DK161366B - Fremgangsmaade til inaktivering af formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere - Google Patents
Fremgangsmaade til inaktivering af formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere Download PDFInfo
- Publication number
- DK161366B DK161366B DK439485A DK439485A DK161366B DK 161366 B DK161366 B DK 161366B DK 439485 A DK439485 A DK 439485A DK 439485 A DK439485 A DK 439485A DK 161366 B DK161366 B DK 161366B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- fibrinogen
- factor xiii
- tissue adhesive
- virus
- heating
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
- A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
- A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
- A61L2/0023—Heat
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Optical Filters (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Harvester Elements (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
- Filtering Materials (AREA)
- Networks Using Active Elements (AREA)
Description
DK 161366 B
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til inaktivering af formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere i fibrinogen- og faktor XIII-holdige vævsklæbestoffer med en høj grad af bibeholdelse af disses biologiske aktivitet.
5 Vævsklæbestoffer fremstilles ud fra menneske- eller dyreblod eller menneske- eller dyreplasma, og tjener til fysiologisk sammenklæbning af vævs- eller knogledele, sårforseg1 ing, blodstandsning og fremme af sårheling. De indeholder som vi rksomme 10 bestanddele fibrinogen og faktor XIII og kan eventuelt indeholde yderligere plasmaproteiner, såsom fibronectin, albumin, plasminogen-aktivator-inhibitorer og/eller plasmininhibitorer, samt yderligere tilsætninger. Et sådant vævsklæbestof er f.eks. beskrevet i GB-offentliggørelsesskrift nr. 2.041.942.
15
Disse vævsklæbestoffers virkningsmåde beror på omdannelsen af opløseligt fibrinogen til uopløseligt fibrin, på aktiveringen af faktor XIII til faktor XHIa ved hjælp af thrombin i nærværelse af Ca2 + -ioner og på tværbindingen af det dannede fi-20 brin ved hjælp af faktor XHIa til en højpolymer. Tværbindingen af fibrin, især af fibrin-a-kæderne, får derved særlig betydning, fordi styrken af de dannede blodklumper og dermed sammenklæbningen forøges væsentligt (L.L.Shen, R.P. McDonagh, J. Hermans jr.: "Fibringel structure: influence of calcium and 25 covalent crosslinking on the elasticity". Biochem. Biophys.
Res. Comm. 56, 793-798, 1974, T. Seelich, H. Red!: Theoretis-che Grundlagen des Fibrinklebers" i: K. Schimpf: "Fibrinogen, Fibrin und Fibrinkleber", F.K. Schattauer Verlag, Stuttgart-
New York, 199-208, 1980).
30
Kvaliteten af et vævsklæbestof afhænger således i væsentlig grad af dettes indhold af opløseligt, intakt og med thrombin koagulerbart fibrinogen og af det dannede fibrins tværbindingsevne ved hjælp af den tilstedeværende faktor XIII.
På trods af omhyggelig undersøgelse af udgangsprodukterne ved fremstilling af blodpræparater er der en ikke ringe risiko for, 35 2
DK 1613 6 6 B
at patienter efter en behandling bliver syge på grund af mikrobielle infektioner. Der gøres ganske vist flere bestræbelser på at inaktivere sygdomsfremkaldere, men præparatets sikkerhed sikres imidlertid ikke altid, eller også påvirkes 5 det vi rksomme stofs biologiske aktivitet.
For præparater, der er bestemt til infusionsformål, er det muligt at kompensere for tab i biologisk aktivitet ved tilsvarende højere dosering, hvilket ganske vist påvirker produk-10 ternes lønsomhed, men ikke deres virkning. For vævsklæbestoffer er det i midlertid ikke muligt at kompensere for en formindsket biologisk aktivitet (udtrykt i indhold af intakt, opløseligt, med thrombin koagulerbart fibrinogen og tværbindingsevnen af det derudfra dannede fibrin) ved højere dosering, 15 idet en sammenklæbning på ingen måde bliver stærkere ved, at man anvender mere klæbestof af ringere kvalitet. Det er desuden kendt, at tværbundet fibrin stimulerer fi brobiastvæksten og dermed sårhelingen, mens fibrinogen og ikke tværbundet fibrin næppe viser denne ønskede virkning (S. Kasai, T. Kunimo-20 to, K. Nitta: "Cross-linking of fibrin by activated factor XIII stimulates attachment, morphological changes and proliferation of fibroblasts", Biomed. Res 4, 155-160, 1983).
Ud fra den ovenstående fremstilling fremkommer kravet om, at 25 inaktiveringsfremgangsmåder til vævsklæbestofpræparater ikke kun skal udvise en høj virkning over for formeringsdygtige, fi 1 — trerbare sygdomsfremkaldere, såsom vira, men også at præparaternes biologiske aktivitet i vidt omfang bibeholdes.
30 Der kendes forskellige fremgangsmåder, ved hvilke blodprodukter underkastes en varmebehandling med det formål at inaktivere formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere i blodprodukter.
35 Således beskrives i den offentliggjorte PCT-ansøgning W0 82/03871 en fremgangsmåde til behandling af tilberedninger indeholdende blodkoaguleringsenzymer, hvorved disse tilberednin-
DK 161366 B
3 ger opvarmes i tør tilstand til inaktivering af tilstedevær-ende infektiøse vira. Ved "tør tilstand" forstås et vandindhold indtil 0,05 (5 vægt%). De der anførte tilberedninger indeholder imidlertid intet fibrinogen og ingen faktor XIII.
5 Det drejer sig ikke om vævsklæbestofpræparater.
En lignende fremgangsmåde er beskrevet i EP-A2 nr. 94.611 for faktor VIII-holdige sammensætninger.
10 Rosenberg et al. beskriver i en afhandling til XII international Congress on Blood Transfusion, Abstracts , "MIR" Publishers, Moscow 1969, side 473-475, en fremgangsmåde til inaktivering af albuminholdige præparater og fibrinogen i tør tilstand ved 10 timers opvarmning til 60°C. Disse præparater til 15 intravenøs indgift var bestemt til behandling af fibrinogen-mangeltiIstande, hvorved fibrinogenet skulle være opløseligt og koagu1erbart. Disse præparater indeholdt ingen faktor XIII og var ikke bestemt til vævssammenklæbning.
20 Desuden kendes ifølge publikationen EP-A-103 196 en fremgangsmåde til fremstilling af et vævsk læbestofpræparat, ved hvilken en vævsklæbestofopløsning opvarmes i nærværelse af calciumioner samt store mængder saccharose og glycin som stabilisatorer under frakt i oner ingsprocessen.Fremgangsmåden har imidlertid 25 den ulempe, at der under opvarmningen skal tilsættes store mængder stabiliseringsmidler, som derefter igen skal fjernes. Derved denatureres en del af fibrinogenet, som må fjernes efter opvarmningstri nnet. Derudover har behandlinger af denne slags den ulempe, at de tilsatte stabilisatorer ikke kun sta-30 bi liserer proteinerne, men også de eventuelt tilstedeværende vira mod varme. En sådan fremgangsmådes virkningsfuldhed er dermed på ingen måde at sammenligne med virkningsfuldheden af den standardiserede varmebehandling af albuminopløsninger (io timers opvarmning til 60°C), da denne på grund af albuminmole-35 kylets usædvanligt store varmestabilitet kan gennemføres uden tilsætning af større mængder stabi1 isatorer.
DK 161366 B
4 I EP-A-142.059 beskrives en fremgangsmåde til varmebehandling af viruskontaminerede plasmaproteiner, herunder koaguleringsfaktorerne II, V, VII, VIII, IX, X og fibrinogen, plasminogen og thrombin, hvorved præparaterne opvarmes i tør tilstand i 5 nærværelse af en sur aminosyre og en basisk aminosyre. Ud fra kombinationen af syrerne forventes en stabiliserende virkning på plasmaproteinerne. Denne stabiliserende virkning strækker sig dog også til viraene, således at inaktiveringen trækkes i langdrag og vanskeliggøres.
:o
Opfindelsen har til formål at undgå ulemperne ved de kendte inaktiveringsfremgangsmåder og har til opgave at tilvejebringe et vævsklæbestofpræparat af menneskelig eller dyrisk oprindelse, hvilket præparat udviser en stor sikkerhed overfor 15 formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere, såsom vira, og hvis biologiske aktivitet i vidt omfang bibeholdes, dvs. at fibrinogenet forbliver opløseligt i høj koncentration og forbliver koagulerbart med thrombin, og at det dannede fibrin udviser en stor tværbindingsevne. Især skal der efter en be-20 handling med vævsklæbestoffet, fremstillet ifølge opfindelsen, efter sårbehandling sikres en tilstrækkelig styrke af klæbestedet og en hurtig komplikationsfri sårheling.
Dette formål opnås ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som 25 er ejendommelig ved, at man opvarmer vævsklæbestofpræparater, der udviser et mindsteindhold på 100 enheder faktor XIII/g fibrinogen, i tør tilstand i nærværelse af en oxygenfri, inert beskyttelsesgas, fortrinsvis nitrogen, eller under vakuum ved en temperatur i intervallet fra 50 til 120°C i et tids-30 rum på mindst 1 minut.
Ved "tør tilstand" forstås et vandindhold indtil 0,05 (5 vægt%). Den højeste temperatur svarer til den korteste opvarmningstid. Varmebehandlingen kan gennemføres på et hvilket som 35 helst trin i fremstillingsprocessen og/eller efter påfyldning af præparatet i siutbeholderen.
Den "tørre tilstand" af vævsklæbestofpræparatet kan foranledi- ges eller sikres ved tørring med vandbindende midler, såsom phosphorpentoxid.
5
DK 161366 B
5 Ifølge en foretrukken udførelsesform fremstilles et vævsklæbestofpræparat ved fraktionering af humant kryopræcipitat og tilsætning af yderligere faktor XIII ud over det naturlige indhold af faktor XIII, fortrinsvis indtil opnåelse af et totalindhold af faktor XIII på ca. 500 enheder/g fibrinogen, 10 hvor varmebehandlingen kan gennemføres på et hvilket som helst trin af fraktioneringsprocessen og/eller efter påfyldning af præparatet i siutbeholderen.
Det varmebehandlede præparat kan fordelagtigt lagres i tør 15 tilstand i slutbeholdere og før anvendelse opløses til en koncentration på mindst 70 mg fibrinogen pr. ml.
Det er imidlertid også muligt at opløse produktet efter opvarmningstrinnet, fylde det over i slut be holderen og for, at 20 gøre det holdbart, lagre det i dybfrossen tilstand.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen beror på hidtil ukendte erkendelser, nemlig: 25 1) Præparaternes stabilitet (evne til termisk belastning) un der varmebehandlingen er væsentligt højere under en oxygenfri beskyttelsesgas eller under vakuum end ved luftens adgang.
30 2) Vævsklæbestofpræparaters stabilitet (evne til termisk be lastning) tiltager med stigende faktor XIII-indhold, men aftager med stigende vandindhold (restfugtighed).
3) Inaktiveringsgraden af sygdomsfremkalderne ved varmebe- 35 handlingen i tør tilstand i oxygenfri atmosfære er i det væsentlige lige så høj som ved luftens adgang.
DK 161366 B
6
Disse kendsgerninger belyses ud fra resultaterne af de efterfølgende forsøg:
Forsøg 1: 5 Vævsklæbestofpræparaters stabilitet ved forskellige vandindhold, på den ene side under nitrogen eller under vakuum, på den anden side under luft.
10 Der fremstilledes et vævsklæbestofpræparat på kendt måde efter fremgangsmåden ifølge publikationen AT-B - 359.652: 277 liter ved -20°C nedfrosset, friskt, humant plasma blev opvarmet til + 2°C, det dannede kryopræcipi tat blev fraskilt ved centrifugering og behandlet med en pufferopløsning med pH-værdi 6,5, in-15 deholdende 6,6 g Na3~citrat.2H20, 3,4 g NaCl , 10,0 g glycin, 25.000 ΚΙE aprotinin og 200 I.E. heparin pr. liter, og centrifugeret endnu en gang ved +2°C. Det fraskilte bundfald blev opløst i en yderligere pufferopløsning med pH-værdi 7,9, indeholdende 19,0 g human albumin, 9,0 g glycin, 1,0 g trinatrium-20 citrat. 2H2O, 25.000 KIE aprotinin og 200 I.E. heparin pr. liter og indstillet på en proteinkoncentrat i on på 50 g pr. liter. Denne opløsning blev sterilf iltreret, fyldt over i s 1ut-beholdere (glasflasker) med hver 12,5 ml, dybfrosset og frysetørret. I det således opnåede præparat androg forholdet 25 faktor XIII: fibrinogen, udtrykt i enheder faktor XIII pr. g fibrinogen, 109. Præparatets vandindhold (restfugt ighed) androg mindre end 0,01 (1 vægt%).
Indholdet af fibrinogen blev bestemt ifølge forskriften ifølge 30 USP XVI, side 298, som det ved hjælp af thrombin koagulerbare protein efter Kjeldahi-metoden.
Indholdet af faktor XIII blev bestemt ved hjælp af en fibrin-tværbindingstest, ved hvilken der som substrat anvendes faktor 35 XIII-frit fibrinogen, på følgende måde: 0,5 ml's portioner af en faktor XIII-fri fibrinogenopløsning med et fibrinogenindhold på 10 mg/ml blandedes med portioner
DK 161366B
7 af 0,05 ml af forskellige fortyndinger af den prøve, der skulle bestemmes, og 0,1 ml's portioner af en opløsning indeholdende 60 I.E. thrombin og 130 pmol CaCl2 pr. ml og inkuberedes ved 37°C. Efter en inkubationstid på 2 timer stoppedes reak-5 tionen ved tilsætning af en blanding af urinstof, Na-dodecyl-sulfat (SDS) og /3-mercaptoethano 1, og de i proteinerne indeholdte disulfidbroer spaltedes reduktivt. Fibrin-y-kædernes tværbindingsgrad bestemtes densitometrisk efter SDS- poly-acrylamid-gelelektroforese (K. Weber, M. Osborn: "The reliabi-10 lity of molecular weight determinations by dodecyl sulfate-polyacrylamide-gel electrophoresis", J. Biol. Chem. 244, 4406-4412, 1969) af de således opnåede prøver og farvning med Coomassie-blå og tjener som mål for faktor XIII-indholdet.
15 Som standard tjente af flere portioner kombineret humant citratplasma, hvor pr. definition 1 ml plasma indeholder 1 enhed faktor XIII. De fortyndinger af prøven og af standarden, som under testbetingelserne bevirkede en 50% tværbinding af fibrin-γ-kæderne, bestemtes, og faktor XIII-indholdet i den oprindeli-20 ge prøve beregnedes efter formlen
Vx X = —
Vs 25 hvor
Vx er fortyndingen af den ukendte prøve, og Vs er fortyndingen af standarden.
30
Vandindholdet bestemtes ved ekstraktion med vandfri methanol, nemlig efter Karl Fischer's metode i en titrator ifølge den coulometriske fremgangsmåde (E. Scholz, Fresenius' Z. anal. Chem. 314, 567-571, 1983).
En del af det på den beskrevne måde opnåede frysetørrede vævsklæbestof præparat blev opløst til en proteinkoncentration på 35 8
DK 161366 B
50 mg/ml, fyldt i glasflasker med hver 2,5 ml, dybfrosset og på ny frysetørret.
Derefter blev prøverne indstillet til forskellige vandindhold, 5 nemlig med 0,007 (0,7 vægt%), 0,03 (3 vægt%) eller 0,05 (5 vægt%). Prøverne med et vandindhold på 0,007 blev lukket lufttæt enten under vakuum (< 10 Pa, dvs. < o,l mbar) eller under N2 eller under luft ved normaltryk. Prøverne med et vandindhold på 0,03 og 0,05 blev enten lukket under N2 eller under 10 luft.
Flere prøver af hver slags blev derefter opvarmet i 10 timer til 60eC, hvorpå restaktiviteten blev bestemt, dvs. indholdet af intakt, med thrombin koagulerbart fibrinogen og fibrin-a-15 kædernes tværbindingsevne som mål for den biologiske aktivi tet, hvor de frysetørrede og opvarmede, henholdsvis ikke opvarmede prøver hver blev opløst med 1,0 ml destilleret vand.
Bestemmelsen af fibriη-α-kædernes tværbindingsevne foregik ef-20 ter en tværbindingstest (T. Seelich, H. Red!.· "Theoretische
Grundlagen des Fibrinklebers" i K. Schimpf: "Fibrinogen, Fi brin und Fibrinkleber", F.K. Schattauer Verlag, Stuttgart- New York, 199-208, 1980), ved hvilken man efter sammenblanding af det opløste,brugsfærdige vævsklæbestof med samme volumen af en 25 opløsning indeholdende 40 pmol CaCl2 og 15 I.E. thrombin pr.
ml, inkuberer blandingen ved 37°C. Fibriη-α-kædernes tværbindingsgrad bestemmes dens itometri sk efter standsning af reaktionen og reduktiv spaltning af de i proteinerne indeholdte di-sulfidbroer ved tilsætning af en blanding af urinstof, Na-30 dodecylsulfat (SDS) og β-mercaptoethanol ved hjælp af SDS- polyacrylamidgelelektroforese (K. Weber, M, Osbron: "The re liability of molecular weight determinations by dodecyl sulfa-te-polyacrylamide gel electrophoresis", J.Biol. Chem. 244, 4406-4412, 1969) og farvning med Coomassie-blå.
De opnåede resultater er sammenfattet i tabel 1.
35
En ikke opvarmet prøve tjente som sammenligning for de under forskellige betingelser opvarmede prøver.
9
DK 161366 B
En sammenligning af de fundne værdier for tværbindingen af 5 fibrin-a-kæderne viser tydeligt, for det første at stabiliteten af vævsklæbestoffet ved opvarmning under N2 eller under vakuum er væsentligt bedre end under luft og for det andet, at stabiliteten aftager med stigende vandindhold.
10 15 20 25 30 35 10
DK 161366 B
CM 0) z c £_ L. 0) <U Ό Ό 85
C JZ
3 1 e n
o i Q
o C I- 5 O -I- £_ tD t- o
Ω 4- OW'JOlOi-oiH
i— -i- æNMOlDWNH
•r- 4- (0 ..“··---
H £_ OOOOOOOO
4- O) O) ro e C -r- •r- O) 4-»
C C
£ •'“CM
10 £“ Ό 1U ro c t_ > ·<- ro Q. .Ω Ή O ·μ S- 4- d) fB d) "O -H > d) 'r- I— > >
T5 -t-> C
r- ^ -ίο as a> 15 -c -μ -μ
Ό (0 O
C O) !_ •r· ac α
Ti C μ ►π ro i_ > (Οι- c n >— O) ω ¢1.51044000401 X) cn o>aiNcocoeococococot“ ro ·ι- Or o
on t— r- C 3 E
-υ (— -1-0)- d) c- ro
Δ O
« ·>- ΛΤ £_ U_ — o 4-
TS
0) a £ o o 25 4- to ω
O £- E
μ r— ftj 3
<0 ->-4- CMCM3-HCM4JCM+J
d> 4J ffl ΖΖΛί4-Ζ4-Ζ4- Q O R5 3 3 3 « Dl E > i— r- r- i— c -μ Λ! -I- ro to c > £ * æ t_ s_ 3 Π r» · rotu JU -μ > ε oooooooo Ή H" O· ’i" Η t—ί Η Η Η Η Η Φ ZS Ο Η- Η- (0 L.
d; Ό μ i— f— di ·— ο μ d) jc •i— Ό C— Er- Er- Er- r— ε c oooonoioin 35 -r-3 -r- oooooooo •Ω 3 T3 - ' roji c oooooooo μ ro ro cn > >
Forsøg 2:
DK 161366 B
11
Stabilitet af vævsklæbestofpræparater med forskelligt indhold af faktor XIII, udtrykt ved forholdet enheder faktor XIII pr.
5 gram fibrinogen:
Der fremstilledes et vævsklæbestofpræparat på samme måde som i forsøg 1. En del deraf blev opløst til en proteinkoncentration på 50 mg/ml, og opløsningen blev delt i to dele.
10
En del blev blandet med 15 enheder faktor XIII pr. ml. Begge dele blev derefter fyldt over i et antal glasflasker med 2,5 ml i hver, dybfrosset, frysetørret og lukket under N2. Indholdet af fibrinogen og faktor XIII blev bestemt som beskrevet i 15 forsøg 1, og indholdet af faktor XIII pr. gram fibrinogen blev beregnet for hvert af de to præparater.
Flere prøver af begge præparaterne blev opvarmet til 60°C eller til 80eC i forskellige tidsrum. Der blev hver gang udtaget to 20 prøver før opvarmningen og på bestemte tider under opvarmningsforløbet til måling af restaktiviteten.
Bestemmelsen af restaktiviteten foregik som beskrevet i forsøg 1. Resultaterne er sammenfattet i tabel 2.
25
En sammenligning af de fundne værdier for tværbindingen af fibrin-a-kæderne viser tydeligt, at stabiliteten af vævsklæbestof præparater tiltager med stigende indhold af faktor XIII, udtrykt som forholdet enheder faktor XIII: gram fibrinogen.
30 35
DK 161366 B
12
TJ
Φ > Φ
C C
Φ i.
u> ®
O TJ
c » λ:
S_ I
δ a 5 ·“ 1 i 4- c n i •r~ q ·· £_ i—
1—4 £ L
1-4 -Γ- O
1-4 4-4-
X
μ- tn £_ ro S_ t-4 C- O C—(O IO MO Ol IO O) o φ ooroioto'ioiæcot-t'ro v u> £ - '.....' ' ' ~ . n x. c · r- ooooooooooo J-u ro -1-+4
<4- TJ
C CM
+4 ·<- Φ Δ t-
T3 t~ <U
r- ffi O > 4- -C 4-1(-04 5- 01
O 4J
4- τ- 1 5 > CM 4- T- ro 4-4 Γ- Λί Φ TJ < .Ω Φ — ro .c c i— ui · ‘i— ··” m Φ 0)0 +4
Co o « £- 20 £ ° α ro onj 4-4 04 i- ^ •i- ro r- T3 c ja e i_ ,—i <u LXion'iin'in'tnc'i'f'i Φ O O)ro0)cocococococococoæcoco +4 .Q Or £ ro rg C 3 r-' «- β O) ro -r-ι £- ro 0-T3 -O o 25 83 G - ^ c ro u. — α > 4- O +) +» Q) tn O) oooo ooooo
Φ Γφ CO ICCCOCOOOICOCDOOCOCO
•Q φ T- o æ > c r— E - -S£ CM C- £_ •50 m S <° Φ ου > > £ ooooooooooo K μ o. T- co o 4—i oo nonno >0) OH 4-f r-4 r-4 ·*- « ro μ !—i *-» 4-4 U) 4-4 C O) Φ C 1-4 Φ Vs 4Jr X O) £- i- c o φ
r- E S- C TJ
35 T-£_ 0‘r®0)0)01(J)010)0)®0)fflffl
J2 ro 4-4£_-COOOOOCOCDOOCOOOCO
ro > iCCHHi4riri^'i4<'f4 4-4 CL ro T- φ tn O U- LL —·
Forsøg 3: 13
DK 161366 B
Stabilitet af vævsklæbestofpræparater med et faktor XIII-ind-hold på ca. 500 enheder pr. gram fibrinogen og et vandindhold 5 på 0,005 ved opvarmning under N2 til temperaturer indtil 120 °C :
Fremstillingen af vævsklæbestofpræparatet foregik på samme måde som i forsøgene 1 og 2. Præparatets vandindhold blev be-10 stemt til 0,005 og forholdet enheder XIII: g fibrinogen til 496. Prøver af præparatet blev opvarmet til forskellige temperaturer i intervallet mellem 60 og 120°C i forskellige tidsrum. Det blev hver gang udtaget to prøver henholdsvis før opvarmningen og efter bestemte opvarmningstider til måling af 15 restaktiviteten. Bestemmelsen af restaktiviteten foreg i k som beskrevet i forsøg 1.
Resultaterne er sammenfattet i tabel 3.
20 Ved at lægge de kvalitetskendetegn til grund, der kræves af vævsklæbestoffer på basis af fibrinogen og faktor XIII, nemlig et mindsteindhold af fibrinogen på 70 mg/ml og en tværbinding af fibrin-a-kæder i den beskrevne tværbindingstest på mindst 0,35 (35%), fremgår det, at sådanne vævsklæbestofpræparater 25 under de anførte betingelser kan opvarmes i betragtelig længere tid end i dette forsøg, uden at dette samtidig medfører for store kvalitetstab.
30 35
Tabel 3 14
DK 161366 B
Stabilitet af et vævsklæbestofpræparat med et faktor XIII-indhold på 496 enheder pr. gram fibrinogen og et vandindhold 5 på 0,005 ved opvarmning under N2.
Restaktivitet
Opvarmning Fibrinogen Fibrin-a-tværbinding 10 Timer °C (koagulerbart efter 2 timers forløb protein) (mg/ml) 0 - 86 0,95 15 *0 60 83 0,90 30 60 84 0,87 100 60 84 0,83 10 80 85 0,80 30 80 85 0,77 20 100 80 83 0,70 3 90 84 0,90 1 100 83 0,81 0,1 110 84 0,85 0,1 120 84 0,81 25
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen inklusive inaktiveringen af formeringsdygtige sygdomsfremkaldere er belyst nærmere i de følgende eksempler. Da de nøvendige undersøgelser af virusinaktiveringer i blodprodukter ikke straks kan foretages på men-nesker foregår vurderingen af virkningen af inaktiveringen ved hjælp af modelvira.
Eksempel 1: 35 Inaktivering af et modelvirus (Sindbis-Virus) og et vævsklæbestofpræparats restaktivitet ved tør opvarmning under N2 eller vakuum på den ene side og under luft på den anden side:
DK 161366 B
15
Der fremstilledes et vævsklæbestofpræparat på samme måde som beskrevet i forsøg 1.
En del af det opnåede frysetørrede vævsklæbestofpræparat blev 5 opløst til en proteinkoncentrat ion på 50 mg/ml, blandet med henholdsvis en Sindbis-virussuspension i cellekulturmedium TCM 199 eller med virusfrit cellekulturmedium, fyldt i glasflasker med hver 2,6 ml, dybfrosset og frysetørret til et vandindhold på 0,005 (0,5 vægt%). En del af prøverne blev lukket tæt under 10 vakuum (< 10 Pa), en yderligere del under N2 og endnu en del under luft ved normaltryk.
De lukkede prøver blev opvarmet til en temperatur på 60°C i forskellige tidsrum. Der blev hver gang udtaget tre prøver før 15 opvarmningen og på bestemte tidspunkter under opvarmningsforløbet til måling af på den ene side virustiteren og på den anden side restaktiviteten.
Bestemmelsen af virustiteren blev gennemført på følgende måde: 20
Prøverne blev hver opløst i 1,0 ml vand og ser iefortyndet med en i soton i sk kogsaltopløsning i forholdet 1:10. Titeren for S i ndb is-virus bestemtes ved fastlæggelse af den cytopatiske effekt på sensitive Vero-celler i mikrotiterpladen. Resulta-25 terne udtryktes efter statistisk behandling af bedømmelsen svarende til Reed und Muench's formel som logaritmen til TCID50 (J.L. Reed, H. Muench; Amer. J. Hyg. 27, 493, 1938).
Bestemmelsen af restaktiviteten foregik som beskrevet i forsøg 30 1. Resultaterne er sammenfattet i tabel 4. De viser ikke kun, at det er muligt fuldstændigt at inaktivere S indbis-virus i vævsklæbestof præparater af den beskrevne art, men de fører først og fremmest også til den vigtige erkendelse, at forholdet mellem virusinaktivering på den ene side og præparatets 35 restaktivitet på den anden side kan forbedres væsentligt ved, at opvarmningen gennemføres under udelukkelse af oxygen, dvs. under en inert beskyttelsesgas eller under vakuum.
DK 161366 B
16 O) c i- cn a; c Ό
•r- SB
C
ε i
£_ ti XI
m r Q
> c ία ·>- ί- Ο i- o α 4- 5 L. -r- Q 4- 0) i P L.
4-0) CO 11) N CO OOt-OC- 00 O rifl)
"O DE MOIOll) MOIOllI MOIDO
0) 'P* - - — - *.*.*.— w >, s %
> -P oooo O O O O O O O O
« fiN
CD ,_j « *g« 10 « S i L -Ptl 0) α mø 4- -Hk
O T- M
•p > —
« ·Γ- C
0 -Μ τα ^ o SB (0 -p
r— +J O
M tn i.
15 tn <u α > Cd
SB -P
i- > £_ 0) c tø — α -p 0) α E n in w <r to m ^ m to n μ h (0 (1) D) l \ co co to co co co co co oo co co co 1- O O O) •i- c i- ε •Γ- 3 «— — i. Ut in jq tø 90 =J -Γ- o d U £_ LL ϊέ •r- > 1 £_ tn tu •r- +1 α -ι- το -p — c tn o -I- 3 li) co c. α ^ -i— 1—1 0)040 O CM O) 000)10 25 > o > » » » » » » » » tn ti— >ί >ί η η m ^ cm ri ui « οι h d * in v v U -t-1 -I- o -¾ α t—i > P OD)
r- H c O
tD , -Γ- 1-1 ØH CO —· o ©
El ? 30 φ o
g (O
4- g ,0) (0 P Ή t_
-¾ Ti SB Ε Η ε E
σ>Ρ +^ 4- 3 3 3 3
Cp* in 3333-P-P-P-P
-i- 0)0 ^^^£^4-4-4-4- C- *“ C E CM CM CM CM lØtØffltØ 3333 0) CM -r-4J Z Z Z Z >>>> i- i- i— i- > Z C (0
E
35 ft- s. c
Λ£β) CO 0) O CO O O O CO O O O CO O O
10 "O > E H CO rH CO T-l CO
c c a-r-
1-13 O -P
Eksempel 2: 17
DK 161366 B
Fremgangsmåden fra eksempel 1 blev gentaget med den forskel, at prøverne efter frysetørring blev eftertørret i 5 nærværelse af et P205-holdigt tørringsmiddel under vakuum til et vandindhold på 0,002, lukket under vakuum (< 10 Pa) og opvarmet til 70°C i forskellige tidsrum.
De opnåede resultater er sammenfattet i tabel 5.
10 15 20 25 30 35
DK 161366 B
18 «TO ϋ
CL <U Q
C e- T> I- £-
i- <D O
0 Ό 4- -C » T3 m
c «L
T3 I E
C C T- 5 > s- CM '
•P -r- O) < t- LO
0) 4- t- C* LO LO
^ ·>. «W ·>. V
Ό 4- Φ O O O O
O) ® •p c (0 T·
L. *U
ίο S c Q. *r ftj X2 t_ £.
α 4j » 4- Φ > 0 +Ί- c +> -i- « >0) tu ·γ· 4j
JD •‘-’O
« -Si J_ ic ·“ rc o.
15 ^ -η tn tn jj ω > tu 7 « “ro * £ 5 % f- a>
·>" DliEHOHN
O „ \ CO 00 CO 00 — C ™ O)
20 2? 7 2 E
3 · L. ^ t- o ja *r- o *r > o u.
1 t~ tn
-r- p— L
n -i- α»
Ό ·Ρ P
c —
•i- E +> O
_ _ cn 3 i in 25 '-s tn q M 3 1—4 t n ns x. u
3 > ·“ h- OHIO
t_ > ~ -
•P 1. I Q ^ fO Η H
> Φ B W v ^ "O ·*- σι Φ C -So
O 3 Ό tH
O C
SO) ·<- 30 c cn
P -r-(1) C S
4- ΧΙΟ (0 > o) α c o u •Γ- D)°
X. Ό C O
<D 4» -i- C"
oc > > C
35 -r- ε -
PCM X. X. O H n O
IC O to φ pH
ro o > s C * Ο.-ΓΗ o Ol—
DK 161366B
Eksempel 3: 19
Inaktivering af tre forskellige modelvira i et vævsklæbestof-præparat ved tør opvarmning til 60°C under N2.
5
Et vævsk 1æbestofpræparat blev fremstillet som beskrevet i eksempel 1, og den fortyndede opløsning af vævsklæbestoffet blev før sterilfiltreringen tilsat 12 enheder faktor XIII pr. ml. Efter frysetørringen indeholdt præparatet 520 enheder 10 faktor XIII pr. g fibrinogen.
En del af det opnåede præparat blev opløst til en koncentration på 50 mg protein pr. ml, og en del af opløsningen blev hver gang blandet med enten en suspension af S indbi s-15 virus eller en suspension af VSV (vesicular stomatitis virus) eller en suspension af LCM (lymfotropt choriomeningitis)-virus i cellekulturmedium TCM 199 eller med virusfrit cellekulturmedium, fyldt i glasflasker med hver 2,6 ml, dybfros-set, frysetørret til et vandindhold på 0,006 og lukket under 20 N2 · Prøver af præparaterne blev opvarmet til 60°C, og virusti-teren og restaktiviteten blev som beskrevet i eksempel 1 bestemt før opvarmningen og efter bestemte opvarmningstider.
Resultaterne er sammenfattet i tabel 6.
25
Resultatet fra eksempel 1, nemlig at Sindbis-virus kan inakti-veres fuldstændigt i et vævsklæbestofpræparat ved 30 timers tør opvarmning til 60°C, blev endnu engang bekræftet efter dette eksempel. LCM-virus og VSV var allerede inaktiveret 30 fuldstændigt efter 10 timers opvarmning.
Aktiviteten af vævsklæbestofpræparatet var efter 30 timers opvarmning stadig næsten fuldstændigt bibeholdt.
35
DK 161366 B
20
CM
Z dl c I_ {_ I φ 4)
1-4 Ό Ό _Q
n C « Q
l-< 3 Λί i— c x bi ' *- 5 c a o L. ·Η I 4- O g c Η P -r- (fl :y a t_ i_ m s Λ dl «<- ft ·<- e « to O «*··ι- σ> co +» +j dl >4-0 0 tj m cm 73 <u in di > σι ιέ c <u (O -i- +> +» O 73 +- (0 O Cd) C_ -r- <0 O J2
Q. IL
« «0 » IL Q. > 0. h- M— 73 15 +» o 4-> in .c di dl 73 +> Λ C ‘ΓΙΟ 8J ‘1- > Λ
Γ- 73 ·“ C
r— Λί C +j -Γ- d) in ro λ: di ώ > > <o +> ro « ή o H- > -u tn i- dl d) o.
20 -μ æ dl O) +> O L. I— CO -St •i- ID E CO 00 C C Δ (D dl dl I- O)
1. Dl Dl dl E
•r- O O I- — > C C 3 r— T- -I- Dl
dl l- l- ID
73 Δ n O
OR O ·γ- <- X
i O EM- LL w
41 E
O) ID > CM C~
•i- J. (/) - - K
— Dl > CO CM r-Ι r-ι t—I
i— λ V V
dl . O
.y i_ ίο ς o co in Q. £_ o o - IL dl 1-4 -ICO T-4 r-l r-t
O l_ +> O V V
30 ^ <u ·" h- 73 +> in dl dl I O ΤΙ- .c in T-4 Ώ +> C 3 Dl TJ l> *7 "7 dl t. o c -
Μ- r rt Γ Ifl ή N H
ID O > — CO V
CM
Di t n c •r· «(D Di r i n i- a. C ou 3 5 di o -r- w
> Ό O CO
**“ 1 O E ^
+4010 l_£_ Ot-ICOOO
.y .c <ro γη co
ID "D <- > E
C C -I- Q. -r- 1-1-1-+-4 Oh-
Eksempel 4: 21
DK 161366 B
Inaktivering af bakteriophagen X 174 ved tør opvarmning af et vævsklæbestofpræparat til 90°C.
5
Et vævsklæbestofpræparat blev fremstillet som beskrevet i eksempel 3.
En del af det opnåede præparat blev opløst til en proteinkon-10 centration på 50 mg/ml, og opløsningen blev blandet med henholdsvis en suspension af bakteriophagen X 174 i kulturmedium for Escherichia col i 11303 eller med virusfrit kulturmedi um, fyldt i glasflasker med hver 2,6 ml, dybfrosset, frysetørret til et vandindhold på 0,005 og lukket under N2· 15
En del af prøverne blev opvarmet til 90°C i forskellige tidsrum, og virustiteren og restaktiviteten blev bestemt før opvarmningen og på bestemte tidspunkter under opvarmningsfor-1øbet.
20
Bestemmelsen af virustiteren gennemførtes på følgende måde:
Prøverne blev hver opløst i 1,0 ml H2O og fortyndet med 1 mM MgCl2 i serier i forholdet 1:10. En blanding af 3 ml 0,7% 25 Bacto-agar, 43 til 45°C, 100 μΐ suspension af E. coli i fly
dende medium og 200 μΐ af den bakteriophagholdige prøve eller fortynding gennemb1andedes og udhældtes hurtigt på en næringsagarplade (ATCC 129). Efter inkubation natten over ved 37°C
taltes ved hjælp af et tælleapparat de af den former ingsdyg- 30 tige viruspartikel udviklede antal plak i den sammenflydende celleflade (PFU, plaque-forming units). Resultaterne udtryktes som logjQ PFU.
Bestemmelsen af restaktiviteten foregik som beskrevet i forsøg 35 1. Resultaterne er sammenfattet i tabel 7. De viser, at den (relativt varmestabile) bakteriophag X 174 kan inaktiveres fuldstændigt i et vævsklæbestofpræparat ved tør opvarmning un- 22
DK 161366 B
der N2 til 90°C, mens vævsklæbestofpræparatets aktivitet næsten bibeholdes fuldstændigt.
5 10 15 20 25 30 35
DK 161366 B
i 23 C 4)
3 C
C C
O O) dl •PC Ό X -r- 8) (0 C 34 4- E >43
C ti Q
•P (0 I Γ- ro > π ία ·- o c ό o e 4- b ro 43 ε ό ·>“ in
φ 4- e LO O
-P > 0) Ol (7) ro 4- e em ro ·γ- o o ro o -p o. o o> « - c cm
e o τα. Ό L
4- -ro cro 10 o a --- -p P 43 4- M Ό C β> fl> r— w O o >
IB 41 H
>- 13
X C -P
t/1 -r- (l)
>13 -P
Φ C ·γ- —· > ro > c 15 t- +j -pro ro -p x -p i— ro ro o ro ··- -p e 43 σι in o.
ro — o roe i- «tf er ro -p c- c o> c h ro o ro ·—- D> C 43 ι- χο -I- t 6 N « c e ro \ oo co 2 0 O) ·!- 43 r- o) roe — 3 ε 4-43 IL en —· O-ι- ffl
•1-4- O
C X
roe p ro x e ro en Λ i
--- · -"T
j c e t- 40 in α i-* 3
C C X
>- ro >13 D> r— ro roe · ro 43 4Z liJ 33 u c α-p u. » p ® oro O'i-ol"·*·*·
E -r- 4-1 lO «» P O
o e tn o
•P CM ro 3 rH
30 ro lo -p e o> • X T- o 4- <ro o ro > i— ro o. o oo - o cm3 en C i- •r- o i— en o e x: -i- co ro i3 p -i-o > c C en en •1- t- CM E *· pi2 ee oonn 3 5 x: m ro ro roue > e c m ro Q. ·ρ
μ X 13 OH
Eksempel 5: 24
DK 161366 B
Inaktivering af Sindbis-virus og hundehepatitis-virus i et vævsklæbestofpræparat ved tør opvarmning til 110°C .
5
Et vævsklæbestofpræparat blev fremstillet som beskrevet i eksempel 3.
En del af det opnåede frysetørrede vævsklæbestofpræparat blev 10 opløst til en proteinkoncentration på 50 mg/ml, blandet med en Sindbis-virussuspension eller en hundehepatitis-virussuspension i cellekulturmedium TCM 199 eller med virusfrit cellekulturmedium, fyldt i glasflasker med hver 2,6 ml, dybfrosset, frysetørret til et vandindhold på 0,005 og lukket under N2.
15 Prøverne blev opvarmet til en temperatur på 110°C i forskellige tidsrum, og som beskrevet blev aktiviteten af præparatet og af virustiteren bestemt før opvarmningen og til bestemte tidspunkter under opvarmningsforløbet.
20 Resultaterne er sammenfattet i tabel 8.
Eksemplet viser, at ikke blot Sindbis-virus, men også det ellers særligt varmestabile kendte hundehepatitis-virus i et vævsklæbestofpræparat kan inaktiveres fuldstændigt ved frem-25 gangsmåden ifølge opfindelsen uden at der må tages for store tab i præparatets biologiske aktivitet med i købet.
30 35
25 DK 161366 B
o c c M £_ i» o xj p æ x> o λ: o σι a ίο i o C 4-
C ΤΟ £_ W
σι xt t- o T- o
5 c 4- E
•r· T- (Μ ΙΛ 00 t_ 4- -P O) CO t— XI <0 ~ '
•r~ OO O O O
4- O) P c ίο £ T- <u
(0 X5 P
i— £_ C 4- cn -i- o -— xi in W · -P L.
iU 3 1-0» £_ O. P > -r- T- l— >1- > --
I O T- C
in xj -p ·- o jr Φ p x: ro +j •i- c p o p o in ίο o θα, o er 15 co o oo -p x: w l. — i— O (ti i— O Ό <1 O C XI E « S3 C CL o OI-^CO 00 <o σ o en o en
1- -C XJ r-l O 1— E
i— t—i C 3 — en o -i- en 0 -C i— l. ro στ- xa o in c -p -i- x on 3 T- Ll_
“ L. I OO
T· 1-1 Z —
> n O
1 i—i £_ ιλ in tn x o Q T- ~o n +-> XI I- C O T- -D O 3 I- -p C P (0 •f x en o α in ro c i-« o 4- -i- di £ ^enio 25 c o ro * - - (0 P £ r— Ό CO r-t t-i r-i r-i
I. O I- -—C V V
ro 3
> TS > s- X
r- o α o
O E O -P
u T- in o -P XJ -P !“ E ro o in S3 (sooo £_ > 3 XJ - o ro £-C COOJt-Ot-Ct-o
-3(-1 P Q. W T- -r- VV
» o > ω
4- L. O
ro o. o 4-0 o en o o C -P «Λ 1-4 •i- tn α en i-* t- o c - o XI XJ t L' > » r- co
-r- r- o e -P
p jr x: l. p oootooo 35 jr in xi ro 3 oo id ro > c > c c » T- α T- M > oz
Eksempel 6: 26
DK 161366 B
Inaktivering af tre forskellige modelvira (Sindbis-virus, VSV og corona-virus) i et vævsklæbestofpræparat med et vandindhold 5 på 0,04 ved opvarmning under N2 til 60eC.
Et vævskiæbestofpræparat blev fremstillet som beskrevet i eksempel 3.
10 En del af det opnåede frysetørrede vævsklæbestofpræparat blev opløst til en proteinkoncentration på 50 mg/ml og, del af opløsningen blev blandet enten med en suspension af Sindbisvirus eller med en suspension af VSV (vesicular stomatitis virus) eller med en suspension af corona-virus i cellekulturme-15 dium TCM 199 eller med virusfrit cellekulturmedium, fyldt på glasflasker med hver 2,6 ml, dybfrosset, frysetørret, indstillet på et vandindhold på 0,04 og lukket under N2.
Prøver af præparatet blev opvarmet til 60°C, og før opvarmnin-20 gen og efter bestemte opvarmningstider blev restaktiviteten og virustiteren bestemt som beskrevet i eksempel 1,
Resultaterne er sammenfattet i tabel 9.
25 Under de angivne betingelser var Sindbis-virus fuldstændigt inaktiveret allerede efter en opvarmningstid på 3 timer, og VSV og corona-virus var endda allerede fuldstændigt inaktiveret efter 1 times forløb, mens præparatets aktivitet i vidt omfang bibeholdtes.
30 35 27
DK 161366 B
o u f— o
0 O
X! (O 0)
Ό C
C <- £-
•i- *r“ O
1 P Ό w æ x)
HH CM .X G
Μ Z I r- X O L.
_ L. I O
5 L. O C 4- O Ό ·Γ P C C. (Λ 3 XI L.
(0 -i- 0) ID ID CM E~ 4-0) 4- E CT) 00 CO C- C 'r «.*»*,
p ·γ- 4- P O O O O
0) C (0
£ CM
•DL. D) <D m C L.
10 e > -r- Q> α ό p P O c 4- (0 -P- Φ L. Ό X) (Od) ΙΟ. > ftt » > l. *3 *j ία, o v
4- - P
O O *>” 1C +* > -^ lo w «ro ·<- c Φ o. p -I- xj s: oj (B tj ro p i— r— p o x o in l.
tn x: a> o.
> ts a: ·— (tic +-» r— > »r* l. ε 73 C (T5 \ <N th o-\ p c o x σ co oo ?0 di ro D) t- ε H > O <D —" φ ·« C r- 22 +* -Γ- 3 rrj ro a> c. o) gn l. x) ro
•r- O) -Γ- O
> O U- r— 0) c ro
Ό J) C
OD) O 00 i-· OC E ° i- ‘ - 25 C O CM CM r-t i-t
φ ·γ- O V V
O) C_ •r- X) -—* r- T- o en i— 4- li) > - Q) Q (Λ CO rH τ-f T-l
Λ! E L. W > VVV
tn ro tu o L. L. -Η ΙΟ D) *r- tn 4- P o t-l 10 -3 n · tflir-ix)-'·
CO L. 3 D) "D 'i ro T-t T-H
Q. S- O C V V
4- ·ι— i— 'ρ- ιπ L. > -— cn Φ D) X! C 0) •i- x: D) o
£_ C CO
0) 0) *1-0
> C tD
•p- O E
35 p CM L. L. O i—1 CO O
si id ro tu i-i
ro > E
C to 0.-1- w O. Ol-
Claims (3)
1. Fremgangsmåde til inaktivering af formeringsdygtige, fi 1 — 5 trerbare sygdomsfremkaldere i fibrinogen- og faktor XIII- holdige vævsklæbestoffer med en høj grad af bibeholdelse af disses biologiske aktivitet, kendetegnet ved, at man opvarmer vævsklæbestofpræparater, som udviser ét mindsteindhold på 100 enheder faktor XIII/g fibrinogen, i tør til-10 stand i nærværelse af en oxygenfri, inert beskyttelsesgas, fortrinsvis nitrogen, eller under vakuum ved en temperatur i intervallet fra 50 til 120°C i et tidsrum på mindst 1 minut.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 15 man opnår den tørre tilstand af vævsklæbestofpræparatet ved eftertørring med vandbindende midler, såsom phosphorpentoxid.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man fremstiller et vævsklæbestofpræparat ved fraktionering af 20 humant kryopræcipi tat og tilsætter yderligere faktor XIII ud over det naturlige indhold af faktor XIII, fortrinsvis til opnåelse af et totalindhold af faktor XIII på ca. 500 enheder/ g fibrinogen, hvor varmebehandlingen gennemføres på et hvilket som helst trin af fraktioneringsprocessen og/eller efter på-25 fyldning af præparatet i s 1utbeho1deren. 30 35
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
AT0308484A AT390001B (de) | 1984-09-28 | 1984-09-28 | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern |
AT308484 | 1984-09-28 |
Publications (4)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK439485D0 DK439485D0 (da) | 1985-09-27 |
DK439485A DK439485A (da) | 1986-03-29 |
DK161366B true DK161366B (da) | 1991-07-01 |
DK161366C DK161366C (da) | 1991-12-09 |
Family
ID=3545088
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK439485A DK161366C (da) | 1984-09-28 | 1985-09-27 | Fremgangsmaade til inaktivering af formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US4816251A (da) |
EP (1) | EP0183674B1 (da) |
JP (1) | JPS6187628A (da) |
AT (2) | AT390001B (da) |
CA (1) | CA1245154A (da) |
DE (1) | DE3570041D1 (da) |
DK (1) | DK161366C (da) |
ES (1) | ES8604776A1 (da) |
Families Citing this family (17)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DK475386D0 (da) * | 1986-10-03 | 1986-10-03 | Weis Fogh Ulla Sivertsen | Fremgangsmaade og apparat til fremstilling af biologiske stoffer |
DE3734923C1 (de) * | 1987-10-15 | 1989-01-26 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung einer sterilen Plasmaproteinloesung,die Fibrinogen und den Gerinnungsfaktor XIII enthaelt |
FR2650508A1 (fr) * | 1989-08-01 | 1991-02-08 | Fondation Nale Transfusion San | Colle pasteurisee pour reunir des tissus humain ou animal |
AT408191B (de) * | 1991-08-19 | 2001-09-25 | Haemosan Erzeugung Pharmazeuti | Verfahren zur inaktivierung von prionen |
US5792835A (en) * | 1991-09-05 | 1998-08-11 | Baxter International Inc. | Method of preparing a topical fibrinogen complex |
US5385606A (en) * | 1992-07-06 | 1995-01-31 | Kowanko; Nicholas | Adhesive composition and method |
JPH06166634A (ja) * | 1992-12-01 | 1994-06-14 | Green Cross Corp:The | プラスミノーゲン含有組成物の製造方法 |
US5290918A (en) * | 1993-02-23 | 1994-03-01 | Haemacure Biotech Inc. | Process for the obtention of a biological adhesive made of concentrated coagulation factors by acidic precipitation |
US5395923A (en) * | 1993-02-23 | 1995-03-07 | Haemacure-Biotech, Inc. | Process for the obtention of a biological adhesive made of concentrated coagulation factors by "salting-out" |
US5330974A (en) * | 1993-03-01 | 1994-07-19 | Fibratek, Inc. | Therapeutic fibrinogen compositions |
AT402788B (de) * | 1993-08-03 | 1997-08-25 | Immuno Ag | Virussichere blutgerinnungsfaktor xiii-präparation |
DE4404625C2 (de) * | 1994-02-14 | 1996-10-17 | Ludwig Dr Baumgartner | Verfahren zur Inaktivierung thermolabiler Viren in biologischem Material unter Beibehaltung der kollagenen Eigenschaften |
GB9424732D0 (en) * | 1994-12-08 | 1995-02-08 | Common Services Agency | Heat treated blood plasma proteins |
US5837519A (en) * | 1996-11-21 | 1998-11-17 | Bayer Corporation | Dry-heat viral inactivation under controlled moisture conditions |
GB0214749D0 (en) * | 2002-06-26 | 2002-08-07 | Leuven K U Res & Dev | Time temperature integrators |
US20090038701A1 (en) * | 2006-01-17 | 2009-02-12 | Baxter International Inc. | Device, system and method for mixing |
ES2350737T3 (es) | 2008-11-10 | 2011-01-26 | Sports Art Industrial Co., Ltd. | Aparato de gimnasia con un carril deslizante curvo. |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB103196A (en) * | 1916-02-16 | 1917-01-18 | Percy Arthur William Parkyn | Improvements in or in connection with the Automatic Regulation of the Temperature of Gases or Superheated Steam. |
AT359652B (de) * | 1979-02-15 | 1980-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines gewebekleb- stoffes |
DE2916711A1 (de) * | 1979-04-25 | 1980-11-06 | Behringwerke Ag | Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung |
US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
EP0068149A3 (de) * | 1981-06-25 | 1983-07-20 | Serapharm GmbH & Co. KG | Fibrinogen-haltiges Trockenpräparat, dessen Herstellung und Verwendung |
US4456590B2 (en) * | 1981-11-02 | 1989-05-30 | Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate | |
DE3230849A1 (de) * | 1982-08-19 | 1984-02-23 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Pasteurisiertes human-fibrinogen (hf) und verfahren zu dessen herstellung |
JPS6054287B2 (ja) * | 1983-10-19 | 1985-11-29 | 株式会社ミドリ十字 | 血漿蛋白の加熱処理方法 |
AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
-
1984
- 1984-09-28 AT AT0308484A patent/AT390001B/de not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-09-12 CA CA000490555A patent/CA1245154A/en not_active Expired
- 1985-09-13 US US06/775,609 patent/US4816251A/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-17 ES ES547064A patent/ES8604776A1/es not_active Expired
- 1985-09-19 EP EP85890227A patent/EP0183674B1/de not_active Expired
- 1985-09-19 AT AT85890227T patent/ATE42900T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-09-19 DE DE8585890227T patent/DE3570041D1/de not_active Expired
- 1985-09-27 DK DK439485A patent/DK161366C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-09-27 JP JP60216082A patent/JPS6187628A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
ATE42900T1 (de) | 1989-05-15 |
ES8604776A1 (es) | 1986-03-01 |
DK439485D0 (da) | 1985-09-27 |
DE3570041D1 (en) | 1989-06-15 |
DK161366C (da) | 1991-12-09 |
EP0183674B1 (de) | 1989-05-10 |
US4816251A (en) | 1989-03-28 |
CA1245154A (en) | 1988-11-22 |
ATA308484A (de) | 1989-08-15 |
ES547064A0 (es) | 1986-03-01 |
DK439485A (da) | 1986-03-29 |
JPS6187628A (ja) | 1986-05-06 |
EP0183674A1 (de) | 1986-06-04 |
AT390001B (de) | 1990-03-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DK161366B (da) | Fremgangsmaade til inaktivering af formeringsdygtige, filtrerbare sygdomsfremkaldere | |
DK175754B1 (da) | Vævsklæbestof | |
CA1239583A (en) | Method of inactivating reproducible filterable pathogens in blood products as well as a method of producing blood products | |
DK171796B1 (da) | Fremgangsmåde til behandling af et blodstørkningsfaktor VIII koncentrat | |
CA2201714C (en) | Method for isolation of highly pure von willebrand factor | |
US5864016A (en) | Blood product, a method of producing the same and a method of determining the virus inactivation capacity of an inactivation treatment | |
US5639730A (en) | Method of producing a virus-safe biological preparation | |
Roberts et al. | Current management of hemophilia B | |
CN102258770A (zh) | 一种安全高效的冻干纤维蛋白封闭剂及其制备方法 | |
JP4010573B2 (ja) | 低温殺菌中の血漿を安定化するための組成物および治療学的用途のための低温殺菌血漿溶液 | |
DK167900B1 (da) | Middel til behandling og forebyggelse af haemostatiske forstyrrelser indeholdende vaevsprotein pp4 | |
AU2019208251A1 (en) | Plasma-supplemented formulation | |
US4579735A (en) | Process for the pasteurization of human residual plasma | |
KR20040058194A (ko) | 보관이 안정한 피브리노겐 용액 | |
Harmon | Cost/benefit analysis of pharmacologic hemostasis | |
RU2045902C1 (ru) | Состав для стабилизации плазмы крови в ходе пастеризации и способ пастеризации плазмы крови | |
KR20040055782A (ko) | 보관-안정한 인간 피브리노겐 용액 | |
CA1321139C (en) | Agent for the therapy of factor viii-resistant hemophilia a, and a process for the preparation thereof | |
Crawford et al. | Fibrin sealant reduces blood loss in total hip arthroplasty | |
IE902766A1 (en) | Pasteurized glue for joining human or animal tissues | |
EP1057490A2 (en) | Use of tranexamic acid for the preparation of a human fibrinogen composition | |
Rosselli et al. | Efficacy of a topical bovine-derived thrombin solution as a hemostatic agent in a rodent model of hepatic injury | |
Ingerslev et al. | Efficacy of recombinant factor VIIa (rVIIa) in surgical procedures in haemophilia A patients with inhibitors and congenital factor VII deficiency | |
EP4387993A1 (en) | Dry heat treatment of plasma-derived factor viii | |
US20030224994A1 (en) | Storage stable liquid sealer protein complex |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
ATS | Application withdrawn | ||
PBP | Patent lapsed |
Country of ref document: DK |