EA016040B1 - Нейропротективное соединение dlhw и его применение - Google Patents

Нейропротективное соединение dlhw и его применение Download PDF

Info

Publication number
EA016040B1
EA016040B1 EA200802273A EA200802273A EA016040B1 EA 016040 B1 EA016040 B1 EA 016040B1 EA 200802273 A EA200802273 A EA 200802273A EA 200802273 A EA200802273 A EA 200802273A EA 016040 B1 EA016040 B1 EA 016040B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
disease
compound
treatment
prevention
analysis
Prior art date
Application number
EA200802273A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200802273A1 (ru
Inventor
Моника Хитцль
Херберт Мосслер
Хайнц Шнайт
Original Assignee
Эвер Нейро Фарма Гмбх
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эвер Нейро Фарма Гмбх filed Critical Эвер Нейро Фарма Гмбх
Publication of EA200802273A1 publication Critical patent/EA200802273A1/ru
Publication of EA016040B1 publication Critical patent/EA016040B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1021—Tetrapeptides with the first amino acid being acidic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению, состоящему из аминокислотной последовательности DLHW.

Description

Настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению и его применению.
Сведения о предшествующем уровне техники
Население в индустриализованных странах быстро стареет из-за большей продолжительности жизни, и возрастающее число людей поражаются нейродегенеративными заболеваниями, что приводит к глобальному распространению данных заболеваний.
Нейродегенеративные заболевания развиваются из-за постепенной и прогрессирующей утраты нервных клеток, приводящей к дисфункции нервной системы, и могут иметь различные причины помимо старения (например, влияние окружающей среды, генетические дефекты). На сегодня известно более 600 неврологических заболеваний.
Основные известные факторы риска нейродегенеративных заболеваний включают определенный генетический полиморфизм и увеличивающийся возраст. Другие возможные причины могут включать пол, плохое образование, состояние эндокринной системы, окислительный стресс, воспаление, инсульт, гипертензию, диабет, курение, травму головы, депрессию, инфекцию, опухоли, дефицит витаминов, состояние иммунной системы и метаболизма и воздействие химикалий. Поскольку патогенез многих этих заболеваний остается неизвестным, может также учитываться роль факторов окружающей среды в развитии этих заболеваний. Обзор нейродегенеративных заболеваний можно найти, например, в №итобедеиетабуе Э1зеазез: №игоЬю1о§у, РаГйодеиез1з аиб ТЪетареибсз (Μ. Ρΐίηΐ Веа1, Ληΐΐιοην Е. Ьаид, аиб Л1Ьег1 С Еибо1рй; СашЬпбде ипуегзйу Ргезз; 2005).
Для лечения нейродегенеративных заболеваний регулярно применяются некоторые медикаменты, включающие одно или более активных соединений, таких как пирацетам, нимотоп, винпоцетин, глиатилин, церебролизин, цитофлавин и т.д. Соединения, известные в данной области техники, имеют различные способы действия. Церебролизин, например, лекарственное соединение, основанное на пептидах, произведенное из очищенных белков мозга животных путем стандартизованного ферментативного разрушения, проявляет активность, подобную фактору роста нервов, в отношении нейронов ганглиев задних корешков спинного мозга, нейротрофные и нейропротективные эффекты.
В предшествующем уровне техники известны некоторые лечебные вещества с нейропротективными свойствами. \УО 01/29067, например, относится к тетрапептиду Е-аланил-Е-глутамил-Е-аспарагил-Епролину, который как биологически активное соединение стимулирует функциональную активность нейронов. Предложено применение тетрапептида Е-Ала-Е-Глу-Е-Асп-Е-Про в медицине для приготовления лекарств, стимулирующих функциональную активность нейронов.
И8 2004/102370 относится к пептидам, включающим основную тетрамерную пептидную структурную единицу Хаа-Хаа-Хаа-Хаа, в которой Хаа в положении 1 представлен Глу или Асп, Хаа в положении 2 представлен любой аминокислотой, Хаа в положении 3 представлен любой аминокислотой, и Хаа в положении 4 представлен Глу или Асп. Указанные пептиды применяются для лечения нейродегенеративных заболеваний и повреждений нервов и описаны как стимуляторы регенерации и выживания аксонов.
Сущность изобретения
Задача настоящего изобретения - предоставить новые соединения для применения в курсе лечения нейродегенеративных заболеваний и для улучшения памяти у здоровых людей.
Поэтому настоящее изобретение относится к нейропротективному соединению, состоящему из аминокислотной последовательности ЭЬН^.
Аббревиатуры для аминокислотных остатков являются обычно используемыми в данной области техники, а именно Ό означает аспарагиновую кислоту (Асп), Ь означает лейцин (Лей), Н означает гистидин (Гис), а означает триптофан (Трп).
Соединение по настоящему изобретению может проявлять нейропротективные и нейротрофные свойства посредством влияния на жизнеспособность нервных клеток. Эти свойства позволяют повысить жизнеспособность нейрональных клеток. Указанное соединения, которое может также быть частью белка, конъюгированным с белком, конъюгированным с другими молекулами и т.д., демонстрирует сходные нейропротективные свойства с другими хорошо известными в данной области техники нейропротективными агентами. Соединение в соответствии с данным изобретением может применяться вместе (например, в одной стандартной лекарственной форме), или параллельно (например, при различных способах и/или местах введения) с другими активными компонентами, или как отдельный активный компонент.
Если соединение по настоящему изобретению является частью или конъюгировано или слито с другой молекулой (например, гликаном), указанное соединение должно экспонироваться на поверхности указанного белка или указанной конъюгированной молекулы, чтобы активировать или инактивировать каскады передачи сигналов. Доступность пептида по настоящему изобретению может определяться вычислительным белковым дизайном или экспериментальными подходами.
Предпочтительными партнерами для конъюгации или слияния соединения настоящего изобретения являются молекулы, которые могут позволить нацеливать соединение в специфический участок организма индивидуума после его введения. Партнерами для слияния могут быть, например, антитела, направленные к конкретным клеткам индивидуума.
- 1 016040
Как применяется здесь, термин нейропротективное соединение или нейропротективная композиция относится к соединению (или к смеси соединений), защищающему нейрональные клетки от токсического вещества, стабилизирующему клеточную мембрану нейрональной клетки и/или помогающему нормализации функций нейрональных клеток. Нейропротективное соединение, таким образом, предотвращает потерю жизнеспособности или функций нейрональных клеток в условиях стресса. Нейропротективная активность может быть определена с помощью анализа клеточных культур (путем измерения жизнеспособности нейрональных клеток, например путем МТТ анализа (Моктапп Т. (1983), 1. 1ттипо1. МеШобк 65: 55-61)).
Соединения из настоящего изобретения проявляют также нейротрофные и/или нейрогенные свойства. Это означает, что соединения изобретения могут также стимулировать рост нейрональных клеток.
Базовая структура соединения в соответствии с настоящим изобретением, образованного аминокислотами, предпочтительно синтезируются химически в соответствии со способами, известными в данной области техники, например способом, разработанным Мегпйе1б е1 а1. (МегпПе1б КВ. (1963) 1. Ат. СНет. Бое. 85, 2149-2154; твердофазный синтез пептидов).
Способ твердофазного синтеза пептидов, введенный Меглйе1б в 1963 г., например, включает присоединение растущей пептидной цепи к твердой подложке. Аминокислота, соответствующая С-концу целевого пептида, ковалентно присоединяется к нерастворимой полимерной подложке (смоле). Следующая аминокислота с защищенной α-аминогруппой активируется и вступает в реакцию с аминокислотой, связанной со смолой до получения аминозащищенного дипептида на смоле. Защитная группа для амина удаляется, и удлинение цепи продолжается с третьей и последующими защищенными аминокислотами. После построения целевой защищенной пептидной цепи ее отделяют от смолы подходящими химическими средствами, высвобождая, таким образом, в раствор неочищенный пептидный продукт (по способам твердофазного синтеза пептидов и другим способам синтеза пептидов см. также Р1е1бк С.В. (еб.). Бойб-Рйаке Рерббе Буп!йек1к ίη Ме1йобк ίη ЕЖУМОБОСУ, уо1. 289, Асабет1с Ргекк, Бап Э1едо (1997); Вобапкку М., Вобапкку А., ТНе ргасбсе оГ рерНбе куп!Нек1к (2пб ебп.), Бргшдег Уег1ад, Вегйп (1995); РешипЦоп М.А., Эипп В.М. (ебк.), РерНбе Буп1Нек1к РгоЮсоК ш Ме1йобк ш Мо1еси1аг Вю1оду, Уо1. 35, Нитапа Ргекк 1пс., То1о\га (1994); Сгап! С.А. (еб.), Буп1Не11с рерНбек: а икег'к дшбе, А.Н. Ргеетапп & Со., Уем Уогк (1992)).
