DK151264B - Adenosintriphosphatderivet eller alkalimetalsalte deraf - Google Patents
Adenosintriphosphatderivet eller alkalimetalsalte deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK151264B DK151264B DK469879AA DK469879A DK151264B DK 151264 B DK151264 B DK 151264B DK 469879A A DK469879A A DK 469879AA DK 469879 A DK469879 A DK 469879A DK 151264 B DK151264 B DK 151264B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- atp
- derivative
- reaction
- reaction product
- adenosintriphosphat
- Prior art date
Links
- -1 ALKALIMETAL SALTS Chemical class 0.000 title claims description 21
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 title claims description 5
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical class C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 claims description 33
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 8
- XTLNYNMNUCLWEZ-UHFFFAOYSA-N ethanol;propan-2-one Chemical compound CCO.CC(C)=O XTLNYNMNUCLWEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 claims 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 claims 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 11
- WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M Lithium hydroxide Chemical compound [Li+].[OH-] WMFOQBRAJBCJND-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 8
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 6
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M lithium chloride Chemical compound [Li+].[Cl-] KWGKDLIKAYFUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 4
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 4
- 108010092060 Acetate kinase Proteins 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000009102 absorption Effects 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KMRNTNDWADEIIX-UHFFFAOYSA-N 3-Iodopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCI KMRNTNDWADEIIX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical class NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- 238000006088 Dimroth rearrangement reaction Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N acetyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(=O)OP(O)(O)=O LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TTWYZDPBDWHJOR-IDIVVRGQSA-L adenosine triphosphate disodium Chemical compound [Na+].[Na+].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O TTWYZDPBDWHJOR-IDIVVRGQSA-L 0.000 description 2
- 125000004103 aminoalkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N hexane-1,6-diamine Chemical compound NCCCCCCN NAQMVNRVTILPCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)-N-[3-oxo-3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propyl]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)C(=O)NCCC(N1CC2=C(CC1)NN=N2)=O VZSRBBMJRBPUNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 3-bromopropanoic acid Chemical compound OC(=O)CCBr DHXNZYCXMFBMHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical group N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 241000193385 Geobacillus stearothermophilus Species 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910003873 O—P—O Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N Propionic acid Substances CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 150000001340 alkali metals Chemical group 0.000 description 1
- 125000005263 alkylenediamine group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructofuranose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@](O)(COP(O)(O)=O)O[C@@H]1COP(O)(O)=O RNBGYGVWRKECFJ-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000002585 base Substances 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229940025237 fructose 1,6-diphosphate Drugs 0.000 description 1
- 239000003262 industrial enzyme Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 125000004437 phosphorous atom Chemical group 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 238000006557 surface reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
- C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
- C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
- C07H19/16—Purine radicals
- C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Description
i 151264 1. Opfindelsens område.
Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt adenosintriphosphatderivat med den i kravet angivne for-5 mel eller alkalimetalsalte deraf, hvilket derivat er anvendeligt som ligand for affinitetschromatografi eller som et enzym-hjælpesubstrat (cofactor) ved industrielle enzymanvendelser.
10 2. Beskrivelse af kendt teknik.
Affinitetschromatografi er nyligt studeret som et effektivt middel til at isolere biologiske materialer. Adenosintriphosphat (ATP) er en meget vigtig cofaktor for enzymreaktioner. Når et materiale, der er fremstillet 15 ved at fiksere ATP til en egnet matrice, anvendes som et affinitets-adsorbentium, bliver det følgelig muligt at isolere og rense enzymer ved affinitetschromatografi.
Ved mange kemiske reaktioner, der gør brug af et enzymsystem i kombination med en cofaktor, såsom ATP, i indu-20 striel målestok, er det endvidere meget vigtigt at være i stand til let at gennemføre den gensidige omdannelse af ATP og adenosindiphosphat (ADP), og der kræves fra-skillelse af cofaktoren fra biprodukter. Det er almindeligt antaget, at understøttelse af cofaktoren på en pas-25 sende matrice er den bedste metode til at lette fraskil-lelse.
Der er følgelig mange tilfælde, hvor det er nødvendigt at binde ATP til en egnet matrice. Det er imidlertid vanskeligt at binde selve ATP til matricen, og 30 det er derfor nødvendigt at indføre funktionelle grupper i ATP, der let kan forbindes til en matrice.
ATP-derivater har i almindelighed en lav substrataktivitet sammenlignet med ATP. Det har derfor været ønsket at finde ATP-derivater med en højere substrat-akti-35 vitet.
2 151264 g N -(Carboxymethyl)-ATP fremstillet af Mosbach,
European Journal of Biochemistry, ¥01.53,(1975), side g 481, og N -[N-(6-aminohexyl)carbamoyl]-ATP fremstillet af Yamazaki et al, European Journal of Biochemistry, Vol.
5 77,(1977), side 511, er to ATP-derivater. Det har hidtil været kendt, at når en funktionel gruppe indføres i en anden stilling end N^-stillingen af ATP, opnås meget lav substrat-aktivitet. Selvom begge de ovennævnte forbin- g delser bærer den funktionelle gruppe ved N -stillingen, 10 har disse forbindelser ikke nogen meget høj substrat-ak-vititet, og der opstår problemer ved deres praktiske an- g vendelse. Da N -carboxymethyl-forbindelsen er kemisk u-stabil, forekommer der bireaktioner, når kobling til en matrice eller indføring af en afstandsgiver gennemføres g 15 ved at omsætte N -carboxylgruppen med en aminogruppehol-dig forbindelse, og det er derefter meget vanskeligt at gennemføre den ønskede reaktion. På den anden side syntetiseres sidstnævnte forbindelse ud fra ADP, der er langt mere kostbar end ATP.
20
Det har vist sig, at et ATP-derivat repræsenteret ved følgende formel har udmærket substrat-aktivitet og praktisk anvendelighed sammenlignet med tidligere ATP-derivater.
25 Opfindelsen angår således et ATP-derivat repræ senteret ved formlen: nhch9ch9cooh 0 0 0
il II II
qn HO-P-O-P-O-P-O -CEL· 30 III 2
OH OH OH /0vS
u
OH OS
3 151264
Den foreliggende opfindelse omfatter også alkalimetalsalte af ovennævnte ATP-derivat, hvori én eller flere af phosphat- eller carboxyl-grupperne er substitueret med et alkalimetalatom.
5 ATP-Derivatet ifølge opfindelsen kan syntetiseres ved forskellige fremgangsmåder. Det syntetiseres for eksempel let ved at omsætte ATP opløst i vand med β-halogen-propionsyre, såsom β-iodpropionsyre eller β-brompropion-10 syre, eller β-propiolacton og gennemføre en Dimroth-om-lejring af det resulterende 1-(carboxyethyl)-ATP. Derivatet i en fri syreform neutraliseres, om ønsket, med en base til dannelse af det tilsvarende salt. I vand omsættes ATP med β-halogenpropionsyre eller β-propiolacton ved 15 et pH på ca. 5 til ca. 8, fortrinsvis ca. 6 til ca. 7, ved fra ca. 20° til ca. 50°C. Syren og lactonen anvendes i mængder mindst ækvimolære med, og fortrinsvis 5 gange eller mere, mængden af ATP. Dimroth-omlejringen gennemføres fortrinsvis ved et pH på 8 til 11, navnlig ved ca.
20 9, ved fra 60° til ca. 90°C. Der kan henvises til Mosbach ovenfor.
ATP-Derivatet ifølge opfindelsen har en carboxyl- g gruppe som en funktionel gruppe ved N -stillingen og kan g betegnes som N -(carboxyethyl)-ATP. Strukturelt svarer g 25 det følgeligt til N -(carboxymethyl)-ATP beskrevet ovenfor. Ved sammenligning af disse forbindelser har imidlertid ATP-derivatet ifølge den foreliggende opfindelse en højere substrat-aktivitet, og ulemperne ved carboxyme-thylderivatet foreligger ikke ved omsætning med en amino-30 gruppeholdig forbindelse som matrice eller afstandsgiver.
ATP-Derivatet ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes til de fleste enzymer, for hvilke et adenin- g nucleotid er et substrat eller et coenzym. N -(Carboxyethyl) -ATP ifølge den foreliggende opfindelse kan reagere 35 med en aminogruppeholdig forbindelse som matrice eller afstandsgiver og kobles dertil, som ovenfor beskrevet.
4 151264
Eksempler på aminogruppeholdige forbindelser, med hvilke det omhandlede derivat reagerer, omfatter amino-alkylagaroser, såsom agaroseaminohexan, aminoalkylcellu-loser, såsom aminohexylcellulose, polylysin, polyethyl-5 enimin (de ovenfor beskrevne forbindelser er matricer) og alkylendiaminer, såsom hexamethylendiamin (afstandsgiver) .
ATP-Derivatet ifølge den foreliggende opfindelse kan anvendes til enzymer, såsom kinaser og dehydrogena-10 ser. Navnlig er der foretaget vidtgående undersøgelse af den industrielle anvendelighed af acetatkinase som et enr zym for gensidig omdannelse af adenin-cofaktor, såsom ATP og ADP. Acetatkinasen overgår andre kinaser derved, at det gensidige omdannelsesforhold for ATP og ADP 15 (ATPADP) er højt, og acetylphosphatet af phosphatdo-noren kan let syntetiseres (ATP + eddikesyre ADP + acetylphosphat).
Opfindelsen beskrives nærmere gennem følgende eksempler .
20
Eksempel 1 1 g Dinatrium-ATP blev opløst i 10 ml vand. Efter tilsætning af 5 g β-iodpropionsyre blev pH indstillet på 6,5, og reaktionen blev gennemført ved stuetemperatur.
25 Under reaktionen holdtes pH ved 6,5 med 2M lithiumhydro-xid. Efter 8 dage blev 10 volumen af en acetone-ethanol-blanding (1:1 efter volumen) sat til reaktionsblandingen. Bundfaldet blev indsamlet, vasket med den ovennævnte acetone-ethanol-blanding, og acetone-ethanol-blandingen 30 blev derefter fjernet under reduceret tryk. Udbyttet var 1,17 g. Efter at bundfaldet var opløst i 10 ml vand, blev pH indstillet til 8,5, og omlejringen blev foretaget ved 70°C. Under reaktionen holdtes pH ved 8,5 med 2M lithiumhydroxid. Efter 2,5 timer blev opløsningen inde-35 holdende den omlejrede forbindelse afkølet med is, indstillet på pH 7 med IN saltsyre og tilført til en '.'Dowex'® l-X8-søjle (C/ -type, 200-400 mesh, 2 cm i diameter og 5 151264 32 cm lang). Søjlen blev først vasket med 300 ml vand, og der anvendtes en lineær lithiumchloridgradient: blande-kammeret indeholdt 500 ml 0,3M lithiumchlorid, og reservoiret 500 ml 0,5M lithiumchlorid. I det udstrømmende 5 blev hovedfraktioner med en U.V.absorption ved 268 nm samlet og koncentreret. En ethanol-acetone-opløsningsmid-delblanding (1:1 efter volumen) blev tilsat, hvorved vandtes 0,39 g N -(carboxyethyl)-ATP som et hvidt pulver.
Når dette produkt blev analyseret ved cellulose-10 tyndtlagschromatografi (Avicel-SF) under anvendelse af en 0,1M kaliumphosphat (pH 6,8):ammoniumsulfat:l-propa-nol-blanding i et forhold på 100 (volumen):60 (vægt):2 (volumen) som fremkaldende opløsningsmiddel, blev der opnået en enkelt plet ved Rf 0,42. Det ultraviolette ab- -1 -1 15 sorptionsspektrum viste Amax 268 nm (ε = 15500M cm ) i en vandig opløsning med pH 7.
Endvidere blev strukturen af forbindelsen påvist ved protonkernemagnetisk resonans (NMR) i tungt vand. NMR-Spektret var karakteriseret ved absorptionerne af de 20 to hydrogenatomer på purinringen ved 6=8,86 og 8,65 (singlet,respektivt), absorptionen af hydrogenatomet ved 1'-stillingen af ribose ved 6=6,56 (dublet) og absorptionerne af hydrogenatomerne på ethylenet af carboxyethyl-gruppen ved 6=4,20 og 3,02 (triplet,respektivt).
25 Endvidere blev det ved farvedannelse ved molybdæn- blåt-reaktion påvist, at forbindelsen havde tre phosphor-atomer.
Eksempel 2 1 g Dinatrium-ATP blev opløst i 10 ml vand, og 0,6 30 β-propiolacton blev tilsat ved pH 6,8. Reaktionen blev gennemført ved stuetemperatur ved et pH på 6,8 med 2M lithiumhydroxid. Efter 56 timer blev der tilsat 10 volumen af en acetone-ethanol-blanding (1:1 efter volumen) for at udfælde produktet. Produktet blev underkastet om-35 lejring ved 70°C og pH 8,5 på samme måde som i Eksempel 1 og fraskilt med "Dowex" l-X8-søjle, hvorved vandtes 0,20 g g N -(carboxyethyl)-ATP. Når det blev analyseret på sam- 151264 6 me måde som i Eksempel 1, fandtes det, at forbindelsen havde samme struktur som i Eksempel 1.
Sammenligningseksempel 1 g N -(Carboxymethyl)-ATP og N -[N-(6-aminohexyl)car-5 bamoyl]-ATP blev syntetiseret ifølge Mosbach et al og Yamazaki et al, og en substrat-aktivitet for hver blev sammenlignet med substrat-aktiviteten af ATP-derivatet ifølge den foreliggende opfindelse vundet i Eksempel 1. Substrat-aktivitet blev undersøgt, som beskrevet i Bio-10 chemica Information, Boehringer Mannheim Co. (1973), i-det der som enzym anvendtes acetatkinase fra Bacillus stearothermophilus (fremstillet ved fremgangsmåden beskrevet i japansk patentansøgning (OPI) nr. 25088/77 (angivelsen "OPI" anvendt her refererer til en "publiceret, 15 ikke-undersøgt japansk patentansøgning")) i specifik aktivitet på 1360 enheder/mg. Ændringen i absorptionsevne ved 340 nm pr. tid blev målt på samme måde, undtagen at 2mM fructose-l,6-diphosphat blev sat til prøveblandingen.
De respektive maksimale reaktionshastigheder (V max) er 20 anført nedenfor baseret på ATP som 100.
g N -(carboxyethyl)-ATP (opfindelsen) 35 N^-(carboxymethyl)-ATP 2 0 g N -[N-(6-aminohexyl)carbamoyl]-ATP 23 Resultaterne viser den højere substrat-aktivitet 25 hos derivatet ifølge den foreliggende opfindelse.
Sammenligningseksempel 2 g
Efter at 100 mg af hver af N -(carboxymethyl)- og g N -(carboxyethyl)-ATP-derivaterne var opløst i 5 ml vand, blev der tilsat 400 mg hexamethylendiamin. Idet pH hold-30 tes ved 4,7 under anvendelse af 0,5M HC1, blev der på sædvanlig måde tilsat 150 mg l-ethyl-3-(3-dimethylamino-propyl)carbodiimid-hydrochlorid (EDC) for at sammenligne derivaternes evne til at reagere med denne sædvanlige g afstandsgiver. I tilfældet med N -(carboxymethyl)-ATP an-35 tog reaktionsopløsningen i løbet af adskillige minutter en gul farve og ændredes gradvist til en rød farve og
Claims (4)
151264 blev viskos. Når der forsøgtes udvinding af reaktionsproduktet i denne tilstand under anvendelse af forskellige ikke-opløsningsmidler, krystallisrede reaktionsproduktet ikke og kunne ikke vindes.
5 Med ATP-derivatet ifølge den foreliggende opfindel se blev der derimod ikke observeret et sådant ugunstigt fænomen/ og der vandtes et råt reaktionsprodukt som et hvidt pulver ved tilsætning af 10 volumen af acetone-ethanol-blandingen (1:1 efter volumen) til reaktions- 10 blandingen. Udbyttet efter 4 timer var 90 mg i tilfælde af EDC for derivatet ifølge opfindelsen. 15 Adenosintriphosphatderivat, kendetegnet ved, at det har formlen;
20 NHCH0CH0COOH r z z uC> 000 II II II w w H0-P-0-P-0-P-0-CH„
1. I I „ _ OH OH OH \ W OH OH 1 eller alkalimetalsalte deraf.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13812378 | 1978-11-08 | ||
| JP13812378A JPS5564599A (en) | 1978-11-08 | 1978-11-08 | Adenosine triphosphate derivative |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK469879A DK469879A (da) | 1980-05-09 |
| DK151264B true DK151264B (da) | 1987-11-16 |
| DK151264C DK151264C (da) | 1988-05-16 |
Family
ID=15214499
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK469879A DK151264C (da) | 1978-11-08 | 1979-11-06 | Adenosintriphosphatderivet eller alkalimetalsalte deraf |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4282352A (da) |
| JP (1) | JPS5564599A (da) |
| DE (1) | DE2945129A1 (da) |
| DK (1) | DK151264C (da) |
| FR (1) | FR2440956A1 (da) |
| GB (1) | GB2036029B (da) |
| IT (1) | IT1164135B (da) |
| SE (1) | SE445224B (da) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1223831A (en) | 1982-06-23 | 1987-07-07 | Dean Engelhardt | Modified nucleotides, methods of preparing and utilizing and compositions containing the same |
| US7220854B1 (en) | 1982-06-23 | 2007-05-22 | Enzo Life Sciences, Inc. C/O Enzo Biochem, Inc. | Sugar moiety labeled nucleotide, and an oligo- or polynucleotide, and other compositions comprising such sugar moiety labeled nucleotides |
| FR2574798B1 (fr) * | 1984-12-13 | 1987-11-20 | Cepbepe | Nouvelle adenosine substituee en n6 et medicament la contenant comme principe actif |
| US4818681A (en) * | 1985-02-22 | 1989-04-04 | Molecular Diagnostics, Inc. | Fast and specific immobilization of nucleic acids to solid supports |
| CA1244349A (en) * | 1985-06-26 | 1988-11-08 | Jen-Chang Hsia | Purification of hemoglobin and modified hemoglobin by affinity chromatography |
| DE4333674A1 (de) * | 1993-10-02 | 1995-04-06 | Merck Patent Gmbh | Nukleotidhaltiges Sorbens für die Affinitätschromatographie |
| US6337191B1 (en) | 1999-03-22 | 2002-01-08 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Vitro protein synthesis using glycolytic intermediates as an energy source |
| CA2428693A1 (en) * | 2000-11-14 | 2002-05-23 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | In vitro protein synthesis using glycolytic intermediates as an energy source |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2151013C2 (de) * | 1971-10-08 | 1983-04-28 | Schering Ag, 1000 Berlin Und 4619 Bergkamen | Verfahren zur Herstellung von in N↑6↑-Stellung gegebenenfalls substituierten 6-Amino- und 2,6-Diaminopurinnucleosiden |
| IT1017564B (it) * | 1974-04-30 | 1977-08-10 | Snam Progetti | Processo per la preparazione di derivati adeninici funzionalizza ti e prodotti cosi ottenuti |
-
1978
- 1978-11-08 JP JP13812378A patent/JPS5564599A/ja active Granted
-
1979
- 1979-11-06 DK DK469879A patent/DK151264C/da not_active IP Right Cessation
- 1979-11-06 IT IT50751/79A patent/IT1164135B/it active
- 1979-11-07 FR FR7927455A patent/FR2440956A1/fr active Granted
- 1979-11-07 SE SE7909236A patent/SE445224B/sv not_active IP Right Cessation
- 1979-11-07 US US06/091,996 patent/US4282352A/en not_active Expired - Lifetime
- 1979-11-08 DE DE19792945129 patent/DE2945129A1/de active Granted
- 1979-11-08 GB GB7938780A patent/GB2036029B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2440956B1 (da) | 1983-02-18 |
| JPS5564599A (en) | 1980-05-15 |
| US4282352A (en) | 1981-08-04 |
| DE2945129C2 (da) | 1988-07-14 |
| SE445224B (sv) | 1986-06-09 |
| IT7950751A0 (it) | 1979-11-06 |
| JPS6350359B2 (da) | 1988-10-07 |
| GB2036029A (en) | 1980-06-25 |
| DK151264C (da) | 1988-05-16 |
| IT1164135B (it) | 1987-04-08 |
| FR2440956A1 (fr) | 1980-06-06 |
| DE2945129A1 (de) | 1980-05-29 |
| SE7909236L (sv) | 1980-05-09 |
| GB2036029B (en) | 1983-02-16 |
| DK469879A (da) | 1980-05-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Kis et al. | Biosynthesis of riboflavin. Studies on the reaction mechanism of 6, 7-dimethyl-8-ribityllumazine synthase | |
| JP5540096B2 (ja) | カルバ−ｎａｄの酵素合成 | |
| AU2006274140A1 (en) | Stable NAD/NADH derivatives | |
| US4908453A (en) | Reagents for the preparation of 5'-biotinylated oligonucleotides | |
| Wolfenden et al. | Influence of substituent ribose on transition state affinity in reactions catalyzed by adenosine deaminase | |
| US4386076A (en) | (E)-5-(2-Halogenovinyl)-arabinofuranosyluracil, process for preparation thereof, and uses thereof | |
| Kruse et al. | Synthesis and evaluation of multisubstrate inhibitors of an oncogene-encoded tyrosine-specific protein kinase. 1 | |
| DK151264B (da) | Adenosintriphosphatderivet eller alkalimetalsalte deraf | |
| US3919193A (en) | 3-Deazaguanosine and derivatives thereof | |
| EP0002192B1 (en) | Enzymatic synthesis of purine arabinonucleosides | |
| US3960840A (en) | Fluorescent derivatives of adenine-containing compounds | |
| Davies et al. | Dinucleotide analogs as inhibitors of thymidine kinase, thymidylate kinase and ribonucleotide reductase | |
| Lesiak et al. | Synthesis and biological activities of oligo (8-bromoadenylates) as analogs of 5'-O-triphosphoadenylyl (2'. fwdarw. 5') adenylyl (2'. fwdarw. 5') adenosine | |
| Wimalasena et al. | Substrate specificity of ascorbate oxidase: unexpected similarity to the reduction site of dopamine β-monooxygenase | |
| US3915958A (en) | 6-Substituted purine nucleotides | |
| Schwögler et al. | Synthesis and properties of flavin ribofuranosides and flavin ribopyranosides | |
| US3893998A (en) | Fluorescent derivatives of cytosine-containing compounds | |
| US4894363A (en) | Derivatives of serotonin | |
| Seela et al. | 1, 7‐Dideaza‐2′, 3′‐dideoxyadenosine: Syntheses of Pyrrolo [2, 3‐b] pyndine 2′, 3′‐Dideoxyribofuranosides and Participation of Purine N (1) during HIV‐1 Reverse Transcriptase Inhibition | |
| Tourigny et al. | Conformation and antiherpes activity of 3′-and 5′-azido and amino analogs of 5-methoxymethyl-2′-deoxyuridine | |
| Slama et al. | Synthesis and properties of photoaffinity labels for the pyridine dinucleotide binding site of NAD glycohydrolase | |
| US4992368A (en) | Novel process for producing oxetanocin G | |
| Montgomery et al. | 2-Fluoropurine ribonucleosides | |
| Kitade et al. | 2-Bromoadenosine-substituted 2′, 5′-oligoadenylates modulate binding and activation abilities of human recombinant RNase L | |
| Triplett et al. | Carbon-13 nuclear magnetic resonance investigations into the interactions of bisulfite with pyrimidine nucleosides and nucleotides |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |