DK2761275T3 - Fremgangsmåder til farvning og sortering af sperma - Google Patents
Fremgangsmåder til farvning og sortering af sperma Download PDFInfo
- Publication number
- DK2761275T3 DK2761275T3 DK12775394.5T DK12775394T DK2761275T3 DK 2761275 T3 DK2761275 T3 DK 2761275T3 DK 12775394 T DK12775394 T DK 12775394T DK 2761275 T3 DK2761275 T3 DK 2761275T3
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- dye
- sperm
- dead
- red
- staining
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0608—Germ cells
- C12N5/061—Sperm cells, spermatogonia
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6432—Quenching
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6439—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks
- G01N2021/6441—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes" with indicators, stains, dyes, tags, labels, marks with two or more labels
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Claims (25)
1. Fremgangsmåde til kønssortering af sperma i en eller flere delpopulationer, som omfatter trinene: a. opnåelse af en population af sperma, der har både X-kromosombærende sperma og Y-kromosombærende sperma; b. farvning af mindst en del af spermapopulationen med et DNA-selektivt fluorescerende farvestof, der fluorescerer, når det exciteres; c. farvning af delen af spermapopulationen med et dødt slukkende farvestof til selektiv slukning af fluorescens, der udsendes af det DNA-selektive fluorescerende farvestof i membransvækket sperma; d. farvning af delen af spermapopulationen med et spaltningsforøgende farvestof, hvor det spaltningsforøgende farvestof er et yderligere farvestof, som et andet farvestof end det døde slukkende farvestof; og e. sortering af det farvede sperma i en eller flere kønssorterede delpopulationer af levedygtigt sperma.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor det døde slukkende farvestof er impedanstilpasset til det DNA-selektive fluorescerende farvestof.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor det døde slukkende farvestof er et gult, orange eller orange-rødt farvestof.
4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det døde slukkende farvestof er valgt blandt gult fødevarefarvestof nr. 6, gult fødevarefarvestof nr. 5 og kombinationer deraf.
5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det døde slukkende farvestof omfatter gult fødevarefarvestof nr. 6 i en koncentration på mellem 12,5 μΜ og 250 μΜ, eller hvor det døde slukkende farvestof omfatter gult fødevarefarvestof nr. 6 i en koncentration på mellem 25 μΜ og 125 μΜ.
6. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det DNA-selektive fluorescerende farvestof, når det exciteres ved hjælp af elektromagnetisk stråling, fluorescerer differentielt i X-kromosombærende sperma og i Y-kromosombærende sperma, og hvor det døde slukkende farvestof gennemtrænger differentielt membransvækket sperma, således at ikke-slukket sperma er beriget med hensyn til spermalevedygtighed sammenlignet med spermapopulationen.
7. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det DNA-selektive fluorescerende farvestof er valgt fra gruppen, der består af: UV-exciterbare farvestoffer, synligt lys-exciterbare farvestoffer, fluorescerende polyamider, fluorescerende nukleotidsekvenser, kønsspecifikke antistoffer og kombinationer deraf.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 7, hvor det DNA-selektive fluorescerende farvestof omfatter Hoechst 33342.
9. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor trinet farvning af sperma med et DNA-selektivt farvestof yderligere omfatter trinet fortynding af spermapopulationen med en første farvningsbuffer, der indbefatter det DNA-selektive fluorescerende farvestof, i en inkubationstid på mellem ca. 20 minutter og ca. 1,5 time.
10. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor trinet farvning af sperma med et DNA-selektivt farvestof yderligere omfatter trinet fortynding af spermapopulationen med en første farvningsbuffer, der indbefatter det DNA-selektive fluorescerende farvestof, i en inkubationstid på mellem ca. 30 minutter og ca. 75 minutter.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 9 eller krav 10, hvor trinet farvning af delen af spermapopulationen med et slukkende farvestof yderligere omfatter trinet fortynding af spermapopulationen med en anden farvningsbuffer efter inkubationstiden, hvor den anden farvningsbuffer indbefatter det døde slukkende farvestof, og den første farvningsbuffer indbefatter det spaltningsforøgende farvestof.
12. Fremgangsmåde ifølge krav 9 eller krav 10, hvor trinet farvning af delen af spermapopulationen med et slukkende farvestof yderligere omfatter trinet fortynding af spermapopulationen med en anden farvningsbuffer, der indbefatter det døde slukkende farvestof og det spaltningsforøgende farvestof efter inkubationstiden.
13. Fremgangsmåde ifølge krav 9 eller krav 10, hvor det døde slukkende farvestof og det spaltningsforøgende farvestof er indeholdt i den første farvningsbuffer.
14. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det spaltningsforøgende farvestof yderligere omfatter et farvestof, der har en lokal maksimal absorptionsbølgelængde på mere end ca. 520 nm.
15. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor den lokale maksimale absorptionsbølgelængde for det spaltningsforøgende farvestof er på mellem ca. 520 nm og ca. 600 nm.
16. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det spaltningsforøgende farvestof omfatter et rødt farvestof.
17. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det spaltningsforøgende farvestof omfatter et farvestof valgt fra gruppen, der består af: phenolrødt, rødt fødevarefarvestof nr. 4, rødt fødevarefarvestof nr. 3, rødt fødevarefarvestof nr. 2 og kombinationer deraf.
18. Fremgangsmåde ifølge krav 17, hvor det spaltningsforøgende farvestof er phenolrødt tilsat i en koncentration på mellem ca. 0,1 μΜ og ca. 1200 μΜ, phenolrødt tilsat i en koncentration på mellem ca. 5 μΜ og ca. 375 μΜ, rødt fødevarefarvestof nr. 4 tilsat i en koncentration på mellem ca. 0,1 μΜ og ca. 1200 μΜ, rødt fødevarefarvestof nr. 4 tilsat i en koncentration på mellem ca. 5 μΜ og ca. 375 μΜ eller rødt fødevarefarvestof nr. 4 tilsat i en koncentration på mellem ca. 15 μΜ og ca. 125 μΜ.
19. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor det døde slukkende farvestof og det spaltningsforøgende farvestof tilsættes i en enkelt farvningsbehandling.
20. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor det døde slukkende farvestof er gult fødevarefarvestof nr. 6, og det spaltningsforøgende farvestof er rødt fødevarefarvestof nr. 4.
21. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvor den lokale maksimale absorptionsbølgelængde for det døde slukkende farvestof er mellem ca. 420 nm og ca. 500 nm, og hvor den lokale maksimale absorptionsbølgelængde for det spaltningsforøgende farvestof er mellem ca. 520 nm og ca. 600 nm.
22. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af ovennævnte krav, hvor sorteringstrinet yderligere omfatter trinene: a. etablering af en væskestrøm; b. indførelse af det farvede sperma i væskestrømmen; c. excitering af det DNA-selektive fluorescerende farvestof, der er forbundet med DNA'et i det farvede sperma; d. detektion af fluorescensemission, der frembringes af det farvede sperma, når det exciteres; e. differentiering af slukkede og ikke-slukkede spermadelpopulationer i det farvede sperma; f. differentiering af X-kromosombærende sperma og Y-kromosombærende sperma i den ikke-slukkede spermadelpopulation på baggrund af den detekterede fluorescens i det ikke-slukkede sperma; og g. selektion af sperma til frembringelse af mindst én kønssorteret delpopulation af levedygtigt sperma.
23. Fremgangsmåde ifølge krav 22, hvor sorteringstrinet udføres med et flowcytometer valgt blandt et stråle-i-luft-flowcytometer og et lukket kammer-flowcytometer.
24. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 21, hvor sorteringstrinet udføres på en mikrofluidchip.
25. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 22 til 23, hvor trinet excitering af DNA-selektivt fluorescerende farvestof, der er forbundet med DNA'et på det farvede sperma, yderligere omfatter undersøgelse af det farvede sperma med en laser, der opererer ved en UV-bølgelængde.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161541451P | 2011-09-30 | 2011-09-30 | |
| US201161541438P | 2011-09-30 | 2011-09-30 | |
| PCT/US2012/058008 WO2013049631A1 (en) | 2011-09-30 | 2012-09-28 | Sperm staining and sorting methods |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK2761275T3 true DK2761275T3 (da) | 2017-09-25 |
Family
ID=47046868
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK12775394.5T DK2761275T3 (da) | 2011-09-30 | 2012-09-28 | Fremgangsmåder til farvning og sortering af sperma |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9581587B2 (da) |
| EP (1) | EP2761275B1 (da) |
| DK (1) | DK2761275T3 (da) |
| HK (1) | HK1200912A1 (da) |
| WO (1) | WO2013049631A1 (da) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2013049631A1 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | Inguran, Llc | Sperm staining and sorting methods |
| US10620213B2 (en) | 2012-10-05 | 2020-04-14 | Inguran, Llc | High pressure sperm sorting and flow cytometer methods |
| CN103525760B (zh) * | 2013-09-29 | 2016-09-21 | 大连金弘基种畜有限公司 | 性控精液的分离方法 |
| WO2016081864A1 (en) * | 2014-11-20 | 2016-05-26 | Inguran, Llc | Low sugar sperm media and compositions |
| WO2016118557A1 (en) * | 2015-01-20 | 2016-07-28 | President And Fellows Of Harvard College | Assessing metabolic condition of sperm |
| EP3570853B1 (en) * | 2017-01-20 | 2024-07-24 | Inguran, LLC | Sperm processing method, apparatus and related media compositions |
| WO2019199852A1 (en) | 2018-04-09 | 2019-10-17 | Inguran, Llc | Improved sperm nuclei and methods of their manufacture and use |
| CN109738412B (zh) * | 2019-03-05 | 2021-07-13 | 贵州大学 | 一种饮用水中铝、铁、铬、汞、铕、铥和镱离子的检测方法 |
| CN117965432B (zh) * | 2024-03-29 | 2024-06-14 | 内蒙古大学 | 一种通过nad+提高牛精子分选后活力的方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US139497A (en) | 1873-06-03 | Improvement in washing-machines | ||
| US4559309A (en) | 1982-09-01 | 1985-12-17 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Flow cytometry-fluorescence measurements for characterizing sperm |
| JP2552582B2 (ja) | 1989-05-10 | 1996-11-13 | アメリカ合衆国 | 子の性の前選択の方法 |
| US5895922A (en) | 1996-03-19 | 1999-04-20 | Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The Minister Of National Defence | Fluorescent biological particle detection system |
| US6149867A (en) | 1997-12-31 | 2000-11-21 | Xy, Inc. | Sheath fluids and collection systems for sex-specific cytometer sorting of sperm |
| US7070917B1 (en) * | 1999-03-05 | 2006-07-04 | Preben Christensen | Determination of sperm concentration and viability for artificial insemination |
| US7208265B1 (en) * | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Xy, Inc. | Method of cryopreserving selected sperm cells |
| US7019129B1 (en) | 2000-05-09 | 2006-03-28 | Biosearch Technologies, Inc. | Dark quenchers for donor-acceptor energy transfer |
| AU1980202A (en) | 2000-11-22 | 2002-06-03 | Pharmacia Corporation | Methods and apparatus for producing gender enriched sperm |
| US20060067916A1 (en) | 2002-07-22 | 2006-03-30 | Xy, Inc. | Sperm cell process system |
| JP2006525019A (ja) | 2003-03-28 | 2006-11-09 | モンサント テクノロジー エルエルシー | 精子の染色方法 |
| EP2305172B1 (en) | 2003-03-28 | 2016-05-11 | Inguran, LLC | Apparatus and methods for providing sex-sorted animal sperm |
| CN101238369B (zh) | 2004-03-29 | 2012-07-04 | 英格朗公司 | 调节细胞内和/或细胞外氧化/还原反应的组合物在精子染色或分选方法中的用途 |
| DE602005010515D1 (de) | 2004-08-06 | 2008-12-04 | Fuji Electric Holdings | Nachweisverfahren für lebenfähige Zellen |
| BRPI0814343A2 (pt) * | 2007-07-23 | 2017-10-03 | Androgenix Ltd | Materiais e métodos para a seleção da sexagem do esperma |
| GB0910826D0 (en) * | 2009-06-23 | 2009-08-05 | Ovasort Ltd | Identification of sex-linked proteins |
| CA2778245A1 (en) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Inguran, LLC. | Methods and systems for reducing dna fragmentation in a population of sperm cells |
| CN102812123A (zh) | 2010-04-01 | 2012-12-05 | 英格朗公司 | 减少经处理的精子样品中的dna断裂的方法和系统 |
| WO2013049631A1 (en) | 2011-09-30 | 2013-04-04 | Inguran, Llc | Sperm staining and sorting methods |
| EP3492603B1 (en) | 2012-10-05 | 2022-07-20 | Inguran, LLC | Methods of processing sperm for sex sorting |
| US10620213B2 (en) | 2012-10-05 | 2020-04-14 | Inguran, Llc | High pressure sperm sorting and flow cytometer methods |
-
2012
- 2012-09-28 WO PCT/US2012/058008 patent/WO2013049631A1/en active Application Filing
- 2012-09-28 EP EP12775394.5A patent/EP2761275B1/en active Active
- 2012-09-28 US US14/348,194 patent/US9581587B2/en active Active
- 2012-09-28 DK DK12775394.5T patent/DK2761275T3/da active
- 2012-09-28 US US13/631,249 patent/US9140688B2/en active Active
-
2015
- 2015-02-05 HK HK15101291.7A patent/HK1200912A1/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20130084558A1 (en) | 2013-04-04 |
| US9581587B2 (en) | 2017-02-28 |
| US20140234833A1 (en) | 2014-08-21 |
| US9140688B2 (en) | 2015-09-22 |
| HK1200912A1 (en) | 2015-08-14 |
| EP2761275B1 (en) | 2017-06-21 |
| WO2013049631A1 (en) | 2013-04-04 |
| EP2761275A1 (en) | 2014-08-06 |
| US20150072340A2 (en) | 2015-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2761275T3 (da) | Fremgangsmåder til farvning og sortering af sperma | |
| Ugur et al. | Advances in cryopreservation of bull sperm | |
| EP3492603B1 (en) | Methods of processing sperm for sex sorting | |
| EP2705136B1 (en) | Nucleated red blood cell analysis method and automated hematology analyzer | |
| JP2006525019A (ja) | 精子の染色方法 | |
| CA2555411A1 (en) | A method and apparatus for orienting spherical cells | |
| US20130011825A1 (en) | Methods and systems for reducing dna fragmentation in a processed sperm sample | |
| US20180128731A1 (en) | White Blood Cell Analysis System and Method | |
| EP3570853B1 (en) | Sperm processing method, apparatus and related media compositions | |
| US20110236923A1 (en) | Method for staining and sorting of a small volume of sperm | |
| US20120308998A1 (en) | Methods and systems for reducing dna fragmentation in a population of sperm cells | |
| US20160010057A1 (en) | Sex sorted sperm demonstrating a dose response and methods of producing sex sorted sperm demonstrating a dose response | |
| Pena et al. | Advances in flow cytometry in basic and applied equine andrology | |
| Gadea | Sperm under the microscope | |
| Uğur et al. | Advances in cryopreservation of bull sperm | |
| Peña Vega et al. | Advances in flow cytometry in basic and applied equine andrology | |
| EP2556146A2 (en) | Methods and systems for reducing dna fragmentation in a processed sperm sample | |
| MXPA06008773A (es) | Metodo y aparato para orientar cèlulas de forma no esfèrica |