EA004873B1 - Способ определения присутствия антигена папилломатозного пальцевидного дерматита в образце сыворотки жвачного животного - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к применению Serpens spp. бактерии или бактерина в композициях, таких как вакцины, и к способам для обнаружения, предупреждения и/или лечения папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных. Настоящее изобретение также обеспечивает биологически чистый штамм HBL-112 и биологически чистый штамм HBL-112 Serpens spp. бактерина.

Description

Настоящая заявка является выделенной из заявки 199800243-И8/28, с приоритетом от 01.08.96 по дате подачи заявки 60/022915.

Настоящее изобретение относится к области обнаружения, для последующего эффективного предупреждения и лечения, папилломатозного пальцевидного дерматита у жвачных животных с использованием новых штаммов бактерии 8етреи8 §рр., пригодных для указанного применения.

Папилломатозный пальцевидный дерматит (ΡΌΌ) является хронической инфекцией и контагиозным заболеванием ступней и/или нижних участков конечностей рогатого скота. Заболевание известно под несколькими тривиальными и научными названиями, включая пальцевидный дерматит, межпальцевидный папилломатоз, пальцевидный папилломатоз, веррукозный дерматит, бородавчатые стопы, волосатые бородавчатые стопы, волосатые пяточные бородавки, малиноподобная пятка (таврЬепу Нее1). земляникоподобное заболевание ступни Щта^Ьепу ίοοΐ), земляникоподобное гниение ступни. Заболевание идентифицировано как одно из наиболее важных заболеваний, с которым сталкивается сегодня животноводческая индустрия. Заболевание вызывает хромоту, которая приводит к экономически значительному снижению производства молока, а также сопровождается ухудшением здоровья животных, потерей веса и плодовитости. Полагают, что агент, вызывающий заболевание, может быть перенесен на молочную ферму при поступлении нового поголовья, а также перенос указанного агента возможен при обработке машинкой для обрезки копыт, через доильные аппараты (ба1ту 1ек1ег8). грязную обувь ветеринаров и т.д. В текущей практике молочных ферм потери от заболевания, как было установлено, состоят из стоимости потерь молочной продукции, репродуктивных потерь и повышенной отбраковки и в среднем составляют по крайней мере 100 долларов в день.

На сегодняшний день только два метода лечения являются перспективными: применение точечно антибиотиков (очистка, выскабливание и перевязывание каждой стопы) или парентерально (проблематично по причинам откачки молока), а также применение бактериоцидных ванн для стоп (антибиотиков, формальдегида, йода и т.д.). Хотя многие повреждения могут хорошо отзываться на антибиотики или ванны для стоп, содержащие антибактерицидные соединения, но известно, что возможны рецидивы заболевания, а также привыкание к используемому антибиотику. Указанные способы лечения являются трудоемкими, зависят от добросовестности и квалификации исполнителя, дорогостоящими (стоимость антибиотиков для 30 дней ванн для стоп составляет 2.500 долларов для стада в 400 голов), применение антибиотиков ограничено правительственными постановле ниями, поскольку оно не обеспечивает безопасность окружающей среды или продолжительной защиты от рецидива.

Ввиду значительного экономического ущерба, вызываемого ΡΌΌ, в значительной степени является перспективным эффективный путь обнаружения и лечения инфицированных заболеванием животных, а также их защита против дальнейшей инфекции.

Настоящее изобретение характеризует способ определения присутствия ΡΌΌ антигена в образце сыворотки жвачного животного, включающий контактирование образца с антителом, взаимодействующим с бактериями 8егрепз зрр., или соответствующим бактерином в условиях, способствующих связыванию ΡΌΌ антигена с антителом с образованием комплекса антиген/антитело, и выявление антигена в указанном образце на основании обнаружения комплекса антиген/антитело.

Настоящее изобретение основано на использовании штамма НВЬ-112 бактерий 8етреп§ зрр. и бактерина штамма НВЬ-112 8етреп§ §рр. Штамм НВЬ-112 8етреп§ §рр. помещен под Νο.1 и бактерин НВЬ-112 8етреп§ §рр. помещен под Νο.2 в Нуще1а Вю1ощса1 ЬаЬотаФпез а! Ροδί ОГПсе Вох 8300, ^ооб1аиб, СайГогша, 9577. Штамм бактерий НВЬ-112 8етреп§ §рр. имеет биологические и морфологические характеристики, определенные ниже.

Штамм бактерий НВЬ-112 был помещен в Американскую коллекцию типовых культур 25 июля 1997 г. под названием «штамм НВЬ112/1» и ему был присвоен номер АТСС-202005. Штаммы НВЬ-112 и НВЬ-112/1 являются идентичными. В тексте и примерах, которые следуют далее, будет использоваться только обозначение «штамм НВЬ-112» для идентификации бактерий 8етреп§ §рр., используемых в изобретении.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими рисунками.

