DK152664B - Fremgangsmaade til fremstilling af modificeret levende pasteurella multocida vaccine - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af modificeret levende pasteurella multocida vaccine Download PDFInfo
- Publication number
- DK152664B DK152664B DK118781AA DK118781A DK152664B DK 152664 B DK152664 B DK 152664B DK 118781A A DK118781A A DK 118781AA DK 118781 A DK118781 A DK 118781A DK 152664 B DK152664 B DK 152664B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- vaccine
- pasteurella multocida
- pasteurella
- animals
- infection
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/823—Bacterial vaccine for bovine species, e.g. cattle
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/824—Bacterial vaccine for ovine species, e.g. sheep
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S424/00—Drug, bio-affecting and body treating compositions
- Y10S424/825—Bacterial vaccine for porcine species, e.g. swine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
DK 152664 B
i
Den foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til fremstilling af en modificeret levende Pasteurella multocida 5 vaccine, der er i stand til at inducere immunitet i kvæg, svin og får uden alvorlige bivirkninger.
Pasteurella multocida er kendt for at smitte kvesg, svin og får og forårsage åndedræt s sy gsomme og har været impliceret i etiologien af transportfebersyndromet. [Jensen m.fl., "Diseases of
Feedlot Cattle", 3.udgave, Lea & Febiger, Philadelphia (1979), side 59-65]. For tiden bekæmpes pasteurellosis hos husdyr med varierende grad af held ved administration 15 af vacciner, antimikrobielle midler eller en kombination af disse.
Kendte vacciner til pasteurellosis indeholder dræbte hele celler (bakteriner), levende svækkede bakterier eller 20 cellefraktioner, med eller uden en adjuvant. Et problem med afprøvningen og brugen af disse vacciner er, at den meget variable krydsbeskyttelse blandt .Pasteurella multocida serotyper ofte resulterer i, at den anvendte vaccinestamme bibringer ingen eller ringe immunitet over for 25 en inficerende organisme, der optræder under markbetingelser [Collins, "Mechanisms of acquired resistance to Pasteurella multocida infection: A Review", Cornell Vet. 67 (1): 103 (1977)].
30 I handelen værende bakteriner, der i reglen indeholder en eller flere stammer af formalindræbte Pasteurella, er uønskede på grund af flere faktorer. Mindst to doser af en sådan vaccine, givet med flere dages mellemrum, er nødvendigt til effektiv beskyttelse (Collins, supra). De er 3 5 ofte ikke vellykkede og har været iagttaget at forårsage forbigående endotoksisk chok [Larson m.fl., J.Am.Vet.Med.
DK 152664B
2
Assn. 155:495(1969)].
Der kendes og anvendes også et antal kombinationsvacciner indeholdende dræbt Pasteurella. For eksempel er dræbt Pasteurella blevet kombineret til brug hos kvæg 5 med kvæginfektionerne rhinotracheitis virus [Matsuoka m.fl., J.Am.Vet.Med.Assn. 160(3):333 (1972)], med kvæg-parainfluenza-3 virus [Sampson m.fl., Vet.Med.Small Anim. Clin. 67(12):1354 (1972), amerikansk patent nr. 3.501.770 og amerikansk patent nr. 3.526.696],i kvadrivalent form 10 med kvæginfektiøs rhinotracheitis virus, kvægviral diar- ré-mucosal sygdomsvirus og kvæg-parainfluenza-3 virus (amerikansk patent nr. 3.634.587) og med Salmonella ty-phimurium (amerikansk patent nr. 4.167.560). Tysk offentliggørelsesskrift nr. 2.816.942 beskriver en cellevaccine 15 til atrofisk rhinitis hos svin omfattende dræbt Pasteurel la multocida og Bordetella bronchiseptica. Fuglevacciner, især til brug mod fjerkrækolera, indeholdende dræbt Pasteu-rel’la alene eller i kombination med andre bakterier eller virus kendes også.
20
Fuglevacciner og kvægvacciner indeholdende levende Pasteurella har også været udviklet. En kalkunvaccine indehol- . dende levende svækket Pasteurella multocida er beskrevet af Bierer m.fl., Poultry Science 47(4):1258 (1968) og i 25 amerikansk patent nr. 3.855.408. Rice m.fl., Poultry
Science 55(4):1605 (1976) beskriver vaccination af høns med levende Pasteurella multocida vaccine, og amerikansk patent nr. 4.169.886 beskriver en levende fjerkrækolera-vaccine, fremstillet af M-3-G-stammen af Pasteurella mul-30 tocida.
Fornylig er en kvægvaccine til transportfeber, administreret ved intradermal injektion og omfattende en levende kultur af en markstamme af Pasteurella haemolytica i 35 en hjerne/hjerte-infusionssuppe, beskrevet i amerikansk patent nr. 4.171.354. Carter m.fl., Am.J.Vet.Res. 39(9): 1 ζ ^ / M Q *7 β \ \ /-r Λ ft ^ "3 \ m A A Ο ( 1 Q TO \ U ^ Ί>>Ί aJ> w η_
DK 152664 B
3 gisk septikemivaccine under anvendelse af en levende streptomycin-afhængig mutant af Pasteurella multocida, som er meget immunogen hos mus, kaniner og kalve. Denne vaccine har også beskyttet kalkuner mod fjerkrækolera 5 [Chengappa m.fl.. Avian Disease 23(1):57 (1979)].
