полезны для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием заболеваний, которые зависят от путей передачи сигналов с участием серин/треонин протеинкиназ.
В соответствии с изобретением соединения формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, пригодны для применения для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов, нарушений ангиогенеза, ретровирусных заболеваний и/или иммунопатологических заболеваний, в частности рака, опухолей, метастазов и/или нарушений ангиогенеза. В соответствии с изобретением соединения формулы (I) или ее подформул и/или их физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, также пригодны для применения для замедления процессов старения, где замедление имеет место в отношении сравнения продолжительности жизни получающих лечение/обработанных организма "хозяина" или клеток, культур клеток, тканей или органов с соответствующими положительными или отрицательными контролям и/или статистикой. Само собой разумеется, что "хозяин" фармацевтических соединений также включен в объем настоящего изобретения.
Опухоль означает, в частности, опухоль, выбранную из группы заболеваний чешуйчатого эпителия, мочевого пузыря, желудка, почек, головы, шеи, пищевода, шейки матки, щитовидной железы, кишечника, печени, мозга, предстательной железы, мочеполового тракта, лимфатической системы, гортани, легкого, кожи, крови и иммунной системы, и/или рак, выбранный из группы моноцитарного лейкоза, аденокарциномы легкого, мелкоклеточного рака легкого, рака поджелудочной железы, глиобластомы, карциномы кишечника, карциномы молочной железы, острого миелолейкоза, хронического миелолейкоза, острого лимфолейкоза, хронического лимфолейкоза, лимфомы Ходжкина и неходжкинской лимфомы.
Дальнейший вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединениям в соответствии с изобретением в комбинации с лучевой терапией и/или по меньшей мере с одним дополнительным активным соединением, предпочтительно в комбинации с лучевой терапией и/или противораковым препаратом.
Промышленные методы облучения, которые используются клинически, предпочтительно включают фотонное облучение (классическое, электромагнитное излучение рентгеновское излучение/гаммаизлучение), протонное облучение, облучение тяжелыми ионами (ионизированный углерод) и нейтронного облучение, не ограничиваясь ими. Эти лучевые терапии и другие пригодные терапии облучением в смысле изобретения являются известными специалисту в данной области техники, такие как, например, из Herrmann et al. (2006), Klinische Strahlenbiologie [Клиническая Радиационная Биология], Elsevier Мюнхен, 4-е изд., 67-68; Bhide и Nutting (2010), ВМС Medicine, 8: 25; Choi & Hung (2010), Текущие Сведения об Урологии, 11 (3): 172. В качестве наиболее часто применяемого, фотонное облучение было технически усовершенствовано посредством метода IMRT (лучевая терапия с модуляцией интенсивности светового потока) и методами томографической диагностики (трехмерная конформная лучевая терапия) при планировании облучения и осуществления для наиболее точной фокусировки, которая только возможна.
Соединения в соответствии с изобретением демонстрируют синергетическое действие с существующими методами химиотерапии рака и облучения и/или восстанавливают эффективность существующих методов химиотерапии рака и облучения. Синергическое действие ингибирования VEGF в комбинации с лучевой терапией описано в уровне техники (WO 00/61186). Дополнительные активные соединения лекарственного средства особенно предпочтительно представляют собой химиотерапевтические агенты, которые ингибируют ангиогенез и, таким образом, ингибируют рост и распространение опухолевых клеток. Примерами таких агентов являются ингибиторы VEGF рецепторов, включающие рибозимы и антисмысловые агенты, которые направлены на рецепторы VEGF и ангиостатин и эндостатин. Дальнейшие примеры антинеопластичных агентов, которые могут применяться в комбинации с соединениями в соответствии с изобретением, обычно включают алкилирующие агенты, антиметаболиты, эпидофиллотоксины, антинеопластические ферменты, ингибитор топоизомеразы, прокарбазин, митоксантрон или координационные комплексы платины. В другом варианте осуществления противораковый препарат особенно предпочтительно выбирают из группы модулятора эстрогенового рецептора, модулятора андрогенного рецептора, модулятора ретиноидного рецептора, цитотоксического агента, цитостатика, ингибитора пренил-протеин трансферазы и ингибитора ангиогенеза. Кроме того, предыдущая идея изобретения и ее варианты, относящиеся к фармацевтической композиции, являются действенными и могут применяться без ограничения ко второму медицинскому показанию, если это представляется подходящим. Чрезвычайно предпочтительный вариант осуществления охватывает соединения в соответствии с изо- 36 022430
бретением в комбинации с лучевой терапией и/или цитостатиком.
Еще один дальнейший вариант осуществления изобретения относится к применению по меньшей мере одного соединения формулы (I) и/или его физиологически приемлемых солей, таутомеров и/или стереоизомеров, включая их смеси во всех соотношениях, для сенсибилизации раковых клеток к противораковым препаратам и/или ионизирующему излучению, при условии, что сенсибилизация не имеет место in vivo в теле человека. Сенсибилизация предпочтительно имеет место ex vivo или in vitro при введении соединений в клетки, культуры клеток, тканей или органы, которые содержат серин/треонин протеинкиназы. Ex vivo использование применяют, в частности, в случае клеток животного, которые происходят из организма животного, который поражен заболеванием, которое выбрано из группы рака, опухолей, метастазов и/или нарушений ангиогенеза. Клетки, обработанные ex vivo, можно либо продолжать сохранять в культуре для последующих исследований, либо переносить в животное, которое может быть животным - "хозяином", или другим животным. Сенсибилизация ex vivo в соответствии с изобретением является особенно полезной для тестирования специфического действия соединений, так что in vivo доза может быть установлена предварительно соответствующим образом путем оценки таких ex vivo данных. Как результат этого, терапевтический эффект существенно возрастает.
Изобретение, кроме того, раскрывает способ профилактики, лечения и/или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов, нарушений ангиогенеза, ретровирусных заболеваний, иммунопатологических заболеваний и/или процессов старения, в котором эффективное количество по меньшей мере одного соединения в соответствии с изобретением и/или его физиологически приемлемые соли, таутомеры и/или стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, вводят субъекту, получающему лечение. Предпочтительными субъектами в смысле изобретения являются люди или животные, особенно предпочтительно люди. В этом случае специалисту в данной области техники известно, что он может вводить соединения в соответствии с изобретением, которые могут, несомненно, также применяться в виде фармацевтической композиции в соответствии с изобретением, в различных дозах в организм, в частности, пациентам-людям. Эффективное количество и тип введения могут быть определены специалистом в данной области техники с помощью обычных экспериментов. Предыдущая идея изобретения и ее варианты являются действенными и могут применяться без ограничения в способах лечения, если это представляется подходящим.
Все вышеуказанные и дополнительные составные части или компоненты знакомы специалисту в данной области техники, и может проверяться на практике специфический вариант осуществления идеи в соответствии с изобретением в обычных экспериментах. Все документы, приведенные в описании, таким образом, предназначены для включения в полном объеме в раскрытие настоящего изобретения в качестве ссылки.
В рамках изобретения, представленного здесь, новые пиразолохинолиновые соединения формулы (I) обеспечиваются впервые. Соединения в соответствии с изобретением контролируют серин/треонин протеинкиназы, в частности ДНК-ПК, родственно и/или селективно. Соединения формулы (I) и их производные отличаются высокой специфичностью и стабильностью, низкой стоимостью получения и удобством в обращении. Эти свойства служат основой для воспроизводимого образа действия, включая отсутствие перекрестной реактивности, а также надежное и безопасное взаимодействие с соответствующими целевыми структурами. Изобретение также включает применение настоящих пиразолохинолиновых производных для ингибирования, регулирования и/или модуляции сигнального каскада серин/треонин-протеинкиназ, в частности ДНК-ПК, и таким образом предлагает новые инструменты для исследования и/или диагностики.
Кроме того, лекарственные средства и фармацевтические композиции, которые включают вышеуказанные соединения, и применение таких соединений для лечения киназа-промотированных расстройств представляют(ет) весьма перспективный подход для широкого спектра методов лечения, обеспечивающих прямое и немедленное облегчение симптомов, необходимое в случае людей и животных. Для эффективной борьбы с тяжелыми заболеваниями, такими как рак, особенно полезно осуществление монотерапии или комбинации с другими противоопухолевыми терапиями. Ключевое участие ДНК-ПК в процессах восстановления ДНК и очевидность того, что ДНК-ПК ингибиторы позволяют клеткам млекопитающих стать более чувствительными к облучению, делает возможным терапевтическое применение ДНК-ПК или ДНК-ПК/АТМ или ATM-специфических ингибиторов в качестве части лечения, например, солидных раковых опухолей, с помощью лучевой терапии и/или химиотерапии, направленной на ДНКДНР. Соединения формулы (I), их соли, изомеры, таутомеры, энантиомеры, диастереоизомеры, рацематы, производные, пролекарства и/или метаболиты являются эффективными не только в случае вышеуказанных клинических картин заболеваний, но, подобным образом и в диагностике и терапии всех заболеваний, связанных с ДНК-ПК сигнальным каскадом, в частности, что касается ингибирования клеточной пролиферации и миграции. Кроме того, ингибиторы в соответствии с изобретением могут применяться для лечения ретровирусных заболеваний путем подавления ретровирусной интеграции (R. Daniel (1999), Science, 284: 644). Наконец, ингибиторы в соответствии с изобретением могут использоваться в качестве иммуномодуляторов и модуляторов сохранения теломер. Ингибиторы с низкой молекулярной массой применяются отдельно и/или в комбинации с другими мерами лечения, такими как, например, хирурги- 37 022430
ческие вмешательства, иммунотерапия, лучевая терапия и/или химиотерапия. Последняя относится к направленной терапии любым желаемым NME (т.е. NCE и/или NBE) в качестве монотерапии и/или направленной/ненаправленной комбинированной терапии.
Благодаря неожиданно сильному и/или селективному ингибированию ферментов, которые регулируют клеточные процессы через восстановление двухцепочечной ДНК, соединения изобретения могут быть введены в преимущественно низкой дозе, в то время как они позволяют достичь подобной или даже лучшей биологической эффективности по сравнению с менее сильными или менее селективными ингибиторами уровня техники. Сниженная доза также сопровождается снижением или полным устранением медицинских побочных действий. Кроме того, высокоселективное ингибирование соединениями в соответствии с изобретением также отражается снижением нежелательных побочных действий, которые не зависят от дозы.
Само собой разумеется, что данное изобретение не ограничивается конкретными соединениями, фармацевтическими композициями, применениями и способами, описанными здесь, так как такие обстоятельства могут быть различными. Кроме того, само собой разумеется, что терминология, используемая в данном случае, служит исключительно цели описания отдельных вариантов и не предназначена для ограничения объема изобретения. Как используется здесь в описании, в том числе формуле изобретения, словоформы в единственном числе, включают эквивалент и во множественном числе при условии, что в контексте конкретно не указывают на иное. Например, ссылка на "соединение" включает одно соединение или несколько соединений, которые, в свою очередь, могут быть одинаковыми или разными, или ссылка на "способ" включает эквивалентные стадии и способы, которые известны специалисту в данной области техники.
Изобретение разъясняется ниже более подробно со ссылкой на неограничивающие примеры отдельных вариантов осуществления. Примеры должны, в частности, интерпретироваться в качестве не ограничиваемых комбинациями признаков, конкретно проиллюстрированных, а вместо этого иллюстративные признаки могут сами свободно комбинироваться при условии, что достигается цель изобретения.
Выше и ниже все температуры указаны в °С. В следующих примерах "обычное выделение продукта" означает: при необходимости добавляют воду, рН устанавливают, при необходимости, на значения между 2 и 10, в зависимости от характера концевого продукта, смесь экстрагируют этилацетатом или дихлорметаном, фазы разделяют, органическую фазу сушат над сульфатом натрия, упаривают и очищают с помощью хроматографии на силикагеле и/или путем кристаллизации. Значения Rf установлены на силикагеле; элюент: этилацетат/метанол 9:1.
ЯМР (1Н) проводили со следующими параметрами.
Приборы: Bruker Avance DRX 500, Bruker Avance 400, Bruker DPX 300.
Эталон: ТМС.
TD (временной интервал = число точек данных или цифровое разрешение): 65536.
Растворитель: ДМСО d6.
NS (число сканирований): 32.
SF (частота спектрометра = частота передачи): 500 МГц.
ТЕ (температура): 303 КЖХВР-МС проводили со следующими параметрами.
Прибор: Agilent Technologies 1200 series.
Методы: ESI1ROD.M и POLAR.M (3,8 мин, градиент растворителей).
Колонка: ChromolithSpeedROD RP18e50-4,6.
Растворитель: ацетонитрил + 0,05% HCOOH/деионизованная вода + 0,04% HCOOH.
Детектируемая длина волны: 220 нм.
МС тип: API-ES.
- 38 022430
Пример 1. Синтез 4-(8-гидрокси-7-метокси-3-метил-ЗН-пиразоло[3,4-с]хинолин-1-ил)бензонитрила
16. Применение соединения по одному из пп.1-3 и/или его физиологически приемлемых солей для профилактики, лечения и/или борьбы с развитием рака, опухолей, метастазов и/или нарушений ангиогенеза в комбинации с лучевой терапией.
EA201300073A 2010-07-01 2011-06-24 Пиразолохинолины в качестве ингибиторов серин/треонин-протеинкиназ EA022430B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE102010025786A DE102010025786A1 (de) 2010-07-01 2010-07-01 Pyrazolochinoline
PCT/EP2011/003127 WO2012000632A1 (de) 2010-07-01 2011-06-24 Pyrazolochinoline

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201300073A1 EA201300073A1 (ru) 2013-11-29
EA022430B1 true EA022430B1 (ru) 2015-12-30

Family

ID=44627920

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201300073A EA022430B1 (ru) 2010-07-01 2011-06-24 Пиразолохинолины в качестве ингибиторов серин/треонин-протеинкиназ

Country Status (23)

Country Link
US (1) US8802712B2 (ru)
EP (1) EP2588457B1 (ru)
JP (1) JP5411393B2 (ru)
KR (1) KR101921764B1 (ru)
CN (1) CN103080092B (ru)
AU (1) AU2011273968B2 (ru)
BR (1) BR112012033425A2 (ru)
CA (1) CA2804069C (ru)
CY (1) CY1115974T1 (ru)
DE (1) DE102010025786A1 (ru)
DK (1) DK2588457T3 (ru)
EA (1) EA022430B1 (ru)
ES (1) ES2528447T3 (ru)
HK (1) HK1184782A1 (ru)
HR (1) HRP20150030T1 (ru)
IL (1) IL223872A (ru)
MX (1) MX2012014638A (ru)
PL (1) PL2588457T3 (ru)
PT (1) PT2588457E (ru)
RS (1) RS53831B1 (ru)
SG (1) SG186870A1 (ru)
SI (1) SI2588457T1 (ru)
WO (1) WO2012000632A1 (ru)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106977495B (zh) 2012-04-24 2020-08-04 沃泰克斯药物股份有限公司 Dna-pk抑制剂
US9464085B2 (en) * 2012-08-17 2016-10-11 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Inhibitor compounds of phosphodiesterase type 10A
ES2900061T3 (es) 2013-03-12 2022-03-15 Vertex Pharma Inhibidores de DNA-PK
EP3424920B1 (en) 2013-10-17 2020-04-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals of (s)-n-methyl-8-(1-((2'-methyl-[4,5'-bipyrimidin]-6-yl)amino)propan-2-yl)quinoline-4-carboxamide and deuterated derivatives thereof as dna-pk inhibitors
US11110108B2 (en) 2016-09-27 2021-09-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Method for treating cancer using a combination of DNA-damaging agents and DNA-PK inhibitors
US10874670B2 (en) 2017-01-09 2020-12-29 Impact Therapeutics, Inc. Substituted fused heteroaromatic compounds as kinase inhibitors and the use thereof
CN108295070B (zh) * 2018-01-08 2020-08-11 华中农业大学 一种喹啉衍生物在制备肿瘤抑制药物中的用途
EP3980080A1 (en) 2019-06-10 2022-04-13 Sutro Biopharma, Inc. Immunomodulator antibody drug conjugates and uses thereof
WO2020257235A1 (en) * 2019-06-17 2020-12-24 Sutro Biopharma, Inc. 1-(4-(aminomethyl)benzyl)-2-butyl-2h-pyrazolo[3,4-c]quinolin-4-amine derivatives and related compounds as toll-like receptor (tlr) 7/8 agonists, as well as antibody drug conjugates thereof for use in cancer therapy and diagnosis
JP2022550109A (ja) * 2019-09-25 2022-11-30 コリア インスティチュート オブ レディオロジカル アンド メディカル サイエンシズ 新規なトリフルオロメチルフェニルピラゾール誘導体を有効成分として含有する癌の予防または治療用組成物

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006122806A2 (en) * 2005-05-20 2006-11-23 Novartis Ag 1,3-dihydro-imidazo [4,5-c] quinolin-2-ones as lipid kinase inhibitors
WO2009155527A2 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Phosphatidylinositol 3 kinase inhibitors

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2074867T3 (es) 1990-11-06 1995-09-16 Pfizer Derivados de quinazolina para potenciar la actividad antitumoral.
WO2000061186A1 (en) 1999-04-08 2000-10-19 Arch Development Corporation Use of anti-vegf antibody to enhance radiation in cancer therapy
GB0211649D0 (en) * 2002-05-21 2002-07-03 Novartis Ag Organic compounds
CA2532800C (en) * 2003-07-23 2013-06-18 Exelixis, Inc. Anaplastic lymphoma kinase modulators and methods of use
EP1910365A4 (en) * 2005-07-22 2009-07-15 Merck & Co Inc INHIBITORS OF CHECKPOINT KINASES
UY32111A (es) * 2008-09-10 2010-04-30 Alcon Res Ltd Inhibidores heterociclicos de los receptores de histamina para el tratamiento de una enfermedad

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006122806A2 (en) * 2005-05-20 2006-11-23 Novartis Ag 1,3-dihydro-imidazo [4,5-c] quinolin-2-ones as lipid kinase inhibitors
WO2009155527A2 (en) * 2008-06-19 2009-12-23 Progenics Pharmaceuticals, Inc. Phosphatidylinositol 3 kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
AU2011273968A1 (en) 2013-02-14
EP2588457A1 (de) 2013-05-08
CN103080092A (zh) 2013-05-01
CN103080092B (zh) 2014-12-17
CA2804069A1 (en) 2012-01-05
EP2588457B1 (de) 2014-11-05
PL2588457T3 (pl) 2015-04-30
ES2528447T3 (es) 2015-02-10
DE102010025786A1 (de) 2012-01-05
MX2012014638A (es) 2013-02-07
HK1184782A1 (en) 2014-01-30
HRP20150030T1 (hr) 2015-03-13
AU2011273968B2 (en) 2014-11-20
CY1115974T1 (el) 2017-01-25
US20130150359A1 (en) 2013-06-13
SI2588457T1 (sl) 2015-03-31
WO2012000632A1 (de) 2012-01-05
SG186870A1 (en) 2013-02-28
IL223872A (en) 2016-02-29
BR112012033425A2 (pt) 2020-08-18
DK2588457T3 (en) 2015-01-12
KR20130041139A (ko) 2013-04-24
PT2588457E (pt) 2015-02-05
CA2804069C (en) 2018-06-12
RS53831B1 (en) 2015-06-30
JP2013531663A (ja) 2013-08-08
KR101921764B1 (ko) 2018-11-23
EA201300073A1 (ru) 2013-11-29
US8802712B2 (en) 2014-08-12
JP5411393B2 (ja) 2014-02-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101912475B1 (ko) Ｄｎａ-ｐｋ 저해제로서의 이미다조［4,5-ｃ］퀴놀린
US9126952B2 (en) Morpholinylquinazolines
EA022430B1 (ru) Пиразолохинолины в качестве ингибиторов серин/треонин-протеинкиназ
JP6096792B2 (ja) 癌治療における使用のためのモルホリニルベンゾトリアジン
MX2012010555A (es) Ingrediente activo cristalino secado por rociado.

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ MD TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): BY KZ KG TJ