Неорганический катион на С-концевом участке соединения по данному изобретению может быть катионом щелочного металла или щелочно-земельного металла, предпочтительно катионом лития, натрия, калия, магния или кальция.
Эти неорганические катионы регулярно используют для приготовления солей фармацевтически активных субстанций.
Органическим катионом может быть четвертичный аммонийный ион.
Если Ν-концевой участок соединения по данному изобретению включает положительный заряд, указанный заряд может быть предпочтительно компенсирован эквивалентом неорганического или органического аниона. Органический анион может быть, например, ацетат-анионом.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением данного изобретения алкильный остаток включает менее 30, предпочтительно менее 20, более предпочтительно менее 10 атомов углерода.
Жирная кислота, например, этерифицирующая соединение по настоящему изобретению, может менять его физические свойства, приводя к более гидрофобному соединению.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение из формулы (I) может быть повторяющимся звеном высокомолекулярной молекулы. Указанная молекула может включать 2, 3, 4, 5, 6, 10 или более соединений в соответствии с настоящим изобретением. Такая высокомолекулярная молекула может проявлять значительно более высокую эффективность при применении у индивидуума, чем молекула единичного компонента.
Другой аспект настоящего изобретения относится к фармацевтической композиции, включающей соединение в соответствии с настоящим изобретением и дополнительно по крайней мере один фармацевтически пригодный наполнитель и/или носитель.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может быть сформировано в виде фармацевтического препарата, который может вводиться пациенту для профилактики или лечения церебральных заболеваний, в частности нейродегенеративных заболеваний. Фармацевтический препарат может дополнительно включать фармацевтически пригодные наполнители и/или носители. Подходящие наполнители и носители хорошо известны в данной области техники (см., например, НапбЬоок оГ РйагтасеиНса1 Ехс1р1еп1к''' 5‘ь Ебйюп Ьу Раутопб С. Роме, Раи1 1. Бйеккеу, Б1ап С. Омеп (2005), АРйА РиЬйсайопк).
В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция может дополнительно включать по крайней мере один дополнительный фармацевтически активный компонент.
Фармацевтический препарат в соответствии с настоящим изобретением может включать помимо нейропротективного соединения по настоящему изобретению другие активные компоненты, которые могут проявлять сходные свойства при применении у индивидуума или которые могут вызывать другие реакции у пациентов, прошедших лечение.
- 2 016040
Указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент предпочтительно выбирают из группы, состоящей из тетрапептида Ь-аланил-Ь-глутамил-Ь-аспарагил-Ь-пролина (см., например, \νϋ 01/29067) и церебролизина (см., например, ЕР 452299).
В соответствии с настоящим изобретением, например, антиоксиданты, такие как витамины, могут рассматриваться как дальнейшие активные компоненты, поскольку антиоксиданты ингибируют окисление или подавляют реакции, стимулируемые кислородом, свободными радикалами кислорода, реакционноспособными формами кислорода, включая пероксиды. Антиоксиданты, в особенности жирорастворимые антиоксиданты, могут абсорбироваться клеточной мембраной для нейтрализации радикалов кислорода и защищать таким образом мембрану. Антиоксиданты, пригодные в настоящем изобретении, предпочтительно являются антиоксидантными витаминами, которые могут быть выбраны из группы, состоящей из всех форм витамина А, включая ретиналь и 3,4-дидегидроретиналь, все формы каротина, такие как α-каротин, β-каротин, γ-каротин, δ-каротин, все формы витамина С (Ό-аскорбиновую кислоту, Ьаскорбиновую кислоту), все формы токоферола, такие как витамин Е (α-токоферол, 3,4-дигидро-2,5,7,8тетраметил-2-(4,8,12-триметилтридецил)-2Н-1-бензопиран-6-ол), β-токоферол, γ-токоферол, δтокоферол, токохинон, токотриенол и эфиры витамина Е, которые легко подвергаются гидролизу до витамина Е, такие как витамин Е ацетат и витамин Е сукцинат, и фармацевтически пригодные соли витамина Е, такие как витамин Е фосфат, пролекарства витамина А, каротина, витамина С и витамина Е, фармацевтически приемлемые соли витамина А, каротина, витамина С и витамина Е и т. п. и их смесей.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция предназначена для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, трансдермального, парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения.
В зависимости от способа применения фармацевтическая композиция в соответствии с настоящим изобретением может быть сформулирована, например, в виде таблеток, капсул, жидкостей, инфузий и суппозиториев (см., например, РуагтасеиИса1 Еогти1а1юи Осус1ортсп1 оГ Сотроиибк Ьу 8уси Егок)асг (1999), СКС; НапбЬоок оГ РЬагтассибса1 МашГасФгтд Еогти1а1юи8 Ьу 8агГагах К. Νίηζί (2004), СКС.
Соединения предпочтительно включаются в композицию в количестве между 0,1 и 100 мкг/г, предпочтительно от 1 до 80 мкг/г.
Другой аспект настоящего изобретения относится к применению соединения с нейропротективной активностью, включающего молекулу по формуле (I)
Χη-ΟΕΗν-Ут где X и Υ представлены аминокислотными остатками, а п и т - целыми числами от 0 до 3, и как определено выше, для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративного заболевания.
В соответствии с настоящим изобретением все компоненты формулы (I), проявляющие нейропротективную активность, могут применяться для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративных заболеваний.
Нейропротективная активность может быть определена, например, с помощью МТТ теста (Мо§таии Т. (1983), 1. 1шшиио1. Мс1Ьоб8 65: 55-61). МТТ тест является анализом жизнеспособности клеток. В метаболически активных клетках (например, нейрональных клетках), фермент сукцинатдегидрогеназа разрушает МТТ до розово-синих частиц формазана. Все жизнеспособные клетки, обработанные МТТ, становятся розово-синими по цвету. Все обработанные клетки, которые погибли, не способны разрушать МТТ и поэтому их окраска не меняется. Скорость изменения окраски, измеряемая по количеству частиц формазана, может быть измерена посредством считывания поглощения с применением ридера микропланшетов. Жизнеспособность выражают в процентах от контроля.
Если С-концевой участок соединения (I) отрицательно заряжен, указанный заряд может быть компенсирован эквивалентом неорганического или органического катиона или алкильным остатком.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может проявлять нейропротективные и нейротрофные свойства посредством влияния на жизнеспособность нейрональных клеток. Эти свойства позволяют увеличить жизнеспособность нейрональных клеток. Указанное соединение, которое может также быть частью белка, конъюгировано с белком, конъюгировано с другой молекулой и т.д., демонстрирует сходные нейропротективные свойства, как и другие хорошо известные нейропротективные агенты, известные в данной области техники. Соединение в соответствии с настоящим изобретением может применяться совместно (например, в одной стандартной лекарственной форме) или параллельно (например, при различных способах и/или местах введения) с другими активными компонентами, или как отдельный активный компонент.
Если соединение в соответствии с настоящим изобретением является частью белка, или конъюгировано или слито с белком, или конъюгировано с другой молекулой (например, гликаном), указанное соединение должно экспонироваться на поверхности указанного белка или указанной конъюгированной молекулы, чтобы активировать или инактивировать каскад сигнальной трансдукции. Доступность пептида в соответствии с настоящим изобретением может определяться вычислительным белковым дизайном или экспериментальными подходами.
- 3 016040
Предпочтительными конъюгированными или слитыми партнерами соединения из настоящего изобретения являются молекулы, которые могут позволить нацеливать соединение в специфический участок организма индивидуума после введения. Партнерами для слияния могут быть, например, антитела, направленные к конкретным клеткам индивидуума.
