DK150719B - Fremgangsmaade og reagens til prothrombinbestemmelse - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til prothrombinbestemmelse Download PDFInfo
- Publication number
- DK150719B DK150719B DK571978AA DK571978A DK150719B DK 150719 B DK150719 B DK 150719B DK 571978A A DK571978A A DK 571978AA DK 571978 A DK571978 A DK 571978A DK 150719 B DK150719 B DK 150719B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- factor
- prothrombin
- activator
- thrombin
- plasma
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 17
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 15
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 claims description 31
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims description 27
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 claims description 26
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 claims description 26
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 22
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 claims description 20
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 claims description 20
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 14
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 8
- 101001038021 Lonomia obliqua Lopap Proteins 0.000 claims description 7
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 7
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 5
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 5
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 5
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 108090001015 cancer procoagulant Proteins 0.000 claims description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 claims description 3
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 4
- TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L barium sulfate Chemical compound [Ba+2].[O-]S([O-])(=O)=O TZCXTZWJZNENPQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 108010063628 acarboxyprothrombin Proteins 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 3
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 3
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 5,5-diethylbarbituric acid Chemical compound CCC1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O FTOAOBMCPZCFFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000122860 Echis carinatus Species 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 2
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 2
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 2
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- QQVNCBCBFNWLJX-KCHLEUMXSA-N n-[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-methyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]benzamide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC=1C=CC(=CC=1)[N+]([O-])=O)NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 QQVNCBCBFNWLJX-KCHLEUMXSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical group O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 2
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 2
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N DEAE-cellulose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)O[C@H]1O[C@@H]1C(CO)OC(O)C(O)C1O GUBGYTABKSRVRQ-WFVLMXAXSA-N 0.000 description 1
- 241000271032 Daboia russelii Species 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000272112 Oxyuranus scutellatus Species 0.000 description 1
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 1
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960002319 barbital Drugs 0.000 description 1
- 239000003637 basic solution Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 150000001805 chlorine compounds Chemical group 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940044765 k-phos Drugs 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 208000037920 primary disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002821 viper venom Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/56—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving blood clotting factors, e.g. involving thrombin, thromboplastin, fibrinogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2337/00—N-linked chromogens for determinations of peptidases and proteinases
- C12Q2337/10—Anilides
- C12Q2337/12—Para-Nitroanilides p-NA
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
- G01N2333/4613—Snake venom
- G01N2333/4616—Snake venom from Russell's viper
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/46—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates
- G01N2333/4609—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans from vertebrates from reptiles
- G01N2333/4613—Snake venom
- G01N2333/4633—Snake venom from Echis carinatus; Ecarin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
- G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
- G01N2333/96425—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals
- G01N2333/96427—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general
- G01N2333/9643—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from mammals in general with EC number
- G01N2333/96433—Serine endopeptidases (3.4.21)
- G01N2333/96441—Serine endopeptidases (3.4.21) with definite EC number
- G01N2333/96444—Factor X (3.4.21.6)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/914—Hydrolases (3)
- G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- G01N2333/974—Thrombin
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2405/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving lipids
- G01N2405/04—Phospholipids, i.e. phosphoglycerides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
150719
Opfindelsen angår en fremgangsmåde og et reagens til pro= thrombinbestemmelse i biologisk materiale, såsom blodplas= ma.
Bestemmelsen af prothrombinspejlet er en vigtig klinisk pa= 5 rameter til styring af antikoaguleringsbehandlingens forløb. Lige så betydningsfuld er påvisningen af en faktor-II-man= gel, der kan være såvel medfødt som erhvervet, dvs. følgen af en primær grundsygdom.
Med udgangspunkt i naturligt thrombinsubstrat-fibrinogen er 10 man under udviklingen af prothrombinbestemmelsesmetoder gået over til anvendelsen af s"yntetiske kromogene substrater, f.eks. peptid-p-nitroanilid-derivater. Vævsthromboplastin blev benyttet som aktivator. Ulempen ved denne metode består eksempelvis i, at den optimale aktiveringstid varierer med 15 prothrombinkoncentrationen, og at specificiteten er mangel= fuld. I tilfælde af andre substrater måtte man have en la= vere plasmakoncentration i aktiveringsblandingen til bestem= melse af prothrombin i normal plasma. Ved hjælp af en så kraftig plasmafortynding var det imidlertid ikke muligt at 20 opnå en fuldstændig aktivering i plasma med lav prothrombin= aktivitet. Som aktivatorer blev også benyttet staphylokoagu= lase og slangegifte. De aktiverer prothrombin direkte. Det har imidlertid vist sig, at disse gifte i det mindste del= vis også aktiverer PIVKA-prothrombinet, som dannes under 25 behandlingen med orale antikoagulationsmidler. Staphyloko= agulase omsætter ligeledes dette såkaldte PIVKA-prothrom= bin.
Fra Thabaut et al., Chemical Abstracts 85 188 186x (1976) side 180 er det kendt at foretage en bestemmelse af prothrom-30 bin i biologisk materiale, ved hvilken bestemmelse der foretages en overføring af prothrombinet til thrombin ved tilsætning af "protram", som er en blanding af faktorer, der er til stede i blod ("iboende koagulationsfaktorer"). Denne blanding er et multifaktorkompleks fra en serumfraktion, nemlig 2 150719
Opfindelsen tager sigte på at angive en fremgangsmåde og et reagens til bestemmelse af prothrombin i plasma, som mu= liggør en prøve med færre fejlkilder, forøget præcision, følsomhed og bedre reproducerbarhed. En sådan prøve skal 5 være specifik, dvs. kun omfatte prothrombin og ikke også PIVKA-prothrombin. Derved skal alt prothrombin hurtigt og fuldstændigt overføres til thrombin, uden at den hertil nødvendige aktivator på nogen som helst måde deltager i farvereaktionen.
10
Dette opnås ifølge opfindelsen ved hjælp af en fremgangsmåde til bestemmelse af prothrombin i biologisk materiale, såsom blodplasma, ved omdannelse af prothrombinet til thrombin, enzymatisk spaltning af et kromogent eller fluorogent 15 thrombinsubstrat samt måling af et spaltningsprodukt, hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at det til undersøgelse.· bestemte biologiske materiale tilsættes faktor Xa, fortrinsvis menneskelig faktor Xa.
20 Den menneskelige faktor Xa har vist sig at være langt den mest egnede. Eksempelvis er imidlertid også anvendelsen af kvæg-faktor Xa mulig.
25 Ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er det ikke nødvendigt at tilsætte andre koagulationsenzymer end faktor Xa. Fordelen ved den styrede tilsætning af standardiseret faktor Xa som et aktivatorsystem består i, at prøven kan udføres uden forstyrrelser, og at aktiveringen af prothrombin til thrombin 30 finder sted uden indskudte trin. Multifaktorkomplekset, som benyttes ved den ovenfor omtalte fremgangsmåde ifølge Tha-baut et al., fører ikke til nogen pålidelig bestemmelsesmetode som -følge af aktiveringsfaktorernes ustabilitet.
35 150719 3
Princippet i bestemmelsesmetoden kan belyses som følger. Thrombin fraspalter p-nitroanilin, f.eks. fra oligopeptider, hos hvilke p-nitroanilin er knyttet til arginins carboxyl= gruppe som chromogengruppe via amidbinding: 5 N-Tos-Gly-Pro-Arg-pNA Thrombin — ..—s» H20 N-Tos-Gly-Pro-Arg-OH + pNA.
^ Især N-Tos-Gly-Pro-Arg-pNA og N-Cbz-Gly-Pro-Arg-pNA (chro= mozym TH) fra Boehringer Mannheim GmbH samt H-D-Phe-Pip-
Arg-pNA (S-2238) og Bz-Phe-Val-Arg-pNA (S-2160) fra Kabi har vist sig sikre som thrombinsubstrater. Den frie p-ni= troanilins gule farve kan måles fotometrisk ved ca. 390 til 410 nm, hvor den per tidsenhed frigjorte farvestofmængde er 15 proportional med enzymaktiviteten.
Som puffer foretrækkes tris- og/eller imidazol-puffer med ca. pH 8-9, hvortil saltsyre og/eller natriumchlorid even= 2Q tuelt tilsættes.
Som samreagenser til aktivering af prothrombinet anvendes phospholipider og calciumchlorid.
25 Substrattilsætningen sker efter fuldstændig omdannelse af prothrombinet til thrombin i prøveopløsningen efter tilsætning af faktoren Xa.
