DK166085B - Antineoplastiske phenanthridoner, farmaceutiske praeparater indeholdende disse samt deres anvendelse til fremstilling af et farmaceutisk praeparat til behandling af en vaert, som er angrebet af en neoplastisk sygdom - Google Patents

Description

i

DK 166085B

Den foreliggende opfindelse angår antineoplastiske phenanthridoner med den i krav 1 viste formel. Opfindelsen angår desuden farmaceutiske præparater, der som aktiv hovedbestanddel indeholder en effektiv mængde af en sådan phenanthridon, samt anvendelsen af phenanthridonerne til 5 fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en vært, som er angrebet af en neoplastisk sygdom.

Så tidligt som i det 4. århundrede f.Kr. blev man opmærksom på visse medicinske og/eller giftige plantearter. For bestemmelse af tilstedeværelsen af alkaloide bestanddele i sådanne arter se R.D. Gibs, 10 "Chemotaxonomy of Flowering Plants", bind III, McGills-Queens University Press, Montreal, 1974, p. 1924. I tidens løb har flere end 30 arter af .den relativt store Amaryllidaceae-familie fundet anvendelse ved en primitiv behandling af cancer (se J.L. Hartwell, Loydia, 1967, 30, 391).

Ved de fortsatte bestræbelser på at lokalisere og definere forskel -15 lige naturlige og syntetiserbare substanser til behandling af én eller flere forskellige former for cancer holder kemikere i deres forskning fortsat opmærksomheden rettet mod den naturlige flora og fauna i et forsøg på at isolere og identificere substanser, der udviser antineopla-stisk aktivitet samtidig med, at de væsentligt reducerer, om ikke fuld-20 stændigt eliminerer nogle af de alvorlige bivirkninger, der ledsager kendte kemoterapeutiske midler.

Det er ved den fortsatte forfølgelse af disse mål, at plantearter, som før i tiden er blevet ignoreret, nu bliver undersøgt for at bestemme, om de indeholder bestanddele, som ved isolering udviser antineopla-25 stisk aktivitet.

Forbindelsen 7-deoxynarciclasin, der har strukturformlen

OH

30 JL h X

H O

35 og kan udvindes fra planter af Amaryllidaceae-familien, er under den alternative betegnelse Lycoricidin beskrevet i US patentskrift nr.

3.583.993 og i Tetrahedron Letters, vol. 22, nr. 28, pp. 2615-2618 (1981). I førstnævnte skrift omtales forbindelsens plantevækstreguleren- 2

DK 166085 B

de virkning, mens forbindelsen i sidstnævnte skrift omtales som potentielt antitumormiddel.

Det har riu vist sig, at forbindelsen pancrat i statin og de i kravene anførte derivater deraf ikke blot har antitumorvirkning, men tilmed en 5 væsentlig kraftigere antitumorvirkning end 7-deoxynarciclasin og derivater deraf.

Forbindelserne ifølge opfindelsen har strukturformlen ORi

10 10 iJ Η «I

OR O

hvori R betyder H, CH^ eller en fysiologisk hydrolyserbar acylgruppe fra 15 en alifatisk, alicyklisk, al i cykl isk-ali fati sk, aromatisk eller aroma-tisk-alifatisk carboxylsyre, især en acetylgruppe, mens Rj, R£, Rj og R4 hver især betyder H eller en fysiologisk hydrolyserbar acylgruppe fra en alifatisk, alicyklisk, al i cykl i sk-alifatisk, aromatisk eller aromatisk-ali fati sk carboxylsyre, især en acetylgruppe.

20 Den foreliggende opfindelse tilvejebringer hidtil ukendte og nyttige kemoterapeutiske midler, som kan ekstraheres fra roden af den hawaiianske (eller afrikanske) Pancratium littorale Jacq. og Zephranthes grandi flora på den herefter mere detaljeret beskrevne måde, og som derefter kan formuleres til anvendelige farmaceutiske præparater, som udvi-25 ser påviselige og bekræftede niveauer af anticancer-aktivitet, når de måles ved hjælp af de generelt accepterede forskrifter, der anvendes ved United States National Cancer Institute.

Et særligt aspekt af opfindelsen udgøres af stoffet pancratistatin, der har strukturformlen: 30 OR* i

RjO ®^2 10 10 i H «1 °R> n 11 35 or o hvori R=Rj=R2=R3=R^=H, og derivaterne deraf, hvori R=Rj=R2=R3=R4=C0CH2, og derivaterne, hvori R^H^ og Rj=R2=R3=R^=H.

DK 166085B

3

Knoldsektionen (45 kg) af P. littorale ekstraheredes med methylen-chlorid-methanol-vand, og pancratistatin koncentreredes (adskillelsen styredes fortrinsvis ved bioanalyse under anvendelse af PS in vivo systemet) i en n-butanolekstrakt af den vandige fase. Rensning af halvde-.5 len af det urene produkt under anvendelse af selektive opløseligheds-egenskaber og gelpermeeringskromatografi ("Sephadex LH-20") gav 6,5 g (0,028% udbytte) pancratistatin, der adskiltes fra dimethylformamid-me-thanol-ether som et farveløst fast stof: dp 330-321°, El massespektrum m/e 325 (M+, C14H15N08)[o]32 +44° (c, 1,0, DMSO), A^|0H(log 10 Σ) 229 (4,29), 239 (4,26) og 281 (4,0) nm, IR (KBr) ^max 3500-3200, 1675, 1615, 1600, 1500, 1465, 1445, 1420, 1375, 1350, 1300, 1230, 1200, 1160, 1118, 1085, 1070, 1040, 1030, 930, 912, 880, 840, 720, 655, 640 og 610 cm-1, og *H NMR (100 MHz, DM$0-d6) S 3,6-4,4 (6H), 4,72-5,70 (5H, fjernet med D20, 6,11 (2H, br, s), 6,56 (IH, s) og 13,15 (IH, fjernet 15 med DgO). Omsætning af pancratistatin med eddikesyreanhydridpyridin gav dens pentaacetat (smp. 162-166°). Omsætning af pancratistatin med diazomethan i methanol gav 7-monomethyletheren (smp. 294-298°). Den samme procedure tilvejebringer pancratistatin ud fra Zepahranthes grandiflora, selvom P. littorale 0. er anvendt heri som eksempel.

20 Den bemærkelsesværdige uopløselighed af pancratistatin i forskellige organiske opløsningsmidler, det høje dekomponeringspunkt, dens ikke-basiske karakter og det infrarøde spektrum leder tanken hen imod et car-bostyril- eller isocarbostyrilsystem. Den mest plausible fortolkning af pancratistatins, pentaacetatets og methyletherens grundstofanalyse- og 25 spektralanalysedata peger på en hidtil ukendt phenanthridon. Til bestemmelse af de stereokemiske data og til bekræftelse af den nedenfor viste samlede struktur af pancratistatin anvendtes en røntgenkrystal struktur-bestemme! se.

OR·, 30 Rj0-y-^\t-°r2

10 toti H < I

(T ThT

OR O

35 hvori R=Rj=R2=R8=R4=H.

Det viste sig, at et enkelt krystal (0,125 x 0,25 x 0,37 mm) af pancratistatinmonomethylether, omkrystalliseret fra 95% ethyl al kohol, svarer til Cj5Hj7N0g.H20 f ω357,32, monoklinisk β = 99,78 (2)°, a =

DK 166085B

4 9,040(1), b * 8,317(1) og c - 10,187(2) A, V - 754,8 A, F(000) = 376, Po = 1,565 g/cc, Z = 2 og Pc = 1,572 g/cm3 (25°C, CuK = 1,54184 A).

Systematiske ekstinktioner (OkO mangler, hvis k = 2n + 1) og kira- litet var konsistente med rumgruppe P2,. Den iagttagne densitet på 1,56 3 1 5 g/cm viste ét molekyle af hhv. CjgHjjNOg og vand per ækvivalent stilling (2 molekyler pancratistatin/celle). Celleparametrene opnåedes ved mindste kvadraters metode ud fra de reciproke gitterpositioner af 25 med diffraktometer målte reflektioner med 2-theta værdier i området 5-35°. Intensiteten af alle entydige reflektioner med 2Θ > 75° blev målt ved 10 25°C under anvendelse af en variabel hastigheds-omega/2-theta-scannings-teknik på et "Enraf-Nonius CAD4" diffraktometer (Delft) under anvendelse af grafit-monokromatisk CuK-stråling. Scanningsvinklen for hver reflek-tion beregnedes som (0,90 + 0,15 tan Θ)0. Detektoraperturen med en variabel bredde på (4,0 + 0,5 tan Θ) mm og en konstant vertikal højde på 4 15 mm anbragtes i en afstand på 173 mm fra krystallet. Den maksimale scanningstid for hver reflektion var 1 minut. 2/3 af denne tid anvendtes til scanning af toppen og 1/6 til måling af de to baggrunde. Intensiteten af tre monitorreflektioner optegnedes også hvert 250. minut, og det viste sig, at afvigelsen var mindre end 0,5% i løbet af hele dataindsamlings-20 processen. Der opnåedes ialt 1647 entydige reflektioner til den efterfølgende behandling (I < 1,0 σ (1)). Alle data vedrørende intensitet korrigeredes for anisotropt henfald under anvendelse af standardernes monitorintensitet. Disse data korrigeredes for Lorentz-polarisation og anomale dispersionsvirkninger. Atomspredningsfaktorkoefficienterne toges 25 fra passende tabeller: D.T. Cromer og J.T. Waber, "International Tables for X-ray Crystallography", bind IV, The Kynoch Press, Birmingham, England, 1974, tabel 2.2B, tabeller for anomale dispersionskoefficienter, D.T. Cramer, ibid, tabel 2.3.1. Ekstinktions- eller absorptionsindstillinger foretoges ikke og ansås heller ikke for nødvendige (μ = 10,038 30 cm"1).

Den strukturelle bestemmelse af pancratistatinmonomethylether gennemførtes ved hjælp af direkte metoder under anvendelse af en multiop-løsnings-vægtet tangent-formelmetode, dvs. program MULTAN. Alle krystallografiske beregninger gennemførtes med en "PDP 11/23" datamat under an-35 vendel se af Enraf-Nonius (Delft) strukturbestemmelsesprogram-softwaresystemet ("SDP-PLUS"), der er udviklet af B.A. Frenz and Associates, Inc., College Station, Texas, 1982. De anvendte hovedprogrammer var START, PAINTER, REJECT, CH0RT, datareduktionsprogrammer, LSB, et fuld matrix,

DK 166085 B

• 5 mindste kvadraters raffineringsprogram, SEARCH, et konnektivitetstopsøg- ningsprogram, ORTEP-11, det krystallografiske illustrationsprogram, MULTAN 11/82, “et system af datamatprogrammer til automatisk opløsning af krystalstrukturer fra røntgendiffraktionsdata", et direktmetode-pro- 5 gram af P. Main og kollegaer, University of York, York, England. For en beskrivelse af MULTAN se: G. Germain, P. Main, Μ. M. Woolfson, Acta

Crystallogr. Sect. B., 1970, 26, 274-285 og M.M. Woolfson, Acta

Crystallogr. Sect. B., 1977, 33, 219-225. Efter den korrekte tildeling af koordinater til alle ikke-hydrogenatomer anvendtes fuld matrix, mind- 10 ste kvadraters raffinering ikke-Poissonbidragsvægtningsskemaet ved mind- ste kvadraters raffinering, hvor W « l/<7/r2,=4 x F /(crr2) og a,r2* = i n o 22 v/ r u / / I + (P x F ) , hvor P er en justeringsfaktor med det formal at ned- graduere intense reflektioner, og W er reflektionens vægt. En værdi på 0,05 anvendtes for P på alle koordinater, skalafaktorer og i sotrope tem-15 peraturfaktorer resulterede i en hurtig reduktion af det konventionelle, uvægtede krystallografiske diskrepansindeks R(2 I Fo-Fe I / ΣΙ Fol ) til 0,1795 (for iagttagne reflektioner, I > 3 σ (I)). Efterfølgende differensel ektrontæthedssyntese afslørede alle hydrogenatomer samt tilstedeværelsen af et molekyle vand, som anses for at være hydrogenbundet (1,83 20 Å) til et af hydroxyhydrogenatomerne ved C-4. Sluttelig forårsagede flere yderligere runder af fuld matrix, mindste kvadraters raffinering af alle variable (anisotrope ikke-hydrogenatomer og isotrope ikke-hydrogenatomer og isotrope hydrogenatomer, hvor de termiske B-værdier af sidstnævnte var fastlagt på en nominel værdi på 5,0, konvergens til R = 25 0,405 (Ra> = 0,0438). Raffinering blev afbrudt, når parameterskiftene blev insignifikante (maksimumskift til fejlforhold var 0,84 med hovedparten i området 0,1-0,2) og en afsluttende differensoversigt afslørede negligerbare elektrontætheder (>0,22 e Å ). Alle bindingslængder og vinkler stemte overens med forventede værdier.

30 En beregning af diskrepansindekserne for den modsatte enantiomorf af den, der er afbildet for pancratistatinderivatet, når R^CHg og Rj=R2=R3=R4=H, ud fra de opnåede data (1632 iagttagelser og 301 variable), gav værdier af R' = 0,0425, og R'w repræsenterer den absolutte stereokemiske konfiguration med > 99,9% sandsynlighed. Den tildelte ab-35 solutte konfiguration støttes yderligere af en kombination af studier af den biosyntetiske struktur og røntgenkrystalstrukturen af narciclasin, et 1-dehydrophenanthridonderivat af pancrastistatin.

Ved én udførelse af ekstrakionen ekstraheredes knolde af P. litto- 6

DK 166085 B

rale under anvendelse af en methylenchlorid-methanol fremgangsmåde efterfulgt af tilsætning af vand. Methylenchloridfasen opdeltes under anvendelse af opløsningsmiddel sekvensen 9:1 -*· 4:1 + 3:2 methanol vand med hexan -* carbontetrachlorid -+ methylenchlorid. Den vandige fase ekstrahe- 5 redes med n-butanol, og pancratistatin koncentreredes dér frem for i methylenchloridresten, hvor man ville forvente lycorin.

n-butanolfraktionen adskiltes yderligere ved gelpermeeringskromato-grafi på "Sephadex LH-20" under anvendelse af methanol som eluerings-middel. Opsamling af fraktioner vejledtes af tyndtlagskromatografi under 10 anvendelse af 3:1 chloroform-methanol. De to hovedsagelige antineopla-stiske komponenter svarede til 0,37 og 0,48. Begge viste sig at have et meget højt smeltepunkt, at være relativt uopløselige og at være ni-trogen-holdige, ikke-basiske faste stoffer, som mindede om carbostyriler eller isocarbostyriler.

15 Rensning af R^ 0,37 produktet ved omkrystallisation fra eddikesyre-methanol gav en laktam, som let resulterede i et tri acetatderivat. Spektralanalysedata viste, at denne anticancer-bestanddel (PS, T/C 161 ved 12,5 mg/kg, ED^q 0,02 /ig/ml) var et 7-deoxyderivat af narciclasin.

Fysiske konstanter rapporteret for margetin, som senere blev omdøbt til 20 lycoricidin, viste derimod noget andet. På grund af dette og fordi indledende forsøg på at opnå en autentisk prøve af 7-deoxynarciclasin ikke var vellykkede, foretoges en fuldstændig strukturbestemmelse ved hjælp af røntgenkrystallografi ske metoder. Resultatet var endelig fastlæggelse af strukturen 25 oh i nh

H O

30 for substansen med R^ 0,37. Den absolutte konfiguration af triolen ud-1 edtes af dens formodede biosyntese frå vittatin. Senere opnåedes autentiske prøver af tri acetatet 35 9COCH3 / S^OCOCHj

NH

H O

7

DK 166085 B

fremstillet ud fra de naturlige og (i)-syntetiske produkter, og sammenligning med substansen med 0,37 udvundet fra P. littorale ved infrarød spektralanalyse i kaliumbromid viste væsentlige forskelle, men ved sammenligning i en chloroformopløsning var spektrene identiske. På dette 5 grundlag antages det, at tildelingen af den ovenfor viste struktur til 7-deoxynarciclasin er korrekt.

Omkrystallisation of 0,46 anticancer-komponenten (T/C 138 ·+ 165 ved 0,75 6,0 mg/kg dosisniveauer og 208 ved 12,5 mg/kg i PS-systemet med ED5q, 0,01 μg/ml) fra dimethylformamid-methanol-ether gav en ren 10 prøve, der udviste grundstofanalytiske og spektralanalytiske data i overensstemmelse med strukturen

OH

HOx

10 lod H * I

15 ( T TH

o--K^A^3nh

I7 II

OH O

Denne nye phenanathridon kaldtes for "pancratistatin" og dens struktur belystes ved hjælp af en røntgenstråle-krystalstrukturbestem-20 melse. Den for pancratistatin bestemte struktur stemte fuldstændig overens med de tilsvarende spektralanalyseresultater.

For at fremme forståelsen af den foreliggende opfindelse yderligere skal opmærksomheden nu ledes hen på de fremgangsmåder, der udførtes ved isolering af pancratistatin og 7-deoxynarciclasin fra den hawaiianske 25 (afrikanske) Pancratium littorale Jacq.

Almen fremgangsmåde. Alle til kromatografering anvendte opløsningsmidler omdestilieredes. Tyndtlagskromatografi udførtes på silicagel "GHLF Uniplates" (0,25 mm lagtykkelse), som leveredes af Analtech Inc., fremkaldelses-opløsningsmiddel chloroformrmethanol (3:1), og synliggø-30 relse med cerisulfatsprayreagens. "Sephadex LH-20" (partikelstørrelse 25-100 μ) leveredes af Sigma Chemical Co. En "Gilson Model FC-200K" fraktionsopsamler anvendtes til opsamling af fraktioner.

Smeltepunkter bestemtes på et varmbordsapparat af Kofler-type og er ukorrigerede. Optiske drejninger måltes med et "Perkin-Elmer Model 241" 35 automatisk polarimeter. Ultraviolette spektra optoges på et "Hewlett-Packard Model 8450A UV/VIS" spektrofotometer og infrarøde spektra på "Perkin Elmer Model 200" og "Nicolet MX-1 FTIR" spektrofotometre. *H- og ^C-NMR-spektre optoges på hhv. "Varian XL-100" og "Bruker HXE-90" 8

DK 166085 B

(22,63 MHz) spektrometre under anvendelse af tetramethylsilan som intern standard. Massespektre opnåedes på et "varian MAT 312" spektrometer.

Planteindsamling. Knoldene af hawaiiansk P. littorale J. opnåedes gennem et føl les forskningsprogram med National Cancer Institute -5 University of Hawaii.

Ekstraktion. Knoldene af den hawaiianske P. littorale Jacq. snitte-des, og de snittede knolde (45 kg) ekstraheredes med methanol:methylen-chlorid (1:1, 320 liter) ved omgivelsestemperatur i 20 dage. Ekstrakten dekanteredes dernæst, og methylenchloridfasen fraskiltes ved tilsætning 10 af 20 volumen-% vand. Den vandige fase indstilledes ved tilsætning af yderligere methanol og methylenchlorid i forholdet vandig fasermethanol: methylenchlorid (2:1:1), og knoldene ekstraheredes igen i yderligere 20 dage. Efterfølgende dekantering og tilsætning af 20 volumen-% vand fraskilte methylenchloridfasen, som så kombineredes med den første methy-15 lenchloridfraktion og inddampedes, hvilket gav en inaktiv ekstrakt (812 9)·

Opløsningsmiddelopdeling. Den vandige fase fra ekstraktionen ovenfor koncentreredes til ca. 16 liter og centrifugeredes dernæst til fjernelse af det uopløselige materiale. Den klare opløsning ekstraheredes 20 dernæst med n-butanol (3 x 10 liter), og butanol ekstrakten koncentreredes til opnåelse af den butanol-opløselige fraktion (705 g). En portion (355 g) opløstes i methanol (1,5 liter), og acetone (3,5 liter) tilsat tes. Det uopløselige materiale (105 g) frafi 1 treredes, og filtratet inddampedes til opnåelse af en remanens (250 g).

25 Isolation af 7-deoxynarciclasin og pancratistatin. Den ved den fo regående opløsningsmiddelopdeling opnåede remanens behandledes med methanol (1,5 liter) og filtreredes derefter til opnåelse af et fast stof (2 g), som viste sig at være pancratistatin. Filtratet kromatograferedes på "Sephadex LH-20" (2 kg, 105 x 10 cm) under anvendelse af methanol som 30 elueringsmiddel og kontrol af fraktionerne ved tyndtlagskromatografi. Fraktioner, der indeholdt komponenten Rp 0,37, kombineredes, koncentreredes og filtreredes til opnåelse af 7-deoxynarciclasin (10 g), der krystalliseredes fra eddikesyremethanol som fine nåle, smp. 251-252° (lit.

214,5-216,5° (9), 230° (dek.) (12)), [a]33 + 157,3° (c 0,96, DMS0), ei 35 ms: m/e 291 (M+, C^H^NOg), *^0H(log Σ) 233 (4,14), 248 (4,15) og 302 (3,75) nm, ir (KBr) 3450, 3250, 1672, 1632, 1620, 1602, 1505, 1473, 1415, 1400, 1340, 1320, 1270, 1250, 1080, 1045, 1015, 976, 940, 890, 785, 700, 670 og 623 cm"*, *H nmr (pyridin-dg)5, 4,81-

DK 166085B

9 4,92 (2H), 5,0-5,35 (2H), 6,05 (2H, d, J=a3 Hz), 6,72 (IH, br, s), 7,33 (IH, s), 8,06 (IH, s), 8,57 (IH, br, s, fjernet ved D2-udveksl i ng) og 7,0-8,6 (br pukkel, fjernet med D^O) ppm, nmr (DMSO-dg) δ 163,12, 150,58, 147,72, 131,70, 130,01, 123,61, 121,95, 106,19, 103,24, 101,81, 5 72,56, 69,21 og 52,74 ppm (et carbonatom maskeret med DMSO: 42,77- 36,72).

Analyse: beregnet for Cj^^NOgt C, 57,73, H, 4,47, N, 4,81 fundet: C, 57,79, H, 4,49, N, 4,79.

Yderligere eluering gav fraktioner hovedsagelig indeholdende kompo-10 nenten R^ 0,48, der ved koncentration og filtrering gav pancratistatin (4,5 g). Krystallisation fra dimethyl formamid-methanol -ether gav et farveløst fast stof, smp. 320-321°C (dek.), [a]^ + 44° (c 1,0, DMS= eims m/e 325 (M+, C14H15N08), A^0H(log Σ) 209 (sh), 219 (sh), 233 (4,32), 278 (3,91) og 308 (br, sh) nm, ir (KBr) v v 3500-3200,

fiiaX

15 1675, 1615, 1600, 1500, 1465, 1445, 1420, 1375, 1350, 1300, 1230, 1200, 1160, 1118, 1085, 1070, 1040, 1030, 930, 912, 880, 840, 720, 655, 640 og 610 cm"*, *H nmr (MDS0-dg) S 3,6-4,4 (6H), 4,72-5,70 (5H, fjernet med DgO), 6,11 (2H, br, s), 6,56 (IH, s) og 13,15 (IH, fjernet med 020) ppm, nmr (DMSO-dg) δ 169,49, 152,04, 145,38, 135,63, 131,70, 107,49, 20 101,70, 97,62, 73,28, 70,19, 69,99, 68,50 og 50,46 ppm (et carbonatom maskeret med DMSO: 42,27-36,72).

Analyse: beregnet for Cj^HjgNOg: C, 51,69, H, 4,61, N, 4,31 fundet: C, 51,65, H, 4,55, N, 4,24.

25

Biologisk aktive glycosidderivater af pancratistatin fremstilles ved at koble hovedforbindelsen med passende beskyttede sukkerarter eller andre hydroxylerede forbindelser under anvendelse af velkendte fremgangsmåder (se Methods in Chemistry af R.L. Whistler og J.N. Bemiller 30 (udgivere), Academic Press, N. Y., 1972, bind 6, eller The

Carbohydrates: Chemistry and Biochemistry af W. Pigman, Academic Press, N.Y., 1981).

Derivater af pancratistatin anvendes til samme formål som pancrati-statin.

35 Som vist har pancratistatin fri hydroxyl grupper, som er tilgængelige for derivatisering. Således kan acylestere af forbindelsen også fremstilles iht. for fagmanden velkendte fremgangsmåder. Acylderi vater kan anvendes til de samme biologiske formål som stamforbindelsen.

DK 166085B

10

Syrer, som kan anvendes til acylering af en pancratistatin, omfatter: (a) mættede eller umættede, ligekædede eller forgrenede alifatiske carboxylsyrer, fx. eddikesyre, propionsyre, smørsyre, i sosmørsyre, tert-5 butyl eddikesyre, valerianesyre, isovalerianesyre, capronsyre, caprylsyre, decansyre, dodecansyre, laurinsyre, tridecansyre, myristinsyre, pen-tadecansyre, palmitinsyre, margarinesyre, stearinsyre, acrylsyre, cro-tonsyre, undecylensyre, oliesyre, hexynsyre, heptynsyre, octynsyre, o.l., (b) mættede eller umættede al i cykl i ske carboxylsyrer, fx. cyclobu-10 tancarboxylsyre, cyclopentancarboxylsyre, cyclopentencarboxylsyre, methyl cyclopentencarboxylsyre, cyclohexancarboxylsyre, dimethylcyclohexan-carboxylsyre, di propylcyclohexancarboxylsyre, o.l., (c) mættede eller umættede al icykl i sk-al ifati ske carboxylsyrer, fx. cyclopentaneddikesyre, cyclopentanpropionsyre, cyclohexaneddikesyre, cyclohexansmørsyre, me-15 thylcyclohexaneddikesyre, o.l., (d) aromatiske carboxylsyrer, fx. benzoesyre, toluensyre, naphthoesyre, ethyl benzoesyre, isobutylbenzoesyre, methyl butyl benzoesyre, o.l., og (e) aromati sk-al i fati ske carboxylsyrer, fx. phenyl eddikesyre, phenylpropionsyre, phenyl valerianesyre, kanelsyre, phenylpropionsyre og naphthyl eddikesyre, o.l. Egnede halogen-, nitro-, 20 hydroxy-, keto-, amino-, cyano-, thiocyano og lavere alkoxycarbonhydrid-carboxylsyrer omfatter carbonhydridcarboxylsyrer som anført ovenfor, der er substituerede med én eller flere grupper i form af halogen, nitro, hydroxy, keto, amino, cyano eller thiocyano, eller lavere alkoxy, fortrinsvis lavere alkoxy med højst 6 carbonatomer, fx. methoxy, ethoxy, 25 propoxy, butoxy, amyloxy, hexyloxy og isomere former deraf. Eksempler på sådanne substituerede carbonhydridcarboxylsyrer er mono-, di- og tri-chloreddikesyre, a- og ^-chlorpropionsyre, a- og γ-bromsmørsyre, a- og 5-iodvalerianesyre, mevalonsyre, 2- og 4-chlorcyclohexancarboxylsyre, shi kimsyre, 2-nitro-1-methyl-cyclobutancarboxylsyre, 1,2,3,4,5,6-hexa-30 chlorcyclohexancarboxylsyre, 3-brom-2-methylcyclohexancarboxylsyre, 4-og 5-brom-2-methylcyclohexancarboxylsyre, 5- og 6-brom-2-methylcyclohe-xancarboxylsyre, 2,3-dibrom-2-methylcyclohexancarboxylsyre, 2,5-dibrom- 2-methyl cyclohexancarboxylsyre, 4,5-dibrom-2-methylcyclohexancarboxylsy-' re, 5,6-di brom-2-methylcyclohexancarboxylsyre, 3-brom-3-methylcyclohe-35 xancarboxylsyre, 6-brom-3-methylcyclohexancarboxylsyre, 1,6-dibrom-3-methylcyclohexancarboxylsyre, 2-brom-4-methylcyclocohexancarboxylsyre, 1,2-dibrom-4-methylcyclohexancarboxylsyre, 3-brom-2,2,3-trimethylcyclo-pentancarboxylsyre, 1-brom-3,5-di methylcycl ohexancarboxylsyre, homogen-

DK 166085B

11 tisinsyre, o-, m- og p-chlorbenzoesyre, anissyre, salicylsyre, p-hydro-xybenzoesyre, b-resorcylsyre, galdesyre, veratrinsyre, trimethoxybenzoe-syre, trimethoxykanel syre, 4,4/-dichlorbenzilsyre, o-, m- og p-nitroben-zoesyre, cyanoeddikesyre, 3,4- og 3,5-dinitrobenzoesyre, 2,4,6-trinitro-• 5 benzoesyre, thiocyanoeddikesyre, cyanopropionsyre, mælkesyre, ethoxymy-resyre (ethylhydrogencarbonat), æblesyre, citronsyre, isocitronsyre, 6-methylsalicyl syre, mandelsyre, levulinsyre, pyrodruesyre, glycin, ala-nin, val in, isoleucin, leucin, phenylalanin, prolin, serin, threonin, tyrosin, hydroxyprolin, ornithin, lysin, arginin, histidin, hydroxyly-10 sin, phenylglycin, p-aminobenzoesyre, m-aminobenzoesyre, anthranilsyre, asparaginsyre, glutaminsyre, aminoadipinsyre, glutamin, asparagin, o.l.

Pancratistatinpentaacetat fremstilledes ved omsætning af pancrati-statin (0,5 g) med eddikesyreanhydrid (2 ml) og pyridin (2 ml) ved stuetemperatur i 48 timer. Produktet (0,5 g), opnået ved tilsætning til is-15 vand og filtrering, kromatograferedes på "Sephadex LH-20" (100 g under anvendelse af methanol-methylenchlorid (3:2) som elueringsmiddel til opnåelse af det amorfe pentaacetat, smp. 162-166°, [a]^ + 85° (c 1,0, CHCI3), eims m/e 535 (M+, C24H25N013), λ^|0Η(1θ9 Σ) 227 (4,31), 247 (sh), 271 (sh) og 299 (3,75 nm), ir (KBr) v 3370, 1760, 20 1680, 1635, 1510, 1490, 1375, 1340, 1295, 1250, 1220, 1180, 1080, 1045, 950, 930, 860, 815, 758 og 640 cm"1, lH nmr (90 MHz, CDC13) S 2,06 (6H, s), 2,08 (3H, s), 2,17 (3H, s), 2,37 (3H, s), 3,43 (IH, dd, J=12,3 og 2,5 Hz), 4,26 (IH, dd, J-12,5 og 11,7 Hz), 5,14 (IH, dd, J-11,7 og 3,3 Hz), 5,22 (IH, dd, J=2,9 og 2,9 Hz), 5,45 (IH, m), 5,56 (IH, m), 5,76 25 (IH, br, s, fjernet med D20), 6,08 (2H, br, s) og 6,48 (IH, s) ppm, 13C nmr (C0C13) S 170,08, 169,69, 169,07, 169,01, 168,29, 162,96, 152,60, 139,86, 134,53, 132,90, 116,20, 102,94, 101,84, 71,68, 67,69, 66,84, 66,42, 47,86, 40,00, 20,86 og 20,70 (sidste to signaler 5C) ppm.

Analyse: beregnet for C24H25N013: C’ 53’83> 4,67, N» 2,62 30 fundet: C, 53,75, H, 4,68, N, 2,61.

Pancratistatinmethylether fremstilledes ved omsætning af pancrati-statin (0,33 g) i methanol (100 ml) med overskud af diazomethan i ether.

Efter omrøring i 8 timer ved stuetemperatur tilsattes en yderligere mængde diazomethan og omrøring fortsattes i 8 timer. Afdampning af op-35 løsningsmidlet gav et produkt (0,34 g), der kromatograferedes på "Sephadex LH-20" under anvendelse af methanol som elueringsmiddel til opnåelse af methyletheren (0,1 g). Krystallisation fra methanol gav farveløse plader, smp. 294-298° (dek.), [a]25 + 289,9° (c 0,69, DMS0), ir (KBr)

DK 166085B

12 »/ 3500, 3400, 3300, 1635, 1600, 1485, 1450, 1390, 1343, 1298, 1226,

MidX

1207, 1152, 1122, 1090, 1060, 1035, 967, 937, 920, 880, 840, 795, 724, 660 og 620 cm'1, lti nmr (DMSO-dg) 3,58-4,44 (6H), 3,88 (3H, $), 4,70- 5,50 (4H, fjernet med DgO), 6,13 (2H, d, J=5 Hz), 6,74 (IH, s) og 6,92 5 (IH, fjernet med D2O) ppm.

Analyse: beregnet for C, 53,10, H, 5,01, N, 4,13 fundet: C, 53,44, H, 5,06, N, 4,08.

Administreringen af pancratistatin og dens farmakologisk aktive, fysiologisk forenelige derivater kan anvendes til behandling af dyr el-10 ler mennesker, som lider af en neoplastisk sygdom, fx. akut myelocytisk leukæmi, akut lymfocytisk leukæmi, ondartet melanom, lunge-adenocarci-nom, neuroblastoma, små-cellet lungecarcinom, brystcarcinom, tarmcarci-nom, ovariecarcinom, blærecarcinom, o.l.

Den administrerede dosis vil være afhængig af den neoplasti ske syg-15 doms art, typen af den involverede vært inkl. dennes alder, helbred og vægt, arten af en eventuel sideløbende behandling, behandlingens hyppighed og terapeutiske forhold.

Eksempelvis er doseringsniveauer af de administrerede aktive bestanddele: intravenøs, 0,1 til ca. 200 mg/kg, intramuskulær, 1 til ca.

20 500 mg/kg, oral, 5 til ca. 1000 mg/kg, intranasal indgivelse, 5 til ca.

1000 mg/kg, og aerosol, 5 til ca. 1000 mg/kg af værtens legemsvægt.

Hvad angår koncentration kan en aktiv bestanddel være til stede i præparatet ifølge den foreliggende opfindelse til lokal anvendelse omkring cutis, intranasalt, pharyngolaryngalt, bronkialt, bronkolialt, in-25 travaginalt, rektalt eller okulært i en koncentration fra ca. 0,01 til ca. 50 vægt/vægt-% af præparatet, fortrinsvis ca. 1 til ca. 20 vægt/-vægt-% af præparatet, og til parenteral anvendelse i en koncentration fra ca. 0,05 til ca. 50 vægt/vol.-% af præparat og fortrinsvis fra ca. 5 til ca. 20 vægt/vol.-%.

30 Præparaterne ifølge opfindelsen anvendes fortrinsvis til admini strering til mennesker og dyr i enhedsdosisform såsom tabletter, kapsler, piller, pulvere, granulater, suppositorier, sterile parenterale opløsninger eller suspensioner, sterile ikke-parenterale opløsninger eller suspensioner og orale opløsninger eller suspensioner o.l., der indehold-35 er passende mængder af en aktiv bestanddel.

Til oral administrering kan enten fremstilles faste eller flydende enhedsdosisformer.

Pulvere fremstilles ganske enkelt ved at findele den aktive be-

DK 166085B

13 standdel til en egnet fin størrelse og blande den med et på lignende vis findelt fortyndingsmiddel. Fortyndingsmidlet kan være et spiseligt car-bohydratmateriale såsom laktose eller stivelse. Fortrinsvis anvendes et sødemiddel eller sukker samt en smagsgivende olie.

5 Kapsler fremstilles ved at fremstille en pulverblanding som beskre vet ovenfor og fylde den i formede gelatinehylstre. Fortrinsvis sættes som et hjælpemiddel for påfyldningsoperationen et smøremiddel såsom talkum, magnesiumstearat, calciumstearat o.l. til pulverblandingen før påfyldningsoperationen.

10 Bløde gelatinekapsler fremstilles ved maskinel indkapsling af en opslæmning af aktive bestanddele med en acceptabel vegetabilsk olie, let parafinolie eller en anden inert olie eller et triglycerid.

Tabletter fremstilles ved at fremstille en pulverblanding, granulere eller slå den, tilsætte et smøremiddel og presse den til tabletter.

15 Pulverblandingen fremstilles ved at blande en aktiv bestanddel, som er findelt på passende måde, med et fortyndingsmiddel eller en base såsom stivelse, laktose, kaolin, dicalciumphosphat o.l. Pulverblandingen kan granuleres ved at befugte den med et bindemiddel såsom majssirup, gelatineopløsning, methylcelluloseopløsning eller gummislim og tvinge den 20 gennem en sigte. Som et alternativ til granulering kan pulverblandingen slås, dvs. køres gennem tabletmaskinen, og den resulterende uregelmæssigt formede tablet brækkes i stykker (slugs). Disse stykker kan smøres for at undgå fasthængning til tabletdannelsesmatricerne ved at tilsætte stearinsyre, et stearinsalt, talkum eller en mineralolie. Den 25 smurte blanding komprimeres så til tabletter.

Tabletten kan med fordel forsynes med et beskyttende overtræk bestående af et forsegl ende eller enterisk overtræk af shellak, et overtræk af sukker og methyl cel lul ose og et politurovertræk af carnaubavoks.

Der kan fremstilles flydende enhedsdosisformer til oral administre-30 ring såsom syruper, eleksirer og suspensioner, hvori hver teskefuld af præparatet indeholder en forudbestemt mængde aktiv bestanddel til administrering. De vandopløselige former kan opløses i et vandigt bæremedium sammen med sukker, smagsgivende midler og konserveringsmidler til dannelse af en syrup. En eleksir fremstilles under anvendelse af et hydro-35 alkoholisk bæremedium sammen med egnede sødemidler og et smagsgivende middel. Suspensioner kan fremstilles ud fra de uopløselige former sammen med et egnet bæremedium ved hjælp af et suspenderingsmiddel såsom akacia, tragakant, methyl cel lul ose o.l.

DK 166085 B

14

Til parenteral administrering fremstilles flydende enhedsdosisformer under anvendelse af en aktiv bestanddel og et sterilt bæremedium, hvorved vand foretrækkes. Den aktive bestanddel kan, i afhængighed af den anvendte form og koncentration, enten suspenderes eller opløses i 5 bæremediet. Ved fremstilling af opløsninger kan den vandopløselige aktive bestanddel opløses i vand til injektion og filter-steriliseres før den fyldes i en egnet hætteflaske eller ampul og forsegles. Adjuvanser såsom et lokalanæstetiserende middel, konserverings- og puffermidler kan med fordel opløses i bæremediet. Parenterale suspensioner fremstilles på 10 i det væsentlige samme måde med undtagelse af, at den aktive bestanddel suspenderes i bæremediet i stedet for at blive opløst, og at sterilisering ikke kan tilvejebringes ved filtrering. Den aktive bestanddel kan steriliseres ved at udsætte den for ethylenoxid før den suspenderes i det sterile bæremedium. Et overfladeaktivt middel eller befugtningsmid-15 del kan med fordel inkorporeres i præparatet for at lette en ensartet fordeling af den aktive bestanddel.

Udover oral og parenteral administrering kan rektale og vaginale veje anvendes. En aktiv bestanddel kan administreres ved hjælp af et suppositorium. Et bæremmedium, som har et smeltepunkt på ca. legemstem-20 peratur eller et let opløseligt bæremedium kan anvendes. Eksempelvis kan kakaosmør og forskellige polyethylenglycoler ("Carbowax"er) tjene som bæremediet.

Til intranasal indgivelse fremstilles en flydende enhedsdosisform under anvendelse af en aktiv bestanddel og et egnet farmaceutisk bæreme-25 dium, fortrinsvis P.F.-vand, et tørt pulver kan formuleres, når administration ved indblæsning vælges.

Til brug som aerosoler kan de aktive bestanddele være emballeret i en aerosol-trykbeholder sammen med et gasformigt eller flydende drivmiddel, fx. dichlordifluormethan, carbondioxid, nitrogen, propan, o.l, med 30 de sædvanlige adjuvanser såsom coopløsningsmidler og befugtningsmidler i den udstrækning, de er nødvendige eller ønskværdige.

Udtrykket "enhedsdosisform" som anvendt i beskrivelsen og kravene, henviser til fysisk adskilte enheder, der er egnede som enhedsdoser for mennesker og dyr, idet hver enhed indeholder en forudbestemt mængde ak-35 tivt materiale, som er beregnet til at frembringe den ønskede terapeutiske virkning i forbindelse med det nødvendige farmaceutiske fortyndingsmiddel, bæremedium eller vehikel. Specifikationerne for de hidtil ukendte enhedsdosisformer ifølge opfindelsen er bestemt af og umiddel-

DK 166085B

15 bart afhængige af (a) de enestående karakteristika af det aktive materiale og den specielle terapeutiske virkning, som skal opnås, og (b) den begrænsning, der ligger i at sammensætte et sådant aktivt materiale til terapeutisk brug hos mennesker som beskrevet i den foreliggende beskri -5 velse, idet disse er aspekter af den foreliggende opfindelse. Eksempler på egnede enhedsdosisformer i overensstemmelse med opfindelsen er tabletter, kapsler, sugetabletter, suppositorier, pulverpakninger, oblater, oblatkapsler, teskefulde, spiseskefulde, pipettefulde, ampuller, hætteglas- eller -flasker, adskilte multipla af enhver af de foregående 10 og andre former som beskrevet heri.

De aktive bestanddele, der skal anvendes som antineoplastiske midler, kan let fremstilles i en sådan enhedsdosisform under anvendelse af farmaceutiske materialer, som kan fås inden for området, og kan fremstilles ved hjælp af kendte fremgangsmåder. De følgende præparater skal 15 tjene til belysning af fremstillingen af enhedsdosisformerne ifølge den foreliggende opfindelse.

Eksempel 1

Ved udførelsen af den foreliggende opfindelse fremstilledes for-20 skellige dosisformer. De er vist i de efterfølgende eksempler, hvori udtrykket "aktiv bestanddel" står for en af de antineoplastiske phenan-thridoner ifølge opfindelsen.

Præparat "A" 25 Hårde gelatinekapsler 1000 todelte hårde gelatinekapsler til oral brug, hver kapsel indeholdende 200 mg aktiv bestanddel, fremstilles ud fra de følgende ingredienstyper og -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 200 g 30 Majsstivelse 20 g

Talkum 20 g

Magnesiumstearat 2 g

Den ved hjælp af en luftmikronisator fint fordelte aktive bestanddel sættes til de andre fint pulveriserede bestanddele, blandes grundigt 35 og indkapsl es dernæst på sædvanlig måde.

De beskrevne kapsler kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom ved oral administrering af én eller to kapsler 1-4 gange daglig.

Under anvendelse af den ovenfor beskrevne fremgangsmåde fremstilles

DK 166085 B

16 lignende kapsler, der indeholder en aktiv bestanddel i en mængde på 50, 250 og 500 mg, ved at erstatte de ovenfor anvendte 200 g med 50 g, 250 g og 500 g aktiv bestanddel.

5 Præparat "B"

Bløde qelatinekapsler

Bløde gelatinekapsler i ét stykke til oral brug, hver indeholdende 200 mg aktiv bestanddel (fi ndelt ved hjælp af en luftmikronisator), fremstilles ved først at suspendere forbindelsen i 0,5 ml majsolie for 10 at gøre materialet egnet til indkapsling, og efterfølgende indkapsling på den ovenfor beskrevne måde.

De beskrevne kapsler kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom ved oral administrering af én eller to kapsler 1-4 gange daglig.

15 Præparat "C"

Tab!etter 1000 tabletter, der hver indeholder 200 mg aktiv bestanddel, fremstilles ud fra de følgende ingredienstyper og -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 200 g 20 Laktose 300 g

Majsstivelse 50 g

Magnesiumstearat 4 g

Let parafinolie 5 g

Den ved hjælp af en luftmikronisator findelte aktive bestanddel 25 sættes til de andre bestanddele og blandes og slås derefter grundigt. Stykkerne neddeles ved at tvinge dem gennem en sigte nr. 16. Det resulterende granulat komprimeres dernæst til tabletter, hvor hver tablet indeholder 200 mg aktiv bestanddel.

De beskrevne tabletter kan anvendes til behandling af en neopla-30 stisk sygdom ved oral administrering af én eller to tabletter 1-4 gange daglig.

Under anvendelse af den ovenfor beskrevne fremgangsmåde kan lignende tabletter, som indeholder en aktiv bestanddel i en mængde på 250 mg og 100 mg, fremstilles ved at erstatte de ovenfor anvendte 200 g med 250 35 g og 100 g aktiv bestanddel.

DK 166085B

17

Præparat "D"

Oral suspension 1000 ml vandig suspension til oral brug, der i hver teskefuld (5 ml) dosis indeholder 50 mg aktiv bestanddel, fremstilles ud fra de føl -5 gende ingredienstyper og -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 10 g

Citronsyre 2 g

Benzoesyre 1 g

Saccharose 790 g 10 Tragakant 5 g

Citronolie 2 g

Afioniseret vand, q.s. 1000 ml.

Citronsyren, benzoesyren, saccharosen, tragakanten og citronolien dispergeres i en tilstrækkelig mængde vand til fremstilling af 850 ml 15 suspension. Den ved hjælp af en luftmikronisator findelte aktive bestanddel røres i syrupen, indtil den er ensartet fordelt. Der tilsættes en tilstrækkelig mængde vand til fremstilling af 1000 ml.

Det således fremstillede præparat kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom i en dosis på 1 spiseskefuld (15 ml) tre gange dag-20 lig.

Præparat "E"

Parenteralt produkt

En steril vandig suspension til parenteral injektion indeholdende 25 300 mg aktiv bestanddel i 1 ml til behandling af en neoplastisk sygdom fremstilles ud fra de følgende ingredienstyper og -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 30 g "Polysorbat 80" 5 g

Methyl paraben 2,5 g 30 Propylparaben 0,17 g

Vand til injektion, q.s. 1000 ml.

Alle bestanddele med undtagelse af den aktive bestanddel opløses i vandet, og opløsningen steriliseres ved filtrering. Til den sterile opløsning sættes den ved hjælp af en luftmikronisator findelte, sterilise-35 rede aktive bestanddel, og slutsuspensionen fyldes i sterile hætteglas, som forsegles.

Det således fremstillede præparat kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom i en dosis på 1 ml tre gange daglig.

DK 166085B

18

Præparat "F"

Suppositorium, rektalt og vaginalt 1000 suppositorier, hver med en vægt på 2,5 g og indeholdende 200 mg aktiv bestanddel, fremstilles ud fra de følgende ingredienstyper og 5 -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 15 g

Propylenglycol 150 g

Polyethylenglycol 4000, q.s. 2500 g.

Den aktive bestanddel findeles ved hjælp af en luftmikronisator og 10 sættes til propylenglycolen, og blandingen ledes gennem en kolloidmølle, indtil den er ensartet dispergeret. Polyethylenglycolen smeltes, og pro-pylenglycoldispersionen tilsættes langsomt under omrøring. Suspensionen hældes i ikke afkølede forme ved 40°C. Præparatet får lov til at afkøle og størkne og fjernes dernæst fra formen, og hvert suppositorium pakkes 15 ind i folie.

De beskrevne suppositorier indføres rektalt eller vaginalt til behandling af en neoplastisk sygdom.

Præparat "G" 20 Intranasal suspension 1000 mg af en steril vandig suspension til intranasal indgivelse, der i hver ml indeholder 200 mg aktiv bestanddel, fremstilles ud fra de følgende ingredienstyper og -mængder:

Aktiv bestanddel, mikroniseret 15 g 25 "Polysorbat 80" 5 g

Methyl paraben 2,5 g

Propylparaben 0,17 g

Afioniseret vand, q.s. 1000 ml.

Alle bestanddele med undtagelse af den aktive bestanddel opløses i 30 vandet, og opløsningen steriliseres ved filtrering. Til den sterile opløsning sættes den ved hjælp af en luftmikronisator findelte, steriliserede aktive bestanddel, og slutsuspensionen fyldes på aseptisk måde i sterile beholdere.

Det således fremstillede præparat kan anvendes til behandling af en 35 neoplastisk sygdom ved intranasal indgivelse af 0,2 til 0,5 ml indgivet 1-4 gange daglig.

Som vist i eksemplerne 12-14 kan en aktiv bestanddel også være til stede i den ufortyndede rene form til lokal brug omkring cutis, intrana-

DK 166085B

19 salt, pharyngolaryngealt, bronkialt, bronkolialt eller oralt.

Præparat "H"

Pulver 5 5 g aktiv bestanddel i løs form findeles ved hjælp af en luftmikro- nisator. Det mikroniserede pulver anbringes i en beholder af strødåsety-pe.

Det beskrevne præparat kan anvendes til behandling af en neopla-stisk sygdom på lokale steder ved påføring af et pulver 1-4 gange dag-10 lig.

Præparat "I"

Oralt pulver 100 g aktiv bestanddel i løs form findeles ved hjælp af en luftmi -15 kronisator. Det mikroniserede pulver opdeles i enkelte doser på 200 mg og emballeres.

De beskrevne pulvere kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom ved oral administrering af 1 eller 2 pulvere suspenderet i et glas vand 1-4 gange daglig.

20

Præparat "J"

Inhalering 100 g aktiv bestanddel i løs form findeles ved hjælp af en luftmi-kronisator.

25 Det beskrevne præparat kan anvendes til behandling af en neoplastisk sygdom ved inhalering af 300 mg 1-4 gange daglig.

Præparat "K" Hårde gelatinekapsler 30 100 todelte hårde gelatinekapsler til oral brug, hver kapsel inde holdende 200 mg aktiv bestanddel.

Den aktive bestanddel findeles ved hjælp af en luftmikronisator og indkapsles på sædvanlig måde.

De beskrevne kapsler kan anvendes til behandling af en neoplastisk 35 sygdom ved oral administrering af 1 til 2 kapsler 1-4 gange daglig.

Under anvendelse af den ovenfor beskrevne fremgangsmåde kan der fremstilles lignende kapsler indeholdende aktiv bestanddel i en mængde på 50, 250 og 500 mg, ved at erstatte de ovenfor anvendte 200 g med 50

DK 166085 B

20 g, 250 g og 500 g aktiv bestanddel.

Eksempel 2

Enhedsdosisformer af pancratistatin fremstillet iht. i eksempel 1 5 beskrevne udvalgte præparater screenedes under anvendelse af den i

Cancer Chemotherapy Reports, del 3, bind 3, nr. 2, september 1972, pp. 9 og følgende sider beskrevne forskrift 1.200 for lymfocytisk leukæmi P386. Pancratistatin tilvejebragte en levetidsforlængelse på 38-106% ved 0,75-12,5 mg/kg af værtens legemsvægt over for P388 lymfocytisk leukæmi 10 fra mus. Pancratistatin inhiberede også markant væksten af P388 in vitro cellelinien (ED^q, 0,001 /ig/ml).

Eksempel 3 (Sammenligning)

Enhedsdosisformer af 7-deoxynarciclasin fremstilledes iht. eksempel 15 1 og screenedes under anvendelse af forskrifter godkendt af The National Cancer Institute. Med præparatet opnåedes indtil 61% levetidsforlængelse ved 12 mg per kg af værtens legemsvægt over for P388 lymfocytisk leukæmi fra mus og en ED^q på 0,02 μq per ml over for P388 cellelinien. En fordobling af dosen gav ingen forøgelse af levetidsforlængelsen.

20

Eksempel 4

En enhedsdosisform af pancratistatin fremstillet iht. eksempel 1 afprøvedes med M5074 muse-ovariesarkom og tilvejebragte en levetidsforlængelse på 53-84% ved 0,38 til 3,0 mg aktiv reagens/kg af værtens le-25 gemsvægt under anvendelse af den af The National Cancer Institute godkendte forskrift mht. levetidsforlængelse.

Eksempel 5

En enhedsdosisform af pancratistatin fremstillet iht. eksempel 1 30 afprøvedes efter den af The National Cancer Institute godkendte forskrift for helbredelsesrate over for M5074 muse-ovariesarkom og tilvejebragte en helbredelsesrate på 50% ved 6 mg/kg af værtens legemsvægt.

Claims (7)

1. Antineoplastisk phenanthridon, KENDETEGNET ved, at den har strukturformlen

5 ORj R^O O R 2 10 10b H 0Ri \ JL . 5nh 0·^Γ%5>/\ν OR O 10 hvori R betyder H, CH^ eller en fysiologisk hydrolyserbar acylgruppe fra en alifatisk, al i cykl i sk, al i cykl i sk-ali fatisk, aromatisk eller aroma-ti sk-al i fatisk carboxylsyre, isar en acetylgruppe, mens Rj, R2, R3 og R^ hver især betyder H eller en fysiologisk hydrolyserbar acylgruppe fra en 15 alifatisk, al i cykl i sk, alicykli sk-ali fatisk, aromatisk eller aromatiskal i fat i sk carboxylsyre, især en acetylgruppe.

2. Antineoplastisk phenanthridon ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at R - R1=R2=R3=R4=H. 20

3. Farmaceutisk præparat, KENDETEGNET ved, at det som sin aktive hovedbestanddel indeholder en effektiv mængde af en phenanthridon ifølge krav 1.

4. Farmaceutisk præparat ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, at RssRj=R2ssR3=H.

5. Anvendelse af en phenanthridon ifølge krav 1 til fremstilling af et farmaceutisk præparat til behandling af en vært, som er angrebet 30 af en neoplastisk sygdom. 1 35 Anvendelse ifølge krav 5, KENDETEGNET ved, at phenanthridonen er pancratistatin. DK 166085B

7. Anvendelse ifølge krav 5, til fremstilling af et farmaceutisk prsparat til intravenøs administrering i et dosisniveau fra 0,1 op til ca. 200 mg/kg af værtens legemsvægt, til subkutan administrering i et dosisniveau fra ca. 1 op til ca. 500 mg/kg af værtens legemsvægt, eTler 5 til oral administrering i et dosisniveau fra ca. 5 op til ca. 1000 mg/kg af værtens legemsvægt. 10 15