DK176174B1 - Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden - Google Patents
Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden Download PDFInfo
- Publication number
- DK176174B1 DK176174B1 DK199701053A DK105397A DK176174B1 DK 176174 B1 DK176174 B1 DK 176174B1 DK 199701053 A DK199701053 A DK 199701053A DK 105397 A DK105397 A DK 105397A DK 176174 B1 DK176174 B1 DK 176174B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- pha
- signal mean
- flow cytometer
- standard
- diagram
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title abstract description 31
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract description 56
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 51
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 31
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 6
- 239000011325 microbead Substances 0.000 abstract 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 42
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 33
- 230000006870 function Effects 0.000 description 26
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 26
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 20
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 20
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 20
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 10
- 230000007257 malfunction Effects 0.000 description 9
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 6
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical group CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical group [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101100468275 Caenorhabditis elegans rep-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 101100238610 Mus musculus Msh3 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- -1 rep 2 Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000013024 troubleshooting Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/10—Investigating individual particles
- G01N15/1012—Calibrating particle analysers; References therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Description
DK 176174 B1 i
Teknisk område
Den nærværende opfindelse angår en ny fremgangsmåde til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, som omfatter anordninger, der afgiver elektriske impulssignaler, der angiver tilstedeværelsen af partikler så som somatiske celler 5 eller bakterier. Opfindelsen er især beregnet på test af mælk, og mere specifikt bestemmelse af antallet af somatiske celler i mælk. Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse giver desuden mulighed for at inspicere og korrigere for en eventuel sammenklumpning af partikler i en standard prøve, der anvendes til at kontrollere funktionen af flowcytometeret.
10
Den kendte teknik
Flowcytometre er instrumenter, der anvendes til analyse af partikler, der er suspenderet i en væske, fx biologiske celler i legemsvæsker, si som somatiske celler i mælk. I korte træk omfatter et flowcytometer et væskeflowsystem og et 15 optisk system, der krydser hinanden i en flowkuvette, samt et elektronisk system, der detekterer fluorescens eller spredt lys, der stammer fra partikler, der passerer gennem kuvetten. Væskeprøven strømmer fortrinsvis i en enkelt tynd streng inde i kuvetten for at tilstedeværende partikler kan tælles enkeltvis. I en foretrukket udførelsesform er den tynde væskestreng desuden omgivet af en væskekappe.
20 Takket være væskekappen vil tilfældige urenheder, der er tilstede i væsken eller fluidet, og som er større end de partikler eller celler, som skal tælles, og dermed større end fluidumprøvestrengen, ikke forårsage tilstopning. Det kunne de have gjort, hvis de strømmede i en væskekanal, der var lige så snæver som den tynde inderstreng.
25
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er specielt udviklet til flowcytometre, der anvendes til bestemmelse af antallet af celler i en prøve af mælk eller et mælkeprodukt, og især til fluorescens-flowcytometre, hvori alle celler eller partikler farves med et fluorescerende farvestof, som fluorescerer, når det 30 udsættes for belysning. Et fluorescens-signal af passende størrelse, dvs. over støj, anses for at markere passagen af en partikel eller celle. I den foretrukne udførelsesform af flowcytometeret er det i øjeblikket foretrukne middel eller farvestof etidiumbromid. Den foretrukne udførelsesform af den nærværende form for flowcytometer har kun een kanal, dvs. det er optimeret til at detektere blot 2 DK 176174 B1 een form for fluorescens eller spredning. Flowcytometre kan imidlertid have flere kanaler, der hver især er beregnet til en bestemt farve.
Det somatiske celletal betragtes som et mil for mælkekvaliteten (mælk af høj 5 kvalitet har et lavt celletal). Følgelig kan celletallet anvendes af mejeriet, når man fastsætter den pris som landmanden skal have for den leverede mælk. For at sikre korrekt betaling af landmanden - og for at afsløre evt. mælk af dårlig kvalitet, er en korrekt funktion af flowcytometeret afgørende.
10 For at opnå nøjagtige og reproducerbare resultater skal flowcytometeret rettes op og kalibreres. Lysstrålen fra lyskilden skal ramme partikelstrømmen, og detektoroptikken skal fokusere på partikelstrømmen, når de belyste partikler fluorescerer. Også forstærkning og karakteristik af de elektroniske kredsløb, som behandler de detekterede signaler og den anvendte matematik, skal frembringe et 15 tal, der angiver det sande antal partikler i strømmen med en tilstrækkelig nøjagtighed og reproducerbarhed.
Mulige årsager til ringe funktion
Enhver defekt eller fejljustering (eller tilstopning) i flowsystemet og/eller defekt 20 eller skævhed (eller mangelfuld opretning) af det optiske system kan bevirke at tællingen enten falder eller forøges i forhold til den sande værdi.
Kendt teknik US 5.093.234 beskriver en fremgangsmåde til opretning, kompensation og 25 kalibrering af et flowcytometer til prøveanalyse og et dertil hørende mikrokugle-standardkit. Fremgangsmåden kan anvendes til multikanalflowcytometre. Fremgangsmåden omfatter at udføre testmålinger på standardkit, - og justere fluorescenskanal PMT-spændinger og - forstærkning for at placere det resulterende prikdiagram (dotplot) eller histogram nær ved begyndelsespunktet 30 på aksen for hver af fluorescenskanalerne, - og indstille grænseniveauer i hver kanal for at angive fluorescensintensiteten. Standardkittet omfatter en inaktiv (blank) og/eller en selvfluorescerende mikrokugle-population og mindst to serier af kalibrerede mikrokuglepopulationer, der er mærket med fluorescerende farvesstof (fer).
35 3 DK 176174 B1 US 5,084,394 beskriver en lignende fremgangsmåde til korrigerende kalibrering af et flowcytometer, som anvender en blanding af fluorescerende mikrokugler og celler. Disse fremgangsmåder tilvejebringer en avanceret, sofistikeret og kvalitativ analyse af enkeltceller som fx lymfocytter i blod.
5
Instrumenter og fremgangsmåder i disse patenter anvender således almindeligvis flere oplysninger end den nærværende opfindelse, idet der måles pi flere fdrskéllige kanaler med forskellige former for fluorescens.
10 US 5,380,663 anviser et system, der giver mulighed for at analysere et flowcytometers funktionsdygtighed ved måling på en forudkendt blanding af mikrokugler. Systemet bygger bl.a. på anvendelsen af et standardkit indeholdende flere forskellige typer af mikrokugler, både med og uden fluorescens.
15 Sædvanligvis er nogle af de problemer, der opstår i forbindelse med kalibrering af et analyseinstrument, at der er mange faktorer, der påvirker funktionen af apparatet og som kan være ude af justering. Det kan fx være optikken, der er blevet forskubbet, lampen der trænger til udskiftning, forstærkningen i 20 elektronikken, flowhastigheden og evt. forstoppelse/tilsmudsning af delene. Det er derfor langt fra sikkert, at man får rettet på den relevante parameter, hvis man blot forskyder et måleresultat, så det stemmer med en kalibreringsprøve.
Fremgangsmåden ifølge nærværende opfindelse er baseret på brugen af en 25 standard- og/eller en kalibreringsvæske eller -fluidum, der kun indeholder en type partikler eller mikrokugler, som er ufarvede, indtil de indgår i processen ifølge opfindelsen. På denne vis er standardvæskeprøverne så simple som muligt. Standardprøverne er meget stabile og egnede til lang tids opbevaring, dvs. et stort antal standardprøver kan opbevares af brugeren i måneder eller år med 30 henblik på fremtidig brug såsom en regelmæssig funktionskontrol hver morgen eller på ethvert andet tidspunkt.
Opfindelsen gør det muligt at foretage en nem og simpel sikring af, at et bestemt apparat arbejder korrekt og optimalt. De ovennævnte usikkerheder i forbindelse 35 med kalibrering af et instrument afhjælpes vha. de informationer, der kan udledes 4 DK 176174 B1 af såkaldte PHA-diagrammer, der anvendes til en "funktionskontrol", dvs. en overvågning af funktionen af et enkeltkanals flowcytometer, i særdeleshed til måling af somatiske celler i mælk.
5 Instrumentet er specielt indrettet til hurtig prøvehåndtering og -tælling, hvorved det tillades at tælle omkring 500 prøver pr. time, dvs. en kvantitativ analyse frem for en kvalitativ analyse som fremgår af den kendte teknik. Flowcytometeret ifølge opfindelsen tæller dermed cellerne baseret på måling af blot en parameter såsom grøn eller rød fluorescens.
10
Den nærværende fremgangsmåde angår således en "funktionskontrol", dvs. en overvågning af funktionen, af et enkeltkanals flowcytometer til måling af somatiske celler i mælk, og fremgangsmåden er baseret på brugen af "en standard- og/eller en kalibreringsvæske eller - fluidum, der kun indeholder en 15 type partikler eller mikrokugler, som er ufarvede, indtil de indgår i processen ifølge den nærværende opfindelse. Funktionskontrollen baseres på sammenligning af et forudbestemt PHA-diagram med et PHA-diagram for standard- og/eller kalibreringsvæsken bestemt med cytometeret.
20 Udover en grundig kontrol af flowcytometerets funktion ville standardvæsken eller - fluidet også kunne anvendes til kalibrering af flowcytometeret.
Resume af opfindelsen
Den nærværende opfindelse tilvejebringer en fremgangsmåde til at kontrollere 25 funktionen af et flowcytometer, hvori antallet af partikler eller celler i et strømmende fluidum, så som mælk, tælles ved at registrere lysimpulser, som udsendes fra partiklerne, og tilvejebringe data, der repræsenterer et PHA-diagram (imPuls Højde Analyse) af de registrerede impulser, og hvor flowcytometerets funktion kontrolleres og/eller justeres ved måling på standardprøver af 30 forudbestemt kendt art, idet de registrerede måleresultater analyseres.
Fremgangsmåden ifølge opfindelse baserer sig på tilvejebringelse af et antal standardprøver, der kun indeholder en type i det væsentlige ensartede mikrokugler, tilvejebringelse af data, der repræsenterer et optimalt (ønsket) PHA-diagram (PHAO) for de impulser, der registreres når en standardprøve måles på et 35 reference-instrument, hvilke data gemmes i en hukommelse i selve instrumentet, DK 176174 B1 Ξ som skal kontrolleres, eller i en hukommelse i databehandlingsorganer forbundet med instrumentet eller i anordninger, hvorfra dataene kan importeres til instrumentet eller til dermed forbundne databehandlingsorganer.
Fremgangsmåden omfatter yderligere det 5 - at måle en standardprøve på det instrument, der skal kontrolleres, - at tilvejebringe data, der repræsenterer et PHA-diagram for de impulser, der registreres under målingen af standard prøven på det instrument, som skal kontrolleres, - at sammenligne de nævnte data, der repræsenterer det nye PHA-diagram 10 (PHAS) med de gemte data, der repræsenterer det optimale PHA-diagram (PHAO), og det - at analysere og/eller evaluere dataene for at kunne bestemme en eventuel dårlig eller fejlbehæftet funktion af instrumentet.
Med denne fremgangsmåde kan brugeren kontrollere instrumentet regelmæssigt 15 og blive direkte informeret om evt. forholdsregler, som bør tages.
Fortrinsvis beregnes mindst en af de følgende parametre: en partikeltælling, et antal tællinger på den samme prøve, en standardafvigelse s og/eller en variationskoefficient CV, baseret på mindst tre gentagne/på hinanden følgende 20 målinger på den samme prøve, og på omtrent samme tid, en signalmiddelværdi, en signalbredde, dvs. bredden af den klokkeformede kurve i PHA-diagrammet, idet de samme data tilvejebringes for standardprøven af standardvæsken målt på et referenceinstrument, dvs., de optimale værdier for disse data, - sammenligning af mindst en af de ovennævnte parametre for den aktuelle måling af 25 standardprøve med de tilsvarende optimale parametre for standardvæsken, idet man analyserer dataene for at bedømme om instrumentet fungerer i det væsentlige optimalt, (dvs. indenfor foretrukne grænser) eller ikke fungerer i det væsentlige optimalt (dvs. udenfor foretrukne grænser) og idet alle afvigelser fra optimal funktion registreres.
30
Fortrinsvis betragtes de registrerede afvigelser som symptomer, der fremvises for brugeren. Fortrinsvis omfatter databehandlingsudstyret organer til at evaluere de observerede symptomer, foreslå mulige mangler eller defekter (stille en diagnose) komme med anbefalinger til, hvorledes man afhjælper enhver dårlig eller 35 utilstrækkelig funktion og/eller hvilke forholdsregler, der bør tages. Fortrinsvis 6 DK 176174 B1 omfatter organerne til at evaluere symptomerne et bibliotek opbevaret i hukommelsesanordninger som databehandlingsorganerne kan få adgang til.
Fortrinsvis omfatter organerne til at kontrollere funktionen/evaluere symptomerne en liste, der viser de fortløbende resultater til brugeren på en monitor og/eller via 5 en udskrift. Fortrinsvis viser organerne til at kontrollere funktionen/evaluere l symptomerne detaljerede resultater og data af de seneste målinger på standardvæsken. Fortrinsvis viser organerne til at kontrollere funktionen/evaluere symptomerne et målt PHA - diagram, når brugeren anmoder om det. Fortrinsvis viser organerne til at kontrollere funktionen/evaluere symptomerne en liste over 10 mulige situationer, der omfatter definerede symptomer og fremkommer for hver situation med oplysning om mulige årsager og passende aktioner for at afhjælpe defekten.
Fremvisningen af eventuelle symptomer og aktioner for at afhjælpe mangelfuld 15 funktion er fordelagtig ved, at brugeren selv vil være i stand til at justere instrumentet for at opnå optimal funktion. Derved kan man undgå at tilkalde en servicetekniker, og dermed kan tabet af kostbar måletid på grund af dårlig funktion undgås.
20 Kort beskrivelse af tegningerne
Fig. 1 viser et skematisk og forenklet diagram af et flowcytometer ifølge opfindelsen.
25 Fig. 2 et typisk PHA - diagram.
Fig. 3 viser et PHA - diagram ifølge opfindelsen, der for eksempel angiver, at forstærkningen kan være indstillet lidt for højt.
30 Fig. 4 viser et andet PHA - diagram ifølge opfindelsen, der for eksempel angiver, at strømningshastigheden af væskekappen kan være for høj.
Fig. 5 viser et diagram, der angiver variationen af tællinger sammenlignet med standardprøvetællingen.
35 7 DK 176174 B1
Fig. 6 viser et diagram over signalmiddelværdien sammenlignet med standardprøven.
Fig. 7 viser standardafvigelsen eller variationskoefficienten CV, sammenlignet med 5 den teoretiske CV.
Figur 8 viser en kumulativ middeltælling sammenlignet med teoretiske værdier.
Figur 9 viser et skærmprint med tre "vinduer" 1) en resultatliste, 2) ίο resultatdetaljer, og 3) standardprøve-data.
Figur 10 viser PHA-diagrammet for en specifik måling (nr. 58.2)
Figur 11 viser et skærmprint med PHA-diagrammet for en specifik måling (nr.
15 58.2)
Figur 12 viser en udskrift af et PHA-diagram i en første situation.
Figur 13 viser en udskrift af et PHA-diagram i en anden situation.
20
Figur 14 viser en udskrift af et PHA-diagram i en tredje situation.
Figur 15 viser et PHA-diagram, der indikerer en sammenklumpning af partikler.
25 Skærmprintene, der er vist i Figur 9 og 10 kan forekomme lidt utydelige og for tydeligheds skyld er alle relevante data vist i tabellerne 1, 2 og 3.
Detaljeret beskrivelse af en foretrukket udførelsesform Opfindelsen vil blive forklaret mere detaljeret i det følgende ikke begrænsende 30 eksempel på en foretrukket udførelsesform ifølge opfindelsen.
Flowcytometeret
En foretrukket udførelsesform af et flowcytometer er vist skematisk i figur 1. Flowcytometeret 10 ifølge opfindelsen omfatter et flowsystem 12 indrettet til at 35 opsuge en mælkeprøve fra en prøvekop 14. Flowsystemet er indrettet således, at 8 DK 176174 B1 prøven blandes med en fluorescerende farve. Flowsystemet indbefatter en transparent kuvette 16, hvorigennem en tynd streng af mælkeprøven passerer omgivet af en væskekappe. Et optisk system 18 indbefatter en lyskilde 20, en optik, der udsender en lysstråle, der passerer gennem den transparente kuvette 5 16 og rammer den tynde mælkeprøvestreng, yderligere optik, der opsamler eventuelt fluorescerende lys udsendt af de farvede celler i den mælkeprøve, der passerer gennem kuvetten 16, en fotodetektor 24, der detekterer det fluorescerende lys, dvs. omdanner det fluorescerende lys til elektroniske signaler, og elektronisk signal- og databehandlingsudstyr 26. Fortrinsvis indbefatter 10 databehandlingsudstyret en PC 28. Databehandlingsudstyret indbefatter en monitor 30 eller lignende visningsenhed.
Sættet (prøveflasker med standardvæske)
Brugeren af flowcytometeret modtager fra flowcytometerproducenten eller en 15 anden leverandør et såkaldt "sæt", hvilket er en portion standardprøver, dvs. et antal små beholdere fyldt med en standardvæske. Standardvæskens egenskaber er blevet omhyggeligt analyseret af leverandøren. De i øjeblikket foretrukne standardprøver består af 30 ml vand, tilsætningsstoffer og at antal plastkugler, der er ca. 6 pm store. Da plastkuglerne har en tendens til at lægge sig på bunden 20 af prøvekoppen, er det vigtigt at ryste disse prøver omhyggeligt for at opnå et godt resultat.
Det kunne også være en mulighed at anvende standardvæsken til kalibrering af flowcytometeret, men det er ikke det væsentlige i denne ansøgning.
25 Information om egenskaberne for "sættets" standardprøver leveres til brugeren fortrinsvis pi lagermedier, så som en diskette eller en CD-ROM, der også indeholder software til analyse af de detekterede signaler og tællinger, som opnås med flowcytometerinstrumentet. Brugeren importereV "sæt"-data fra disketten til databehandlingsudstyret 26-28, der er forbundet med flowcytometeret. Alternativt 30 kan standardkittet med "sættet" indeholde midler, så som en brugeridentifikation og/eller et kodeord, der giver adgang til lageranordninger, der indeholder informationen, fx information, der kan hentes via Internettet.
35 9 DK 176174 B1
Funktionskontrof og drift af flowcytometeret I almindelighed behandles og tælles standardprøverne i flowcytometeret på samme måde som de normale mælkeprøver. Regelmæssigt, fx hver anden time, indfører brugeren en omhyggeligt rystet standardprøve i flowcytometeret. Når 5 noget af standardvæsken er opsuget i flowcytometeret, blandes den med en fluorescerende farve, så som etidiumbromid. Flowsystemet 12 indbefatter passende blande- og tidsforsinkelses-anordninger til at sikre, at noget farve har hæftet på hver celle eller partikel, som skal tælles. De farvede celler eller partikler passerer fortrinsvis enkeltvis i en streng af prøvevæske omgivet af en 10 væskekappe. En lysstråle fra optikkens lyskilde 20 passerer tværs gennem partikelstrengen og aktiverer derved de farvede partikler til at fluorescere. Hvert i fluorescensglimt detekteres af en meget følsom fotodetektor 24, der er forbundet med signal- og databehandlingsudstyret 26-28, som udfører tællingen.
15 Tællingen og PHA-diagrammet
Partikeltællingen kan analyseres ved brug af det såkaldte PHA-diagram (PHA betyder imPuls Højde Analyse) Det er et diagram eller histogram, der viser antallet af impulser som funktion af signalstørrelsen (højden). Et typisk PHA diagram ses i figur 2. Det fremgår af kurveafsnittet 32, at der detekteres et stort 20 antal impulser i form af meget lave signaler. De repræsenterer normalt støj. Det klokkeformede afsnit 34 (i midten af diagrammet), der har et maksimum, angiver forekomsten af højere signaler, som fortolkes som værende forårsaget af de partikler, der skal tælles. Arealet af denne del er et mål for antallet af partikler. PHA-diagrammet er meget nyttigt til at vise støjen og gør det således muligt at 25 udskille støjen. I en fortrukken udførelsesform vil alle signaler, der er mindre end en justerbar værdi D, lig med eller tæt på minimummet M vist i fig. 2, blive anset for at være støj. Alle signaler, der er større end D betragtes som partikler og tælles følgelig med.
30 PHA diagnostik
Ifølge den foreliggende opfindelse er PHA-diagrammet (fig.2, 3, 4) yderst anvendeligt til at diagnosticere funktionen af instrumentet. Ifølge opfindelsen kan PHA-diagrammet (eller kurven), der fås for standardprøven, vises for brugeren på den tilsluttede skærm (eller visningsorgan) sammen med et andet PHA-diagram 35 (eller kurve), PHAO. Det andet diagram eller den anden kurve angiver det 10 DK 176174 B1 optimale (ønskede, bedst mulige) diagram for det målte "sæt" (denne information kommer på en diskette fra leverandøren). Hvis det nye PHA-diagram (PHAS=PHA af Standardprøve), der fås med standardprøven, dækker eller er identisk (eller næsten identisk) med det optimale diagram PHAO, fungerer flowcytometeret godt.
5 Enhver afvigelse kan anvendes til diagnostik som forklaret i det følgende.
Afvigelser, der overskrider foruddefinerede grænser, anvendes som symptomer, der angiver dårlig funktion af flowcytometeret. For at kunne vurdere forskellene udregnes en signalmiddelværdi (Gauss-middelværdi).
10 Bibliotek
Informationen, der leveres af producenten, omfatter et "bibliotek" til fejlfinding. I biblioteket forbindes et antal symptomer med passende råd eller anvisninger, der informerer brugeren om handlinger, som bør foretages for at afhjælpe eventuel dårlig funktion. I en foretrukket udførelsesform er biblioteket lagret på en 15 diskette, fortrinsvis en CD ROM eller lignende diskette med høj kapacitet. Et eksempel på den lagrede information er vist på siderne 11-17 som tabel 1.
Eksemplet ifølge tabel 1 viser en i øjeblikket foretrukket måde at vise symptomer og diagnostiske anbefalinger. 14 forskellige situationer eller såkaldte "versioner" er beskrevet i tabellen. Nr. 0.0, dvs. den første er det perfekte tilfælde, alle 20 værdier ligger inden for grænserne og tæt på det optimale. Alle de følgende 13 tilfælde repræsenterer indikationer for en eller anden form for dårlig justering.
Den første spalte til venstre viser de observerede symptomer, (i nogen tilfælde forekommer de samme symptomer i forskellige versioner a, b, c). Den højre spalte, indeholder de meddelelser, som brugeren får i den højre side af vinduet i 25 bunden af figur 10. Disse meddelelser indbefatter: a) yderligere detaljerede symptomer, b) visninger så som forslag til, hvad der kan være årsagen til den dårlige funktion, og c) hvad der bør gøres for at afhjælpe situationen.
Typiske symptomer, der antyder dårlig funktion er: lav signalmiddelværdi, for lav 30 signalmiddelværdi, alt for lav signalmiddelværdi, høj signalmiddelværdi, for høj signalmiddelværdi, for bred PHA, for lav PHA, skæv eller dobbelt PHA.
Typiske diagnoser kan være:
Elektronisk forstærkning for lav eller for høj; kræver justering af forstærkningen i de elektroniske signalbehandlingsorganer; 35 Blokering eller tilstopning i flowsystemet; 11 DK 176174 B1 Væskekappens strømningshastighed er for lav, for høj eller alt for høj; prøvens strømningshastighed bør justeres; ukorrekt blanding af prøve og farvestof; defekt lampe; 5 dårlig indstilling af lampe eller mikroskop; lampen eller mikroskopet skal indstilles eller rettes op.
Foretrukket udførelsesform I en foretrukket udførelsesform af en nærværende opfindelse udføres de følgende 10 aktioner /operationer: - Hver anden time opfordrer computeren brugeren det at indføre en standardprøve (fra et "sæt" leveret af leverandøren) - flowcytometeret måler standardprøven tre gange, dvs. får tre tællinger Ci, C2, c3, der hver repræsenterer det antal partikler, der passerer i en forudbestemt 15 måleperiode på nogle få sekunder, fx. 2 sekunder, (fortrinsvis en periode, der anvendes i den normale drift af instrumentet). Tællingen tildeles et løbende registreringsnummer fx nr. 58.1, 58.2, 58.3, 59.1 ... .
- Databehandlingsudstyret med tilhørende software beregner: _ - antallet af partikler Ci, c2, c3 20 - middelværdien af tællingerne, c =( Ci + c2 + c3 )/3, (tælling i figur 5) - signalstørrelsen - middelværdien af signalstørrelsen (i figur. 6) - standardafvigelsen beregnes ud fra de tre målinger: 25 s = ^((c, -c)2 +(c2 -c)2 +(c, -c)2)/2 - eller variationskoefficienten CV: 100% * s/c (CV er vist i fig. 7 sammenlignet med et teoretisk CV, som beregnes i henhold til Poisson's sampling - statistik.
- En akkumuleret middelværdi for alle tællinger, der er udført med instrumentet: 30 Σ c,, (kumulative tælling i fig. 8).
- De beregnede resultater sammenlignes med den information, der fulgte med "sættet" (fra leverandøren af "sættet") indeholdende øvre og nedre optimale driftsgrænser (henvisningstallene 51, 52, ... i figurerne 5-8) (fx middelværdi af signalstørrelse, tælling, CV), 12 DK 176174 B1 - og kommentarer til hver måling og middelværdi af resultater vises for brugeren fx som vist i resultatlisten i figur 9, for at henlede operatørens opmærksomhed på en eventuel dårlig funktion. For tydelighedens skyld er uddrag af resultatlisten vist i tabel 3.
5 - På anmodning vil databehandlingsudstyret (med tilhørende software) vise et PHA-diagram på den tilkoblede monitor 30 og dermed vise signalstørrelsen.
Hver tælling (50 i figur 6) sammenlignes med "sæt"-tællingen, som er et tælletal, der leveres sammen med sættet, og som repræsenterer det faktiske antal 10 partikler i det nærværende sæt. Følgelig bør den aktuelle tælling ideelt være lig med "sæt"-tællingen (53). "Sæt"-grænser (51, 52), der angiver tilladelig variation, leveres også sammen med sættet.
Figur 5 viser tællingen (50) sammenlignet med "sæt"-tællingen 53 for et antal 15 standardprøver 0 — 72. Den vandrette akse viser det registrerede prøvenr., og den lodrette akse angiver tællingen pr 1000 partikler. De tilladelige variationer er vist som øvre og nedre grænser 51, 52. I det nærværende tilfælde er sæt-tallet /1000 = 396 og grænserne er sat til 371 og 421. Den fede streg angiver de faktisk målte tællinger/1000. De ser ud til at ligge indenfor grænserne 51, 52.
20
Figur 6 viser en signalmiddelværdi 60 sammenlignet med et sæt-signal 63 og øvre og nedre grænser 61, 62. Som et eksempel på en mulig fejl eller defekt henvises til prøve nr. 48: Et markant fald i signal synes at optræde efter prøve nr. 48. Når man sammenligner med de detaljerede resultater fremgår det, at forstærkningen 25 på en eller anden måde er blevet nedsat fra 625 til 615.
Figur 7 viser som et eksempel en sekvens af beregnede CV/R (henvisningstal 70 i figur 7) sammenlignet med den teoretiske værdi: CV/R = 1 (72). En øvre grænse 71 angiver den tilladelige variation.
30
Figur 8 viser en kumulativ (samlet) tælling 80 sammenlignet med teoretiske værdier. Den akkumulerede middelværdi sammenlignes med krumme grænsekurver 81, 82 (som er p% konfidensgrænser), der afgrænser et gab, der bliver smallere efterhånden som prøveantallet vokser. En portion prøver (det 35 såkaldte sæt) har imidlertid et begrænset antal prøver, og et nyt sæt kan have et 13 DK 176174 B1 andet antal partikler per ml. For at undgå en forskydning af alle de forud definerede værdier, fx den teoretiske middelværdi (det såkaldte sæt-tal) og grænserne foretrækkes det, at den akkumulerede middelværdi 80 og grænserne 81, 82 normaliseres, dvs. divideres med sættallet, en "sæt"-middelværdi. Derved 5 muliggøres en kontinuerlig overvågning, også når "sættet" udskiftes.
Eksempel Når brugeren modtager en meddelelse eller bemærkning fx som vist i tabel I for registreringerne 19, 49, 51, 58 og 59, skal han snarest mulig studere de seneste 10 måleresultater. Softwaren er "Windows®"-baseret, og giver mulighed for flere vinduer. Figur 9 viser en liste over kontrolmålinger eller resultater af samme art vist i tabel 3. Den fremhævede prøve nr. 58 har faet en anmærkning. Brugeren beder derfor om at få vist resultatdetaljer for 58. Resultatdetaljer vises i tabelform (også vist i tabel 2 side 19) indeholdende seks rækker (omfattende de tre 15 målinger rep 1, rep 2, rep 3, en middelværdi, CV% (en teoretisk standardafvigelse, og sæt-middelværdien; og otte spalter (omfattende de værdier, der er fundet for tællingen, R, signalmiddelværdi 58, signal bredde (8), Z (en værdi, som kvantiserer diskrimineringsafstanden mellem støj og signaler, diskriminator , støjniveau, og anmærkninger. I et tredje vindue vises sæt-data.
20
Visningsmulighederne tillader visning af et målt PHA diagram og et teoretisk ønsket PHA-diagram (figur 10). En udskrift af de viste PHA-diagrammer er vist i Hg. 11. Som det ses af skærmprintet i fig. 10, kan brugeren udpege enhver registreret måling, fx nr., 58.2 som er gemt i dataopbevaringsanordningerne som 25 en sekvens af tal, omfattende ordinaterne for PHA—kurven for nr. 58.2. PHA-kurven vises sammen med den optimale PHA-kurve. Det ses tydeligt, at signalmiddelværdien er for lav ( se fig. 6). Den nederste del af skærmbilledet omfatter tre små vinduer, der støder op til hinanden: et vindue til venstre, hvori symptomet "Signalmiddelværdi er for lav" er fremhævet, et midtervindue, der 30 viser det symptomatiske billede af PHA-kurverne, og et vindue til højre, der viser detaljer og indikationer, omfattende anbefalinger for, hvorledes man afhjælper den dårlige funktion. Yderligere eksempler på symptomer og anbefalinger er vist i tabel 1 på siderne 11-17.
35 14 DK 176174 B1
Tabel 1: Forklaringer i "QCHECK" biblioteket pr 15 august 1997 5 BESKRIVELSER
Signalmiddel- Malt Signalmiddelværdi ligger inden for grænserne og tæt på værdi er "sæt" Signalmiddelværdien.
Korrekt (a) PHA er høj, smal og ligner sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen er korrekt (2) Væskekappens strømning er korrekt (3) Mikroskopindstillingen er korrekt (4) Lampen er korrekt (5) Ingen blokering i flowcellen bemærk: Hvis målt PHA er smal og placeret korrekt, er det uden betydning om målt PHA er lidt lavere eller lidt højere end sæt-PHA. (Ver. 0.0)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi ligger inden for grænserne men lavere værdi er lav (a) end Sæt-Signalmiddelværdien.
PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen er muligvis lidt for lav (2) Væskekappens strømning kan være for høj (3) Lampen skal måske rettes ind
Hvad bør gøres: Det er ikke nødvendigt at gøre noget med det samme. Hvis strømningen er OK (9,5-10,5 ml/minut): se da efter yderligere ændringer i de følgende dage.
Ved lejlighed forøg forstærkningen til korrekt indstilling (Målt Signalmiddelværdi tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ± 2) (Ver. 1.0)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi ligger uden for den lave grænse for værdi er for lav "Sæt"-Signalmiddelværdien.
15 DK 176174 B1 PHA er høj, smal og ligner Saet-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen er muligvis for lav ; kontroller forstærkningen i resultatlisten, har den ændret sig? (2) Væskekappens strømning kan være alt for høj; er væskekappens strømning forøget? (3) Lampen kan være defekt.
Hvad bør gøres: Find årsagen til problemet snarest mulig. Hvis forstærkningen er uændret og strømmningen er korrekt (9,5- 10,5 ml/min): Ret lampen ind efter maksimal signalmiddelværdi eller udskift lampen. Sæt endelig forstærkningen korrekt (Malt Signalmiddelværdi tæt på Sæt-Signalmiddelværdi ±2. (Ver. 2.0)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi er indenfor grænserne men højere end værdi er høj "Sæt"-Signalmiddelværdien.
(a) PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen kan være indstillet lidt for høj. Kontroller forstærkning i resultatlisten. Ændret? (2) Væskekappen strømmer muligvis for langsomt. Er væskekappens strømning reduceret? Kontroller.
Hvad bør gøres: Det er ikke nødvendigt at foretage noget straks. Når lejlighed gives: Hvis strømningen er OK (9,5-10,5 ml/minut), reduceres forstærkningen til korrekt indstilling, dvs.
Målt Signalmiddelværdi skal være tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ±2. (Ver. 3.)
Signalmiddel- Malt Signalmiddelværdi er udefor den høje grænse for Sætværd/ er for høj Signal-middelværdien.
PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA Indikationer: (1) Forstærkningen kan være indstillet lidt for høj. Kontroller forstærkning i resultatlisten. Ændret? (2) Væskekappen strømmer muligvis for langsomt. Er væskekappens strømning reduceret? Kontroller.
16 DK 176174 B1
Hvad bør gøres: Problemet bør løses ved først givne lejlighed.:
Hvis strømningen er OK (9,5-10,5 mllminut), reduceres forstærkningen til korrekt indstilling, dvs. Malt Signalmiddelværdi skal være tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ± 2. (Ver. 4.)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi er indenfor grænserne og tæt på Sæt- værdi er Signalmiddelværdien.
korrekt (b) PHA er høj, smal og ligner sæt-PHA.
Se også : Signalmiddelværdi er korrekt (a)
Dette er et eksempel på, at Målt PHA er lidt lavere end sæt-PHA. Variationer i PHA-højder — der er uden betydning for mælkemålinger — kan forårsages af mindre forskelle i justeringen af optik, lampe, og mikroskop. (Ver. 5.0)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi er indenfor grænserne men højere end værdi er høj Sæt-Signalmiddelværdien.
(b) PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen kan være indstillet lidt for høj. Kontroller forstærkning i resultatlisten. Ændret? (2) Væskekappen strømmer muligvis for langsomt. Er væskekappens strømning reduceret? Kontroller.
(3) Mikroskopet kan kræve en justering
Hvad bør gøres: Hvis væskestrømningen ikke er ok: Afhjælp problemet ved førstkommende lejlighed. Forøg strømningen til 9,5-10,5 ml/minut. Kontroller eller juster mikroskopet forsigtigt til maksimalt signalmiddelværdi. Indstil endelig forstærkningen korrekt, dvs. Målt Signalmiddelværdi skal være tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ±2. (Ver. 6.)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi kan ligge indenfor eller udenfor værdi er hoj, grænserne og være højere end Sæt-Signalmiddelværdien. PHA PHA er bred er lavere og bredere end Sæt-PHA.
Indikationer: 17 DK 176174 B1 (1) Væskekappen strømmer muligvis for langsomt. Er væskekappens strømning reduceret? Kontroller.
Hvad bør gøres: Genindstil væskestrømningen til 9,5-10,5 ml/minut ved førstkommende lejlighed. Indstil endelig forstærkningen korrekt, dvs. . Malt Signalmiddelværdi skal være tæt på sæt Signalmiddelværdien ± 2. (Ver. 7.)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi ligger indenfor grænserne, men er værdi er lav (b) lavere end Sæt Signalmiddelværdien.
PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen kan være indstillet lidt for lav. Kontroller forstærkning i resultatlisten. Ændret? (2) Væskekappen strømmer muligvis for hurtigt. Er væskekappens strømning forøget? Kontroller.
(3) Lampen kan være ude af justering (sidde skævt) (4) Mikroskopet kan kræve en justering
Hvad bør gøres: Hvis væskestrømningen ikke er ok: Afhjælp problemet ved førstkommende lejlighed. Reducer strømningen til 9,5-10,5 ml/minut. Kontroller eller juster mikroskopet forsigtigt til maksimalt signalmiddelværdi. Indstil endelig forstærkningen korrekt i, dvs. Målt Signalmiddelværdi skal være tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ± 2. (Ver. 8.)
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi ligger indenfor grænserne men er lavere værdi er lav (c) end Sæt Signalmiddelværdien.
PHA er høj, smal og ligner Sæt-PHA.
Indikationer: (5) Forstærkningen kan være indstillet lidt for lav. Kontroller forstærkning i resultatlisten. Ændret? (6) Væskekappen strømmer muligvis for hurtigt. Er væskekappens strømning forøget? Kontroller.
Hvad bør gøres: Hvis væskestrømningen ikke er ok: Afhjælp problemet ved førstkommende lejlighed. Reducer strømningen til 9,5-10,5 ml/minut. Indstil endelig forstærkningen korrekt, 18 DK 176174 B1 dvs. Malt Signalmiddelvaerdi skal være tæt på Saet-Signalmiddelværdien ± 2. (Ver. 9.) PHA lav, bred Malt Signalmiddelværdi kan ligge indenfor eller udenfor den lave grænse for Sæt-Signalmiddelværdien.
PHA er skæv, lavere og bredere end Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Mikroskopjusteringen er ikke OK.
Hvad bør gøres: Afhjælp problemet ved førstkommende lejlighed. Kontroller at forstærkningen er OK; Den skal ikke ændres. Kontroller at væskestrømningen er OK, 9,5-10,5 milminut. Genindstil mikroskopet forsigtigt til at få en smal og høj PHA og en maksimal Signalmiddelværdi. Indstil endelig forstærkningen korrekt dvs. Målt Signalmiddelværdi skal være tæt på Sæt-Signalmiddelværdien ± 2. (Ver. 12.) PHA skæv eller Målt Signalmiddelværdi kan ligge indenfor eller udenfor den lave dobbelt grænse for Sæt-Signalmiddelværdien.
PHA er skæv /dobbelt, lavere og bredere end Sæt-PHA.
Indikationer:
(1) Mikroskop justeringen er ikke OK
(2) Væskekappens strømning er ikke korrekt.
Hvad bør gøres: Afhjælp problem snarest muligt. Kontroller væskekappens strømning, og genindstil den om nødvendigt til 9,5-10,5 ml/minut. Genindstil mikroskopet forsigtigt for at få en smal og høj PHA og en maksimal signalmiddelværdi. Indstil endelig forstærkningen korrekt, dvs. Målt Signalmiddelværdi er tæt pi Sæt-Signalmiddelværdi, ±2. (Ver. 13.0).
Signalmiddel- Målt Signalmiddelværdi ligger udenfor den lave grænse for Sæt værdi er alt for Signalmiddelværdien.
lav PHA er høj, smal og lignet Sæt-PHA.
Indikationer: (1) Forstærkningen kan være lidt for lav (2) Væskekappens strømning kan være alt for høj 19 DK 176174 B1
(3) Mikroskopjusteringen er ikke OK
(4) Opretning eller udskiftning af lampen kan være påkrævet.
Hvad bør gøres: Afhjælp problem snarest muligt. Kontroller væskekappens strømning, og genindstil den om nødvendigt til 9,5-10,5 ml/minut. Juster lampe til maksimalt DC-niveau på mælkeprøve. Finindstil mikroskopet forsigtigt til en maksimal signalmiddelværdi. Med FMA-prøve. Indstil endelig forstærkningen korrekt, dvs. Målt Signalmiddelværdi er tæt på Sæt-Signalmiddelværdi, ±2. (Ver. 14.0).
Figur 12-14 viser som eksempler PHA-diagrammer for forskellige situationer. De vertikale linier 91 og 92 er nedre og øvre sæt-grænser for PHA for den målte 5 FMA-prøve. Den grå PHA-kurve 93 viser, hvorledes PHA'en skulle se ud i det ideelle tilfælde, den mørke kurve 94 viser kurven for den nylig målte prøve.
PHA-diagrammet i Fig. 12 illustrerer en situation, der er karakteriseret ved at signalmiddelværdien er for høj. Den målte signalmiddelværdi er udenfor den høje 10 grænse for sætsignalmiddelværdi. PHA er høj, smal og ligner sæt-PHA.
Indikationerne for denne situation er: Forstærkningen kan være indstillet for højt, kontroller forstærkningen i resultatlisten, ændret? Væskekappens strømning kan være for lav. Er hastigheden af væskekappen blevet reduceret? Kontroller. Hvis strømningen er OK, reducer forstærkningen.
15 PHA-diagrammet i figur 13 illustrerer en situation, der er karakteriseret ved, at signalmiddelværdien er høj, og PHA er bred. Den målte signalmiddelværdi kan ligge indenfor eller udenfor grænserne og højere end sætsignalmiddelværdi. PHA er lavere og bredere end SætPHA. Indikationerne i relation til denne situation er: 20 væskekappens strømning kan være lav. Er væskekappens strømning blevet reduceret? Kontroller. Genindstil strømningen til 10-10,5 mUminut snarest mulig.
Indstil endelig forstærkningen korrekt (dvs. målt signalmiddelværdi skal være tæt på sæt-signalmiddelværdi. +/- 2.
25 PHA-diagrammet i figur 14 illustrerer en situation, der er karakteriseret ved, at PHA er skæv eller dobbelt. Målt signalmiddelværdi kan ligge indenfor eller udenfor 20 DK 176174 B1 grænsen for sæt signatmiddelværdi. PHA er skæv eller dobbelt, lavere og bredere end sæt PHA. Indikationerne i relation til denne situation er 1) mikroskop-justeringen er ikke OK. 2) væskekappens strømning er muligvis ikke korrekt.
Kontroller væskekappens strømning og genindstil om nødvendigt til 10-10,5 5 mUminut. Genindstil mikroskop forsigtigt til en smal og høj PHA og maksimal signalmiddelværdi. Indstil endelig forstærkningen korrekt. (Malt signalmiddeiværdi er tæt pi sætsignalmiddelværdi +/- 2).
Det fremgår af de ovenstående eksempler, at fremgangsmåden ifølge de 10 nærværende opfindelser gør det muligt for brugeren selv at udføre mange normale justeringer af instrumentet. Det sikres hermed, at instrumentet i det væsentlige vil fungere perfekt hele tiden.
Kompensation for standard prøven.
15 PHA-diagrammet giver mulighed for en kompensation af standardprøven.
Erfaringen har vist, at standardprøverne undertiden indeholder nogle partikler, som har samlet sig to og to til dubletter eller tre og tre til tripletter. Jo større partiklerne er jo større signaler. Følgelig kan PHA-diagrammet se ud som angivet i fig. 15.
20
Den første top (101) repræsenterer enkeltpartikler, i et antal på 166; den anden top (102) repræsenterer dobbelte partikler i et antal på 429, og den tredje top repræsenterer tripletter i et antal på 77. Følgelig kan programmet, dvs. software der styrer instrumentet og evaluerer målingerne, være indrettet til at kompensere 25 for de sammenklumpede partikler ved at addere dubletterne og tripletterne henholdsvis to og tre gange.
Dannelsen af dubletter og tripletter (og muligvis andre multipla) menes at afhænge af partiklernes alder, at prøven rystes, og temperaturen af prøven. Det 30 er vanskeligt at forudsige mængden af dubletter og tripletter i standardprøverne, og følgelig løser den ovennævnte kompensationsmetode et aktuelt problem.
Det er klart for fagfolk, at udførelsesformerne ifølge opfindelsen og som beskrevet i det foregående kan varieres på flere måder indenfor beskyttelsesomfanget, 35 således som det defineres i de følgende patentkrav.
21 DK 176174 B1
Resultatdetaljer for 58 Tælling R Signal Signal Z Diskrimi- Støj- Anmærk.
____Middel Bredde___Nator__niveau__
Rep. 1 418 2.67 58 8 33 29 4 signal _________lavt_
Rep.2 399 2.74 58 8 3.4 28 4 signal _________lavt_
Rep.3 399 2.73 58 8 3.7 25 4 signal _________lavt_
Gennemsnit 405 2.71 58 8 3.4 27 4 signal __ lavt_ CV(%) 271___OO______ Sæt 396 2.75 73 7144511
Gennem
Snit_________ 5
Fossomatic kvalitetskontrol - resultater
Signal Signal
Nr. Dato Tid tælling CV R Middel CV bredde Anmær
1 30.06.97 12:36:15 393 0.83 2.76 73 0.0 8 OK
2 30.06.97 12:37:30 402 5.45 2.73 73 0.0 8 OK
3 30.06.97 12:37:51 389 6.20 2.77 73 0.8 8 OK
19 30.06,97 17:01:26 374 6.16 2.83 72 0.8 9 Anmær
20 30.06.97 17:02:21 390 0.70 2.77 73 0.0 8 OK
21 01.07.97 08:38:22 419 1.19 2.67 72 0.0 8 OK
48 10.07.97 14:33:30 400 1.93 2.73 64 0.9 8 OK
49 10.07.97 16:17:36 394 2.28 2.75 49 1.2 8 signal!;
50 10.07.97 17:34:39 389 6.69 2.77 68 0.0 8 OK
51. 11.07.97 11:02:47 391 1.35 2.76 62 2.5 8 signal!
57 15.07.97 06:51:50 398 2.47 2.74 62 0.9 8 OK
58 15.07.97 08:52:45 405 2.71 2.71 58 0.0 8 signal! 59 15.07.97 10:54:27 388 2.69 2.77 58 1.0 8 signal!
Tabel 3 23 DK 176174 B1 1. Fremgangsmåde til at kontrollere funktionen af et flowcytometer (10), hvori antallet af partikler eller celler i et strømmende fluidum, så som mælk, tælles ved at registrere lysimpulser, som udsendes fra partiklerne, og tilvejebringe data, der 5 repræsenterer et PHA-diagram (imPuls Højde Analyse) af de registrerede impulser, og hvor flowcytometerets funktion kontrolleres og/eller justeres ved måling på standardprøver af forudbestemt kendt art, idet de registrerede måleresultater analyseres, 10 kendetegnet ved, - at tilvejebringe et antal standardprøver, der kun indeholder en type i det væsentlige ensartede mikrokugler, - at tilvejebringe data, der repræsenterer et optimalt (ønsket) PHA-diagram (PHAO) for de impulser, der registreres når en standardprøve måles på et 15 reference-instrument, hvilke data gemmes i en hukommelse i selve instrumentet (10), som skal kontrolleres, eller i en hukommelse i databehandlingsorganer forbundet med instrumentet (10) eller i anordninger, hvorfra dataene kan importeres til instrumentet (10) eller til dermed forbundne databehandlingsorganer, 20 - at måle en standardprøve på det instrument (10), der skal kontrolleres, - at tilvejebringe data, der repræsenterer et PHA-diagram for de impulser, der registreres under målingen af standardprøven på det instrument (10), som skal kontrolleres, - at sammenligne de nævnte data, der repræsenterer det nye PHA-diagram 25 (PHAS) med de gemte data, der repræsenterer det optimale PHA-diagram (PHAO), og - at analysere og/eller evaluere dataene for at kunne bestemme en eventuel dårlig eller fejlbehæftet funktion af instrumentet.
30 2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved at beregne og/eller tilvejebringe mindst en af de følgende parametre ved at behandle de data, der repræsenterer PHA-diagrammerne: - en partikeltælling eller flere partikeltællinger på samme prøve, - en standardafvigelse s og/eller en variationskoefficient CV, baseret på mindst tre DK 176174 B1 24 gentagne/på hinanden følgende målinger på den samme prøve og i det væsentlige på samme tid, - en signalmiddelværdi, og/eller - en signalbredde (bredden af den klokkeformede del af PHA-diagrammet) 5 * at tilvejebringe de samme data for standardprøven fra standardvæsken målt på et referenceinstrument (dvs. de optimale værdier af disse data), - at sammenligne mindst en af de ovennævnte parametre for den aktuelle måling pi standardprøven med de tilsvarende optimale parametre for standardvæsken målt på et reference-instrument, og 10 - analysere dataene for at bedømme, om instrumentet fungerer i det væsentlige optimalt (dvs. indenfor visse grænser) eller ikke fungerer optimalt (dvs. udenfor visse grænser), idet alle afvigelser fra normal funktion registreres.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at de registrerede 15 afvigelser betragtes som symptomer, som forevises brugeren.
4. Fremgangsmåde ifølge et eller flere af de foregående krav, kendetegnet ved - at analysere PHA-diagrammet (PHAS) for den målte standardprøve for at 20 observere eventuelle sammenklumpede partikler i den målte standardprøve, og - hvis PHA-diagrammet afslører flere maksima for signaler af en størrelse over det første klokkeformede område med et første maksimum, - at justere det antal partikler, der beregnes på grundlag af arealet af det første maksimum i PHA-diagrammet (PHAS), ved at anvende beregninger af antallet af 25 partikler repræsenteret af et tilstødende andet område med et andet maksimum i PHA diagrammet ved at addere antallet af partikler i det andet område to gange til antallet af partikler i det første område.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at antallet af partikler 30 beregnet udfra områderne med det første og det andet maksima i PHAS- diagrammet justeres ved at anvende beregninger af antallet af partikler repræsenteret af et tilstødende tredje område med et tredje maksimum i PHAS-diagrammet ved at addere antallet af partikler beregnet i det tredje område tre gange til antallet beregnet i det første og andet område.
35 25 DK 176174 B1 6. Apparat omfattende databehandlingsudstyr indrettet til at udøve en fremgangsmåde ifølge et eller flere af de foregående krav.
7. Apparat ifølge krav 6, kendetegnet ved, at databehandlingsudstyret er 5 indrettet til at kontrollere funktionen og/eller evaluere observerede symptomer.
8. Apparat ifølge krav 7, kendetegnet ved, at databehandlingsudstyret omfatter organer til at afprøve funktionen og/eller evaluere de observerede symptomer, foreslå mulige defekter (dvs. stille en diagnose), komme med 10 anbefalinger af, hvorledes en evt. dårlig funktion afhjælpes, og/eller hvilke forholdsregler, der bør tages.
9. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at organerne til at evaluere symptomerne indbefatter et bibliotek indeholdende en Liste af symptomer, der 15 angiver dårlig funktion og anbefalinger af, hvorledes man afhjælper en dårlig funktion, og/eller andre forholdsregler, som bør tages, idet biblioteket gemmes i hukommelses-anordninger, hvortil databehandlingsorganerne kan få adgang.
10. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at organerne til at kontrollere 20 funktionen og/eller evaluere symptomerne indbefatter fremvisning af en liste over resultater til brugeren på en monitor og/eller levering af en udskrift af samme.
11. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at organerne til at kontrollere funktionen og/eller evaluere symptomerne indbefatter fremvisning af detaljerede 25 resultater og data for de seneste målinger på standardvæsken.
12. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at organerne til at kontrollere funktionen og/eller evaluere symptomerne indbefatter fremvisning af et målt PHA-diagram (PHAS) på opfordring af brugeren.
30 13. Apparat ifølge krav 8, kendetegnet ved, at organerne til at kontrollere funktionen og/eller evaluere symptomerne indbefatter fremvisning af en liste af mulige situationer omfattende definerede symptomer og for hver situation fremviser information om mulige årsager og hensigtsmæssige aktioner for at 35 afhjælpe fejlen.
DK 176174 B1 26 14. Apparat ifølge krav 13, kendetegnet ved, at listen over symptomer omfatter en eller flere af følgende indikationer: signalmiddelværdi lav, signalmiddelværdi for lav, signalmiddelværdi meget for lav, signalmiddelværdi 5 høj, signalmiddelværdi for høj, PHA er bred, PHA er lav, PHA er skæv eller dobbelt.
15. Apparat ifølge krav 13, kendetegnet ved, at årsagerne (dvs. de foreslåede fejl) og anbefalinger omfatter en eller flere af følgende indikationer: 10 elektronisk forstærkning for lav, forstærkning for høj; kræver justering af forstærkningen i de elektroniske signalbehandlingsorganer; blokering eller tilstopning i flowsystemet væskekappestrømningen er for lav , eller væskekappestrømningen er for høj, væskekappestrømningen er meget for høj justering af strømningshastigheden er 15 påkrævet; ukorrekt blanding af prøve og farve; defekt lampe; fejlagtig justering af lampe eller mikroskop.
16. Standardkit til anvendelse i et apparat ifølge et eller flere af kravene 6-15 20 og/eller ved fremgangsmåden ifølge et eller flere af kravene 1-5 kendetegnet ved, at kittet omfatter et standardfluidum og et eller flere tilhørende datamedier til at få adgang til data, der repræsenterer information om standardfluidet.
17. Standardkit ifølge krav 16, kendetegnet ved, at fluidet leveres som en 25 portion standard-prøver i et antal prøvebeholdere af foreskrevet størrelse med et bestemt volumen, så som 30 ml af et standardfluidum, indeholdende vand, tilsætningsstoffer og et antal plastkugler, og at tilknyttede dataorganer indeholder information om antallet af plastkugler i fluidet. .
30 18. Standardkit ifølge krav 16 eller 17, kendetegnet ved, at det omfatter et eller flere medier til at få adgang til information om standard prøvenes egenskaber, såvel som information indeholdende et bibliotek over symptomer, der angiver dårlig funktion, og anbefalinger af, hvorledes man afhjælper eventuel dårlig funktion, og hvilke forholdsregler, der bør tages.
35
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK199701053A DK176174B1 (da) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden |
| EP98942513A EP1017989B1 (en) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | A method of checking the performance of a flow cytometer instrument and a standard kit therefor |
| PCT/DK1998/000389 WO1999014574A1 (en) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | A method of checking the performance of a flow cytometer instrument and apparatus for executing said method as well as a standard kit therefore |
| AU90630/98A AU9063098A (en) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | A method of checking the performance of a flow cytometer instrument and apparatus for executing said method as well as a standard kit therefore |
| DE69839776T DE69839776D1 (de) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | Verfahren zur prüfung der leistung eines durchflusszytometers und standardsatz dafür |
| US09/508,437 US6542833B1 (en) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | Method of checking the performance of a flow cytometer instrument and apparatus for executing said method as well as a standard kit therefore |
| ES98942513T ES2310009T3 (es) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | Procedimiento para comprobar el rendimiento de un citometro de flujo y un equipo estandar. |
| AT98942513T ATE402404T1 (de) | 1997-09-12 | 1998-09-14 | Verfahren zur prüfung der leistung eines durchflusszytometers und standardsatz dafür |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK199701053A DK176174B1 (da) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden |
| DK105397 | 1997-09-12 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK105397A DK105397A (da) | 1999-03-13 |
| DK176174B1 true DK176174B1 (da) | 2006-11-20 |
Family
ID=8100457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK199701053A DK176174B1 (da) | 1997-09-12 | 1997-09-12 | Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6542833B1 (da) |
| EP (1) | EP1017989B1 (da) |
| AT (1) | ATE402404T1 (da) |
| AU (1) | AU9063098A (da) |
| DE (1) | DE69839776D1 (da) |
| DK (1) | DK176174B1 (da) |
| ES (1) | ES2310009T3 (da) |
| WO (1) | WO1999014574A1 (da) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6118525A (en) | 1995-03-06 | 2000-09-12 | Ade Optical Systems Corporation | Wafer inspection system for distinguishing pits and particles |
| US20050264804A1 (en) * | 2004-05-27 | 2005-12-01 | Eastman Kodak Company | Bi-modal control material for particle size analyzers |
| US20070020357A1 (en) | 2005-07-20 | 2007-01-25 | Yissum Research Development Company | Method and device for determining milk quality |
| US7799575B2 (en) * | 2006-11-07 | 2010-09-21 | Genetix Limited | Flow cytometers |
| US8102528B2 (en) * | 2007-09-13 | 2012-01-24 | Brightwell Technologies Inc. | Particle standard and method of calibrating or validating an optical particle analyzer |
| US7859664B2 (en) | 2007-09-13 | 2010-12-28 | Brightwell Technologies Inc. | Plurality of samples and method for selecting a target sample therefrom |
| US8140300B2 (en) * | 2008-05-15 | 2012-03-20 | Becton, Dickinson And Company | High throughput flow cytometer operation with data quality assessment and control |
| US8187885B2 (en) * | 2009-05-07 | 2012-05-29 | Nodality, Inc. | Microbead kit and method for quantitative calibration and performance monitoring of a fluorescence instrument |
| JP5831059B2 (ja) * | 2011-09-07 | 2015-12-09 | ソニー株式会社 | 光学的測定装置、フローサイトメーター及び光学的測定方法 |
| WO2015099116A1 (ja) * | 2013-12-27 | 2015-07-02 | 株式会社堀場製作所 | 粒子計数方法および粒子計数装置 |
| US9863864B2 (en) * | 2015-09-15 | 2018-01-09 | Bio-Rad Technologies, Inc. | Threshold selector for flow cytometer |
| US11131618B2 (en) | 2018-08-10 | 2021-09-28 | Cytek Biosciences, Inc. | Smart flow cytometers with self monitoring and self validation |
| CN116698709B (zh) * | 2023-06-09 | 2024-03-12 | 深圳市益希医疗器械有限公司 | 一种流式细胞仪的数据处理方法及流式细胞仪 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5084394A (en) | 1984-12-24 | 1992-01-28 | Vogt Robert F | Method for corrective calibration of a flow cytometry using a mixture of fluorescent microbeads and cells |
| US4774189A (en) | 1984-12-24 | 1988-09-27 | Flow Cytometry Standards Corp. | Fluorescent calibration microbeads simulating stained cells |
| US5380663A (en) | 1984-12-24 | 1995-01-10 | Caribbean Microparticles Corporation | Automated system for performance analysis and fluorescence quantitation of samples |
| US5073497A (en) | 1989-06-30 | 1991-12-17 | Caribbean Microparticles Corporation | Microbead reference standard and method of adjusting a flow cytometer to obtain reproducible results using the microbeads |
| US4918004A (en) | 1984-12-24 | 1990-04-17 | Caribbean Microparticles Corporation | Method of calibrating a flow cytometer or fluorescence microscope for quantitating binding antibodies on a selected sample, and microbead calibration kit therefor |
| US4767206A (en) | 1984-12-24 | 1988-08-30 | Flow Cytometry Standards Corporation | Calibration method for flow cytometry using fluorescent microbeads and synthesis thereof |
| US5093234A (en) * | 1984-12-24 | 1992-03-03 | Caribbean Microparticles Corporation | Method of aligning, compensating, and calibrating a flow cytometer for analysis of samples, and microbead standards kit therefor |
| US4867908A (en) * | 1986-08-29 | 1989-09-19 | Becton, Dickinson And Company | Method and materials for calibrating flow cytometers and other analysis instruments |
| JP2667867B2 (ja) * | 1988-03-30 | 1997-10-27 | 東亜医用電子株式会社 | 粒子解析装置 |
| US5107422A (en) * | 1989-10-02 | 1992-04-21 | Kamentsky Louis A | Method and apparatus for measuring multiple optical properties of biological specimens |
| US5288642A (en) * | 1992-12-09 | 1994-02-22 | Flockton Analytical Management Inc. | Shelf-stable milk calibration standards |
| FI98765C (fi) * | 1995-01-16 | 1997-08-11 | Erkki Soini | Virtaussytometrinen menetelmä ja laite |
| EP0846259A1 (en) * | 1995-08-21 | 1998-06-10 | Foss Electric A/S | A method and an apparatus for determining the number of particles or cells in a liquid sample |
| US6183697B1 (en) * | 1997-05-27 | 2001-02-06 | Sysmex Corporation | Particle measuring apparatus |
-
1997
- 1997-09-12 DK DK199701053A patent/DK176174B1/da not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-09-14 US US09/508,437 patent/US6542833B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-14 AU AU90630/98A patent/AU9063098A/en not_active Abandoned
- 1998-09-14 WO PCT/DK1998/000389 patent/WO1999014574A1/en active IP Right Grant
- 1998-09-14 ES ES98942513T patent/ES2310009T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-14 EP EP98942513A patent/EP1017989B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-14 AT AT98942513T patent/ATE402404T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-09-14 DE DE69839776T patent/DE69839776D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE402404T1 (de) | 2008-08-15 |
| ES2310009T3 (es) | 2008-12-16 |
| DE69839776D1 (de) | 2008-09-04 |
| US6542833B1 (en) | 2003-04-01 |
| AU9063098A (en) | 1999-04-05 |
| EP1017989A1 (en) | 2000-07-12 |
| WO1999014574A1 (en) | 1999-03-25 |
| EP1017989B1 (en) | 2008-07-23 |
| DK105397A (da) | 1999-03-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK176174B1 (da) | Fremgangsmåde og standardkit til at kontrollere funktionen af et flowcytometer, samt apparat til udövelse af fremgangsmåden | |
| JP6971524B2 (ja) | 診断分析装置において精度管理を行う方法およびシステム | |
| EP1107159B1 (en) | Quality control method and device therefor | |
| AU599104B2 (en) | Interlaboratory quality assurance program | |
| US8150645B2 (en) | Automatic analzyer | |
| US9229015B2 (en) | Accuracy management method | |
| INTERNATIONAL COMMITTEE FOR STANDARDIZATION IN HAEMATOLOGY (ICSH) et al. | Protocol for evaluation of automated blood cell counters | |
| CN106164645B (zh) | 用于诊断流体系统并且判定流式细胞仪的数据处理设置的系统和方法 | |
| US6448085B1 (en) | Quality control material and calibrator for nucleated red blood cell tested on hematology analyzer | |
| JP7384905B2 (ja) | フローサイトメトリー調査のための流体サンプルの最適化された希釈のためのデータ分析を伴うフローサイトメトリー | |
| EP2597469B1 (en) | Accuracy management system | |
| US7206701B2 (en) | Systems and methods for automated quantitative analysis of digitized spectra | |
| Sharp et al. | An evaluation of the Coulter S counter. | |
| EP4361640A1 (en) | Diagnosis system, automated analysis device, and diagnostic method | |
| WO2020051028A1 (en) | Instrument analyzers, data displays, and display methods | |
| Beckman et al. | The UK strategy for monitoring universal leucodepletion | |
| Lappin et al. | An evaluation of the Fisher Hem-Alyzer | |
| Souan et al. | Innovative Approaches in Quality Management in Clinical Laboratories | |
| CASA | SQA-Vision vs. Hamilton Thorne vs. Microptic vs. Biophos CASA Comparison Table | |
| JPS6095360A (ja) | 血液自動分析装置のデ−タ処理装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |
Expiry date: 20170912 |