EA014512B1

EA014512B1 - Бактерицидная композиция

Info

Publication number: EA014512B1
Application number: EA200701445A
Authority: EA
Inventors: Роберт Холладэй; Уилльям Меллер; Дилип Мехта; Джулиана Х. Дж. Брукс; Растам Рой; Марк Мортенсон
Original assignee: АМЕРИКАН СИЛВЕР, ЭлЭлСи; ГР ИНТЕЛЛЕКЧУАЛ РЕЗЕРВ, ЭлЭлСи
Priority date: 2005-01-05
Filing date: 2005-12-30
Publication date: 2010-12-30
Also published as: LV13745B; JP5337928B2; JP2008526851A; EE05508B1; EE200700041A; KR101339533B1; KR20080014728A; EA200701445A1

Abstract

Описана бесцветная композиция, содержащая частицы металла (например, наночастицы серебра) и воду, в которой указанные частицы содержат внутреннюю часть из элементного металла (например, серебра) и наружную часть из оксида металла (например, одного или нескольких оксидов серебра), в которой наночастицы металла присутствуют в воде на уровне примерно 5-40 ч./млн, и при этом композиция проявляет значительные противомикробные свойства. Описаны способы применения композиции. Композиция может быть включена в гидрогель, по существу, без потери противомикробных свойств. Также описаны различные содержащие металл композиции с неожиданной биологической эффективностью.

Description

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к новым смесям серебро/вода (иногда называемым наночастицами серебра, диспергированными в воде) и, более конкретно, к новым композициям и/или структурам смесей серебро/вода, гидрогелям серебра, новым композициям на основе серебра в комбинации с современными антибиотиками и различными лигандами, связанными с ионами серебра, гелям серебра, основанным на некоторых исходных смесях серебро/вода, ионам серебра и/или металлу(ам), связанным/находящимся в некоторых клатратах, таких как глины и/или цеолитные материалы, и к способам получения и применения указанных композиций в качестве средств против различных организмов (включая некоторые вирусы), опасных для здоровья или самочувствия людей и/или животных или других организмов. Кроме того, в данной публикации также описаны другие металлы в дополнение к серебру, и во многих случаях они могут быть использованы взаимозаменяемо с серебром. Также описаны различные комбинации и концентрации предлагаемых в изобретении композиций.

Уровень техники

Хорошо известно, что некоторые препараты серебра проявляли бактерицидные свойства. Серебро использовали в качестве бактерицидного средства и в качестве антибиотика до того, как были созданы современные антибиотики. В прошлые века пользователи соскабливали частицы серебра в питьевую воду или окунали целые серебряные предметы в питьевую воду с целью поглощения серебра при питье воды. Кажется вероятным, что практика потребления пищи из серебряной посуды (т.е. столового серебра) могла быть результатом убеждения в том, что серебро обладает целебными свойствами.

Может быть много причин того, что введение серебра, суспендированного в растворе, может улучшать здоровье человека.

Вероятно, что такой раствор работает таким образом, что он ингибирует рост бактерий, вирусов и других нежелательных организмов, а также уничтожает такие существующие бактерии, вирусы и другие организмы. Также возможно, что композиция серебра может обладать противовоспалительным действием, достаточным, например, для уменьшения опухания, осложнений при ожогах и некоторых симптомов астмы.

Первый вариант осуществления настоящего изобретения относится к применению композиции серебра в воде для лечения болезней человека (или животных). Один вариант осуществления изобретения относится к композиции серебра, содержащей наночастицы серебра (например, большинство из которых имеют диаметр 10-50 нанометров), и которые в предпочтительном варианте могут содержать внутреннюю часть из металлического серебра и внешнее покрытие или внешнюю часть, отличающуюся от указанной внутренней части (например, покрытие из ионного серебра, одно или несколько покрытий из оксидов серебра) (например, разные композиции и/или разные фазы и т.д.), и такие частицы суспендированы в воде (например, в очищенной воде). В следующем предпочтительном варианте по меньшей мере 90% таких частиц имеют диметр 10-50 нм. Предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к композиции серебра, содержащей частицы серебра (включая покрытые оксидом серебра частицы серебра), в которой более 50% количества частиц имеют размер менее 0,015 мкм, и частицы суспендированы с образованием коллоидной суспензии (т.е. не оседают) в воде. Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения относится к схожим частицам, среди которых примерно 95% частиц имеют диаметр 10-40 нм. В следующем предпочтительном варианте примерно 95% частиц имеют диметр 10-30 нм.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение, в общем, относится к применению серебра на уровне 5-40 ч./млн, в воде (но в некоторых случаях менее 5 ч./млн), чтобы убить или блокировать микроорганизмы (включая некоторые вирусы), которые являются опасными для людей и/или животных или других живых организмов. Кроме того, настоящее изобретение в частности относится к композициям, содержащим наночастицы серебра, при этом указанные частицы в предпочтительном варианте содержат, например, внутреннюю часть из элементного серебра и внешнее покрытие или частичное покрытие, или слой, например, из одного или нескольких оксидов серебра (например, ионный оксид серебра, такие оксиды серебра, как Ад₂О, АдО, Ад₄О₄ и т.д.), при этом указанные покрытия из оксида находятся в различных фазовых состояниях (например, Ад₂О имеет моноклинную и/или тетрагональную структуру), и воду, причем частицы серебра находятся в суспензии (например, коллоидной суспензии) в воде на уровне 5-40 ч./млн. Один вариант настоящего изобретения относится к наночастицам серебра (с этого момента далее в описании следует понимать, что использование термина частицы серебра или подобного при обработке согласно электрохимическому способу, описанному в данной публикации, относится не только к элементному серебру, но также к частицам элементного серебра, которые могут иметь частичное или, по существу, полное покрытие из одной или нескольких композиций, такое покрытие(ия) содержит(ат) один или несколько оксидов серебра в смеси частиц), присутствующих в воде (предпочтительно очищенной воде, обсуждаемой в данном описании ниже) в концентрации 5-40 ч./млн, при этом более 50% частиц серебра имеют максимальные размеры менее 0,015 мкм. В предпочтительном варианте большинство частиц имеют диметр 10-40 нм. В более предпочтительном варианте большинство частиц имеют диаметр 10-30 нм. Композиция серебра в воде (а также частицы серебра, экстрагированные в виде дискретных частиц

- 1 014512 из смесей серебро/вода, приготовленных согласно изобретению), а также смеси серебро/вода, приготовленные согласно инструкциям, предлагаемым в изобретении и позже преобразованным в гель, порошок, глину или цеолит (как обсуждается в предпочтительных вариантах в описании ниже), согласно инструкциям, предлагаемым в изобретении, являются очень эффективными противомикробными средствами и противовирусными средствами (и в некоторых случаях также противопаразитарными средствами). Настоящее изобретение также относится к композициям серебра с содержанием 5-40 ч./млн серебра в воде, и согласно способам применения указанные композиции серебро/вода, раскрытые в данном описании, являются очень эффективными в качестве противомикробных средств в случае применения указанных композиций следующим образом: (1) вовнутрь живыми организмами; (2) наружно для живых организмов, а также наружно (или внутренне) на различных поверхностях, как твердых, так и пористых (например, на столешницах рабочего кухонного стола, поверхностях, на которых готовят пищу, оборудовании для приготовления пищи, поверхности в больницах, медицинских инструментах, водоводах (металлических и/или пластиковых), устройствах для фильтрации воздуха и т.д.); и (3) за счет смешивания серебра или композиций серебра в воде с загрязненной водой (например, при обработке сточных вод, воды в водоеме, контейнеров с загрязненной водой, водопроводов и т.д., из которых предпочтительно были удалены крупные частицы твердого вещества перед указанным смешиванием), таким образом происходит процесс очистки воды.

Один предпочтительный вариант настоящего изобретения относится к композициям серебра в воде, приготовленным с использованием модификации устройства и/или способов, описанных в патенте США № 6214299 (патент '299), который специально включен в данное описание в виде ссылки. Кроме того, можно использовать композиции других металлов, таких как, например, медь (и медные сплавы), цинк, платина и титан и их сплавы, и смеси), чтобы получить другие требуемые металлы/композиции согласно способам, предлагаемым в настоящем изобретении, которые также обладают поразительной эффективностью.

Устройство и способ, описанные в патенте '299, были модифицированы и усовершенствованы, чтобы получить композицию серебра согласно настоящему изобретению, и указанный способ более подробно описан ниже в данном описании. По существу, устройство, имеющее электрод, состоящий из восьми серебряных частей, которое описано в патенте '299, модифицировали и масштабировали, чтобы оно подходило для камеры с водой большего объема (например, 75-85 галлонов). Чтобы начать процесс производства композиции серебро/вода в емкости объемом 75-85 галлонов, в камеру помещают примерно 70-75 галлонов воды относительно высокой чистоты (например, фильтрованной воды, воды, обработанной с использованием обратного осмоса, или воды, которая не содержит больших количеств возможных загрязнителей и т.д.), обычно содержащей менее 2 ч./млн общих растворенных твердых веществ или еще более предпочтительно менее 1 ч./млн общих растворенных твердых веществ. К ней добавляют в предпочтительном варианте примерно пять галлонов композиции серебро/вода, полученной в предварительном цикле. Такое инициирование примерно 5 галлонами является полезным, но не обязательным. Инициирование, по существу, обеспечивает достаточное количество проводящих частиц серебра, которые должны присутствовать в камере, для того, чтобы ток мог протекать между разными электродами при достижении достаточного напряжения/тока за относительно короткий период времени. Такое инициирование также приводит к немного меньшим начальным конусам Тейлора, обсуждаемым в данном описании ниже. Камера для воды оборудована подводом воздуха (обычно расположенным близко к нижней части камеры для воды), который обеспечивает протекание потока пузырьков воздуха через жидкость вода/серебро во время ее производства. Было обнаружено, что такой способ приводит к несомненному улучшению смешивания по сравнению с лопастной мешалкой, описанной в патенте '299, что подтверждается некоторыми повышенными зффективностями.

Содержащее электроды устройство (устройства) работает (работают) при напряжениях переменного тока (по меньшей мере вначале) порядка десяти тысяч вольт или приближающихся примерно к десяти тысячам вольт (при этом каждая группа серебряных электродов имеет отдельный источник напряжения), как описано в патенте '299. Напряжения значительно выше десяти тысяч вольт имеют тенденцию давать раствор, который может иметь значительные количества растворенного в нем ионного серебра. Предлагаемая в настоящем изобретении композиция содержит избыток 97% частиц металлического серебра, присутствующих в количестве 5-40 ч./млн с очень небольшим количеством или без ионного серебра, присутствующего в растворе серебро/вода.

Концентрацию серебра определяют согласно способам, которые объяснены ниже. По существу, устройство для производства растворов серебро/вода объемом 75 галлонов главным образом работает непрерывно, и образцы из устройства анализируют вплоть до получения требуемой концентрации серебра в воде в ч./млн. Было обнаружено, что в условиях эксплуатации, описанных в данной публикации, для получения композиции 10 ч./млн серебро/вода требуются примерно одни с половиной сутки работы; для композиции 22 ч./млн серебро/вода требуется примерно трое суток работы, и для композиции 32 ч./млн серебро/вода требуется примерно шесть суток работы. Скорость образования частиц серебра в композициях серебро/вода, по-видимому, тем медленнее, чем выше концентрации частиц серебра пытаются достичь. Когда требуются концентрации серебра в композициях серебро/вода выше 50 ч./млн, то для их дос

- 2 014512 тижения требуется относительно длительный период времени при параметрах обработки, описанных в данной публикации, при этом наиболее высокая концентрация, достигаемая в настоящее время за приемлемый промежуток времени, составляет примерно 50 ч./млн. При необходимости возможны более высокие концентрации серебра. Однако эффективность более низких концентраций частиц серебра против различных патогенов настолько известна, что в настоящее время более высокие концентрации частиц серебра не являются необходимыми.

Все наночастицы серебра в композициях серебро/вода имеют очень сходный общий размер частиц и параметры формы, более подробно описанные ниже в разделе Характеристика, и в отличие от многих обычных композиций коллоидного серебра такие композиции серебро/вода совсем бесцветны и в значительной степени стабильны по отношению к умеренному освещению и изменениям температуры без необходимости в применении каких-либо добавок, способствующих стабильности (которые требуются и/или применяются в случае многих препаратов коллоидного серебра известного уровня техники). Предполагается, что используемые компоненты и стадии коммерческого способа дают композицию серебро/вода, которая отличается от других продуктов, известных как коллоидное серебро, таким образом, который приводит к тому, что композиции серебро/вода обладают более высокой эффективностью. Некоторые заметные отличия физических свойств (например, размер частиц, состав, спектроскопическая картина и т.д.) новых композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению обсуждаются в данном описании более подробно ниже.

Композиции серебро/вода согласно изобретению также являются в значительной степени химически неактивны по отношению ко многим добавляемым к ним веществам, включая, например, отдельно или в комбинации (1) пероксид водорода, (2) динатрий-ΕΌΤΑ (динатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты), которая в действительности может действовать в качестве усилителя композиций серебро/вода (т.е. может делать композиции серебро/вода еще более эффективными), (3) йод (например, повидон-йод, который в некоторых случаях может проявлять некоторую слабую реактивность), который может помогать композициям серебро/вода быть еще более эффективными против множества патогенов и (4) различные коммерчески доступные антибиотики (которые фактически могут приводить к некоторым синергетическим эффектам, возникающим между композициями серебро/вода и антибиотиками, таким образом приводя к возможности реализации новой и очень необходимой комбинированной терапии). Соответственно, множество дополнительных материалов или веществ можно использовать в комбинации (например, добавленными или доставляемыми вместе) с новыми композициями серебро/вода согласно настоящему изобретению, чтобы усилить синергетическим образом требуемые эффекты, которые каждый материал может проявлять отдельно. В частности, во многих случаях (например, в комбинациях с антибиотиками) полученное в результате комбинированное действие является синергетическим и превышает отдельные аддитивные эффекты каждого материала или вещества при комбинировании (например 2+2=6). Конечно, некоторые возможные добавки будут делать новые композиции подходящими только для местных или поверхностных обработок вследствие их возможной токсичности внутри биологических организмов (например, человека или животных). Количество необходимой добавки может варьировать в зависимости от многих обстоятельств, включая конкретную болезнь (например, вызванную вирусом, бактерией, паразитом и т.д.) или инфекцию, количество других материалов, присутствующих кроме добавок и т. д. Однако точное необходимое количество добавки могут определить специалисты в данной области посредством обычного экспериментирования. Кроме того, концентрация смеси серебро/вода также может влиять на количество требуемой добавки, что также могут определить специалисты в данной области посредством обычного экспериментирования.

Одним примером требуемой добавки является пероксид водорода. Пероксид водорода является известным дезинфицирующим средством. Обнаружено, что пероксид водорода синергетически взаимодействует с предлагаемыми композициями серебро/вода согласно изобретению. Пероксид водорода доступен в концентрациях например 30 мас.% (мас.%, на объем или массовый процент) или еще более высоких. Хотя удобны более высокие концентрации, предпочтительные концентрации, используемые в композициях серебро/вода согласно настоящему изобретению, по-видимому, составляют 30% или ниже и более предпочтительно находятся в диапазоне примерно от 1 до 5 мас.%.

Один предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к композициям, содержащим от 5 до 40 ч./млн частиц серебра, от 1 до 3 мас.% пероксида водорода и остальную часть воды (например, фильтрованной или в значительной части очищенной воды). Другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является применение и способ применения композиций, содержащих от 10 до 40 ч./млн серебра и от 1 до 3 мас.% пероксида водорода в воде в качестве противомикробных средств.

Другим примером добавки, которая положительно работает в случае композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению, является динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, также известная как натрий-ΕΌΤΆ (натрий ЭДТА) или динатрий-ΕΌΤΑ (оба термина иногда встречаются в литературе), которая может иметь следующую структурную формулу:

(СН;\ (СН2СООН) СН;СОО\а);-2Н;О.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения небольшое количество (напри

- 3 014512 мер, 0,5-10 ч./млн, или более предпочтительно 0,5-5 ч./млн, или еще более предпочтительно примерно 0,5 ч./млн) динатрий-ΕΌΤΛ добавляют или доставляют с композициями серебро/вода согласно настоящему изобретению. В таком варианте, по-видимому, добавление даже небольшого количества динатрийΕΌΤΛ повышает эффективность (например, усиливает бактерицидные, дезинфицирующие и/или противомикробные свойства) композиции серебро/вода. Не имея намерения быть связанными с какой-либо конкретной теорией и объяснением, возможно, что динатрий-ΕΌΤΛ может увеличивать проницаемость клеточной стенки, что может повышать общую эффективность композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению. Другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является применение и способ применения композиций, содержащих от 10 до 40 ч./млн серебра и 0,5-10 ч./млн динатрий-ΕΌΤΛ в воде, в качестве противомикробного средства, бактерицидного средства, противовирусного средства и/или дезинфицирующего средства.

Другим примером добавки, которая положительно работает в случае композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению, является повидон-йод. Йод является хорошо известным в медицине профилактическим средством в борьбе против широкого круга патогенов. Йод коммерчески доступен в различных концентрациях, но обычно используемой и предпочтительной является концентрация 10%. В данном предпочтительном варианте осуществления изобретения синергетическая комбинация из 25-50 об.% смеси серебро/вода замещается 10% раствором йода. Хотя возможны некоторые реакции между смесью серебро/вода и йодом, на основании экспериментальных результатов, обсуждаемых в данном описании далее, очевидно, что синергетическая комбинация смеси серебро/вода с повидон-йодом может функционировать в качестве местного дезинфицирующего средства (например, в виде мази) и/или в качестве профилактического средства против инфекции при порезах, ожогах и/или царапинах и т. д. Другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является применение и способ применения композиций, содержащих от 10 до 40 ч./млн серебра и повидон-йод в воде, в качестве противомикробного средства, бактерицидного средства, противовирусного средства и/или дезинфицирующего средства.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения используют композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению в комбинации с различными коммерчески доступными антибиотиками, применяя способ, известный как комбинированная терапия. Комбинированная терапия приобрела огромный интерес вследствие того, что в последние два десятилетия устойчивость к антибиотикам получила широкое распространение и стала предметом огромного беспокойства во всем мире. Инфекции, вызванные грамотрицательными бактериями, такими как Εδοίιοποίιία сой, К1сЬ51с11а. Рто1еи8, 8Ыде11а и Ркеибошопак, стали причиной все большего беспокойства, так как указанные организмы приобрели множественную лекарственную резистентность к антибиотикам. Недавнее исследование картины резистентности грамотрицательных клинических изолятов, вызывающих больничные инфекции, показало, что большинство изолятов резистентны к обычным антибиотикам, подобным ампициллину, гентамицину, хлорамфениколу, котримоксазолу и цефалоспоринам первого и второго поколения. Также примерно 70% таких изолятов были резистентны к ципрофлоксацину. В данном варианте осуществления изобретения смеси серебро/вода (либо комбинируемые в виде жидкости, либо высушенные и добавленные в виде твердого вещества с образованием, тем самым, например, порошка, иногда называемого в данном описании 8ί1άιΐ5ΐ) при комбинировании с различными антибиотиками проявляли синергизм, а не просто аддитивные свойства. Анализ способом шахматной доски показал, что комбинирование некоторых антибиотиков со смесями серебро/вода приводило к тому, что антибиотики были в несколько раз более эффективными, чем серебро отдельно (например, смеси серебро/вода в комбинации с амикацином и цефоперазоном имели индекс Р1С примерно 0,1875, по сравнению с двумя антибиотиками, используемыми в комбинации друг с другом, что приводило к индексу Р1С 0,625, в том случае, когда обе комбинации применяли, например, против МК8Л (резистентные к метициллину 81арйу1ососси5 аитеик)), как более подробно обсуждается в данном описании ниже. Другим предпочтительным вариантом осуществления настоящего изобретения является применение и способ применения композиций, содержащих от 10 до 40 ч./млн серебра и различные антибиотики, в качестве противомикробного средства и/или бактерицидного средства и/или противовирусного средства при лечении, называемом комбинированной терапией. Точное количество (и концентрацию) смесей серебро/вода согласно настоящему изобретению, которое может быть добавлено к обычной терапии антибиотиками, является предметом обычного экспериментирования. В частности, конкретное заболевание, подвергаемое лечению курсом конкретного антибиотика (а также эффективность антибиотика против патогена), будет влиять на количество и концентрацию требуемой смеси серебро/вода.

Хотя ниже представлено большое количество тестов, в которых использовали растворы серебро/вода отдельно или в комбинации с различными добавками, в данном описании также показано, что некоторые наполнители могут значительно улучшать результаты, получаемые с использованием растворов серебро/вода в различных ситуациях. В частности было обнаружено, что приготовление водной композиции серебро/вода в виде полутвердого гидрогеля (иногда называемого в данном описании 811де1, или другого варианта, называемого ЗПбетш), или даже листов такого материала, значимо увеличивает ее эффективность в случае некоторых применений. Гидрогели обычно являются гидрофильными гелями,

- 4 014512 получаемыми добавлением некоторых гидрофильных, органических полимеров к водному раствору - в случае раствора, содержащего раствор серебро/вода согласно изобретению. Однако допускается, что другие растворы коллоидного серебра могут быть преобразованы в гидрогели согласно инструкциям, имеющимся в данном описании, и хотя такие гидрогели могут быть не такими эффективными как гидрогели согласно настоящему изобретению, такие гидрогели все-таки могут иметь определенную требуемую применимость. Соответственно подразумевается, что настоящее изобретение также охватывает некоторые аспекты, относящиеся в таким гидрогелям. Как можно было ожидать, гидрогель улучшает удержание серебра на определенной площади поверхности, такой как рана на поверхности кожи. В случае лечения ран гидрогель или листовой материал также имеет значительное преимущество в защите тканей, окружающих рану, и предотвращении обезвоживания, указанные факторы часто улучшают заживление ран. Наиболее важно, что гидрогель, по-видимому, несущественно мешает или совсем не мешает противомикробным свойствам наночастиц серебра согласно настоящему изобретению. Кроме того, такие гидрогели функционируют как прекрасные моющие средства для рук или кожи, а также как защитные средства для кожи (например, помещение гидрогелей на руку (руки) так, чтобы в том случае, когда рука (руки) будет (будут) контактировать с патогенами, защитный гель для кожи мог бы способствовать предотвращению инфекций вследствие, например, порезов или царапин, при этом гель функционирует в качестве профилактического средства), что делает гели широко применимыми в области здравоохранения или поддержания хорошего самочувствия.

В частности, считается, что чистые руки являются одним из наиболее важных факторов предотвращения распространения опасных микроорганизмов и резистентности к антибиотикам в условиях учреждений здравоохранения. Наиболее гигиеническими средствами для мытья рук, используемыми в настоящее время в медицине, основаны на спирте и имеют некоторые ограничения. Основным среди таких ограничений является повреждение кожи, которое вызвано многократным воздействием основанных на спирте продуктов. В некоторых случаях также сообщалось о (1) раздражающем контактном дерматите, а также (2) аллергическом контактном дерматите. Это уменьшает соблюдение многими работниками здравоохранения правил применения продуктов для гигиены рук.

Другим фактором, вызывающим неудовлетворение с точки зрения эффективной практики гигиены рук, является то, что поскольку продукты для гигиены рук являются жидкими, их обычно постоянно прикрепляют над умывальником или раковиной. Это приводит к тому, что персонал учреждений здравоохранения вынужден перемещаться от места у кровати пациента к раковине для мытья рук и назад к следующему пациенту. Если бы мытье рук было доступно в виде натирания, указанную проблему можно было бы избежать, таким образом гарантируя лучшее соблюдение процедуры. Показано, что продукты в виде гидрогеля согласно настоящему изобретению уменьшают число бактерий индикаторных организмов на значительное количество в течение длительных периодов времени, что более подробно обсуждается в данном описании, таким образом давая в результате приемлемый альтернативный продукт для гигиены рук. Соответственно также показана широкая применимость продуктов в виде гидрогеля согласно настоящему изобретению в качестве защитных средств для кожи, профилактически защищающих нормальную здоровую кожу от различных патогенов.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения основанный на серебре продукт может по меньшей мере частично или в некоторых случаях, по существу, полностью заменять композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению. В частности, было обнаружено, что серебро-ΕΌΤΑ (или ЛдЕЭТЛ) само по себе обладает очень интересными противомикробными свойствами. В частности, как обсуждается выше, динатрий-ΕΌΤΆ применим в качестве добавки к композициям серебро/вода согласно настоящему изобретению. Однако ΕΌΤΆ (эдетовая кислота) является прекрасным синтетическим хелатирующим агентом. ΕΌΤΆ (С10-Н16-№-08) разрешена для применения в пище человека и ее часто добавляют к безалкогольным напиткам в качестве консерванта. ΕΌΤΆ также использовали в терапии, направленной на хелатирование тяжелых металлов у людей. Однако не рассматривалось применение Α§ΕΌΤΑ в качестве противомикробного средства (например, как такового или в комбинации с другими терапевтическими средствами, такими как описанные в данной публикации средства). Применения для рынка товаров массового производства, например, в промышленности по производству и переработке мясных или белковых продуктов, в мыловаренной промышленности (например, продукты для персонального ухода и для домашнего хозяйства), в сельскохозяйственной или связанной с выращиванием урожая промышленности и в медицинской промышленности, могут быть весьма подходящими для порошкообразной формы стабильного серебра, которая может обеспечить многие полезные для здоровья и самочувствия эффекты (например, как терапевтические, так и профилактические). В частности, Ά§ΕΌΤΆ является легко доступным и относительно простым для производства, хранения и транспортировки. В данном варианте осуществления изобретения предлагается новое применение Ά§ΕΌΤΆ, а именно применение порошка Ά§ΕΌΤΆ для поддержания здоровья или самочувствия человека, растений и/или животных и/или для лечения некоторых заболеваний у животных и человека (например, его можно применять в качестве терапевтического лечения и/или в качестве профилактического средства). ΑΕζο-ΝοΒεΙ в настоящее время производит приемлемый Α§ΕΌΤΑ. Другие хелатирующие серебро или комплексообразующие агенты, например, такие как серебро-ΕΌΌδ, серебро-куркуминат, серебро-берберин и серебро

- 5 014512 тетрациклин, также проявляют противомикробные свойства, и применение таких материалов для здоровья и самочувствия человека или животных также является новым и неизвестным в предшествующем уровне техники. Могут быть использованы различные другие органические структуры для переноса и/или доставки серебра и/или ионов серебра в различные эффективные положения в биологических структурах или на биологических структурах. И снова количество необходимого АдЕЭТА будет варьировать в зависимости от конкретных биологических проблем в случае данной потребности (например, требованиях лечения и/или профилактики).

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения дополнительные основанные на серебре неорганические продукты могут по меньшей мере частично или в некоторых случаях, по существу, полностью заменять композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению. В частности, серебро (например, ионы серебра, металл серебра, Ад+) может быть регулируемым образом связано или фиксировано, например, на слое глины или между слоями глины и/или в ячейках в цеолитах. Такое фиксирование может происходить посредством регулирования заряда, например, слоя силиката, заряда ячейки цеолита, а также расстояний между слоями или размера ячейки цеолита. В этом отношении серебро может быть закреплено или связано, тесно или относительно свободно, в зависимости от конкретного применения для здоровья или самочувствия и точки взаимодействия между серебром и биологическим объектом (например, на поверхности биологического объекта или во внутренней части или с комбинацией внутренних частей и т.д.). Соответственно, получаемые в результате продукты могут включать продукты, которые являются довольно текучими, и поэтому их можно пить или распылять; а также продукты, которые являются гелеобразными или пастообразными, и их можно распределять по поверхностям подобно гелям и пастам.

Любой из металлов, обсуждаемых в данном описании, может удерживаться в кристаллическом или аморфном клатрате, состоящем из одного или нескольких атомарных слоев кислорода или кислородсодержащих молекул. Показано, что некоторые структуры металл/клатрат обладают неожиданной эффективностью. Кроме того, в дополнение к серебру, включенному в структуру оксидного слоя (например, глины) и каркасы (например, цеолиты), также можно использовать силикаты, фосфаты и оксиды, такие как гидротальциты. Более того, желательные глины или семейство слюд, которые могут быть использованы в настоящем изобретении (и которые способны иметь разные поверхностные заряды и/или разные расстояния между слоями), включают, например, иллиты, монтмориллониты, хлориты и вермикулиты.

Глины или слюды, а также цеолиты очень желательны в качестве переносчиков ионов металла(ов) по нескольким причинам, включая то, что многие встречаются в природе или их легко получить, частицы можно поддерживать в желательном диапазоне коллоидного размера, который делает возможным, например, их суспендирование в жидкостях (например, воде), и обычно они биологически очень благоприятны (т. е. имеют мало или не имеют побочных эффектов). В этом отношении, после того как серебро помещают, например, в глину или клатрат цеолита, затем молекулы нагревают до умеренных температур (например, 100-200°С), чтобы фиксировать серебро с клатратом или в клатрате. Все указанные материалы могут быть получены в широком диапазоне вязкости от очень текучих до очень вязких.

В общем, электронные слои в элементах, таких как катионы, в любом данном валентном состоянии могут быть изменены, когда такой катион элемента координируется различными анионами. В частности, чем более ковалентна связь, тем больше могут быть изменены энергетические уровни. Очень вероятно, что изменения, от небольших до умеренных, в электронной структуре серебра будут происходить в том случае, когда серебро окружают (или координируют) различные количества оксид-ионов. Такое изменение электронной структуры в случае катионов, таких как катионы серебра, должно происходить в любых различных структурах оксидов серебра. Кроме того, существует более общий способ, посредством которого серебро может быть помещено в кислородный клатрат или ячейку. В этом отношении, при замене, например, катиона натрия в структуре катионом серебра, ионы натрия могут сидеть в пригодных для замены полостях или пространствах (например, либо на слоях, либо между слоями глины или каркасах цеолитов). В общем, способность одного материала заменять катионы известна как его СЕС или катионообменная способность. Единицы СЕС обычно называют мэкв./100 г или миллиэквивалентами на сто грамм. В общем, чем выше число СЕС, тем больше должна быть способность материала принимать катионы (например, катионы серебра). Соответственно, многие координационные соединения, в которых серебро координировано атомами кислорода, могут играть роль носителя серебра (или других металлов) и таким образом способны действовать в качестве терапевтических средств сами по себе или в комбинации с другими терапевтическими средствами.

Кроме того, металл серебра или ионы серебра, включенные в силикагель посредством диффузии и сушки, также представляют собой желательные механизмы доставки металла(ов) согласно настоящему изобретению.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения комбинации указанных выше частиц, органических и/или неорганических структур можно использовать, чтобы положительно влиять на здоровье и самочувствие человека и животных. В частности, частицы металла согласно изобретению можно использовать отдельно, как обсуждается выше. Кроме того, частицы металла можно комбинировать, например, с органическими соединениями, обсуждаемыми выше (например, АдЕЭТА). Кроме того,

- 6 014512 ионы металла согласно настоящему изобретению можно комбинировать с любыми неорганическими соединениями (например, глинами или цеолитами). Кроме того, ионы металла согласно настоящему изобретению можно комбинировать как с органическими молекулами (например, Ά§ΕΌΤΛ), так и неорганическими молекулами (например, глинами или цеолитами). Такая комбинация металлов серебра или системы доставки ионов серебра могут быть сконструированы так, чтобы, например, внутреннее поглощение любой из указанных выше систем доставки серебра могло приводить к доставке серебра, например, в разные части организма. В частности, например, у человека некоторая часть серебра может поглощаться во рту, на протяжении пищеварительного тракта, а также на протяжении толстого и/или тонкого кишечника и т.д. Кроме того, в зависимости, например, от количества глины (глин) или цеолита(ов) относительно воды (а также различных гелеобразующих соединений, описанных в данной публикации) полученный в результате продукт(ты) согласно настоящему изобретению может варьировать от очень жидкого (с низкой вязкостью) до очень вязкого (с высокой вязкостью). В этом отношении, в общем, чем больше глины или цеолита присутствует относительно воды (а также гелеобразующего агента), тем более вязким является конечный продукт.

Подробное описание изобретения

Следующее описание приведено для того, чтобы дать возможность любому специалисту в данной области осуществить и применить изобретение и чтобы описать наилучшие способы осуществления изобретения, предлагаемые автором изобретения. Однако специалисты в данной области легко смогут представить различные модификации, так как общие принципы настоящего изобретения специально определены в данном описании, чтобы получить улучшенную композицию серебро/вода (иногда называемую в данном описании как наночастицы серебра, диспергированные в воде), которая может быть использована сама по себе или в комбинации (например, смешанная или доставляемая, по существу, вместе) с другими описанными веществами, и которая может быть образована в виде различных композиций, являющихся гидрогелями или пастами, которые все проявляют значительные способности убивать патогены человека и/или животных, как ίη νίνο, так и ίη νίίτο.

В целом настоящее изобретение относится к новому способу уничтожения или повреждения микроорганизмов, которые являются опасными для человека и/или животных, посредством применения наночастиц серебра в воде в концентрации от 5 до 40 ч./млн серебра; или активных частиц серебра, находящихся, например, в Ά§ΕΌΤΆ и/или других соединениях, обсуждаемых в данном описании. В зависимости от применения и/или присутствующих добавок композицию серебро/вода можно применять внутренне или наружно. В зависимости от применения композиция серебро/вода также может содержать различные требуемые добавки, многие из которых специально не перечислены в данном описании, но будут очевидны для специалистов в данной области как применимые.

Краткое описание фигур

На фиг. 1-6 показаны ПЭМ-микрофотографии при разных увеличениях частиц серебра, образованных в композициях серебро/вода, полученных согласно настоящему изобретению.

На фиг. 7а-76, показаны ПЭМ-микрофотографии, полученные в процессе другой ПЭМ и с использованием другого способа, отличного от способа, применяемого в исследовании, показанном на фиг. 1-6; и на фиг. 7е показан спектр ЭДРС (ЭДРА) частиц серебра, взятых из композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению.

На фиг. 8 показана картина дифракции электронов частицы серебра из композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению.

На фиг. 9 представлены три СЭМ-микрофотографии, которые вместе показывают возможное повреждение электронным лучом частиц серебра, взятых из композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению.

На фиг. 10 показана СЭМ-микрофотография нового серебряного электрода перед использованием в способе согласно настоящему изобретению.

На фиг. 11, 12 и 13 показан элементный анализ, проведенный с использованием ΕΌ8, частей 1, 2 и 3, соответственно, показанных на фиг. 10.

На фиг. 14 показана СЭМ-микрофотография рабочего конца электрода, используемого для производства композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению.

На фиг. 15 и 16 показан элементный анализ, проведенный с использованием ΕΌ8, частей 1 и 2, соответственно, показанных на фиг. 14.

На фиг. 17 показана СЭМ-микрофотография при увеличении примерно 3500Х рабочего конца используемого серебряного электрода.

На фиг. 18а и 18Ь представлены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, взятых из жидкой пищевой добавки серебра ΟΝΟ (25 ч./млн).

На фиг. 19а и 19Ь представлены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, взятых из продукта коллоидного серебра, известного как ЕИКсгабо .

На фиг. 20а и 20Ь представлены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, взятых из продукта коллоидного серебра, известного как высокоэффективные биоорганические коллоидные минералы фирмы VI1ашш Аог16 (3 ч./млн).

- 7 014512

На фиг. 21 показано сравнение пяти совмещенных ПЭМ-микрофотографий частиц серебра, на двух из которых представлены частицы серебра согласно настоящему изобретению и на трех из которых представлены частицы серебра из коммерчески доступных препаратов коллоидного серебра.

На фиг. 22а и 22Ь показаны семь разных спектров комбинационного рассеяния, три из которых соответствуют композициям серебро/вода согласно настоящему изобретению, один соответствует чистой воде, один соответствует деионизованной воде, и два соответствуют коммерчески доступным продуктам коллоидного серебра.

На фиг. 23а показаны два спектра комбинационного рассеяния, соответствующие композициям серебро/вода согласно изобретению; и на фиг. 23Ь показаны три спектра комбинационного рассеяния, которые соответствуют трем коммерчески доступным продуктам коллоидного серебра.

На фиг. 23с показан другой спектр комбинационного рассеяния, соответствующий композициям серебро/вода согласно изобретению.

На фиг. 24а показан спектр комбинационного рассеяния композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению; и на фиг. 24Ь показаны три спектра комбинационного рассеяния композиций серебро/вода, цинк/вода и медь/вода.

На фиг. 25 показана диаграмма возможных взаимодействий в дискодиффузном тесте в отношении синергии против бактерий.

На фиг. 26 показаны титрования способом шахматной доски и графики, изображающие аддитивные, синергетические и антагонистические эффекты в комбинированной терапии.

На фиг. 27 показаны фотографии чувствительности изолятов ΜΌΒ к смесям 10 ч./млн серебро/вода.

На фиг. 28 показаны фотографии действия комбинаций антибиотиков на ΜΒ8Ά.

На фиг. 29 показаны фотографии действия комбинаций антибиотиков на Е. сой.

На фиг. 30 показаны фотографии действия комбинаций антибиотиков на Ркеиботопак.

На фиг. 31 показан график сиюминутного приложенного напряжения и концентрации серебра в данный момент времени в виде функции времени процесса в ходе процесса образования композиции серебро/вода.

На фиг. 32 показан график концентрации серебра в данный момент времени в виде функции времени процесса, полученный с использованием способов атомно-абсорбционной спектроскопии и измерений электрической проводимости, соответственно. На указанной фигуре также показана концентрация серебра через 32 часа получения и после гомогенизации.

На фиг. 33 показан график приложенного в данный момент времени напряжения, коэффициента мощности и концентрации серебра в виде функции времени процесса в ходе процесса образования композиции серебро/вода.

Фиг. 34 является графиком, показывающим потерю влаги 8ΙΕΌΕΒΜ.

Фиг. 35 является графиком, показывающим поглощение влаги 8ΙΕΌΕΚΜ.

Фиг. 36 является фотографией, показывающей антибактериальную активность хелатов серебра (АдЕБТА производства Акхо-№Ье1) против Ркеибошопак аетидшока (ΜΌΒ).

Фиг. 37 является фотографией, показывающей антибактериальную активность хелатов серебра (АдЕБТА производства А1рйа Сйешкак) против Ркеибошопак аетидтока (МБР).

Фиг. 38 является фотографией, показывающей чувствительность Е. сой (МБР) к δΙΕΌϋδΤ.

Фиг. 39 является графиком, показывающим противовирусную активность δΙΕΌϋδΤ в виде функции времени воздействия.

Фиг. 40 является фотографией центральной тестируемой чашки, показывающей рост бляшек.

Фиг. 41 является фотографией тестируемой чашки, показывающей отсутствие бляшек через три часа и следовательно показывающей активность δΙΕΌϋδΤ против бактериофагов.

На фиг. 42 показано четыре картины дифракции рентгеновских лучей композиции 200 ч./млн серебро/вода согласно изобретению и четыре наложенные на них эталонные записи дифракции рентгеновских лучей (т.е. АдО, Ад₂СО₃, Ад и Ад₂О).

На фиг. 43 показан анализ ТГА Ад₄О₄, а также анализ ДТА Ад₄О₄.

На фиг. 44а и 44Ь показаны СЭМ-микрофотографии, которые соответствуют предлагаемым смесям каолинит/серебро, полученным согласно настоящему изобретению.

На фиг. 45а и 45Ь показаны анализы ЭДРС (ЭДРА), соответствующие микрофотографиям 44а и 44Ь, соответственно.

На фиг. 46 показана СЭМ-микрофотография новой смеси цеолит/серебро, полученной согласно настоящему изобретению.

На фиг. 47 показан анализ ЭДРС (ЭДРА) цеолита Линде 4А, содержащего замещение атомами серебра и полученного согласно настоящему изобретению.

На фиг. 48а показаны УФ-видимые спектры раствора 10 ч./млн серебро/вода и раствора 32 ч./млн серебро/вода в диапазоне длин волн 190-400 нм (оба раствора получены согласно настоящему изобретению); и на фиг. 48Ь показаны УФ-видимые спектры тех же образцов в диапазоне 190-250 нм.

Предпочтительные варианты осуществления изобретения

Неограничивающие предпочтительные варианты представляют собой следующие варианты.

- 8 014512

Композиция, содержащая наночастицы серебра, суспендированные в воде в виде коллоидной суспензии, в которой общее содержание серебра составляет от 5 до 40 ч./млн, при этом указанная композиция убивает или блокирует микроорганизмы, которые являются опасными для человека и/или животных.

Композиция, содержащая наночастицы серебра, суспендированные в воде в виде коллоидной суспензии, в которой общее содержание серебра составляет примерно 10±2 ч./млн, при этом указанная композиция убивает или блокирует микроорганизмы, которые являются опасными для человека и/или животных.

Композиция, содержащая наночастицы серебра, суспендированные в воде в виде коллоидной суспензии, в которой общее содержание серебра составляет примерно 22±2 ч./млн, при этом указанная композиция убивает или блокирует микроорганизмы, которые являются опасными для человека и/или животных.

Композиция, содержащая наночастицы серебра, суспендированные в воде в виде коллоидной суспензии, в которой общее содержание серебра составляет примерно 32±3 ч./млн, при этом указанная композиция убивает или блокирует микроорганизмы, которые являются опасными для человека и/или животных.

Композиция в виде гидрогеля, полученная из предшествующей композиции серебро/вода, содержащей наночастицы серебра, суспендированные в воде в виде коллоидной суспензии, при этом общее содержание серебра в предшествующем материале составляет предпочтительно примерно 32±3 ч./млн (но может быть больше или меньше), и указанная композиция в виде гидрогеля убивает или блокирует микроорганизмы, которые являются опасными для организма человека, и функционирует, например, в качестве очищающего средства для кожи, средства для заживления ран и/или защищающего кожу средства для дезинфицирующего кожу средства.

Следует понимать, что конкретное указание общего количества наночастиц серебра в композиции серебро/вода не полностью конкретизирует материал. Чем более мелкими по размеру приготовлены наночастицы, составляющие композицию, тем большее количество частиц будет представлено при данной концентрации серебра. Кроме того, будет увеличена общая площадь поверхности при данной концентрации серебра. Поэтому размер частиц и диапазоны размера частиц являются важными параметрами для определения эффективной композиции серебро/вода согласно изобретению. Кроме того, покрытие (покрытия), такие как оксидные покрытия (например, частичные или, по существу, полные), на указанных частицах серебра также могут влиять на эффективность композиций серебро/вода согласно изобретению, такие покрытия, по сути, возникают вследствие воздействия условий обработки согласно изобретению. Однако сходные покрытия на частицах серебра, получаемые другими способами (а также других металлов, отличных от серебра, таких как цинк, медь, медные сплавы, титан, платина и их сплавы или смеси), также рассматриваются как входящие в пределы объема настоящего изобретения. Соответственно, всякий раз, когда в данном описании упоминают серебро, также следует иметь в виду применение многих других альтернативных металлов, обсуждаемых в данном описании как проявляющих возможную эффективность, в зависимости от конкретных биологических состояний (например, конкретных патогенов, вовлеченных в такие состояния).

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой более 50% наночастиц серебра имеют максимальный размер менее 0,015 мкм.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой более 75% наночастиц серебра имеют максимальный размер менее 0,015 мкм.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой более 90% наночастиц серебра имеют максимальный размер менее 0,02 мкм.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой более 75% наночастиц серебра имеют максимальный размер более 0,005 мкм.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой более 90% наночастиц серебра имеют максимальный размер более 0,005 мкм, но менее 0,040 мкм.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой наночастицы серебра содержат как серебро с нулевой валентностью, то есть в состоянии металлического серебра (Ад(0)) в ядре или их центральной части, так и по меньшей мере одно покрытие из серебра в ионном окисленном состоянии, выбранном из группы, состоящей из Ад(1), Ад(11) и Ад(Ш), при этом покрытие из АдО, Ад₂О и/или Ад₄О₄ наиболее вероятно присутствует по меньшей мере на части (или, по существу, на всем) ядра из металлического серебра.

Следующим классом вариантов осуществления является любая из описанных выше композиций, в которой частицы серебра содержат как серебро с нулевой валентностью, то есть в состоянии металлического серебра (Ад(0)), так и покрытие из оксида серебра со стехиометрией АдО или Ад2О или другой известной стехиометрией, которое является стабильным в условиях способа, применяемого для получения новых композиций серебро/вода согласно изобретению.

Следующее экспериментальное доказательство показывает, что покрытия из оксида серебра, в дей

- 9 014512 ствительности возникающие по меньшей мере на части частиц согласно настоящему изобретению, по меньшей мере, частично находятся, например, в форме Ад₄О₄, то есть оксида серебра II. В молекуле такого вещества два атома серебра могут быть в состоянии 1⁺ (серебро I), тогда как другие два атома серебра могут быть в состоянии 3⁺ (серебро III). Кроме того, при определенных условиях серебро может присутствовать в состоянии 2⁺ (серебро II), что приводит, по меньшей мере, к частичным покрытиям, например из Ад₂О. Такие покрытия, по сути, являются результатом воздействия условий обработки согласно изобретению (например, таких условий, которые создаются на поверхности контакта электрод/вода и вблизи нее) и могут иметь очень важное значение для общей эффективности композиций серебро/вода согласно изобретению. Точный состав покрытий до настоящего времени было трудно определить, но подробности эксперимента представлены в данном описании ниже в разделе, посвященном характеристике.

Следующим классом вариантов осуществления является комбинация любого из описанных выше вариантов серебро/вода с пероксидом водорода на уровне 1-3 мас.%, пероксида водорода в конечном продукте.

Следующим классом вариантов осуществления является комбинация любого из описанных выше вариантов серебро/вода с динатрий-ЕБТА на уровне 0,5-10 ч./млн в конечном продукте.

Следующим классом вариантов осуществления является комбинация любого из описанных выше вариантов серебро/вода с примерно на 50-75 об.% заменяемым 10% раствором повидон-йода, который заменяет примерно 25-50% смеси серебро/вода в конечном продукте.

Следующим классом вариантов осуществления является комбинация любого из описанных выше вариантов серебро/вода с различными коммерчески доступными антибиотиками (либо в жидкой форме, либо в форме порошка) с получением в результате синергетически эффективных средств комбинированной терапии.

Следующим классом вариантов осуществления являются способы применения всех описанных выше композиций против патогенов человека или животных либо: (1) внутренне, либо (2) наружно, либо (3) и внутренне и наружно.

Следующий класс вариантов осуществления включает применение АдЕБТА для обеспечения здоровья или хорошего самочувствия человека и/или животных.

Следующий класс вариантов осуществления включает применение других основанных на серебре средств, таких как, например, серебро-ЕББ8, серебро-куркуминат, серебро-берберин и серебротетрациклин.

Следующий класс вариантов осуществления включает применение других металлов, таких как цинк, медь, медные сплавы, титан, платина и их сплавы или смеси, взаимозаменяемо с серебром, как в способах получения, так и способах применения, описанных в данной публикации. Для краткости в данном описании преимущественно указано серебро, однако следует понимать, что в равной мере могут быть полезными и другие металлы, описанные в данной публикации.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения дополнительные основанные на серебре неорганические продукты могут, по меньшей мере, частично или в некоторых случаях, по существу, полностью заменять композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению. В частности, серебро (например, ионы серебра, Ад+, серебро в металлическом состоянии) можно регулируемым образом связывать или фиксировать, например, между слоями глины и/или в ячейках в цеолитах. Такое фиксирование может происходить посредством регулирования заряда, например, слоя силиката, заряда ячейки цеолита, а также расстояний между слоями или размера ячейки цеолита. В этом отношении серебро может быть закреплено или связано, тесно или относительно свободно, в зависимости от конкретного применения для здоровья или самочувствия и точки взаимодействия между серебром и биологическим объектом (например, на поверхности биологического объекта или во внутренней части, или с комбинацией внутренних частей и т.д.). Соответственно, получаемые в результате продукты могут включать продукты, которые являются довольно текучими, и поэтому их можно пить или распылять, а также продукты, которые являются гелеобразными или пастообразными, и их можно распределять по поверхностям подобно гелям и пастам. Любой из металлов, обсуждаемых в данном описании, может удерживаться в кристаллическом или аморфном клатрате из одного или нескольких слоев атомарного кислорода или кислородсодержащих молекул. Показано, что некоторые структуры металл/клатрат обладают неожиданной эффективностью. Кроме того, в дополнение к серебру, включенному в структуру оксидного слоя (например, глины) и каркасы (например, цеолиты), также можно использовать силикаты, фосфаты и оксиды, такие как гидротальциты. Более того, желательные семейства глин или слюд, которые могут быть использованы в настоящем изобретении (и которые способны иметь разные поверхностные заряды и/или разные расстояния между слоями), включают, например, иллиты, монтмориллониты, хлориты и вермикулиты.

Глины или слюды, а также цеолиты предпочтительны в качестве переносчиков ионов металла(ов) по нескольким причинам, включая то, что многие встречаются в природе или их легко получить, частицы можно поддерживать в желательном диапазоне коллоидного размера, который делает возможным, например, их суспендирование в жидкостях (например, воде), и обычно они биологически очень благо

- 10 014512 приятны (т.е. имеют мало или не имеют побочных эффектов). В этом отношении, после того как серебро помещают, например. в глину или цеолит, затем молекулы нагревают до умеренных температур (например, 100-200°С), чтобы фиксировать серебро с клатратом или в клатрате. Все указанные материалы могут быть получены в широком диапазоне вязкости от очень текучих до очень вязких.

В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения комбинации указанных выше частиц органических и/или неорганических структур можно использовать, чтобы положительно влиять на здоровье и самочувствие человека и животных. В частности, частицы металла согласно изобретению можно использовать отдельно, как обсуждается выше. Кроме того, частицы металла можно комбинировать, например, с органическими соединениями, обсуждаемыми выше (например, Ά§ΕΌΤΛ). Кроме того, ионы металла согласно настоящему изобретению можно комбинировать с любыми неорганическими соединениями (например, глинами или цеолитами). Кроме того, ионы металла согласно настоящему изобретению можно комбинировать как с органическими молекулами (например, Ά§ΕΌΤΆ), так и неорганическими молекулами (например, глинами или цеолитами). Такая комбинация металлов серебра или системы доставки ионов серебра могут быть сконструированы так, чтобы, например, внутреннее поглощение любой из указанных выше систем доставки серебра могло приводить к доставке серебра, например, в разные части организма. В частности, например, у человека, некоторая часть серебра может поглощаться во рту, на протяжении пищеварительного тракта, а также на протяжении толстого и/или тонкого кишечника и т.д. Например, в зависимости от количества глины (глин) или цеолита(ов) относительно воды (а также различных гелеобразующих соединений, описанных в данной публикации), полученный в результате продукт(ты) может варьировать от очень жидкого (с низкой вязкостью) до очень вязкого (с высокой вязкостью). В этом отношении, чем больше глины или цеолита присутствует относительно воды (а также гелеобразующего агента), тем более вязким является конечный продукт.

Примеры Получение композиции

Композиции серебро/вода могут быть получены согласно способам, указанным в патенте США № 6214299, описание объекта которого специально включено сюда в качестве ссылки.

В предпочтительном способе получения композиции, содержащей серебро, согласно настоящему изобретению используют электрохимическую ячейку, содержащую электроды, и способ включает в себя следующие стадии:

(a) помещение по меньшей мере двух серебряных электродов в контакте с некоторым количеством воды высокой очистки;

(b) подачу электрического тока через серебряные электроды, чтобы тем самым отделить частицы серебра от указанного серебряного электрода в такой степени, которая достаточна для того, чтобы вызвать образование суспендированных частиц серебра в воде; и (c) встряхивание воды во время указанного образования суспендированных частиц серебра, чтобы тем самым диспергировать частицы серебра в более однородной концентрации в указанной воде, так чтобы можно было получить большое количество и, по существу, однородное распределение суспендированных частиц серебра в партии.

В другом предпочтительном способе получения композиции, содержащей смесь серебро/вода, используют электрохимическую ячейку, и способ включает в себя следующие стадии:

(a) создание электрической цепи, содержащей источник тока и первый проводник, электрически соединенный с указанным источником тока, и второй проводник, электрически соединенный с указанным источником тока, при этом указанный первый проводник размещен на расстоянии от указанного второго проводника, и при этом по меньшей мере один из проводников изготовлен из элементного серебра или альтернативно из цинка, меди, медных сплавов, титана, платины и их сплавов и смесей;

(b) замыкание контактов цепи посредством соединения первого проводника и второго проводника с помощью жидкостного резистора;

(c) работа источника тока таким образом, чтобы подать переменный ток одновременно на первый проводник и второй проводник, так чтобы напряжение возрастало и снижалось на первом и втором проводниках, последовательно чередуясь, чтобы таким образом заставить частицы серебра (или другого металла) отделяться от первого электрода и поступать в жидкостный резистор, и становиться диспергированными в суспензии в указанном жидкостном резисторе; и (б) избирательная подгонка электродов посредством их перемещения по направлению к жидкостному резистору, чтобы компенсировать уменьшение длины электрода вследствие постепенного отделения от него частиц серебра, чтобы таким образом предотвратить образование дуги между электродами и указанным жидкостным резистором и чтобы поддерживать требуемую плотность тока на рабочем конце электродов.

Каждая камера или резервуар для воды, в котором получают композиции серебро/вода, имеет источник питания, состоящий из восьми трансформаторов (приемлемым трансформатором для применения

- 11 014512 в настоящем изобретении является РтапсеГоттег, Рат! № 48765), рассчитанный на входное напряжение переменного тока 120 В и на максимальное выходное напряжение переменного тока 10500 В при 30 миллиамперах. Каждый трансформатор предпочтительно оборудован конденсатором на 45 микрофарад (таким как Аетоуох, Рай № М24Р3745МР2), соединенным параллельно через питающий провод трансформатора.

Комбинация трансформатора и конденсатора может быть полезной в некоторых случаях и очень желательной в других. В частности, трансформатор способствует приведению синусоидальных волн мощности переменного тока по напряжению и току в фазу друг с другом. Степень, в которой напряжение и токи находятся в фазе друг с другом, определяется как коэффициент мощности. Чем ближе коэффициент мощности к 1,0, тем ближе совпадают фазы между вольтами и амперами, и тем большая мощность подается на электроды (например, мощность обычно определяют умножением вольт на амперы).

Каждый резервуар оснащен прозрачной крышкой, изготовленной, например, из подходящего полимера, и сконструирован так, чтобы вместить восемь наборов электродов. Каждый набор электродов состоит из фиксированного электрода, изготовленного, например, из пластины 18-каратного серебра, окруженной двумя расходуемыми электродами, изготовленными, например, из 18-каратной серебряной проволоки (чистота 0,9999). Электроды предпочтительно согнуты пополам в середине и на концах, закручены вместе в двойную спираль, чтобы получить требуемую комбинацию напряжения и плотности мощности. Каждый набор электродов питается одним трансформатором.

По мере того, как каждый резервуар заполняют для получения, электроды устанавливают так, чтобы фиксированные электроды находились в хорошем контакте с водой (например, погружены по меньшей мере от 1/3 до 1/2 пластин), а расходуемые электроды были выше поверхности воды. Когда источник питания включен, вода поднимается и образует конусообразную структуру вокруг каждого расходуемого электрода. Такая конусообразная структура известна в литературе как конус Тейлора. Сначала вода является очень чистой и, следовательно, обладает высоким электрическим сопротивлением. Соответственно при использовании, например, трансформатора постоянного тока на 10000 В, напряжение, приложенное к электродам, сначала может быть очень высоким, например, примерно 6500-8500 В, а расходуемые электроды могут быть на 5-10 мм выше поверхности воды, при этом достигается требуемое напряжение и требуемая плотность тока на расходуемых электродах. Это приводит к образованию относительно большого конуса вследствие низкой проводимости воды по сравнению с высокой проводимостью электрода (например, создается сильное поле). Продукт в виде наночастиц серебра образуется по мере того, как частицы серебра удаляются из расходуемых электродов на поверхности контакта воздухвода-серебряный электрод. По мере того, как вода принимает все больше и больше частиц серебра, электрическое сопротивление смеси вода/серебро падает. При постоянном токе или в случае ограниченной по току схемы, приложенное напряжение затем будет падать или уменьшаться как функция времени (см., например, фиг. 31). Соответственно расходуемые электроды, как правило, опускаются ближе к поверхности воды, например могут быть только на 1-2 мм выше поверхности. Простыми словами, конусы Тейлора затем будут намного меньше вследствие меньшей разницы в проводимости между электродами и водой (например, имеется более слабое поле). В общем, расходуемые электроды и/или уровень воды следует соответствующим образом корректировать в ходе процесса получения, чтобы сохранить начальную геометрию. Хотя конусы Тейлора становятся меньше в ходе данного процесса (таким образом отражая, например, переход частиц металла в раствор), небольшие конусы Тейлора все еще будут присутствовать в конце обработки. Воду в каждом резервуаре перемешивают воздухом во время всего процесса, чтобы сохранить гомогенность.

После получения требуемого или целевого количества ч./млн серебра в растворе серебро/вода продукт при желании или необходимости можно прокачать через фильтр с размером пор 1 мкм в один из нескольких очень больших, например, вместимостью 2300-6500 галлонов, сборных резервуаров, и может быть проведен анализ перед разливом продукта во флаконы для отправки груза. Анализ осуществляют способом расщепления, используя нагревание и азотную кислоту, и анализируют с использованием атомно-абсорционного спектрофотометра Реткш-Е1тет Апа1у81 300. Полученную композицию серебро/вода затем можно комбинировать с другими ингредиентами, чтобы получить гидрогель, листовой материал, или можно разлить по флаконам как таковую, или ее можно комбинировать (например, либо в виде жидкости, либо высушенной и добавленной в виде порошка) с другими добавками, которые обсуждаются в данном описании.

Снова обращаясь к фиг. 31, видно, что показано падение напряжения в реальном времени и данные о концентрации серебра как функции времени, соответствующего циклу образования композиций серебро/вода согласно изобретению. Очевидно, что по мере прохождения цикла напряжение снижается, тогда как концентрация серебра возрастает. Также отмечается соответствующее уменьшение размера конусов Тейлора на каждом расходуемом электроде. Однако данные о концентрации серебра на данном графике не следует воспринимать как количественные, а возможно как показательные, из-за проблем отбора образцов и перемешивания (например, смесь серебро/вода может быть не совсем гомогенной в любой момент отбора образца).

Теперь, обращаясь к фиг. 32, видно, что показаны два графика концентрации серебра для одного и

- 12 014512 того же цикла, а также несколько дополнительных точек получения данных о концентрации. Серая линия с квадратами означает концентрацию серебра в данный момент времени (которую определяли атомно-абсорбционной спектроскопией) на основании образца объемом 60 мл, отбираемого пипеткой примерно на средней глубине резервуара и примерно на равном расстоянии от центра и от стенки резервуара. Черная линия с ромбами означает концентрацию серебра в данный момент времени, грубо аппроксимированную предварительно откалиброванным устройством, измеряющим электрическое сопротивление указанной выше аликвоты жидкости объемом 60 мл. В показаниях исходных данных сопротивления вода сначала (т.е. время = нулю) имела электрическое сопротивление примерно 175 кОм-см. В отличие от этого в точке 31 ч цикла смесь вода/серебро имела сопротивление примерно 62,7 кОм-см.

Непосредственно под данными о концентрации/сопротивлении, указанными для точки 32 ч, имеется отдельная точка, представленная в виде квадрата. Эта точка означает концентрацию серебра, которую определяли атомно-абсорбционной спектроскопией после отключения высокого напряжения, но при этом оставляли барботер/мешалку продолжать работать еще в течение 20 ч, чтобы гомогенизировать смесь.

Один из выводов, который можно сделать на основании фиг. 32, заключается в том, что серебро сначала не может быть гомогенно распределено по всему резервуару по мере образования серебра, несмотря на наличие барботера/мешалки, работающей в ходе цикла. Точнее, может существовать некоторый 1ад-период после завершения добавления серебра в раствор, до того как барботер/мешалка сможет подхватить и гомогенно распределить серебро по всему объему воды.

Фиг. 33 представляет собой другой график напряжения и концентрации серебра в данный момент времени как функции времени в ходе цикла получения смеси серебро/вода. На указанном графике, кроме того, показан коэффициент мощности в данный момент времени трансформатора питания. Таким образом, коэффициент мощности начинали регистрировать примерно равным 0,8, он возрастал до максимума примерно 0,97 около 6 ч и снижался примерно до 0,6 примерно через 30 ч. Кроме того, данные напряжение/время математически подгоняли к уравнению у = -2,1333 Ьи(х) + 8,7057, где у соответствует напряжению, и X соответствует времени. Количество ч./млн серебра в воде представлено квадратами и начинается около 1 ч./млн, а достигает максимума примерно 11 ч./млн, примерно через 30 ч (например, вследствие того, что вода не является полностью чистой после фильтрования).

Физическая характеристика

Анализ содержания серебра в композициях серебра согласно настоящему изобретению можно осуществить атомно-абсорбционной спектроскопией в (ацетиленовом) пламени (РЛЛ8), атомноэмиссионной спектроскопией (АЕ8) с индуктивно связанной плазмой (1СР) или другими способами, которые, как известно специалисту в данной области,. чувствительны к серебру в подходящем диапазоне концентраций. Если частицы композиции серебра являются маленькими и однородными по размеру (например, 0,01 мкм или меньше), довольно точный анализ можно осуществить, непосредственно подвергая коллоид атомной абсорбции или 1СР/ЛЕ8. Это связано с тем, что при подготовке образца для атомноабсорбционной спектроскопии происходит ионизация, по существу, всего серебра, что позволяет легко его регистрировать.

Если композиции содержат крупные частицы до 0,2 мкм, предпочтительно использовать способ расщепления. Способ расщепления не обязательно является идеальным для композиций серебра, которые были произведены или хранились в контакте с галогенидами или другими анионными видами, которые могут взаимодействовать с тонко диспергированным серебром, или были комбинированы с белком или другим гелеобразным материалом. Вариант способа расщепления представляет собой следующее:

1. Берут аликвоту объемом 10 мл тщательно перемешанной или подвергнутой встряхиванию композиции серебра, которую необходимо анализировать, и помещают ее в прозрачный поликарбонатный флакон или другую емкость из подходящего материала (обычно флакон) с плотно подогнанной крышкой. Предпочтительный размер 30-100 мл.

2. С помощью микропипетки или капельницы добавляют 0,1 мл азотной кислоты чистой для анализа к композиции серебра во флаконе.

3. С плотно закрытой крышкой на флаконе композицию серебра нагревают, по меньшей мере, примерно при 80°С и предпочтительно примерно при 90-100°С при умеренном встряхивании в течение времени, достаточного для растворения серебра, растворение происходит, по существу, мгновенно.

4. Полученной в результате смеси дают возможность остыть до комнатной температуры с закрытой крышкой. Тщательно встряхивают флакон. При таком способе расщепления также растворяется любой поверхностный слой из оксида серебра, который может присутствовать на частицах серебра.

5. Применяют атомно-абсорбционную спектроскопию, 1СР/ЛЕ8 или эквивалентные способы, чтобы проанализировать содержание серебра в смеси серебра. Предпочтительно будут использовать свежеприготовленный стандарт или стандарты, предпочтительно приготовленные согласно инструкциям производителя оборудования при необходимости с соответствующим разведением.

6. При сообщении результатов необходимо учесть все разведения во время приготовления, включая 1% разведение в результате добавления азотной кислоты.

- 13 014512

Концентрацию серебра в композициях серебро/вода согласно настоящему изобретению, соответствующую данным, показанным на фиг. 31, 32, 33 и т.д., определяли, используя атомно-абсорбционный (АА) спектрометр Регкш Е1тег ААпа1уЧ 300. Образцы композиций серебро/вода согласно изобретению расщепляли описанным выше способом.

Принцип

Система Регкш Е1тег ААпа1у§! 300 состоит из высокоэффективной системы горелки с распылителем ишуегаа1 ОетИр и атомно-абсорбционного спектрометра. Конструкция горелки обеспечивает тепловую энергию, необходимую для диссоциации химических соединений с получением свободных атомов аналита для того, чтобы произошла атомная абсорбция. Спектрометр измеряет количество света, поглощенного на определенной длине волны, используя лампу с полым катодом в качестве первичного источника света, монохроматор и детектор. Дейтериевая дуговая электролампа корректирует фоновое поглощение, вызванное неатомарными частицами в атомном облаке.

Анализ физической/химической формы серебра и композиций серебро/вода

A. Введение.

Образец композиции, номинально содержащий 22 ч./млн серебра в воде, анализировали с использованием времяпролетной масс-спектрометрии вторичных ионов (ΤΟΕ-8ΙΜ8) для определения формы серебра в композиции. В результате установлено, что основная часть серебра существует в виде серебра(0) (то есть металлического серебра), и что существует поверхностное покрытие, которое в виде усредненного состава представляет собой, например, оксид серебра(11) (АдО). Как указано выше, оксид серебра (II) обычно имеет стехиометрическую комбинацию серебра(1) и серебра(Ш).

B. Экспериментальный способ.

Несколько капель композиции, содержащей 22 ч./млн серебра, согласно изобретению упаривали досуха на кремниевой подложке при температуре окружающей среды. Остаток анализировали ΤΟΡ8ΙΜ8, и он обозначен как образец. Эталонное вещество оксид серебра (II) (АдО) анализировали, размещая несколько частиц полученного от поставщика эталонного порошка на кремниевой подложке, и оно обозначено как эталон.

Техника измерения и пролета вторичных ионов с помощью масс-спектрометрии (ΤΟΡ-δΓΜδ) основана на принципе бомбардировки твердого образца импульсным, тонко сфокусированным лучом первичных ионов и проведения последующего анализа вторичных ионов, генерируемых на поверхности образца, с помощью масс-спектрографа, измеряющего время пролета. Такой аналитический способ является поверхностно-чувствительным, извлекающим информацию из слоя, который простирается ниже поверхности примерно до 20-40 А (один ангстрем=1х10^-4 мкм). Способ ΤΟΡ-δ^δ обычно используют в качестве инструмента исследования для идентификации состава неизвестных образцов. Он способен дать количественную оценку, если доступны соответствующие микроаналитические стандарты для калибровки. Такой анализ осуществляли, используя стандартные условия высокого разрешения массспектрометра.

C. Результаты.

Массу отрицательно заряженных ионов получали для эталонного вещества Ад/П^ и образца продукта, соответственно. Область масс-спектра в обоих спектрах показала присутствие более чем одной разновидности оксида серебра, который наиболее вероятно присутствовал по меньшей мере в виде частичного покрытия на частицах серебра. Полученные данные свидетельствуют, что серебро (II) характеризует среднюю степень окисления серебра, присутствующего на поверхности частиц в образце. Сигналы от оксида серебра (например, АдΟ) имеют существенно более высокую интенсивность в эталонном образце по сравнению с образцом продукта, что вызвано, вероятно, тем, что металлическое серебро является доминирующим в образце. Будет понятно, что, по мере того как средний размер частиц в образце уменьшается, отношение серебра к оксиду серебра также будет уменьшаться, поскольку будет присутствовать больше оксида серебра.

Анализ размера, морфологии, состава

Вероятно, что необычная эффективность препаратов серебро/вода, приготовленных согласно изобретению, вызвана зависимостью между поверхностными свойствами/внутренними свойствами частиц (например, оксид/металл) и/или распределением наночастиц серебра по размерам, и/или морфологией наночастиц серебра. Чем меньше средний размер частицы, тем больше площадь поверхности и тем больше вклад конкретной химии поверхности. Однако, если частицы являются чрезмерно маленькими, то может иметь место потеря стабильности и/или появление других взаимодействий, которые могут оказать отрицательное воздействие на продукт. Композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению являются замечательными, поскольку они стабильны, по существу, в чистой воде без поверхностноактивных веществ и т.д. (например, для многих препаратов коллоидного серебра известного уровня техники требуются белки для удерживания частиц серебра в суспензии). Кроме того, композиции серебро/вода, по существу, бесцветны, в то время как другие препараты из коллоидного серебра (особенно с большими размерами частиц) обычно имеют цвет. Указанные свойства являются результатом условий их получения, которые обсуждались в данном описании выше.

Цифровой анализ композиции показал наличие частиц со средним диаметром частиц 0,0106 мкм с

- 14 014512 диапазоном изменения от 0,005 до 0,0851 мкм. Однако анализ распределения частиц по размерам показал, что более чем 95% частиц находятся в диапазоне примерно от 0,005 мкм до примерно 0,015 мкм в диаметре.

Дальнейший анализ частиц выполняли посредством СЭМ, ЭДРС (ЭДРА) и ПЭМ. В частности, композиции серебро/вода сушили и помещали на ЭМ-сетку и исследовали в СЭМ (то есть в сканирующем электронном микроскопе) и в двух различных ПЭМ (то есть просвечивающих электронных микроскопах). Применение указанных устройств для анализа в результате привело к определению распределения частиц по размерам в диапазоне от 10 до 30 нм. Однако была необходима некоторая оценка размера частиц на некоторых из полученных микрофотографиях, так как частицы имели тенденцию к образованию скоплений или агломерации при сушке. Размер высушенных агломератов составлял от 50 до 100 нм. На фиг. 1-6 показаны различные ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, полученных высушиванием композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению. На фиг. 7а-7й показаны различные ПЭМмикрофотографии частиц серебра, полученных согласно настоящему изобретению, причем приведенные микрофотографии получали разными способами. В частности, композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению помещали на С-пленку и исследовали крио-ПЭМ (то есть с помощью другого ПЭМ, отличного от ПЭМ, используемого для получения фиг. 1-6), при температуре примерно -100°С. Таким образом, композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению были, по существу, мгновенно заморожены. Крио-ПЭМ использовали примерно при -100°С и при уровне мощности примерно 100 кВ, и полученные микрофотографии показаны на фиг. 7а, 7Ь и 7с. Представленные фиг. 7а-7с ясно показывают, что средний размер частиц составляет менее 20 нм. Кроме того, на фиг. 7й показан ПЭМанализ в режиме 8АЭ. В общем, представленные ПЭМ-микрофотографии (фиг. 7а-7с) показывают максимальные размеры частиц в виде несгруппированных частиц серебра, равные 15 нанометрам или меньше, и некоторые более мелкие частицы в диапазоне от 3,5 до 5 нм. Анализ картины дифракции, показанный на фиг. 7й, свидетельствует, что частицы являются в основном металлическим серебром, они многократно сдвойникованы и, по существу, не содержат примесей. На приведенных микрофотографиях имеется свидетельство наличия возможного покрытия или оболочки. На фиг. 7е показан ЭДРА-спектр (то есть энергодисперсионный спектр или ЭДРС) частиц серебра, взятых из композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению. На фиг. 7е показано полное отсутствие в серебре примесей металлов (например, Аи, ΡΙ и т.д.). Присутствующая медь содержится в необходимом оснащении микроскопа. Существует свидетельство значительного количества присутствующего кислорода, который может присутствовать в меди, а также присутствовать в качестве покрытия(ий) на небольшой части частиц серебра.

На фиг. 8 показана картина дифракции электронов, полученная для частицы серебра согласно настоящему изобретению. Представленные данные свидетельствуют о присутствии по меньшей мере одной разновидности оксида серебра. Однако приведенные данные являются предметом интерпретации, поскольку на фиг. 9 показано, например, возможное повреждение электронным лучом, происходящее в частицах серебра во время процесса сбора данных. Такое повреждение электронным лучом не было так очевидно при исследовании коллоидного серебра, полученного другими производителями (обсуждаемого ниже в данном описании). Таким образом, сбор данных с использованием методов СЭМ и ПЭМ весьма затруднен, так как энергия электронных лучей способна повреждать (и таким образом изменению) представляющие интерес поверхности любого состава. Таким образом, предпринимали особую осторожность при получении и анализе таких результатов.

На фиг. 42 показаны результаты применения еще одного инструментального средства для определения характеристик. В данном случае применяли способы порошковой рентгеновской дифракции при попытке дополнительно продемонстрировать существование оксидной фазы (фаз). В частности, на фиг. 42 показаны четыре картины дифракции рентгеновских лучей, полученные от четырех различных локальных участков высушенной композиции 200 ч./млн серебро/вода, полученной согласно настоящему изобретению. Кроме того, на четыре картины дифракции рентгеновских лучей наложены четыре эталонные картины дифракции других разновидностей, отличных от чистого металлического серебра. В частности, композицию 32 ч./млн серебро/вода, полученную согласно настоящему изобретению, концентрировали примерно до 200 ч./млн стандартным способом фильтрации воды с использованием обратного осмоса. В частности, композицию серебро/вода согласно изобретению пропускали через систему фильтрации на основе обратного осмоса, при этом сбрасываемая вода из системы фильтрации на основе обратного осмоса содержала значительно более концентрированный компонент серебра. После получения раствора, содержащего 200 ч./млн серебра, такой раствор сушили в условиях потока азота с целью получения порошка, который мог быть подвергнут дифракции рентгеновских лучей. В частности, смесь серебро/вода помещали в чан, чан закрывали пластмассовым листом и вводили азот через один конец сборного узла чан/пластмассовый лист; при этом азот выпускали из противоположного конца сборного узла чан/пластмассовый лист. Температура в устройстве не превышала примерно 75-80°С для сохранения целостности всех компонентов в смеси серебро/вода. После этого достаточное количество высушенного порошка (т.е. полученного из раствора 200 ч./млн) было доступно для проведения анализа дифракции рентгеновских лучей.

Образованные картины рентгеновской дифракции совершенно ясно показывают присутствие по

- 15 014512 меньшей мере четырех отдельных разновидностей. При этом ясно, что набор пиков карбоната серебра расположен примерно при 18-22°. Наиболее вероятно, указанные пики являются следствием процедуры сушки. В этой связи, наиболее вероятно, СО₂ присутствовал в воздухе даже несмотря на то, что были предприняты попытки создания азотного защитного слоя над раствором, содержащим 200 ч./млн серебра, во время процедуры сушки. Кроме того, набор пиков расположен примерно при 33°. Однако каждый из указанных пиков может относиться к оксиду серебра (АдО), карбонату серебра (Ад₂СО₃) и/или оксиду серебра (Ад₂О). Таким образом, не совсем ясно, какие разновидности присутствуют. Кроме того, резко выраженный пик металлического серебра расположен примерно при 38°. Указанный выраженный пик может быть отмечен для каждой из картин рентгеновской дифракции. Однако отмечено, что небольшой пик оксида серебра (Ад₂О) также расположен примерно при 38°. Кроме того, выраженный пик оксида серебра (АдО) имеется примерно при 37° также в комбинации с относительно выраженным пиком карбоната серебра (Ад₂СО₃). Дополнительно отмечается, что пик оксида серебра (АдО) соответствует одной из тетрагональных фаз оксида серебра. Из рассмотрения полученных данных дифракции рентгеновских лучей и их сравнения с существующими файлами в базе данных ясно, что одна или несколько оксидных фаз серебра присутствуют в композициях серебро/вода согласно настоящему изобретению. Возможно, что комбинация оксидов присутствует вследствие применения новых методик обработки согласно настоящему изобретению. Отмечается отсутствие картин дифракции рентгеновских лучей для Ад4О4 при сравнении с картинами дифракции рентгеновских лучей согласно настоящему изобретению.

Однако Ад4О4 действительно существует в качестве коммерческого продукта. В связи с этим образец Ад₄О₄ был коммерчески получен, и для такого порошка выполняли анализ ТГА и ДТА. В частности, на фиг. 43 приведены данные анализа ТГА и анализа ДТА, соответственно. Из кривой ДТА на фиг. 43 ясно, что эндотермический пик для Ад₄О₄ существует примерно при 181°С. Указанный эндотермический пик также соответствует потере массы, показанной на кривой ТГА на фиг. 43. Приведенные экспериментальные измерения соответствуют Ад4О4, который разлагается до Ад2О. Второй очень сильный эндотермический пик наблюдается примерно при 403°С, а также вторая соответствующая потеря массы. Две указанные экспериментальные точки соответствуют Ад2О, который разлагается до металлического Ад.

На фиг. 10 показана СЭМ-микрофотография нового серебряного электрода до того, как он был использован в способе согласно настоящему изобретению. Элементный анализ ЭДРС выполняли на частях электрода, помеченных 1, 2 и 3. Три таких отдельных анализа показаны на фиг. 11, 12 и 13, соответственно. Проведенные исследования показали присутствие, по существу, чистого серебра.

На фиг. 14 показана СЭМ-микрофотография рабочего конца используемого серебряного электрода после того, как он был использован в способе согласно настоящему изобретению. Элементный анализ ЭДРС осуществляли для частей использованного электрода, помеченных 1 и 2. Два таких отдельных исследования показаны на фиг. 15 и 16, соответственно. На фиг. 17 показана СЭМ-микрофотография использованного рабочего конца электрода при большем увеличении (примерно 3500Х). Части 4 и 5 также исследованы в элементном анализе ЭДРС, и также установлено наличие, по существу, чистого серебра.

Сравнение частиц серебра из коммерчески доступных препаратов коллоидного серебра.

Пытаясь понять отличия в эффективности (например, биологической эффективности) композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению по сравнению с известными препаратами коллоидного серебра, исследовали различия в физических свойствах. На фиг. 18а и 18Ь приведены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, которые соответствуют частицам серебра из первого препарата коллоидного серебра, полученного в Сспсга1 Νυίτίίίοη Сеп!ет в 2004 г. и известного на рынке как жидкая пищевая добавка коллоидного серебра ΟΝί (25 ч./млн) (ΟΝΟ'). На фиг. 19а и 19Ь приведены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, которые соответствуют второму препарату коллоидного серебра, известному на рынке как ЕИкегабо. На фиг. 20а и 20Ь приведены ПЭМ-микрофотографии частиц серебра, которые соответствуют третьему препарату коллоидного серебра, известному на рынке как высокоэффективные биоорганические коллоидные минералы фирмы Уйатт \Уог1б (3 ч./млн) (Вюотдатс). На фиг. 21 представлено совмещенное сравнение ПЭМ-микрофотографий частиц серебра из двух композиций серебро/вода согласно изобретению (помеченных как А8АР 20 и А8АР.10) и из трех известных коммерческих продуктов коллоидного серебра, известного как ΟΝΟ', 811уетабо и Вюотдашс, обсуждаемых выше. Четкие различия в размерах и форме частиц видна на приведенных микрофотографиях, таким образом показывающих, что существуют физические, структурные и потенциальные химические различия между различными препаратами коллоидного серебра, которые могут помочь в частичном объяснении различий в биологической эффективности между различным продуктами со сходной общей химией.

Спектроскопическая характеристика Спектроскопия комбинационного рассеяния

Дальнейший анализ смесей серебро/вода выполняли с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния. Выполняли ряд аналитических способов на трех разных спектрометрах комбинационного рассеяния. Причиной использования спектроскопии комбинационного рассеяния и резонансного комбинационного рассеяния была уверенность в том, что различные типы (и/или амплитуды) колебаний могли бы быть заметными в различных препаратах коллоидного серебра при их сравнении с композициями

- 16 014512 серебро/вода согласно настоящему изобретению, а также по сравнению с чистой или деионизированной водой. Кроме того, эти различные наблюдаемые моды колебаний в молекулах воды смогут помочь лучше охарактеризовать коллоидные системы и объяснить отличающуюся биологическую эффективность различных продуктов на основе серебра.

В первой серии измерений с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния использовали конфокальный спектрометр комбинационного рассеяния фирмы УЕесЕ (И1т, Ссгтапу). Номер модели СКМ200. Спектры получали, используя иммерсионные линзы ΝίΕοπ 60х (ΝΑ=1) и продолжительность интегрирования на один спектр 15 с (т.е. использованы три отдельные 5-секундные экспозиции). Детектор с зарядовой связью центрировали приблизительно при волновом числе 1,799. Капельку раствора помещали в небольшую лунку в чашке Петри и в нее опускали иммерсионные линзы. Лазерный источник для комбинационного рассеяния характеризовался длиной волны 532 нм и мощностью примерно 10 мВт. Конфокальную систему детектирования использовали с конфокальным объемом, равным примерно 0,3x0,3x0,75 мкм (примерно 7x10 Е^-8 пл).

На фиг. 22а и 22Е в графическом виде показаны результаты сбора данных для 7 образцов. Два из указанных образцов представляли собой один и тот же образец, несмотря на то, что их метили различным образом (10РК и 10 Р8И), и соответствовали ранее упомянутому образцу Α8ΑΡ 10 (т.е. с 10 ч./млн серебра в композиции серебро/вода согласно изобретению). ВЭЖХ соответствует воде с высокой степенью чистоты (ультрачистой для ВЭЖХ), полученной из Д1Га Лс^аг. ΌΙ соответствует деионизированной воде. ΟΝΟ¹ соответствует жидкой пищевой добавке коллоидного серебра ΟΝί (25 ч./млн). ΑΟΧ-32 соответствует композиции серебро/вода согласно изобретению, содержащей 32 ч./млн серебра. У XV соответствует высокоэффективным биоорганическим коллоидным минералам фирмы УЕатш ХУог1б (3 ч./млн) (ранее названным Вюогдашс). Между различными образцами обнаружены очевидные различия. Например, наблюдаются большие различия первичных валентных колебаний (например, для волновых чисел примерно 3400-3500 1/см) в нескольких указанных растворах на основе вода/вода. Кроме того, вибрационное/вращательное поведение ниже 500 1/см также показывает совершенно ясное различие между образцами. Некоторые различия также можно наблюдать в изгибных модах примерно при 1600 1/см. Не желая быть связанными какой-либо конкретной теорией или объяснением, полагают, что различное поведение композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению, по-видимому, может, например, влиять или по меньшей мере помогает объяснить эффективность таких композиций по сравнению с другими исследованными образцами.

Второй набор данных по комбинационному рассеянию получали с использованием другой спектрографической системы. Несмотря на то, что полученные значения при сравнении двух наборов данных различны (что строго свидетельствует о том, что данные спектроскопии комбинационного рассеяния для воды являются функцией используемого для анализа устройства), данные, относящиеся к этому набору данных, также указывают на значительное отличие композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению по сравнению с другими препаратами коллоидного серебра или с другими образцами воды. В этом наборе измерений с помощью спектроскопии комбинационного рассеяния использовали отражательный микроскоп комбинационного рассеяния. Спектры получали, используя линзы О1утри§ 20х (ΝΑ=0,4). ПЗС-детектор центрировали при четырех различных волновых числах, а именно при 1600, 2500, 3400 и 4400 1/см. Лазерный источник для комбинационного рассеяния характеризовался длиной волны 514,5 нм и мощностью примерно 11,5 мВт. Дополнительную информацию относительно спектров можно найти на каждой из фиг. 23а, 23Е и 23с. Маркировка образцов на этих фигурах согласуется с приведенной выше. Оба набора данных спектроскопии комбинационного рассеяния строго свидетельствуют, что в данных различных образцах существует различное молекулярное движение, которое может способствовать (или по меньшей мере служить доказательством) биологической эффективности композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению.

Третий набор данных по комбинационному рассеянию получали, используя конфокальный микроспектрограф комбинационного рассеяния с третьей линией излучения многоволнового лазера ВешЛает. Эту систему конфигурировали так, чтобы обеспечить возможность измерения, как над образцом, так и при погружении в образец. Установка была разработана для исследования больших объемов образцов от 100х до 1000х, чем объемы, которые описаны в первом наборе измерений. Отражательный микроспектрограф с микроскопом Ьеюа ИЬ ИМ был оснащен либо водноиммерсионной 20х (ΝΑ=0,5), либо сухой линзами 5х (ΝΑ=12). Размер задней апертуры каждой линзы устанавливали равным или превышающим расширенный диаметр лазерного луча. Использовали две лазерные частоты, при этом одна частота многоволнового аргонового лазера мощностью 50 мВт при '/₂ установленной мощности для 514,5 нм и частота Не№-лазера мощностью 20 мВт при 633 нм. Устанавливали решетки с высокой разрешающей способностью в оптическом пути монохроматического детектора, которые позволяли осуществлять непрерывное сканирование в области от 50 до 4000 волновых чисел (1/см). Использовали продолжительность интегрирования от десяти до 20 с. Жидкий образец помещали снизу линзы в стакане объемом 50 мл. Для исследования резонансных полос использовали оба лазера, при этом для получения спектра комбинационного рассеяния, главным образом, использовали первый лазер. Объем образца составлял примерно 25 мл. Измерения, сделанные с использованием сухой линзы 5х, осуществляли с использованием объектива,

- 17 014512 расположенного примерно на 5 мм выше жидкости, чтобы детально исследовать объем примерно на 7 мм ниже водного мениска. Иммерсионные измерения осуществляли с использованием иммерсионной линзы 20х, помещенной в образец примерно на 4 мм, позволяющей проводить исследование того же самого пространственного объема. Площади исследования ПЗС-детектором отдельно регулировали для каждой линзы с целью максимизации интенсивности сигнала и отношений сигнала к шуму. Типичные спектры для композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению показаны на фиг. 24а. На фиг. 24Ь показаны спектры комбинационного рассеяния трех разных растворов металл/вода, полученных согласно настоящему изобретению. Кривая 1 соответствует раствору 13 ч./млн серебро/вода; кривая 2 соответствует раствору 10 ч./млн цинк/вода; и кривая 3 соответствует раствору 11 ч./млн медь/вода.

Несмотря на то что полученные значения при сравнении трех наборов данных слегка отличаются (что свидетельствует о том, что данные спектроскопии комбинационного рассеяния для воды являются функцией, используемой для анализа устройства и настройки данного прибора), данные, относящиеся к этим наборам данных, указывают на значительные отличия композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению по сравнению с другими препаратами коллоидного серебра или с другими образцами воды. Все наборы данных спектроскопии комбинационного рассеяния точно свидетельствуют о том, что различное молекулярное движение и связи существуют в указанных разных образцах, что может вносить вклад в (или по меньшей мере служить доказательством) эффективность композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению. Далее, различия в картинах комбинационного рассеяния для трех разных растворов металл/вода, показанные на фиг. 24Ь, также свидетельствуют о возможных различиях в эффективности.

Ультрафиолетовая видимая спектроскопия

Дальнейший анализ смесей серебро/вода выполняли с помощью УФ-видимой спектроскопии. УФвидимую спектроскопию использовали в дополнение к спектроскопии комбинационного рассеяния для поиска дополнительных различающихся мод и/или амплитуд колебаний в другой части спектра. Для сбора данных использовали один УФ-видимый спектрометр. При этом спектры поглощения энергии получали с использованием УФ-видимой микроспектрофотометрии. Такую информацию получали, используя двулучевую сканирующую систему монохроматического детектора, способную к сканированию диапазона длин волн примерно от 190 нм до примерно 1100 нм. УФ-видимый спектрометр, который использовали для сбора спектров поглощения, представлял собой спектрометр .Такео М8У350. Прибор настраивали так, чтобы обеспечить измерение жидких образцов с низкой концентрацией, используя кювету 10х 10 мм из плавленого кварца. Данные получали в указанном выше диапазоне длин волн, используя как фотоэлектронный умножитель (РМТ), так и фотодиодный детектор со следующими рабочими параметрами: набор полосы пропускания - 2 нм, разрешение - 0,5 нм; при этом исходную фоновую интенсивность воды вычитали из полученных спектров. В данном аспекте кривую в УФ-видимой области для чистой воды вычитали из полученных спектров для того, чтобы показать наиболее характерные спектральные кривые смеси серебро/вода.

Оба источника энергии: вольфрамовый галогеновый и водородный Ό2 использовали в качестве первичных источников энергии для М8У350. Длину оптического пути спектрометра установили так, чтобы позволить активному лучу проходить через образцы с фокусом вблизи центра кювет с образцом. Приготовление образца ограничивали заполнением и закупориванием кювет и их физической установкой на держатель кювет в полностью закрытой ячейке для размещения образца. Выходные данные измеряли и отображали в виде единиц оптической плотности (в соответствии с законом Бира-Ламберта) в зависимости от значений длины волны и частоты. Основные различия между образцами, соответствующими двум спектрам, показанным на каждой из фиг. 48а и 48Ь, заключались в концентрации серебра в каждом из образцов. В частности, более высокая амплитудная кривая для каждой из фиг. 48а и 48Ь соответствует раствору 32 ч./млн серебро/вода, а более низкая амплитудная кривая соответствует раствору 10 ч./млн серебро/вода. Положение пиков по длинам волн или частотам (т. е. положение пиков и минимумов) практически совпадает.

Как обсуждалось в данном описании выше, серебро (например, ионы серебра, металлическое серебро, Ад⁺ и т.д.) может быть контролируемым образом связано или фиксировано, например, между и/или на слоях глины и/или в ячейках цеолитов. Один из способов осуществления размещения, например, ионов серебра в или на глинах, слюдах или в цеолитах, заключается в создании ионных разновидностей серебра в растворимом состоянии и введении указанных разновидностей в композицию или смесь с глиной или цеолитом. Концепцию замены, например, ионом серебра другого положительно заряженного иона, иногда определяют как ВЕС или СЕС (которые являются кратким обозначением для определения катионообменной способности системы). В этом отношении известно, что большинство веществ каолинитовой группы обладают катионообменной способностью, которая находится в диапазоне от 2 до 5 (т. е. 2-5 мэкв./100 г). Монтмориллонитовые глины, например, обладают катионообменной способностью примерно 100 мэкв./100 г. Тогда как цеолиты могут обладать катионообменной способностью в несколько сотен мэкв./100 г. Например, хорошо известный цеолит, известный как цеолит Линде 4А, имеет значения ВЕС или СЕС, составляющие 400-500 мэкв./100 г. В общем, чем выше ВЕС или СЕС, тем выше способность вещества принимать катионы.

Проводили экспериментальные исследования для определения того, обладают ли каолиниты или цеоли

- 18 014512 ты способностью становиться системами для удерживания/доставки серебра (или другого катиона(нов) металла) или не обладают такой способностью. В частности, приведенные ниже стадии использовали для получения и соответственно анализа образцов серебро-глина, а также образцов серебро-цеолит.

В общих чертах, вещество, представляющее собой типичный каолинит и цеолит Линде 4А, сначала три раза промывали деионизованной водой для удаления возможного загрязнения хлором, которое могло бы вызвать осаждение (или нежелательную реакцию) некоторого количества исходного серебра (например, ионов серебра) до того, как исходное серебро смогло бы нужным образом связаться на/в структуре каолинита и/или цеолита. Затем указанные промытые вещества затем смешивали с раствором нитрата серебра (Α§ΝΟ₃) с подходящими концентрациями, соответствующими предполагаемой или известной СЕС для каждого соответствующего вещества. Затем полученные в результате обработанные вещества снова промывали деионизованной водой для удаления неиспользованного нитрата серебра. Образцы сушили в течение ночи в сушильном шкафу электрорезистивного типа примерно при 120°С. В частности использовали следующий способ промывки.

Примерно 2 г каждого образца каолинита или цеолита помещали в центрифужную пробирку. Затем добавляли деионизованную воду. Затем смесь образца и деионизованной воды встряхивали в ручном встряхивающем устройстве в течение примерно 40 мин. Затем смесь центрифугировали примерно 30 мин примерно при 1000 об/мин. Избыточную жидкость затем сливали из пробирки, содержащей образец. Стадии добавления деионизованной воды, встряхивания, центрифугирования и декантирования повторяли всего три раза.

После того, как исходный образец массой 2 г соответствующим образом промывали для удаления возможного загрязнения хлором, вводили нитрат серебра в очищенные вещества каолинита и цеолита. В частности, примерно 0,09 г нитрата серебра вводили в смесь каолинита, и примерно 4,25 г Α§ΝΟ₃ вводили в цеолит Линде 4А. В частности, измеренные количества нитрата серебра добавляли в каждую трубку, затем добавляли деионизованную воду для заполнения пробирки, затем смесь встряхивали на ручном встряхивающем устройстве примерно 40 мин и затем центрифугировали в течение примерно 30 мин примерно при 1000 об/мин. Затем жидкость декантировали. Указанную процедуру добавления нитрата серебра, добавления деионизованной воды, встряхивания в ручном встряхивающем устройстве, центрифугирования и декантирования повторяли всего три раза. После завершения процедуры промывки и введения нитрата серебра образцы извлекали из центрифужной пробирки и помещали в алюминиевый (Α1₂Ο₃) тигель и сушили в течение ночи примерно при 120°С в печи для нагревания электрорезистивного типа. Полученные в результате вещества в виде композиции каолинит/серебро и цеолит/серебро затем характеризовали, используя СЭМ-микрофотографии и способы СЭМ-ЭДРС (ЭДРА). На фиг. 44а и 44Ь показаны СЭМ-микрофотографии образцов каолинита, полученные согласно способам, обсуждаемым в данном описании выше. Как следует из полученных микрофотографий, похожие на книгу или похожие на страницы структуры каолинитов (например, слои δίΟ₂ и Α1Ο₂Ο₃, обозначенные X и Υ на фиг. 44а) ясно свидетельствуют, что катионы серебра были расположены вокруг граней глинистых веществ. Очевидно, что имел место тип связывания или обмена серебра, о чем свидетельствуют более яркие похожие на страницы части на приведенных микрофотографиях (примечание: части X и Υ являются типичными для различных других похожих на книгу структур в образце). На фиг. 45а-45Ь показаны данные анализа ЭДРС (ЭДРА) образцов, приведенных на фиг. 45а и 45Ь, соответственно. Указанные исследования ясно свидетельствуют о присутствии алюминия и кремния, что и можно было ожидать в случае каолинита, также как и некоторое количество титана (предположительно присутствие рутила). Также можно видеть очень маленькие пики серебра, которые соответствуют числам ВЕС для каолина, которые являются относительно низкими, составляющими 2-5.

На фиг. 46 показана СЭМ-микрофотография, соответствующая цеолитам, обработанным согласно способам, обсуждаемым в данном описании выше. Из-за более высокого значения СЕС цеолита (а именно примерно 500), цеолитные структуры с кубической симметрией на фиг. 46 выглядят светящимися на микрофотографии (см., например, фрагмент А на фиг. 46). Такое свечение свидетельствует о том, что имело место существенное однородное распределение серебра в структурах цеолита и на всем их протяжении. В этом отношении, если бы имели место яркие пятна металлического серебра отдельно сами по себе ярко светящиеся, то серебро не было бы включено в/на цеолит. На фиг. 47 приведены результаты анализа ЭДРС (ЭДРА) образца, показанного на фиг. 46. Также присутствуют относительно высокие амплитудные пики алюминия и кремния, но присутствуют и чрезвычайно высокие пики серебра (т.е. по сравнению с пиками Дд в каолините, показанными на фиг. 45а-45Ь). Такие очень высокие пики серебра соответствуют существенно более высокой способности цеолита захватывать серебро в свою структуру (т.е. высокой ВЕС) по сравнению со структурой каолинитов (т.е. низкой ВЕС), показанных на фиг. 44а и 44Ь.

Доказательство эффективности композиции, содержащей 22 ч./млн серебра, против ВасШиз зиЬИИз

А. Цель примера.

Целью данного примера является демонстрация противомикробной активности основанной на серебре композиции согласно настоящему изобретению на бактериальных эндоспорах тестируемого организма ВасШиз διώΐίΐίδ. Демонстрацию осуществляли, выполняя стандартный анализ гибели во времени, используя суспензию эндоспор В. 8иЬШ18. Обычно бактериальные эндоспоры резистентны к вызываю

- 19 014512 щему гибель воздействию.

B. Материал и способы.

Тестируемый организм. Тестируемую суспензию, содержащую эндоспоры ВасШик киЬИйк (АТТС № 19659), готовили из культуры, выращенной на питательном агаре, к которому добавляли дополнительные ингредиенты для усиления споруляции. Сбор с чашек осуществляли стерильной водой и эндоспоры очищали многократным центрифугированием и ресуспендированием в воде. Конечную промывку проводили в 70% этаноле в течение 30 мин, чтобы гарантировать разрушение всех вегетативных бактерий. Споры ресуспендировали в воде, содержащей 0,1% твин 80 (торговая марка полисорбатного поверхностно-активного вещества), чтобы предотвратить агрегацию.

Нейтрализатор. Смесь нейтрализаторов состояла из 12,7% твина 80 (торговая марка полисорбата), 6,0% тамола 8Ν (торговая марка натриевой соли продукта конденсации нафталина и формальдегида), 1,7% лецитина, 1% пептона и 0,1% цистина. Указанный раствор предназначен для нейтрализации любых химических веществ, чтобы они не влияли на последующий рост бактерий.

Способ исследования зависимости гибели от времени

a) Аликвоту объемом 9,9 мл дезинфицирующего средства (композиция, содержащая 22 ч./млн серебра в воде согласно изобретению) помещали в стерильную пробирку 20x150 мм. Пробирку уравновешивали на водяной бане при 20°С.

b) Аликвоту объемом 9,9 мл дезинфицирующего средства (композиция, содержащая 22 ч./млн серебра в воде, согласно изобретению) помещали в стерильную пробирку 20x150 мм. Пробирку уравновешивали на водяной бане при 20°С.

c) Во временных точках 30 мин, 1 ч и 4 ч 1 мл суспензии организм/дезинфицирующее средство переносили в пробирку, содержащую 9 мл нейтрализатора. Содержимое пробирки тщательно перемешивали.

б) Через две минуты нейтрализованную суспензию серийно разводили 1:10 в физиологическом растворе соли (Р88).

е) Количество живых организмов в пробирках с выбранными разведениями анализировали фильтрованием через мембраны. Аликвоты объемом один мл высевали в двух повторах. Мембраны промывали примерно 100 мл стерильного Р88 и переносили на чашки с питательным агаром. Чашки инкубировали при 37°С в течение 20 ч.

1) Подсчитывали количество колоний на каждом фильтре и вычисляли 1од уменьшения.

Контроли.

a) Титры тестируемых суспензий рассчитывали, осуществляя анализы с использованием фильтрования на мембранах выбранных разведений 1:10 тестируемых суспензий в Р88.

b) Контроль нейтрализатора осуществляли, высевая смесь 9 мл нейтрализатора и 1 мл дезинфицирующего средства со 100 мл разведения титра, содержащего 100 КОЕ. Это давало примерно 10 КОЕ/мл в пробирке, которой давали возможность стоять в течение 20 мин перед анализом на основе фильтрования через мембраны с использованием образцов объемом 1 мл в двух повторах.

C. Результаты.

Разведение п:

1:1х10⁶ ' 1:ΙχΙΟ⁷ 1:1х10⁶

ТИТС 75 7

ТЫТС 58 8

ТИТС = слишком много, чтобы подсчитать.

Разведение суспензии споры В. зиЬЫНз/дезинфицирующее

Титр Вас111и8 ьиЫшь:

Количество колоний

Время 1:1x1ο¹	1:ΙχΙΟ²	средство 1:1*10³	1:ΙχΙΟ⁴	1:1х10⁵	1:1*10'
30 мин -	-	ТЫТС	тате	57	10
-	-	ТИТС	тате	51	7
1 час -	-	ТИТС	тате	28	3
-	-	ТЫТС	тате	55	3
2 час -	ТЫТС	тмтс	126	23	-
-	тате	ТИТС	183	17	-
4 час ΤΝΤΟ	тате	88	12	-	-
тате	тате	69	12	-	-
ТИТС = слишком	МНОГО,	чтобы подсчитать.

Контроль нейтрализации: 1:1 х 10⁸.

И. Обсуждение.

Результаты анализа титра показывают, что концентрация жизнеспособных спор В. киЫШк составляет 6,65х10⁸ спор в мл исходной суспензии. Инокуляция 9,9 мл дезинфицирующего средства со 100 мл такой суспензии давала начальную концентрацию 6,65х 10⁶ спор в 1 мл в анализируемой пробирке.

- 20 014512

Результаты, полученные такими способами, позволили рассчитать значения 1од снижения (ЬВ) и гибели в процентах (РК). Значения перечислены в таблице ниже. Значения рассчитывали, используя формулы: ЬВ = -Ьод(8/8о) и РК = (1-(8/8о))х100; где 8 = концентрация организмов в конкретный момент времени; и 8о = начальная концентрация организмов в нулевое время.

Время	Ъод снижения	Процент гибели
30 мин	0,090	18,8
1 час	0,205	37,6
2 час	0,634	76,8
4 час	1,928	98,8

Данные контроля нейтрализации показали, что дезинфицирующее средство было в достаточной мере нейтрализовано. Фактические подсчеты соответствовали подсчетам, полученным в результате разведения без заметного киллинга.

Дезинфицирующий препарат, тестированный в данном случае, проявлял хорошую спороубивающую активность против спор В. киЬ!Шк. В. киЫШк является общепринятым видом, используемым в тестировании спороубивающей активности, и относится к тому же роду, что и организм, который вызывает сибирскую язву. Вследствие их генетического сходства споры В. киЫШк использовали в качестве непатогенного заменителя ВасШик аиШгаак, бактерии сибирской язвы. Поэтому полученные результаты применимы по отношению к сибирской язве. Предполагается, что более длительное воздействие приведет к дополнительной гибели.

Доказательство эффективности композиции, содержащей 10 ч./млн серебра и 1,0% Н₂О₂, и композиции, содержащей 14 ч./млн серебра и 1,5% Н₂О₂, против ВасШик киЫШк

A. Цель примера.

Целью данного примера является демонстрация противомикробной активности двух основанных на серебре композиций согласно настоящему изобретению на бактериальные эндоспоры тестируемого организма ВасШик киЫШк.

Демонстрацию осуществляли, выполняя стандартный анализ гибели во времени, используя суспензию эндоспор В. киЫШк. При рассмотрении относительно предыдущего примера (с использованием 22

ч./млн серебра), в данном примере устанавливали стимулирующее действие пероксида водорода (Н₂О₂) на противомикробные свойства композиций серебра. Пероксид водорода является стабильным в присутствии композиций серебра согласно настоящему изобретению. Хотя пероксид водорода сам по себе обладает значительными противомикробными свойствами, он часто разрушается каталазой или другими ферментами микроорганизмов. Однако пероксид водорода способен ослаблять клеточные стенки бактерий и усиливать проникновение частиц серебра до того, как происходит ферментативное разрушение пероксида водорода.

B. Материал и способы.

Тестируемый организм. Тестируемую суспензию, содержащую эндоспоры ВасШик киЫШк (АТТС № 19659), готовили из культуры, выращенной на питательном агаре, к которому добавляли дополнительные усилители споруляции. Сбор с чашек осуществляли стерильной водой и эндоспоры очищали многократным центрифугированием и ресуспендированием в воде. Конечную промывку проводили в 70% этаноле в течение 30 мин, чтобы гарантировать гибель всех вегетативных бактерий. Споры ресуспендировали в воде, содержащей 0,1% твин 80 (торговая марка полисорбата), чтобы предотвратить агрегацию.

Нейтрализатор. Смесь нейтрализаторов состояла из 12,7% твина 80, 6,0% тамола 8Ν (торговая марка натриевой соли, продукта конденсации нафталина и формальдегида), 1,7% лецитина, 1% пептона и 0.1% цистина. Указанный раствор предназначен для нейтрализации любых химических веществ, чтобы они не влияли на последующий рост бактерий.

Способ исследования зависимости гибели от времени.

a) Аликвоту объемом 9,9 мл каждого дезинфицирующего средства (композиции коллоидного серебра согласно изобретению: одна из которых содержит 14 ч./млн серебра и 1,5% Н₂О₂; а другая содержит 10 ч./млн серебра и 1,0% Н₂О₂) помещали в стерильную пробирку 20x150 мм. Пробирку уравновешивали на водяной бане при 20°С.

b) В каждую пробирку с дезинфицирующим средством инокулировали 100 мл суспензии тестируемого организма в нулевое время.

c) Во временных точках 10 мин, 30 мин, 1, 2, 4, 6 и 8 ч 1 мл суспензии организм/дезинфицирующее средство переносили в пробирку, содержащую девять мл нейтрализатора. Содержимое пробирки тщательно перемешивали.

е) Количество живых организмов в пробирках с выбранными разведениями анализировали фильтрованием через мембраны. Аликвоты объемом 1 мл высевали в двух повторах. Мембраны промывали примерно 100 мл стерильного Р88 и переносили на чашки с агаром Со1итЫа. Чашки инкубировали при 37°С в течение 20 ч.

- 21 014512

ί) Подсчитывали количество колоний на каждом фильтре и вычисляли 1од уменьшения.

Контроли.

b) Контроль нейтрализатора осуществляли, высевая смесь 9 мл нейтрализатора и 1 мл дезинфицирующего средства со 100 мл разведения титра 1:10³. Это давало примерно 2000 КОЕ/мл в пробирке, которой давали возможность стоять в течение 20 мин перед разведением 1:10. Обе пробирки анализировали на основе фильтрования через мембраны с использованием образцов объемом 1 мл в двух повторах. Все результаты показаны в табл. 1а и 1Ь.

С. Результаты.

Титр спор ВасШик киЫШк:

Разведение

1:1х10⁶ 1:1χ10⁷

Количество колоний

ТИТС 36

ТИТС 27

1:1*10⁸

ТИТС = слишком много, чтобы подсчитать.

Таблица 1а. Раствор, содержащий 14 ч./млн серебра и 1,5% Н₂О₂

Разведение суспензии споры В. зиЫ: ίίί5/дезинфицирующее средство

Время	ΙζΙχΙΟ¹	1:1х10²	1:1х10³	1:1х10⁴	1:1х10⁵
10 мин	-	-	ТИТС	ТИТС	227
	-	-	ТИТС	ТИТС	265
30 мин	-	-	ТИТС	ТИТС	258
	-	-	ТИТС	ТИТС	273
1 час	-	-	ТИТС	ТИТС	55
	-	-	ТИТС	ТИТС	33
2 час	-	ТИТС	207	29	-
	-	ТИТС	237	24	-
4 час	59	3	1
	57	5	1
6 час	0	0	0
	3	0	0
8 час	1	0	0
	1	0	0
ТИТС	= слишком	много, чтобы	подсчитать.

Контроль нейтрализации

Неразбавленный	1:1^10¹
ТИТС	195
ТИТС	210
ТИТС = слишком много, чтобы	подсчитать.

Таблица 1Ь. Раствор, содержащий 10 ч./млн серебра и 1,0% Н₂О₂

Разведение суспензии споры В. зиЫ. Шз/дезинфицирующее средство:

Время	1:1Х10¹	1:1х10²	1:1х10³	1:1Х10⁴	1:1х10⁵
10 мин	-	-	ТИТС	. ТИТС	230
			ТИТС	ТИТС	287
30 мин	-	-	ТИТС	ТИТС	254
			ТИТС	ТИТС	260

- 22 014512

1 час	-	-	тытс	ΤΝΤΟ	146
			ТИТС	ТИТС	124
2 час	-	ТИТС	ТИТС	64	-
		ТИТС	ТИТС	71	-
4 час	ТИТС	72	5
	ТИТС	77	5
6 час	0	0	0
	2	0	0
8 час	0	0	0

тытс слишком много, чтобы подсчитать.

Контроль нейтрализации:

Неразбавленный

1:1x1ο¹

ТИТС

200 тытс

184 тите слишком много, чтобы подсчитать.

Ό. Обсуждение.

Данные показали, что концентрация жизнеспособных спор В. киЫШк в 1 мл исходной суспензии составляла 2,59х 10⁸. Инокуляция 9,9 мл дезинфицирующего средства со 100 мл указанной суспензии давала начальную концентрацию спор 2,59х 10⁵ в 1 мл в пробирке для анализа.

Результаты, полученные такими способами, позволили рассчитать значения 1од снижения (ЪЯ) и гибели в процентах (РК). Значения перечислены в таблице ниже. Значения рассчитывали, используя формулы: ЬЯ = -Ьод(8/8о) и РК = (1-(8/8о))х100; где 8 = концентрация организмов в конкретный момент времени; и 8о = начальная концентрация организмов в нулевое время. Так как не было значимой гибели за 30 мин, то для значений 8о использовали данные в точке 10 мин. Во временных точках воздействия 6 ч и 8 ч не получали достаточно высокого подсчета, чтобы он был достоверным. Поэтому такие данные не использовали для линейных регрессий. Линейные регрессии получали на основе значений 1од снижения, используя линейные графики подгонки, получаемые при выполнении команды, имеющейся в пакете статистических компьютерных программ МшйаЬ. Полученные уравнения регрессии и периоды времени, необходимые для осуществления снижения на шесть 1од, показаны наряду со значениями 1од снижения и гибели в процентах в следующей табл. 2.

Таблица 2

14 ч/млн. серебра+1,5% Н₂О₂	10 ч/млн. серебра+1% Н₂О₂
Время	Ьод снижения	Процент гибели	Вод снижения	Процент гибели
30 мин	-0,03	-7, 9	0,003	0, 6
1 час	0,66	78,0	0,28	47,8
2 час	2,05	99,1	1,58	97,4
4 час	4,63	99,998	3,54	99, 97

Регрессионный анализ

Уравнение рассчитанной кривой 14 ч./млн : Υ = -0,66704 + 1,32936х. Уравнение рассчитанной кривой 10 ч./млн: Υ = -0,59690 + 1,03933х. Указанные уравнения свидетельствуют, что период времени для 6-1од-снижения составляет 5,02 ч в случае композиции 14 ч./млн и 6,35 ч в случае композиции 10 ч./млн.

Данные контроля нейтрализации показали, что дезинфицирующее средство было адекватно нейтрализовано. Ожидаемые расчеты соответствовали расчетам, ожидаемым на основании разведения.

Тестируемые экспериментальные растворы дезинфицирующего средства проявляли значимую спороубивающую активность против спор В. киЫШк. Штамм В. киЫШк, используемый для таких оценок, был таким же, как штамм, указанный в тесте спороубивающей активности АОАС. Споры указанного организма обеспечивают достоверную проверку большинства дезинфицирующих средств. Периоды времени, необходимые для того, чтобы вызвать снижение на шесть 1од, совпадают с заявленной на этикетках спороубивающей активностью многих средств холодной стерилизации.

- 23 014512

Доказательство эффективности композиции, содержащей 10 ч./млн серебра, в качестве противомикробного средства широкого спектра действия

A. Способы.

Тесты МК'.' (минимальной ингибирующей концентрации) и МВС (минимальной бактерицидной концентрации) осуществляли согласно стандартному способу микроразведения бульона. МК'.' определяют как наименьшую концентрацию антибиотика, которая будет ингибировать (ίη νίίτο) рост инфекционного организма. Результаты приводят в микрограммах в 1 мл. Для применяемых в медицине антибиотиков интерпретация данных ίη νίίτο основана на доступных концентрациях лекарственного средства в плазме, которые могут варьировать в зависимости от дозы, пути введения, степени связывания с белками, места инфекции, возраста и массы пациента и других факторов. МВС определяют как наименьшую концентрацию противомикробного средства, необходимую для убивания 99,9% исходного посева организмов.

Тест осуществляли, выращивая чистые культуры каждого из тестируемых организмов в жидкой культуре. Турбометрические измерения использовали для контроля концентрации культуры. Серийные разведения каждого тестируемого антибиотика осуществляли в питательном бульоне. Разведения рассчитывали так, чтобы перекрыть диапазоны чувствительности каждого организма к каждому средству. В каждую пробирку добавляли стандартное количество тестируемой культуры и пробирку возвращали в инкубатор (37±2°С) для роста. Пробирки проверяли турбометрически, чтобы определить рост бактерий. При концентрации ниже МК' в пробирках наблюдали увеличение оптической плотности с течением времени, свидетельствующее о бактериальном росте. Наименьшая концентрация антибиотика, при которой не наблюдали роста, представляла собой ИС. Пробирки, в которых нет роста, затем субкультивировали в свежей среде. Пробирка, в которой нет роста, с наименьшей концентрацией антибиотика, в которой не наблюдали роста при субкультивировании, представляла МВС.

Результаты показаны в табл. 3.

B. Результаты.

Таблица 3

Противомикробное средство (ч/млн.)

Организм	Тетрациклин	Офлоксацин	Пенициллин 5	Цефанеразон	Эритромицин	Серебро
2. руодепе$	0,625/>5	1, 25/2,5	>5, 0	0,313/1, 25	0,003/0,019	2,5/5,0
8, шиСапз	0,625/>5	2,5/>5,0	0,521/>5	1,25/>5	0,009/0,019	2,5/10,0
2. догйепИ	0,156/0, 625	2,5/5,0	0,009/0,039	1,25/1,25	0,005/0,019	2, 5/10,0
2. рпеилюп1аа	0,078/0, 625	2,5/2,5	0,019/0,019	0,313/0,313	0,002/0,004 ’	2,5/2,5
	0,313/>5	1,25/5,0	5,0/>5,0	>5, 0	0,009/1,25	10,0/10,0
3, аигеиз	0,31 3/>5	0,417/0,625	2,5/>5,0	5,0/5,0	0,С39/>5,0	5,0/5,0
Р.	0,078/5	0,156/0,313	0,13/>5,0	2,5/5,0	2,5/>5,0	1,67/5
аегидхпоза	1,67/>5	0,104/0,156	>5,0	0,625/>5,0	5,0/>5,0	2,5/2,5
Ξ.	>5	0,078/0,156	>5,0	2,92/>5,0	>5, 0	2,5/2,5
аегсдепеа К,	1,67/>5	0,156/0,156	>5, 0	>5, 0	>5,0	2,5/5,0
5,	1,25/>5	0,078/0,156	>5,0	1,25/2,5	5,0/>5,0	2,5/5,0
2. агхгопа.	0,625/>5	0,078/0,078	>5,0	0,833/>5,0	4,17/>5,0	2,5/5,0
5 Ъоу<11 ϊ	1,25/>5	0,073/0,156	>5, 0	0,625/0,625	5,0/>5,0	1,25/1,25
К.	2,5/>5	0,417/0,625	>5,0	>5,0	>5,0	2,5/2,5
рпешполхае К, охусоса	1,25/>5	10,104/0,156	>5,0	1,25/>5,0	>5, 0	1,25/1,25

Данные представлены в виде МК'/МВС (минимальная ингибирующая концентрация/минимальная бактерицидная концентрация) в частях на миллион (ч./млн ); > означает, что концентрация, необходимая для получения МК' или МВС, выше, чем тестируемые параметры, измеренные в тесте. Например, самая высокая концентрация тетрациклина, используемая в случае 8. Руодепе, составляла 5 ч./млн. При такой концентрации еще имел место рост при субкультивировании пробирок, помеченных нет роста. Поэтому МВС должна быть > (больше) 5 ч./млн МК'/МВС'.' для штамма Е. сой О157:Н7, который связывали со вспышками геморрагической диареи и колита, определяли в последующем исследовании. Определили, что МК' составляла 2,5 ч./млн и МВС составляла 5 ч./млн.

С. Заключение.

Тестировали композицию, содержащую 10 ч./млн серебра, согласно настоящему изобретению и обнаружили, что она является как бактериостатической, так и бактерицидной по отношению ко всем тестируемым организмам. В других исследованиях такую композицию сравнивали с другими коммерчески доступными продуктами коллоидного серебра и обнаружили, что она имеет более высокую активность по сравнению со всеми другими тестируемыми препаратами (данные не показаны). Наиболее интересным наблюдением был широкий спектр действия, которым обладает композиция, содержащая 10 ч./млн серебра. Противомикробная активность, которую наблюдали, была довольно постоянной, независимой от конкретного тестируемого организма. За исключением 81гер1ососсик ГаесаК и 81герЮсосси5 аигеик (которые имели значения МК' 10 ч./млн и 5 ч./млн, соответственно), значения МК' были в диапазоне от

- 24 014512

1,25 ч./млн до 2,5 ч./млн, как для грамположительных, так и для грамотрицательных организмов. Сходное поведение наблюдали в случае значений МВС, которые были в диапазоне от 1,25 ч./млн, до 5 ч./млн, за исключением 81тер1ососсик ти1апк, 81тер1ососсик дотбопи и 81тер1ососсик ГаесаСз (которые имели значения МВС 10 ч./млн ). Данные свидетельствуют, что вариант с содержанием серебра 10 ч./млн согласно настоящему изобретению проявляет равный или более широкий спектр активности, чем любой тестируемый антибиотик. Антибиотики обычно имеют ограниченные антибактериальные спектры, которые ограничены чувствительными организмами, но как показывают данные, композиция серебра согласно настоящему изобретению одинаково эффективна, как против грамположительных, так и против грамотрицательных организмов. Данные свидетельствуют, что, в общем, при более низкой токсичности, связанной с серебром, и широком спектре противомикробной активности данной композиции серебра такой препарат можно эффективно применять в качестве альтернативы антибиотикам.

Р. Ссылки для предыдущего примера:

1. Сообщение и.8. ΕΡΑ ΙΒΙ8 для препарата серебро-СЛ8КЫ 7440-22-4.

2. Рох СЬ, Мобак 8М. Месйашкт оГ 8бует 8и1р11аб1а/те Лсбоп оп Вит Аоипб. 1пРесбопк. Лпбт1сгоЫа1 Лдеп1к СйетоЛег. 5:582-588. 1974.

3. Ригскпег, ΙΕ, Вкктопб СВ, апб СЛ Эгаке. Сотрагабуе Ме1аЬоКкт оГ Вабюписйбек т Матта1к. IV. Ве1епбоп оГ 8буег-110т т 1ке Мойке, Ва1, Мопкеу, апб Под. НеаИй Ркук. 15:505-514. 1968.

4. Снег, N. 811уег апб йк Сотроипбк т ПШпРесйоп, 81егШ/абоп, апб Ргекегуайоп. (8еутоиг 8. В1оск, еб.) 2^пб Ε6^ рр 395-407, 1977.

5. Ншб1ег, 1А апб Ш 1огдепкеп. Ргосебиге ш Лпйт1сгоЫа1 Τеκΐ^пд ш П1адпокйс МютоЬю1оду. (СВ Макоп апб С МапикеНк, ебк.) рр 63-91.1995.

Доказательство эффективности композиции, содержащей 32 ч./млн серебра против Рхеиботопах асгищпо/а, 8а1топе11а ско1сгаехи1х и 8(арку1ососсих аигеих

А. Способы.

Ркеиботопак аегидтока ЛЕГСС №15442, 8а1топе11а ско1егаекшк Л^СС №10708 и 8!арку1ососсик аигеик ЛТСС №6538 тестировали, используя принятые способы АОАС (Лккошайоп оГ 0ГГ1с1а1 Лпа1уйса1 СкетЩк Л0С МеИобк, уо1. 1, 15^Л ебйюп, 1990, Л0ЛС Лт1шд1оп, VЛ) 955.14, 95515 и 964.02. В пробирки с питательным бульоном (NВЛ0ЛС) делали посев из маточной культуры и пробирки инкубировали при 37 ±2°С. Переносы питательного бульона в свежие пробирки осуществляли в течение трех последующих дней, после конечного переноса инкубацию проводили при 37±2°С в течение 48-54 ч. Культуру Ркеиботопак сливали в свежую пробирку, извлекая пленку. Другие культуры встряхивали в течение 3-4 с и давали возможность отстаиваться в течение 10 мин при комнатной температуре. Наконец культуры разбавляли 1:100 в пептоновой воде (РБРА), к которой добавляли сыворотку лошади, получая общее введение органических веществ 5%. Носители для тестирования (гладкие цилиндры из нержавеющей стали 304 длиной 10 мм с внешним диаметром 8 мм и внутренним диаметром 6 мм) замачивали в растворе для контрольного заражения в течение 15 мин, вынимали, осушали и сушили при 37±2°С в течение 40±2 мин перед использованием.

Резистентность к фенолу. Пять аликвот по 1 мл каждого разведения тестируемого фенола помещали в стерильные пробирки для тестирования и обеспечивали возможность уравновешивания на водяной бане при 20±2°С. С 30-секундными интервалами 0,5 мл каждой культуры для контрольного заражения добавляли к соответствующим разведениям фенола, взбалтывали и помещали на водяную баню: после соответствующих периодов времени воздействия 5, 10 и 15 мин суспензию на петле для посева извлекали из пробирок для анализа и переносили в пробирки с летиновым бульоном (ΕΕΤΗ). Пробирки с ΕΕΤΗ инкубировали при 37±2°С в течение 2 суток.

Титрование носителей. Для титрования носителей готовили 10 мл контрольных растворов пептонтвин (торговая марка полисорбата) (РЕРТ). Два носителя помещали в отдельные пробирки, содержащие первое разведение 1:10. Пробирки достаточно энергично встряхивали, чтобы бактерии перешли в раствор, и готовили серийные разведения в 9 мл контрольной среды ΕΕΤΗ. Контрольные разведения инкубировали при 37±2°С. Последняя пробирка, в которой происходил рост, показывала 1од₀-титр организмов на носителе. Для АОАС требуется, чтобы носители имели минимальные популяции 1х 10⁴ КОЕ/носитель.

Тестирование композиции серебра. Используя стерильные стеклянные пипетки, аликвоты объемом 10 мл приготовленных дезинфицирующих средств помещали в стерильные пробирки и обеспечивали возможность уравновешивания на охлаждаемой водяной бане, поддерживаемой при 20±2°С. Не касаясь стенок пробирок, один зараженный высушенный носитель добавляли с 30-секундными интервалами в каждую пробирку с композицией серебра и снова помещали на водяную баню. Для каждого организма дезинфицирующее средство тестировали против 60 высушенных зараженных носителей с 5- и 10минутными интервалами воздействия. После воздействия носители удаляли из дезинфицирующего средства и переносили в пробирку с ΕΕΤΗ. Пробирки для культивирования инкубировали при 37±2°С в течение 2 суток и оценивали как позитивные (+) или негативные (0) в отношении роста заражающего организма.

- 25 014512

Контроли.

Для каждого организма высушенный зараженный носитель добавляли в пробирку с ЬЕТН в качестве позитивного контроля. Пробирки со средой без посева служили в качестве негативных контролей. После инкубации во все негативные пробирки вводили 1-100 колониеобразующих единиц (КОЕ) соответствующих организмов, чтобы показать эффективность нейтрализации. Чтобы показать стимуляцию роста средами в пробирки с негативными контролями также инокулировали 1-100 КОЕ всех трех организмов. Объемы, соответствующие инокулирующим, высевали в трех повторах на соевый агар с казеиновым отваром (8СБА), чтобы подтвердить титры для инокуляции. Пробирки и чашки инкубировали при 37 ±2°С вплоть до того, как рост был виден во всех пробирках.

При нейтрализации Р. аетидшока обнаружено, что начальный титр инокулята составлял >100 КОЕ, который был слишком высоким для протокола. Поскольку во все исходные пробирки были введены заражающие организмы, осуществляли моделирующее тестирование на той же партии среды, которую использовали при тестировании, помещая носители в пробирки с дезинфицирующим средством из всех трех партий композиций серебра на 10 мин. Носители переносили в заготовки с ЬЕТН. В указанные пробирки затем вводили 1-100 КОЕ организма. Пробирки инкубировали, как описано выше, и оценивали в отношении наличия роста или отсутствия роста. Новые пробирки со стерильной средой из той же самой партии также засевали для подтверждения стимуляции роста.

В. Результаты.

Начальное тестирование с использованием 8. аигеик показало удовлетворяющие требованиям результаты в случае образца №1 и №2, но образец №3 был неудачным. При исследовании было решено, что образец №3 мог быть поврежден перед отправкой. Новый флакон получили из той же партии, что и образец №3, и новый флакон пометили, как образец №4. Контрольное заражение 8. аигеик повторяли, используя образец №4. В руководстве АОАС указано, что для любой временной точки и организма дают возможность расти организмам только из 1 носителя для каждой тестируемой партии.

Позитивные контроли показывали рост, а в негативных контролях не наблюдали роста в случае всех партий, временных точек и организмов.

Титрование носителя осуществляли в двух повторах для всех организмов. Указываемый титр является средним для двух повторов. В случае всех трех организмов обнаружено, что средний титр на носителях находится в диапазоне от 5,5х10⁴ до 5,5х10⁶ КОЕ/носитель. Для АОАС требуется, чтобы носители имели минимум 1,0х10⁴ КОЕ/носитель.

В случае Р. аетидшока 3/180 носителей показали рост во временной точке в тесте 5 мин, и 2/180 носителей показали рост во временной точке в тесте 10 мин. В случае 8. аигеик 16/180 носителей показали рост во временной точке в тесте 5 мин, и 2/180 носителей показали рост во временной точке в тесте 10 мин. В случае 8. с1ю1егае8Ш8 6/180 носителей показали рост во временной точке в тесте 5 мин, и 1/180 носителей показал рост во временной токе в тесте 10 мин.

В тестируемой культуре Ркеиботопак наблюдали рост после 5, 10 или 15 мин обработки фенолом в разведении 1:90 и наблюдали рост после 5 или 10 мин обработки фенолом в разведении 1:80, но не наблюдали роста после 15 мин обработки фенолом в разведении 1:80. В культуре 8!арйу1ососси8 наблюдали рост после 5, 10 или 15 мин обработки фенолом в разведении 1:70 и наблюдали рост после 5 или 10 мин обработки фенолом в разведении 1:60, но не наблюдали роста после 15 мин обработки фенолом в разведении 1:60. В культуре 8а1топе11а наблюдали рост после 5, 10 или 15 мин обработки фенолом в разведении 1:100, но не наблюдали роста после 5, 10 или 15 мин обработки фенолом в разведении 1:90.

Доказательство эффективности 32, 22 и 10 ч./млн серебра, и 22 ч./млн серебра и 1,5% Н₂О₂, и 10

ч./млн серебра и 10 ч./млн К₂8₂О₈ против 8а1шопе11а и ЕзсЬепсЫа сой в свежеинокулированных образцах, полученных от коров

A. Цель примера.

Целью данного примера является демонстрация противомикробной активности вариантов основанных на серебре композиций согласно настоящему изобретению на образцах из куска говядины из боковой части туши, на внешнюю поверхность которых высевали смесь штаммов видов 8а1топе11а или ЕксНепсЫа со11 О157:Н7 с высоким уровнем посевного материала в растворе (1х10⁶ КОЕ/см²) и отдельно с низким уровнем посевного материала в растворе (1 х 10⁴ КОЕ/см²) (КОЕ = колониеобразующая единица).

B. Материалы и способы.

Образцы говядины. Образцы ткани быка получали со скотобойни в пределах 8 ч после разделки туши. Прямую брюшную мышцу гесШк аЬботшик снимали с туши, подвешенной в холодной камере, делая надрез между 11-м и 12-м ребрами и затем сдирая мышцу вдоль природной линии сращения. Асептически взятые образцы помещали в полиэтиленовые мешки и на массу льда и транспортировали в тот же день в лабораторию, где образцы быстро упаковывали в МиШ-Уас (А-300) и помещали в холодильник при 4°С. Образцы, используемые для тестирования, имели рН от 5,8 до 6,0, и их использовали не более чем через 36 ч после разделки туши. Из случайно отобранных прямых брюшных мышц нарезали образцы 13х 8 см и подвергали обработке. После обработки использовали стерилизованное в пламени стальное устройство для взятия глубинной пробы площадью 3,5 см² и хирургический скальпель, чтобы асептиче

- 26 014512 ски извлечь две глубинные пробы мяса из каждого образца для определенного интервала времени взятия образца. Глубинные пробы мяса помещали в стерильный пакет типа 81отас11ег с 25 мл 0,1% пептона и перемешивали в течение двух минут в гомогенизаторе 81отас11ег (ЪаЬ Вепйег 400). Готовили серийные разведения и высевали спиралью через 0 мин, 20 мин, 1 ч, 4 ч и 24 ч после обработки на селективной и восстановительной средах.

Бактериальные культуры. Бактериальные культуры получали из коллекции маточных культур Капкак 8(а(е Ишуегкйу (К8И) и хранили, используя систему хранения защищенный шарик. Следующие культуры использовали для образца 8а1топе11а: 8. Ш1е (ИОЛ), 8. топ1еу1йео (ИОЛ), 8. (урЫтипит (ИОЛ), 8. адопа (К8И 05 из изолята вспышки инфекции СЭС) и 8. петероП (К8И 06 из изолята вспышки инфекции СЭС) . Следующие культуры использовали для образца ЕксНепсЫа сой: Е. сой О157:Н7 (СЭС 01,03), Е. сой О157:Н7 (υ8ΌΑ-Ρ8Ι8 011-82 В1Г-резистентная 100 ч./млн ), Е. сой 0157:Н7 (АТСС 43895 связанные с ГУС токсины типа I и II ΡίΓ. Век.) и Е. сой АТСС №23740 (генотип К-12 прототрофный лямбда).

Маточные культуры культивировали, помещая один пропитанный шарик в 5 мл раствора триптического соевого бульона Эйсо® (Т8В) и инкубируя в течение 24 ч при 35°С. Затем петлю объемом 0,05 мл соответствующей культуры высевали в 5 мл раствора Т8В и инкубировали в течение 24 ч при 35°С, чтобы получить чистую культуру. После инкубации 1 мл соответствующей культуры инокулировали в 49 мл Т8В и инкубировали в течение 24 ч при 35°С. После инкубации образцы центрифугировали (15300 д при 4°С) и материал в надосадке сливали, и осадок ресуспендировали в 50 мл 0,1% пептона и центрифугировали (15300 д при 4°С) последний раз. Пептон сливали и оставшийся осадок ресуспендировали в 10 мл 0,1% пептона. Пять флаконов по 10 мл соответствующей культуры смешивали вместе, чтобы получить смесь объемом 50 мл, содержащую 10⁹ КОЕ/мл видов 8а1топе11а. Смесь разбавляли до 10⁶ КОЕ/мл или 10⁴ КОЕ/мл, используя 0,1% пептон. Культуры подтверждали культивированием на селективной и дифференциальной среде и биохимическим анализом предполагаемых колоний с использованием наборов ΑΡΙ 20Е.

Способ инокуляции. Образцы куска говядины из боковой части туши (мышца гесШк аЬйотшик) нарезали на кусочки 13x8 см (104 см²) и инокулировали смесью пяти штаммов вида 8а1топе11а или ЕксйейсЫа сой 0157:117 при высоком уровне посевного материала в растворе (10⁶ 1од КОЕ/см²) и отдельно при низком уровне посевного материала в растворе (10⁴ 1од КОЕ/см²) . Указанным посевным материалом опрыскивали поверхность ткани, используя пластиковый флакон для распыления с образцами, находящимися в герметичной камере для посевного материала. Фактическая концентрация видов 8а1топе11а на поверхности мяса составляла примерно 5,0 и 3,4 1од КОЕ/см² для высокого и низкого уровня посевного материала в растворе, соответственно. В случае Е. сой О157:Н7 соответствующие уровни инокуляции на поверхности мяса составляли 4,2 и 3,9 1од КОЕ/см².

Затем образцы говядины вертикально подвешивали на крючки из нержавеющей стали, прикрепленные к механизированному конвейеру, который перемещал образцы говядины через опытную камеру для опрыскивания (Капкак 8(а(е ищуегкйу, Роой 8аГе1у ЬаЬога!огу), в то время как проводили обработки опрыскиванием. Обработки либо композициями серебра согласно настоящему изобретению, либо деионизованной водой наносили на говядину при давлении 20 фунтов/кв. дюйм с расстояния 13 см в опытной камере для ополаскивания под давлением в течение 20 с.

Распылительная насадка (ВЕТЕ ΝΡ0580 303) доставляла примерно 20 мл раствора на поверхность образца говядины. Температура растворов и температура в комнате для нанесения обработки составляла примерно 14°С. После обработки глубинные образцы по 3,5 см² в двух повторах случайным образом отбирали с боковой поверхности образца говядины во временных точках 0, 20, 60 и 240 мин. Образцы культивировали и нумеровали на селективной дифференциальной и восстановительной средах. Ьод снижения рассчитывали вычитанием 1од10 КОЕ/см² инокулированных/обработанных образцов в указанных временных точках отбора образцов (0, 20, 60 и 240 мин) из 1од10 КОЕ/см² инокулированных/необработанных образцов в точке 0 мин. Обработка образцов включала применение композиций, содержащих 32 ч./млн серебра, 22 ч./млн серебра и 10 ч./млн серебра, согласно настоящему изобретению. Отдельно тестировали комбинации 22 ч./млн Ад с 1,5 мас.% пероксида водорода и 10 ч./млн Ад с 10 ч./млн пероксидисульфата (К₂8₂О₈).

С. Результаты, полученные с применением композиции, содержащей 32 ч./млн серебра.

Применение композиции, содержащей 32 ч./млн серебра, согласно настоящему изобретению давало снижение количества бактерий на куске говядины. В дальнейшем такое снижение выражено в виде 1од10 отношения количества бактерий в контроле во временной точке 0 к количеству бактерий в обработанном образце во временной точке отбора образца (т.е. обработки).

В случае 8а1топе11а при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 0,78 в 0 мин, 1,11 через 20 мин, 1,08 через 60 мин и 1,23 через 240 мин. Таким образом, во временной точке 4 ч (240 минут) отношение начального количества бактерий в контроле к бактериям в образце, обработанном с использованием 32 ч./млн серебра, составляет 10^1,23. В случае более высокого начального уровня бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,86 в 0 мин, 0,95 через 20

- 27 014512 мин, 0,98 через 60 мин и 1,17 через 240 мин. Результаты показывают, что в случае варианта, содержащего 32 ч./млн серебра, согласно изобретению наблюдали эффективное бактерицидное действие в отношении 8а1топе11а на куске говядины. Будет понятно, что дезинфекция поверхности мяса является экстремальной проверкой для любого дезинфицирующего средства.

В случае Е. со11 при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 1,03 в 0 мин, 1,28 через 20 мин, 1,42 через 60 мин и 1,58 через 240 мин. При более высоком начальном уровне бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,65 в 0 мин, 0,60 через 20 мин, 0,83 через 60 мин и 0,87 через 240 мин. Результаты показывают, что вариант, содержащий 32 ч./млн серебра, согласно настоящему изобретению проявляет эффективное бактерицидное воздействие в отношении патогенных Е. со11 на куске говядины.

Ό. Результаты, полученные с применением композиции, содержащей 22 ч./млн серебра.

Результаты, полученные с применением серебра в воде. В случае 8а1топе11а при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 0,41 через 0 мин, 0,43 через 20 мин, 0,48 через 60 мин и 0,68 через 240 мин. При более высоком начальном уровне бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,24 через 0 мин, 0,24 через 20 мин, 0,42 через 60 мин и 0,61 через 240 мин. Результаты показывают, что вариант, содержащий 22 ч./млн серебра, согласно настоящему изобретению оказывает эффективное бактерицидное воздействие в отношении 8а1топе11а на куске говядины.

Результаты, полученные с применением серебра в воде и 1,5 мас.% пероксида водорода. В случае 8а1топе11а при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 0,34 через 0 мин, 0,33 через 20 мин, 0,36 через 60 мин и 0,62 через 240 мин. При более высоком начальном уровне бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,28 через 0 мин, 0,14 через 20 мин, 0,30 через 60 мин и 0,69 через 240 мин. Результаты показывают, что вариант, содержащий 22 ч./млн серебра с 1,5 мас.% пероксида водорода, согласно настоящему изобретению оказывает эффективно бактерицидное воздействие в отношении 8а1топе11а на куске говядины.

Е. Результаты, полученные с применением композиции содержащей 10 ч./млн серебра.

Результаты, полученные с применением композиции серебра в воде. В случае 8а1топе11а при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 0,38 через 0 мин, 0,41 через 20 мин, 0,39 через 60 мин и 0,61 через 240 мин. При более высоком начальном уровне бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,24 через 0 мин, 0,21 через 20 мин, 0,41 через 60 мин и 0,54 через 240 мин. Результаты показывают, что вариант, содержащий 10 ч./млн серебра согласно настоящему изобретению, оказывает эффективное бактерицидное воздействие в отношении 8а1топе11а на куске говядины.

Результаты, полученные с применением композиции серебра в воде с 10 ч./млн Κ₂δ₂Ο₈. В случае 8а1топе11а при более низком начальном уровне бактерий (10⁴) регистрировали следующие 1од снижения: 0,26 через 0 мин, 0,28 через 20 мин, 0,35 через 60 мин и 0,58 через 240 мин. При более высоком начальном уровне бактерий (10⁶) регистрировали следующие 1од снижения: 0,03 через 0 мин, 0,16 через 20 мин, 0,21 через 60 мин и 0,36 через 240 мин. Результаты показывают, что вариант, содержащий 10 ч./млн серебра с 10 ч./млн пероксидисульфата калия (Κ₂δ₂Ο₈) согласно настоящему изобретению, оказывает эффективное бактерицидное воздействие в отношении δа1тоηе11а на куске говядины.

Доказательство эффективности 10 ч./млн серебра для лечения болезней человека

A. Цель примера.

Целью данного примера была демонстрация применимости основанных на серебре вариантов композиции согласно настоящему изобретению для лечения различных заболеваний человека. Исследования в данном разделе осуществляли в Гане в Западной Африке в гарнизонном госпитале воздушных сил под руководством доктора КтаЫаЕ, в клинике Копе-Ви под руководством δτ. δаскеу и в клинике/родильном доме Л151аЬ под руководством доктора АЬгаЪат. В общем, пятьдесят восемь (58) пациентов лечили, используя композицию серебро/вода согласно настоящему изобретению, содержащую 10 ч./млн серебра. Композицию использовали как внутренне, так и наружно в качестве альтернативы традиционным антибиотикам. Подвергаемые лечению заболевания включали малярию, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции мочевыводящих путей, синусит, вагинальные дрожжевые инфекции, инфекции глаз, носа и ушей, порезы, грибковые инфекции кожи и венерические заболевания, такие как гонорея.

B. Способы лечения и результаты.

Боль в животе и диарея. Способ включает в себя стадию введения примерно 5-25 мл композиции серебра от одного до пяти раз в сутки перорально вплоть до получения ответа. Одного пациента лечили примерно 10 мл (примерно две чайных ложки) композиции согласно настоящему изобретению три раза в течение одних суток. Пациент полностью выздоровел за один день.

Бронхит. Способ включает в себя стадию введения примерно 2-25 мл композиции серебра перорально от одного до пяти раз в сутки вплоть до получения ответа. Двух пациентов лечили примерно 5 мл (примерно одна чайная ложка) каждой композиции согласно настоящему изобретению два раза в сутки в течение трех дней. Пациенты полностью выздоравливали за три дня.

Вагинальные дрожжи (СапФба). Способ включает в себя стадию введения примерно 5-25 мл компо

- 28 014512 зиции серебра от одного до пяти раз в сутки в виде влагалищного душа вплоть до получения ответа. Пять пациентов лечили примерно 10 мл (примерно две чайные ложки) каждой композиции согласно настоящему изобретению два раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за шесть дней.

Конъюнктивит. Способ включает в себя стадию введения примерно нескольких капель композиций серебра от одного до пяти раз в сутки в инфицированный глаз вплоть до получения ответа. Двух пациентов лечили несколькими каплями композиции согласно настоящему изобретению в каждый инфицированный глаз по два раза в сутки. Пациенты полностью выздоравливали за один день.

Наружные порезы и инфекция (включая стафилококковые инфекции кожи, септические язвы и инфицированные абсцессы). Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в инфицированную область вплоть до получения ответа. Шесть пациентов лечили примерно 5 мл (примерно одна чайная ложка) каждой композиции согласно настоящему изобретению на инфицированные области по два раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за три дня.

Наружный отит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в инфицированное ухо вплоть до получения ответа. Шесть пациентов лечили примерно двумя каплями композиции согласно настоящему изобретению в инфицированные уши по три раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление примерно через четыре дня.

Средний отит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в инфицированное ухо вплоть до получения ответа. Одного пациента лечили примерно двумя каплями композиции согласно настоящему изобретению в инфицированное ухо три раза в сутки. У пациента наблюдали полное выздоровление за четыре дня.

Грибковая инфекция кожи. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки местно в инфицированную область вплоть до получения ответа. Двух пациентов лечили примерно десятью мл (две чайные ложки) каждой композиции согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за восемь дней.

Гонорея. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра в инфицированную область вплоть до получения ответа. Двух пациентов лечили примерно десятью мл (две чайные ложки) композиции согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациентов наблюдали отсутствие симптомов через шесть дней.

Малярия. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки перорально пациенту вплоть до получения ответа. Одиннадцать пациентов лечили в первом исследовании примерно десятью мл (две чайные ложки) каждой композиции согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациентов наблюдали устранение симптомов за пять дней. Более подробные протоколы лечения малярии обсуждаются в данном описании ниже.

Запах изо рта и гингивит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в виде полоскания рта вплоть до получения ответа. Каждого из двух пациентов лечили композицией в виде полоскания рта. Имело место полное устранение симптомов за три дня (гингивит) и за один день (запах изо рта).

Воспалительное заболевание органов таза. Способ включает в себя стадию введения примерно 5-25 мл композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в виде вагинального душа вплоть до получения ответа. Одну пациентку лечили примерно 5 мл (примерно одна чайная ложка) композиции согласно настоящему изобретению два раза в сутки. Симптомы у пациентки устранялись за пять дней.

Фарингит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в виде полоскания вплоть до получения ответа. Каждого из четырех пациентов лечили примерно десятью мл (две чайные ложки) композиции согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за шесть дней.

Ретровирусная инфекция (ВИЧ). Способ включает в себя стадию введения композиции серебра, содержащей от 5 до 40 ч./млн серебра, от одного до пяти раз в сутки перорально вплоть до получения ответа. Одного пациента, у которого обнаружен ВИЧ (вирус иммунодефицита человека), лечили примерно 5 мл (примерно одна чайная ложка) композиции согласно настоящему изобретению два раза в сутки. Симптомы пациента устранялись за пять дней.

Синусит и ринит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в нос вплоть до получения ответа. Каждого из шести пациентов с назальными инфекциями (четыре с синуситом и два с ринитом) лечили примерно двумя каплями композиции согласно настоящему изобретению, вводимыми в их носовые ходы три раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за четыре дня.

Тонзиллит. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки в виде полоскания вплоть до получения ответа. Одного пациента лечили композицией согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациента наблюдали полное выздоровление за семь дней.

Инфекция верхних дыхательных путей. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки перорально вплоть до получения ответа. Каждого из двух пациентов лечили примерно 5 мл (примерно одна чайная ложка) композиции согласно настоящему изобретению три раза в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за шесть дней.

- 29 014512

Инфекции мочевыводящих путей. Способ включает в себя стадию введения композиции серебра от одного до пяти раз в сутки перорально вплоть до получения ответа. Каждого из троих пациентов лечили примерно десятью мл (две чайные ложки) композиции согласно настоящему изобретению от двух до трех раз в сутки. У пациентов наблюдали полное выздоровление за шесть дней.

С. Обсуждение.

Полученные результаты согласуются с различными тестами ίη νίΐτο, о которых сообщается в данном описании. По существу, композиция серебра чрезвычайно эффективна против большого количества микробов ίη νίΐτο. Однако тесты показывают, что такая эффективность сохраняется даже в присутствии большого количества органического вещества. Композиции серебра проявляют широкую эффективность ίη νίνο, где органический фон чрезвычайно высок. Многие другие дезинфицирующие средства являются неэффективными в присутствии большого количества органического вещества и/или являются слишком едкими или токсичными при применении ίη νίνο.

Дополнительное исследование малярии в Гане, Африка.

Другое более жестко регламентированное исследование также проводили в Гане. Целью данного исследования было применение очень специфичного протокола и фокусирование только на целебных свойствах композиции 10 ч./млн серебро/вода согласно настоящему изобретению у пациентов, которые заразились малярией.

Целью данного протокола была разработка способа, посредством которого раствор 10 ч./млн серебро/вода, полученный согласно способам, описанным в данной публикации, можно тестировать в отношении его возможных целебных свойств при лечении пациентов, которые заразились малярийной инфекцией, вызванной любым из четырех (4) видов Ρ1;·ΐ5ΐηοάίιιιη.

В общих чертах протокол представляет собой следующее: испытания осуществляли в клиниках или больницах врачи (МИ), которые были хорошо знакомы с заболеванием и его последствиями для здоровья. Всего каждый доктор обследовал 16 пациентов, и пациентам требовалось принимать содержащий серебро продукт дважды в сутки в течение пяти дней, а также требовалось брать у них кровь за сутки до начала испытания и затем каждый день вплоть до того, как тестирование крови показывало, что паразит был удален в течение по меньшей мере двух суток. Пациенты могли получать оплату, только если они полностью придерживались схемы приема серебра и получения ежедневных тестов крови.

Подробности протокола:

количество врачей (МИ), вовлеченных в тестирование: 2;

количество пациентов, подвергаемых тестированию одним врачом: 16: 8 мужчин и 8 женщин; общее количество дней испытания: 15.

Доза композиции 10 ч./млн серебро/вода, вводимой для лечения пациентов: суммарная суточная доза - одна унция, разделенная на две равные дозы; половину унции (3 чайных ложки) принимали утром и половину унции (3 чайных ложки) принимали вечером. Пациентов лечили раствором серебро/вода в течение первых пяти (5) дней из 15 дней испытания, или, если паразит не полностью погибал на пятый день, лечение композицией серебро/вода продолжали вплоть до гибели паразита, или вплоть до 15 дня, если он наступал раньше.

В случае пациентов, у которых паразиты погибали на второй или третий день, введение композиции серебро/вода продолжали вплоть до пятого дня и делали пометку в документах, когда паразит полностью исчезал.

В случае пациента, у которого еще оставались паразиты после приема композиции серебро/вода в течение 15 дней, испытание заканчивали как обычно и данного пациента регистрировали в документах как пациента с неудачным лечением.

В случае пациента, которого лечили менее пяти дней, регистрировали дату полного исчезновения паразита, пациент продолжал получать композицию серебро/вода до пятого дня, и его продолжали наблюдать в испытании до 15 дня.

Тесты крови.

Используемые тесты крови: присутствие (или отсутствие) паразитов в крови пациентов определяли либо в тесте с окрашиванием акридиновым оранжевым, либо в тесте с окрашиванием по Гимза на тонких или толстых мазках крови от каждого пациента. Кровь пациентов тестировали в нулевой день (0), чтобы удостовериться, что у них действительно имелся активный случай малярии. Если тест крови подтверждал активный случай малярии, то пациента подвергали скринингу в отношении принятия в испытание. Скрининг включал регистрацию важных данных, таких как имя, возраст, сообщенное пациентом начало заболевания, информированность пациента о том, что от него требовалось во время испытания, о том сколько им могут заплатить за полное согласие, и тот факт, что отказ может привести к тому, что их отстранят от испытания без вознаграждения. В том случае, когда пациенты соглашались присоединиться к испытанию, они получали письменный набор инструкций, в которых им сообщалось о том, как принимать содержащий серебро продукт каждый день, куда приходить каждый день для тестирования их крови, и акцентировалась необходимость полного соблюдения протокола испытания, чтобы получать оплату в любой день.

Указанный выше протокол строго соблюдался в самом последнем исследовании в Гане в Африке.

- 30 014512

Все пациенты получали одну и ту же дозу. и их кровь проверяли ежедневно, чтобы определить наличие паразитов Р1а§тоб1а. В следующей табл. 4 перечислены части более ранних исследований, обсуждаемых выше (исследование 1 и исследование 2), а также нового исследования 3, в котором следовали протоколу, указанному непосредственно выше в данном описании.

Таблица 4. Сводные данные

Исследование	1	2	3	4

Количество пациентов	11	16	16	13
Диапазон возраста	8-75	2-90	3-61	15-57
Мужчины/женщины	МА	ΝΑ	8/8	6/7
Средняя суточная доза	10 мл	5 мл	15 мл	15 мл
Наименьшее время выздоро вления+	3 дня	3 дня	2 дня	3 дня
Наибольшее время выздоровления	7 дней	10 дней	8 дней	6 дней
Среднее время выздоровления	5,0 дней	6,3 дней	4,3 дней	4,0 дня
# Количество пациентов, проверенных на наличие плазмодиев	0	7	16	13
# Количество пациентов с плазмодиями	0	0	0*	0*
# Количество случаев неудачного лечения	0	0	0	0
+ Периоды времени выздоровления представляли собой периоды времени, воспринимаемые пациентами как бессимптомные, которые оценивали врачи. * Каждого из указанных пациентов обследовали ежедневно в течение 14 дней. Через шесть дней каждый из тестированных образцов крови был негативным в отношении Р1азтоб1а. ΝΑ - не анализировали

Несомненно, раствор 10 ч./млн серебро/вода согласно настоящему изобретению оказывал значительное позитивное воздействие против малярийного паразита.

Доказательство эффективности 100 ч./млн серебра против малярии (ΐη υϊΙιό)

Введение

В мировом масштабе малярия была и остается основной проблемой здравоохранения. Заболевание вызывает паразитическое простейшее рода Р1а§тобшт. Жизненный цикл этого организма является сложным, с чередованием полового размножения паразита в организме беспозвоночного хозяина (комара) и полового размножения в организме позвоночного хозяина. Кроме млекопитающих в качестве хозяев-позвоночных малярийных паразитов также служат птицы и рептилии. Часть жизненного цикла в организме комара представляет собой фазу спорогонии, приводящую к образованию спорозоитов, которые впрыскиваются переносчиком позвоночному хозяину во время питания. Спорозоиты дают начало фазе шизогонии с пролиферацией паразитов в эритроцитах и вне эритроцитов. Паразит является внеклеточным во время фазы спорогонии с переключением к внеклеточной локализации во время стадий шизогонии в развитии. Культивирование паразита ίη νίΐΐΌ требует для фазы спорогонии в жизненном цикле моделирования условий в организме переносчика-комара, а для фазы шизогонии - условий, стимулирующих рост вне эритроцитов и в эритроцитах хозяев-позвоночных.

Малярия является одной из наиболее распространенных паразитических болезней в мире и занимает не менее чем третье место в мире среди основных инфекционных заболеваний в отношении смертности. Протозойный паразит, который вызывает малярию, относится к роду Р1а§тобшт. Малярию вызывают четыре вида простейших Р1а§тобшт: Р1а§тобшт £а1арагцт, Р1а§тобшт νίνηχ. Р1а§тобшт та1апае и Р1а§тобшт ονа1е. Переносимые, главным образом, комарами Апорйе1е8 малярийные инфекции также могут возникать в результате контакта с инфицированной кровью, например при переливании крови.

Классические симптомы малярии включают повышенную температуру, головные боли, озноб, рвоту, дрожь и конвульсии. При некоторых редких формах малярии, вызванной Р. £а1с1рагцт, озноб и высокая температура могут отсутствовать, и у пациента может присутствовать бредовое состояние или кома. Периоды ремиссии могут продолжаться от нескольких недель до нескольких месяцев. Тяжелой анемией часто объясняется причина смерти от малярийной инфекции.

- 31 014512

РЫкшойшш Га1е1рагцш

Указанный паразит имеет несколько важных признаков. Признаки включают серповидную форму гаметоцита, медленную скорость роста последнего и локализацию пигмента вокруг ядра (перинуклеарное распределение), который отсутствует в гаметоцитах других малярийных паразитов приматов.

Р. £а1с1рагит также отличается от других видов паразитов человека своей, более высокой вирулентностью и летальными эффектами, в то время как шизогония на эритроцитарных стадиях почти полностью ограничена капиллярами и синусоидами внутренних органов. Распространенное название заболевания, вызванного Р. £а1с1рагит, трехдневная молниеносная малярия.

Материалы и способы

Цитратный раствор соли:

Хлорид натрия9 г

Цитрат натрия20 г

Дистиллированная вода 1000 мл

Краситель по Гимза:

Порошок красителя Гимза75 г

Абсолютный спирт 75 мл

Глицерин 25 мл

Краситель по Филду: раствор Филда № 1

1. Растворить 1,6 г метиленового синего в 1 л дистиллированной воды.

2. Растворить 2,6 г Ыа₂НРО₄ (безводного) в растворе, полученном на стадии 1.

3. Растворить 1 г азура 1 в растворе, полученном на стадии 2.

4. Растворить 2,6 г КН₂РО₄ в растворе, полученном на стадии 3.

5. Поместить в условия умеренного нагрева с перемешиванием или встряхиванием в течение от 45 мин до 1 ч.

6. Оставить при комнатной температуре на 24 ч.

7. Профильтровать.

Раствор Филда № 2.

1. Растворить 2 г эозина Υ в 1 л дистиллированной воды.

2. Растворить 2,6 г Ыа₂НРО₄ в растворе, полученном на стадии 1.

3. Растворить 2,6 г КН₂РО₄ в растворе, полученном на стадии 2.

4. Профильтровать. Краситель по Райту:

Порошок красителя Райта 6, 0 г

Порошок красителя по Гимза 0,6 г

Метанол 1000 мл

Перемешивают в течение ночи и фильтруют перед использованием.

Сыворотка/плазма крови человека группы АВ+.

Сыворотка/плазма крови человека группы А+.

Неполная среда КРМ1-1640 (Персональное сообщение доктора 8и1аг, Найкше 1и5Йи1е, Раге1).

Сбор и обработка инфицированной крови

Зараженные паразитами эритроциты получали, собирая аликвоты крови объемом 6 мл в 1 мл цитратного раствора соли венопункцией от пациентов с клинически диагностированными случаями малярии, вызванной Р1актойшт У1уах и Р1актойшт £а1с1рагит, из КайигЬа 1п£есйоик П1кеаке Нокрйа1, ВотЬау. Образцы крови собирали в стерильные флаконы объемом 10 мл. Образцы исследовали, готовя тонкие мазки и окрашивая мазки 10% красителем по Гимза/красителем, по Филду/красителем, по Райту, для идентификации и подтверждения вида малярийного паразита. Регистрировали процентный уровень паразитемии в образце.

Зараженные паразитами клетки крови дважды промывали неполной средой и один раз полной средой и готовили 6% суспензию клеток в полной среде. Культуры получали, распределяя по 0,5 мл суспензии на каждую чашку Петри. Добавляли 1,5 мл полной среды и чашки инкубировали в атмосфере 5% СО2 и 14-17% О2. Среду заменяли ежедневно отсасыванием старой среды стерильной пипеткой Пастера и добавлением 1,5 мл полной среды. Культуры поддерживали добавлением свежих клеток (из крови группы А+ или АВ+; промытых и приготовленных в виде суспензии клеток таким же образом) через одну неделю с промывками 2 раза/неделю вплоть до достижения целевого индекса паразитов >1%. Если начальный индекс паразитов составлял более 1%, то смесь крови со средой (ВММ) непосредственно использовали для исследований чувствительности к лекарственному средству, (Τΐιηηΐι. 2001) и (Така по г, 2002).

- 32 014512

Приготовление мазков и способ окрашивания

Культуры промывали дважды в неделю. Для промывки культуры извлекали из чашек и переносили в центрифужные пробирки. Примерно 5 мл неполной среды добавляли в каждую центрифужную пробирку и тщательно перемешивали. Пробирки центрифугировали примерно при 1000-1500 об/мин в течение примерно 10 мин. Примерно через 10 мин пробирки извлекали из центрифуги и надосадочную жидкость сливали. Затем культуры подвергали еще двум подобным промывкам, одной промывке неполной средой ВРМ1-1640 и другой промывке полной средой ВРМ1-1640. После трех промывок культуры переносили в отдельные чашки Петри. Из каждой культуры готовили мазок и красили красителем по Гимза/Филду/Райту. Примерно 1,5 мл среды добавляли в каждую чашку и мазки исследовали под оптическим микроскопом в отношении индекса паразитов или регистрировали % паразитемии для каждой культуры. В каждую чашку каждую неделю добавляли свежие эритроциты (Ргабйап, 1984).

Приготовление мазка

Брали каплю культуры из чашки на предметное стекло. Готовили тонкий мазок и сушили на воздухе. Тонкий мазок фиксировали погружением стекла в сосуд для связывания, содержащий абсолютный спирт. Готовили 10% раствор красителя по Гимза и использовали для окрашивания мазков. Стекла выдерживали погруженными в 10% раствор красителя по Гимза в течение примерно 30-40 мин и затем промывали под водопроводной водой.

Индекс паразитов

Индекс паразитов рассчитывали подсчетом количества паразитов на 100 эритроцитов в тонких мазках крови. Для этой цели обследовали минимум 100 полей или 10000 ВВС.

Системы культивирования

Культуры на чашках готовили с 5% гематокритом и примерно 1% паразитемией. Чем ниже начальная паразитемия, тем больше увеличение количества паразитов, которое будет происходить во время роста ίη уйго.

Чувствительность к лекарственным средствам

Стерильные планшеты М1сго^е11 с плоским дном диаметром 16 мм использовали для чувствительности к лекарственным средствам. Один планшет использовали для одного образца. Первые две лунки использовали для контроля и в них вносили 50 мкл ВММ пациентов или культуры и 50 мкл полной среды ВРМ1 и не вносили лекарственного средства. Для тестирования 50 мкл культуры или ВММ пациентов перемешивали в лунке, содержащей 50 мкл сконструированных наночастиц серебра (Ε8ΝΓ) в разных концентрациях. Планшеты М1сго^е11 закрывали и инкубировали примерно при 37°С в сосуде с фильтром-свечой в течение примерно 48 ч. Большая часть паразитов вступала в стадию шизонта к концу 48часовой инкубации. После инкубации надосадочную среду удаляли с использованием микропипетки; из каждой лунки брали кровь, чтобы приготовить мазки, и исследовали в отношении развития шизонтов. Оценку в тесте проводили подсчетом количества паразитов на окрашенных пленках, полученных до инкубации и после инкубации, и связанного с Ε8ΝΓ ингибирования образования шизонтов. Для достоверного тестирования в контрольной лунке должно наблюдаться >10% созревание шизонтов (АУегпкбогГег апб АегпкбогГег. 1995).

Результаты

Вид	Процент снижения количества паразитов
Р1азто(Иип1 £а1с1рагип1	94%
Р1 азтос11 ит νίνζх	92%
Р1азтосИит ЬегдЬе!	90% .

В тесте ίη уйго, используемом в качестве показателя противомалярийной эффективности, окончательно наблюдали, что Е8№ - 100 ч./млн способны уменьшать количество паразитов ίη уйго. Это имеет важное значение, так как паразиты были собраны от пациентов, у которых наблюдали озноб с повышенными температурами и классическими симптомами малярийной инфекции.

Доказательство эффективности 10 ч./млн серебра против туберкулезных бактерий

A. Цель.

Целью данного примера была демонстрация эффективности композиции серебра согласно настоящему изобретению против бактерий, которые вызывают туберкулез. В данном примере описаны способы оценки согласно настоящему изобретению бактерицидной эффективности по отношению к бактериям туберкулеза. Методика основана на тесте бактерицидной активности против бактерий туберкулеза, который утвержден ЕРА 11 декабря 1985. [Ипйеб 81а1ек Епуйоптеп!а1 РгсИесбоп Адепсу, 1986. ОГПсе оГ Рек11с1бек апб Тох1с 8иЬк!апсек. Эа1а Са11-1п №бсе Гог ТиЬегсио1ос1ба1 ЕГГесбуепекк Эа1а Гог А11 Ап1пшсгоЫа1 Рекбабек \\Й11 ТиЬегси1ос1ба1 С1а1тк (получен 13 июня 1986).

B. Материалы и способы.

Материалы. Композиция серебра согласно настоящему изобретению содержала 10 ч./млн серебра в воде. Композицию серебра оценивали, используя нанесение жидкости на жидкую матрицу, против МусоЬас1егйпп Ьоу1к ВСС (ТМС 1028). Указанный организм вызывает туберкулез у животных и может вы

- 33 014512 звать туберкулез у человека. Его используют в качестве замены М. 1иЬегси1о818, основной причины туберкулеза у человека, так как тесты показали, что данный организм обладает чувствительностью, сходной с М. 1иЬегси1о818. Тестируемый организм подвергали воздействию композиции серебра в двух повторах в течение четырех периодов времени экспозиции и количественно оценивали, используя фильтрование через мембраны.

Способ. Флакон замороженной маточной культуры извлекали из хранения и размораживали. К клеточной суспензии добавляли равный объем забуференного желатина (ΒυΟΕ) и гомогенизировали гомогенизатором ткани из тефлона (торговая марка политетрафторэтилена) в течение 1 мин, поддерживая культуру при температуре от 0 до 4°С на ледяной бане. Гомогенизированную клеточную суспензию разбавляли физиологическим раствором, содержащим твин 80 (торговая марка полисорбата) (8Τ80) примерно до 10⁷ КОЕ/мл.

Титрование контрольного заражения. Готовили десятикратные разведения культуры в заготовках для разведения, содержащих 9 мл бульона с нейтрализатором (ΝΕυΒ) до разведения 10^-6. Три аликвоты по 1 мл соответствующих разведений фильтровали через мембраны, сначала добавляя 10-20 мл физиологического раствора (РН88) в корпус фильтра и затем добавляя аликвоту объемом 1 мл соответствующего разведения. Затем фильтр промывали примерно 100 мл РН88. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с агаром 7Н11. Чашки инкубировали во влажной камере при 37±2°С в течение 21 дня.

Позитивный контроль. Готовили пробирку, содержащую 9 мл 8Τ80, и уравновешивали до 20 ±0,5°С. Во временной точке 0 в пробирку добавляли 1 мл культуры тестируемого организма (разведение 1:10). Образец выдерживали в течение 60 мин. Готовили серийные разведения в заготовках для разведения, содержащих 9 мл ΝΕυΒ, до разведения 10^-6. Три аликвоты по 1 мл соответствующих разведений фильтровали через мембраны, сначала добавляя 10-20 мл РН88 в корпус фильтра и затем добавляя аликвоту объемом 1 мл соответствующего разведения. Затем фильтр промывали примерно 100 мл РН88. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с агаром 7Н11. Чашки инкубировали во влажной камере при 37±2°С в течение 21 дня.

Тесты. Две пробирки 25x150 мм, содержащие 9 мл тестируемого образца, уравновешивали до 20 ±0,5°С на водяной бане. В каждую пробирку, содержащую тестируемое дезинфицирующее средство (т.е. композицию серебра), добавляли 1 мл культуры тестируемого организма. Содержимое пробирки перемешивали вращением и снова помещали на водяную баню. Во временных точках 15, 30, 45 и 60 мин, аликвоты объемом 1 мл смеси дезинфицирующее средство-суспензия клеток переносили в 9 мл ΝΕυΒ и тщательно перемешивали. Десятикратные серийные разведения готовили в заготовках для разведения, содержащих 9 мл ΝΕυΒ, до разведения 10^-6. Три аликвоты по 1 мл соответствующих разведений фильтровали через мембраны, сначала добавляя 10-20 мл РН88 в корпус фильтра и затем добавляя аликвоту объемом 1 мл соответствующего разведения. Фильтр промывали примерно 100 мл РН88. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с агаром 7Н11. Чашки инкубировали во влажной камере при 37±2°С в течение 21 дня.

Контроль с фенолом. Чтобы показать минимальную жизнеспособность и резистентность культуры ее тестировали против 0,8% раствора фенола. Аликвоту объемом 1 мл культуры тестируемого организма помещали в 9 мл раствора фенола, уравновешенного до 25±0,5°С и инкубировали в течение 20 мин. После периода воздействия 1 мл из раствора фенол/организм извлекали и добавляли к 9 мл ΝΕυΒ. Десятикратные серийные разведения готовили в заготовках для разведения, содержащих 9 мл ΝΕυΒ, до разведения 10^-6. Три аликвоты по 1 мл соответствующих разведений фильтровали через мембраны, сначала добавляя 10-20 мл РН88 в корпус фильтра и затем добавляя аликвоту объемом 1 мл соответствующего разведения. Фильтр промывали примерно 100 мл РН88. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с агаром 7Н11. Чашки инкубировали во влажной камере при 37±2°С в течение 21 дня.

Подтверждение нейтрализации. Аликвоту объемом 1 мл дезинфицирующего средства добавляли к 8 мл ΝΕυΒ. Бульону, содержащему дезинфицирующее средство/нейтрализатор, обеспечивали возможность для уравновешивания до такой же температуры как и тестируемые образцы. К смеси добавляли один мл культуры тестируемого организма и тщательно перемешивали. Инкубацию продолжали в течение периода времени, приблизительно требуемого для фильтрации образца. Дополнительно добавляли аликвоту объемом 1 мл тестируемого организма к 9 мл ΝΕυΒ и тщательно перемешивали (разведение 1:10). Десятикратные серийные разведения содержимого обеих пробирок готовили в заготовках для разведения, содержащих 9 мл ΝΕυΒ, до разведения 10^-6. Три аликвоты по 1 мл соответствующих разведений фильтровали через мембраны, сначала добавляя 10-20 мл РН88 в корпус фильтра и затем добавляя аликвоту объемом 1 мл соответствующего разведения. Фильтр промывали примерно 100 мл РН88. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с агаром 7Н11. Чашки инкубировали во влажной камере при 37±2°С в течение 21 дня.

С. Результаты.

Начальный титр культуры для заражения составлял 4,7х10⁷ КОЕ/мл. Титр в позитивном контроле

- 34 014512 составлял 6,5 х 10⁶ КОЕ/мл. В среде, используемой в данном исследовании, наблюдали эффективную нейтрализацию с 95,2% восстановлением в растворе дезинфицирующее средство/нейтрализатор по сравнению с контрольной средой.

В случае тестируемых чашек ожидаемые количества недооценивали и поэтому указанные количества представлены со знаком >, чтобы отметить, что количество является приблизительной оценкой и что точные количества выше предела выявления для высеваемых разведений.

При расчетах 1од и процента снижения в результате действия дезинфицирующего средства против М. Ьоу15 оцениваемые количества, которые были больше чем указанные количества, приводили к 1од и процентам снижения меньше чем указанные (<). Цель заключалась в том, чтобы показать, что результаты являются приблизительной оценкой и находятся за пределами границ точного определения для высеваемых разведений. Все снижения рассчитывали, используя позитивный контроль в качестве начального титра организма. Результаты определения 1од и процента снижения суммированы ниже. В качестве меры резистентности заражающей культуры резистентность к фенолу М. Ьо\35 соответствовала 1од снижения ~1,81 при 20-минутном воздействии 0,8% фенола.

Первый повтор:

Время воздействия	Вод снижения	Процент снижения
15 мин	<0,12	<12,3%
30 мин	<0,22	<40,0%
45 мин	<1, 57	<97,2%
60 мин	<1,56	<97,2%

Второй повтор:

Время воздействия	Вод снижения	Процент снижения
15 мин	<0,26	<44,8%
30 мин	<0, 20	<36,9%
45 мин	<1,58	<97,3%
60 мин	<1, 53	<97,1%

Р. Выводы.

Применение композиций серебра согласно настоящему изобретению эффективно против вызывающих туберкулез бактерий. Способ, включающий в себя стадию введения композиций серебра согласно настоящему изобретению, является эффективным против вызывающих туберкулез организмов.

Доказательство эффективности 10 ч./млн серебра против Сапб1ба а1Ыеап$ АТСС 10231, ТпеЬошопаз να^ϊηαΐϊχ № 20235 и МК8А 8(арКу1ососсих аигеиз АТСС № ВАА-44

A. Цель примера.

Целью данного примера является иллюстрация эффективности композиций серебра согласно настоящему изобретению против Сапб1ба а1Ь1сап8 АТСС 10231, тасНов-юнах уадшабк АТСС 20235 и резистентного к лекарственным средствам 81ар11у1ососси5 аитеик АТСС ВАА-44.

Дрожжи Сапб1ба а1Ысап8 и простейшие Τ^^сΗотоηа5 уадшабк могут вызывать многочисленные проблемы со здоровьем, включая вагинальные инфекции, опрелости и молочницу. Приведенные ниже результаты показывают, что композиции серебра согласно настоящему изобретению приводят почти к 100% гибели обоих организмов. Результаты показывают применимость композиций серебра согласно настоящему изобретению в продуктах для женской гигиены и продуктах против опрелости.

81ар11у1ососси5 аитеик может вызывать серьезную интоксикацию крови при попадании в рану. Прежде лечение легко осуществляли пенициллином, но в настоящее время организм мутировал до такой точки, когда он стал полностью резистентным к пенициллину. Следующей ступенькой в борьбе с использованием антибиотиков был метициллин, но резистентные к метициллину штаммы все больше и больше распространились в стационарах. Указанные штаммы известны как МЯ8А (резистентные к метициллину 81ар11у 1ососси5 аитеик) и также названы резистентными к воздействию антибиотиков бактериями. Люди, которые заражены МЯ8А, могут умереть в течение нескольких дней. Согласно результатам, приведенным в данном примере, обнаружено, что композиция серебра согласно настоящему изобретению убивает 91,6% МЯ8А только за 10 мин и 99,5% за час. Результаты показывают применимость композиций серебра согласно настоящему изобретению для уничтожения МЯ8А, известной инфекционной опасности.

B. Способы и результаты.

Используя быстрый тест защиты от контрольного заражения И8Р для композиции согласно настоящему изобретению, содержащей 10 ч./млн серебра в воде, получили следующие результаты. Полученные результаты показывают, что композиции серебра согласно настоящему изобретению могут быть эффективными против дрожжевых инфекций, протозойных инфекций и инфекций, вызванных резистентными к лекарственным средствам бактериями.

Сапб1ба а1Ысап8 АТСС № 10231. Начальная концентрация дрожжей Сапб1ба а1Ысап8 составляла 6,8

- 35 014512 х10⁵ КОЕ/мл. После контакта в течение 10 мин, 30 мин, 1 ч или одних суток с композицией серебра колонии не выявляли.

Тйсйотопак уад1пайк АТСС № 30235. Начальная концентрация простейшего Тйсйотопак уадшайк составляла 6,0х10⁴ КОЕ/мл. После контакта с композицией серебра в течение 10 мин, 30 мин, 1 ч или одних суток имело место 0% подвижность из 100 организмов. То есть анализировали сто (100) паразитов Тйсйотопак уадшайк с помощью микроскопии в отношении подвижности жгутиков. Ни у одного из ста (100) паразитов не наблюдали подвижности уже через десять (10) минут контакта с композицией серебра, что свидетельствует об ингибирующих или летальных свойствах композиции серебра в отношении паразитов. Наружные мембраны двадцати пяти (25) процентов паразитов были разрушены после контакта в течение одних (1) суток.

81арйу1ососсик аигеик МВ8А АТСС №ВАА-44. Начальная концентрация резистентных к метициллину 81арйу1ососсик аигеик (МВ8А) составляла 6,0х10⁶ КОЕ/мл. После контакта с композицией серебра выявляли 500000 КОЕ/мл после 10-минутного контакта (гибель 91,6%), 70000 КОЕ/мл после 30минутного контакта (гибель 98,8%), 30000 КОЕ/мл после 1-часового контакта (гибель 99,5%) и менее 10 КОЕ/мл после контакта в течение одних суток (фактически полная гибель).

Доказательство эффективности и отсутствия цитотоксичности 10 ч./млн серебра, 14 ч./млн серебра + 1,5% Н₂О₂ и 22 ч./млн серебра в ингибировании ДНК-полимеразы и обратной транскриптазы в случае гепатита В

A. Цель примера.

Целью примера является иллюстрация эффективности композиций серебра согласно настоящему изобретению против гепатита В. Данный пример показывает, что композиции серебра согласно настоящему изобретению обладают противовирусными свойствами. Так как любое средство, применяемое в противовирусной терапии, должно проявлять небольшую или не проявлять цитотоксичности, то анализировали цитотоксичность композиций серебра.

Гепатит В вызван ДНК-вирусом семейства вирусов Нерабпаушбае. Вирус гепатита В (НВУ) является вирусом, содержащим 3,2 т.п.о. ДНК, реплицирующимся почти исключительно в клетках печени (гепатоцитах). В репликацию вовлечены два основных фермента: ДНК-полимераза и обратная транскриптаза. Результаты данного примера показывают, что композиции серебра согласно настоящему изобретению препятствуют репликации с вовлечением либо ДНК-полимеразы, либо обратной транскриптазы, что композиции серебра согласно настоящему изобретению обладают противовирусными свойствами, что композиции серебра согласно настоящему изобретению могут быть эффективными против гепатита В.

Как более подробно обсуждается далее, когда вирус гепатита В проникает в организм нового хозяина, он инфицирует печень, если он обходит иммунную систему хозяина. При инфекции вирус связывается с мембраной клетки печени, и частица ядра вируса проникает в клетку печени. Затем частица ядра высвобождает находящиеся в ней ДНК и ДНК-полимеразу в ядро клетки печени. В клетке печени вирус реплицируется посредством процессов обратной транскрипции и трансляции, в которые вовлечены ферменты обратная транскриптаза и ДНК-полимераза. ДНК-полимераза заставляет клетку печени создавать копии ДНК гепатита В. Указанные копии вируса высвобождаются через мембрану клетки печени в кровоток. Из кровотока они могут инфицировать другие клетки печени и таким образом эффективно реплицируются. Инкубационный период вируса гепатита В составляет примерно от 6 до 25 недель (т.е. период времени до появления физических и в большинстве случаев выявляемых гистологических или физических симптомов). Однако имеют место несколько биохимических и гистологических изменений, которые происходят на ранних стадиях после инфекции вирусом гепатита В.

B. Материалы.

Использовали растворы, содержащие композиции серебра 10 ч./млн, 14 ч./млн, 22 ч./млн и 32 ч./млн согласно представленному описанию. Нуклеотиды бАТР, бСТР, бСТР и [³Н]-бТТР получали из стандартных коммерческих источников, также как соединения ламивудин (синтетическое средство против ретровирусов) и зидовудин (А2Т). Выделенный вирус гепатита В получали свежевыделенным от человека, страдающего инфекцией гепатита В, в Найше ЬкйЮе, МитЬа1 ΙΝΩ [А (сертифицированная \УНО испытательная лаборатория). Тестируемые культуры клеток (Уето и Нер2) выращивали в виде сливающегося монослоя обычными способами культивирования клеток.

C. Способы.

1) Способ тестирования ингибирования ДНК-полимеразы.

Общий способ. Экстракты вируса гепатита, полученные из организма человека, инкубируют с радиоактивно мечеными нуклеотидами и активным ингибитором. Процент ингибирования рассчитывают на основе количества синтезированной бе поуо вирусной нуклеиновой кислоты относительно ламивудина в качестве позитивного контроля и фосфатно-солевого буфера (РВ8) в качестве негативного контроля.

Конкретный способ. Выделенный вирус гепатита В лизировали, чтобы экстрагировать свободный фермент полимеразу, который свободен от примеси ферментов. Вирусный экстракт (25 мл) добавляли к реакционной смеси, содержащей нуклеотиды бАТР, бСТР, бСТР и [³Н]бТТР (25 мл). К смеси, содержа

- 36 014512 щей вирусный экстракт и нуклеотиды, добавляли активный ингибитор (3 мл). Полученную в результате смесь инкубировали при 37°С в течение 24 ч.

Осуществляли отдельный эксперимент с негативным контролем, в котором использовали фосфатно-солевой буфер (РВ8, 3 мл) вместо ингибитора (3 мл).

Осуществляли отдельный эксперимент с позитивным контролем, в котором использовали известный ингибитор ДНК-полимеразы (3 мл ламивудина в концентрации 3 мг/мл) вместо тестируемого ингибитора (3 мл).

Реакцию останавливали добавлением 25 мл ΕΌΤΑ и 25 мл ТХУ (трихлоруксусной кислоты). Затем реакционную смесь наносили пятнами на бумагу с ионогенными группами (ΌΕΑΕ-бумагу). Бумагу промывали три раза ТХУ и затем этиловым спиртом. Фильтровальную бумагу сушили на воздухе и помещали во флакон для сцинтилляции, содержащий сцинтилляционную смесь. Радиоактивность измеряли в жидкостном сцинтилляционном счетчике (В1ие 81аг). В качестве контроля счета пустую композицию серебра проводили через весь процесс без вирусной нагрузки, чтобы проверить возможные помехи для способа сцинтилляционного счета.

Описание данного способа приведено в публикации Р. 8. Уепка1е5\\'агап. I. М111тап, апб В. 8. В1итЬегд, ΕίίεΛ οί ап ех1гас1 Ггот РНу11ап1Нн5 шгип оп ЬераББк В апб \\'ообс11иск ЬераЫй νπυ^δ: ίη νίίτο апб ίη νίνο 51иб1е5 , Ргос. Αсаб. 8ск, υ8Α, 1987, 84, 214-278, которая включена в данное описание в виде ссылки.

2) Способ тестирования ингибирования обратной транскриптазы.

Использовали коммерческий препарат вирусного фермента обратной транскриптазы вируса лейкоза Молони (МоМиЬУ), имеющий поли(А)бТ (праймер для ОТ). 50 мл препарата МоМиЬУ объединяли со смесью нуклеотидов 6ΑΤΡ, бСТР, бСТР и [³Н]бТТР.

Полученную смесь объединяли в 3 мл тестируемого ингибитора и полученную в результате смесь инкубировали при 37°С в течение 24 ч.

Осуществляли эксперимент с негативным контролем, в котором использовали фосфатно-солевой буфер (РВ8, 3 мл) вместо ингибитора.

Осуществляли эксперимент с позитивным контролем, в котором использовали известный ингибитор обратной транскриптазы (3 мл ΑΖΤ в концентрации 0,625 микрограмм/мл) вместо тестируемого ингибитора.

Реакцию останавливали добавлением 25 мл ΕΌΤΑ и 25 мл ТХУ. Затем реакционную смесь наносили пятнами на бумагу с ионогенными группами (ΌΕΑΕ-бумагу) . Бумагу промывали три раза ТХУ и затем этиловым спиртом. Фильтровальную бумагу сушили на воздухе и помещали во флакон для сцинтилляции, содержащий сцинтилляционную смесь. Радиоактивность измеряли в жидкостном сцинтилляционном счетчике (В1ие 81аг).

3) Способ тестирования цитотоксичности.

Клетки получали из здоровых, слитых в монослой культур клеток Уего и Нер2, которые поддерживали, пересевая каждые 3-4 дня. За день до теста клетки высвобождали из культур, используя стандартные способы, и суспендировали в среде роста, и распределяли по лункам планшета для микротитрования, и помещали в инкубатор с 5% СО₂ при 37±2°С. Аликвоту (100 мкл) каждого тестируемого вещества вносили в лунку (в трех повторах) или вносили 100 мкл РВ8 в качестве контроля. Каждые 24 ч лунки исследовали с помощью мощного инвертированного микроскопа, чтобы проверить цитопатическое действие (СРЕ). Все результаты показаны в следующей табл. 5.

Ό. Результаты.

Таблица 5а. Результаты тестирования ингибирования обратной транскриптазы Образец % ингибирования

Негативный контроль(РВЗ)0

Позитивный контроль (ΑΖΤ)31,33

Серебро, 10 ч/млн.89,52

Серебро, 14 ч/млн. и 1,5% Н₂О₂86,93

Серебро, 22 ч/млн.84,46

Таблица 5Ь. Результаты тестирования ингибирования ДНК-полимеразы Образец % ингибирования

Негативный контроль{РВЗ)0

Позитивный контроль (ламивудин)31,33 ч/млн.

ч/млн. с 1,5% Н₂0₂ ч/млн.

Серебро,

77,73

65, 6

60,89

Композиции серебра согласно настоящему изобретению являются высокоэффективными в ингибировании ДНК-полимеразы.

- 37 014512

Таблица 5с. Результаты тестирования ингибирования обратной транскриптазы Образец % ингибирования

Негативный контроль(ΡΒΞ)

Позитивный контроль (ΑΖΤ)

Серебро, 10 ч/млн.

Серебро, 14 ч/млн. с 1,5% Н₂О₂

Серебро, 22 ч/млн.

18,06

89, 52

86, 93

84,46

Таким образом, композиции серебра согласно настоящему изобретению ингибируют обратную транскриптазу. Можно ожидать, что композиции серебра согласно настоящему изобретению являются эффективными против заболеваний человека, распространяемых вирусами, таких как гепатит В.

Таблица 56. Результаты тестирования цитотоксичности

Образец Уего Нер2

Контроль (РВ5) Нет СРЕ Нет СРЕ

Серебро, 10 ч/млн. Нет СРЕ Нет СРЕ

Серебро, 14 ч/млн. с 1,5% Н₂О₂ СРЕ-позитивный СРЕ-позитивный Серебро, 22 ч/млн. Нет СРЕ Нет СРЕ

Полученные результаты показывают, что композиция серебра, по существу, не является цитотоксичной. Как предполагалось, пероксид водорода, который, как известно, является цитотоксичным, оказывал цитотоксическое действие. Таким образом, серебро должно быть безвредным для клеток при использовании ίη νΐνο.

12. Доказательство эффективности композиции серебра в качестве дезинфицирующего воду средства

Α. Цель.

Тесты осуществляли для того, чтобы показать эффективность предлагаемой в изобретении композиции для дезинфекции питьевой воды.

В. Способы.

Образец сырой речной воды заражали двумя петлями К1еЬые11а ох1уоса. Аликвоты объемом 100 мл полученного зараженного водного раствора доводили до получения 0,05 ч./млн, 0,1 ч./млн, 0,2 ч./млн, 0,5

ч./млн или 1,0 ч./млн композиции серебра согласно изобретению. После инкубации в течение 5-60 мин образцы фильтровали через мембрану. Фильтр промывали примерно 100 мл стерильной воды. Фильтры асептически извлекали из корпуса фильтра и помещали на чашки с питательным агаром для колиформных бактерий. Чашки инкубировали в условиях роста в течение 24 ч и подсчитывали.

Таблица 6

Образец	Серебро (ч/млн.)	Контакт (мин)	Всего колиформных бактерий (в мл)	КОЕ/100 мл
Сырая вода	—	—	36	ΤΝΤΟ
1	1,00	5, 0	0	0
2	1,00	10,0	0	0
3	1,00	15,0	0	0
4	1,00	30,0	0	0
5	0,50	10, 0	0	0
6	0,50	30,0	0	0
7	0,50	60, 0	0	0
8	0,20	5,00	0	0
9	0,20	10,0	0	0
10	0,20	30,0	0	0
11	0,20	60,0	0	0
12	0, 10	10,0	0	0
13	0, 05	20,0	0	0

ΤΝΤί = слишком много, чтобы подсчитать.

Композиция серебра оказалась неожиданно эффективной. Даже за короткое время (20 мин), в течение которого осуществляли инкубацию с наименьшей тестируемой концентрацией (0,05 ч./млн) имела место полная гибель бактерий. При концентрации 0,20 ч./млн и выше полная гибель наблюдалась через 5 мин. По-видимому, для полной гибели требовалось менее 5 мин.

Доказательство эффективности 32 ч./млн серебра в качестве средства для дезинфекции поверхностей

Агентство по охране окружающей среды (ЕРА) утвердило композицию, содержащую 32 ч./млн серебра согласно настоящему изобретению в качестве средства для дезинфекции поверхностей широкого спектра действия для применения в больницах, медицинских учреждениях, жилых домах, коммерческих зданиях и фирмах. Композиция была одобрена для применения против некоторых из наиболее смертоносных патогенов, включая грамположительные бактерии, такие как §1арйу1ососси8 аитеик (в настоящее время считающаяся наиболее смертоносной бактерией в больницах США), грамотрицательные бактерии, такие как 8а1топе11а с1ю1егае5Ш5 (ответственная за пищевые отравления), и внутрибольничные или заражающие в больницах патогены, такие как Ркеиботопак аетидшока (часто выявляемая в местах ожогов и

- 38 014512 порезов).

Композиции серебра согласно настоящему изобретению можно распылять на площади и вокруг площадей, не создавая угрозы здоровью или самочувствию людей или животных. Можно дезинфицировать поверхности, выбранные из группы, состоящей из стен, столов, стульев, осветительных приборов, ванных комнат, стекла, фарфора, металла, глазурованной керамики, эмалированных и раскрашенных поверхностей, посредством опрыскивания или протирания композицией серебра согласно настоящему изобретению. Предпочтительный способ дезинфекции включает в себя одну или несколько стадий очистки дезинфицируемой поверхности посредством нанесения с помощью спрея, швабры, губки или ткани композиции согласно настоящему изобретению, тщательного увлажнения дезинфицируемой поверхности, обеспечения возможности для поверхности оставаться влажной в течение по меньшей мере 10 мин при температуре по меньшей мере 20°С (соотношение время/температура можно корректировать согласно уравнению Аррениуса или другими способами, известными специалисту в данной области) и вытирания поверхности чистым бумажным или тканевым полотенцем. Композиции для дезинфекции поверхностей включают композиции, содержащие от 5 до 40 ч./млн серебра. Предпочтительная композиция согласно настоящему изобретению для дезинфекции поверхностей содержит (32 ±3) ч./млн серебра. Другая предпочтительная композиция согласно настоящему изобретению для дезинфекции поверхностей содержит (10 ±2) ч./млн серебра. Другая предпочтительная композиция согласно настоящему изобретению для дезинфекции поверхностей содержит (22 ±2) ч./млн серебра.

Доказательство эффективности композиции серебра в качестве превосходного дезинфицирующего средства

A. Цель примера.

Целью данного примера является иллюстрация противомикробной активности композиции серебра согласно настоящему изобретению (в данном случае 10 ч./млн серебра, 14 ч./млн серебра с 1,5 мас.% пероксида водорода и 32 ч./млн серебра) против тестируемого организма Уегкийа рекйк, этиологического фактора бубонной чумы. Осуществляя стандартный анализ зависимости гибели от времени с использованием суспензии Υ. рекйк, показали, что композиции серебра согласно настоящему изобретению эффективны даже против бактерий бубонной чумы.

B. Материалы и способы.

Υ. рекйк, штамм Ό27, выращивали на чашках с агаром Со1итЫа в течение примерно 24 ч при 30°С в инкубаторе с 5% СО₂. Выросшие бактерии с чашки соскабливали в суспензию, используя 3 мл стерильной воды для ВЭЖХ. Суспензию переносили в коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл. Затем чашку промывали, используя еще 2 мл воды для ВЭЖХ. Указанную промывную воду добавляли в центрифужную пробирку. Пробирку центрифугировали при 3500хд в течение 5 мин. Надосадок сливали и осадок ресуспендировали в 1 мл воды для ВЭЖХ, получая конечную концентрацию примерно 10¹⁰ клеток в 1 мл.

Способ включает в себя следующие стадии:

1. Аликвоту тестируемой композиции серебра объемом 9,9 мл помещали в стерильную пробирку 20x150 мм. Пробирку уравновешивали на водяной бане при 20°С.

2. В пробирку, содержащую композицию серебра, инокулировали 100 мкл суспензии тестируемого организма в нулевое время с образованием смеси. Пробирку сразу же встряхивали и возвращали на водяную баню.

3. Во временных точках 2 мин, 3 мин, 4 мин и 5 мин для 10 ч./млн или 32 ч./млн серебра или 2 мин, 4 мин, 6 мин и 8 мин для 14 ч./млн серебра с 1,5% об./об. Н₂О₂ 1 мл смеси организм/серебро переносили в 99 мл нейтрализатора в колбе Эрленмейера объемом 250 мл.

4. Нейтрализованную суспензию немедленно серийно разводили 1:10 в физиологическом солевом растворе (Р88).

5. Количество жизнеспособных организмов в пробирках и колбах с выбранными разведениями анализировали фильтрованием через мембраны. Аликвоты объемом 1 мл высевали в двух повторах. Мембраны промывали примерно 150 мл (или 250 мл, если образец брали из флакона с нейтрализатором) стерильного фосфатно-солевого буфера и переносили на чашки с агаром Со1итЬ1а. Также высевали полное оставшееся содержимое (98 мл) флаконов с нейтрализатором для временных точек 4 и 5 мин. Чашки инкубировали при 30°С в инкубаторе с 5% СО₂ в течение 72 ч.

6. Подсчитывали количество колоний на каждом фильтре и вычисляли 1од снижения.

C. Результаты.

Результаты для 10 ч./млн серебра показаны в табл. 7.

Таблица 7

Время	Ьод снижения	Процент гибели
2 мин	2,63	99,77
4 мин	3,20	99, 94
6 мин	3,46	99, 97
8 мин	3,68	99,98

Рассчитанное уравнение регрессии для полученных данных Υ=2,3965+0,1696χ. Уравнение показы- 39 014512 вает, что время, необходимое для б-^д-снижения, составляет 21,2 мин. Результаты для 32 ч./млн серебра показаны в табл. 8.

Таблица 8

Время	Ьод снижения	Процент гибели
2 мин	>7,61	99,999998
4 мин	>7, 61	99,999998
6 мин	>7,61	99,999998
8 мин	>7, 61	99,999998

Результаты для 14 ч./млн серебра с 1,5% об./об. Н₂О₂ показаны в табл. 9. Таблица 9

Время	Ьод снижения	Процент гибели
2 мин	3, 27	99, 95
3 мин	4,72	99,998
4 мин	5,36	99,9996
5 мин	6,47	99,99997

Рассчитанное уравнение регрессии для полученных данных Υ=1,371+1,024χ. Уравнение свидетельствует, что время, необходимое для 6-1од-снижения, составляет 4,52 мин.

Композиция серебра согласно настоящему изобретению проявляла значительную бактерицидную активность против Υ. рейЪ, этиологического фактора бубонной чумы. Композиция 32 ч./млн давала более чем 7 ^д-снижение (по существу, полную гибель) мене чем за 2 мин. Данные показывают, что в случае 10 ч./млн серебра требуется около 20 мин для достижения 6 ^д-гибели. Серебро и пероксид водорода проявляли значимый синергизм с рассчитанной 6 ^д-гибелью меньше, чем за 5 мин. Это намного лучше, чем в случае 10 ч./млн серебра отдельно. Уровень 14 ч./млн серебра выбирали потому, что данные других экспериментов свидетельствовали, что при данном уровне серебра в комбинации с пероксидом водорода можно получить результаты, приближающиеся к результатам продукта, содержащего 32

ч./млн серебра.

Сводные данные

В следующей табл. А приведена сводка описанных выше результатов в отношении воздействия композиции серебра согласно изобретению на широкое множество микроорганизмов и заболеваний человека. В некоторых случаях представленные в таблице данные не приведены выше. Однако результаты получали, используя способы, которые объясняются выше, так что специалист в данной области легко может повторить результаты.

Заболевания человека, излечиваемые композицией серебра согласно изобретению, и патогены, убиваемые композицией серебра согласно изобретению.

Таблица А

Заболевание	Патоген	Эффективная концентрация
Фурункул	Зеар1уу1оаассиз аигеиз	Погибали Θ 5 ч/млн.
Остеомиелит	ЗеарЬу1ососсиз аигеиз	Погибали @ 5 ч/млн.
Бактериальная дизентерия	З.ЫдеИа ЬоусШ	Погибали @2,5 ч/млн.
Инфекции ожогов	Рзеис1отопаз аегидзпоза	Погибали @ 5 ч/млн.
Зубная бляшка	ЗегерСососсиз тисапз	Погибали @ 5 ч/млн.
Диарея (геморрагическая)	5Ыде11а ЬоусШ	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Диарея	ЕзсПег1сп1а соИ	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекция уха	НаеторкНиз 1п£1иепгаз	Погибали 0 1,25 ч/млн.
Инфекция уха	ЗЬ-герСососсиз рпеитопзе	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Брюшной тиф	За1топе11а ЬуЫтигаит	Погибали β 2,5 ч/млн.
Эпиглотит (у детей)	НаеторЪНиз 1п£1иепгае	Погибали 0 1,25 ч/млн.
Глазные инфекции	ЗеарРу1ососсиз аигеиз	Погибали @ 5 ч/млн.
Язвы роговицы - кератит	РзеисЗотопаз аегидлпоза	Погибали 6 5 ч/млн.
Пищевая интоксикация	За1топе11а аглзопа	Погибали 0 5 ч/млн.
Пищевая интоксикация	За1топе11а £уП1гп.иг1ит	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Пищевая интоксикация	ЕзсЬеглсЪза со!1	Погибали 0 2,5 ч/млн.
Эндокардит	ЗОгерсососсиз РаесаИз	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Эндокардит	ЗЬгереососсиз догс!оп11	Погибали 0 5 ч/млн.
Менингит	НаеторкНиз 1п£1иепгае	Погибали 0 1,25 ч/млн.
Менингит	ЕпеегоЬасеег аегодепез	Погибали β 2,5 ч/млн.
Менингит	Рзеис/отопаз аегидлпоза	Погибали 6 5 ч/млн.
Менингит	Зсгерсососсиз рпеитопле	Погибали 0 2,5 ч/млн.
Внутрибольничные инфекции	К1еЪз2е11а рпеигаоплае	Погибали 0 2,5 ч/млн.
Внутрибольничные инфекции	Рзеи^отопаз аегидгпоза	Погибали @ 5 ч/млн.
Внутриболь ничные инфекции (из больниц)	Зелереососсиз руодепез	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Пневмония	Зеар1гу1ососсиз аигеиз	Погибали @ 5 ч/млн.
Пневмония	НаеторкНиз 1п£1иепгае	Погибали 0 1,25 ч/млн.
Пневмония	РзеисЗотопаз аегидЕпоза	Погибали @ 5 ч/млн.
Пневмония	ЗегерСососсиз рлеитолде	Погибали 6 2,5 ч/млн.
Инфекции дыхательных, путей	ЗегерЕососсиз руодепез	Погибали Θ 1,25 ч/мпн.
Инфекции дыхательных путей	Е. соИ	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции дыхательных путей	К1еЬз1е11а рпеитоплае	Погибали @2,5 ч/млн.
Скарлатина	ЗСгер^ососоиз руодепез	Погибали @ 1/25 ч/млн.
Сепсис	Еп(:его&ас£ег аегруодепез	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Синусные инфекции	НаеторЕНиз ίη£1 иепгае	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Синусит	Зегереососсиз рпеитопле	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Импетиго	3£ар!1у1ососсиз аигеиз	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Кожные инфекции	ЗеарЛуЕососсиз аигеиз	Погибали @ 5 ч/млн.
Кожные инфекции	Зегереососсиз руодепез	Погибали @ 1,25 ч/млн. \|

- 40 014512

Стрептококковое воспаление горла	Зсгер£ососсиз руодепез	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Гнойный артрит	ВаеторкНиз 1п£1иепгае	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Инфекции горла	НаеторпНиз 1п£1иепгае	Погибали @ 1,25 ч/млн.
Гниение зубов	ЗСгерЬососсиз тисапз	Погибали @ 5 ч/млн.
Уретрит (у мужчин)	Тггсйотопаз тпад1паИз	Погибали 6 10 ч/млн.
Инфекции мочевыводящих путей	Е. соИ	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции мочевыводящих путей	К1еЬз1е11а рпеитоптае	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции мочевыводящих путей	Рзеиботопаз аегидгпоза	Погибали @ 5 ч/млн.
Инфекции мочевыводящих путей	ЗРгерЬососсиз £аесаИз	Погибали 0 2,5 ч/млн.
Инфекции мочевыводящих путей	ЕпСегоЪасСег аегруодепез	Погибали 6 2,5 ч/млн.
Вагинит (у женщин)	ТгбсЪотопаз чад1паИз	Погибали @ 10 ч/млн.
Инфекции ран	Езспег1сп1а со11	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции ран	ЕпсегоЬасСег аегруодепез	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции ран	К1еЬз1е11а рпеитоп!ае	Погибали @ 2,5 ч/млн.
Инфекции ран	Рзеиботопаз аегидгпоза	Погибали @ 5 ч/млн.
Инфекции ран	ЗСгерЬососсиз ЕаесаИз	Погибали @2,5 ч/млн.
Дрожжевые инфекции	Сапбхба а!Ысапз	Погибали 0 10 ч/млн.

Эффективность коллоидного серебра, приготовленного в виде гидрогеля

Современное лечение ран пришло к пониманию того факта, что для оптимального заживления рана должна поддерживаться стерильной и защищенной от обезвоживания и загрязняющих веществ окружающей среды. Традиционные повязки эффективны в качестве средств, обеспечивающих защиту от загрязнителей окружающей среды, но почти совершенно неэффективны для предотвращения обезвоживания. Повязки можно сделать противомикробными посредством добавления множества дезинфицирующих веществ, но такие вещества часто являются агрессивными и убивают клетки организма, также как и микроорганизмы. В последнее время в лечении ран произошла революция, обусловленная веществами в виде гидрогелей, которые доступны либо в виде полутвердого (аморфного вещества), либо в виде листового материала. Гидрогель является гидрофильным и поэтому предотвращает обезвоживание раны. Листовой материал является эффективным для исключения загрязнителей окружающей среды, и вследствие своей гидрофильной природы гидрогель может фактически абсорбировать избыток жидкости, выделяемой раной.

Гидрогели образуют комбинированием гидрофильного полимера с другими ингредиентами в водном растворе. Полимер образует гель после изменения рН, температуры или другого запускающего события. . геле тонкая молекулярная сеть полимера окружает области водного раствора. Хотя композиция может представлять собой аморфное полутвердое вещество или плотный листовой материал, большая часть объема имеет тенденцию заполняться водным раствором, а не гидрофильным полимером. Гидрофильные полимеры, которые являются подходящими для получения гидрогелей, включают желатин, карбоксиметилцеллюлозу (и другие производные целлюлозы), другие углеводные полимеры, происходящие из растений или водорослей, такие как альгинат, каррагинан, ксантановая камедь, камедь из плодов рожкового дерева, трагакантовая камедь, гуаровая камедь, аравийская камедь и другие растительные камеди, сополимеры акриловой кислоты (такие как карбопол) и комбинации указанных и сходных гидрофильных полимеров.

Водный компонент предпочтительно содержит различные вспомогательные вещества, которые усиливают физические свойства гидрогеля и/или улучшают заживление ран. Вспомогательные вещества включают различные витамины, аминокислоты и факторы роста, добавляемые для улучшения заживления или уменьшения образования рубцов, чтобы снизить рубцевание. Общие анестетики, такие как новокаин, лидокаин и их производные, также могут быть включены в качестве добавок, чтобы повысить комфортность. Так как поддержание раны в стерильном состоянии является основной целью перевязок, преимущественно включают различные противомикробные или дезинфицирующие средства. Такие средства включают органические кислоты, такие как лимонная кислота, разбавленная уксусная кислота, бензойная кислота, пропионовая кислота и молочная кислота. Применимы спирты, такие как изопропанол, также как органические дезинфицирующие средства, содержащие хлорированные фенолы, такие как ТСР (2,4,6-трихлорфенол), бигуаниды, хлоргексидин (при смешивании с цетримидом), глюконат хлоргексидина и ацетат хлоргексидина. Могут быть добавлены дезинфицирующие поверхностно-активные вещества, включая амфотерные поверхностно-активные вещества и альдегиды, такие как формальдегид и глутаральдегид. Содержащие галогены дезинфицирующие средства, включая йод, йодофоры и поливидон-йод, являются эффективными, также как пероксиды и другие оксигенаторы, такие как пероксид водорода. Другие полезные ингредиенты включают цинк-алюминиевые вяжущие средства, производные фурана и производные хинолина, такие как клиохинол. Насколько полезными могут быть все указанные противомикробные средства, настолько все они имеют тенденцию к недостатку, который заключается в том, что они могут повреждать ткань, и/или у микроорганизмов может легко развиться резистентность к ним.

Как достаточно продемонстрировано выше, коллоидное серебро согласно изобретению является высокоэффективным против микроорганизмов, является очень мягким по отношению к ткани человека и эффективным против резистентных микробов. Аморфный гель и лист гидрогеля являются пригодными для доставки эффективных уровней коллоидного серебра во влажной среде заживления. С одной стороны, аморфный гидрогель медленно высвобождает коллоидное серебро, по мере того как он медленно

- 41 014512 размягчается в экссудате ткани и постепенно начинает растворяться. С другой стороны, аморфный гидрогель отдает влагу ткани и одновременно делает коллоидное серебро активным в требуемом месте. Кроме того, небольшое количество коллоидного серебра, присутствующего в перевязочном материале, имеет преимущество, поскольку является молекулярным серебром, постепенное уменьшение которого в течение длительного периода времени будет высвобождать ионы серебра, которые обладают превосходной олигодинамической активностью.

После начальных экспериментов был выбран карбопол в качестве эффективного, образующего гидрогель средства для применения с коллоидным серебром согласно изобретению. Разработана основная композиция, которая, как правило, содержала следующие ингредиенты, которые показаны в табл. 9а.

Таблица 9а

Ингредиент	Функция	Поставщик
Раствор коллоидного серебра (22 ч/млн. или 32 ч/млн.)	Активное противомикробное средство и разбавитель	Атегасап ВлоЕесЬ ЬаЬз
Карбопол ЕТБ2020	Модификатор реологических свойств	Νονεοη
Триэтаноламин	Нейтрализатор, средство для проницаемости	Е. Мегск
Пропиленгликоль	Увлажнитель	Е. Мегск

Все сырые материалы сначала анализировали в отношении

I. Антибактериальной активности.

II. Физических и химических свойств:

1) внешнего вида,

2) запаха,

3) рН,

4) свойства на ощупь,

5) плотности,

6) свойства пенообразования,

7) текучести.

Раствор коллоидного серебра (22 ч./млн или 32 ч./млн). В данной композиции раствор серебра используют в качестве активного компонента (противомикробного средства). Он также является единственным разбавителем в данной конкретной композиции.

А. Антибактериальная активность:

Культура	Диаметр	зоны ингибирования
	22 ч/млн.	32 ч/млн.
МЕЗА	17 мм	18 мм
Е. соИ	14 мм	Не анализировали
Рз. аегидапоза	21 мм	22 мм

В. Физические и химические свойства:

1.	Внешний вид	Бесцветная прозрачная жидкость
2.	Запах	Без запаха
3.	рН	5,0
4.	Свойство на ощупь	Не применимо
5.	Плотность	1,00
6.	Свойства пенообразования	Не применимо
7.	Текучесть	Не применимо

Карбопол

Карбопол химически известен как карбоксиполиметилен или полимер карбоксивинила. Он представляет собой сополимер акриловой кислоты и является высоко ионогенным (т.е. гидрофильным) и обладающим свойствами слабой кислоты соединением. Карбополовые полимеры необходимо нейтрализовать, чтобы достичь максимальной вязкости. Его применяют в фармацевтике, в косметической области и в области печатания на текстильных материалах в качестве загустителя, суспендирующего средства, диспергирующего средства и эмульгатора. В данной композиции карбопол используют в качестве гелеобразующего средства или загустителя.

A. Антибактериальная активность (не применимо).

B. Физические и химические свойства:

- 42 014512

1. Внешний вид

2. Запах

Сухой белый порошок

Без запаха

3.

4.

5.

6.

7.

рН	Не	применимо
Свойство на ощупь	Не	применимо
Плотность	Не	применимо
Свойства пенообразования	Не	применимо
Текучесть	Не	применимо

Триэтаноламин (ТЕА) С.Н.ХО; (М.м.: 149,19).

В данной композиции алкилирующий агент тризтаноламин нейтрализует карбопол, повышая вязкость. Он также увеличивает проникающую способность активного средства.

B. Физические и химические свойства:

1. Внешний вид

2. Запах

3. рН

4. Свойство на ощупь

5. Плотность

6. Свойства пенообразования

7. Текучесть

Бесцветная вязкая жидкость

Слегка аммиачный

Не применимо

Не применимо 1,1242 г/см³

Не применимо

Пропиленгликоль

С₃Н₈О₂ М.м. : 76,09.

Пропиленгликоль химически известен как 1,2-пропандиол. Его используют в данной композиции в качестве увлажнителя и модификатора осязаемых свойств в данной композиции.

A. Антибактериальная активность не применимо.

B. Физические и химические свойства:

1. Внешний вид

2. Запах

3. рН

4. Свойство на ощупь

5. Плотность

6. Свойства пенообразования

7. Текучесть

Бесцветная вязкая жидкость

Без запаха

Не применимо

1,036 г/см³

Не применимо

После разработки стандартной формулы получили некоторое количество партий, чтобы исследовать возможный диапазон для препаратов. Из 19 проведенных экспериментов получили следующие результаты наблюдения.

1. Увеличение рН увеличивает вязкость геля.

2. Увеличение количества карбопола увеличивает вязкость геля.

3. Чем выше процентное содержание карбопола, тем выше липкость.

Из описанных выше экспериментов можно сделать вывод, что был достигнут компромисс между используемым количеством карбопола и ТЕА и конечным получаемым рН, который должен быть не более 8,5. Поэтому препарат № 18 оставили в качестве стандарта и партию увеличили до 10 кг.

Исследование для усовершенствования продукта

Введение

Основанные на карбополе гелевые препараты необходимо стандартизовать в отношении рН, выявляемых на ощупь свойств, липкости и консистенции. Имея это в виду, брали различные лабораторные партии, используя воду в качестве жидкой фазы, чтобы получить продукт подходящего качества и определяемых на ощупь свойств перед получением основной партии.

Приготовление партии № 80/001:

Часть А

Дистиллированная вода	83,50 г
Карбопол	00,62 г
ЫаОН 18%	00,60 г
Дистиллированная вода	1,00 г
Пр о пил енгликоль	5,00 г
ИаОН 18%	1,50 г

Часть В

Способ. Взвешивают заданное количество дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. Добавляют карбопол к дистиллированной воде с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ЫаОН 18% при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

- 43 014512

Результаты

1.	рН	10, 8
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/002

Часть А	Дистиллированная вода	83,50 г
	Карбопол	00,62 г
	ТЕА	01,20 г
Часть В	Дистиллированная вода	1,0 г
	Пропиленгликоль	5, 0 г
	ТЕА	1, 5 г

Способ: взвешивают заданное количество дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. Добавляют карбопол к дистиллированной воде с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ТЕА при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	7,9 (5ОР-08)
2.	Текучесть	90’С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 5С/003:

Часть А

Дистиллированная вода

86,00 г

ТЕА

Карбопол

01,20 г

00,62 г

Часть В

Дистиллированная вода

2,00

Пропиленгликоль

5, 00

ТЕА

1,50

Результаты:

1.	рН	8, 62
2.	Текучесть	90°С “> >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/004

Часть А	Дистиллированная вода	86, 00 г
	Карбопол	00,62 г
	ТЕА	01,00 г
Часть В	Дистиллированная вода	2,00 г
	Пропиленгликоль	5,00 г
	ТЕА	1,50 г

- 44 014512

Результаты

1.	рН	8,5
2 .	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/005

Часть А	Дистиллированная вода	86,00 г
	Карбопол	0, 62 г
	ТЕА	1,20 г
Часть В	Дистиллированная вода	2,00 г
	Пропиленгликоль	7,00 г
	ТЕА	1,50 г

Способ: взвешивают заданное количество дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. Добавляют карбопол к дистиллированной воде с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 минут добавляют ТЕА при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	8,7
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/006

Часть А	Дистиллированная вода	85,00 г
	Карбопол	00,62 г
	ТЕА	01,00 г
Часть В	Дистиллированная вода	1,00 г
	Пропиленгликоль	5,00 г
	ТЕА	1,40 г

Результаты:

1.	рН	8,4
2.	Текучесть	90 °С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 36/007

Часть А	Дистиллированная вода	172 г
	Карбопол	1,24 г
	ТЕА	2,40 г
Часть В	Дистиллированная вода	6, 0 г
	Пропиленгликоль	10 г
	ТЕА	2,80 г

- 45 014512

Результаты

1.	рн	8,28
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С -> >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 36/008

Часть А	Раствор серебра Карбопол ТЕА	(32	ч/млн.)	86,00 г 0,62 г 1,20 г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	2,0 г
	Пропиленгликоль			5,0 г
	ТЕА			1,5 г

Способ: Взвешивают заданное количество раствора серебра для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. Добавляют карбопол к раствору серебра с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ТЕА при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рн	8,65
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии Н’ 36/009

Часть А	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	172 :	Г
	Дистиллированная	вода	12 г
	Карбопол			1,24	г
	ТЕА			2,40	г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	6, 00	г
	Пропиленгликоль			10,0	г
	ТЕА			2,80	г

Результаты:

1.	рн	8,54
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/010

Часть А	Раствор серебра	(32	ч/млн,)	172 г
	Дистиллированная	вода	24 г
	Карбопол			1,39 г
	ТЕА			2,40 г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	6,00 г
	Пропиленгликоль			5,00 г
	ТЕА			2,80 г

- 46 014512

Результаты

1.	рН	8,43
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		4 5°С => >5 мин
3.	Липкость	Липкий

Приготовление партии № 86/011

Часть А	Дистиллированная вода	98 г
	Карбопол	0,76 г
	ТЕА	0,56 г
Часть В	Дистиллированная вода	3, 0 г
	Пропиленгликоль	5,0 г
	ТЕА	1,4 г

Способ: взвешивают заданное количество дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. Добавляют карбопол к дистиллированной воде с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ΤΕΑ при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	8,05
2,	Текучесть	90°С => >5 мин
		4 5°С => >5 мин
3,	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 5С1012

Часть А	Дистиллированная вода	98 г
	Карбопол	0,76 г
	ТЕА	0,34 г
Часть В	Дистиллированная вода	3,00 г
	Пропиленгликоль	5,00 г
	ТЕА	0,64 г

Результаты:

1,	рН	6,35 .
2.	Текучесть	90 °С > >5 мин
		45°С ~> >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 35/013

Часть А	Раствор серебра (32 ч/млн.) Дистиллированная вода Карбопол ТЕА	86 г 12 г 0,76 г 0,32 г
Часть В	Раствор серебра (32 ч/млн.)	3,00 г
	Пропиленгликоль	5,00 г
	ТЕА	0,64 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ΤΕΑ при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

- 47 014512

Результаты

1.	рН	6,7
2.	Текучесть	90°С -> >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № ЗС/014

Часть А	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	8 6 г
	Дистиллированная	вода	12 г
	Карбопол			0,78 г
	ТЕА			0,32 г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	3,00 г
	Пропиленгликоль			5,00 г
	ТЕА			0,64 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют 'ГЕА при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	6, 6
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	Очень липкий

Приготовление партии № 3(3/015

Часть А	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	8 6 г
	Дистиллированная	вода	12 г
	Карбопол			0, 68 г
	ТЕА			0, 40 г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	5, 0 г
	Пропиленгликоль			7,0 г
	ТЕА			0, 6 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ΤΕΛ при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	6,72
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	липкий

Приготовление партии № ЗЕ/016:

Часть А Раствор серебра (32 ч/млн.) 86 г

	Дистиллированная вода	12 г
	Карбопол	0,64 г
	ТЕА	0,40 г
Часть В	Раствор серебра (32 ч/млн.)	5, 0 г
	Пропиленгликоль	7,0 г
	ТЕА	0,6 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ΤЕА при 70°С. Взвешивают все ингреди

- 48 014512 енты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	6, 87
2.	Текучесть	90°С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	липкий

Приготовление партии № 80/017

Часть А	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	86 г
	Дистиллированная	вода	12 г
	Карбопол			0,62 г
	ТЕА			0,4 г
Часть В	Раствор серебра	(32	ч/млн.)	5,0 г
	Пропиле н гликоль			7,0 г
	ТЕА			0,6 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют ТЕА при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части А и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	7,05
2.	Текучесть	90 °С => >5 мин
		45°С => >5 мин
3.	Липкость	липкий

Приготовление партии № 86/018

Часть А	Раствор серебра (32 ч/млн.)	8 6 г
	Дистиллированная вода	12 г
	Карбопол	0,58 г
	ТЕА	0,4 г
Часть В	Раствор серебра (32 ч/млн.)	5,0 г
	Пропиленгликоль	7,0 г
	ТЕА	0,6 г

- 49 014512

	Результаты:
1.	рН .	7,40
2.	Текучесть	90°С =>	>5 мин
		45°С =>	>5 мин
3.	Липкость	гладкий

Приготовление партии № 36/019

Часть А	Раствор серебра	(32 ч/млн.)	86 г
	Дистиллированная	вода	12 г
	Карбопол		0, 54 г
	ТЕА		0,4 г
Часть В	Раствор серебра	(32 ч/млн.)	5, 0 г
	Пропиленгликоль		7,0 г
	ТЕА		0,6 г

Способ: взвешивают заданное количество раствора серебра и дистиллированной воды для части А и оставляют на водяной бане при 70°С. К раствору добавляют карбопол с постоянным перемешиванием, чтобы избежать образования комков. Через 20 мин добавляют 1ЕЛ при 70°С. Взвешивают все ингредиенты для части В и оставляют на водяной бане при 70°С на 15-20 мин. Добавляют часть В к части Л и перемешивают в течение 10-15 мин. Охлаждают до комнатной температуры и анализируют.

Результаты:

1.	рН	7, 65
2.	Текучесть	90°С => >1 мин
		45°С => >2 мин
3.	Липкость	Гладкий

Примечание: хотя улучшились воспринимаемые на ощупь свойства, консистенция была неподходящей.

На основании описанных выше результатов разработали следующие инструкции для получения партии массой один килограмм.

Часть А	Раствор серебра	860 г
	Дистиллированная вода	100 г
	Карбопол	5,80 :
	ТЕА	4,00 :
Часть В	Раствор АЗАР	50,0 :
	Пропиленгликоль	70,0 :
	ТЕА .	6,00 :

Выход 1,0 кг после корректировки в отношении потери влаги.

Способ: в прозрачный стерилизованный флакон отбирают требуемое количество дистиллированной воды и раствора серебра. Температуру раствора повышают до 70°С с постоянным перемешиванием. Начинают добавлять карбопол небольшими количествами с постоянным перемешиванием/гомогенизацией. После добавления всего карбопола перемешивание продолжают в течение 30 мин (время корректируют в соответствии с размером партии). Затем добавляют ЗЕЛ в раствор фазы А.

В отдельном сосуде смешивают все ингредиенты части В. Повышают температуру до 70°С и медленно добавляют часть В к части А. После полной гомогенизации охлаждают до комнатной температуры.

Меры предосторожности: дисперсию карбопола необходимо получать с использованием хорошего гомогенизатора. Берут небольшой пробный образец при использовании новой партии карбопола. Минимизируют время нагревания, так как более длительное нагревание приводит к большей потере воды.

Результаты:

1.	рН	7,4
2.	Текучесть	> 5 мин
3.	Липкость	Гладкий

Получаемое количество указанного препарата легко увеличивали до 10 кг в опытной установке. Не сталкивались ни с какими проблемами при масштабировании. Рекомендуется деаэрация с применением вакуума, чтобы удалить захваченный воздух и обеспечить однородное заполнение.

Данный препарат имел следующие физические и химические свойства, которые показаны в табл. 10.

- 50 014512

Таблица 10

	Тест	Описание	Результаты
1.	Внешний вид	Золотисто-желтый полупрозрачный гель	Удовлетворительный
2.	Запах	Без запаха	Без запаха
3.	Удельная масса	1,02	1,02
4.	Текучесть	При 45° и 90° - более чем за 5 мин перемещается на 1 дюйм от начала	При 45° и 90° - более чем за 5 мин перемещается на 1 дюйм от начала
5 *	Способность к пенообразованию	<10 мл .	<10 мл
6.	Свойство на	1 - гладкий	1 - гладкий

	ощупь/липкость
7.	Вязкость КТ 30°С 37°С	32000+5000 3000015000	34000 33500
8.	рн	от 6,5 до 8,0	7,4
9.	Замораживание и оттаивание	Для прохождения ΞΟΡ 1-10	Сравним с оригиналом
10.	Оптимальная длина волны (X Мах)	22 ч/млн. - 400±20 нм 32 ч/млн. - 450+20 нм	400 нм 450 нм
11.	Воздействие света	Без дополнительной потери окраски	Удовлетворительный
12.	Совместимость	Нет обесцвечивания продукта при взаимодействии с емкостями	См. таблицу 3
13.	Отдача влаги	-	10,27%
14.	Поглощение влаги		ео%

Микробиологическая оценка

Справедливо предположить, что коллоидный гидрогель серебра обладает микробиологическими свойствами, сходными с исходным коллоидным серебром, которое было широко исследовано как описано выше. Однако добавление гидрофильного полимера для получения геля может непосредственно мешать микробиологическим свойствам серебра или может так подавлять диффузию серебра, что эффективность снижается. Поэтому также проводили микробиологические тесты для коллоидного гидрогеля серебра, сходные с тестами, проведенными для коллоидного раствора серебра.

Сначала гидрогель тестировали, чтобы определить, была ли композиция самостерилизующейся. Использовали следующий протокол:

Готовили колбы, содержащие по 100 мл стерильной жидкой среды, содержащей тиогликолят (анаэробные бактерии), стерильной соевой среды с казеиновым переваром (аэробные бактерии) и картофельно-декстрозного бульона (грибы). Образцы, содержащие примерно 100 мг тестируемого геля, асептически переносили в наборы колб. Один набор инкубировали при 37°С, а другой набор инкубировали при комнатной температуре в течение одной недели. После указанного периода времени колбы проверяли и не выявляли помутнения или признаков роста микроорганизмов. Поскольку образец геля не был получен

- 51 014512 в стерильных условиях, можно сделать вывод, что композиция является самостерилизующейся. Для каждого теста использовали 100 мг геля. Это соответствует 2,2 мкг в 100 мл среды или 0,02214 или 0,032 мкг серебра в 1 мл среды. При данной концентрации серебро может не обладать противомикробной активностью и поэтому ложноотрицательные результаты могут быть исключены.

Затем использовали различные тестируемые организмы для сравнения зоны ингибирования, достигаемой с использованием либо раствора, содержащего 22 или 32 ч./млн серебра, либо геля, содержащего 22 или 32 ч./млн серебра, приготовленного как описано выше, которые показаны в таблице 11. Аликвоты объемом 0,1 мл активно растущих 18-часовых культур каждого микроорганизма (примерно 10⁸ КОЕ/мл) наносили на стерильные чашки с питательным агаром. В каждой инокулированной чашке делали отверстие диаметром 10 мм с помощью сверла для пробок. Тестируемое количество (0,2-0,3 г) продукта помещали в каждое отверстие и планшет инкубировали в течение 24 ч. После указанного периода времени чашки осматривали и измеряли следующие зоны ингибирования (общий диаметр каждой зоны).

Таблица 11

Куль тура	Раствор серебра	Гель серебра
22 ч/млн.	32 ч/млн.	22 ч/млн.	32 ч/млн.
Е. соИ	14 мм	14 мм	12мм	13 мм
Ρε. Аегид1поза	21 мм	22 мм	21 мм	20 мм
В. зиЫШз	15 мм	16 мм	14 мм	14 мм
МКЗА1	17 мм	18 мм	16 мм	17 мм
МКЗА.2	16 мм	17 мм	16 мм	17 мм
3. аигеиз АТСС 6536 Р	14 мм	14,5 мм	15 мм	15 мм
3. руодепез	16 мм	18 мм	16 мм	18 мм
3.(урн!	17 мм	16 мм	16 мм	16 мм
ЗЬ.	20 мм	21 мм	20 мм	21 мм

К. рпеитоп1аз	17 мм	18 мм	18 мм \| 18 мм
С. сИ.рС6ег1ае	16 мм	18 мм	16 мм \| 17 мм
С. а1Ысапз	39 мм	40 мм	39 мм \| 40 мм

Полученные результаты показывают, что ингибирующее влияние геля, по существу, эквивалентно ингибирующему влиянию коллоидного раствора серебра; это свидетельствует о том, что гелеобразующий полимер не оказывает отрицательного влияния на противомикробную эффективность коллоидного серебра. Некоторые культуры (8. руодепек, С. б|р11111епае) также культивировали на содержащем кровь агаре. Результаты свидетельствуют, что гель серебра также может быть эффективным на кровоточащей, выделяющей экссудат ране.

Сходные тесты осуществляли на таких же бактериальных штаммах с использованием различных антибиотиков. В некоторых случаях антибиотики были более эффективны, чем соединения серебра - в других они были менее эффективны. Это свидетельствует о том, что используемые штаммы не были ослабленными или легко поддающимися воздействию штаммами (см. табл. 12а и 12Ь).

Таблица 12а. Грамположительные бактерии

Антибиотик	Концентрация	З.аигеие	МЯЗА1	МРЗА2	В. зиЫ\|Пз
Ампициллин	200 мкг	Чисто	15 мм	18 мм	16 мм
Цефотаксим	30 мкг	26мм	Нет ингибирования	Чисто	12 мм
Цефалексин	30 мкг	Чисто	1,0 мм	0,8 мм	Чисто
Ципрофлоксацин	5 мкг	28 мм	14 мм	14 мм	20мм
Кпоксацин	1 мкг	Чисто	Чисто	13 мм	18 мм
Котримоксазол	25 мкг	Чисто	Нет ингибирования	Нет ингибирования	15 мм
Гентамицин	10 мкг	Чисто	Нет ингибирования	11 мм	18 мм
Линкомицин	2 мкг	Чисто	Чисто	Чисто	18 мм
Офлоксацин	5 мкг	Чисто	15 мм	16 мм	22мм
Пефлофлоксацин	10 мкг	30 мм	11 мм	13 мм	21 мм
Роксигромицин	15 мкг	Чисто	1,0 мм	12 мм	20 мм
Тетрациклин	30 мкг	34 мм	Нет ингибирования	0,7мм	19 мм

Таблица 12Ь Гоамотрицателыные бактерии

Антибиотик	Концентрация	Е.соП	К. рпеитоп1ае	8.1урЫ	Рз. аегид1П05а
Амикацин	30 мкг	Чисто	18 мм	Чисто	10мм
Ампициллин	200 мкг	23 мм	18 мм	20 мм	13 мм
Цефотаксим	30 мкг	21 мм	20 мм	22 мм	19 мм
Цефтизоксим	30 мкг	18 мм	18 мм	15 мм	Нет ингибирования
Хлорамфеникол	30 мкг	22 мм	21 мм	23 мм	Нет ингибирования
Ципрофлоксацин	5 мкг	29 мм	22 мм	25 мм	15мм

- 52 014512

Котримоксазол	25 мкг	24 мм .	19 мм	27мм	Чисто
Гентамицин	10 мкг	Чисто	17мм	Чисто	Нет ингибирования
Офлоксацин	5 мкг	Чисто	29 мм	Чисто	15 мм
Пефлофлоксацин	10 мкг	Чисто	25 мм	Чисто	10 мм
Пиперациллин	100 мкг	22 мм	15 мм	16 мм	10 мм
Тетрациклин	30 мкг	19 мм	18 мм	16 мм	Нет ингибирования

Тестирование скраба для рук

Так как гидрогель обладает способностью увеличивать прилипание серебра к поверхности кожи, оценивали эффективность геля в качестве скраба для рук. Для данного теста отмечали один квадратный дюйм на руке добровольцев и затем очищали, используя примерно 1 г геля. Контрольную площадь очищали стерильной дистиллированной водой. С площади брали мазок и мазок высевали штрихом на питательный агар. Мазки брали каждый час в течение четырех часов. Чашки с посевами штрихом инкубировали в течение 24 ч при 37°С и оценивали результаты.

Как показано в следующей табл. 13, из контрольных мазков вырастало так много бактерий, что их было слишком много, чтобы подсчитать (ΤΝΤί.'). Площади, обработанные гелем серебра, оставались, по существу, стерильными в течение трех часов, и только незначительный рост наблюдали через четыре часа. Это должно обеспечивать превосходные результаты для работников здравоохранения, которым необходимо стерилизовать поверхность рук без применения агрессивных соединений или соединений для промывания.

Таблица 13

Время	Контроль	22ч/ылн.	32 ч/млн.
0 час	ТИТС	Нет роста	Нет роста
1 час	ТЫТС	Нет роста	Нет роста
2 час	ТИТС	Нет роста	Нет роста
3 час	τντο	Нет роста	Нет роста
4 час	тытс	3 КОЕ	2 КОЕ

Хотя гидрогели проявляют необычные свойства при заживлении ран, недостаток типичного гидрогеля заключается в том, что микроорганизмы часто способны мигрировать через матрикс. Таким образом, если рану покрывают гидрогелем и один участок площади раны становится инфицированным, то инфекционные организмы могут обладать способностью перемещаться через гидрогель и инфицировать другие области. Такую возможность тестировали, используя полоску гидрогеля в качестве мостика, соединяющего две отдельных области на чашке с питательным агаром. Каждую чашку с агаром делили на две области, удаляя полоску агара шириной 2 вдоль диаметра чашки. Через полученный промежуток делали мостик из полоски гидрогеля шириной 1,5 см, который заходил на агар примерно по 5 мм с каждого конца. Затем на одну сторону чашки высевали примерно 0,5 мл культуры и чашку инкубировали, чтобы посмотреть, могут ли микроорганизмы пересекать мостик из гидрогеля. Результаты в табл. 14 показывают, что гидрогель серебра полностью предотвращает миграцию.

Таблица 14

Культура	Зона инокуляции	Зона миграции
Е. со11	Обильный рост	Нет роста
В. зиЬЕШз	Обильный рост	Нет роста
МКЗА 1	Обильный рост	Нет роста
Рз. АегидТпоза	Обильный рост	Нет роста
Контроль гидрогеля	Обильный рост	Вост

На основе показанных выше результатов выбирали формулу опытного образца геля, и его варианты предлагаются в следующих примерах.

Пример А. Для партии геля массой 1 кг берут компоненты части А и части В, которые приведены ниже:

Часть А	Коллоидное серебро согласно
	изобретению 32 ч/млн.	860 г
	Дистиллированная вода	100 г
	Карбопол	6,8 г
	Триэтаноламин	4,0 г
Часть В	Коллоидное серебро согласно	50 г
	изобретению 32 ч/млн.
	Пропиленгликоль	70 г
	Триэтанол амин	6,0 г

- 53 014512

Сначала берут требуемое количество дистиллированной воды и раствора серебра в мешалку и начинают перемешивать. Медленно добавляют в карбопол (Ыоуеоп, И8А) . Перемешивание должно быть достаточно энергичным, чтобы диспергировать карбопол и избежать образования комков. Температуру во время перемешивания необходимо поддерживать на уровне 60-70°С.

Все ингредиенты части В смешивают в лабораторном стакане. Нагревают до 70°С и добавляют к части А при энергичном перемешивании. Продолжают перемешивание и охлаждают до комнатной температуры. Проверяют выход партии. Он должен составлять примерно 1000 г. Триэтаноламин вызывает гелеобразование карбопола.

Пример В.

Готовят все ингредиенты как в примере А, включая добавление 1% коллагена. Это приведет к получению геля, как с противомикробной активностью, так и с полезными свойствами коллагена, который ускоряет заживление ран по типу образования каркаса.

Пример С.

Готовят все ингредиенты как в примере А, но включая добавление алоэ а1ое уега (порошка или раствора) в пределах 1-5%. Это будет придавать дополнительные свойства для заживления ран.

Пример Ό.

Готовят все ингредиенты как в примере А с добавлением 1-10 мас.% мальтодекстрина. Это будет обеспечивать гелеобразование, которое стимулирует грануляцию ран.

Сводные результаты, полученные для гидрогеля серебра.

Можно приготовить основанные на карбополе гели с использованием коллоидных растворов серебра согласно изобретению, содержащих 22 ч./млн и 32 ч./млн серебра. Полученные таким образом гели имеют много преимуществ по сравнению с их аналогами в виде растворов благодаря их способности оставаться на месте при сохранении свойств исходных растворов серебра. Аморфная природа лекарственного средства в виде гидрогеля обеспечивает преимущество, заключающееся в ускорении заживления влажных ран, а также ограничении тяжести ожоговых ран благодаря ограничению теплового шока. Кроме того, активное средство, коллоидный раствор серебра, тестировали на линии клеток в более раннем исследовании и обнаружили, что он является нетоксичным.

Всестороннюю физико-химическую оценку геля осуществляли в разных партиях и разработали серию подробных способов для стандартизации и контроля продукта и процессов во время производства.

Проводили глубокие микробиологические исследования и показали, что гель сохраняет свою бактерицидную природу. Моделировали исследования миграции серебра и окончательно показали, что гель может с течением времени доставлять серебро к ране. Образец препарата также не позволит микроорганизмам мигрировать снаружи внутрь и наоборот.

Приведенные тесты показывают гипотетическую оценку гидрогеля серебра на основе публикации (Йоигпа1 ой ^оипй Саге Уо1. 12, Ыо 8 8ЕРТ 2003), при которой альтернативные основанные на серебре перевязочные материалы оценивали по пунктам, которые начисляли за:

1. Противомикробную зону ингибирования;

2. Тест контрольного заражения микроорганизмами;

3. Тест передачи микроорганизмов; и

4. Содержание серебра в перевязочных материалах.

В первом тесте гидрогель серебра можно поместить в группу В, а во всех трех остальных тестах гидрогель серебра можно причислить к группе А, давая ему общее количество очков 20, наравне с Са1дПго1 Ад и АсПсок коммерческими продуктами, которые получили наибольшее количество баллов при такой оценке.

Антибактериальные и противовирусные свойства раствора коллоидного серебра делают доступными несколько важных применений гидрогеля серебра кроме перевязочного материала для ран. Как показано выше, гидрогель является идеальным антибактериальным скрабом для рук. Кроме того, не вызывающая раздражения природа коллоидного серебра и гидрогеля делает комбинацию идеальным индивидуальным смазывающим материалом для применения в половой сфере мужчин и женщин с применением или без применения презервативов или противозачаточных диафрагм, при этом комбинация может противодействовать бактериям, грибкам (отмечена эффективность против СапйИа а1Ь1сапк) и опасных вирусов, таких как ВИЧ, и дезинфицировать многократно используемые барьеры, такие как противозачаточные диафрагмы. Так как гидрогель содержит мало или вообще не содержит масла, он не оказывает вредного воздействия на презервативы или противозачаточные диафрагмы, в отличие от некоторых других смазочных материалов индивидуального применения.

Очищающее средство для рук в виде гидрогеля (Примечание: термины гидрогель и 81ЬСЕЬ относятся к одному и тому же предлагаемому в изобретении продукту и используются в данном описании взаимозаменяемо).

Сообщалось, что чистые руки являются наиболее важным фактором для предотвращения распространения опасных микробов и резистентности к антибиотикам в условиях здравоохранения. Соответственно было решено проверить эффективность гидрогеля, известного как 81ЬСЕЬ, в качестве продукта для гигиены рук согласно руководствам ММ^К, датированным 25 октября 2002/Уо1. 51/№ КК-16.

- 54 014512

Использовали следующую стандартную рабочую процедуру.

Требуемые материалы (8ОР):

стандартная суспензия 8еггайа тагсексепк (10⁸ КОЕ/мл), водопроводная вода, стерильные резиновые перчатки, стерильный раствор для взятия образцов, стерильный триптический соевый агар, стерильные пипетки, стерильные пробирки.

Способ:

1. 5 мл стандартной суспензии 8еггаНа тагсексепк наносят на кисти руки и поверхности выше кистей рук.

2. Смазывают 3 мл тестируемого материала кисти рук и нижнюю треть предплечья.

3. Добавляют 2 мл водопроводной воды на руки и намыливают их (см. фиг. 1).

4. Ополаскивают руки и предплечья под водопроводной водой в течение 30 с при комнатной темпе ратуре.

5. Повторяют процедуру от стадии 2 до стадии 4.

6. После 1-й, 3-й, 7-й и 10-й промывок стерильные резиновые перчатки, используемые для взятия образца, надевают на правую и левую руки.

7. 75 мл стерильного раствора для взятия образца вливают в перчатки.

. Все поверхности рук массажируют в течение одной минуты.

9. Образцы получают асептически для количественного анализа с применением способа подсчета жизнеспособных организмов, используя стерильный триптический соевый агар.

10. Применяют способ размножения на чашках, используя исходный образец, 10^-1, 10^-2 и 10^-3 в качестве разведений.

Чашки инкубировали при 37°С в течение 24 ч.

Материалы и способы

Использовали процедуры согласно указанной выше 8ОР

Используемая среда Стандартный триптический соевый агар

Используемая культура	16-часовая культура ЗеггаЫа шагсезсепз (примерная плотность 10⁸ КОЕ/мл)
Температура инкубации	37°С
Время инкубации	24 часа
Оцениваемые продукты	311де1 22 и 32 ч/млн., ЗрНгабегт,

Ыдц1<3 С1еап, ЗкегПИшп

Результаты

Результаты представленытаблицах

15е, 16а-16е

Левая рука

Таблица 15а

5р1£ас1егт (приложение-11)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	КГ¹	10’²	10'³
1-я промывка	10	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
5-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 15Ь ЗИде! 32 ч/млн

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’¹	10’²	10'³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 15с

311де1 22 ч/млн

№ промывки Разведение	КОЕ/мл .
Исходный	10’¹	10’²	10’³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 15б

Ξίβϊίΐίιυη (приложение-ΙΙ)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’^х	10'²	10’³
1-я промывка	30	30	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	10	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 15е

Ъ1ди1с1 С1еап (приложение-11)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’^г	10“²	10’³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Правая рука

Таблица 16а

ЗрдЛабепп (приложение-11)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’¹	10’²	10~³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
5-я промывка ·	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 16Ь

ЗИде! 32 ч/млн

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10'¹	10*²	10‘³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль .	Ноль

Таблица 16с 311де1 22 ч/млн

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’¹	10’²	10‘²
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 16б

51ег1Шит (приложение-11)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10¹	10‘²	10‘³
1-я промывка	Ноль	Ноль .	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

Таблица 16е

Ыдп1б С1еап (приложение-11)

№ промывки Разведение	КОЕ/мл
Исходный	10’¹	10'	10’³
1-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
3-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
7-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль
10-я промывка	Ноль	Ноль	Ноль	Ноль

- 56 014512

Заключение: 81ЬОЕЬ 32 ч./млн и 81ЬОЕЬ 22 ч./млн удовлетворяют критериям ТРМ (ТеШаИуе Рта1 Моподгарй) в отношении эффективности в качестве продуктов гигиены рук, при этом эффективность определяют как 2-1од-снижение количества индикаторного организма на каждой руке после 1-го применения и 3-1од1₀-снижение количества индикаторного организма на каждой руке за 5 мин 10-го применения. Кроме того, 81ЬОЕЬ был более эффективным в качестве моющего средства для рук по сравнению с 81еп11шт и 8рйайег. Наконец, являясь средством для натирания, 81ЬОЕЬ в качестве очищающего средства для рук может быть хорошо переносимым, поскольку он исключает необходимость в наличии раковины и также не сушит руки пользователя или не раздражает, а будет приводить к увлажнению области применения.

Гидрогель в качестве перевязочного материала для ран

Введение

Основанные на гидрогеле перевязочные материалы можно применять в качестве первичных перевязок (аморфных и в виде пропитанной марли) или в качестве первичных или вторичных перевязок (листовой материал) для обработки частично повреждающих кожу ран и ран на всю толщу кожи, глубоких ран (аморфные, пропитанная марля), ран с некрозом или струпом, небольших ожогов и ткани, поврежденной излучением.

В настоящее время почти все гидрогели на рынке не имеют входящего в них противомикробного средства. Это обусловлено тем, что антибиотики и антисептики являются потенциально цитотоксичными и часто замедляют закрывание раны.

Так как предлагаемый в изобретении раствор серебро/вода является нетоксичным, было решено приготовить гидрогель с использованием сконструированных согласно изобретению наночастиц серебра.

Недавно специально приготовленный гидрогель введен для терапии индуцированного излучением дерматита. Такие перевязочные материалы имеют высокую удельную теплоемкость, обеспечивая охлаждающий эффект, и будут впитывать по меньшей мере троекратно в воде, сыворотке или крови.

Преимущества:

являются успокаивающими и уменьшают боль;

регидратируют участок раны;

способствуют аутолитическому очищению раны; заполняют пространство ложа (аморфный, пропитанная марля); обеспечивают от минимального до умеренного поглощения; легко наносятся и удаляются с раны;

могут быть использованы в случае присутствия инфекции;

обеспечивают визуальное обследование ложа раны.

Недостатки:

обычно не рекомендованы для ран с обильными экссудатами; некоторые требуют вторичных перевязочных средств;

легко дегидратируют, если не имеют покрытия;

некоторые может быть трудно закрепить;

некоторые могут вызывать мацерацию.

Способ: гидрогель согласно настоящему изобретению получали в форме листового материала в качестве выбранного для исследования перевязочного материала для ран.

Листовая форма гидрогеля может взаимозаменяемо называться 81ЬПЕКМ.

Результаты:

81ЬПЕКМ - потеря влаги

Цель - чтобы определить способность 81ЬПЕКМ терять влагу.

Процедура:

требуемое оборудование - аналитические весы;

требуемые материалы - пластмассовый лоток.

Способ:

определяют массу пустого лотка;

помещают лист 81ЬПЕКМ на лоток;

определяют массу лотка + листа 81ЬПЕКМ;

отмечают полученные данные, как данные для 1=0 ч;

данные регистрируют каждый час;

регистрируют данные за ночь;

затем строят график зависимости потери влаги от времени;

определяют потерю влаги в процентах.

Результаты: см. табл. 17 ниже и фиг. 34.

- 57 014512

Таблица 17. Способность 8ΙΕΌΕΚΜ к потере влаги

Время (час)	Масса
0	68 г
1	64 г
2	60 г
3	56 г
4	51 г
5	48 г
22	40 г

Заключение: можно сделать вывод, что лист 8ΙΕΌΕΚΜ может терять влагу на 30% своей массы. 8ΙΕΌΕΚΜ - поглощение влаги

Цель - чтобы определить способность дегидратированного 8ΙΕΌΕΚΜ поглощать влагу. Процедура: требуемое оборудование - аналитические весы;

требуемые материалы - химический стакан.

Способ:

определяют массу листа 8ΙΕΌΕΚΜ в г, отмечают полученные данные, как данные для 1=0 ч, наполняют химический стакан водой, помещают лист 8ΙΕΌΕΚΜ в химический стакан, погружая его полностью, с интервалами в один час извлекают лист, высушивают капли и определяют его массу, регистрируют данные за ночь, затем строят график зависимости поглощения влаги от времени, рассчитывают поглощение влаги дегидратированным гелем в процентах.

Результаты: (см. табл. 18 ниже и фиг. 35).

Таблица 18

Время (час)	Масса
0	4 5 г
1	48 г
2	51 г
3	53 г
4	54 г
. 5	56 г
6	57 г
22	68 г

Заключение: дегидратированный лист 8ΙΕΌΕΚΜ может поглощать влагу до 52% от своей массы. δΙΌΌΕΚΜ - высвобождение серебра

Цель - чтобы определить замедленное высвобождение наночастиц серебра из 8ΙΕΌΕΚΜ.

Принцип:

перевязочные листы из гидрогеля обычно помещают на рану на 48-72 ч. В такой ситуации было желательно определить противомикробную активность перевязочного материала с течением времени относительно высвобождения серебра.

Требуемое оборудование - инкубатор, ламинарный поток.

Требуемые материалы - стерильные чашки с питательным агаром, стерильные ватные валики, микропипетка (емкость 100-1000 мкл), 16-часовая культура Рзеиботопаз аегидтоза (дикого типа).

Способ:

нарезать кусочки 8ΙΕΌΕΚΜ размером 4x3 см, поместить 81Иегт на чашку с питательным агаром, на которую нанесен мазок Рз. аегидтоза (дикого типа), инкубируют при 37°С в течение примерно 18 ч, проверяют зону ингибирования вертикально и горизонтально, затем помещают тот же самый кусочек 8ΙΕΌΕΚΜ на чашку с агаром, на которую нанесен свежий мазок Рз. аегидтоза, инкубируют, как описано выше.

Указанную процедуру повторяют минимум в течение 7 дней.

Результаты: при контактировании 8ΙΕΌΕΡΜ проявлял ингибирующую активность при 3 переносах, как показано в табл. 19 ниже.

- 58 014512

Таблица 19

	Тест 31Ь0ЕКМ с контрольным заражением
№ переноса	Вертикальное	Горизонтальное
		ингибирование	ингибирование
Перенос	1	52 мм	35 мм
Перенос	2	53 мм	35 мм
Перенос	3	51 мм	34 мм

Заключение:

Гидрогель 8КБЕЕМ способен проявлять длительную противомикробную активность на протяжении 3 контрольных заражений свежим инокулятом каждые 24 ч. Проводится дальнейшее тестирование.

Состав среды для обсуждаемых выше вариантов был следующим:

Питательный агар:

Пептон	10,0 г
Хлорид натрия	5,0 г
Мясной экстракт	3,0 г
Дистиллированная вода	900 мл
Агар	2,5 г
рн	7,2±0,2

Кроме того, можно будет разработать препараты 8ГЕБЕКМ со следующими компонентами: Коллаген.

Коллаген, наиболее распространенный белок в организме, является фибриллярным и нерастворимым и продуцируется фибробластами. Его волокна обнаруживают в соединительных тканях, включая кожу, кости, связки и хрящ. Во время заживления ран коллаген стимулирует отложение и организацию новообразованных коллагеновых волокон и грануляцию тканей в раневом ложе. Он также стимулирует образование новой ткани и очищение раны, создавая среду, способствующую заживлению.

Мальтодекстрин.

Мальтодекстрин является стимулятором заживления ран, который ускоряет заживление благодаря активации и привлечению макрофагов, таким образом снижая инфицирование и увеличивая грануляцию.

Факторы роста, полученные из тромбоцитов (РБ0Е)

РБ0Е стимулируют хемотаксическую мобилизацию и пролиферацию клеток, вовлеченных в заживление ран и усиливающих грануляцию ткани. Их главным образом используют для лечения диабетических невропатических язв нижних конечностей.

Динатрий-ЕБТА в качестве добавки.

Известно, что динатрий-ЕБТА увеличивает антибактериальное действие различных соединений, как природных, так и синтетических, посредством механизма, который предположительно приводит к увеличению проницаемости клеточной стенки бактерий, таким образом способствуя проникновению антибактериальных соединений.

Показано, что хелатор металлов и усилитель проницаемости наружной мембраны бактерии, этилендиаминтетрауксусная кислота (ЕБТА) усиливает активности различных противомикробных средств против Ркеиботопак аегидшока. Кроме того, субингибирующая концентрация ЕБТА заметно снижает МК'.’ цефпрозила против Е. со11 и 8еггайа тагсексепк.

Сообщалось, что имипенем, цефтазидим и цефепим плюс 150 мкг ЕБТА могут увеличивать средний диаметр зоны ингибирования в случае Р. аегидшока. В исследовании сообщалось, что этилендиаминтетрауксусная кислота (ЕБТА) влияла на чувствительность Р. аегидшока. ЕБТА при использовании вместе с АдЫОз существенно усиливала антибактериальное действие последнего, так что наблюдали, что штаммы К1екЫе11а рпеитошае и 81арЕу1ососсик аигеик, резистентные к 70 мкг/мл АдЫО₃, становились чувствительными к 10 мкг/мл данного соединения.

Была разработана конкретная композиция и набор тестов для определения того, могут ли композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению благоприятно функционировать с динатрий-ЕБТА. В частности, динатрий-ЕБТА производили в \Уек1 ’оак! ЬаЬотаФпек ίη МитЬац Ш^а. Динатрий-ЕБТА также известен как Ыа₂ЕБТА (динатрий-этилендиаминтетрауксусная кислота), имеет формулу: (’Η₂Ν (СН₂СООН) ’Щ’ОО^У^ЩО и имеет молекулярную массу 372,24.

В данном тесте использовали следующие среды: питательный агар: (Н1МеФа) 1000 мл; В.№ 10115 ехр. Аид 2006; пептический перевар животной ткани 50,00 г; дрожжевой экстракт 1,50 г; мясной экстракт 1,50 г; хлорид натрия 5,00 г; агар-агар типа-1 25г; рН 7,4 ±0,2.

Штаммы микроорганизмов

Композицию 32 ч./млн серебро/вода отдельно, композицию 22 ч./млн серебро/вода отдельно и композицию 32 ч./млн серебро/вода, а также композицию 22 ч./млн серебро/вода, добавленные к №₂ЕБТА, и тестировали против панели микроорганизмов, включающей:

- 59 014512

Нксйепсйпа сой (штамм, обладающий множественной лекарственной резистентностью) из образца кала;

Ркеибошопак аеигдшока (штамм, обладающий множественной лекарственной резистентностью) из мокроты; и

Резистентный к метициллину 81арйу1ососсик аигеик (штамм, обладающий множественной лекарственной резистентностью) из гноя в поясничной области.

Указанные выше ΜΌΚ-штаммы получали из Р. Ό. Ншйща Нокрйа1 (ΜυΜΒΑΙ, 1п±а).

8Ыде11а Пехпеп (лабораторный штамм). 8а1шопе11а 1ур1и (лабораторный штамм).

Бактериальные штаммы культивировали в течение 24 ч при 37°С на питательном агаре (рН 7,4).

Разведения 32 ч./млн и 22 ч./млн, добавленные к ΝνΕΩΤΑ. готовили в стерильной дистиллированной воде. Каждый микроорганизм суспендировали в стерильном физиологическом растворе и разбавляли до 10⁶ колониеобразующих единиц (КОЕ/мл). Их наносили мазком на поверхность питательного агара (рН 7,4), используя стерильные ватные валики. В агаре пробивали лунки (диаметром 10 мм) и в них добавляли 0,1 мл соответствующих разведений. После инкубации в течение примерно 24 ч при 37°С все чашки исследовали в отношении зон ингибирования роста и измеряли диаметры в мм, используя устройство для измерения зоны (Н1 МеЛа). Результаты приведены в табл. 20.

Результаты и обсуждение

Таблица 20

Серебро/вода + ИагЕЭТА

Система	Е. соИ	МЕЗА	С. а1Ысапз
Серебро/вода 32 ч/млн.-	21 мм	24 мм	27 мм
контроль
Серебро/вода 32 ч/млн.+	22 мм	29 мм	40 мм
0,5% Νη₂ ЕПТ А
Серебро/вода 22 ч/млн.+	20 мм	23 мм	29 мм
Серебро/вода 22 ч/млн.+	22 мм	31 мм	>40 мм

0,5% Ыа₂ ΕΩΤΑ

Динатрий-ΕΌΤΑ в концентрации 0,5 ч./млн явно усиливает эффективность композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению, как с уровнем концентрации 22, так и 32 ч./млн.

Серебро-ΕΌΤΑ в качестве единственного антибактериального средства

Была разработана конкретная композиция и набор тестов для определения того, обладают ли хелаты серебра, такие как серебро-ΕΌΤΑ (или Α§ΕΌΤΑ), антибактериальными свойствами. В частности коммерчески доступные композиции серебро-ΕΌΤΑ получали из ΑΚΖΟ №Ье1 и Л1рйа СйешюаК

Требуемые материалы - стерильные чашки с питательным агаром, стерильные ватные валики, микропипетка (емкость 100 мкл-1000 мкл), 16-часовая культура следующих штаммов (приблизительная плотность составляет 10⁸ КОЕ/мл): Нксйепсйиа сой (дикого типа), Ε8сйе^^сй^а сой (ΜΌΚ), Ркеибошопак аегидшока (дикого типа), Ркеибошопак аегидшока (ΜΌΚ), 84арйу1ососсик аигеик АТСС 6538Р, резистентный к метициллину 81арйу1ососсик аигеик.

Способ:

наносят мазком 16-часовую культуру указанных тестируемых организмов на стерильные чашки с питательным агаром;

дают возможность чашкам отстояться в течение 15 минут для абсорбции;

через 15 мин асептически высверливают лунки на поверхности агара с помощью сверла для пробок диаметром 10 мм;

распределяют по 100 мкл соответствующего разведения образца в лунки. Выдерживают в течение 15 мин для предварительной диффузии;

инкубируют чашки примерно при 37°С в течение примерно 24 ч и наблюдают результаты; измеряют зону ингибирования в мм, используя устройство для измерения зоны Н^Μеά^а. Результаты: см. табл. 21 ниже и фиг. 36 и 37.

- 60 014512

Таблица 21. Сравнительная оценка хелатов серебра

Организм	Концентрация	Зона ингибирования
ΑΚΖΟ	АЬРНА
Е. соИ (дикий тип)	28 ч/млн.	20 мм	22 мм
57 ч/млн.	22 мм	24 мм
114 ч/млн.	22 мм	25 мм
Е. соИ (МОК)	28 ч/млн.	20 мм	19 мм
57 ч/млн.	21 мм	21 мм
114 ч/млн.	23 мм	22 мм
Рз. аегидтпоза (дикий тип)	28 ч/млн.	21 мм	20 мм
57 ч/млн.	27 мм	24 мм
114 ч/млн.	28 мм	27 мм
Рз. аегидтпоза (ΜΰΚ)	28 ч/млн.	15 мм	17 мм
57 ч/млн.	21 мм	20 мм
114 ч/млн.	25 мм	22 мм
3. аидеиз (дикий тип)	28 ч/млн.	16 мм	15 мм
57 ч/млн.	19 мм	18 мм
114 ч/млн.	22 мм	21 мм
МЕЗА	28 ч/млн.	19 мм	20 мм
57 ч/млн.	21 мм	22 мм
114 ч/млн.	26 мм	24 мм

Заключение: хелаты серебра, такие как серебро-ΕΌΤΑ, обладают антибактериальной эффективностью.

Комбинированная терапия антибиотиками

Когда антибиотики были впервые открыты, их рекламировали как чудесно исцеляющие средства, и они без преувеличения были таковыми. Инфекции, которые были смертельными к концу столетия, были покорены и стали не более чем неудобством в этом столетии. Но медицина совершила почти полный цикл. Неправильное употребление, чрезмерное назначение и/или злоупотребление антибиотиками позволили развиться резистентным штаммам бактерий, и снова штаммы бактерий угрожают здоровью и жизни.

Некоторыми другими факторами, которые вносят вклад в развитие резистентности у бактерий, являются применение антибиотиков для сельскохозяйственных целей и в качестве кормовых добавок в сельском хозяйстве (например, для домашней птицы, крупного рогатого скота, свиней и т.д.). Чрезмерное назначение антибиотиков, как многие считают, является угрожающим в сельскохозяйственном производстве в Соединенных Штатах и является угрожающим во многих других странах. Терапию антибиотиками в сельском хозяйстве часто начинают даже то того, как образец культуры посылают в лабораторию. Птичий грипп (например, Η5Ν1 или НРА1) стал очень устойчивым к антибиотикам вследствие интенсивного применения антибиотиков в птицеводстве в Азии. Пациенты также имеют легкий доступ к антибиотикам без рецепта. Неподходящие дозы и неполная продолжительность лечения также вносят вклад в появление штаммов, резистентных к лекарственным средствам. Существуют важные клинические разветвления проблемы резистентности. Резистентность патогенных бактерий к антибиотикам оказала сильное влияние на лечение инфекционных болезней. В случае многих лекарственных средств, таких как пенициллин, который считали чудодейственным лекарственным средством и который обладал большими возможностями для эффективной борьбы, когда он был впервые введен, недавно появились бактерии, которые адаптированы к ним и сильно уменьшают их применимость.

Проблема резистентности к антибиотикам в настоящее время является глобальной проблемой. В настоящее время известно, что некоторые распространенные и высокопатогенные бактерии, такие как 81арйу1ососсик аигеик, особенно штаммы, встречающиеся в стационарах, являются резистентными ко всем антибиотикам кроме ванкомицина, и как предполагают, вскоре станут также резистентными и к ванкомицину. МК8А (резистентные к метициллину §1арйу1ососсик аигеик) и УКЕ (резистентные к ванкомицину Еи1егососс1) являются причиной тяжелых внутрибольничных инфекций, и часто больничные палаты закрывают и даже ликвидируют при выявлении инфекции.

При наличии такой проблемы крайне необходим поиск альтернативы, например, либо найти новые антибиотики вместо старых, либо сделать эффективным применение существующих антибиотиков. Также растущая угроза появления бактерий с множественной лекарственной резистентностью является серьезной причиной для рассмотрения композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению.

Один из способов преодоления возрастающей резистентности бактерий к антибиотикам заключается в применении комбинированной терапии, при которой применяют два или более разных антибиотика с разными способами действия. Имеются различные способы ίη уйго для измерения синергетического действия комбинаций антибиотиков, но могут быть расхождения результатов при использовании разных тестов, также комбинации не полностью исключают развитие резистентности к ним.

- 61 014512

Цели и задачи

Настоящее исследование проводили, преследуя следующие цели и задачи.

1. Чтобы определить характер множественной лекарственной резистентности (МОЕ) клинических изолятов.

2. Чтобы определить чувствительность клинических изолятов к растворам серебро/вода согласно настоящему изобретению.

3. Чтобы определить комбинацию (синергию) антибиотиков с использованием теста дисков.

4. Чтобы определить минимальную ингибирующую концентрацию (М1С) антибиотиков и композиций серебро/вода согласно настоящему изобретению.

5. Чтобы исследовать синергетическое действие между антибиотиками и растворами серебро/вода согласно настоящему изобретению с помощью анализа способом шахматной доски .

Материалы и способы

Сбор клинических изолятов.

Следующие клинические изоляты с множественной лекарственной резистентностью собирали в Р. Ό. Ншбща Нокрйа1, Сабе11 гоаб, МаЫш, МитЬа1-400016, 1пб1а.

НкскепсЫа со11 (выделены из кала);

Ркеиботопак аегидшока (выделены из мокроты);

резистентные к метициллину 81арЬу1ососсик аигеик (МВ8Л - выделенные из гноя из поясничной области).

Среды, растворы и диски с антибиотиками

Среды:

питательный бульон, питательный агар, агар Мюллера-Хинтона.

Растворы:

растворы антибиотиков, раствор серебро/вода (22 ч./млн).

Состав сред и растворы, используемые в различных экспериментах в исследовании, перечислены в табл. 26 (в данном описании ниже).

Использовали легкодоступный диск с антибиотиком подходящей концентрации. Содержание диска для каждого антибиотика указано в табл. 27 (в данном описании ниже).

Приготовление инокулята

Петлю чистой культуры высевали на питательный бульон и инкубировали в течение ночи примерно при 37°С. 500 мкл ночной культуры переносили в 5 мл свежего питательного бульона и инкубировали в течение 4-6 ч примерно при 37°С. Плотность культуры доводили примерно до 10⁵-10⁶ КОЕ/мл.

Тест чувствительности к антибиотикам - способ Кирби-Бауера

В данном способе пропитанные антибиотиком диски помещают на чашку с агаром, на которую предварительно посеяна бактериальная суспензия. Антибиотик диффундирует в окружающую среду. Имеет место логарифмическое снижение концентрации антибиотика по мере увеличения расстояния от диска. Свободная зона вокруг диска указывает на чувствительность организма к антибиотику. Чистую зону измеряют в миллиметрах и сравнивают со стандартной диаграммой Νί.'ί.Έ·8.

Способ.

1. Стерильные ватные валики обмакивали в указанные выше пробирки с бульоном, содержащим инокулят, и использовали для распределения по поверхности на чашках с агаром М.Н., чтобы получить сплошной рост.

2. После обеспечения возможности для абсорбции инокулята в среде диски с антибиотиками помещали на чашки с распределенным по поверхности инокулятом с помощью стерильного пинцета.

3. Чашки инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

4. Просветление вокруг диска свидетельствует о чувствительности организма. Регистрируют диаметр зоны и интерпретируют согласно стандартным диаграммам, подготовленным Νί.'ί.Έ·8. (см. табл. 27) (Копетап 5¹¹' еб. 1997).

Определение чувствительности изолятов к 10 ч./млн - способ диффузии в агаре.

Чувствительность определяли способом анализа лунок, при котором осуществляют массовый посев изолята на агаризованную среду и добавляют раствор 10 ч./млн серебро/вода в лунки (10 мм), пробитые в твердой инокулированной среде. Затем отмечают размер зоны ингибирования.

Способ.

1. К расплавленному столбику агара Мюллера-Хинтона объемом 20 мл добавляют 0,5 мл инокулята и выливают на чашку Петри и обеспечивают возможность отверждения.

2. В слое агара пробивают лунки.

3. Затем в каждую лунку добавляют различные концентрации композиций серебро/вода.

4. Чашки инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

5. Отмечают размер зон ингибирования.

- 62 014512

Определение комбинации антибиотиков - способом дисковой диффузии.

Это простой, качественный тест для исследования взаимодействия между клиническим изолятом и комбинацией антибиотиков. В данном тесте диски с антибиотиками помещают на чашку с агаром, на которую был произведен посев способом Кирби-Бауера. Диски должны быть отделены на расстояние, которое равно или немного превышает средние диаметры ингибирования, получаемые от каждого диска отдельно. Форма полученной зоны ингибирования будет указывать на вид взаимодействия между клиническим изолятом и комбинацией антибиотиков.

Способ.

2. После обеспечения возможности для абсорбции инокулята в среде два диска с антибиотиками (комбинация, которую необходимо исследовать) помещали на чашки с распределенным по поверхности инокулятом с помощью стерильного пинцета на расстоянии, равном или немного превышающем сумму диаметров ингибирования, полученных для каждого диска отдельно.

3. Чашки инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 часов.

4. Форма зон ингибирования может указывать на тип взаимодействия, т.е. синергию, антагонизм или нейтральность.

Фиг. 25 представляет собой диаграмму, на которой показаны возможные взаимодействия в дискодиффузном тесте при исследовании синергии по отношению к бактериям.

В частности, часть А показывает аддитивное или нейтральное действие; каждый антибиотик дает зону ингибирования, на которую не влияет соседняя зона; часть В показывает антагонистическое действие, при котором зоны ингибирования каждого антибиотика уменьшаются в присутствии другого антибиотика; и часть показывает два возможных проявления синергетического действия. Слева увеличенная зона ингибирования возникает в том случае, когда встречаются два антибиотика. Справа ни один из антибиотиков не является ингибирующим сам по себе, но бактериальный рост ингибируется в случае совместной диффузии двух антибиотиков.

Определение минимальной ингибирующей концентрации (М1С) противомикробных средств.

Определение представляет собой тест чувствительности на основе макроразведения бульона. Серийные разведения противомикробного средства готовят в бульоне, к которому добавляют стандартизованную суспензию бактерий. В конце периода инкубации пробирки обследуют в отношении роста. Наименьшую концентрацию противомикробного средства, которое ингибирует визуальный рост, принимают за М1С.

Используемые антибиотики:

Амикацин: микацин для инъекций (250 мг) Αηδίυ 1аЬ§, МитЬа1 Ιηάία. Партия № 02Ό054, дата изготовления: апрель 2004.

Цефоперазон: магнамицин для инъекций (250 мг) РПхег Еб, МитЬа1, 1пб. Партия № 32035153Α, дата изготовления: март 2003.

Ципрофлоксацин: цифран (200 мг/мл) КапЬаху ЬаЬ§, ба1риг, 1пб1а. Партия № 9042601, дата изготовления: март 2004.

Способ.

1. Определенное количество противомикробного средства серийно разводят в подходящем диапазоне.

2. Пробирка, не содержащая противомикробного средства, служит в качестве контроля роста.

3. Затем в каждую пробирку инокулируют стандартную суспензию бактерий и инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

4. В конце инкубационного периода пробирки обследовали визуально в отношении мутности. Мутность указывает на то, что бактериальный рост не был ингибирован концентрацией противомикробного средства, находящейся в среде.

5. М1С является наименьшей концентрацией противомикробного средства, которая ингибирует видимый рост.

Исследование синергетического действия посредством анализа способом шахматной доски. Анализ типа шахматной доски представляет собой способ, применяемый в том случае, когда необходимо тестировать несколько антибиотиков и/или несколько разведений. Серийные двукратные разведения выбирают так, чтобы включать концентрации от одной шестнадцатой до по меньшей мере двукратной М1С. Лекарственное средство А разводят вдоль ординаты, тогда как лекарственное средство В серийно разводят вдоль абсциссы. Полученная в результате шахматная доска дает каждую комбинацию двух антибиотиков от пробирки, которая содержит наивысшую концентрацию каждого в противоположном углу.

- 63 014512 с; Σ

Σ СО

О о

ф

Протокол:

О М1С М1С М1С М1С М1С М1С

Лекарственное средство А мкг/мл

Расположение разведений лекарственных средств в анализе способом шахматной доски.

Первый ряд и колонка пробирок только с одним лекарственным средством служили для подтверждения индивидуальных значений МК'.' для тестируемых изолятов.

Одна пробирка без антибиотика является позитивным контролем.

1. Противомикробные лекарственные средства, растворенные в бульоне, необходимо добавить из соответствующих маточных растворов до конечного объема 5 мл в каждой пробирке.

2. Добавляют 0,1 мл суспензионной культуры.

3. Инкубируют при 37°С в течение 24 ч.

4. Результаты изображают, вычерчивая изоболограмму, полученную соединением точек, которые представляют все комбинации с одним и тем же эффектом, включая одинаково эффективные концентрации антибиотика, используемого отдельно.

Вычисления.

Е11оп е! а1. (1954) описал способ количественной оценки результатов МГС, полученных в пересчете на индекс фракционно ингибирующей концентрации (НС), определяемый как сумма значений НС двух лекарственных средств в комбинации.

Индекс НС = НС средства А + НС средства В.

ПС средства

„ М1С средства А в комбинации со средством В. МТС средства А.

Индекс менее 0,5 считают доказательством синергизма; индекс больше 2,0 является доказательством антагонизма (Копетап 5'¹' еб. 1997) .

На фиг. 26 показано титрование типа шахматной доски в отношении противомикробной синергии.

Каждый квадрат представляет пробирку. Возрастающие концентрации антибиотика А распределяют вдоль горизонтальной оси, и возрастающие концентрации антибиотика В - вдоль вертикальной оси. Заштрихованные квадраты показывают бактериальный рост. На панели А антибиотики проявляют аддитивное действие; изоболограмма справа представляет собой прямую линию. На панели В представлен синергизм, при этом изоболограмма является вогнутой кривой. На панели С показаны антагонистические результаты с выпуклой кривой.

Определение характера чувствительности к антибиотикам способом Кирби-Бауера.

Таблица 22. Антибиограммы изолятов, используемых для исследования (зоны в мм)

- 64 014512

Концентрация АЗАР, ч/млн	Размер зоны (мм) Организмы
Е. соИ	Рзеиботопаз	МЕЗА
32	16	16	13

16	15	14	11

8	11	11	-

4	-	-	-

2	-	-	-

Фотографию см. на фиг. 27.

Определение комбинации антибиотиков в дисковом тесте.

Из различных комбинаций антибиотиков, исследуемых в отношении синергетического или аддитивного действия на изоляты, зоны ингибирования, указывающие на возможную синергию, наблюдали только в случае МК8А при использовании комбинации амикацина с цефоперазоном и амикацина с тетрациклином (см. фиг. 28). Не наблюдали зон ингибирования, свидетельствующих о синергетической комбинации, в случае других двух изолятов, т.е. Е. сой и Ркеийотопак (см. фиг. 29 и 30).

Определение минимальной ингибирующей концентрации антибиотиков.

Определяли М1С антибиотиков, в случае которых наблюдали зоны ингибирования, свидетельствующие о возможной синергии.

Таблица 23.

М1С амикацина

Исходный раствор: 125 мкг/мл

Разбавитель: питательный бульон

Культура: МК8А

Обозначение: +: рост; -: нет роста

Обнаружено, что М1С амикацина для ΝΚ.8Λ равна 0,8 мкг/мл

М1С цефоперазона

Исходный раствор: 100 мкг/мл

Разбавитель: питательный бульон

Культура: МК8А

Обозначение: +: рост; - нет роста.

Обнаружено, что М1С цефоперазона для МК8А равна 10 мкг/мл. М1С композиции серебро/вода

Исходный раствор: раствор 20 ч./млн серебро/вода

- 65 014512

Разбавитель: питательный бульон

Культура: МВ8А

Таблица 23а

Обозначение: +: рост; -: нет роста.

Обнаружено, что М1С серебро/вода для МВ8А составляет 8 ч./млн.

М1С композиции серебро/вода Исходный раствор: 20 ч./млн. Разбавитель: питательный бульон Культура: Е. сой.

Таблица 24

- 66 014512

Обозначение: +: рост; -: нет роста.

Обнаружено, что М1С серебро/вода для Е. со11 составляет 3 ч./млн.

М1С композиции серебро/вода. Исходный раствор: 20 ч./млн серебро/вод. Разбавитель: питательный бульон.

Культура: Ркеиботопак.

Таблица 25

Обозначение: +: рост; -: нет роста.

Обнаружено, что М1С серебро/вода для Ркеиботопак составляет 3 ч./млн.

Исследование синергетического действия с помощью анализа способом шахматной доски. I. Комбинация амикацина и композиции серебро/вода.

М1С амикацина = 0,8 мкг/мл.

М1С серебро/вода = 8 ч./млн.

Культура: МΚ8Α.

Обозначение: +: рост; -: нет роста.

Обнаружено, что синергетическая концентрация для МΚ8Α составляет 0,05 мкг/мл амикацина и 1 ч./млн композиции серебро/вода согласно настоящему изобретению.

Расчет индекса НС:

- 67 014512

М1С амикацина в комбинации

=0,1875.

Индекс НС является показателем синергии между амикацином и композицией серебро/вода.

II. Комбинация цефоперазона и композиции серебро/вода.

М1С цефоперазона = 10 мкг/мл.

М1С серебро/вода = 8 ч./млн.

Культура: МК8А.

Серебро/вода (ч/млн.)

Обозначение: +: рост. -: нет роста.

Обнаружено, что синергетическая концентрация для МК8А составляла 0,625 мкг/мл цефоперазона и 1 ч./млн композиции серебро/вода.

=0,625/10 =0,0625.

Индекс ЕтС =0,0625+0,125 =0,1875.

Индекс НС является показателем синергии между цефоперазоном и композицией серебро/вода.

III. Комбинация цефоперазона и амикацина. М1С цефоперазона = 10 мкг/мл.

М1С амикацина = 8 ч./млн.

Культура: МК8А

- 68 014512

Амикацин (мкг/мл) Обозначение: +: рост. -: нет роста.

Обнаружено, что аддитивная концентрация цефоперазона составляла 1,25, а амикацина - 0,4.

Расчет индекса ПС:

ЕТС цефоперазона =

МТС цефоперазона в комбинации МТС цефоперазона отдельно.

=1,25/10 =0,125.

ПС	МТС амикацина в комбинации
амикацина =	МТС амикацина отдельно

=0,4/0,8 =0, 5.

Индекс ПС =

= МТС амикацина + ПС цефоперазона

=0,125+0,5 =0,625

Индекс НС является показателем аддитивности между цефоперазоном и композицией серебро/вода.

Обсуждение

В данном примере из трех клинических изолятов, собранных в Р. Ό. Нтйн)а Нокрйа1, МитЬац 1пй1а, грамотрицательные изоляты проявляли резистентность к более старым антибиотикам, таким как ампициллин, тетрациклин, канамицин, и к более старым хинолонам, подобным налидиксовой кислоте, также цефалоспоринам третьего поколения - цефтазидиму и цефоперазону. Клинические изоляты Ркеийотопак, используемые в исследовании, также были резистентны к новому ципрофлоксацину и к полусинтетическому аминогликозиду, амикацину. Грамположительный изолят МВ8А также был резистентным к более старым антибиотикам, а также к цефалоспоринам третьего поколения, подобным цефтазидиму.

Исследование чувствительности к композициям серебро/вода согласно настоящему изобретению показало, что грамотрицательные изоляты были очень чувствительны к растворам примерно 3 ч./млн серебро/вода, и обнаружено, что изолят МВ8А ингибировался растворами 8 ч./млн серебро/вода, что определяли способом диффузии в агаре и микроразведения бульоном.

Взаимодействие двух антибиотиков в комбинации с изолятами определяли диско-диффузным способом, в котором получили синергетические результаты между цефоперазоном и амикацином против МВ8А. Чтобы это подтвердить, осуществляли анализ способом шахматной доски. Для грамотрицательных изолятов в диско-диффузном тесте ни аддитивного действия, ни синергии между антибиотиками не наблюдали.

Осуществляли анализ способом шахматной доски и обнаружили, что индекс НС двух антибиотиков составляет 0,625, что свидетельствует об аддитивном действии, но не синергии в случае комбинации амикацина и цефоперазона.

Анализ способом шахматной доски также осуществляли для исследования комбинации растворов серебро/вода с амикацином, а также с цефоперазоном. Результаты показали, что в присутствии композиций серебро/вода согласно изобретению эффективная концентрация антибиотика была снижена пример

- 69 014512 но в четыре раза. Обнаружено, что индекс НС указанных комбинаций составлял 0,1875 в каждом случае, свидетельствуя о синергии в случае комбинации серебро/вода с амикацином и серебро/вода с цефоперазоном.

Результаты исследования указывают, что для описанных выше клинических ΜΌΚ-изолятов доза антибиотика может быть значительно снижена в присутствии композиции серебро/вода, что не наблюдали в случае комбинации антибиотиков.

Полученные результаты показывают, что композиции серебро/вода согласно изобретению должны будут сыграть важную роль в комбинированной терапии антибиотиками, особенно против штаммов с множественной лекарственной резистентностью.

Таблица 26

1. Питательный бульон:

Пептон	10_г0 г
Хлорид натрия	5,0 г
Мясной экстракт	3,0 г
Декстроза	5,0 г
Феноловый красный (индикатор)	0,001%
Дистиллированная вода	900 мл

2. Питательный агар

Пептон	10, 0 г
Хлорид натрия	5,0 г
Мясной экстракт	3,0 г
Дистиллированная вода	900 мл
Агар	2, 0%
рН	7,2
гар Мюллера-Хинтона
Кислотный казеиновый гидролизат	29,0 г
Мясной экстракт	10,0 г
Картофельный крахмал	2,5 г
Агар	1,2%
Дистиллированная вода	1000 мл
рн	7,6

Таблица 27. Интерпретация диаметра зоны (Документ Ж.'С.Ък 1988)

Антибиотики	Диск	Диаметр зоны в мм
концентрация (мкг)	резистентные	промежу т о чные	чувствительные
Амикацин (АК)	30	£14	15-16	Ϊ17

Ципрофлоксацин (КС)	5	<15	16-20	£21

Канамицин (КА)	30	£13	14-17	£18

Гентамицин (СМ)	10	£12	13-14	£15

Тетрациклин (ТЕ)	30	£14	15-18	£19

Налидиксовая кислота (ΝΑ)	30	£14	14-18	>19

Цефоперазон (СР)	75	<15	16-20	>21

Цефтазидим (РС5)	30	£14	15-17	£18

Хлорамфеникол (СН)	30	£12	13-17	£18

- 70 014512

Комбинация гентамицина и композиции серебро/вода в качестве опудривающего спедства для ран

Введение

Средства для опудривания ран представляют собой препараты, применяемые для профилактики или лечения поверхностных бактериальных инфекций ран, ожогов, кожных язв или абсцессов после инфекции.

Порошки для опудривания ран обычно представляют собой препараты антибиотиков/антисептиков широкого спектра действия. Применение таких порошков не исключает сопутствующей терапии антибиотиками, когда это необходимо.

Большинство продуктов для лечения ран, доступных в настоявшее время на рынке, основаны на повидон-йоде. Повидон-йод является высоко токсичным на открытых ранах и в частности противопоказан при диабетических ранах. Кроме того, йод испаряется, и его необходимо повторно наносить каждые 6-8 ч.

Другой потенциальной областью применения является область ветеринарии. Комнатные животные часто имеют порезы, потертости и раны либо вследствие царапания, чтобы удалить паразитов, а также борьбы с другими животными. Мягкое противомикробное средство, но с широким спектром действия может быть полезным в случае такого применения.

Было решено приготовить средство для опудривания ран, состоящее из препарата медленного высвобождения, содержащего комбинацию гентамицина и сконструированных наночастиц серебра согласно настоящему изобретению. Основанный на тальке препарат, содержащий примерно 200 ч./млн наночастиц серебра и примерно 100 ч./млн гентамицина, в данном описании называют ЗГЙБиЗТ.

Результаты ЗГЙБиЗТ - чувствительность

Цель - чтобы определить чувствительность микроорганизмов к ЗГЬЭиЗТ и его компонентам.

Процедура.

Требуемые материалы - стерильные чашки с питательным агаром, стерильные ватные валики, микропипетка (емкость 100-1000 мкл), 16-часовая культура следующих штаммов (приблизительная плотность 10⁸ КОЕ/мл) ЕксйейсЫа сой (ΜΌΚ), Ркеиботопак аегидшока (ΜΌΚ), резистентные к метициллину 8!арйу1ососсик аигеик.

Способ.

Распределяют 0,1 мл культуры по поверхности питательного агара, используя стерильные ватные валики. Оставляют на 15 мин.

Через 15 мин асептически высверливают лунки на поверхности агара с помощью сверла для пробок диаметром 10 мм.

В одну лунку вносят 10 мг ЗГЙБиЗТ (200 ч./млн серебра в тальке + 100 ч./млн гентамицина).

В другую лунку вносят 100 мкл гентамицина 100 ч./млн. Также вносят 200 ч./млн серебра в тальке + 100 мкл дистиллированной воды. Обе лунки служат в качестве контролей.

Чашки инкубируют примерно при 37°С в течение примерно 24 ч и исследуют.

Измеряют зону ингибирования в мм, используя устройства для измерения зоны Н1Меб1а. Результаты. Показаны в табл. 28 ниже и на фиг. 38.

Таблица 28. Чувствительность к БГЙБиБТ

Культура	Зона ингибирования \|
100 ч/млн. гентамицина	200 ч/млн. АЗАР, тальк	зтьризт* 1
ЕвсЪегз-сЫа соИ (ΜϋΡ)	24 мм	17 мм	26 мм \|

31ЬЭиЗТ* 200 ч/млн. АЗАР, тальк + 100 ч/млн. гентамицина

Заключение. Имеет место синергетическая активность, наблюдаемая в случае ЗГЙБиЗТ (содержащего 200 ч./млн серебра в тальке и 100 ч./млн гентамицина).

Обозначение:

8ΙΕΩΕ8Τ 1 - 200 ч./млн серебра, тальк + 50 ч./млн гентамицина;

8ΙΕΩΕ8Τ 2 - 200 ч./млн серебра, тальк + 100 ч./млн гентамицина.

ЗГЙБиЗТ - антабактериальная активность

Цель - чтобы определить время гибели микроорганизмов при действии ЗГЙБиЗТ.

Процедура.

Требуемое оборудование - инкубатор, ламинарный поток, аналитические весы.

Требуемые материалы - стерильный бульон с феноловым красным, микропипетка, 16-часовая культура следующих штаммов (примерная плотность 10⁸ КОЕ/мл) ЕксйейсЫа сой (ΜΌΚ), Ркеиботопак аегидшока (ΜΌΚ), резистентные к метициллину 81арйу1ососсик аигеик.

Способ.

Готовили аликвоту объемом 5 мл, содержащую 2 г ЗГЙБиЗТ, в стерильной пробирке.

Инокулировали 0,1 мл культуры в описанный выше раствор. Тщательно встряхивали.

С интервалами времени 0, 5, 10-50 мин инокулировали петлю тестируемого образца в 5 мл стерильного содержащего декстрозу бульона с феноловым красным. Тщательно встряхивали.

- 71 014512

Инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 часов.

Наблюдали рост.

Для негативного контроля петлю δΣΕϋυδΤ без инокулята суспендировали в 5 мл стерильного содержащего декстрозу бульона с феноловым красным и инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

Для позитивного контроля петлю тестируемой культуры инокулировали в 5 мл стерильного содержащего декстрозу бульона с феноловым красным и инкубировали примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

Результаты: смотри табл. 29, 30 и 31.

Таблица 29

ЕзсЬеггсЫа соИ (ИРК)

Интервал времени (минуты)	100 ч/млн. гентамицина	200 ч/млн. АЗАР, тальк	зтьризт*	Вокадин *
0	+	+		-
5	4’	+	+	-
10	+	+	+	-
15	+	+	+	-
20	+	+	+	-
25	4-	+	4-	-
30	+	+	4-	-
35	+	+	+	-
40	+	+	+	-
45	+	+		-
50	+	+	-	-
Позитивный контроль	+	+		+
Негативный контроль	—	—	—

51ЬРи5Т* -> 200 ч/млн. АЗАР, тальк + 100 ч/млн. гентамицина Вокадин* -» 200 ч/млн. доступного йода.

Обозначение:

+ рост

- нет роста

Заключение: комбинация проявляет синергетическую активность. Пробирка с вокадином (обсуждаемы ниже в конце примера) становится коричневой через несколько секунд после добавления порошка к среде вследствие высвобождения йода. Хотя вокадин приводит к более быстрой гибели, такая высокая цитотоксичность является нежелательной для заживления ран.

Таблица 30

Рзеиботопав аегидхпоаа (МРВ)

Интервал времени (минуты)	100 ч/млн, гентамицина	200 ч/млн. АЗАР, тальк	51ъризт*	Вокадин *
0	4-	+	+	-
• 5	+	+	+	-
10	+	4-	4-	-
15	4-	+		-
20	+	+		-
25	+	+	+	-
30	+	+	4-	-
35	+	+	4-	-
40	+	+	-
45	+	+	-	-
50	-	-	-	-
Позитивный контроль	+	+	+	+
Негативный контроль	—	—	“	—

ЗНОиЗТ* — 200 ч/млн. АЗАР, тальк + 100 ч/млн. гентамицина Вокадин* -> 200 ч/млн. доступного йода.

Обозначение: + рост —» нет роста

- 72 014512

Заключение: комбинация проявляет синергетическую активность.

Таблица 31

МНЗА

Вокадин* -» 200 ч/млн. доступного йода. .

Обозначение:

+ рост

- нет роста

8П.1Л:8Т - антибактериальная активность

Цель: чтобы определить чувствительность хозяина бактериофага к 81ЬОи8Т.

Принцип: необходимо добиться подходящего разведения, чтобы исключить ложноположительный тест вследствие гибели хозяина под действием 81ЬОи8Т.

Процедура.

Принцип: - Т-четный бактериофаг и хозяина НксНепсЫа соН использовали в качестве системы регистрации. Концентрацию серебра в 81ЬОи8Т необходимо нейтрализовать посредством разведения так, чтобы не убить хозяина. Экспериментальные аликвоты были приготовлены следующим образом:

1. Тест - Фаг + 8ΙΕΌυ8Τ.

2. Контроль - Фаг + физиологический раствор.

Требуемое оборудование - весы для взвешивания, ламинарный бокс с воздушным потоком, инкубатор.

Требуемые материалы - чашки Петри, маркер, шпатель, микропипетка.

Способ.

Готовят аликвоту объемом 2,5 мл, содержащую примерно 1 г 8ΙΓΌυ8Τ (который не оказывает бактерицидного действия) и физиологический раствор, в отдельной стерильной пробирке.

В каждую добавляют примерно 0,1 мл фагового лизата (примерно 10¹⁰ инфицирующих единиц фага в мл).

Тщательно смешивают на вихревом смесителе и инкубируют примерно при 37°С.

В ί=0,1 и с часовыми интервалами после этого отбирают аликвоты объемом 0,5 мл и разбавляют до пробного разведения 8ΙΓΌυ8Τ, которое не оказывает бактерицидного действия.

Наносят пятно такого разведения на сплошной свежеприготовленный посевной материал хозяина. Это необходимо сделать как для тестируемых образцов, так и для контролей.

Инкубируют чашку примерно при 37°С в течение примерно 24 ч.

Смешивают 0,1 мл такого разведения с 0,5 мл экспоненциально растущего хозяина и инкубируют примерно при 37°С в течение примерно 15 мин.

Добавляют 7 мл расплавленного мягкого агара.

Тщательно встряхивают и наслаивают сверху на чашку с питательным агаром.

Чашку инкубируют примерно при 37°С в течение примерно 24 часов.

Проверяют бляшки на посевном материале и подсчитывают бляшкообразующие единицы на верхнем слое агара.

Результаты: см. табл. 32.

- 73 014512

Таблица 32. Пилотное исследование 81ЬБи8Т

Разведения	Результат
10'¹	+
10'²	-
1О'^;	-
10’⁴	-

Обозначение:

+ присутствие активных фаговых частиц.

- отсутствие фаговых частиц.

81ЬБи8Т - противовирусная активность

Цель: чтобы определить противовирусную активность 81ЬБи8Т с использованием основанной на бактериофаге системы регистрации.

Процедура: такая же как в разделе 8П.1)и8Т АНТИБАКТЕРИАЛЬНАЯ АКТИВНОСТЬ, ЧАСТЬ 2

Результаты: в табл. 33 и 34.

Таблица 33

Время гибели в случае ЗТЪРОЗТ

Интервалы времени (час)	Физиологический раствор	ЗТЬОТЗТ*
0	+	+
1	+	+
2	+	-
3	+	-

51ЬРиЗТ* -* 200 ч/млн. АЗАР, тальк + 100 ч/млн, гентамицина

Обозначение:

+ присутствие активных фаговых частиц. - отсутствие фаговых частиц.

Таблица 34 Подсчет фагов

Интервалы времени (час)	Физиологический раствор (БОЕ/ыл)	зинизт* (БОЕ/мл)
0	ТИТС	1,15х10⁵
1	ТЫТС	1, ОхЮ⁴
2	ТИТС	3, ОхЮ³
3	ТИТС	Ноль

31ЬРиЗТ* -> 200 ч/млн. АЗАР, тальк + 100 ч/млн. гентамицина Обозначение:

Т№ГС слишком много, чтобы подсчитать.

БОЕ/мл - титр инфекционных фаговых частиц.

Заключение: Обнаружено, что 81ЬБи8Т не проявляет бактерицидной активности против культуры хозяина в разведении 10^-2. Противовирусную активность проверяли при таком же разведении 81ЬБи8Т и обнаружили, что является эффективным. Обнаружено, что количество бляшкообразующих единиц снижается от 10⁵ до нуля за 3 часа, что доказывает, что 81ЬБи8Т, вероятно, также может обладать активностью против вирусов животных.

Следующую композицию использовали в экспериментах, указанных выше.

Состав сред:

Питательный агар:

Пептон	10,0 г
Хлорид натрия	5,0 г
Мясной экстракт	3,0 г
Дистиллированная вода	900 мл

- 74 014512

Агар 2,5 г рН 7,2±0,2

Содержащий декстрозу бульон с феноловым красным

Протеозопептон	10,00 г/л
Мясной экстракт	1,00 г/л
Хлорид натрия	5,0 г/л
Декстроза	5,0 г/л
Феноловый красный	0,018 г/л
рН	7,4+0,2
Мягкий агар:
Агар 1,0%
Физиологический	раствор:

Хлорид натрия 0,9%

Вокадин

Производства Ые. №: Αϋ/200-Α

Партия Ν’: ΚΝΚ 5008

Дата изготовления: март 2005

Срок хранения: март 2008

Активные ингредиенты:

Повидон-йод ΙΡ 5% мас./мас.

Производства: Nаνкеΐаη КекеагсН апб ЬаЬ. Иб.

Добавления серебро/вода к 10% раствору повидон-йода

Другим примером добавки, которая положительно работает с композициями серебро/вода согласно настоящему изобретению, является повидон-йод. Йод является хорошо известным профилактическим средством в медицине против широкого круга патогенов. Йод коммерчески доступен в различных концентрациях, но обычно используемой и предпочтительной является концентрация 10%. В данном предпочтительном варианте осуществления изобретения синергетическая комбинация содержит замену примерно на 25-50 об.% смеси серебро/вода 10% раствором йода. Хотя возможны некоторые реакции между смесью серебро/вода и йодом, на основании экспериментальных результатов очевидно, что синергетическая комбинация смеси серебро/вода с повидон-йодом может функционировать в качестве местного дезинфицирующего средства (например, в виде мази) и/или в качестве профилактического средства против инфекции при порезах, ожогах и/или царапинах и т. д.

В частности, синергетическую активность композиций 32 ч./млн серебро/вода в комбинации с различным процентным содержанием повидон-йода (ΡΙ) исследовали против различных бактерий. Способы тестирования и результаты следуют. Можно сделать вывод на основании полученных результатов, что при добавлении указанных двух материалов вместе существует синергетическое взаимодействие. Такой синергизм можно использовать для получения в результате прекрасного местного дезинфицирующего средства.

Таким образом, следует понимать, что следующая далее формула изобретения включает то, что конкретно проиллюстрировано и описано выше, что является концептуально эквивалентным, что явно можно заменить, а также то, что, по существу, включает в себя основную идею настоящего изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что могут быть осуществлены различные адаптации и модификации описанного предпочтительного варианта, не выходя за рамки объема изобретения. Проиллюстрированный вариант осуществления изобретения приведен только в качестве примера, и его не следует воспринимать как ограничивающий настоящее изобретение. Поэтому следует понимать, что в объеме прилагаемой формулы изобретения настоящее изобретение может быть осуществлено на практике иным образом, отличным от конкретного описания, приведенного в данной публикации.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Бактерицидная композиция, представляющая собой коллоидный раствор серебра, содержащий общую концентрацию серебра примерно от 5 до 40 ч./млн, имеющих внутреннюю часть из элементного серебра и поверхность по меньшей мере из одного оксида серебра, где большинство частиц серебра имеют максимальный диаметр менее 0,015 мкм и минимальный диаметр более 0,005 мкм.

- 75 014512
2. Композиция по п.1, дополнительно содержащая пероксид водорода.
3. Композиция по п.2, в которой концентрация пероксида водорода составляет от примерно 1 до примерно 3,0% мас./об.
4. Композиция по п.1, дополнительно содержащая Ε^ΤЛ.
5. Композиция по п.4, в которой указанная Ε^ΤЛ включает динатрий-Ε^ΤЛ.
6. Композиция по п.1, содержащая гидрогель, образованный растворением гидрофильного полимера в композиции серебра в воде.
7. Композиция по п.6, приготовленная в виде аморфного геля.
8. Композиция по п.6, приготовленная в виде твердого гелевого листа.
9. Композиция по п.8, в котором гидрофильный полимер выбран из группы, состоящей из желатина, углеводных полимеров и сополимеров акриловой кислоты.
10. Композиция по п.9, в которой углеводный полимер содержит по меньшей мере один полимер, выбранный из группы, состоящей из производных целлюлозы, альгината, каррагенана и растительных камедей.
11. Способ лечения заболевания из группы, состоящей из малярии, грибковых инфекций кожи, бактериальных инфекций кожи, вагинальных инфекций, инфекций мочевыводящих путей, тонзиллита, воспалительного заболевания органов таза, фарингита, гонореи, конъюнктивита, отита, инфекций дыхательных путей и назальных инфекций, включающий в себя стадию введения человеку, страдающему заболеванием, композиции по п.1.