DK160053B - Fremgangsmaade til fremstilling af ikke-toxiske styren-, acryl- eller epoxyharpikser med cholesterolsaenkende egenskaber - Google Patents

Description

DK l6 1 ηS3 B

Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af ikke-toxiske styren-, acryl- eller epoxyharpikser med cholesterolsænkende egenskaber.

5

Ionbytterharpikser har specielt fundet anvendelsen ved behandlingen af forskellige patologiske tilstande som f.eks. hyperaciditet, forhindring af Na+-mangel i mavetarmkanalen, induktion af K+-udskillelse, behandling af 10 nephrotisk-, pancreas- og cardiaødem, behandling af ulcus, neutralisering af mavesurhedstilstande osv.

Naturligvis kræver hver enkel patologisk tilstand en harpiks med specielle kemiske egenskaber valgt blandt svagt 15 sure harpikser, stærkt sure harpikser, svage basiske harpikser og stærke basiske harpikser, forudsat at disse harpikser ikke virker toxiske over for den menneskelige organisme.

20 Anvendelsen af ionbytterharpikser er specielt blevet udvidet i de senere år ved behandling af hyperlipemi. Det er en kendsgerning, at for høje niveauer af lipider, der i det væsentlige er cholesterol og triglycerider, kan forårsage tidlig arteriosclerose i organismen med følger 25 som f.eks. hjerteinfarkt og cerebraltrombose. Hyperlipemi er derfor et udstrakt problem, for hvilken det endelige lægemiddel endnu ikke er fundet.

For at reducere cholesterol til normale niveauer, er det 30 nødvendigt både at undgå alle de næringsstoffer, der er rige på disse eller på mættede fedtstoffer, og samtidig forøge fjernelsen af cholesterol.

Det har vist sig, at ionbytterharpikser af basisk karak-35 ter virker på en anden måde ved at binde galdesyrerne i tarmkanalen, hvorved den enterohepatiske recirkulation afbrydes med følgelig tab af cholesterol.

2

DK 16 f> O !:o B

For at udføre denne cholesterolfjernende metode i praksis er visse basiske anionbytterharpikser blevet fremstillet indeholdende amino- og/eller ammoniumgrupper, der er i stand til kemisk at binde galdesyrerne.

5

De hidtil fremstillede og anvendte harpikser er i det væsentlige Cholestyramin og Cholestypol. Den første af disse harpikser er i det væsentlige en styren harpiks, der indeholder kvarternære ammoniumgrupper tværbundet med 10 divinylbenzen, medens den anden er en polymer af N-(2-aminoethyl)-l,2-ethandiamin med chlormethyloxiran. Set ud fra et teoretisk synspunkt er den kemiske virkemåde af disse harpikser tilsyneladende klar, og kan derfor klart bestemmes ud fra et kvantitativt synspunkt, i praksis har 15 de opnåede resultater imidlertid været betydelig dårligere, end man kunne antage, og de kan forbedres. Specielt har disse harpikser ofte i modsætning til de resultater, der er opnået ved in vitro forsøg, uafhængigt af deres kemiske natur, for lav kapacitet til at binde cholationer 20 in vivo, fordi enten er den reduktion i cholesterol, de bevirker, ubetydelig, eller de skal anvendes i meget høje doser, hvilket forårsager alvorlige bivirkninger i mavetarmkanalen .

25 En hel nærliggende ting ville være at fremstille harpikser med en højere koncentration af funktionelle grupper. Imidlertid har det vist sig, at ved at forøge koncentrationen af harpiksens basiske funktionelle grupper over en vis grænse, hvad enten disse er stærke eller svage, redu-30 ceres deres aktivitet snarere end forøges. Det har imidlertid nu vist sig, at aktiviteten af harpiksen kun i begrænset omfang afhænger af den kemiske art og antallet af de basiske funktionelle tilstedeværende grupper, medens den bestemmende faktor er "tilgængeligheden" af de 35 funktionelle grupper for galdesyremolekylerne, der som bekendt alle er forbindelser af steroid opbygning og derfor umådelig voluminøse og med lav mobilitet.

DK 160(1'->3 B

3

Den umiddelbare løsning på problemet ville derfor synes at være at anvende lineære opløselige harpikser, hvis funktionelle grupper antages at have maksimum tilgængelighed.

5

Det har imidlertid vist sig, at anioniske harpikser af denne type fuldstændig uventet er i besiddelse af meget ringe aktivitet, på grund af at de lineære kæder, som ikke er bundet sammen, agglomererer i et vandigt miljø især 10 på grund af koordinationsbindinger under dannelse af et fuldstændigt randomiseret pseudogitterværk, i hvilket det er praktisk taget umuligt for de store galdesyremolekyler at trænge ind, og dette fjerner derfor de fleste af de aktive grupper fra ionbytterreaktionen.

15 På samme måde har meget kraftigt tværbundne harpikser en meget lav og utilstrækkelig aktivitet på grund af dannelsen af et for snævert gitterværk, der ikke er tilgængeligt for galdesyremolekylerne.

20

Man har nu fundet, at der kan opnås cholesterol sænkende anionbytterharpikser med meget høj aktivitet ved at fremstille harpikser, der har en almindelig tværbindingsgrad, der holdes inden for meget veldefinerede kritiske græn-25 ser, og som er forskellige for hver type harpiks.

Hensigten med den almindelige tværbinding ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er at danne "masker" i den polymere, der har en åbning, der i det væsentlige "svarer 30 til" rumfanget af galdesyrerne, der således kan komme i kontakt i fordøjelseskanalen med det højst mulige antal aktive funktionelle grupper.

Da funktionelle grupper af forskellig kemisk art har for-35 skelligt volumen og derfor skaber forskellig grad af "modstand" og sterisk hindring inden i "maskerne", er det klart, at den kritiske effektive grad af tværbinding er

4 DK 16 O O Η 3 B

forskellig afhængig af harpiksens kemiske art. Imidlertid afhænger det på ingen måde af om harpiksen har en gel-agtig, mikroporøs eller makroporøs opbygning.

5 For en lineær polymer af en forud bestemt kemisk art og med et vist antal basisk aktive grupper, dvs. en polymer med en ionbytterevne, fås hermed en forud bestemt chole-sterolsænkende virkning ved i denne at frembringe en nøjagtig grad af ensartet tværbinding.

10

For at opnå denne grad af tværbinding og som følge heraf den krævede åbning af maskerne dannet i polymeren, skal den tværbindende monomer i blandingen af monomere, der skal polymeriseres, anvendes i en nøjagtig defineret pro-15 centdel.

For at opnå ensartet tværbinding og som følge heraf en ensartet størrelse af maskerne dannet i polymeren, skal der anvendes en meget lav polymeringshastighed ved at ud-20 vælge katalysatoren, reaktionstemperaturen, monomerkon centration i reaktionsopløsningen og katalysatorkoncentrationen på passende måde.

Det har vist sig, at de mest velegnede katalysatorer til 25 at tilvejebringe de nødvendige milde polymeringsbetingel- ser er organiske peroxider og specielt lauroyl- og ben-zoylperoxid. Det foretrækkes at anvende benzoylperoxid, fordi det har en højere halveringstid og en bedre renhed og katalysatorevne.

30

De kritiske betingelser under hvilke katalysatorerne skal anvendes til at fremstille de omhandlede harpikser er: 35

DK 16i ni)3 B

5

Lauroylperoxid - Acryl: temperatur 55-65°C; koncentration 1-2% - Styren: temperatur 60-70°C; koncentration 1-3% 5 - Epoxy: temperatur 55-65°C; koncentration 0,5-1,5%

Benzoylperoxid - Acryl: temperatur 60-70°C; koncentration 0,2-1,5% 10 - Styren: temperatur 65-75°C; koncentration 0,3-1,5% - Epoxy: temperatur 60-70°C; koncentration 0,2-1,0%

Det har også vist sig, at visse ikke særlig let kontrollerbare bireaktioner på de forskellige trin af de for-15 skellige processer kan forårsage yderligere tværbinding af polymernettet. Dette kan ødelægge hele den omhyggelige opbygning af harpiksen, hvis der ikke kontrolleres grundigt nok.

20 Specielt når det drejer sig om acrylharpikser, kan denne uønskede reaktion ske under ammonieringsstadiet, hvor polyaminerne anvendes.

Når det gælder styrenharpikser, er det kritiske trin un-25 der chlormethyler ingen. Når det drejer sig om epoxyharpikser, er det vanskelige trin amineringen, når der anvendes polyaminer.

Det har vist sig, at disse uheldige reaktioner kan undgås 30 på følgende måde: - Acryl: ved ammonieringstrinnet, skal anvendes et stort overskud af polyaminer indtil 6 til 7 gange den støkiometriske mængde, 35 - Styren: ved chlormethyleringstrinnet anvendes en mild katalysator som f.eks. ZnC^ under meget svage betingelser, dvs. et fortyndet system ved lav temperatur (35-

DK 160053 B

6 40 °C), - Epoxy: ved amineringstrinnet anvendes et overskud af polyamin ved lav temperatur (35-40 °C).

5 Hvad angår valget af tværbindingsmiddel kan teoretisk alle molekyler, der har to vinylfunktioner, og som har en stor afstand mellem disse, anvendes som tværbindende middel. I praksis anvendes følgende: divinylbenzen, divinyltoluen, divinylxylen, divinylethylbenzen og lignende. Di-10 vinylbenzen foretrækkes på grund af dens reaktivitet, og da den er let tilgængelig.

Det har nu uventet vist sig, at de faktorer, der bestemmer den cholesterolsænkende virkning af en ånionbytter-15 harpiks og specielt størrelsen af de tværbundne "masker", der findes i den, er en funktion af den tilsyneladende massefylde i vand og harpiksens absorptionsevne for vand, af hvilken grund maksimumaktiviteten for en vilkårlig harpiks svarer til en i det væsentlige konstant tilsyne-20 ladende massefylde og en i det væsentlige konstant vandabsorptionsevne .

Opfindelsen angår således en fremgangsmåde til fremstilling af ikke-toxiske styren-, acryl- eller epoxyharpikser 25 med cholesterolsænkende virkning, der er ejendommelig ved det i kravets kendetegnende del angivne.

Den specielle og konstante værdi for tilsyneladende massefylde og vandabsorptionsevne svarer for hver harpiks 30 til forud bestemte kombinationer af ionbytterevne og grad af tværbinding (udvalgt inden for et kritisk og nøjagtigt defineret område), og som derfor kan fastsættes entydigt for hver harpiks.

35 Til det foreliggende formål er den tilsyneladende massefylde i vand blevet bestemt, og den er defineret ved følgende metode:

DK i * ", ·, 3 B

7 20 g tør harpiks (tørret ved 40 °C i en vakuumovn indtil dens vægt er konstant) anbringes i 150-200 ml vand i 24 timer, idet der af og til omrøres. Herefter overføres harpiksen til en glassøjle, der er nøjagtig inddelt og 5 udstyret med en porøs bund.

Herefter ekspanderes harpikslejet i modstrøm, idet vand tilledes i en mængde på 10 volumen pr. volumen harpiks, indtil man får et lag på 1 til 2 cm over harpiksen.

10

Efter henstand i 20 minutter, bestemmes rumfanget af harpikslaget. Denne måling gentages to eller tre gange for hver prøve, således at fejlen falder indenfor 1%. Massefylden udtrykkes ved forholdet mellem harpiksens tørvægt 15 og dens rumfang i vand.

Vandabsorptionskapaciteten af harpiksen bestemtes altid på følgende måde: 20 3 g harpiks, der var tørret til konstant vægt ved en tem peratur på 40 °C under reduceret tryk, anbringes på en glasplade i en atmosfære, der er mættet ved fugtighed ved 25 °C, indtil der ikke sker yderligere vægtforøgelse.

25 Det absorberede vand udtrykkes som en procentdel af totalvægten.

Den cholesterolsænkende virkning af harpikserne bestemtes ved følgende måde in vitro: 30 20 ml natriumcholatopløsning med en koncentration på 2 mg/ml i en 0,02 molær opløsning af phosphatbuffer (pH 5) anbringes i en konisk kolbe.

35 1 ml vand og 30 mg harpiks sættes til kolben.

DK 160053 B

8

Efter omrøring i 5 minutter ved 25 °C, filtreres indholdet, og den ikke bundne cholsyre bestemmes ved en spek-trofotometrisk metode efter omsætning med svovlsyre (Kier et al. J. Chim. Invest 40,755, 1952).

5

Aktiviteten udtrykkes ved den bundne natriumcholat i løbet af et vist tidsrum. Forskellige prøver af styren-, acryl- og epoxyharpikser fremstilledes med forskellig ombytningsevne og forskellig tværbindingsgrad.

10

Under anvendelse af de oven for beskrevne metoder bestemte den tilsyneladende massefylde, vandabsorptionen og aktiviteten for hver harpiks. Maksimumaktivitet opnåedes konstant med harpikser, der havde en tilsyneladende mas-15 sefylde på 0,18 til 0,20 g tørt materiale/ml og en vandabsorptionsevne på 69 til 73 vægt-%.

Ved denne metode bestemtes det kritiske område for ion-bytterevne og tværbindingen, indenfor hvilket det er mu-20 ligt at opnå en meget kraftig cholesterolsænkende virkning for en vilkårlig type af harpiks. Under anvendelse af denne metode, fandtes det, at i virkeligheden havde alle hidtil kendte harpikser, og som har en utilstrækkelig aktivitet til at kunne betragtes som et effektivt 25 cholesterolsænkende middel, en tilsyneladende massefylde i vand, der ligger uden for grænserne 0,18 til 0,20 g tørt materiale/ml, og specielt en massefylde og vandabsorption, der angiver dårlig ikke-ensartet tværbinding ("Cholestyramin"-typen) eller en for stor og ikke-30 ensartet tværbinding (Lewatit® MP 500 og "Cholestypol”-typer af harpiks).

Den stærke ionbytterevne og den totale ionbytterevne bestemtes ligeledes for hver harpiks.

Den stærke ionbytterevne bestemtes på følgende måde: 10 g tør harpiks omdannedes til OH ved at perkolere en 5% 35 9

DK 6η O 53B

vandig NaOH opløsning, indtil der ikke længere fandtes Cl ioner i eluatet.

Harpiksen vaskedes grundigt, indtil vandet var neutralt.

5 OH formen genomdannedes til Cl ved at perkolere 400 ml af en 10% vandig NaCl opløsning, hvorefter der vaskedes med 1000 ml ^0. Den fundne base i eluatet filtreredes med 0,1 N HC1, idet 1 ml HC1 svarede til 0,01 milliækvi-valent pr. g (meq/g).

10

Den totale ombytningsevne bestemtes på følgende måde: 10 g harpiks overførtes til OH-formen og den fri aminform som beskrevet ovenfor og behandledes med 100 ml IN HC1, hvorefter vaskedes med vand indtil neutral reaktion.

15 HC1 af eluatet titreredes med 0,1N NaOH, idet man anvendte methylrødt som indikator.

Den totale ombytningsevne af harpiksen angives ved det 20 antal milliækvivalenter syre, der ikke fandtes i eluatet, divideret med 10. De kritiske værdier, der bestemtes for de mest almindelige typer af de omhandlede anionbytter-harpikser og som er nødvendige for at opnå god choleste-rolsænkende virkning, er følgende: 25

Styrenharpikser med amino- og ammoniumgrupper

Stærk ombytningsevne meq/g 2,8 - 4,0

Total ombytningsevne meq/g 2,8 - 4,0 30 Tværbindings-% 1,5 - 2,5

Acrylharpikser med amino- og ammoniumgrupper Stærk ombytningsevne meq/g 2,0 - 3,0

Total ombytningsevne meq/g 5,5 - 8,0

Tværbindings-% 10 - 12 35 Epoxyharpikser med amino- og ammoniumgrupper

Stærk ombytningsevne meq/g 2-5

Total ombytningsevne meq/g 10 - 12,5

Tværbindings-% 3-4

DK 160053 B

10 Når det drejer sig om epoxyharpikser, angiver udtrykket "tværbinding" kun tværbindingen på grund af det tværbindende middel, idet der ses bort fra tværbindingen på grund af aminen.

5

Nogle praktiske eksempler på de omhandlede cholesterol-sænkende harpikser er angivet nedenfor.

EKSEMPEL 1 10

Fremstilling af mikroporøs harpiks (AP2)

En blanding bestående af 33 dele acrylnitril, 16 dele me-thylacrylat, 10 dele teknisk divinylbenzen (styrke 60%), 15 1 del benzoylperoxid og 40 dele toluen og opslæmmes under omrøring i en vandig opløsning indeholdende 20 vægt-% gelatine.

1 del bentonit sættes til suspensionen.

20

Suspensionen opvarmes i 40 timer ved 65 °C.

Den således fremstillede polymer, der har form af opali-serende perler, vaskes omhyggeligt fra resten af den dis-25 pergerende opløsning. Porøsitetsmidlet fjernes ved dampdestillation, hvorefter polymeren tørres.

1 del polymer behandles med 5 dele ethylendiamin i 10 timer ved 130 °C. Efter afkøling fjernes overskuddet af 30 amin ved gentagen vask med vand. Det fremstillede produkt neddyppes i 50 dele 1^0 og 50 dele ^200^, afkøles til 0 °C og behandles med 400 dele CE^Br i 5 timer under omrøring .

35 Herefter filtreres, der vaskes med ^0, hvorefter der overføres til chloridformen i en perkolationssøjle ved langsomt at perkolere 1000 dele 5% vandig opløsning af

DK 1 6 O O S 3 B

11

NaCl.

Der fås en harpiks med følgende egenskaber: 5 Tværbinding 10%

Stærk ombytningsevne 2,1 meq/g

Total ombytningsevne 6,2 meq/g H^O absorptionsevne 71%

Tilsyneladende massefylde 0,186 g/ml 10 Aktivitet 18 τ 0,4 mg bundet cholat

Amin tertiær + kvaternær type EKSEMPEL 2 15 Fremstilling af en standard acrylharpiks (API)

En blanding bestående af 55 dele acrylnitril, 26,5 dele methylacrylat, 18,3 dele teknisk divinylbenzen (60%) og 0,2 dele benzoylperoxid opslæmmes under omrøring i en 20 vandig opløsning indeholdende 20 vægt-% gelatine. Der tilsættes suspensionen 2 dele bentonit. Suspensionen opvarmes ved 70°C i 40 timer.

Den opnåede polymer vaskes, ammonieres, overføres til 25 kvarternær form og til chloridformen, således som beskrevet ovenfor.

Der fås en harpiks med følgende egenskaber: 30 Tværbinding 11%

Stærk ombytningsevne 2,1 meq/g

Total ombytningsevne 6,1 meq/g H2O absorptionsevne 70,4%

Tilsyneladende massefylde 0,192 g/ml 35 Aktivitet 18 τ 0,4 mg bundet cholat

Amin tertiær + kvarternær type 12

DK 1600S3B

EKSEMPEL 3

Fremstilling af en standard styrenharpiks (S1) 5 En blanding bestående af 96,5 dele styren, 2,5 dele teknisk divinylbenzen (60%) og 1,0 del benzoylperoxid op-slæmmes under omrøring i en vandig opløsning indeholdende 15 vægt-% gelatine.

10 Suspensionen tilsættes 0,5 dele bentonit.

Suspensionen opvarmes ved 70 °C i 40 timer.

Den fremstillede polymer vaskes omhyggeligt fra resten af 15 den dispergerende opløsning og tørres.

Herefter chlormethyleres hele produktet med monochlor-ether (200 dele) og zinkchlorid (65 dele) efter at det er ekspanderet i dichlorethan (300 dele), idet blandingen 20 opvarmes 7 timer ved 35 °C.

Herefter amineres det opnåede mellemprodukt med tri-methylamin (180 dele af en 40% vandig opløsning) ved 45 °C i 6 timer.

25

Den opnåede harpiks havde følgende egenskaber:

Tværbinding 1,5%

Stærk ombytningsevne 3,3 meq/g 30 Total ombytningsevne 3,3 meq/g H20 absorptionsevne 71,7%

Tilsyneladende massefylde 0,180 g/ml

Aktivitet 15 τ 0,4 mg bundet cholat

Amin kvarternær type 35

DK 1 ο-0ί,3 B

13 EKSEMPEL 4

Fremstilling af en standard styrenharpiks (S^) 5 En blanding bestående af 95 dele styren, 3,5 dele teknisk divinylbenzen (styrke 60%) og 0,7 dele benzoylperoxid opslæmmes under omrøring i en vandig opløsning indeholdende 15% vægt-% gelatine.

10 Suspensionen tilsættes 0,7 dele bentonit.

Suspensionen opvarmes ved 70 °C i 40 timer.

Den opnåede polymer vaskes, tørres, chlormethyleres og 15 amineres således som beskrevet i eksempel 3.

Man fik en harpiks der havde følgende egenskaber:

Tværbinding 2,1% 20 Stærk ombytningsevne 3,3 meq/g

Total ombytningsevne 3,3 meq/g absorptionsevne 71,5%

Tilsyneladende massefylde 0,195 g/ml

Aktivitet 15 τ 0,4 mg bundet cholat 25 Amin kvarternær type EKSEMPEL 5

Fremstilling af en standard epoxyharpiks () 30

En blanding bestående af 93,3 dele epichlorhydrin, 6,5 dele teknisk divinylbenzen (styrke 60%) og 0,2 dele benzoylperoxid opslæmmes under omrøring i en vandig opløsning indeholdende 20 vægt-% gelatine.

Suspensionen opvarmes 40 timer ved 65 °C.

35 14

DK 160063 B

Den fremstillede polymer vaskes omhyggeligt fra resten af det dispergerende system og tørres.

Hele polymeren behandles herefter med 100 dele ethylen-5 diamin og 40 dele NaOH-flager ved 65 °C i 10 timer under omrøring. Det fremstillede produkt vaskes med vand for at fjerne overskud af amin, hvorefter det nedsænkes i 50 dele ^0 og 50 dele Na2C0g, og der behandles med 500 dele CHgBr i 5 timer ved 0 °C under omrøring. Til slut filtre-10 res, der vaskes med vand, hvorefter der overføres til chloridformen i en perkolationssøjle ved langsomt at perkolere 1000 dele af en 5% vandig opløsning af NaCl.

Der fås en harpiks med følgende egenskaber: 15

Tværbinding 4%

Stærk ombytningsevne 2,1 meq/g

Total ombytningsevne 10,5 meq/g H20 absorptionsevne 69,5% 20 Tilsyneladende massefylde 0,180 g/ml

Aktivitet 12 τ 0,8 mg bundet cholat

Amin tertiær + kvarternær type EKSEMPEL 6 25

Fremstilling af en standard epoxyharpiks (Eg) . <

En blanding bestående af 94,8 dele epichlorhydrin, 5 dele teknisk divinylbenzen (styrke 60%) og 0,2 dele benzoyl-30 peroxid opslæmmes under omrøring i en vandig opløsning indeholdende 20 vægt-% gelatine.

Suspensionen opvarmes 40 timer med 65 °C.

35 Den fremstillede polymer vaskes, amineres og overføres til kvarternær form således som beskrevet i det tidligere eksempel.

DK 160053B

15

Man fik en harpiks med følgende egenskaber:

Tværbinding 3%

Stærk ombytningsevne 2,3 meq/g 5 Total ombytningsevne 10,9 meq/g H^O absorptionsevne 70,5%

Tilsyneladende massefylde 0,180 g/ml

Aktivitet 12 τ 0,8 mg bundet cholat

Amin tertiær + kvarternær type 10

For nærmere at forklare de karakteristiske egenskaber ved de omhandlede harpikser er disse opsummeret i følgende tabel, hvor de er sammenlignet med de mest kendte kommercielle harpikser.

15 20 25 30 35

DK 1600.43 B

= >1

Η X OO

O O

α a o o >ι φ w co is μ ^ v o w + · LO CM ID v -i-)

(D · +> A r—I UD O

Η · +> Μ A co O O U (0 Λ 0) 0) > u w -μ x + « μ μ (U Η 00 μ is μ ^ o = o vo co co CO (0 V V V -I-) ID in CO ^ H o ^ μ λ vo oo μ < to κ > η χ <Μ VO 00

ft fi V

s: φ ο ο μ οο ^3 ρ CM CM -η πω ιη ι ί οο ο η μ a cm id μ & μ φ φ j μ ο ο C0

in C

Α Φ in ο co s: μ is Η >i VO VO CM Ή) ^ ffl in co co vo o vd

H A CO

μ μ ία μ £ (0 φ > a χ οο c is o' •η d ^ E Φ σν σν ο ·η id μ «· - *.

μ is cm cm cm in ο οο is μ vo μ w λ w φ μ η

η μ S

ο id \ Λ > D) οχ ο ο μ = ''s s φ id σ σ ό η Φ φ η ο ε ε is λ 6¥> νμ ϋ Φ Φ Φ C C Φ C0 μ > > C CD Φ Φ Φ > Id Ό ω w φ ε α οι ο ω d d α d φ λ •η ·η ο Ό d φ ΰ ΰ ·η d Di > a ϋιμμμφε id is d Ν is a d d μ -ΗΛΰμΐΰμ ό ε ε ο η φ men d 0 0 ω φ μ * X -Η Ά d -Η Η ·Η Λ Η (d is > a α μ μ id ω -η μμ æ æ μ ο η μ (did > μ ο cm ·η

id id E-icflEHtdE-tC

DK i n o b 3 B

•p μ (d

> CO

x o - + oo o • >i co σι in h P X - ^·ι-)

p O CO <N O O O COd) Q ΓΗ O- CS

W -P 0) >-1

•P

P

(0 > 00 X o v

+ 00 O

. h in in h P X «. *. - » Ό

p O Ί M O O' O (S

D< H ID H

ω -p o

LO

• G σ> o

P 0) H CN (N in H

PP »· *> " * - 1-) (d>< oo co co h o in

(N> -P IN H

Ui X (n o

• C 00 V

PO) in co co in ho P P s s v - >.

(0 >1 H CO 00 H O -Γ-) h> -p in m ω x ω h n.

Η H

* p o cs to cn ·>

+ · Η Η rH O

• -P i—1 " >· » *

P P H CS VD O O TO

i-HP (0 IN CO

Pu Φ > P

< -P X

H

>H ^ P -

o ID O

to co + · Η N Η ·η

. .p o «. *. 'OO

.p p Η N Ό H OH

CSP (0 IN

O. <D > P

< ·Ρ X Dl O (0

\ S 0) H

O’ D* Ό 0 0) (1) Η Λ S S >* o o¥> Ή

(D (1) d) -P

G G Φ Φ (D

> > G (0 V

d) d) > t0 G

a en Φ S o D dl 01 Λ G G G ® Η Η O Ό D) G dl C G H G >

>a Cn-P-P-Pd) S

(0 >1 c >1 >1 a Ό

G P Η Λ Λ P 10 P

Ό S E O H (D

co cd G o o ω d) P

η λ c -η HH Λ Η (0 >h >

DiQj pptd WHH

PP ffi fij P O H g P

(0(0 >PO NH N Ji a x E-ico^æE-icn<

DK 160053 B

18

Den cholesterolsænkende virkning af de omhandlede harpikser undersøgtes også "in vivo".

For at undersøge den "in vivo" cholesterolsænkende virk-5 ning af de forskellige harpikser, anvendtes følgende forsøg: 1) Deres virkning på hypercholesterolemi frembragt med en diæt med forøget cholesterolindhold hos rotter og kani- 10 ner.

2) Deres virkning på fecal udskillelse af galdesyre hos hunde.

15 1) For at inducere hypercholesterolemi hos rotter, hold tes dyrene på en diæt i overensstemmelse med, hvad der er beskrevet af Nath et al. (J.Nutrit 67, 289, 1959) indeholdende: 20 devitaminiseret casein 20% dl-methionin 0,4%

Hegsted saltvandsblanding 4% saccharose 49,1% cholesterol 1% 25 cholsyre 0,5% og vitaminer

For at inducere hypercholesterolemi hos kaniner, administreredes 1 g/dag/dyr cholesterol ved hjælp af en mave-sonde. Hver dyreart omfattede 84 handyr, nemlig rotter af 30 Spraque-Dawley stammen med en gennemsnitsvægt på 200 g og New Zealand kaniner på 3 kg, der opdeltes i 12 grupper med 7 dyr i hver. Alle dyrene sattes i en tilstand af hypercholesterolemi ved hjælp af foderet. En gruppe behandledes ikke, medens de andre 11 grupper behandledes med 35 0,5 g/kg en af harpikserne i 30 dage.

Harpikserne opløstes eller opslæmmedes i 10% gummiarabi- cumslim. Kun gummiarabicumslimen administreredes til kon trolgruppen.

10 DK 16 Η 3 Β 3 B

iy 5 På den 30. behandlingsdag aflivedes alle dyrene, og det totale plasmacholesterolindhold måltes i blodet opsamlet fra carotidarterierne (Pearson et al. J.Chim. Endocrin. Metabolism 12, 1245, 1952).

10 2) For at vurdere den fecale udskillelse af galdesyre, anvendtes 48 han beagle-hunde, der vejede ca. 8 kg og som opdeltes i 12 grupper med fire dyr i hver gruppe. Alle dyrene holdtes på en standarddiæt under standardbetingelser og med undtagelse af kontrolgruppen af hunde fik 15 alle grupper ud over deres diæt 2 g/kg/dag af en af harpikserne i 25 dage. Fra den 26. dag fra begyndelsen af forsøget bestemtes galdesyrerne i feces fra hundene, der havde fastet 12 timer i en stofskiftekasse (Grundy et al., J. Lipid Res. 6, 397, 1965; Makita et al., Ann.

20 Biochem. 5, 523, 1963; Forman et al., Clin.Chem. 14, 348, 1969).

Tabel 1 og 2 opsummerer de opnåede resultater med rotter og kaniner bragt i hypercholesterolemisk tilstand via 25 diæten, og som er behandlet med forskellige harpikser.

Den cholesterolsænkende virkning af de oralt administrerede harpikser i "in vivo" ligevægtsdoser stemte i det væsentlige overens med resultaterne fra "in vitro" for-30 søgene.

Med hensyn hertil fandt man atter, at når de omhandlede harpikser havde en tilsyneladende massefylde i vand på 0,18 til 0,20 g tørt materiale/ml og en vandabsorptions-35 evne på 69 til 73 vægt-% af polymervægten, så udviste de en cholesterolsænkende virkning både hos rotter og hos kaniner, som er overraskende større, end hvad der nogen-

DK 16 O Ob3 B

20 sinde er blevet opnået med andre harpikser. Forskellen med hensyn til de tidligere kendte harpikser er alle højt signifikante (P>0,01).

5 Tabel 3 viser galdesyreudskillelsesværdierne for hunde behandlet med 2 g/kg/dag med forskellige harpikser.

Det fremgår klart, at når de omhandlede harpikser administreres, fremkommer der en betydelig forøgelse i den fe-10 cale galdesyreudskillelse i forhold til, hvad man hidtil har nået med de bedste harpikser, der er tilgængelige på nuværende tidspunkt. Højt signifikante forskelle (P>0,01) findes mellem galdesyreværdierne udskilt med feces efter administrering af AP£, AP^, S^, S2, E^ og og værdier 15 opnået med andre harpikser.

20 25 30 35 21

^ DK 160 053 B

m h in H IN H +1

H

C\J ~ <1- h in [x] IN H +1 cn ni o m in oo tn +i

(N

i—i <r * co in oo tn +1 m

Xi Hl H ·> p di IN <J\ O' (0 <! + z ^ c ni Q) CL) N σι <t u c Ό <D +1

0) CO

ex -

*H H

p α o dl U rv U (0 £ Ό Λ .μ tn 00 o to ni Ή 0) Q) IN H m

. ? H

ht ‘jj o +i 03 H rj PH g P 03 -

O X

d CO

p = h tn 1-1 n i2 <|G0 fn - . 9 4-1 æm nhn ® £ Ό f-i +l £1 U 0) “ s i: % æ h ρηι > in cdUD IN - Σ, g £ m

O § Φ dj IN Η H

is -S +' ϊ Λ % HO ·Η O <1- o P O UD » n ø Cd in IN ni

O 01 £ N Η H

£ cd Q)dj 3 Ό dl S +1

P

0) O

CO 00 CD H £h Η i>i

(0 P P

P 18 M: O H (DØ E-ι Ό H S O ni o *h ni ~

£! S IN H UD

O Cd = +1

H

O

U 00 P H *

£ 00 UD

o in ni h w +i d ø

P

P

o d

H

cd

P

S I?

DK 160053B

22

OO <M

IO CT\

H IS Η IS

+ 1

CQ H

<t" CTv »

H S H CO

+1

H CM

CM tO

CO S H <f +1

CO CO

H CM ·> cq is h ro +1

H CT\ LO

A to

<3 S Η tO

+1

Φ I ,Α H S

i A lo «3 0 < S H ro ο <Η , , S ^ - +'

-P Φ H

Φ S o u P< Ό -P h O Φ f.

0—1 I CQ

Ϊ3 Φ O CM

iU c! c-! H ·> Φ CO o IS CM <1· β Λ £ •Η Φ ° +1 β -

CO

il ω _= ιο

Λ O «300 CO

cq od lo io co

O φ H <t S ΙΟ H

Λ y *

•H O ‘P CO

oi r ro -¾.¾ H - c. coco <f s

g -Π So, ^ ^ H

Η H -P +1 O 83 Φ β ·Η Φ Ό 1 (O, ,Ω -P β <83.

CQ +3 φ -P

CO φ Φ CQ -HO „ H b0 ^ -P O 00

H O-H-H

ris! β P S <t H

S ,Q CO ^ S + EJ Η Λ

β O

Φ β Φ

cq φ bC I

P -Η β

H cq H

CO Φ H -P- •P Η Φ m ~ O O X © © + ,

^ ϋ cd H S <r H

^ O -H O

i! S S CM lO

O CO

= +1

rH

O

u <r -p σι - β ω η

ο s CO CM

Μ +1 β φ β •Η §

X

Η C0 -Ρ ££. β Μ

< S

ro

DK 160GH3B

23

H 4 00 CD

4 O

IA Hl CM + 4 w 4 o- cm co o

ΙΑ H

CM +1

CM

co 4 iA σ cn o

MO H

CM +1

H

m

4 H IS

ΙΑ H

IS H

H CM +1

Ph < 4 4 oo

-4" H

IS H

4_> Al <D CM +1

-P HH

§ ^ 4 LA 4

2 OH

t . = S H

S U 3 w +l d ω 2 +l β w g 2 Λ I? 5 e ®

S S O -4 CM

2 Λ Æ LA 4 Λ <D P H ^

O -H

s I ss iA S ra H4 -i la

ML = Η IA

2 o r\ 3 ^ j_l H ^ % H +.

CO d Ta,0

ω Μ g dS

^ d bf dPn *4 -4 S

d * β JS © <f ω ή υΛ ..

Η Ώ Η ,Ο Η d % Η d Η ° Η d -ΡΟ πω Ι1^ -¾ -° ωΡπ -4 Ο Η d ω Η 00 3 δ , Η + 1 d-d Ρ ° la ^ cm 2 ® Η β Ο ·Η Λ Β 4 Ο Ο C0 Η Η = ΓΑ Ο CM Η Η +1 Ο β -Ρ β 4 00 ο s σ W CD ΙΑ + 1 0) d β 5 Η Μ cO \ -Ρ W) β ο

DK 160053B

24

De ovenfor viste data angiver klart, at de omhandlede harpikser uafhængigt af matrixens kemiske natur og fysiske form (microporøs, macroporøs eller gel) effektivt er i stand til at binde galdesyrer, og at de bevirker en cho-5 lesterolsænkning, når de administreres peroralt, der er større, end hvad man hidtil har opnået med kendte harpikser.

10 15 20 25 30 35

Claims (1)

1. DK Vh'0d3B Patentkrav : Fremgangsmåde til fremstilling af ikke-toksiske styren-, 5 acryl- eller epoxyharpikser med cholesterol-spejl-sænkende egenskaber, kendetegnet ved, at enten A) polymeriseres styren langsomt med 1,5 - 2,5% divinyl-forbindelse (100%) i nærvær af lauroylperoxid som ka- 10 talysator i en koncentration på 1 - 3% ved temperatu rer mellem 60 og 70 °C, eller i nærvær af benzoylper-oxid som katalysator i en koncentration på 0,3 - 1,5% ved temperaturer på 65 og 75 °C, hvorpå det fremstillede produkt chlormethyleres i et fortyndet system ved 15 35 - 40 °C og derpå amineres, eller B) polymeriseres acrylmonomer langsomt med 10 - 12% af en divinylforbindelse (100%) i nærvær af lauroylperoxid som katalysator i en koncentration på 1 - 2% ved en 20 temperatur på mellem 55 og 65 °C, eller i nærvær af benzoylperoxid som katalysator i en koncentration på 0,2 - 1,5% ved en temperatur på mellem 60 og 70 °C, hvorpå det fremstillede produkt ammonieres og kvarter-niseres med indtil 2 gange den støkiometriske mængde 25 af polyamin, eller C) polymeriseres epiklorhydrin langsomt med 3 - 4% af en divinylforbindelse (100%) i nærvær af lauroylperoxid som katalysator i en koncentration på 0,5 - 1,5% ved 30 en temperatur på mellem 55 og 65 °C, eller i nærvær af benzoylperoxid som katalysator i en koncentration på 0,2 - 1% ved en temperatur på mellem 60 og 70 °C, hvorpå det fremstillede produkt amineres og kvarter-niseres med et overskud af polyamin ved 35 - 40 °C, hvorved der opnås et polymerisat med en bestemt og jævnt fordelt tværbindingsgrad, der udviser en tilsyneladende 35 DK 16 Π O b 3B massefylde i vand på 0,18 - 0,20 g tørt materiale/ml, og en vandabsorptionsevne på 69 - 73 vægt-% af den polymere vægt. 5 10 15 20 25 30 35