Den ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen benyttede faktor Xa 2q kan let fremstilles ved, at man behandler plasma, fortrinsvis menneskeplasma, med en prothrombinaktivator, tilsætter en pro-teinadsorbent efter centrifugering, eluerer præcipitatet med proteinelueringsmiddel og til eluatet sætter en faktor-X-akti-vator og eventuelt et opløseligt calciumsalt. Som prothrom= 35 binaktivator er det fordelagtigt at anvende echis-carinatus-venom, men egnede er også slangegifte, såsom taipan snake venom (Oxyuranus scutellatus) og trypsin.
150719 4
Det efter behandlingen med prothrombinaktivatoren opnåede koagulat, som fracentrifugeres, består delvis af fibrinogen, antithrombin og thrombin.
5 Som proteinadsorbent kommer fortrinsvis bariumsulfat, - ci= trat og -oxalat på tale, men også aluminiumhydroxid, DEAE-sephadex og QAE-sephadex egner sig. Som proteinelueringsmid-del kan eksempelvis anvendes en vandig trinatriumcitratopløs-ning, phosphatpuffer eller en natriumchloridopløsning. Som 10 faktor-X-aktivator egner sig først og fremmest Russel1s-vi= per-venom. Som opløseligt calciumsalt foretrækkes calcium= chlorid. I det tilfælde, at der i eluatet efter behandling med proteinelueringsmidlet findes bestanddele, som indvirker negativt på koaguleringssystemet, eksempelvis calciumbinden-15 de komponenter, såsom citrationer, når proteinelueringsmidlet er natriumcitrat, er det nødvendigt at indskyde et dialysetrin. I det nævnte tilfælde gennemfører man eksempelvis en dialyse mod en puffert fysiologisk kogesaltopløsning (Micha= elispuffer) ved lav temperatur, dvs. ca. 4°C. Efter behand-20 lingen med faktor-X-aktivatoren og tilsætning af den calcium= ionholdige opløsning lader man før anvendelsen præparatet henstå indtil fuldstændig omdannelse af faktoren X til faktoren Xa ved lav temperatur, fortrinsvis 4°C. Der kan suppleres med et yderligere trin til opnåelse af en højrenset 25 faktor Xa. Dette yderligere rensningstrin kan bestå af gel= filtrering med en molekylsigte, som differentierer området 50.000-100.000, f.eks."Sephadex"G 100,"Biogel"P 100, idet der kan elueres med natriumacetatpuffer (0,4 M, pH 7). Det er endvidere muligt at foretage en ammoniumsulfatfældning, 30 (f.eks. 45-55% opløsning, pH 6-8), en ionbytningskromatogra= fi med DEAE-Sephadex"A 50, DEAE-cellulose eller QAE-Sepha= dex'/cellulose, hvorved der som puffer kan anvendes Na/K-phos= phat (f.eks. 0,02 M, pH 6,8) eller en gradient 0,1-1,0 M NaCl. Også enhydroxyapatitbehandling (phosphatpuffer 0,2-35 0,5 M, pH 6,8) samt en præparativ elektroforese og eventuelt en ultracentrifugering er mulig. De nævnte metoder kan med fordel kombineres. Den således højrensede faktor Xa kan be- 150719 5 nyttes til prøven i form af en opløsning, f.eks. i veronal-eller Michaelispuffer, i fysiologisk kogsaltopløsning og i prøvepuffer. Til anvendelse til prøven ifølge opfindelsen kan dette rensningstrin imidlertid udelades, og det som oven-5 for beskrevne koncentrerede faktor-Xa-præparat benyttes.
Opfindelsen angår endvidere et reagens til bestemmelse af prothrombin i biologisk materiale, såsom blodplasma, hvilket reagens indeholder et thrombinsubstrat og en prothrombinak-^0 tivator og er ejendommeligt ved, at prothrombinaktivatoren er faktoren Xa, fortrinsvis den menneskelige faktor Xa.
Fortrinsvis består dette -reagens i det væsentlige af tris-og/eller imidazolpuffer, den menneskelige faktor Xa anvendes 15 som prothrombinaktivator, hvorved der son yderligere reagenser fordelagtigt anvendes phospholipider fra menneskehjerne samt calciumchlorid, og et syntetisk thrombinsubstrat. Et reagens indeholder fortrinsvis 0,3 til 6,5 yg/ml phospholipider, 0,7 til 10 mmol/1 calciumchlorid og 150 til 380ymol/l substrat, 20 idet faktor-Xa-koncentrationen svarer til 0,2-2,5% plasmaekstrakt. Reagenset kan foreligge i tør og opløst form.