Аминокислотные остатки, предпочтительно связываемые с соединением в соответствии с настоящим изобретением, могут быть выбраны из группы из всех известных природных аминокислот (аланина, аргинина, аспарагина, аспарагиновой кислоты, цистеина, глутамина, глутаминовой кислоты, глицина, гистидина, изолейцина, лейцина, лизина, метионина, фенилаланина, пролина, серина, треонина, триптофана, тирозина, валина) или, конечно, из нестандартных аминокислот, таких как селеноцистеин, пирролизин, таурин, САБА (γ-аминомасляная кислота), лантионин, 1-аминоизобутировая кислота, дегидроаланин, дегидроаминомасляная кислота, гидроксипролин и орнитин.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно является неиммуногенным. Термин неиммуногенное соединение, как применяется здесь, относится к молекуле, в частности к соединению, которое, по существу, не вызывает иммунного ответа ίη νίνο, когда применяется у человека или животного. Это свойство молекулы может быть определено способами, известными в данной области техники. Например, если применение молекулы в соответствии с настоящим изобретением у животного (например, кролика, мыши) вызывает у животного существенное повышение антител, направленных против указанной молекулы, указанная молекула считается иммуногенным соединением, если, напротив, нельзя вызвать существенного повышения антител, специфичных к молекуле, при применении указанной молекулы у животных или человека она считается неиммуногенным соединением. Важно, что соединения в соответствии с настоящим изобретением являются неиммуногенными, поскольку иммуногенные соединения в норме элиминируются из организма иммунной системой.
Основная структура соединения в соответствии с настоящим изобретением, которая образована аминокислотами, предпочтительно синтезируется химически в соответствии со способами, известными в данной области техники, например, по способу, разработанному Метпйе1б с1 а1. (Метпйе1б, В.В. (1963) 1. Ат. 8ое. 85, 2149-2154; твердофазный пептидный синтез). Неорганический катион на С-концевом участке соединения в соответствии с настоящим изобретением может быть катионом щелочного металла или щелочно-земельного металла, предпочтительно катионом лития, натрия, калия, магния или кальция.
Эти неорганические катионы регулярно применяются для приготовления солей фармацевтически активных веществ.
Органический катион может быть четвертичным аммонийным ионом.
Если Ν-концевой участок соединения в соответствии с настоящим изобретением включает положительный заряд, указанный заряд может быть предпочтительно компенсирован эквивалентом неорганического или органического аниона. Органический анион может быть, например, ацетат-анионом.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением данного изобретения алкильный остаток включает менее 30, предпочтительно менее 20, более предпочтительно менее 10 атомов углерода.
Жирная кислота, например, этерифицирующая соединение по настоящему изобретению, может менять его физические свойства, приводя к более гидрофобному соединению.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение из формулы (I) может быть повторяющимся звеном высокомолекулярной молекулы. Указанная молекула может включать 2, 3, 4, 5, 6, 10 или более соединений в соответствии с настоящим изобретением. Такая высокомолекулярная молекула может проявлять значительно более высокую эффективность при применении у индивидуума, чем единичная молекула соединения.
В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение является соединением в соответствии с настоящим изобретением, как определено выше.
Нейродегенеративное заболевание предпочтительно выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни Пелицеуса-Мерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, инсульта и спинной сухотки.
В дополнение к этим предпочтительным нейродегенеративным заболеваниям соединения в соответствии с настоящим изобретением может также применяться для лечения других церебральных нарушений.
В предпочтительном воплощении настоящего изобретения соединения настоящего изобретения может применяться для производства медикамента для улучшения способностей к обучению и долговременной памяти у индивидуумов. Применение соединения настоящего изобретения у индивидуума, здорового лица или лица, страдающего заболеванием, предпочтительно неврологическим заболеванием, ведет к значительному улучшению способностей к обучению и запоминанию у указанного лица. Так,
- 4 016040 применение соединений настоящего изобретения также у здоровых индивидуумов ведет к улучшению памяти. Подходящим тестом для демонстрации этих положительных эффектов на животной модели является тест водного лабиринта Морриса.
В одном воплощении изобретения пептид или белок, включающий ΌΕΗ\ν. может употребляться в качестве лекарства, стимулирующего репаративные процессы в мозге, и применяться для лечения и профилактики церебральных поражений, связанных с травмой, включая лечение церебральных поражений после перелома свода черепа, основания черепа, множественных переломов костей, для лечения церебральных поражений в случае внутричерепной травмы (например, посттравматического сотрясения мозга, ран и контузий мозга, субарахноидальной, субдуральной и экстрадуральной геморрагии), для лечения и профилактики травматического шока, лечения церебральных поражений, связанных с воздействием радиации, пониженной температуры, нагревания и света, воздушного давления, электрического и высокочастотного тока, лечения и профилактики отдаленных эффектов перелома черепа, лечения и профилактики отдаленных эффектов внутричерепной травмы, лечения и профилактики отдаленных церебральных поражений, вызванных радиацией, осложнений после хирургических и других медицинских вмешательств.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, подавляющее нейротоксические эффекты нейротрофных агентов, стимулирующее процессы восстановления мозга и демонстрирующее церебропротективную активность для лечения и профилактики церебральных поражений после отравления, включая лечение церебральных поражений после отравления терапевтическими агентами, медицинскими и биологическими соединениями, лечение церебрального повреждения агентами немедицинского происхождения, лечение и профилактику отдаленных церебральных поражений, вызванных отравлением наркотиками и немедицинскими веществами.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство с ноотропной активностью и стимулирующее процессы церебрального восстановления для лечения и профилактики недостаточности умственных способностей.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться для стимуляции процессов церебрального восстановления и двигательной активности для лечения и профилактики паралитических расстройств, включая лечение и профилактику гемиплегии, лечение и профилактику детского церебрального паралича, лечение и профилактику других паралитических синдромов (квадриплегии, параплегии, диплегии верхних конечностей, моноплегии нижних конечностей).
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае хромосомных аномалий, включая синдром Дауна.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае воспалительных церебральных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений в случае бактериального менингита, включая криптококковый менингит у больных СПИД, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае небактериальных менингитов, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае менингита неясного происхождения, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае энцефалита, миелита и энцефаломиелита, включая церебральный токсоплазмоз у больных СПИД, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае внутричерепных абсцессов, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае флебита и тромбофлебита внутричерепного венозного синуса, для лечения и профилактики последствий внутричерепных абсцессов или гнойной инфекции.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться как лекарство, стимулирующее процессы церебрального восстановления с церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае цереброваскулярных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений в случае субарахноидальной геморрагии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае церебральной геморрагии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае непроходимости и стеноза прецеребральных артерий, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае непроходимости церебральных артерий, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае транзиторной церебральной ишемии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае других цереброваскулярных расстройств (острых цереброваскулярных расстройств, церебрального атеросклероза и других генерализованных цереброваскулярных расстройств, гипертензионной энцефалопатии, церебральной аневризмы, церебрального артериита и негнойного тромбоза внутричерепного венозного синуса).
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобрете
- 5 016040 нием могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления, обладающего церебропротективной и ноотропной активностью, для лечения и профилактики алкогольного психоза, включая лечение и профилактику белой горячки при абстинентном синдроме, лечения и профилактики синдрома алкогольной амнезии и других расстройств алкогольной деменции, лечения и профилактики патологической алкогольной интоксикации, лечения и профилактики алкогольной паранойи и алкогольного психоза параноидного типа.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления, обладающего церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики церебрального повреждения в случае алкоголизма.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, подавляющего токсические эффекты нейротропных агентов и обладающего церебропротективной и ноотропной активностью для лечения и профилактики психоза, вызванного наркотиками, включая лечение и профилактику синдрома наркотической абстиненции, лечение и профилактику вызванных наркотиками параноидных и/или галлюцинаторных расстройств, лечения и профилактики патологической интоксикации медицинскими агентами, лечения и профилактики других вызванных наркотиками психических расстройств (делирия, деменции, синдрома амнезии и органического аффективного синдрома).
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, подавляющего токсические эффекты нейротропных агентов и обладающего церебропротективной активностью, для лечения и профилактики лекарственной зависимости, включая лечение и профилактику зависимости от опиоидных агентов, лечение и профилактику зависимости от барбитуратов, седативных агентов и транквилизаторов, лечение и профилактику кокаиновой зависимости, лечение и профилактику зависимости от марихуаны и её производных, лечение и профилактику зависимости от амфетамина и психостимулирующих агентов, лечение и профилактику зависимости от галлюциногенных агентов, лечение и профилактику церебральных повреждений, вызванных злоупотреблением лекарствами без лекарственной зависимости (злоупотреблением алкоголя, табака, марихуаны, галлюциногенов, опиоидов, кокаина, психостимулирующих агентов, антидепрессантов).
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве агента для лечения и профилактики психогенных симптомов и синдромов, включая лечение и профилактику психогенных психологических нарушений, лечение и профилактику других психогенных симптомов и синдромов (заикания и дефектов речи, психогенных аноректических судорог, повторяющихся стереотипных движений, неорганических расстройств сна, психогенных расстройств питания, энуреза, психалгии), лечения и профилактики острого стрессового ответа, лечения и профилактики реакций, вызванных психологическими причинами.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве агента для лечения и профилактики неорганических психозов, включая лечение и профилактику шизофренических расстройств, лечение и профилактику аффективных психозов, лечение и профилактику параноидных состояний, лечение и профилактику других неорганических психозов (психозов депрессивного и возбужденного типа, реактивного психоза со спутанностью сознания, острых параноидных реакций, психогенных параноидных психозов) и недифференцированных психозов, включая психозы, индуцированные церебральными повреждениями у больных СПИД, лечение и профилактику инфантильных психозов, включая инфантильный аутизм и дезинтегративные психозы.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления и обладающего церебропротективной и ноотропной активностью, для лечения и профилактики церебральных повреждений в случае других церебральных расстройств, включая лечение и профилактику церебральных повреждений церебральных кист, лечение и профилактику гипоксического повреждения мозга, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае внутричерепной гипертензии, лечение и профилактику церебральных повреждений в случае энцефалопатии.
В другом воплощении настоящего изобретения соединения в соответствии с настоящим изобретением могут применяться в качестве лекарства, стимулирующего процессы церебрального восстановления и двигательную активность, обладающего церебропротективными и ноотропными эффектами, для лечения и профилактики симптомов и синдромов в случае различных церебральных расстройств, включая лечение и профилактику когнитивных расстройств, нарушений памяти и внимания (например, в случае амнестических заболеваний, недостаточности умственных способностей, неорганических психозов и т.д.), лечения и профилактики афазии и апраксии (например, в случае амнестических заболеваний, неогранических психозов, церебральных повреждений из-за хромосомных аномалий и т. д.), лечения и профилактики эмоциональных расстройств (например, в случае неорганических психозов, демиелинизирующих церебральных расстройств и т.д.), лечения и профилактики психопатологического синдрома (например, в случае транзиторных органических психотических состояний, психозов, вызванных лекар
- 6 016040 ствами, лекарственной зависимости и т.д.), лечения и профилактики астено-депрессивного синдрома (например, в случае неорганических психозов, церебральных повреждений из-за хромосомных аномалий и т.д.), лечения и профилактики синдрома делирия (например, в случае психозов, индуцированных наркотиками и наркотической зависимости, неорганических психозов и т.д.), лечения и профилактики нарушений сна (например, в случае опухолей мозга, транзиторных органических психотических состояний и т.д.), для лечения и профилактики церебрального фокального синдрома (фокальных патологических симптомов) (например, в случае церебральных нарушений, вызванных осложнениями хирургических или других медицинских вмешательств, демиелинизирующих церебральных расстройств и т.д.), лечения и профилактики синдрома моторных расстройств (например, в случае опухолей мозга, церебральных нарушений, вызванных отравлениями и т. д.), лечения и профилактики периферической нейропатии, предпочтительно диабетической нейропатии.
В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция дополнительно включает фармацевтически пригодный наполнитель и/или носитель, как определено выше.
В соответствии с другим предпочтительным воплощением настоящего изобретения композиция далее включает по крайней мере один дополнительный фармацевтически активный компонент.
Указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент предпочтительно выбран из группы, состоящей из тетрапептида Ь-аланил-Ь-глутамил-Ь-аспарагил-Ь-пролина и церебролизина.
Медикамент предпочтительно предназначается для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального или ректального введения.
В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения медикамент включает соединение в количестве между 0,1 мкг/г и 100 мг/г, предпочтительно от 1 до 80 мг/г.
В частности, предпочтительно применять в качестве соединения тетрапептид, имеющий аминокислотную последовательность ΌΕΠΨ.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу профилактики проявления нейродегенеративного заболевания у индивидуума и лечения индивидуума, страдающего нейродегенеративным заболеванием, включающему введение фармацевтического препарата или эффективного количества соединения в соответствии с настоящим изобретением.
Термин эффективное количество соединения, как применяется здесь, зависит среди прочих факторов от пути введения и физического состояния индивидуума, у которого применяют указанное соединение. Способы определения эффективного количества известны специалистам в данной области техники.
Нейродегенеративное заболевание предпочтительно выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни Пелицеуса-Мерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии, диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки.
В соответствии с предпочтительным воплощением настоящего изобретения соединение вводят указанному индивидууму в дозе от 0,1 мкг до 20 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,5 мкг до 10 мг/кг массы тела.
Другой аспект настоящего изобретения относится к способу культивирования нейрональных клеток, включающему этапы обеспечения культуры нейрональных клеток;
добавления в указанную культуру соединения в соответствии с настоящим изобретением и инкубации смеси соединения/культуры.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением может также быть выгодно использовано для ίη νίίτο целей для культивирования нейрональных клеток, например. Указанное соединение просто добавляют в культуральные среды, известные в данной области техники.
Соединение предпочтительно содержится в указанной культуре в количестве от 5 мкг/мл до 2 мг/мл, предпочтительно от 10 до 1 мкг/мл, более предпочтительно от 15 до 900 мкг/мл культуральной среды.
Соединение в соответствии с настоящим изобретением проявляет нейропротективный эффект в отношении нейрональных клеток, в частности, когда оно включено в вышеуказанной концентрации в культуральную среду.
Настоящее изобретение далее проиллюстрировано следующей фигурой и примерами, не ограничиваясь ими.
Чертеж показывает эффекты ОЬН^ по сравнению с матриксом анализа, добавленным в ЮГУ (первый день ίη νίίτο), в отношении жизнеспособности кортикальных нейронов, полученные способом анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны как среднее значение и стандарт
- 7 016040 ная ошибка среднего от данных в процентах (контроль составляет 100%). Величины представляют среднее значение и 8ЕМ % (100% = контроль) от двух независимых экспериментов, выполненных за два дня на двух идентичных 96-луночных планшетах (п>8 для каждой концентрации используемого объекта и для контролен). Неповрежденный контроль представляет 0 и не получает какого-либо испытуемого объекта.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Пример 1.
Представленный пример с применением способа анализа с низким содержанием сыворотки 2% проводили для оценки нейропротективного потенциала пептида ΌΠΗ^, состоящего из аминокислотной последовательности. Эффекты оценивали также для матрикса анализа (6,18 мг/мл ЫаС1 и 0,35 мг/мл КС1).
1.1. Испытуемые и контрольный объекты.
1.1.1. Испытуемые объекты.
Пептиды, состоящие из аминокислотной последовательности ΌΗΗ^, ΝΐνΤΡΚ, НСРЬРК. и ИМУРРРК, и матрикс анализа (6,18 мг/мл №С1 и 0,35 мг/мл КС1) в качестве контроля соответственно.
1.1.2. Условия анализа.
Способ анализа: анализ в клеточной культуре с низким содержанием сыворотки 2%
Источник клеток: нейроны мозгового пузыря от 9-дневных куриных эмбрионов (гибрид Ломан Браун)
Питательная среда: ЕМЕМ с 1 г глюкозы /л, 2% ЭТС (эмбриональная телячья сыворотка), 0,01% гентамицина сульфата и 2 мМ Ь-глутамина
Размер группы: проведено 4 независимых эксперимента (п=8 для ОЬНАУ, ΝΐνΤΡΚ, ΗΟΓίΡΚ и ΝΜΫΡΓΡΚ и матрикса анализа)
Оценка эффектов: Способ анализа жизнеспособности с использованием
МТТ; поглощение (ОП) измеряли ридером микропланшетов
Длительность отдельного эксперимента: 8 дней
1.2. Результаты экспериментов.
Этот пример описывает эффекты пептидов, состоящих из аминокислотных последовательностей ОЬН^, ΝΐνΤΡΚ, НОРЬРК. и ΝΜνΡΕΡΚ, в валидированном анализе с низким содержанием сыворотки 2% с применением куриных кортикальных нейронов ίη νίίτο. Эффекты оценивали также для матрикса анализа (6,18 мг/мл №1С1 и 0,35 мг/мл КС1).
Общие выводы, которые могут быть сделаны по результатам, состоят в следующем.
Полученные результаты демонстрируют дозозависимый профиль, явно улучшающий нейрональную жизнеспособность, достигающую величины максимального эффекта более 300% в отношении необработанного контроля. Это дополнительно указывает, что выбранный способ анализа способен без всяких сомнений оценить дозозависимый профиль ответа.
В то время как матрикс анализа был не способен повысить нейрональную жизнеспособность выше степени необработанного контроля, пептид ΌΗΗ^ явно проявлял нейропротективные эффекты.
В данном примере ΌΕΗΨ по результатам анализа был эффективным соединением, достигающим высокой величины эффекта (330% по сравнению с контролем) при относительно низких концентрациях. Результаты представленного эксперимента показывают, что этот малый пептид ΌΕΗΨ или соединения, включающие указанный пептид, вносят значительный и эффективный вклад в повышение нейрональной жизнеспособности. В противоположность этому, пептиды, включающие другую аминокислотную последовательность, не демонстрируют таких эффектов.
2. Испытуемые вещества.
2.1. Цель эксперимента.
Эксперименты были проведены для оценки нейропротективных эффектов пептидов, состоящих из аминокислотной последовательности ОЬН^, ΝΐνΤΡΡ. ΗΟΕΕΡΚ, ΝΜνΡΕΡΚ и матрикса анализа.
2.2. Испытуемые и контрольные объекты.
- 8 016040
2.2.1. Испытуемые объект.
2.2.1.1. Испытуемый объект (ОЬН^). Растворитель для разведения: Режим применения:
Период применения:
матрикс анализа (6,18 мг/мл ΝηΟΙ и 0,35 мг/мл КС1) один раз в 1-й день в течение всего эксперимента, т.е. 8 дней, начиная с 1го дня
5,6, 11,25,22.5,45, 90, 180, 360 и 720 мкг/мл
0,625, 1,25,2,5, 5, 10,20,40, 80 мкл среды
Концентрации:
Вводимый объем:
2.2.1.2. Испытуемый объект (ΝΐνΤΡΚ).
Растворитель для разведения:
Режим применения:
Период применения:
матрикс анализа (6,18 мг/мл КаС1 и 0,35 мг/мл КС1) один раз в 1-й день в течение всего эксперимента, т.е. 8 дней, начиная с 1го дня
5,6,11,25,22,5, 45,90, 180, 360 и 720 мкг/мл
0,625,1,25,2,5, 5, 10, 20,40, 80 мкл среды
Концентрации:
Вводимый объем;
2.2.1.3. Испытуемый объект (НСРЬРК).
Растворитель для разведения: Режим применения:
Период применения:
матрикс анализа (6,18 мг/мл ИаС1 и 0,35 мг/мл КС1) один раз в 1-й день в течение всего эксперимента, т.е. 8 дней, начиная с 1го дня
5,6, 11,25,22,5, 45, 90,180, 360 и 720 мкг/мл
0,625, 1,25,2,5, 5, 10,20,40, 80 мкл среды
Концентрации:
Вводимый объем:
2.2.1.4. Испытуемый объект (ИМУРРРК).
Растворитель для разведения:
Режим применения:
Период применения:
матрикс анализа (6,18 мг/мл №С1 и 0,35 мг/мл КС1) один раз в 1-й день в течение всего эксперимента, т.е. 8 дней, начиная с
1-го дня
5,6, 11,25, 22,5,45, 90, 180, 360 и 720 мкг/мл
0,625, 1,25,2,5, 5,10,20, 40, 80 мкл среды
Концентрации:
Вводимый объем:
2.2.1.5. Испытуемый объект (матрикс анализа).
Вводимый объем:
2.3. Условия анализа.
Способ анализа на клеточной культуре: анализ с низким содержанием сыворотки 2%.
растворы для инъекции
Наименование, концентрация соли: матрикс анализа или холостая проба (6,18 мг/мл МаС1 и 0,35 мг/мл КС1)
Растворитель для разведения:
Режим применения:
Период применения:
Концентрации:
без растворителя, используются готовые к применению
- 9 016040
Источник клеток:
Питательная среда:
Размер группы:
Оценка эффектов:
нейроны мозгового пузыря 9-дневных куриных эмбрионов (гидрид Ломан Браун)
ЕМЕМ с 1 г глюкозы/л, 2% ЭТС, 0,01% гентамицина сульфата и 2 мМ Ь-глутамина были проведены 4 независимых эксперимента (п=8 для ОБНБ/ и матрикса анализа; п=224 для контролей) способ анализа жизнеспособности с использованием МТТ; поглощение (О П), измеренное ридером микропланшетов
Длительность отдельного эксперимента: 8 суток
3. Методы.
Процедурой анализа, использованной в данном эксперименте, является способ анализа с низким содержанием сыворотки 2% с применением изолированных птичьих кортикальных нейронов. С данным анализом в культуре клеток ίη νίίτο нейропротективный и/или нейротрофный потенциал соединений может быть оценен путем определения жизнеспособности живых нейронов после определенного периода времени в культуре. Методом измерения количества жизнеспособных нейронов является МТТ-анализ.
3.1. Испытуемые объекты.
Биологическую активность ИЬН^, ΝΐνΤΡΚ, НСРЬРК, ΝΜνΡΡΡΚ и матрикса анализа (6,18 мг/мл №С1 и 0,35 мг/мл КС1) исследовали с применением валидированной модельной системы в культуре птичьих клеток.
3.1.1. Приготовление маточных растворов пептидов.
Пептиды, предназначенные для анализа, растворяли в матриксе анализа (6,18 мг/мл Ναί'Ί и 0,35 мг/мл КС1).
3.2. Контроль.
Для контроля применяли нейроны, которые не обрабатывали ИЬН^, ΝΐνΤΡΚ, НСРЬРК и ΝΜνΡΡΡΚ.
3.3. Задачи процедуры анализа.
В данном примере пептиды, содержащие аминокислотную последовательность ИЬН^, ΝΐνΤΡΚ, НСЕЕ-ΡΚ и ΝΜνΡΡΡΚ, исследовали для оценки их возможной активности в отношении повышения нейрональной жизнеспособности изолированных кортикальных нейронов. Пептиды применяли в концентрации 4,5 мг/мл.
3.4. Размер группы и концентрации.
К изолированным нервным клеткам пептиды или матрикс анализа добавляли один раз, т. е. на первые сутки. 8 концентраций, включающих диапазон доз 5,6, 11,25, 22,5, 45, 90, 180, 360 и 720 мкг на 1 мл среды, вводимые объемы составили 0,625, 1,25, 2,5, 5, 10, 20, 40, 80 мкл на 1 мл среды.
4. Оценка.
4.1. МТТ-анализ жизнеспособности.
Нейрональную жизнеспособность культур определяли МТТ-анализом с применением ридера микропланшетов (570 нм). МТТ-анализ является чувствительным тестом, измеряющим активность митохондриальной дегидрогеназы только в живых клетках. Он выполняется в соответствии со способом, описанным Моктапп, ί. 1ттипо1. Мс111.. 1983, 55-63. Анализ основан на восстановлении желтого МТТ (3-(4,5диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия бромида) до темно-синих кристаллов формазана митохондриальными дегидрогеназами (сукцинатдегидрогеназой). Поскольку эта реакция катализируется только в живых клетках, анализ может применяться для количественного определения жизнеспособности клеток. Для определения жизнеспособности клеток раствор МТТ добавляли в каждую лунку до конечной концентрации 0,5 мг/мл. Спустя 2 ч МТТ-содержащую среду удаляли аспирацией. Клетки лизировали 3% ДСН, кристаллы формазана растворяли в изопропаноле/НС1. Для оценки оптической плотности использовали ридер микропланшетов (Ληΐΐιοδ НТ II) при длине волны 570 нм. Нейрональную жизнеспособность выражали в виде оптической плотности (ОП).
5. Статистика.
Для оценки различия между обработанным и необработанными нейронами применяли ί-критерий Стьюдента. Различия считали значимыми при р<0,05.
6. Результаты.
Данный пример описывает нейротрофные/нейропротективные эффекты ίη νίίτο пептида, содержащего аминокислотную последовательность ИЬН^. Дополнительно матрикс анализа тестировали в анализе с низким содержанием сыворотки 2%, с применением кортикальных куриных нейронов.
Эффекты оценивали, как упоминалось для ИЬН^, ΝΐνΤΡΚ, НСЕЕ-ΡΚ и ΝΜΥΡΡΡΚ. Дополнительно
- 10 016040 матрикс анализа (6,18 мг/мл ЫаС1 и 0,35 мг/мл КС1) анализировали в данном тесте. Описательная статистика для каждой концентрации пептидов и матрикса анализа, такая как среднее значение, стандартное отклонение и 8ЕМ, показаны в табл. 2 и 3 и на чертеже. В табл. 4 суммированы р-значения, полученные при ΐ-анализе Стьюдента, статистически оценивающем различия между необработанными контролями и каждой из 8 концентраций (от 5,6 до 720 мкг/мл) ΌΒΗ^ и матрикса анализа.
Таблица 2 Эффекты анализируемых пептидов и матрикса анализа, добавленных в ΙΌΐν, на жизнеспособность кортикальных нейронов, полученные способом анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны в виде среднего значения, стандартного отклонения и стандартной ошибки среднего (8ЕМ) оптических плотностей (ОП).
Среднее значение
0 5.6 11.25 22,5 зо 180 360 720н№'мл
а. 063 0.062 0.062 0.085 0.136 0.217 0.272 0.254 0.257
№/Т?К 0.069 : 0.063 0.069 0.068 0.068 0.066 0.064 0.060 0.058
НСГЬРЙ 0.066 0.060 0.069 0.069 0.067 0.070 0.067 0.064 0.058
ндотр. 0.062 0.061 0.060 0.057 0.057 0.056 0.055 0,055 0.057
матрикс анализа 0.002 0.082 0,005 0.085 0.088 О.ОЭО 0.088 0.082 0.069
Стандартное отклонение
0 5.6 11.25 22.5 45 90 280 360 72фикг/мл
оьнн 0.005 0.004 0.006 0.031 0.070 0.061 0.030 0.015 0.038
Ηΐντίϋ 0.004 0.003 0.005 0.005 0,004 0.001 0,004 0.005 0.003
НбГЬРК 0.005 0.004 0,004 0.005 0.004 0,005 0,004 0,005 0.007
ΗΜνίίΤΒ 0.004 0.003 0.004 0.004 0.003 0.004 0.002 0.002 0.003
м зарине анализа 0.014 0.015 0.016 0.016 0.019 0.017 0,015 О.015 0.010
8ЕМ
О 5.6 11.25 22.5 45 90 180 360 720акг/мл
О1ИИ 0.001 0.001 0.002 0.011 0.025 0.024 0.011 0.005 0.013
ΗΐνΤΈΒ 0.001 0.001 0.002 С.002 0.002 0.001 0.001 0.002 0.081
НСИ.И1 0.001 0.001 0.001 0.002 0.002 0,002 0.002 0.002 0.003
ЫМУРРРЕ 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001 0.001
матрикс анализа 0.004 0.005 0.006 0.006 0.007 0.006 0.005 0.005 0.004
Величины представляют ОП в виде среднего значения, стандартного отклонения и 8ЕМ по четырем независимым экспериментам, выполненным за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (п>8 для каждой концентрации пептида и матрикса анализа и для контролей). Неповрежденный контроль представлен 0 и не получал ни пептида, ни матрикса анализа.
- 11 016040
Таблица 3
Эффекты анализируемых пептидов и матрикса анализа, добавленных на 1Э1У. на жизнеспособность кортикальных нейронов. полученные в способе анализа с МТТ с низким содержанием сыворотки 2%. Результаты показаны в виде среднего значения. стандартного отклонения и стандартной ошибки среднего (8ЕМ) для данных в процентах (контроль составляет 100%; см. также чертеж для ЭЬ-НУУ).
Среднее значение
а 5.6 11.25 22.3 45 М 160 360 720жг/мл
ОЬЙЯ 100.00 97.85 97.68 134.51 213.12 341.32 429.54 401.23 406.75
В1УТРЙ 100.00 98.92 100.32 98,70 98.75 95.12 92.28 86.60 83.13
ЯОГЬРР. ЮО.00 100.07 101.16 101.16 90.95 102.25 99.14 94.53 85.71
НМУРГРВ 100.00 9В.06 95,77 90.76 90.55 89.54 87.76 87.79 91.24
матрикс анализа 100.00 99.94 103.17 103.51 107.12 109,78 106.87 99.34 85.08
Стандартное отклонение
5 5.6 11.23 22.3 45 160 360 72<Ьикг/ыл
оьня 5.80 4.12 8.85 47.75 107.35 102.95 45.65 25.04 56.16
ΝΤνΤΡΚ 5.42 3.70 6.43 6.75 6.37 4.91 6.43 7.46 3.32
ИСТЪРК 7.01 4.97 5.08 6.52 5.67 5.45 5.71 6.49 10.29
ЫМУРЕРР 5,44 5.79 5.77 5-12 3.99 5.00 2.97 2.41 4.92
мэтрккс анализа 10.44 10.46 10.93 12.99 15.63 14.24 11.07 11,44 12.54
8ЕМ
0 5.6 11.25 22.5 45 за 160 360 720мкг'мл
ОБО 1.45 1.46 3.13 16.88 37.96 36. 40 16.14 8.65 19.86
κτντρκ 1.36 1.31 2,27 2.39 2.25 1.73 2.27 2.64 1.17
ногьея 1.75 1.76 1.80 2.31 2.00 1.93 2.02 2.29 3.64
нмуекрй 1.36 2-05 2.04 1.81 1.41 1.77 1.05 0.85 1.74
матрикс анализа 2,61 3.70 З.В7 4.59 5.53 5.03 3.92 4,04 4.43
Величины представляют жизнеспособность в процентах в виде среднего значения. стандартного отклонения и 8ЕМ по четырем независимым экспериментам. выполненным за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (п>8 для каждой концентрации пептида и матрикса анализа и для контролей). Неповрежденный контроль представлен 0 и не получал ни пептида. ни матрикса анализа.
Таблица 4
Результаты статистического анализа - р-величины: в верхней части таблицы показаны р-величины. отображающие разницу между необработанным контролем и различными концентрациями пептидов и матрикса анализа.
Разница между концентрациями и контролем
5.6 11.25 22.5 45 90 100 360 720мкг/мл ί
ОЪНН 0.1945449 0.484933 0.0802617 0.0205037 0.0002919 1.672Е-07 4.6032-09 1.1428Е-06 1
метрике анализа 0.9878519 0.4414904 0.4712104 0.2391877 0.0934033 0.1238825 О.8761О6В 0,01191905
Различия между разными значениями считали значимыми при р<0.05. Значения для расчета различий были получены из четырех независимых экспериментов. проведенных за четыре дня с двумя идентичными 96-луночными планшетами (п>8 для концентраций ЭЬ-НУУ и матрикса анализа и для контро- 12 016040 лей). Неповрежденный контроль не получал ни пептида, ни матрикса анализа.
В то время как в табл. 2 результаты показаны в виде среднего значения, стандартного отклонения и 8ЕМ оптических плотностей (ОП), табл. 3 иллюстрирует результаты относительно необработанного контроля, в процентах, где среднее значение необработанного контроля взято за 100%. Чертеж соответствует результатам, показанным в табл. 3 для ЭЙН№.
Чертеж показывает эффекты эффективного пептида, ОЬН№, по сравнению с матриксом анализа. Максимальный эффект 430% может быть получен для концентрации 360 мкг/мл ОЬН№, но даже при более высоких концентрациях эффекты остаются в диапазоне 300% от уровня контроля. В противоположность этому, другие анализируемые пептиды не показывают какого-либо значимого эффекта.
В табл. 5 приведены основные эффекты, полученные для ЭЙН№ и матрикса анализа. Вновь обобщены результаты, описанные выше.
Таблица 5
Обобщение эффектов пептидов и матрикса анализа, добавленных на 1Όΐν, в отношении жизнеспособности кортикальных нейронов, полученных МТТ-методом.
Наимеповаиие Диапазон эффективной дозы Наиболее эффективная концентрация Максимальный эффект в % Эффект по отношению к контролю
1)1.1) \ν 45-702 мкг/мл 180 мкг/мл 430% 430%
ΝΐνΊΈΚ.
НОБЕРК --------
ΝΗνΡΕΡΕ
матрикс
анализа
7. Обобщение экспериментальных данных.
Обобщая возможные нейротрофные/нейропротективные эффекты ОЬН№, полученные в анализе с 2% низким содержанием сыворотки, можно установить, что ЭЙН№ значительно повышает нейрональную жизнеспособность по сравнению с необработанным контролем. Далее можно ясно продемонстрировать, что пептиды, имеющие иную аминокислотную последовательность, чем ОЬН№, не проявляют нейротрофных и нейропротективных свойств.

Claims (20)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Нейропротективное соединение, состоящее из аминокислотной последовательности ИЬН№.
  2. 2. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по п.1 и при необходимости фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель.
  3. 3. Композиция по п.2, характеризующаяся тем, что композиция дополнительно включает по крайней мере один фармацевтически активный компонент.
  4. 4. Композиция по п.3, характеризующаяся тем, что указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент выбран из группы, состоящей из тетрапептида Ь-аланил-Е-глутамил-Еаспарагил-Ь-пролина и церебролизина.
  5. 5. Композиция по любому из пп.2-4, характеризующаяся тем, что композиция предназначена для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения.
  6. 6. Композиция по любому из пп.2-5, характеризующаяся тем, что соединение содержится в композиции в количестве от 0,1 мкг/г до 100 мг/г, предпочтительно от 1 мкг/г до 80 мг/г.
  7. 7. Применение соединения с нейропротективной активностью, состоящего из аминокислотной последовательности ПЬН№, для производства медикамента для лечения и/или профилактики нейродегенеративного заболевания.
  8. 8. Применение соединения с нейропротективной и нейротрофной активностью, состоящего из аминокислотной последовательности ПЬН№, для производства медикамента для улучшения способности к обучению и запоминанию у индивидуума.
  9. 9. Применение по п.7, характеризующееся тем, что нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни ПелицеусаМерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии, диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки.
  10. 10. Применение по любому из пп.7-9, характеризующееся тем, что медикамент дополнительно включает фармацевтически приемлемый наполнитель и/или носитель.
    - 13 016040
  11. 11. Применение по любому из пп.7-10, характеризующееся тем, что композиция дополнительно включает по крайней мере один фармацевтически активный компонент.
  12. 12. Применение по п.11, характеризующееся тем, что указанный по крайней мере один фармацевтически активный компонент выбран из группы, состоящей из тетрапептида Ь-аланил-Ь-глутамил-Ьаспарагил-Ь-пролина и церебролизина.
  13. 13. Применение по любому из пп.7-12, характеризующееся тем, что медикамент предназначен для внутривенного, внутримышечного, спинального, эпидурального, мукозального, чрескожного, парентерального, перорального, энтерального, интраназального или ректального введения.
  14. 14. Применение по любому из пп.7-13, характеризующееся тем, что медикамент включает соединение в количестве от 0,1 мкг/г до 100 мг/г, предпочтительно от 1 мкг/г до 80 мг/г.
  15. 15. Способ профилактики проявления нейродегенеративного заболевания у индивидуума и лечения индивидуума, страдающего нейродегенеративным заболеванием, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.2-6 или эффективного количества соединения по п.1.
  16. 16. Способ по п.15, характеризующийся тем, что нейродегенеративное заболевание выбрано из группы, состоящей из болезни Александера, болезни Альпера, болезни Альцгеймера, амиотрофического латерального склероза, атаксии-телеангиэктазии, болезни Канавана, синдрома Коккейна, кортикобазальной дегенерации, болезни Крейтцфельда-Якоба, эпилепсии, болезни Гентингтона, болезни Кеннеди, болезни Краббе, деменции с тельцами Леви, болезни Мачадо-Джозефа (спинально-церебеллярной атаксии типа 3), рассеянного склероза, рассеянной системной атрофии, болезни Паркинсона, болезни ПелицеусаМерцбахера, болезни Пика, первичного латерального склероза, болезни Рефсума, болезни Сандоффа, болезни Шильдера, спинально-церебеллярной атаксии, болезни Стила-Ричардсона-Ольжевского, периферической нейропатии, диабетической нейропатии, инсульта и спинной сухотки.
  17. 17. Способ улучшения способностей к обучению и запоминанию у индивидуума, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.2-6 или эффективного количества соединения по п.1.
  18. 18. Способ по любому из пп.15-17, характеризующийся тем, что соединение вводят указанному индивидууму в дозе от 0,1 мкг/кг до 20 мг/кг массы тела, предпочтительно от 0,5 мкг/кг до 10 мг/кг массы тела.
  19. 19. Способ культивирования нейрональных клеток, включающий этапы обеспечения культуры нейрональных клеток;
    добавления в указанную культуру соединения по п.1 и инкубации смеси соединения и культуры клеток.
  20. 20. Способ по п.19, характеризующийся тем, что соединение содержится в указанной культуре в количестве от 5 мкг/мл до 2 мг/мл, предпочтительно от 10 мкг/мл до 1 мг/мл, более предпочтительно от 15 до 900 мкг/мл культуральной среды.
    2% Анализ матрикс анализа — ϋαπν иыпх и матрикс анализа, дииАвлснные и ινιν? МТТ-£уйсЪр с18Οΐν £ 350 300 · 250 · 200 150 · 7 у д ; ь .о> х 50 . □ 5,6 11,25 22,5 45 90 160 360 720. мкг/мл
    Евразийская патентная организация, ЕАПВ
    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
EA200802273A 2006-05-03 2007-05-03 Нейропротективное соединение dlhw и его применение EA016040B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP06450065A EP1857463A1 (en) 2006-05-03 2006-05-03 Peptide having neuroprotective effects
PCT/EP2007/003906 WO2007128493A1 (en) 2006-05-03 2007-05-03 Neuroprotective compounds and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200802273A1 EA200802273A1 (ru) 2009-04-28
EA016040B1 true EA016040B1 (ru) 2012-01-30

Family

ID=37084626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200802273A EA016040B1 (ru) 2006-05-03 2007-05-03 Нейропротективное соединение dlhw и его применение

Country Status (9)

Country Link
US (1) US8034778B2 (ru)
EP (2) EP1857463A1 (ru)
CN (1) CN101426807B (ru)
AT (1) ATE444968T1 (ru)
DE (1) DE602007002716D1 (ru)
EA (1) EA016040B1 (ru)
HK (1) HK1128703A1 (ru)
UA (1) UA94604C2 (ru)
WO (1) WO2007128493A1 (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2707191C2 (ru) * 2014-11-26 2019-11-25 Нейро-Био Лтд Нейродегенеративные расстройства

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK2582366T3 (en) 2010-06-15 2015-12-07 Gruenenthal Gmbh A pharmaceutical combination for the treatment of pain.
CN107428800B (zh) * 2015-07-08 2020-11-27 中国食品发酵工业研究院 一种抑制ampa受体的活性肽及其制备方法和应用
WO2022013236A1 (en) 2020-07-13 2022-01-20 Ever Neuro Pharma Gmbh Method for producing a mammalian brain protein hydrolysate

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997011963A1 (en) * 1995-09-27 1997-04-03 The Austin Research Institute ANTI-GALα(1,3)GAL ANTIBODY BINDING PEPTIDES
WO2001029067A1 (en) * 1999-10-20 2001-04-26 Sankt-Peterburgskaya Obschestvennaya Organizatsya 'institut Biroregulyatsii I Gerontologii Szo Ramn' Tetrapeptide stimulating functional activity of neurones, pharmacological agent based thereon and method of use thereof
WO2001096364A2 (en) * 2000-06-16 2001-12-20 Imperial College Innovations Limited Peptides that stimulate cell survival and axon regeneration
WO2004011650A2 (en) * 2002-07-24 2004-02-05 Intercell Ag Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0452299B1 (en) 1990-04-12 1997-06-18 EBEWE Arzneimittel Gesellschaft mbH Use of a mixture of peptides and amino acids in the prophylaxis or treatment of dementia
AU2001274904B2 (en) * 2000-05-26 2006-08-31 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Neuroprotective peptides

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1997011963A1 (en) * 1995-09-27 1997-04-03 The Austin Research Institute ANTI-GALα(1,3)GAL ANTIBODY BINDING PEPTIDES
WO2001029067A1 (en) * 1999-10-20 2001-04-26 Sankt-Peterburgskaya Obschestvennaya Organizatsya 'institut Biroregulyatsii I Gerontologii Szo Ramn' Tetrapeptide stimulating functional activity of neurones, pharmacological agent based thereon and method of use thereof
WO2001096364A2 (en) * 2000-06-16 2001-12-20 Imperial College Innovations Limited Peptides that stimulate cell survival and axon regeneration
WO2004011650A2 (en) * 2002-07-24 2004-02-05 Intercell Ag Antigens encoded by alternative reading frame from pathogenic viruses

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MOSMANN T.: "RAPID COLORIMETRIC ASSAY FOR CULLAR GROWTH AND SURVIVAL: APPLICATION TO PROLIFERATION AND CYTOTOXICITY ASSAYS" JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 65, 1983, pages 55-63, XP008025247 ISSN: 0022-1759 cited in the application the whole document *
MURALI DORAISWAMY P.: "NON-CHOLINERGIC STRATEGIES FOR TREATING AND PREVENTING ALZHEIMER'S DISEASE" CNS DRUGS, ADIS INTERNATIONAL, AUCKLAND, NZ, vol. 16, no. 12, 2002, pages 811-824, XP009033332 ISSN: 1172-7047 pages 816-817, paragraph 1.4 page 820; table 1 *
SCHAUER E. ET AL.: "Neuroprotection of Cerebrolysin in tissue culture models of brain ischemia: Post lesion application indicates a wide therapeutic window" JOURNAL OF NEURAL TRANSMISSION 2006 AUSTRIA, vol. 113, no. 7, 2006, pages 855-868, XP002403878 ISSN: 0300-9564, 1435-1463 published online 14-12-2005 the whole document *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2707191C2 (ru) * 2014-11-26 2019-11-25 Нейро-Био Лтд Нейродегенеративные расстройства

Also Published As

Publication number Publication date
EA200802273A1 (ru) 2009-04-28
US8034778B2 (en) 2011-10-11
HK1128703A1 (en) 2009-11-06
EP2032596A1 (en) 2009-03-11
EP1857463A1 (en) 2007-11-21
CN101426807B (zh) 2012-08-29
WO2007128493A1 (en) 2007-11-15
US20090105159A1 (en) 2009-04-23
ATE444968T1 (de) 2009-10-15
CN101426807A (zh) 2009-05-06
EP2032596B1 (en) 2009-10-07
UA94604C2 (en) 2011-05-25
DE602007002716D1 (de) 2009-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200254075A1 (en) Methods and compositions for treating aging-associated conditions
KR100864380B1 (ko) 두뇌기능 향상과 뇌신경계 질환 예방 또는 치료용 펩타이드
US9650418B2 (en) Synthetic analogues of neural regeneration peptides
US8338378B2 (en) Neurotrophic peptides
EA016040B1 (ru) Нейропротективное соединение dlhw и его применение
CA2932791C (en) A chromone derivative as a dopamine d3 receptor antagonist for its use for the treatment of autism spectrum disorder
WO2021200259A1 (ja) Ｖｉｐｒ２アンタゴニストペプチド
JP4169597B2 (ja) 神経変性疾患の処置のためのトリペプチド及びトリペプチド誘導体
HU231182B1 (hu) A ß-amiloid toxicitását gátló kis peptid inhibitorok
US8796215B2 (en) Neurotrophic peptides
Novelli et al. Potential neurotoxins: Okadaic acid and analogs
Camarini et al. Long-lasting changes following repeated cocaine use: behavioral sensitization and neurotoxicity
US8796214B2 (en) Neurotrophic peptides
RU2115660C1 (ru) Пептиды, обладающие антистрессорным, противосудорожным и нейропротекторным действием
Borisova et al. Synthesis and analgesic activity of new analogs of FELL tetrapeptide containing D-Phe in the first position