Фиг. 1 представляет график, показывающий типичную стандартную кривую положительного образца бычьей сыворотки, титрованной в анализе ЕЫ8А с захватом.

Фиг. 2 представляет график, показывающий стандартную кривую конкуренции ЕЬ18А с использованием постоянного антитела и титрованного антигена.

Фиг. 3 представляет микрофотографию, иллюстрирующую индуцибельную спиральную форму 8егреп5 врр. штамма НЬВ-112.

Фиг. 4 представляет микрофотографию той же чистой культуры штамма НЬВ-112 8етреп§ зрр, что и на фиг. 3, показывающую длинные стержни, короткие стержни и сферические тела типичных бактерий 8етреп§ §рр.

Фиг. 5 представляет микрофотографию той же чистой культуры штамма НЬВ-112 8етреп§ зрр, что и на фиг.4, показывающую жгутик бактерий штамма НЬВ-112 8етреп§ §рр.

Настоящее изобретение обеспечивает способ диагностики ΡΌΌ путем обнаружения Бегрепз антигенов с использованием обычных методов иммуноанализа.

Способ обнаружения антигена ΡΌΌ или бактерий Бегрепз посредством определения наличия антител к Бегрепз в образце сыворотки млекопитающего может включать инкубирование образца с раствором, содержащим по крайней мере один связывающий агент, способный связывать антитела к Бегрепз, и прямое или непрямое определение наличия связывания агентов в образце.

Сыворотка от клинически пораженных животных или подвергнутых воздействию, но не вакцинированных животных, взаимодействует с антигеном Бегрепз, если она содержит антитела к бактериям, или с антителом к Бегрепз, если она содержит антигены к бактериям. Связывание антител может быть измерено. Поэтому антиген Бегрепз может быть использован в диагностическом тесте на скринирование животных, не подвергнутых вакцинации. Аналогично, такой диагностический тест может быть также использован для оценки иммунного статуса животного, подвергнутого вакцинации, по отношению к антигену Бегрепз.

Напротив, антитела, которые образовались в организме животного, подвергнутого вакцинации бактериями Бегрепз, и были отобраны у этого животного, могут быть использованы для обнаружения бактерий Бегрепз.

Способ определения присутствия ΡΌΌ антигена в образце ткани жвачного животного включает введение бактерий Бегрепз зрр., или бактерина Бегрепз зрр., и/или иммунологически активной их части, и/или эпитопа антигена, перекрестно-реактивного с Бегрепз зрр., в организме жвачного животного, сбор образующихся антител или сбор клеток продуцирующих антитела и впоследствии сбор антител из этих клеток, связывание антител со связывающими агентами и прямое или непрямое определение продуктов реакции связывания.

Антигены Бегрепз или антитела к Бегрепз или их иммунологически активные фракции могут быть использованы в способе, разработанном для концентрирования или очистки связывающего агента.

Настоящее изобретение использует образцы сыворотки и антиген Бегрепз в качестве соответствующего связывающего агента, однако, может быть использована специфическая реак ция связывания для исследования других образцов, таких как тканевые срезы, клеточные мазки. Образцы Бегрепз регзе или их фракции также могут быть изучены с использованием заявленного метода.

Связывающий агент может включать либо один, либо большее количество обнаруживаемых маркеров, таких как радиоизотоп, металл или флуоресцирующий хромофор, или он может быть обнаружен не непосредственно, а через использование сопряженного фермента с обнаруживаемым субстратом.

В том случае, когда ни первые связывающие агенты не содержат маркер, ни другие средства не эффективны для прямого обнаружения, могут быть приготовлены вторые связывающие агенты для последующего обнаружения либо с использованием антигенов Бегрепз и/или антител к Бегрепз. Также могут быть использованы связывающие агенты, которые не имеют отношения к Бегрепз (такие как авидин-биотин), но которые могут быть использованы непосредственно или опосредованно для обнаружения первых связывающих агентов.

Последующее обнаружение и количественная оценка вышеуказанных маркеров и связывающих агентов могут быть осуществлены обычным способом соответствующей методологии.

Обнаружение антигенов Бегрепз в образце может быть осуществлено с помощью прямого или опосредованного измерения физических величин, характерных для Бегрепз. Такие измерения могут включать обнаружение и измерение соединений или смесей соединений, включающих липиды, белки или нуклеиновые кислоты, например, методом ДНК амплификации или хроматографическим разделением, в частности газовой или жидкостной хроматографией.

Claims (1)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   Способ определения антигена папилломатозного пальцевидного дерматита (ΡΌΌ) в образце сыворотки жвачного животного, включающий обеспечение контактирования указанного образца с антителом, взаимодействующим с бактериями Бегрепз зрр. в условиях, способствующих связыванию ΡΌΌ антигена с антителом с образованием комплекса антиген/антитело, и выявление антигена в указанном образце на основании обнаружения комплекса антиген/антитело.