Fremgangsmåden og reagenset ifølge opfindelsen muliggør en hurtig og pålidelig bestemmelse af prothrombin. Fremgangs-25 måden udmærker sig ved sin specificitet, fordi faktoren Xa kun omfatter normalt prothrombin og ikke også PIVKA-prothrom= bin. De hidtil benyttede aktivatorer virker netop ikke specifikt. Ved hjælp af tilsætningen af et standardiseret fak= tor-Xa-præparat sikres det, at der i hvert tilfælde forelig-30 ger en tilstrækkelig mængde af aktivatoren. Det var meget overraskende, at Xa-faktoren efter tilsætning overfører alt prothrombin hurtigt og fuldstændigt til thrombin, uden, hvilket er meget væsentligt selv på nogen som helst måde at deltags i farvereaktionen. Det er nemlig kendt, at faktoren Xa ind-35 virker direkte spaltende på syntetiske peptid-d-nitroanilidderivater, såsom eksempelvis chromozym TH. Især var det også overraskende, at den menneskelige faktor Xa er mere fordel- 6 150719 agtig at anvende end f.eks. kvæg-faktor Xa. Det har vist sig at være ganske særlig fordelagtigt at tilsætte faktoren Xa i bestemt mængde. Aktiveringen af i sig selv i blodplasma tilstedeværende faktor Xa ville her føre til utilfredsstil-5 lende resultater. Yderligere var det overraskende, at der kan stilles en aktivator til rådighed, som sikrer gennem-førbarheden, især den tekniske brugbarhed, og som i henseende til oprindelsen, nemlig det menneskelige plasma, i det hele taget kunne være tilstrækkeligt udbyttegivende.
10
Opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.
Eksempel 1 15
Fremstilling af et faktor-Xa-præparat.
Til udvinding af normalplasmaet anvendes blod fra sunde donorer med en gennemsnitsalder på 30 år, hvoraf halvdelen stam-20 mer fra kvinder og halvdelen fra mænd. Det indeholder 25 roM= natriumcitrat. Plasmaet bliver efter en første centrifugering i 15 min. ved 1500 g og stuetemperatur underkastet en anden centrifugering ved 4°C i 30 min.ved 20.000 g. Pr. 4 ml normalplasma tilsættes 1 ml 1/30 M vandig calciumchloridopløs-25 ning og 2 dråber Echis carinatus venom (Sigma V 8250, grundopløsninger, 1 mg/ml vand), og der henstilles i 2 timer i vandbad (37°C). Det dannede koagulat fracentrifugeres, og til den ovenstående væske sættes 150 mg bariumsulfat pr. 4 ml normalplasma. Der omrøres i 30 min. ved stuetemperatur 30 0g centrifugeres. Den ovenstående væske bortkastes, og præp-cip.itatet vaskes fire gange, hver gang med ca. 4 ml fysiolo= gisk kogesaltopløsning. Centrifugatet elueres med 2 ml af en 0,2 M trinatriumcitratopløsning (pH 7,0) . Efter fornyet centrifugering dialyseres den ovenstående væske mod fysio= 35 logisk kogesaltopløsning ved 4°C. Dialysatet opbevares i små portioner på ca. 250 μΐ ved -20°C. Pr. portion tilsættes ved stuetemperatur 30 yl af en 0,1 M calciumchloridopløsning og 7 150719 1 μΐ Russel's viper venom (Vipera Russelli, Wellcome)/ og man lader henstå i ca. 14 timer ved 4°C. Dette præparat kan benyttes til prøven (2yl svarende til 1% plasmaekstrakt).
Det kan lyofiliseres. En yderligere rensning kan gennemføres, 5 således som udførligt beskrevet på side 5.
Eksempel 2
Fremgangsmåde til prothrombin- og thrombinbestemmelse.
10
Der fremstilles prøveblandinger, som indeholder:
Materiale Volumen . . Slutkoncentration
Pufferopløsning 400 μΐ minus andre tilsatte mængder Prøveplasma 1-5 μΐ 0,25-1,25%
Phospholipider 2 μΐ 1,25 μg/ml 20
Calc iumchlor id= opløsning 40 μΐ (0,1 Η) 10 mM/1
Aktivator (faktor-25
Xa-præparat ifølge eksempel 1) 2 μΐ svarende til 1% plasmafraktion 30 Pufferopløsningen fremstilles som følger:
Stamopløsning A: 0,1 M/l Tris +0,1 M/l Imidazol +0,1 M/l saltsyre
Stamopløsning B: 0,1 m/1 Tris +0,1 M/l Imidazol +0,1 M/l natrium= 35 chlorid
Stamopløsning C: 0,2 M/l natriumchlorid 8 150719
Brugspufferen(pH = 8,4) fremstilles ved forening af stamopløs-ningerne i volumenforholdet A:B:C = 1:1:2. Med de benyttede phospholipider er der tale om en acetone/ether-ekstraktion fra menneskehjerne ifølge Bell og Alton.
5
Prøveblandingens komponenter pipeteres ved 37°C direkte i den angivne rækkefølge i en mikrokuvette med lagtykkelse 1 cm tilhørende et spektrofotometer "Aminco" DW 2. Inkubati= onstiden for faktoren Xa andrager 120 sekunder. Der tilsæt-10 tes derpå 50 yl (1,5 mM/1) substrat(chromozym TH, Boehrin= ger Mannheim GmbH eller Substrat 2238, Kabi), hvorved slut-koncentrationen andrager 187,5 yM/l(chromozym TH) eller 148 μΜ/l (S 2238). Målingens begyndelse finder sted straks efter hurtigst mulig god'blanding.
15
Absorptionen pr. tidsenhed optegnes direkte med en viserforløbshastighed i min. pr. cm i vandret retning og med en absorp= tion i mm pr. mm fuld skala i den lodrette retning. Herved kan forskellige absorptionsfølsomheder og forløbshastigheder 20 vælges. Absorptionsændringen pr. minut udregnes derfor i overensstemmelse med følgende formel: Målt absorption i mm -------------------- x absorptionsfølsomhed 25 Samlet skala i mm
Viserforløbshastighed i min/cm x målestrækning
Eksempel på målestrækning 10 cm, lodret 43 mm, fuld skala 30 252 mm, absorptionsfølsomhed 0,5 og forløbshastighed 0,033: — x 0 5 252 ' absorptionsændring - = 0,258 -:- 0,033 x 10 min/cm minut 35
Claims (6)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af prothrombin i biologisk materiale, såsom blodplasma, ved omdannelse af prothrombinet til thrombin, enzymatisk spaltning af et kromogent eller fluorogent thrombinsubstrat og måling af et spaltningspro- 5 dukt, kendetegnet ved, at det til undersøgelse bestemte biologiske materiale tilsættes faktor Xa, fortrinsvis menneskelig faktor Xa.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der anvendes en faktor Xa, scm er fremstillet ved, at man behandler plasma, fortrinsvis menneskelig plasma, med en prothrcmbinaktivator, efter centrifugeringen tilsætter en proteinadsorbent, elue-rer præcipitatet med et proteinelueringsmiddel og til elua-tet sætter en faktor-X-aktivator og eventuelt et opløseligt calciumsalt.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2, kendeteg net ved, at thrombinsubstratet er et syntetisk peptid-p-nitroanilidderivat..
4. Reagens til bestemmelse af prothrombin i biologisk materiale, såsom blodplasma, indeholdende et thrombinsubstrat 20 og en prothrombinaktivator, kendetegnet ved, at prothrombinaktivatoren er faktoren Xa, fortrinsvis den menneskelige faktor Xa.
5. Reagens ifølge krav 4, kendetegnet ved, at det i det væsentlige bestående af Tris- og/eller Imidazolpuffer, 25 faktoren Xa, fortrinsvis den menneskelige faktor Xa, yder ligere reagenser, såsom phospholipider og calciumchlorid, samt et syntetisk thrombinsubstrat, såsom et peptid-p-ni= troanilidderivat.