Immunisering af kalkuner, høns og/eller mus med forskellige cellefraktioner af Pasteurella multocida er også opnået, f.eks. med kulturfiltrat, cellevægge og cytoplas-ma [Brown m.fl.,Άρρί.Microbiol. 19(5):837 (1970)], fri endotoksin [Rebers m.fl., Am.J.Vet.Res. 35(4):555 (1974) og canadisk patent nr. 1.030.873], et protein-polysaccharid kompleks isoleret af bakterierne [Ganfield m.fl., Infect. Immun. 14(4):990 (1976)], cellemembran [Borisenkovam.fi., 15 Veterinariya (Moskva) 5:48(1977)], en glycoproteinekstrakt af et kulturfiltrat [Srivastava m.fl., Can.J.Microbiol. 23(2):197 (1977)] og en ribosomal fraktion [Baba, Infect. Immun. 15(1):1 (1977)]. Nagy m.fl., Res.Vet.Sci. 20(3):249 (1976) beskriver beskyttelse af kvæg mod hæmorragisk sep-20 tikemi, forårsaget af Pasteurella multocida type E-organis- mer, med en vaccine omfattende en ekstrakt af Pasteurella kapselmateriale i en aluminiumhydroxid-adjuvant (se også britisk patent nr. 1.441.018. 1 2 3 4 5
Ribosomale vacciner fremstillet af forskellige organismer, 2 herunder Pasteurella multocida og Pasteurella haemolytica, er beskrevet i belgisk patent nr. 857.014. En kaliumthiocy= anat-ekstrakt af Pasteurella haemolytica serotype 1 viste sig at være immunogen og at frembringe kryds-immunitet hos 3 3® mus over for Pasteurella multocida type A [Mukkur, Infect.
4
Immun. 18(3):583 (1977)]. Høns og kalve er blevet beskyttet mod heterolog smitte med en kaliumthiocyanat-ekstrakt af Pasteurella multocida serotype 3 [Gaunt m.fl., Avian Disease 21(4):543 (1977), Mukkur, Am.J.Vet.Res. 39(8):1269 5 35 (1978)].
DK 152664 B
4
Indtil den foreliggende opfindelse har man ikke ment, at kemisk modifikation af PasteureUla bakterier og fremstilling af en sikker og meget effektiv vaccine til beskyttelse af dyr, 5 især økonomisk vigtige dyr til menneskeføde mod ødelæggelserne af transportfeber og andre sygdomme, der står i forbindelse med Pasteurella, har været opnået. Vaccinen fremstillet af de hidtil ukendte modificerede Pasteurella organismer har også vist sig at være krydsbeskyttende mod forskellige markisolater af Pasteurella arter.
En side af fremgangsmåden ifølge opfindelsen består i en sikker og effektiv vaccine til beskyttelse af kvæg, svin og får mod sygdomme i de øvre åndedrætsorganer, der står i forbindelse med Pasteurella infektion, herunder den, der almindeligvis 15 kaldes transportfeber {"shippeng fever"). Modificeret levende Pasteurella multocida monovalent vaccine er blevet fremstillet til administration ad den subkutane, intranasale eller, fortrinsvis, intramuskulære vej. Til administration til kvæg og svin -indeholder denne vaccine fortrinsvis fra ca. 1,0 x 107 20 til ca. 1,0 x iq11 CFU {kolonidannende enheder) pr. dosis af de modificerede levende Pateurella multocida organismer sammen med en egnet bærer og/eller stabilisator. Til administration til får indeholder vaccinen, fortrinsvis fra ca. 1,0 x 109 til ca. 1,0 x 10*1 CFU pr. dosis af den modificerede Pasteurella 25 multocida organisme. Vaccinen administreres i en eller to doser, fortrisvis to, på fra 2,0 til 5,0 ml hver, afhængende af arten og størrelsen af dyret, der vaccineres, samt organisme-tallet, dvs. antallet af organismer pr. dosis. 1 35
En bivalent vaccine bestående af vaccinale mængder af den modificerede levende Pasteurella multocida og den i ans. nr. 496/65 beskrevne modificerede levende'Pasteurella 5
DK 152664 B
haemolytica kan også anvendes. Til administration til kvæg og 7 svin indeholder en sådan vaccine fra ca. 1,0 x 10 til ca. 1,0 x 10"^ CFU pr. dosis af hver af de modificerede 5 levende Pasteurella stammer sammen med en egnet bærer og/eller stabilisator. Til administration til får inde- 9 11
holder vaccinen fra ca. 1,0 x 10 til ca. 1,0 x 10 CFU
pr. dosis af de modificerede levende Pasteurella multo- 7 11 cida organismer, og fra ca. 1,0 x 10 til ca. 1,0 x 10 10 CFU pr. dosis af de modificerede levende Pasteurella hae molytica organismer. Denne vaccine kan administreres ad den subkutane, intranasale eller, fortrinsvis, intra-muskulære vej i en eller to doser, fortrinsvis to, på fra 2,0 ml til 5,0 ml hver.
15
Den hidtil ukendte modificerede Pasteurella multocida organisme er deponeret i The American Type Culture Collection i Rockville, Maryland den 5. marts 1980 og har fået deponerings-nummer 31610. Deponeringen bevares i 30 år eller 5 år efter en forespørgsel, hvis dette er en længere periode. Den er tilgængelig for offentligheden fra udstedelsesdatoen for U.S-patent nr. 4293545. d. 6. oktober 1981.
Pasteurella bakterierne, der anvendes til at fremstille vaccinen, fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, blev 2 5 isoleret af lungevæv fra inficerede dyr og identificeret ved standard-identifikationsmetoder. Isolatet viste sig at være virulent ved vaccination af mus og hamstere. Formering af bakterierne blev udført i et flydende medium bestående af trypto-2Q sesuppe suppleret med thiamin (Difco Laboratories, Detroit,
Michigan). Tryptose -agar med 5% fåreblod blev anvendt som medium til at bestemme koloniegenskaberne af hver af Pasteurella forældrebakterierne.
35 6
DK 152664 B
Foraldre Pasteurella stammen modificeres kemisk med acridi-niumsalte såsom 3,6-bis-dimethylaminoacridiniumchlorid (acri -din-orange), 2,8(3,6)diami no-10-methy1acridiniumchlor id og 2,8{3,6)diaminoacridinuiumchlorid (acriflavin HC1) i koncentrationer fra ca. 0,1 ug pr. ml til ca. 150 ug pr. ml i et medium bestående af tryptose suppleret med thiaminsuppe. Organismerne kan passeres op til ca. 40. gange i suppe suppleret med acridiniumsalt, idet fra ca. 8 til ca. 26 passager er pas- ^0 sende. Efter modifikation ændres de morfologiske egenskaber af bakterierne fra glatte, skinnende og slimagtige kolonier med en diameter på 1,5 - 2,0 mm efter inkubation ved 37°C i 18 timer til ru, matte og punktformede kolonier med en diameter på 0,5 - 1,0 mm efter inkubation.. Der er ikke andre forskelle i Ί_ morfologiske egenskaber, men de modificerede organismer er na- 15 turligvis svækkede. De kemi sk modificerede bakterier kan dyrkes videre i ethvert egnet vækstmedium, f.eks. i tryptoseboui 1-Ion suppleret med thiamin, eller i det medium, som er beskrevet side 10 i den foreliggende ansøgning.
20
Fremgangsmåde ifølge opfindelsen er ejendommelig ved kemisk modificering af den virulente Pasteurella multocida stamme ATCC nr. 31609 ved 8-40 passager af den i nærværelse af et acridiniumsalt, hvorefter den opnåede modificerede bakterie 25
Pasteurella multocida ATCC nr. 31610 dyrkes i et egnet vækstmedium og kombineres med en bærer til vaccinen.
DETALJERET BESKRIVELSE AF OPFINDELSEN.
30 I soler ormer;±n2_02;_lsemislc_mod±f ±lcat±ori_af __Paste-urella.
multocida_vaccinestammen ^
Den virulente Pasteurella multocida (ATCC nr. 31609), der blev anvendt til at fremstille den modificerede levende organisme 35 kom fra og blev identificeret af University of Nebraska, Department of Veterinary Sciences og blev oprindelig isoleret af lungevæv fra en gnotob-iotisk kalv, der var inficeret med bakterierne .
DK 152664 B
7
Kalven var blevet vaccineret ad den intratracheale vej med en suspension af en samling lungevæv fra 2 angrebne kalve, der tidligere var blevet vaccineret på lignende måde med lungematerialer fremkommet af prøver, der var 5 leveret til laboratorie-undersøgelser. Inden 36 timer efter vaccinationen udviste kalven kliniske symptomer på bakteriel lungebetændelse, nemlig forhøjet temperatur, depression, hoste og besværet åndedræt. Dyret blev euta-niseret, og ved obduktion konstateredes alvorlig lunge-10 betændelse med en fibrinøs pleuritis. Prøver af lunge vævet blev udtaget aseptisk og frosset ved -50°C.
Prøver af det frosne væv blev optøet og udstreget på blod-agar-plader. Udvalgte kolonier af væksten blev iden-15 tificeret ved standard-biokemiske reaktioner som værende typiske for Pasteurella multocida. Andre udvalgte kolonier blev podet i et medium af tryptosebouillon suppleret med thiamin. Vækst af organismerne fik lov at foregå ved 37°C i 16 timer. Lige store portioner af kulturen 20 blev så dispenseret i små sterile flasker, der blev til proppet med sterile neoprenpropper, tillukket og lagret ved -70°C.
En flaske med den frosne bouillonkultur blev optøet og 25 podet i en 100 ml bouillonkultur af tryptosebouillon sup pleret med thiamin. Efter inkubation ved 37°C i 21 timer blev et rumfang på 1,0 ml af kulturen podet ad den intra-kardiale vej på en ung, voksen New Zealand hvid kanin.
7
Podematerialet indeholdt ca. 2,0 x 10 CFU pr. ml. Kani-30 nen blev dræbt 8 timer efter vaccinationen. Prøver af le ver og milt og en portion blod blev udtaget. Vævene blev homogeniseret, forenet med blodet og frosset ved -70°C.
En flaske af det frosne kaninvæv indeholdende Pasteurella 33 multocida organismerne blev optøet, og der blev foreta get to passager af den virulente organisme i tryptose- 8
DK 152664B
bouillon suppleret med thiamin. En lille portion af materialet fra den anden passage blev podet på tryptose-bouillon suppleret med acriflavin HC1 i en mængde på 0,75 yg pr. ml. Efter inkubation i 24 timer ved 37°C
C
blev en lille portion af bakterievæksten podet på tryp= tosebouillon indeholdende 1,5 yg pr. ml acriflavin HC1. Yderligere passager blev foretaget i tryptosebouillon suppleret med 1,5 yg pr. ml acriflavin HCl.
Hver passage af organismen i nærværelse af acriflavin HCl blev overvåget ved udstregning af væksten på overfladen af blod-agar-plader for at iagttage renheden af kulturen og eventuelle ændringer i morfologien af organismekolonierne.
15
En ændring i morfologien af kolonierne af den modificerede Pasteurella multocida stamme blev iagttaget efter ialt 8 passager i nærværelse af acriflavin HCl. Forældreorganis-men og organismerne fra de tidlige passager i nærværelse 20 af acriflavin HCl var glatte, skinnende og slimagtige. Størrelsen af disse kolonier efter inkubation ved 37°C i 18 timer var fra 1,5 til 2,0 mm i diameter. Kolonierne af organismerne fra den ottende passage, udstreget på blod- agar-plader, var ru og punktformede. Størrelsen af kolo- 25 o nierne var mellem 0,5 og 1,0 mm efter inkubation ved 37 c i 18 timer.
Den kemisk modificerede Pasteurella multocida stamme blev yderligere passeret i suppe suppleret med acriflavin HCl og undersøgt for renhed og for LD^Q-værdier på dyr (hamster og mus) efter 8., 15., 20., 26. og 30. passage. Forsøgsdyrene fik administreret 0,1 ml af vaccinestammen 6—8 indeholdende ca. 1,0 x 10 CFU ad den intraperitoneale ^ vej. Efter vaccination blev dyrene smittet med kendte virulente stammer af Pasteurella multocida. Smittestammerne, som blev anvendt, var Carter B (bison)stammen, USDA-stammen nr. 169 og USDA-stammen nr. 1062 eller isolater af
DK 152664B
9
Pasteurella multocida, der var fremkommet fra forskellige diagnostiske universitetlaboratorier. Smitteorganismer-ne havde i almindelighed forholdsvis lave LD^-værdier på fra 1 til 100 organismer.
5 De dyr, der tidligere var blevet vaccineret med en eller to doser af den kemisk modificerede stamme fra 8. til 26.
7 passage, modstod smitte med fra 1 til mere end 1,0 x 10 virulente organismer. På stadiet efter 26 passager beskyttede vaccinestammen alle de vaccinerede dyr.
10
En enkelt lille koloni af den modificerede Pasteurella multocida organisme fra 26. passage blev isoleret og podet på tryptosebouillon suppleret med thiamin.' Efter inkubation ved 37°C i 18 timer blev en stabilisator sat til IS vækstmediet med henblik på frysning. Organismen blev dispenseret i et antal flasker, som blev frosset ved -70°C. Denne lyofiliserede organisme blev deponeret i The American Type Culture Collection i Rockville,Maryland, den 5.marts 1980 og har fået deponeringsnummeret 31610.
20
For at bestemme den genetiske stabilitet af den modificerede Pasteurella multocida ifølge opfindelsen (ATCC nr.31610) blev materialet fra den 26.passage passeret yderligere 15 gange i tryptosebouillon suppleret med thiamin. Ved den 5., 25 lo. og 15. passage i fravær af acriflavin var morfologien af kolonierne på blod-agar-plader den samme som efter eksponering i 26 passager i acriflavinholdigt medium. De beskyttende egenskaber af 5., 10. og 15. passage i acrifla-vinfrit bouillonmateriale forblev uændrede. Virulensen 20 af organismerne efter 5., 10. og 15. passage i acriflavin- fri bouillon forblev lav og var lig med eller større end 7 1,0 x 10 organismer.
35 10·
DK 152664 B
Fremstilling_02_bru2_af_den__modificerede_levende _ Til vaccinefremstilling bliver den modificerede Pasteu-
O
rella multocida stamme (materiale fra 26.passage) yderligere formeret i et egnet vækstmedium. Et foretrukket vækstmedium ifølge opfindelsen har sammensætningen: 10 Bestanddel Gram/liter vand lavmolekylært stof fremkommet ved hydrolyse af proteiner 10,0 - 40,0 saltsyrehydrolysat af casein 5,0 - 20,0 15 pankreatisk hydrolysat af.casein indeholdende alle aminosyrer, der oprindelig findes i casein 5,0 - 20,0 pankreat i sk hydrolysat af casein, 9q indeholdende aminosyrer, peptider og større proteinfraktioner 5,0 - 20,0 gærekstrakt . 5,.0 - 20,0 natriumchlorid 0,5 - 3,0 25
Ovenstående bestanddele, forenes og steriliseres ved autoklavering. En opløsning af 20,0 - 80,0 gram pr. liter saccharose steriliseres separat ved autoklavering og sættes til de andre bestanddele, når den er kold. pH-3 0 værdien indstillles til 7,4 - 7,6 med ION natriumhydroxidopløsning.
Fra 1 til 4 dele af vækstmediet indeholdende de modifici- rede organismer forenes med 1 del stabilisator og lyofili- 3 5 seres. Et eksempel på en egnet stabilisator er følgende:
DK 152664 B
11
Opløsning 1
Bestanddele Gram/liter vand
Kaliumhydroxid (vandfri) 0,2 - 0,8 5 L-glutaminsyre 0,5 - 2,0
Kaliumphosphat,dibasisk (vandfri) 1,0 - 4,0
Kaliumphosphat,monobasisk ( " ) 0,3 - 1,5
Saccharose 50,0 - 200,0 10
Bestanddelene forenes og steriliseres ved autoklavering. Opløsning 2
Bestanddele Gram/liter vand 15
Gelatine (Knox) 100,0 - 300,0
Autoklaveret i 4 timer for at hydrolysere.
2 dele af opløsning 2 sættes til 3 dele af opløsning 1 for 20 at fremstille stabilisatoropløsningen.
Vaccination af kalve.
Den modificerede levende Pasteurella multocida vaccine fremstillet 25 ifølge opfindelsen blev administreret i to 5,0 ml doser, givet ad subkutan eller intramuskulær vej, med 2 ugers mellemrum til 10 kalve, der var konstateret at mangle beskyttende antistoffer. 9 af kalvene var sædvanlige malkekvægskalve, som var blevet berøvet råmælk efter 30 fødselen, og en kalv var gnotobiotisk og bragt til verden ved kejsersnit og holdt i isolationsaggregat. 2 uger efter administration af den anden dosis vaccine blev alle kalvene smittet ved intratracheal administration af Pasteurella multocida Carter type B organismer af kendt viru-35 lens, nar den administreres til kalve ad den subkutane og intratracheale vej. Resultaterne af denne undersøgelse fremgår af tabel I.
DK 152664 B
12 TABEL I.
Beskyttelse af kalve ved vaccination med en modificeret levende vaccine, fremstillet af ATCC nr. 31610 mod en 5 smitte med Pasteurella multocida Carter type B.
Vaccination (CFU/5,0 ml)
Status
Dyr Første dosis Anden dosis _Vej_ efter smitte 1 x) 2,5 x 10^ 4,5 x 10® Subkutan Døde (120 timer efterssmitte xx) 2 3,4 x 10^ 5,5 x 10® Subkutan Normal 3 3,4x10^ 5,5 x 10^ Subkutan Normal . c 4 3,4 x 10^ 5,5 x 10® Subkutan Normal iD 9 8 5 3,4x10 5,5x 10 Subkutan Normal 6 3,4 x 10^ 5,5x10® Intramuskulær Normal 9 8 7 3,4x10 5,5x10 Intramuskulær Normal
9 R
8 3,4x10 5,5x 10° Intramuskulær Normal 9 8 9 3,4x10 5,5x10 Intramuskulær Normal g o 10 3,4 x 10 5,5 x 10 Intramuskulær Normal A +) - - - Døde (48 timer efter smitte! 25 B +) - - - Døende, slagtet x) Gnotobiotisk.
xx) ingen Pasteurella fundet ved obduktion.
3Q +) Kontrol.
Vaccination af svin.
Den modificerede levende Pasteurella multocida vaccine fremstillet 35 ifølge opfindelsen blev administreret til 4 normale op fodringssvin med en vægt på 13,5 - 22,5 kg hver, som var blevet bestemt at være fri for beskyttende antistoffer over for Pasteurella multocida USDA-stammen nr. 169.
DK 152664 B
13
Dyrene blev vaccineret med 2 5,0 ml doser, administreret intramuskulært med 20 dages mellemrum. 2 uger efter administrationen af den anden dosis vaccine blev de vaccinerede dyr og 5 ikke-vaccinerede serologisk negative 5 kontroldyr smittet ved intravenøs vaccination med 1,5 x g 10 organismer af Pasteurella multocida USDA-stammen nr.
169, indeholdt i et 5,0 ml rumfang.
De vaccinerede dyr og kontrol dyrene blev holdt i adskilte rene rum i en isoleringsbygning efter smitten og blev iagttaget 10 mindst 2 gange dagligt i 14 dage. Ca. 3 timer efter administrationen af smittematerialet udviste kontroldyrene tegn på depression og åndedrætsbesvær. Alle kontrol dyrene blev ukoordinerede, dvs. viste tegn på tab af bevægelseskontrol såsom snubling og almindelig kejtethed, og ca. 8 timer efter smitten 15 lå de ned. 2 af kontroldyrene døde af akut lungebetændelse, henholdsvis 40 og 58 timer efter smitten. De øvrige 3 kontroldyr udviste tegn på åndedrætsbesvær og var tydeligt nedtrykte i flere dage. Et af kontroldyrene vendte tilbage til normal tilstand efter iagttagelsesperioden, medens de 2 andre kontroldyr forblev nedtrykte og ikke genvendt helbredet helt efter virkningerne af smitten.
De vaccinerede dyr var nedtrykte og spiste ikke i de 25 første 8-12 timer efter smitten, men vendte tilbage til normal tilstand inden for 24 timer. Resultaterne af denne undersøgelse fremgår af tabel II.
TABEL II.
30
Beskyttelse af svin ved vaccination med en modificeret levende vaccine, fremstillet af ATCC nr. 31610 mod en Pasteurella multocida USDA stamme nr. 169 smitte.
35
DK 152664 B
14
Vaccination (CFU/5,0 ml)
Status
Dyr Første dosis Ånden dosis efter smitte Bemærkninger 9 10 1 9,0x10 1,0x10 Levende og raske Normal 5 9 10 2 9,0x10 1,0x10 Levende og raske Normal 9 10 3 9,0x10 1,0x10 Levende og raske Normal 9 10 4 9,0x10 1,0x10 Levende og raske Normal A x) - - - Dårlig Trivedes 2 g ikke B x) - - - Dårlig Vendte til bage til normal C x) - - - - Døde (58 timer 15 efter smitte) D x) - - - - Dårlig Trivedes ikke
Ex)- - - - Døde (40 timer 2 g efter smitte) x) Kontrol.
Vaccination af får.
25
Den modificerede levende Pasteurella multocida vaccine fremstillet ifølge opfindelsen blev administreret til 10 uvaccine- rede følsomme får, som i vægt lå fra 18 til 58 kg, og som blev udtaget af en flok, hvis historie viste, at den var fri for åndedrætssygdoms-problemer. Dyrene blev 30 delt i to grupper, som blev vaccineret med to forskellige mængder vaccine ialt 2 gange. Den ene gruppe dyr'·modtog vaccine indeholdende ca. 1,0 x 10^ CFU/5,0 ml dosis, og den an- g den gruppe blev vaccineret med ca. 4,0 x 10 CFU/5,0 ml dosis. Tidsintervallet mellem administrationen af de to 35 doser vaccine var 20 dage.
DK 152664 B
15 14 dage efter den anden vaccination blev de vaccinerede får og en kontrolgruppe smittet ved intravenøs administra- g tion af ca. 3,0 x 10 CFU/3,0 ml rumfang Pasteurella mul- tocida USDA stamme nr. 1062. -Efter smitten blev dyrene 5 iagttaget mindst to gange om dagen i en periode på 14 dage.
Det blev noteret, at inden for 4 timer efter smitten blev kontroldyrene nedtrykte og udviste tegn på åndedrætsbesvær.
50 Inden for flere timer blev dyrene i denne gruppe stadig mere nedtrykte, og åndedrættet blev meget besværligt. To af kontroldyrene døde af lungebetændelse, den ene 38 timer efter smitten, og den anden 148 timer efter. De tre overlevende dyr forblev nedtrykte og lå ned i længere tid.
15 Hvert af kontroldyrene udviklede led-opsvulmninger og udviste depression og varierende grad af bevægelsesvanskelighed og åndedrætsvanskelighed.
De fem får, der var vaccineret med to reducerede doser af 20 vaccinen, udviste i hovedsagen samme tegn og symptomer efter smitten som kontroldyrene. Tre af disse dyr døde 65, 73 og 294 timer efter smitten. Omfattende lungebetændelse blev iagttaget hos hvert af disse dyr ved obduktion.
De to overlevende dyr kunne ikke vende tilbage til nor-25 mal tilstand og var svage og nedtrykte i hele perioden efter smitten.
Dyrene, der var var vaccineret med to doser indeholdende 1,0 x 1010 CFU/dosis var let nedtrykte og hørte op med 30 at spise straks efter smitten. Inden for 24 timer efter smitten af dyrene,med undtagelse af et dyr der blev halt, vendte dyrene tilbage til normal tilstand. I resten af iagttagelsestiden udviste dyrene i denne gruppe forbigående halthed og udviste periodisk nogen depres-35 sion. Et dyr blev nedtrykt og helt halt mod slutningen af iagttagelsesperioden og blev slagtet efter afslutning
DK 152664 B
16 af undersøgelsen. Ved obduktion blev iagttaget et lille lungebetændelsesområde i den ene lap, og Pasteurella mul-tocida-agtige organismer blev udvundet af de pågældende ledvæsker. Tabel III viser resultaterne af denne under-5 søgelse.
TABEL III.
Beskyttelse af får ved vaccination med en modificeret le-10 vende vaccine, fremstillet af ATCC nr. 31610 mod en Pasteurella multocida stamme nr. 1062 smitte.
Vaccination (CFU/5,0 ml)
Status 15 Dyr Første dosis Anden dosis efter smitte Bemærkninger 9 10 1 9,0 x 10 1,0x10 Levende Normal 9 10 2 9,0 x 10 1,0x10 Levende Normal 9 10 3 9,0x10 1,0x10 Levende Normal 9 10 4 9,0 x 10 1,0 x 10 Levende Nedtrykt, 20 halthed, slagtet 5 9,0 x 10^ 1,0 x 10^ Levende Normal 6 3,6 x 108 4,0 x 108 Dårlig Slagtet 7 3,6 x 108 4,0 x 108 Dårlig Døde (32 dage 2 5 efter smitte) 8 3,6 x 108 4,0 x 108 Døde (254 timer efter smitte) 9 3,6 x 108 4,0 x 108 Døde (7 3 timer efter smitte) 30 10 3,6 x 108 4,0 x 108 Døde (6 5 timer efter smitte) A x) - - - Dårlig Nedtrykt, ledproblemer 35 b x) - - - - Dårlig Nedtrykt, ledproblemer
Claims (4)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af en modificeret levende Pasteurella multocida vaccine, der er i stand til at inducere immunitet i kvæg, svin og får uden alvorlige bivirkninger, kendetegnet ved kemisk modificering af den virulente Pasteurella multocida stamme ATCC nr. 31609 ved 8-40 passager 20 af den i nærværelse af et acridiniumsalt, hvorefter den opnåede modificerede bakterie Pasteurella multocida ATCC nr. 31610 dyrkes i et egnet vækstmedium og kombineres med en bærer til vaccineni
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at vækstmediet er .tryptosebouillon suppleret med thiamin.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at væsktmediet har sammensætningeni 30 Bestanddel Gram/liter vand lavmolekylært stof fremkommet ved hydrolyse af proteiner 10,0 - 40,0 saltsyrehydrolysatat af casein 5,0 - 20,0 3 5 pankreatisk hydrolysat af casein indeholdende alle aminosyrer, der oprindelig findes i casein 5,0 - 20,0 DK 152664 B pankreatisk hydrolysat af casein, indeholdende aminosyrer, peptider og større proteinfraktioner 5,0 - 20,0 5 gærekstrakt 5,0 - 20,0 natriumchlorid 0,5 - 3,0
4. Fremgangsmåde ifølge krav 2 og 3, kendetegnet ved, at vækstmediet indeholder en stabilisator. 10 15 20 25 30 35
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK049685A DK154804C (da) | 1980-03-31 | 1985-02-04 | Fremgangsmaade til fremstilling af en modificeret levende pasteurella haemolytica vaccine |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/135,828 US4293545A (en) | 1980-03-31 | 1980-03-31 | Modified Pasteurella multocida bacteria vaccines |
| US13582880 | 1980-03-31 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK118781A DK118781A (da) | 1981-10-01 |
| DK152664B true DK152664B (da) | 1988-04-11 |
| DK152664C DK152664C (da) | 1988-08-22 |
Family
ID=22469886
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK118781A DK152664C (da) | 1980-03-31 | 1981-03-17 | Fremgangsmaade til fremstilling af modificeret levende pasteurella multocida vaccine |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4293545A (da) |
| EP (1) | EP0036995B1 (da) |
| AR (1) | AR227543A1 (da) |
| AT (1) | ATE5682T1 (da) |
| AU (1) | AU545276B2 (da) |
| CA (1) | CA1162480A (da) |
| DE (1) | DE3161739D1 (da) |
| DK (1) | DK152664C (da) |
| ES (1) | ES8302086A1 (da) |
| GR (1) | GR74844B (da) |
| IE (1) | IE51715B1 (da) |
| NO (1) | NO159805C (da) |
| NZ (1) | NZ196586A (da) |
| PT (1) | PT72671B (da) |
| ZA (1) | ZA811919B (da) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4743553A (en) * | 1984-07-18 | 1988-05-10 | W. R. Grace & Co. | Synthetic genes for bovine parainfluenza virus |
| GB2202851B (en) * | 1987-03-24 | 1990-12-19 | Nat Res Dev | Proteinaceous material of p. haemolytica and vaccine against pasteurella |
| US5885589A (en) * | 1988-04-12 | 1999-03-23 | Intervet International B.V. | Pasteurella vaccine |
| DK199588D0 (da) * | 1988-04-12 | 1988-04-12 | Nordisk Droge & Kemikalie | Vaccine |
| US4999191A (en) * | 1988-05-05 | 1991-03-12 | University Of Georgia Research Foundation, Inc. | Pasteurella multocida vaccine |
| JPH08503136A (ja) * | 1992-11-06 | 1996-04-09 | リージェンツ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オブ・ミネソタ | Ｐ．ｍｕｌｔｏｃｉｄａによるパスツレラ症に対する感染防御剤 |
| US5587305A (en) * | 1993-12-06 | 1996-12-24 | The United States Of America As Represented By The Department Of Agriculture | Pasteurella haemolytica transformants |
| US6793927B1 (en) * | 1993-12-06 | 2004-09-21 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Agriculture | Construction of Pasteurella haemolytica vaccines |
| WO2015066292A1 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Merial Limited | Attenuated pasteurella multocidavaccines & methods of making & use thereof |
| CN113046271B (zh) * | 2021-04-10 | 2022-10-14 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一株兔f型多杀性巴氏杆菌及其在制备灭活疫苗中的应用 |
| CN112843228B (zh) * | 2021-04-10 | 2022-10-14 | 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种兔巴氏杆菌病二价灭活疫苗及其制备方法 |
Family Cites Families (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3501770A (en) * | 1967-04-13 | 1970-03-17 | Lilly Co Eli | Shipping fever vaccine |
| US3526696A (en) * | 1968-02-14 | 1970-09-01 | Lilly Co Eli | Shipping fever vaccine |
| US3634587A (en) * | 1969-11-06 | 1972-01-11 | Ralston Purina Co | Method of immunizing cattle against bovine respiratory disease syndrome |
| GB1441098A (en) | 1972-03-29 | 1976-06-30 | Wellcome Found | Biological preparations |
| US3855408A (en) * | 1973-07-16 | 1974-12-17 | Univ Minnesota | Poultry vaccine |
| CA1030873A (en) | 1973-10-09 | 1978-05-09 | Jagmahan Bhasin | Immunizing agent for poultry |
| FR2360314A2 (fr) | 1976-08-06 | 1978-03-03 | Fabre Sa Pierre | Nouveaux vaccins perfectionnes a base de fractions ribosomales |
| US4167560A (en) * | 1977-04-12 | 1979-09-11 | Texas Vet Lab, Inc. | Polyvalent shipping fever vaccine |
| AT350181B (de) | 1977-05-04 | 1979-05-10 | Schuller Walter Dr | Verfahren zur herstellung einer mischvaccine |
| US4171354A (en) * | 1977-06-23 | 1979-10-16 | Ohio Agricultural Research And Development Center | Vaccine for animal respiratory diseases |
| IL52815A (en) * | 1977-08-24 | 1983-03-31 | Israel State | Fowl cholera vaccine and process for producing an attenuated non-virulent strain of pasteurella multocida |
| US4346074A (en) | 1978-08-24 | 1982-08-24 | National Research Development Corp. | Pasteurellosis vaccines |
-
1980
- 1980-03-31 US US06/135,828 patent/US4293545A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-03-16 AT AT81101921T patent/ATE5682T1/de active
- 1981-03-16 AU AU68381/81A patent/AU545276B2/en not_active Expired
- 1981-03-16 DE DE8181101921T patent/DE3161739D1/de not_active Expired
- 1981-03-16 EP EP81101921A patent/EP0036995B1/en not_active Expired
- 1981-03-17 PT PT72671A patent/PT72671B/pt unknown
- 1981-03-17 DK DK118781A patent/DK152664C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-03-19 NO NO810938A patent/NO159805C/no not_active IP Right Cessation
- 1981-03-20 IE IE618/81A patent/IE51715B1/en not_active IP Right Cessation
- 1981-03-23 NZ NZ196586A patent/NZ196586A/en unknown
- 1981-03-23 ZA ZA00811919A patent/ZA811919B/xx unknown
- 1981-03-26 ES ES500722A patent/ES8302086A1/es not_active Expired
- 1981-03-26 GR GR64492A patent/GR74844B/el unknown
- 1981-03-27 AR AR284774A patent/AR227543A1/es active
- 1981-03-30 CA CA000374195A patent/CA1162480A/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT72671A (en) | 1981-04-01 |
| AU6838181A (en) | 1981-10-22 |
| ES500722A0 (es) | 1983-01-01 |
| NZ196586A (en) | 1984-05-31 |
| DE3161739D1 (en) | 1984-02-02 |
| EP0036995B1 (en) | 1983-12-28 |
| DK118781A (da) | 1981-10-01 |
| PT72671B (en) | 1982-03-22 |
| US4293545A (en) | 1981-10-06 |
| EP0036995A1 (en) | 1981-10-07 |
| IE51715B1 (en) | 1987-03-04 |
| NO159805B (no) | 1988-10-31 |
| AR227543A1 (es) | 1982-11-15 |
| GR74844B (da) | 1984-07-12 |
| AU545276B2 (en) | 1985-07-11 |
| IE810618L (en) | 1981-09-30 |
| CA1162480A (en) | 1984-02-21 |
| ATE5682T1 (de) | 1984-01-15 |
| ZA811919B (en) | 1982-05-26 |
| ES8302086A1 (es) | 1983-01-01 |
| DK152664C (da) | 1988-08-22 |
| NO159805C (no) | 1989-02-08 |
| NO810938L (no) | 1981-10-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Confer | Immunogens of pasteurella | |
| Duff | The oral immunization of trout against Bacterium salmonicida | |
| Deb et al. | Laboratory trials with inactivated vaccines against Escherichia coli (O78 K80) infection in fowls | |
| Heddleston et al. | Fowl cholera: cross-immunity induced in turkeys with formalin-killed in-vivo-propagated Pasteurella multocida | |
| US3917819A (en) | Method for preventing respiratory mycoplasmosis of livestocks | |
| Nielsen et al. | Vaccination against progressive atrophic rhinitis with a recombinant Pasteurella multocida toxin derivative. | |
| DK152664B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af modificeret levende pasteurella multocida vaccine | |
| US3855408A (en) | Poultry vaccine | |
| US4171354A (en) | Vaccine for animal respiratory diseases | |
| Bhasin et al. | Fowl cholera in turkeys: The efficacy of adjuvant bacterins | |
| Matsumoto et al. | A broth bacterin against infectious coryza: immunogenicity of various preparations | |
| NO175735B (no) | Fremgangsmåte ved fremstilling av Pasteurella-vaksine | |
| US4328210A (en) | Modified Pasteurella bacteria and vaccines prepared therefrom | |
| US4335106A (en) | Processes for the growth of a modified Pasteurella multocida bacteria and preparation of a vaccine therefrom | |
| EP0625190B1 (en) | New bacterium causing poultry disease and vaccine derived thereof | |
| US4559306A (en) | Modified Pasteurella multocida bacteria | |
| US4626430A (en) | Processes for growth of modified Pasteurella haemolytica bacteria and preparation of a vaccine therefrom | |
| US4388299A (en) | Modified pasteurella bacteria and vaccines prepared therefrom | |
| Chima et al. | Immunoprophylaxis of experimental Mycoplasma bovis arthritis in calves. Protective efficacy of live organisms and formalinized vaccines | |
| US4506017A (en) | Modified Pasteurella haemolytica bacteria | |
| Burke et al. | Field vaccination trials against turkey coryza using a temperature-sensitive mutant of Alcaligenes faecalis | |
| Clark et al. | Studies of an inactivated Hemophilus gallinarum vaccine for immunization of chickens against infectious coryza | |
| Arp et al. | Passive immunization versus adhesion of Bordetella avium to the tracheal mucosa of turkeys | |
| CA1183472A (en) | Veterinary vaccines | |
| US5059419A (en) | Streptococcus suis antiserum and its use in treating Streptococcus suis infections |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |