EA015863B1

EA015863B1 - Фармацевтическое применение белковых молекул, иммунологически взаимосвязанных с дифтерийным токсином

Info

Publication number: EA015863B1
Application number: EA200870597A
Authority: EA
Inventors: Сильвио Буцци
Original assignee: Сильвио Буцци
Priority date: 2006-05-31
Filing date: 2006-05-31
Publication date: 2011-12-30
Also published as: US20090270319A1; CA2654014A1; CN101460180A; JP2009538902A; ATE552839T1; CN101460180B; WO2007138621A1; EP2035022A1; US9107880B2; EA200870597A1; JP5155306B2; EP2035022B1; WO2007138621A8

Abstract

Белковые молекулы, иммунологически связанные с дифтерийным токсином, предложены для лечения атеросклероза и других патологических состояний, связанных с ним.

Description

Настоящее изобретение относится к применениям белковых молекул для лечения атеросклероза и для лечения и/или профилактики других патологий, связанных с атеросклерозом.

Уровень техники

Патологические состояния сердечно-сосудистой системы в настоящее время являются одной из наиболее значительных причин смерти в средне- и высокоразвитых промышленных странах.

Атеросклероз представляет собой сердечно-сосудистую патологию, характеризующуюся отвердеванием и сужением артерий, которое происходит у большинства людей с возрастом. Атеросклероз обычно не проявляет симптомов до серьезного нарушения кровотока в кровеносных сосудах. Характерные симптомы атеросклероза включают боль в груди, при вовлечении коронарной артерии, или боль в ноге, при вовлечении артерии ноги. Возможные осложнения атеросклероза включают апоплексию, некроз и заболевание коронарных артерий (одним из симптомов которого является стенокардия) с ишемией и инфарктом.

На основании вышеизложенного очевидно, что все еще существует значительная необходимость в получении лекарственных средств, доступных для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний.

Описание изобретения

Целью настоящего изобретения является предоставление новых возможностей для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний.

В соответствии с настоящим изобретением представлены способы лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний и применения производных дифтерийного токсина в получении лекарственных средств для лечения атеросклероза и связанных с ним патологических состояний, как заявлено в независимых пунктах формулы изобретения, которые следуют в конце этого описания, и, предпочтительно, в любом из отдельных пунктов прямо или опосредованно зависимых от независимых пунктов.

Если явным образом не утверждается обратное, следующие термины имеют указанное ниже значение.

В тексте настоящего описания процент идентичности и % идентичности между двумя аминокислотными последовательностями означает процент идентичных аминокислотных остатков в соответствующих положениях в двух последовательностях при оптимальном выравнивании.

Для определения процента идентичности двух аминокислотных последовательностей или последовательностей нуклеиновых кислот, последовательности попарно выравнивают для достижения оптимального сравнения. В эту последовательность могут быть введены разрывы (т.е., удаления или вставки). Затем сравнивают аминокислоты в соответствующих положениях. В тех случаях, когда положение в первой последовательности занято той же аминокислотой, которая занимает соответствующее положение во второй последовательности, молекулы являются идентичными в этом положении (т.е., это положение является идентичным). Процент идентичности между двумя последовательностями представляет собой следствие наличия определенного числа идентичных положений в последовательностях [т.е. процент идентичности = (число идентичных положений/общее число положений) х 100]. В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, последовательности имеют одинаковую длину.

В сравниваемых последовательностях могут присутствовать разрывы.

Процент идентичности может быть получен с помощью математических алгоритмов. Неограничивающим примером математического алгоритма, используемого для сравнения двух последовательностей, является алгоритм Каг1ш и А11кс11и1 ((1990), Ргос. Νη11 Асаб 8е1 И8А 87: 2264-2268) модифицированный Каг11 и А11кс1и.11 ((1993), Ргос. №11. Асаб. 8с1 И8А 90: 5873-5877). Такой алгоритм включен в программы А11кс1ш1 ВЬА8Тп и ВЬА8Тр (А11ксЬи1, е! а1, (1990). 1. Мо1. Бю1. 215: 403-410).

Для получения выравниваний также в присутствии одного или нескольких разрывов можно применять способы, которые налагают сравнительно высокий штраф за каждый разрыв и более низкий штраф за каждый дополнительный аминокислотный остаток или нуклеотид в разрыве (такой дополнительный аминокислотный остаток или нуклеотид определяется как удлинение разрыва). Очевидно, высокие штрафы будут определять оптимизированные выравнивания с меньшим числом разрывов.

Примером программы, подходящей для реализации этого типа выравнивания, является программа ВЬА8Т, описанная А11ксНи1 е! а1. ((1997). №.1с1ею Ас1бк Век 25: 3389-3402). С этой целью программы ВЬА8Тп и ВЬА8Тр могут быть использованы с параметрами по умолчанию. При использовании программы ВЬА8Т обычно употребляется матрица ВЬО8иМ62.

Предпочтительным и неограничивающим примером программы для получения оптимального выравнивания является пакет ОСО ХУшксопкш ВекШ1 (Ишуегкйу о£ ХУшксопкш. И8А; Эеуегеих е! а1.(1984). №1с1е1с Ас1бк Векеагсй 12:387). В этом случае также используются параметры по умолчанию, которые для последовательности аминокислот предусматривают штраф за разрыв -12 и штраф за каждое удлинение -4.

В тексте настоящего описания под гомологичными положениями подразумеваются положения, которые имеют две гомологичных аминокислоты, то есть аминокислоты, наделенными сходными физи

- 1 015863 ко-химическими свойствами. Например, аминокислоты, принадлежащие тем же группам, таким как: ароматическая (РЬе, Тгр, Туг), кислая (С1и, Акр), полярная (Οίη, Аки), основная (Иук, Агд, Ηίκ), алифатическая (А1а, Ьеи, Не, Уа1), с одной гидроксигруппой (8ег, ТЬг), с короткой боковой цепью (О1у, А1а, 8ег, ТЬг, Ме!) . Можно было бы ожидать, что замены между такими гомологичными аминокислотами не изменят фенотип белка (консервативная замена аминокислот). Конкретные примеры консервативных замен хорошо известны в уровне техники и описаны в различных работах (например, Во\\ае е! а1. (1990). 8аеисе 247:1306-1310).

В тексте настоящего описания под условиями строгости подразумевается, предпочтительно, промывание в течение одного часа буфером 88С (0,15 М раствор хлорида натрия и 20 мМ цитрат натрия) и 0,1% 8Ό8 (додецилсульфат натрия) при 50°С. Альтернативно, условия строгости были описаны ранее (АикиЬе1 Р М е! а1. ебк. (1989) Сиггеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1оду, Уо1. I, Огееи РиЬйкЫид Л88ОС1а1е8. Тис. апб ίοΐιη ^11еу & 8оик 1ис. №\ν Уогк).

В тексте настоящего описания под фармацевтически приемлемым производным подразумевается соль или комплекс (т.е. соединение, в котором одна или более молекул или ионов образуют одну или несколько координатных связей с одним или более атомами металлов или ионов металла), которые сохраняют биологические свойства исходной молекулы. Неограничивающие примеры способов получения таких производных включают следующие положения: добавление неорганических кислот (например, соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты и им подобных) или органических кислот (например, уксусной кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, метасульфоновой кислоты, салициловой кислоты, янтарной кислоты, лимонной кислоты или подобных) к свободному основанию исходной молекулы; замена протона кислоты исходной молекулы катионом металла (например, катионом щелочного металла или алюминия или подобного); перенос протона кислоты исходного соединения на органическое основание (например, диметиламин, триэтиламин и подобное) и координация с таким органическим основанием. Должно быть понятно, что молекулы, которые являются объектом настоящего изобретения, если не указано обратное, включают их фармацевтически приемлемые производные.

Краткое описание чертежей

Неограничивающие варианты осуществления настоящего изобретения будут описаны посредством примеров со ссылкой на сопровождающие чертежи, на которых на фиг. 1 и 2 показаны цветные Допплеровские изображения, полученные у пациента из примера 3 до, и, соответственно, после лечения с использованием СВМ197.

Наилучший способ осуществления изобретения

В соответствии с первым аспектом настоящего изобретения предложены белковая молекула для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих, и применение белковой молекулы для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих. В частности, в соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предлагается применение белковой молекулы для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза и/или для лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих.

Патологические состояния, связанные с атеросклерозом, включают: апоплексию, некроз и заболевание коронарных артерий с ишемией и инфарктом. Ишемия также может быть, в частности, почечной, легочной и цереброваскулярной.

Белковая молекула, предпочтительно, имеет идентичность по меньшей мере 90% с последовательностью СВМ197, содержит первый и второй дисульфидный мостик, два фрагмента, оба из которых соединены друг с другом посредством первого дисульфидного мостика, и имеет глутаминовую кислоту в положении 52.

СВМ197 представляет собой токсин, продуцируемый мутантным штаммом СогуиеЬаЫепиш б1р1й1зепае (ИсЫба Т., Рарреийетег АМ 1г, Огеаиу В (1973). И1рШйег1а Юхт аиб ге1а!еб ргсИешк. I 1ко1а1юи аиб ргорегйек о! тШаШ ргсИетк кего1одюа11у гекйеб !о б1рЬ1Ьег1а !охш. 1. Вю1. Сйет. 248: 3838-3844), является, по существу, нетоксичным (см. ИсЫба е! а1. , выше), в настоящее время используется в качестве носителя для детских вакцин (см., в частности, Ваг1о1ох/1 Ο, Варрпой В. I уассшг ИТЕТ, 2001. рр 114, 164), отличается от дифтерийного токсина наличием глутаминовой кислоты вместо глицина в положении 52, и продается (для лабораторного применения) фирмой 81дша-А1бпсй® под номером СА8 92092-36-9 и номером МИЬ МРСИ00166638. Дифтерийный токсин представляет собой токсин, как известно, продуцируемый СогуиеЬаЫепит б1рШйепае. Были описаны последовательность и структура дифтерийного белка (Ие1аиде В 1, Ога/ίη В Е, и СоШег В 1 (1976). Атшо-ааб кецпеисе о! ГгадтеШ А, аи еи71тайса11у асйге ГгадтеШ Ггот б1рЬ(Ьег1а !охш. Ргос №11 Асаб δα И8А 73: 69-72, и: Ра1тадие Р, Сар1аи С, ЬатЬойе Р е! а1. (1985). ТЬе сотр1е!е атто ааб кецпеисе о! б1рЬ(Ьег1а !охш ГгадтеШ В. Согге1айои χνίίΐι ίίκ йр1б-Ьшбшд ргорегйек. ВюсЫт Вюрйук Ас!а 827: 45-50). СВМ197 может быть получен тем же способом, описанным Рагк Н и ХУПйатк А (1 Ехр Меб 1:164-185) с использованием мутантного штамма СогупеЬааегшт б1рШйепа, упомянутого ранее (см. ИсЫба е! а1., выше).

- 2 015863

В соответствии со все более предпочтительными вариантами осуществления, белковая молекула должна иметь по меньшей мере 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99 и 100% идентичность последовательности СКМ197. Где белковая молекула и СКМ 197 демонстрируют одно или более различных положений, предпочтительно по меньшей мере одно из этих различных положений должно быть гомологичным; более предпочтительно, различные положения должны быть гомологичными.

Предпочтительно, белковая молекула содержит первый цистеин в положении 186, а второй цистеин в положении 201. Первый и второй цистеины соединены вместе первым дисульфидным мостиком. Белковая молекула содержит третий цистеин в положении 461, и четвертый цистеин в положении 471. Третий и четвертый цистеины соединены вместе посредством второго дисульфидного мостика.

Белковая молекула действует путем присоединения ее к НВ-ЕСБ (КааЬ С, К1ад8Ьгип Н (1997). Нерапп-Ьшбшд ЕСЕ-йке Сго\\111 Еас1от, ВюсЫт Вюрйук Ле1а 1933: 179-199) и стимуляции иммунной системы таким образом, что притягивает антитела и лейкоциты (Наткоп'к Рг1пс1р1еь οί 1п1егпа1 Мебюте, ηίηΐΗ ебйюп, рр 672-674). НВ-ЕСЕ представляет собой гепаринсвязывающий фактор роста, способный активировать два подтипа (НЕК1 и НЕК4) ЕСЕК (рецептор эпидермального фактора роста) и в основном сверхэкспрессируется при некоторых патологических процессах, таких как атеросклероз (Мтуадага Л, Н1дакЫуата 8, 1<а\\Ша 8, е1 а1. (1995). БосаШабоп οί йератш-Ьшбтд ЕСЕ-йке дго\\Л1 ГасЮг т 1Не δΐηοοίΐι тнзс1е сеШ апб тасгорйадек оГ йитап а1йего§с1егойс р1ас.|ие5. 1 Сйп бпуей 95: 404-411).

Следовательно, предпочтительно, эта молекула способна прикрепляться к НВ-ЕСЕ в условиях строгости и стимулировать иммунологическую реакцию таким образом, чтобы притягивать антитела и/или лейкоциты.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предложены фармацевтический препарат, содержащий белковую молекулу, описанную выше, или один из ее фармацевтически приемлемых производных и эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель.

В соответствии с дополнительным аспектом настоящего изобретения предложен способ лечения атеросклероза и/или лечения или профилактики патологических состояний, связанных с атеросклерозом у млекопитающих. Способ предусматривает введение млекопитающим эффективной дозы белковой молекулы, определенной выше.

Предпочтительно, белковую молекулу вводят путем подкожной инъекции. В этом случае риск возникновения иммунологической реакции немедленного типа у гиперчувствительных пациентов резко снижен.

В соответствии с предпочтительными вариантами осуществления способ включает в себя первую фазу введения, в которой дозу молекулы вводят пациенту каждый первый установленный период. Первый установленный период составляет от двух до четырех дней. Предпочтительно первый установленный период составляет приблизительно три дня. Продолжительность первой фазы введения составляет от десяти до тридцати дней. Предпочтительно продолжительность первой фазы должна составлять приблизительно восемнадцать дней.

Предпочтительно, способ включает в себя вторую фазу введения, которая следует за первой фазой введения. Во второй фазе дозу молекулы вводят однократно каждый второй установленный период. Второй установленный период составляет от одного до трех месяцев. Более предпочтительно, второй установленный период составляет приблизительно два месяца.

Продолжительность второй фазы составляет от четырех до восьми месяцев. Более предпочтительно, продолжительность второй фазы должна быть приблизительно восемь месяцев.

Предпочтительно каждая единичная доза составляет от 0,5 до 4,0 мг, более предпочтительно от 0,5 до 3,6, еще более предпочтительно от 0,5 до 3,0 мг.

Предпочтительно способ включает в себя фазу предварительной обработки, предшествующую первой фазе введения с целью идентификации пациентов с гиперчувствительностью немедленного типа (1ТН) или гиперчувствительностью замедленного типа (ИТН). Фаза предварительной обработки ранее была описана подробно (Βυζζί 8, КиЬЬой И, Βυζζί С, е1 а1. (2004). СКМ197 (попбохю б1рй!йепа 1охт): еГГесй оп абуапсеб сапсег райепК Сапсег 1ттипо1 1ттипо1йег 53: 1041-1048). Состояние 1ТН обнаруживается при развитии зуда и эритематозных реакций в местах инъекций в течение нескольких минут после введения белка, и когда уровень 1дЕ составляет выше 500 нг/мл.

Состояние ИТН обнаруживается при развитии зуда и эритематозных реакций в местах инъекций в течение 24 ч после введения белка.

Полная ссылка дана в настоящем описании к содержанию ссылок (статей, пособий и т.д.), процитированных выше с целью полного описания.

Дополнительные характеристики настоящего изобретения будут очевидны из описания, содержащего далее всего лишь иллюстративные и неограничивающие примеры.

В частности, следующие примеры иллюстрируют то, как применение определенной выше белковой молекулы неожиданно вызывает крайне важное уменьшение атеросклеротических бляшек и, следовательно, улучшение связанных с ними патологических состояний. Следующие примеры также демонстрируют, что определенная выше белковая молекула имеет крайне низкую токсичность (как уже показано ИсЫба е1 а1., выше).

- 3 015863

Пример 1.

СВМ197 разводили до достижения концентрации 3,0 мг/мл в стерильном фосфатном буфере (10 мМ фосфатно-натриевый буфер, рН 7,2), содержащем 10% сахарозу в качестве стабилизатора. Конечный продукт разливали аликвотами в апирогенные флаконы и хранили при -20°С.

Пример 2.

Мужчина в возрасте 68 лет, с 55% стенозом (ультразвуковое исследование) правой внутренней сонной артерии, получал лечение дозой 3,5 мг СКМ197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, подобно первым, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев. Восемнадцать месяцев спустя ультразвуковое цветное допплеровское исследование подтвердило 27% уменьшение первоначального стеноза (все случаи стеноза сонной артерии, цитируемые в настоящем описании, были выявлены и контролировались с помощью ультразвукового прибора, всегда используемого одним и тем же лечащим врачом).

Пример 3.

Мужчина в возрасте 74 лет с 40% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) правой внутренней сонной артерии (смешанная бляшка) и 67,8% стенозом общей левой сонной артерии (мягкая бляшка) получал лечение дозой 3,5 мг СК.М197. полученной как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз (в левой внутренней сонной артерии и правой общей сонной артерии было показано только утолщение интимы). Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, шесть раз. У пациента была гуморальная иммунная реакция и умеренная гиперчувствительность замедленного типа на дифтерийный токсин и СКМ197. После лечения единственным побочным эффектом, проявившимся у пациента, было развитие зудящей эритемы в местах инъекций.

После лечения пациента проверяли с равными промежутками времени в течение 58 месяцев. Через 14 месяцев после начала лечения наблюдалось 8% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии. Через 25 месяцев после начала лечения наблюдалось 15% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии. Через 58 месяцев после начала лечения наблюдалось 71,5% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 93,3% уменьшение стеноза левой общей сонной артерии.

Фиг. 1 относится к ультразвуковому исследованию левой общей сонной артерии, проведенному до исследования. Эта ультразвуковая картина позволила определить общую площадь сечения артерии 0,59 см², окружность целого сечения 2,8 см, площадь свободного кровотока (просвета) 0,19 см², процент свободной площади (просвета) 32,2% и процент площади стеноза 67,8%.

Фиг. 2 относится к ультразвуковому исследованию левой общей сонной артерии, проведенному через 58 месяцев после лечения. Эта ультразвуковая картина позволяет определить общую площадь сечения артерии 40,62 мм², площадь свободного кровотока (просвета) 38,68 мм², процент свободной площади (просвета) 95,5% и процент площади стеноза 4,5%.

Пример 4.

Женщина в возрасте 74 лет с 65% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) правой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) и 40% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получала лечение дозой 1,7 мг СКМ197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили каждые два месяца, в течение шести месяцев.

У пациентки не было иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина и СКМ197.

Через восемь месяцев после начала лечения наблюдалось 46% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 50% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии.

Пример 5.

Мужчина в возрасте 79 лет с 59% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) правой внутренней сонной артерии и 20% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) левой внутренней сонной артерии (мягкая бляшка и твердая бляшка, соответственно) получал лечение дозой 1,7 мг СВМ197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев.

У пациента не было иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина и СК.М197.

Через восемь месяцев после начала лечения наблюдалось 90% уменьшение стеноза правой внутренней сонной артерии и 30% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии.

Пример 6.

Женщина в возрасте 65 лет с 60% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) правой внутренней сонной артерии и 55% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получала лечение дозой 1,7 мг СВМ197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев.

У пациентки не было показано иммунокомпетентности в отношении дифтерийного токсина и СВМ197.

Через шестьдесят месяцев после начала лечения наблюдалось 30% уменьшение стеноза внутренней правой сонной артерии и 25% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии.

Пример 7.

Женщина в возрасте 78 лет с 60% стенозом (ΝΛδί,ΈΤ) правой внутренней сонной артерии и 40%

- 4 015863 стенозом (ΝΆδΟΕΤ) левой внутренней сонной артерии (смешанные бляшки) получал лечение дозой 3,5 мг СВМ197, полученной, как описано в примере 1, и вводимой через день шесть раз. Следующую дозу, как и первые, вводили пациенту каждые два месяца, в течение шести месяцев.

У пациентки была сильная гуморальная иммунная реакция на дифтерийный токсин и СКМ197.

Через шестьдесят месяцев после начала лечения наблюдалась 40% уменьшение стеноза внутренней правой сонной артерии и 30% уменьшение стеноза левой внутренней сонной артерии.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза у млекопитающих.

2. Применение СКМ197. по п.1, где молекула идентична по меньшей мере на 95% последовательности 3. Применение СКМ197. по п.2, где молекула идентична по меньшей мере на 97% последовательности 4. Применение СКМ197. по п.3, где молекула идентична по меньшей мере на 98% последовательности 5. Применение по п.4, где молекула идентична по меньшей мере на 99% последовательности

СКМ197.
6. Применение по любому из предыдущих пунктов, где в том случае, когда молекула и СКМ197 имеют одно или более различных положений по меньшей мере одно из этих различных положений представляет собой гомологичное положение.
7. Применение по п.6, где все различные положения являются гомологичными.
8. Применение по п.5, в котором молекула представляет собой СКМ197.
9. Применение по любому из предыдущих пунктов, где молекула содержит первый цистеин в положении 186 и второй цистеин в положении 201; первый и второй цистеин соединены вместе первым дисульфидным мостиком.
10. Применение по любому из предыдущих пунктов, где молекула содержит третий и четвертый цистеин в положении 461 и 471 соответственно, соединенные вместе вторым дисульфидным мостиком.
11. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения атеросклероза у млекопитающих, причем белковая молекула обладает способностью прикрепляться к ΗΒ-ΕΟΕ в жестких условиях и стимулировать ответ иммунной системы таким образом, чтобы притягивать антитела и/или лейкоциты.
12. Применение по п.11, в котором молекула определена в соответствии с одним из пп.1-10.
13. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики апоплексии у млекопитающих.
14. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики инфаркта у млекопитающих.
15. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики патологических состояний коронарных артерий у млекопитающих.
16. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики некроза у млекопитающих.
17. Применение белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52, для получения фармацевтического препарата для лечения и/или профилактики ишемии.
18. Применение по одному из пп.13-17, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12.
19. Способ лечения атеросклероза у млекопитающих, причем способ предусматривает введение

- 5 015863 указанным млекопитающим эффективной дозы белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52.
20. Способ по п.19, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12.
21. Способ лечения патологического состояния у млекопитающего, выбранного из апоплексии, патологий коронарных артерий, некроза, ишемии, предусматривающий введение указанному млекопитающему эффективной дозы белковой молекулы, имеющей идентичность по меньшей мере 90% последовательности СКМ197, содержащей два дисульфидных мостика и два фрагмента, соединенных вместе первым дисульфидным мостиком, имеющей глутаминовую кислоту в положении 52.
22. Способ по п.21, где белковая молекула определена в соответствии с одним из пп.2-12.
23. Способ по п.19 или 21, где молекулу вводят путем подкожной инъекции.
24. Способ по одному из пп.19-23, причем указанный способ включает в себя первую фазу введения, где дозу молекулы вводят пациенту каждый первый установленный период с начальной продолжительностью от десяти до тридцати дней, причем первый установленный период составляет от двух до четырех дней.
25. Способ по п.24, где продолжительность первой фазы введения составляет приблизительно восемнадцать дней.
26. Способ по п.24 или 25, включающий в себя вторую фазу введения, где дозу молекулы вводят однократно каждый второй установленный период, причем второй установленный период составляет от одного до трех месяцев, а продолжительность второй фазы введения составляет от четырех до восьми месяцев.
27. Способ по любому из пп.24-26, где доза составляет от 0,5 до 4,0 мг.
28. Способ по п.27, где доза составляет от 0,5 до 3,0 мг.