6. Reagens ifølge krav 5, kendetegnet ved, at 30 det indeholder 0,3 til 6,5 yg/ml phospholipider, 0,7 til
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK17882A DK17882A (da) | 1977-12-24 | 1982-01-15 | Fremgangsmaade til fremstilling af et faktor xa-praeparat |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19772757992 DE2757992A1 (de) | 1977-12-24 | 1977-12-24 | Verfahren zur prothrombin-bestimmung |
| DE2757992 | 1977-12-24 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK571978A DK571978A (da) | 1979-06-25 |
| DK150719B true DK150719B (da) | 1987-06-01 |
| DK150719C DK150719C (da) | 1988-06-06 |
Family
ID=6027271
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK571978A DK150719C (da) | 1977-12-24 | 1978-12-20 | Fremgangsmaade og reagens til prothrombinbestemmelse |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4334018A (da) |
| EP (1) | EP0003474B1 (da) |
| JP (2) | JPS588840B2 (da) |
| AT (1) | AT360661B (da) |
| CA (1) | CA1127942A (da) |
| DE (2) | DE2757992A1 (da) |
| DK (1) | DK150719C (da) |
| FI (1) | FI64466C (da) |
| NO (2) | NO151792C (da) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4289498A (en) * | 1979-01-08 | 1981-09-15 | Ortho Diagnostics, Inc. | One-stage prothrombin assay and compositions useful therein |
| US4463090A (en) * | 1981-09-30 | 1984-07-31 | Harris Curtis C | Cascade amplification enzyme immunoassay |
| DE3413311A1 (de) * | 1984-04-09 | 1985-10-17 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Reagenz zur bestimmung der thromboplastinzeit |
| GB2178533B (en) * | 1985-07-22 | 1989-07-19 | Asahi Chemical Ind | Analytical method of enzyme precursors and device therefor |
| DE3607559A1 (de) * | 1986-03-07 | 1987-09-10 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur photometrischen bestimmung der protein c- und/oder protein s-aktivitaet |
| US5190864A (en) * | 1986-04-15 | 1993-03-02 | Northeastern University | Enzyme amplification by using free enzyme to release enzyme from an immobilized enzyme material |
| US4937188A (en) * | 1986-04-15 | 1990-06-26 | Northeastern University | Enzyme activity amplification method for increasing assay sensitivity |
| US5312745A (en) * | 1987-06-18 | 1994-05-17 | Chromogenix Ab | Determination of components active in proteolysis |
| DE3727610A1 (de) | 1987-08-19 | 1989-03-02 | Behringwerke Ag | Synthetische peptide, gegen diese gerichtete antikoerper und deren verwendung |
| US6541275B1 (en) | 1988-02-03 | 2003-04-01 | Dade Behring Inc. | Immunoassay for F1.2 prothrombin fragment |
| DE4203980A1 (de) * | 1992-02-11 | 1993-08-12 | Max Planck Gesellschaft | Verfahren zur bestimmung von hirudin und synthetischen thrombininhibitoren |
| AT396937B (de) * | 1992-04-06 | 1993-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur aktivierung von blutgerinnungsfaktoren |
| US5780255A (en) * | 1995-06-09 | 1998-07-14 | Instrumentation Laboratory, S.P.A. | Protein C pathway screening test |
| DE102010025972A1 (de) * | 2010-07-02 | 2012-01-05 | Papst Licensing Gmbh & Co. Kg | Verfahren zur Bestimmung von Proteasen und ihren Proformen |
| ES2879812T3 (es) * | 2015-02-06 | 2021-11-23 | Guangzhou Bioseal Biotech Co Ltd | Método para la preparación de trombina |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3486981A (en) * | 1965-03-15 | 1969-12-30 | Roy E Speck | Substances relating to testing of blood-coagulation |
| SE380257B (sv) * | 1972-05-02 | 1975-11-03 | Bofors Ab | Nya diagnostiskt verksamma substrat med hog specificitet till trombin och andra proteolytiska enzymer av typen peptidyl-peptid-hydrolaser |
| ES431736A1 (es) * | 1973-11-13 | 1977-05-16 | Behringwerke Ag | Procedimiento para la preparacion de un agente para diagnos-tico para el proposito de efectuar el control de la capaci- dad de coagulacion de la sangre. |
| CH622286A5 (da) * | 1975-06-23 | 1981-03-31 | Pentapharm Ag | |
| US4061625A (en) * | 1975-07-11 | 1977-12-06 | Ab Kabi | Novel chromogenic thrombin substrates |
| SE407405B (sv) * | 1975-07-11 | 1979-03-26 | Kabi Ab | Nya kromogena trombinsubstrat |
| SE419871B (sv) | 1975-12-01 | 1981-08-31 | Pharmacia Ab | Sett att bestemma aktiviteten hos faktor xa-inhibitor i blod |
-
1977
- 1977-12-24 DE DE19772757992 patent/DE2757992A1/de not_active Withdrawn
-
1978
- 1978-12-14 DE DE7878101680T patent/DE2861386D1/de not_active Expired
- 1978-12-14 EP EP78101680A patent/EP0003474B1/de not_active Expired
- 1978-12-18 FI FI783880A patent/FI64466C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-12-20 DK DK571978A patent/DK150719C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-12-21 NO NO784318A patent/NO151792C/no unknown
- 1978-12-21 JP JP53156954A patent/JPS588840B2/ja not_active Expired
- 1978-12-22 CA CA318,481A patent/CA1127942A/en not_active Expired
- 1978-12-22 AT AT924378A patent/AT360661B/de not_active IP Right Cessation
-
1980
- 1980-12-15 US US06/216,696 patent/US4334018A/en not_active Expired - Lifetime
-
1981
- 1981-05-22 JP JP56076831A patent/JPS5812257B2/ja not_active Expired
-
1983
- 1983-10-25 NO NO83833884A patent/NO154803C/no unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA1127942A (en) | 1982-07-20 |
| DK150719C (da) | 1988-06-06 |
| DK571978A (da) | 1979-06-25 |
| NO151792C (no) | 1985-06-05 |
| FI64466C (fi) | 1983-11-10 |
| EP0003474B1 (de) | 1981-11-25 |
| JPS5718626A (en) | 1982-01-30 |
| FI64466B (fi) | 1983-07-29 |
| DE2757992A1 (de) | 1979-06-28 |
| NO154803C (no) | 1986-12-29 |
| JPS5492393A (en) | 1979-07-21 |
| JPS5812257B2 (ja) | 1983-03-07 |
| EP0003474A1 (de) | 1979-08-22 |
| FI783880A7 (fi) | 1979-06-25 |
| JPS588840B2 (ja) | 1983-02-17 |
| US4334018A (en) | 1982-06-08 |
| NO833884L (no) | 1979-06-26 |
| NO154803B (no) | 1986-09-15 |
| NO784318L (no) | 1979-06-26 |
| ATA924378A (de) | 1980-06-15 |
| AT360661B (de) | 1981-01-26 |
| NO151792B (no) | 1985-02-25 |
| DE2861386D1 (en) | 1982-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4160025A (en) | Method of producing a blood-coagulation-promoting preparation from human blood plasma | |
| Sas et al. | Abnormal antithrombin III (antithrombin III ‘Budapest’) as a cause of a familial thrombophilia | |
| Iatridis et al. | Active Hageman factor: A plasma lysokinase of the human fibrinolytic system | |
| Walker | Regulation of bovine activated protein C by protein S: the role of the cofactor protein in species specificity | |
| DK150719B (da) | Fremgangsmaade og reagens til prothrombinbestemmelse | |
| CA1286223C (en) | Method for quantitatively assaying protein c and activator preparation for applying this method | |
| DK171086B1 (da) | Fremgangsmåde til fotometrisk bestemmelse af protein C- og/eller protein S-aktivitet | |
| US5705198A (en) | Test for lupus anticoagulant | |
| CA1078732A (en) | Process for the preparation of thrombinlike enzymes from snake venoms | |
| Ikkala et al. | Congenital deficiency of fibrin stabilizing factor | |
| Egberg | Coagulation studies in patients treated with Defibrase | |
| DK157939B (da) | Reagens til optisk bestemmelse af blodkoagulationsforholdet | |
| Miller-Andersson et al. | Preparation and stability of a highly purified human thrombin standard | |
| Josso et al. | A new variant of human prothrombin: prothrombin Metz, demonstration in a family showing double heterozygosity for congenital hypoprothrombinemia and dysprothrombinemia | |
| Meier et al. | Snake venom protein C activators | |
| EP0041174B1 (en) | Blood coagulation promoting product and process of preparing same | |
| Vinazzer | Photometric assay of antithrombin III with a chromogenic substrate | |
| US3509024A (en) | Aspergillopeptidase for use in therapy and a process for the preparation thereof | |
| CA1150607A (en) | Process for the production of factor xa preparation | |
| FI75057C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av ett faktor-xa-preparat. | |
| AU695396B2 (en) | Method for the production of thrombin | |
| Neal et al. | Kinetic studies of the activation of factor X by factors IXa and VIII: C in the absence of thrombin | |
| JPS59218960A (ja) | 第ｘ因子欠乏血漿 | |
| Helgeland | Studies of an Inhibitor of the Thrombin-Fibrinogen Reaction Localized in Rat Liver Microsomes. Interference with the Polymerization Step | |
| SU978862A1 (ru) | Способ количественного определени фибриногена в плазме крови |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |