DK159124B - Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for sur phosphatase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden - Google Patents
Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for sur phosphatase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden Download PDFInfo
- Publication number
- DK159124B DK159124B DK268380A DK268380A DK159124B DK 159124 B DK159124 B DK 159124B DK 268380 A DK268380 A DK 268380A DK 268380 A DK268380 A DK 268380A DK 159124 B DK159124 B DK 159124B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- phosphate
- glucose
- group
- enzyme
- reaction
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 23
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 17
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 title claims description 7
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 title claims description 7
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 title claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 27
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 19
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 claims description 18
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 claims description 18
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 17
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 17
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 13
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 108010057899 Maltose phosphorylase Proteins 0.000 claims description 12
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 9
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 claims description 9
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 7
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 claims description 7
- YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=CC=C2C(OP(O)(=O)O)=CC=CC2=C1 YNXICDMQCQPQEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 6
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims description 6
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims description 6
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- HXXFSFRBOHSIMQ-DVKNGEFBSA-N beta-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-DVKNGEFBSA-N 0.000 claims description 6
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 6
- XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 4-Nitrophenyl Phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XZKIHKMTEMTJQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 5
- CMPQUABWPXYYSH-UHFFFAOYSA-N phenyl phosphate Chemical compound OP(O)(=O)OC1=CC=CC=C1 CMPQUABWPXYYSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- LNQVTSROQXJCDD-KQYNXXCUSA-N 3'-AMP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H]1O LNQVTSROQXJCDD-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 4
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N D-ribulose 5-phosphate Chemical compound OCC(=O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N 0.000 claims description 4
- JWBPMLSZYOGYFD-UHFFFAOYSA-N [4-[1-(4-hydroxy-2-methyl-5-propan-2-ylphenyl)-3-oxo-2-benzofuran-1-yl]-5-methyl-2-propan-2-ylphenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound C1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3C(=O)O2)C=2C(=CC(OP(O)(O)=O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C JWBPMLSZYOGYFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N adenosine monophosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(CO)C(OP(O)(O)=O)C1O LNQVTSROQXJCDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 4
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 claims description 3
- 229910052816 inorganic phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 3
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical group O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 2
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N Rbl5P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- VRVKOZSIJXBAJG-ODZAUARKSA-M sodium;(z)-but-2-enedioate;hydron Chemical compound [Na+].OC(=O)\C=C/C([O-])=O VRVKOZSIJXBAJG-ODZAUARKSA-M 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940045189 glucose-6-phosphate Drugs 0.000 claims 4
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 102000045595 Phosphoprotein Phosphatases Human genes 0.000 claims 1
- 108700019535 Phosphoprotein Phosphatases Proteins 0.000 claims 1
- WMDDNKROYKCDJC-UHFFFAOYSA-N [4-[3-oxo-1-(4-phosphonooxyphenyl)-2-benzofuran-1-yl]phenyl] dihydrogen phosphate Chemical compound C1=CC(OP(O)(=O)O)=CC=C1C1(C=2C=CC(OP(O)(O)=O)=CC=2)C2=CC=CC=C2C(=O)O1 WMDDNKROYKCDJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims 1
- XENHFSZRMFXQBS-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;pyridine-3-carboxamide Chemical compound OP(O)(O)=O.NC(=O)C1=CC=CN=C1 XENHFSZRMFXQBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 13
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 13
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 11
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 4
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 4
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 description 4
- ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N (4-hydroxyphenyl) [4-(3-oxo-1h-2-benzofuran-1-yl)phenyl] hydrogen phosphate Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1OP(O)(=O)OC1=CC=C(C2C3=CC=CC=C3C(=O)O2)C=C1 ANAZDOWEOOFEET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- -1 alkaline earth metal salt Chemical class 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 101710102459 Beta-phosphoglucomutase Proteins 0.000 description 2
- 240000001929 Lactobacillus brevis Species 0.000 description 2
- 235000013957 Lactobacillus brevis Nutrition 0.000 description 2
- 241000192130 Leuconostoc mesenteroides Species 0.000 description 2
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 2
- 241001464937 Neisseria perflava Species 0.000 description 2
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-ASMJPISFSA-N alpha-maltose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-ASMJPISFSA-N 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 102000010705 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040005050 glucose-6-phosphate dehydrogenase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N thymol Chemical compound CC(C)C1=CC=C(C)C=C1O MGSRCZKZVOBKFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930010764 α-maltose Natural products 0.000 description 2
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 108090001003 Beta-phosphoglucomutases Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010070600 Glucose-6-phosphate isomerase Proteins 0.000 description 1
- 102000005731 Glucose-6-phosphate isomerase Human genes 0.000 description 1
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 1
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 1
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005844 Thymol Substances 0.000 description 1
- LDKDGDIWEUUXSH-UHFFFAOYSA-N Thymophthalein Chemical class C1=C(O)C(C(C)C)=CC(C2(C3=CC=CC=C3C(=O)O2)C=2C(=CC(O)=C(C(C)C)C=2)C)=C1C LDKDGDIWEUUXSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical class 0.000 description 1
- 229910052784 alkaline earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 150000004712 monophosphates Chemical class 0.000 description 1
- 238000005895 oxidative decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 229960000790 thymol Drugs 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i
DK 159124B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde ved kinetisk analyse for sur phosphatase og reagens til anvendelse ved udøvelse af fremgangsmåden.
5 Fra Bergmeyer, H.U., "Methoden der enzymatischen Analyse", 3. Aufl.,
Bd. 1, s. 532-543, 826-829 og 923-927, Verlag Chemie, Weinheim/Berg-strasse, 1974, kendes metoder til aktivitetsbestemmelse af phospho-glucomutase, 6-phosphogluconatdehydrogenase, phosphoglucoseisomerase og 3-phosphoglyceratkinase. PhosphogTucomutaseaktivitet bestemmes 10 under anvendelse af glucose-6-phosphatdehydrogenase som indikatorenzym. Endvidere kan α-amylaseaktivitet bestemmes ved at måle maltose og glucose, der hidrører fra nedbrydningen af stivelse med a-amylase. Fra "J. Biol. Chem.", 199, 153-163 (1952) og "J. Biol. Chem.", 236, 2186-2189 (1961) er det kendt, at α-maltose med enzymet 15 maltosephosphorylase under tilstedeværelse af phosphationer kan omdannes til glucose og /J-D-glucose-l-phosphat ved, at /J-D-glucose- 1-phosphat danner et substrat for phosphoglucomutase til dannelse af glucose-6-phosphat. I "Analytical Biochemistry", 57, 303-305 (1974) beskrives en fremgangsmåde til kvantitativ bestemmelse af maltose 20 under anvendelse af maltosephosphorylase koblet med et glucoseoxi-dasesystem. Fra "Analytical Biochemistry", 53, 108-114 (1973) kendes en fremgangsmåde til spektrofotometrisk bestemmelse af /J-glucose-1-phosphat i nærvær af a-glucose-l-phosphat og glucose-6-phosphat og under anvendelse af /?-mutase. I "J. Gen. Appl. Microbiol.", 14, 25 359-371 (1968) beskrives oprensning af og 6-phosphogluconatdehydro- genases egenskab til oxidativ decarboxylering af 6-phosphogluconat under dannelse af ribulose-5-phosphat og COg. Endvidere beskrives der i "Årztl. Lab.", 17, 340-343, 1971, bestemmelse af a-amylaseak-tiviteten sammenkoblet med α-glucosidase, hexokinase og glucose-6-30 phosphatdehydrogenase som indikatorenzymer. I "Agr. Biol. Chem.", 37, 2813-2819, 1973, beskrives oprensning af maltosephosphorylase og undersøgelse af dette enzyms specificitet med henblik på anvendelse af samme til kvantitativ bestemmelse af maltose i nærvær af stivel-seshydrolysater. Fra "Methods of Enzymatic Analyses", vol. 1, 35 Academic Press, New York, s. 109-110 og 123-127, 1974, kendes endvidere bestemmelse af glucose ved en "hjælpereaktion" under anvendelse af et "hjælpeenzym", som omdanner glucose til glucose-6-phosphat, der kan indgå som substrat i en NADP-afhængig indikatorreaktion. Reaktionerne er således koblede. Der kan desuden udføres 2
DK 159124 B
flere "hjælpeaktioner" efter hinanden. I beskrivelsen til US patent nr. 3.823.071 beskrives en fremgangsmåde til bestemmelse af surt prostataphosphataseenzym i en biologisk væske, ved hvilken en vandig opløsning af den biologiske væske, der som eneste substrat indehol-5 der et alkalimetal- eller alkalisk jordartsmetalsalt af thymol-phthaleinmonophosphat, inkuberes, og at den ved inkubationen omdannede substratmængde bestemmes. Der beskrives endvidere i US patent nr. 3.799.843 en fremgangsmåde til bestemmelse af sur phosphatase under anvendelse af en substratsammensætning omfattende et thymol-10 phthaleinsalt som farvedannende reagens.
Formålet med den foreliggende opfindelse er at tilvejebringe en fremgangsmåde til analyse for sur phosphatase, med hvilken fremgangsmåde der tilvejebringes en metode til hurtig, enkel, pålidelig 15 og reproducerbar bestemmelse af sur phosphatase i en forelagt prøve.
Dette formål opnås med fremgangsmåden ifølge opfindelsen, som er ejendommelig ved, (a) at der ved en pH på fra ca. 4,5 til ca. 6 udføres samtidige 20 reaktioner, som indbefatter: (I) omsætning af et organisk phosphat udvalgt fra gruppen bestående af /J-glycerophosphat, phenylphosphat, p-nitro-phenylphosphat, a-naphthylphosphat, adenosin-3'-monophos-phat, thymolphthaleinmonophosphat og phenolphthaleinmono- 25 phosphat i nærværelse af den sure phosphatase og under frigørelse af uorganisk phosphat, (II) omsætning af maltose med phosphationer i nærværelse af maltosephosphorylase til dannelse af glucose og β-D-glu-cose-l-phosphat, 30 (Ill)omsætning af /l-D-glucose-l-phosphat i nærværelse af /J-D-phosphoglucomutase til dannelse af glucose-6-phosphat, og (IV) omsætning af glucose-6-phosphat i nærværelse af glucose-6-phosphatdehydrogenase og et co-enzym udvalgt fra gruppen 35 bestående af ^-nicotinamid-adenindinucleotid, Ø-nicotin- amid-adenindinucleotidphosphat og blandinger heraf til dannelse af den reducerede form af co-enzymet og 6-phos-phogluconatet, (b) at dannelseshastigheden for det reducerede co-enzym måles,
DK 159124 B
3 hvorhos den sure phosphatase, som måles, er hastighedsbegrænsende, og hvorhos der benyttes en ikke-phosphatpuffer til regulering af pH-værdien.
5 Den kinetiske analyse for sur phosphatase omfatter således følgende samtidige reaktioner: (I) organisk phosphat (R-P04 ) sur PhosPhataser po4'"" + r ___ Mp
10 (II) maltose + P04 _^ glucose + Ø-D-G-l-P
(III) Ø-D-G-l-P ^~PGM^ G-6-P
(IV) G-6-P + NAD G~6PDH ^ 6-P-G + NADH
15 og i en foretrukken udførelsesform også følgende reaktion: (V) 6-P-G + NAD 6'PDH ^ ribulose-5-P + NADH + 00£ 20 Nedenstående forkortelser er anvendt i ovenstående reaktionsskemaer og i det følgende:
Forkortelser: P04”’ : phosphation 25 MP : maltosephosphorylase β-D-G1P : /?-D-glucose-l-phosphat /3-PGM : /5-D-phosphoglucomutase G-1,6-diP : D-glucose-l,6-diphosphat G-6-P : glucose-6-phosphat 30 6-PG : 6-phosphogluconat G6PDH : glucose-6-phosphatdehydrogenase 6PDH : 6-phosphogluconatdehydrogenase NAD : Ø-nicotinamid-adenindinucleotid NADH : reduceret form af Ø-nicotinamid-adenindinukleotid 35
Skønt en hvilken som helst organisk phosphatforbindelse kan benyttes ved den første reaktion:
(I) R-P04~- sur Phosphatase^ + R
4
DK 159124 B
vælges den organiske phosphatforbindelse fortrinsvis blandt Ø-gly-cerophosphat, phenylphosphat, p-nitrophenylphosphat, a-naphthylphosphat, adenosin-3'-monophosphat, thymolphthaleinmonophosphat og phenolphthaleinmonophosphat og er fortrinsvis a-naphthylphosphat.
5
Ved ovenstående kinetiske analyse for sur phosphatase er det nødvendigt, at mængden af sur phosphatase er hastighedsbegrænsende. Det organiske phosphat hydrolyseres af sur phosphatase til phosphat-ioner.
10
Med hensyn til den anden ovenfor nævnte reaktion:
MP
(II) maltose + phosphat glucose + /J-D-G-l-P
15 omsættes tilsat maltose med de phosphationer, som dannes ved den første reaktion, under anvendelse af maltosephosphorylase som enzymatisk katalysator til dannelse af glucose og ^-D-glucose-1-phosphat.
20 Maltosephosphorylase er et enzym, som katalyserer reaktionen mellem α-maltose og uorganisk phosphat.
Den foretrukne kilde for maltosephosphorylase er en stamme af mikroorganismen Lactobacillus brevis (ATCC 8287), som er blevet 25 dyrket af Beckman Instruments, Inc., Microbics Operations, Carlsbad, Californien, og enzymet er blevet ekstraheret og renset ved sædvanlige fremgangsmåder derfra. Andre kilder for dette enzym er stammer af Neisseria meninqitides, Neisseria perflava og andre Lactobacil-li-stammer.
30
Med hensyn til den tredie af ovennævnte reaktioner:
(III) β-ϋ-G-l-P G-6-P
35 katalyserer enzymet Ø-phosphoglucomutase (/J-PGM) omdannelsen af Ø-D-glucose-l-phosphat til glucose-6-phosphat. Den foretrukne kilde for J3-PGM er Lactobacillus brevis (ATCC 8287). Den dyrkes og renses ved sædvanlige enzymrensningsmetoder. Andre kilder er stammer af Neisseria meninqitides, Neisseria perflava og Euqlena gracilis.
DK 159124 B
5
Fortrinsvis er glucose-l,6-diphosphat (G-l,6-diP) til stede i enzymsystemet for at virke som cofaktor for Ø-PGM. /J-PGM kræver /J-formen af G~1,6-diP for aktivitet, men det antages, at α-formen af denne cofaktor også kan virke.
5 +2 +2
Fortrinsvis er der også divalente kationer i form af Mn , Mg , ^2 +7 i o
Co , Zn eller Ni til stede i enzymsystemet for at virke som cofaktor for Ø-PGM. Kationerne Mn+2, Mg+2 eller Co+2 foretrækkes fremfor Zn+2 eller Ni+2.
10
Hvad angår den fjerde af ovennævnte reaktioner:
(IV) G-6-P + NAD G"6PPH ^ 6-P-G + NADH
15 omsættes glucose-6-phosphat med /l-nicotinamid-adenindinucleotid og G6PDH under dannelse af 6-phosphogluconat og NADH.
Den foretrukne kilde for G-6-PDH er Leuconostoc mesenteroides (ATCC 12291), men det kan fås fra andre kilder.
20
Formålet med den eventuelle femte reaktion er at forøge sensitiviteten og nøjagtigheden af analysen ved at forøge den dannede mængde NADH: 25 (V) 6-P-G + NAD 6~PDH ^ ribulose-5-P + NADH + C02
Den foretrukne kilde til enzymet 6-PDH er Leuconostoc mesenteroides (ATCC 12291), hvorfra enzymet er blevet dyrket og renset ved sædvan-30 lige kendte fremgangsmåder, men det kan fås fra andre kilder.
Hastigheden for phosphationfrigørelse bestemmes således ved måling af hastigheden for dannet NADH, NADPH eller blandinger heraf under anvendelse af de koblede enzymatiske reaktioner ifølge den forelig-35 gende opfindelse.
NADH-Dannelseshastigheden og omregningen af denne hastighed til sur phosphatasekoncentrationen gennemføres ved velkendte metoder. En af disse metoder benytter spektrofotometrisk udstyr til måling af 6
DK 159124 B
ændringen i lysabsorbans som følge af dannelsen af NADH ved bølgelængder beliggende mellem 300 og 370 millimicron (nm) i et temperaturområde på fra ca. 15eC til ca. 50°C. En bølgelængde på ca. 340 nm ved ca. 37°C foretrækkes.
5 Når hastigheden for absorbansforandringen måles, kan koncentrationen af sur phosphatase beregnes efter følgende ligning, hvori absorbansforandringen måles ved en bølgelængde på 340 nm og ved en temperatur på 37*C.
10 IU/liter = ΔΑ x Vt x 1000 Vs x 6,22 15 ΔΑ = forandring i absorbans/minut
Vj. = totalt reaktionsrumfang
Vs = rumfang prøve indeholdende a-amylase 6,22 = millimolært absorptivitetstal for NADH ved 340 nm.
20 pH-Værdien for den sure phosphataseanalyse holdes i området fra ca.
4 til under 7, fortrinsvis fra ca. 4,5 til ca. 6, og navnlig fra ca.
5 til ca. 6. Reagenssysfemet Ran pufres ved hjæl~p af”en hvilken som helst ikke-phosphatpuffer med en pH-værdi på fra ca. 4 til under 7, og som er forligelig med de reagenser, som anvendes. Eksempler på 25 sådanne ikke-phosphatpuffere er natriumcitrat, natriumhydrogenmaleat og natriumkakodylat. (Natriumcitrat er den foretrukne puffer til brug i forbindelse med det kinetiske reagenssystem for sur phosphatase).
30 Opfindelsen omhandler også et reagens til anvendelse ved udøvelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen, hvilket reagens er ejendommeligt ved, at det omfatter: (a) maltose, 35 (b) et organisk phosphat udvalgt fra gruppen bestående af /J-glycerophosphat, phenolphosphat, p-nitrophenolphosphat, α-naphthylphosphat, adenosin-3'-monophosphat, thymolphtha-leinmonophosphat og phenolphthaleinmonophosphat, (c) maltosephosphorylase, 7
DK 159124 B
(d) et co-enzym udvalgt fra gruppen bestående af /1-nicotin-amid-adenindinucleotid, Ø-nicotinamid-adenindinucleotid-phosphat og blandinger heraf, (e) glucose-6-phosphatdehydrogenase, 5 (f) /J-D-phosphoglucomutase, og eventuelt (g) 6-phosphogluconatdehydrogenase, hvorhos ovenstående stoffer er til stede i en sådan mængde, at den sure phosphatase, som skal bestemmes, er hastighedsbegrænsende, og 10 (h) en ikke-phosphatholdig puffer med en pH-værdi på fra ca.
4,5 til ca. 6,0.
Reagenssystemet kan opbevares og benyttes i form af en vandig opløs-15 ning, eller opløsningen kan frysetørres ved sædvanlige foranstaltninger og rekonstitueres med vand, når den er klar til brug. Reagenssystemet kan også fremstilles under anvendelse af dets bestanddele i pulveriseret form, som opløses med vand" umiddelbart inden brugen.
20
Eksempler på analysereagenssammensætninger for sur phosphatase er angivet i nedenstående skema.
EKSEMPEL
25
Bestanddele i analyseblanding for sur phosphatase Nødvendig mindste
Bestanddel Foretrukket område mængde_
30 Organisk phosphat 1-5 mM 0,5 mM
Maltose 5-20 mM 2 mM
Maltosephosphorylase 1-5 IU/ml 0,5 IU/ml jff-Phosphoglucomutase 0,3-2 IU/ml 0,1 IU/ml
Co-enzym (NAD, NADP) 0,2-4 mM 0,1 mM
35 Glucose-6-phosphat DH 2-10 IU/ml 1 IU/ml
Di valent kation 1-5 mM 0
Glucose-l,6-diphosphat 0,02-0,2 mM 0
Ikke-phosphatpuffer 0,02-0,05 M 0,01 M
Claims (11)
1. Fremgangsmåde ved kinetisk analyse for sur phosphatase, kendetegnet ved, (a) at der ved en pH på fra ca. 4,5 til ca. 6 udføres samtidige reaktioner, som indbefatter: (I) omsætning af et organisk phosphat udvalgt fra gruppen bestående af Ø-glycerophosphat, phenylphosphat, p-nitro- 10 phenylphosphat, α-naphthylphosphat, adenosin-3'-monophos- phat, thymolphthaleinmonophosphat og phenolphthaleinmono-phosphat i nærværelse af den sure phosphatase og under frigørelse af uorganisk phosphat, (II) omsætning af maltose med phosphationer i nærværelse af 15 maltosephosphorylase til dannelse af glucose og /J-D-glu- cose-l-phosphat, (III) omsætning af /i-D-glucose-1-phosphat i nærværelse af /1-D-phosphoglucomutase til dannelse af glucose-6-phosphat, og 20 (IV) omsætning af glucose-6-phosphat i nærværelse af glucose-6- phosphatdehydrogenase og et co-enzym udvalgt fra gruppen bestående af Ø-nicotinamid-adenindinueleotid, j3-nicotin-amid-adenindinucleotidphosphat og blandinger heraf til dannelse af den reducerede form af co-enzymet og 6-phos- 25 phogluconatet, (b) at dannelseshastigheden for det reducerede co-enzym måles, hvorhos den sure phosphatase, som måles, er hastighedsbegrænsende, og hvorhos der benyttes en ikke-phosphatpuffer til regulering af pH-værdien. 30
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den yderligere omfatter omsætning af 6-phosphogluconat i nærværelse af co-enzymet og 6-phosphogluconatdehydrogenase under dannelse af den reducerede form af co-enzymet og ribulose-5-phosphat. 35
3. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at /J-D-glucose-l-phosphatet omsættes i nærværelse af Ø-D-phosphoglucomutase og glucose-l,6-di-phosphat under dannelse af glucose-6-phosphat. DK 159124 B
4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af de foregående krav, kendetegnet ved, at /1-D-glucose-l-phosphat omsættes i nærværelse af Ø-D-phosphoglucomutase, glucose-l,6-diphosphat og en 12. o i o ^2 12 kation udvalgt fra gruppen bestående af Mn , Mg , Co , Zn , Ni 5 og blandinger heraf under dannelse af glucose-6-phosphat.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1-4, kendetegnet ved, at de samtidige reaktioner gennemføres ved en pH-værdi på fra ca. 5,0 til ca. 6,0. 10
5 DK 159124 B
6. Reagens til anvendelse ved kinetisk analyse for sur phosphatase, kendetegnet ved, at det omfatter: (a) maltose, 15 (b) et organisk phosphat udvalgt fra gruppen bestående af Ø-glycerophosphat, phenolphosphat, p-nitrophenolphosphat, α-naphthylphosphat, adenosin-3'-monophosphat, thymolphtha-leinmonophosphat og phenolphthaleinmonophosphat, (c) maltosephosphorylase, 20 (d) et co-enzym udvalgt fra gruppen bestående af /J-nicotin- amid-adenindinucleotid, /J-ni cotinamid-adeni ndi nuel eotid- phosphat og blandinger heraf, (e) glucose-6-phosphatdehydrogenase, (f) Ø-D-phosphoglucomutase, og eventuelt 25 (g) 6-phosphogluconatdehydrogenase, hvorhos ovenstående stoffer er til stede i en sådan mængde, at den sure phosphatase, som skal bestemmes, er hastighedsbegrænsende, og 30 (h) en ikke-phosphatholdig puffer med en pH-værdi på fra ca. 4,5 til ca. 6,0.
7. Reagens ifølge krav 6, kendetegnet ved, at pufferen er natriumcitrat, natriumhydrogenmaleat eller natriumkakodylat. 35
8. Reagens ifølge krav 6, kendetegnet ved, at det yderligere omfatter glucose-l,6-diphosphat.
9. Reagens ifølge krav 6 eller 8, kendetegnet ved, at DK 159124 B det yderligere omfatter en kation udvalgt fra gruppen bestående af Mn+2, Mg+2, Co+2, Zn+2, Ni+2 og blandinger heraf.
10. Reagens ifølge krav 9, kendetegnet ved, at kationen 5 udvælges fra gruppen bestående af Mn+2, Mg+2, Co+2 og blandinger heraf.
11. Reagens ifølge krav 8, kendetegnet ved, at glu-cose-l,6-diphosphatet i det væsentlige består af /J-formen af dette. 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/657,976 US4036697A (en) | 1976-02-13 | 1976-02-13 | Kinetic assay for alpha-amylase |
| US65797676 | 1976-02-13 | ||
| US05/758,518 US4097336A (en) | 1976-02-13 | 1977-01-11 | Reagent system for beta-amylase assay |
| US75851877 | 1977-01-11 | ||
| DK61077 | 1977-02-11 | ||
| DK061077A DK160844C (da) | 1976-02-13 | 1977-02-11 | Fremgangsmaade til kinetisk bestemmelse af alfa-amylase i vandige oploesninger og reagenssystem til anvendelse herved |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK268380A DK268380A (da) | 1980-06-23 |
| DK159124B true DK159124B (da) | 1990-09-03 |
| DK159124C DK159124C (da) | 1991-02-11 |
Family
ID=27220817
Family Applications (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK268380A DK159124C (da) | 1976-02-13 | 1980-06-23 | Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for sur phosphatase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden |
| DK268280A DK158956C (da) | 1976-02-13 | 1980-06-23 | Fremgangsmaade ved kinetisk eller endepunktsanalyse for uorganisk phosphat og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden |
| DK268180A DK159123C (da) | 1976-02-13 | 1980-06-23 | Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for beta-amylase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden |
Family Applications After (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK268280A DK158956C (da) | 1976-02-13 | 1980-06-23 | Fremgangsmaade ved kinetisk eller endepunktsanalyse for uorganisk phosphat og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden |
| DK268180A DK159123C (da) | 1976-02-13 | 1980-06-23 | Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for beta-amylase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (3) | DK159124C (da) |
-
1980
- 1980-06-23 DK DK268380A patent/DK159124C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-06-23 DK DK268280A patent/DK158956C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-06-23 DK DK268180A patent/DK159123C/da not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK268280A (da) | 1980-06-23 |
| DK159124C (da) | 1991-02-11 |
| DK268380A (da) | 1980-06-23 |
| DK158956B (da) | 1990-08-06 |
| DK268180A (da) | 1980-06-23 |
| DK159123B (da) | 1990-09-03 |
| DK158956C (da) | 1990-12-31 |
| DK159123C (da) | 1991-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1136027A (en) | Method for determining a substance in a biological fluid and reagent combination for use in the method | |
| JP3080770B2 (ja) | 液体中のイオンを測定する方法及びそのための組成物 | |
| Čerkasovová et al. | Metabolic differences between metronidazole resistant and susceptible strains of Tritrichomonas foetus | |
| Kumagai et al. | Development of a highly sensitive, high-throughput assay for glycosyltransferases using enzyme-coupled fluorescence detection | |
| US4036697A (en) | Kinetic assay for alpha-amylase | |
| CA1220122A (en) | Enzymatic urea assay | |
| CA2291912A1 (en) | Method and reagent for quantitative determination of 1,5-anhydroglucitol | |
| US5804402A (en) | Reagent | |
| EP0533183B1 (en) | Composition for the measurement of potassium ion concentration | |
| CA1076935A (en) | Kinetic assay for alpha-amylase | |
| EP0712937A1 (en) | Method of determining chloride ion | |
| US4012286A (en) | Determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| US4816393A (en) | Nucleoside triphosphate-dependent 1-methylhydantoinase, a process for obtaining it and the use thereof | |
| DK159124B (da) | Fremgangsmaade ved kinetisk analyse for sur phosphatase og reagens til anvendelse ved udoevelse af fremgangsmaaden | |
| US4162194A (en) | Kinetic assay for acid phosphotase and composition therefore | |
| CA1235635A (en) | Process and reagent for the determination of glycerol | |
| US11773379B2 (en) | Enzymes and reagents for measurement of short chain fatty acids | |
| Ghetta et al. | Polynucleotide phosphorylase-based photometric assay for inorganic phosphate | |
| US4159923A (en) | Kinetic assay for inorganic phosphates and composition therefore | |
| Brand | Transaldolase | |
| JPS6236199A (ja) | カルシウムイオンの定量法 | |
| Casselton | Enzymes of the Embden—Meyerhof and Pentose Phosphate Pathways in Polyporus brumalis Extracts | |
| EP0071087B1 (en) | Improved determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| JPS5935592B2 (ja) | Ｄ−フルクト−スの定量法 | |
| Grassl | Guanosine-5′-triphosphate and inosine-5′-triphosphate |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |