DK159883B - Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser - Google Patents
Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser Download PDFInfo
- Publication number
- DK159883B DK159883B DK601787A DK601787A DK159883B DK 159883 B DK159883 B DK 159883B DK 601787 A DK601787 A DK 601787A DK 601787 A DK601787 A DK 601787A DK 159883 B DK159883 B DK 159883B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- sugar
- process according
- substituted
- enzyme
- reaction
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 35
- 150000002584 ketoses Chemical class 0.000 title claims description 7
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 title description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 title description 2
- WAAPEIZFCHNLKK-UFBFGSQYSA-N (2s,4s)-6-fluoro-2',5'-dioxospiro[2,3-dihydrochromene-4,4'-imidazolidine]-2-carboxamide Chemical class C([C@H](OC1=CC=C(F)C=C11)C(=O)N)[C@@]21NC(=O)NC2=O WAAPEIZFCHNLKK-UFBFGSQYSA-N 0.000 title 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 19
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 19
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims description 10
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims description 10
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 9
- -1 hydroxy, mercapto Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 8
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims description 8
- 208000007976 Ketosis Diseases 0.000 claims description 6
- 150000001323 aldoses Chemical class 0.000 claims description 6
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 6
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 6
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 5
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical group OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 claims description 4
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 4
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 claims description 3
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 claims description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 claims description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 2
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 claims description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 claims description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 claims 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- XMVJITFPVVRMHC-UHFFFAOYSA-N roxarsone Chemical group OC1=CC=C([As](O)(O)=O)C=C1[N+]([O-])=O XMVJITFPVVRMHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 15
- 125000003700 epoxy group Chemical group 0.000 description 12
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 10
- IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N Dimethyl sulfoxide Chemical compound [2H]C([2H])([2H])S(=O)C([2H])([2H])[2H] IAZDPXIOMUYVGZ-WFGJKAKNSA-N 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 150000002924 oxiranes Chemical class 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerol Substances OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 3
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 150000008195 galaktosides Chemical class 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CTKINSOISVBQLD-UHFFFAOYSA-N Glycidol Chemical compound OCC1CO1 CTKINSOISVBQLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 2
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 2
- FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N pentan-3-one Chemical compound CCC(=O)CC FDPIMTJIUBPUKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 2
- LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 1,3-dihydroxypropan-2-yl formate Chemical compound OCC(CO)OC=O LDVVTQMJQSCDMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 2-cyanobenzohydrazide Chemical compound NNC(=O)C1=CC=CC=C1C#N TWJNQYPJQDRXPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VTDOEFXTVHCAAM-UHFFFAOYSA-N 4-methylpent-3-ene-1,2,3-triol Chemical compound CC(C)=C(O)C(O)CO VTDOEFXTVHCAAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 235000021360 Myristic acid Nutrition 0.000 description 1
- TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N Myristic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCC(O)=O TUNFSRHWOTWDNC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100109871 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) aro-8 gene Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229910004298 SiO 2 Inorganic materials 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000007171 acid catalysis Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 239000011203 carbon fibre reinforced carbon Substances 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000009483 enzymatic pathway Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 125000003055 glycidyl group Chemical group C(C1CO1)* 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000006053 organic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 1
- HWCKGOZZJDHMNC-UHFFFAOYSA-M tetraethylammonium bromide Chemical compound [Br-].CC[N+](CC)(CC)CC HWCKGOZZJDHMNC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Epoxy Compounds (AREA)
Description
i
DK 159883 B
Opfindelsen angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af kendte og hidtil ukendte kulhydrater, der bærer en epoxygruppe som en glucosidisk aglycon eller angivet på en anden måde en særlig fremgangsmåde til fremstilling af 5 epoxysubstituerede aldoser eller ketoser, som har den i krav 1's indledning angivne formel I.
Epoxider er en klasse af organiske forbindelser, der har stor praktisk betydning som mellemprodukter ved organisk syntese og som en klasse af forbindelser, der i sig selv ud-10 viser mange anvendelige egenskaber. Som følge deraf har man i årenes løb udtænkt mange metoder til syntese af epoxider, beskrevet i anerkendte lærebøger i organisk kemi, såsom f.eks. i Comprehensive Organic Chemistry udgivet af Barton og Ollis og publiceret af Pergamon Press, 1984. Principielt anvendes to 15 hovedmetoder til syntese af et givet ønsket molekyle, som indeholder en epoxygruppe: Enten dannes epoxygruppen på basis af passende fraktionsgrupper, som findes i en precursor for det ønskede molekyle, såsom en gruppe, der indeholder en dobbeltbinding af typen carbon-carbon, eller også indføres 20 epoxidet i det ønskede molekyle ved en kondensationsreaktion, hvor én af reaktanterne bærer en epoxygruppe. Den foreliggende opfindelse er af den sidst angivne art.
En væsentlig vanskelighed, som foreligger ved organisk syntese af epoxider, hidrører fra reaktiviteten af epoxy-25 gruppen. Under mange forskellige betingelser vil epoxider reagere med opløsningsmidler og et stort antal organiske funktionelle grupper, således at én konsekvens deraf er, at indføring af en epoxygruppe i et komplekst, polyfunktionelt organisk molekyle kan være et yderst vanskeligt, hvis ikke 30 umuligt arbejde.
Et eksempel af denne art har relation til kulhydratmolekyler, som bærer en epoxygruppe i det glucosidiske aglycon, jævnfør formel I. På grund af tilstedeværelsen af mange reaktive grupper i sådanne molekyler, den lave 35 opløselighed af forbindelserne i de fleste organiske opløsningsmidler og‘ den følsomme karakter af molekylerne er
DK 159883 B
2 det et vanskeligt og ofte et meget langsommeligt arbejde at fremstille sådanne forbindelser ved organisk syntese. Et eksempel, der er beskrevet af J.E.G. Barnett og A. Ralph i Carbohydr. Res. 17 (1971), 231, angår syntese af 2,3-epoxy-5 propyl-g-D-glucopyranosid, formel II.
HO -i
A
)-0 0-CH--CH--CH-, (II) HO 1
OH
En syntese af kulhydrat-molekyler, hvorpå der findes en epoxygruppe, omfatter en temmelig lang række af syntesetrin, 15 hvorved man går ud fra let tilgængelige udgangsmaterialer.
I de senere år har der været en voksende interesse hvad angår potentialet for enzymer som organiske katalysatorer. Da disse katalysatorer i mange henseender er enestående, har de mange potentielle anvendelsesmuligheder i den 20 organiske syntese. F.eks. muliggør enzymerne gennemførslen af organiske reaktioner under yderst milde betingelser, og de er ofte substratselektive, hvorved man f.eks. muliggør selektiv omdannelse af en enkelt gruppe blandt adskillige i kemisk henseende meget beslægtede grupper i organiske molekyler eller 25 syntesen af optisk rene organiske komponenter udfra racemiske udgangsmaterialer.
En gruppe af enzymer, der har tiltrukket sig en vis interesse som organiske katalysatorer, er enzymer, der er i stand til at spalte bindinger ved C-l stillingen (aldoser) 30 eller C-2 stillingen (ketoser) af et kulhydrat. Organiske kemikere har været interesserede i disse enzymer, fordi de muliggør gennemførslen af visse kemiske reaktioner ved de enzymatiske spaltningspositioner.
DK 159883 B
3
Anvendelsen af $-galactosidaser til syntese af galactosider illustrerer, hvorledes enzymer, der er i stand til at spalte bindinger ved C-l stillingen (aldoser) eller C-2 stillingen (ketoser) af kulhydrater, kan anvendes til organisk 5 syntese. I J.Biol. Chem. 248 (1973), 6571 - 6574, beskriver T.J. Silhavy et al., hvorledes (2R)-glyceryl-B-D-galactopyra-nosid (skema 1, formel III) kan syntetiseres på basis af lactose og isopropylidenglycerol, der kondenseres til det tilsvarende galactosid (skema 1, formel IV) ved at blive udsat 10 for påvirkning af den 8-galactosidase, som fremstilles ved hjælp af E. coli og ved derefter at blive spaltet til det ønskede produkt med formel III ved sur katalyse, jævnfør skema 1.
DK 159883 B
Skema 1 4 ch3 H2CO-C-CH3
5 I I
GAL-GLU + HC--0 -3-:---.
I β-galactosidase ' h2c-oh ch3 10 I H+
h2co-c-ch3 H
I I
GAL-0-CH2“CH-0 (IV)
15 GAL-0-CH2-CH0H-CH20H
(III) GAL-GLU betegner lactose, og GAL betegner galactose.
På lignende måde beskriver T. Satoh et al. i Chem.Pharm.Bull 32 (1984), 1183 - 1187, anvendelsen af lactase fra Kleuromyces 20 fragilis med henblik på syntese af en serie af galactosider.
Som vist i skema 2 nedenfor, gør disse kemikere brug af arylglucosider som udgangsmateriale for en ad enzymatisk vej katalyseret udvekslingsreaktion til syntese af en serie alkylglucosider. Det fremgår af denne publikation, at 25 principielt den samme reaktion kan gennemføres med vidt forskellige radikaler R.
Skema 2
DK 159883 B
5 HO —i ! „0<r \ Γ 0H 1 /
10 I LACTASE
HO>_0 / \
/ \ ^OR ^ArOH
15 h^__X
HO -Γ
OH
Ar = aryl 20 R = alkyl
Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendes enzymer til syntese af kulhydrater med formlen I, som på deres C-l stilling (aldoser) eller C-2 stilling (ketoser) bærer en epoxygruppe. Det har således overraskende vist sig, at 25 molekyler, som bærer en i høj grad reaktiv epoxygruppe, kan anvendes ved enzymatiske reaktioner, og at epoxygruppen kan overføres til et andet organisk molekyle uden at forstyrre eller inaktivere enzymet på trods af, at enzymet indeholder talrige funktionelle grupper, som vides at reagere med 30 epoxider.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 1 angivne.
DK 159883 B
6
Hvis således SUGAR er oi-glucose-molekyldelen, er det enzym, som skal anvendes, α-glucosidase, hvis SUGAR er β-galactose-molekyldelen, er det enzym, som skal anvendes, β-galactosidase, osv. Disse enzymer udviser ikke blot en 5 spaltningsaktivitet, men også en tilsvarende overførselsaktivitet i forbindelse med den samme position som spaltnings-positionen.
Et defineret SUGAR-radikal i forbindelse med denne opfindelse kan således altid associeres med et enzym med en 10 defineret aktivitet, hvilket fremgår af den nedenfor angivne tabel, der kun er af illustrerende artFor. nogle SUGAR-radikaler gælder det, at en glycosidase med en relativt uspecifik aktivitet ville være i stand til at katalysere reaktionen, hvorimod mere specifikke glycosidaser er nødvendige 15 i andre tilfælde··.
SUGAR I Glycosidaseaktivitet ribose | ribosidase 20 xylose j xylosidase β-galactose j β-galactosidase glucose j glucosidase fructose j fruetosidase
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden 25 ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 2 angivne. Både β-galactose og β-galactosi-dase er- let rekvirerbare stof-fer, og slutproduktet er et værdifuldt råmateriale til reaktion med organiske syrer.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden 30 ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 3 angivne. Både lactose og galactosidase er billige og let rekvirerbare.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegn-35 ende del af krav 4 angivne. Både saccharose og glucosidase er billige og let rekvirerbare.
DK 159883 E
7
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 5 angivne. På denne måde gør man et meget reaktivt substrat let tilgængeligt.
5 En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 6 angivne. Der foreligger ingen steriske hindringer, og reaktionen kan gennemføres glat og med høje udbytter.
10 En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 7 angivne. På denne måde opnås alle de sædvanlige fordele ved at anvende et immobiliseret enzym.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden 15 ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 8 angivne. Når begge reaktanter er tungt opløselige i vandige medier, foretrækkes denne udførelsesform.
En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden 20 ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 9 angivne. Når begge reaktanter er tungt opløselige i rene vandige medier, men letopløselige i en blanding af vand og et organisk opløsningsmiddel, foretrækkes denne udførelsesform.
25 En foretrukken udførelsesform for fremgangsmåden ifølge opfindelsen omfatter, at den gennemføres i et tofase-system. Når den ene reaktant er let opløselig i et vandigt medium, og den anden reaktant er let opløselig i et organisk opløsningsmiddel, foretrækkes denne udførelsesform, og 30 reaktionen finder sted i mellemfasen.
De reaktioner, som kan udføres ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan sammenfattes som angivet nedenfor i skema 3, hvor X er hydrogen, en kulhydratremanens, alkyl eller aryl, hvilke alle kan være substitueret 35 med hydroxy, mercapto, nitro, alkoxy, carboxy eller amino, Z er oxygen eller svovl, Y er alkylen, som kan være 8
DK 159833 B
substitueret med hydroxy, mercapto, nitro, alkoxy, carboxy 12 3 eller ammo, og R , R og R er ens eller forskellige og hver for sig repræsenterer hydrogen, alkyl eller aryl, hvorved begge de sidst angivne radikaler kan være substitueret med 5 hydroxy, mercapto, nitro, alkoxy, carboxy eller amino, hvorved den (usubstituerede) alkylgruppe fortrinsvis indeholder 6 karbonatomer eller under 6 karbonatomer, og hvorved den (usubstituerede) arylgruppe fortrinsvis indeholder mellem 6 og 10 karbonatomer, inklusive.
10 Fortrinsvis indeholder alkylengruppen 8 karbon atomer eller mindre end 8 karbonatomer, fortrinsvis 4 karbonatomer eller under 4 karbonatomer. Eksempler på foretrukne kulhydrat-remanenser (X) er monosaccharid-remanenser, f.eks. en glucoseremanens. Fortrinsvis er aryl phenyl eller 15 naphthyl, der kan være substitueret eller usubstitueret. De substituerede phenyl- eller naphthylradikaler foretrækkes, f.eks. de nitrosubstituerede radikaler, på grund af den højere reaktivitet af forbindelsen V.
Skema 3
DK 159883 B
9 ov / \ ~ enzym SUGAR-O-X + H-Z-Y-C-C-R ·-->
I I
5 R1 R3 (V) (VI) /\ 2
SUGAR-Z-Y-C—C-R
I I
10 R1 R3 (I) 12 3 hvor R , R , R , SUGAR, X, Y og Z hver er som defineret i det følgende krav 1.
De enzymer, som kan anvendes ved fremgangsmåden 15 ifølge opfindelsen, er enzymer, der kan spalte -OX-bindingen af forbindelsen SUGAR-O-X (V), vist i skema 3, jfr. krav 1.
De enzymer, der anvendes ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan foreligge i opløsning eller være immobiliseret. Enzymerne kan også modificeres ved kemiske eller genetiske 20 metoder for at optimere reaktiviteten deraf i forbindelse med den pågældende reaktion.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan gennemføres ved at blande acceptor- og donor-komponenten ved reaktionen, dvs. forbindelserne med formlerne henholdsvis V og VI, i 25 vand, der indeholder enzymet med stuetemperatur. Om ønsket kan reaktionsblandingen opvarmes for at accelerere reaktionen. Man kan også tilsætte organiske opløsningsmidler til reaktionsblandingen for at forøge reaktanternes opløse-
DK 159883 B
10 lighed, og reaktionsmediets pH-værdi kan indstilles med henblik på opnåelse af maksimal enzym-aktivitet og/eller -stabilitet.
De forbindelser med den almeme formel I, som kan 5 fremstilles ved hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, kan anvendes til mange formål. F.eks. muliggør den reaktive epoxygruppe i molekyler med den almene formel I koblingen deraf til andre molekyler. Derfor kan kulhydrat-raolekyldele let overføres f.eks. til en matrix, som bærer hydroxyl-10 grupper, såsom Sepharose eller cellulose, eller kulhydratremanenser kan kobles til proteiner, der derved omdannes til glycoproteiner.
En reaktion af speciel interesse, som kan gennemføres under anvendelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, 15 er illustreret i skema 4 nedenfor. Ved reaktion med epoxidet med formel VIII kan et substratmolekyle med den almene formel V som vist omdannes til den epoxiderede forbindelse med formel IX, der som vist ved reaktion med en fedtsyre yderligere kan omdannes til monoglyceridet med formlen X. For-20 bindeiserne med den almene formel X, som således kan fremstilles udfra forbindelser med den almene formel IX, der er fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, er overfladeaktive midler med stor anvendelighed. Disse forbindelser kan således anvendes i næringsmidler og foder som emulger-25 ingsmidler, eller de kan anvendes til at forbedre mange funktionelle egenskaber af næringsmidler og foder. De reaktive forbindelser med den almene formel IX kan også kobles til aminosyrer, f.eks. i proteiner, hvorved de funktionelle egenskaber deraf ændres.
Skema 4
DK 159883 B
11 y°\ SUGAR-O-X + HO-CH2-CH—-CH2 -> (V) (VIII)
5 RCOOH
sugar-o-ch2-ch—ch2 -> (IX)
H2C-0-SUGAR
10 HCOH
H2C-OCOR
(X) hvor R repræsenterer en carboxylsyre-remanens, f.eks. alkyl, og 15 hvor SUGAR og X hver for sig er som defineret i det følgende krav 1.
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen illustreres ved de følgende eksempler 1 og 2. Eksempel 3, 4 og 5 illustrerer anvendelsen af de epoxyforbindelser, som fremstilles ved 20 hjælp af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
EKSEMPEL 1
DK 159883 B
12
Fremstilling af 2,3-epoxypropyl-8-galactopyranosid β-Galactosidase (leveret af Boehringer Mannheim og udvundet fra E. coli, 830 μΐ, ca. 50 U, suspenderet i 5 (NH^)2SO^) blev sat til en blanding af 5 g (16,6 mmol) o-nitrophenylgalactopyranosid og 17,5 ml (0,26 mmol) 2,3-epoxy-1-propanol i 400 ml puffer (0,07 M fosfatpuffer, 10 mM MgCl2, pH = 7). Omsætningen blev fulgt ved tyndtlagskromatografi (i det følgende betegnet TLC) og højtryksvæskekromatografi (i det 10 følgende betegnet HPLC). Efter 4 timers forløb blev blandingen ekstraheret med æter (4 x 100 ml) til fjernelse af nitro-phenol, og vandfasen blev inddampet ved reduceret tryk. Produktet blev taget op i ethanol og uorganiske salte blev filtreret fra. Udbyttet ved inddampning var 6,4 g råprodukt.
15 Dette produkt blev underkastet kromatografering på
Si02 og yderligere krystalliseret af absolut ethanol, hvilket gav 1,1 g (28%) af den i overskriften anførte forbindelse. Smeltepunkt: 126 - 127°C.
Ή NMR(DMS0-d6) delta; 2,6 (m, IH), 2,74 (m, IH), 3,14 (m, 20 IH), 3,2 - 3,4 (m, 3H), 3,45 - 3,55 (m, 2H), 3,56 - 3,65 (m, 2H), 3,73 (dd, IH), 4,13 (d, IH), 4,38 (d, IH), 4,56 (m, IH), 4,72 (d, IH), 4,94 (d, IH).
13C NMR(DMS0-d6) delta; 43,8, 50,1, 60,5, 68,2, 69,3, 70,5, 73,4, 75,2, 103,4.
EKSEMPEL 2
DK 159883 B
13
Fremstilling af 2,3-epoxypropyl-B-D--galactopyranosid β-Galactosidase (leveret af Boehringer Mannheim og udvundet fra E. coli, 12 mg frysetørret, ca. 2400 U) blev sat 5 til en blanding af 5 g (13,9 mmol) lactose og 20 ml (0,3 mol) 2,3-epoxy-l-propanol i 300 ml puffer (0,07 M fosfatpuffer, 10 mM MgCl2, pH = 7). Reaktionsblandingen blev omrørt i 15 timer ved stuetemperatur og derefter opvarmet til 80°C i 10 minutter. Vandfasen blev inddampet ved reduceret tryk. Pro-10 duktet blev taget op i ethanol og filtreret fra uorganiske salte. Inddampning gav det rå produkt som en gul sirup. Yderligere rensning blev udført som i eksempel 1, og dataene var konsistente med de ovenfor angivne.
EKSEMPEL 3 15 Fremstilling af 1'-0-tetradecanoyl-3'-O-B-D-galactopyranosyl-glycerol_ 2,3-Epoxypropyl-f3-D-galactopyranosid (1 g, 4,2 mmol) blev sat til myristinsyre (1,06 g, 1,1 ækvivalent) ved 80°C. Derefter blev der tilsat tetraethylammoniumbromid (40 mg, 0,05 20 ml ækvivalent). Den halvfaste blanding blev omrørt i 3 timer. Produktet blev taget op i diethylketon/methanol (i det følgende betegnet Et20-MeOH) (50:50) og inddampet på SiC>2 efterfulgt af kromatografering, hvorved man fik 1,2 g (61%) af titelforbindelsen, som blev krystalliseret af acetone.
25 Ή NMR(DMSO-d6) delta; 0,88 (t, 3H), 1,25 (bs, 20H), 1,54 (m, 2H), 2,32 (t, 2H), 3,25 - 3,6 (mm, 6H), 3,65 (bs, IH), 3,72 (dd, IH), 3,83 (m, IH), 4,0 (m, IH), 4,08 (m, 2H), 4,4 (d, IH), 4,6 (t, IH), 4,75 (d, IH), 4,9 (d, IH), 5,0 (d, IH).
14
DK 1 59883 B
13C NMR(DMSO-d6) delta; 13/8, 22,0, 24,4, 28,5, 28,6, 28,7, 28.8, 28,9 - 29,0 (4c), 31,2, 33,5, 60,4, 65,4, 67,5, 68,1, 70.4, 70,6, 73,3, 104,0, 172,8.
EKSEMPEL 4 5 Fremstilling af 1'-O-hexadecanoyl-3'-0-3-D-galactopyranosyl-glycerol blev udført på analog måde som i eksempel 3 *H NMR(DMSO-d6) delta? 0,86 (t, 3H), 1,25 (bs, 24H), 1,5 (m, 2H), 2,3 (t, 2H), 3,25 - 3,55 (mm, 6H), 3,62 (bs, IH), 3,7 (m, IH), 3,8 (m, IH), 3,96 (m, IH), 4,05 (m, 2H), 4,4 (d, IH), 10 4,55 (t, IH), 4,7 (d, IH), 4,85 (bs, IH), 4,98 (d, IH).
13c NMR(DMSO-d6) delta; 13,8, 22,0, 24,4, 28,5, 28,7 (2c), 28,9 (2c), 29,0 (5c), 31,2, 33,5, 60,4, 65,4, 67,5, 68,1, 70.4, 70,6, 73,4, 75,3, 104,0, 172,8.
EKSEMPEL 5 15 Fremstilling af 1'-O-octadecanoyl-3'-O-8-D-galactopyranosyl-glycerol blev udført på analog måde som i eksempel 3 Ή NMR(DMSO-d6) delta; 0,84 (t, 3H), 1,24 (bs, 28H), 1,5 (m, 2H), 2,28 (t, 2H), 3,25 - 3,55 (mm, 6H), 3,6 (bs, IH), 3,68 (m, IH), 3,8 (m, IH), 3,95 (m, IH), 4,05 (m, 2H), 4,35 (d, 20 IH), 4,55 (t, IH), 4,7 (d, IH), 4,85 (d, IH), 4,95 (d, IH).
13C NMR(DMSO-d6) delta; 13,8, 22,0, 24,4, 28,5, 28,6, 28,7, 28.9, 29,0 (8c), 31,3, 33,5, 60,4, 65,4, 67,5, 68,2, 70,5, 70,7, 73,4, 75,3, 104,0, 172,8.
Claims (9)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser med den almene formel I A 2
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at SUGAR er β-galactose og at enzymet er en β-galactosidase, fortrinsvis fremstillet ved hjælp af E. coli.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1-2, kendetegnet ved, at 15 forbindelsen med formel V er lactose, og at enzymet er galactosidase.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1-3, kendetegnet ved, at forbindelsen med formel V er saccharose, og at enzymet er glucosidase.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1-4, kendetegnet ved, at X er en arylgruppe med 6-10 karbonatomer.
5 SUGAR-Z-Y-C-C-R (I) I I R1 R3 hvor SUGAR betyder en galactose-, glucose-, fructose-, xylose- eller ribose-molekyldel, Z betyder oxygen eller svovl knyttet 10 til det terminale, anomere C-l karbonatom (aldoser) eller C-2 karbonatom (ketoser) af sukker-molekyldelen, Y betyder alkylen, der kan være substitueret med hydroxy, mercapto, 12 3 nitro, alkoxy, carboxy eller ammo og R , R og R , som er ens eller forskellige, hver for sig betyder hydrogen, alkyl eller 15 aryl, hvor alkyl og aryl kan være substitueret med hydroxy, mercapto, nitro, alkoxy, carboxy eller amino, og hvor i 12 3 tilfælde af, at nogle af radikalerne Y, R , R eller R er substitueret med en OH- eller SH-gruppe, de pågældende radikaler fortrinsvis er beskyttet, kendetegnet ved, at man 20 omsætter en forbindelse med den almene formel V SUGAR-O-X (V) hvor SUGAR er som ovenfor defineret, og hvor X er hydrogen, en kulhydrat-remanens, alkyl eller aryl, som alle kan være substitueret med hydroxy, mercapto, nitro, alkoxy, carboxy 25 eller amino, med en forbindelse med den almene formel VI DK 1 59883 B /°\ 2 H-Z-Y-C-C-R (VI) I ! R1 R3 12 3 5 hvor R , R , R , Y og Z hver er som ovenfor defineret og hvor 12 3 i tilfælde af, at nogle af radikalerne Y, R , R , R eller X er substitueret med en OH- eller SH-gruppe, de pågældende radikaler fortrinsvis er beskyttet, og at reaktionen katalyseres af et enzym, der spalter molekyldelen SUGAR-O- på i 10 den position, der er vist ved pilen: SUGAR-O-.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 2-5, kendetegnet ved, at Z er 12 3 oxygen, Y er methylen og R , R eller R hver er hydrogen.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 1-6, kendetegnet ved, at 25 enzymet er immobiliseret.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 1-7, kendetegnet ved, at reaktionen gennemføres i et organisk opløsningsmiddel. DK 159 383 B
9. Fremgangsmåde ifølge krav 1-8, kendetegnet ved, at reaktionen gennemføres i en blanding af vand og et organisk opløsningsmiddel.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK601787A DK159883C (da) | 1986-11-18 | 1987-11-16 | Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK549886A DK549886D0 (da) | 1986-11-18 | 1986-11-18 | Enzymproces |
| DK549886 | 1986-11-18 | ||
| DK601787A DK159883C (da) | 1986-11-18 | 1987-11-16 | Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser |
| DK601787 | 1987-11-16 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK601787D0 DK601787D0 (da) | 1987-11-16 |
| DK601787A DK601787A (da) | 1988-05-19 |
| DK159883B true DK159883B (da) | 1990-12-24 |
| DK159883C DK159883C (da) | 1991-05-13 |
Family
ID=26067866
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK601787A DK159883C (da) | 1986-11-18 | 1987-11-16 | Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (1) | DK159883C (da) |
-
1987
- 1987-11-16 DK DK601787A patent/DK159883C/da active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK601787D0 (da) | 1987-11-16 |
| DK159883C (da) | 1991-05-13 |
| DK601787A (da) | 1988-05-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Shinoyama et al. | Enzymatic synthesis of alkyl β-xylosides from xylobiose by application of the transxylosyl reaction of Aspergillus niger β-xylosidase | |
| Gao et al. | Novel enzymatic approach to the synthesis of flavonoid glycosides and their esters | |
| Stevenson et al. | Optimization of alkyl β‐D‐galactopyranoside synthesis from lactose using commercially available β‐galactosidases | |
| US5795749A (en) | Use of 2-deoxyribose-5-phosphate aldolase to prepare 2-deoxyfucose, analogues and derivatives | |
| Mandhapati et al. | The isothiocyanato moiety: an ideal protecting group for the stereoselective synthesis of sialic acid glycosides and subsequent diversification | |
| Bjo et al. | New enzyme catalyzed synthesis of monoacyl galactoglycerides | |
| US4859589A (en) | Enzymatic method for preparation of epoxy compounds | |
| Kurashima et al. | Enzymatic β-glycosidation of primary alcohols | |
| Binder et al. | Galactosylation by use of β-galactosidase: Enzymatic syntheses of disaccharide nucleosides | |
| JPH0631293B2 (ja) | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 | |
| DK159883B (da) | Enzymatisk fremgangsmaade til fremstilling af epoxysubstituerede aldoser eller ketoser | |
| WO2012013648A1 (en) | Process for producing glycosides of acrylate derivatives employing saccharides and glycosidases | |
| US8580538B2 (en) | Enzymatic production of an ethylenically unsaturated glycoside | |
| US11999764B2 (en) | Class of sucrose esters and a method for their preparation | |
| US6080563A (en) | Method for synthesizing 2-ketoaldonic acids | |
| Baker et al. | An improved strategy for the stereoselective synthesis of glycosides using glycosidases as catalysts | |
| US5068186A (en) | Process for the enzymatic preparation of disaccharide fluorides using α-glycosyl fluorides as substrates | |
| Nilsson et al. | Syntheses of modified carbohydrates with glycosidases: Stereo-and regiospecific syntheses of lactosamine derivatives and related compounds | |
| Nilsson et al. | Synthesis of disaccharide derivatives employing β-N-acetyl-d-hexosaminidase, β-d-galactosidase and β-d-glucuronidase | |
| Wu et al. | Highly anomer-and regio-selective transesterification catalyzed by alkaline protease from Bacillus subtilis in organic media | |
| EP0635063B1 (en) | Process for the preparation of glycolipids | |
| CN115584348B (zh) | 一种固定化多酶材料及其制备方法和应用 | |
| US5876981A (en) | Transglycosylation reactions employing β-galactosidase | |
| Ljevaković et al. | Syntheses and Enzymatic Hydrolyses of Acylated Methyl α-D-Mannopyranosides | |
| Uchida et al. | Formation of 3′-O-β-Galactosyl Compounds of 5-Bromouridine by Sporobolomyces singularis |