DK149638B - Process and apparatus for separating out bacteria - Google Patents
Process and apparatus for separating out bacteria Download PDFInfo
- Publication number
- DK149638B DK149638B DK285684A DK285684A DK149638B DK 149638 B DK149638 B DK 149638B DK 285684 A DK285684 A DK 285684A DK 285684 A DK285684 A DK 285684A DK 149638 B DK149638 B DK 149638B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- centrifuge container
- centrifuge
- density
- component
- container
- Prior art date
Links
Description
149638149638
Den foreliggende opfindelse vedrører en fremgangsmåde til separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier. Separationen sker i overensstemmelse med de i og for sig kendte gradientseparationsprincipper.The present invention relates to a method for separating bacteria from a liquid sample containing bacteria. The separation occurs in accordance with the gradient separation principles known per se.
5 I "Encyclopedia of Chemical Technology" af Kirk-Othmer, 3. udgave, bind 5, pp. 214-218 er generelle principper for centrifugal- eller gradientseparation beskrevet sammen med kendte centrifugal- eller gradientseparationscentrifuger. Disse kendte centrifuger har cylindriske eller skålformede centrifugebeholdere.5 In "Encyclopedia of Chemical Technology" by Kirk-Othmer, 3rd edition, Volume 5, pp. 214-218, general principles of centrifugal or gradient separation are described together with known centrifugal or gradient separation centrifuges. These known centrifuges have cylindrical or bowl-shaped centrifuge containers.
10 I mange forskellige tilfælde er det ønskeligt at kunne separere bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier, idet bakterieindholdet i prøven kan bestemmes, efter at bakterierne er separeret fra prøven ved simpel tælling af antallet af bakterier, der er separeret fra prøven, i et i og for sig kendt optisk måleapparat. Væskeprøven kan ha-15 ve en vilkårlig organisk oprindelse. Prøven kan således være en blodprøve eller en urinprøve eller en suspension eller opløsning af en fast prøve (fx en vandig opløsning eller en alkoholsuspension af en organisk komponent, fx en vævs- eller fødevareprøve). Et meget vigtigt eksempel på en væskeprøve indeholdende bakterier er en 20 mælkeprøve. Som man vil forstå bestemmes målingen af bakterieindhol det i den oprindelige væskeprøve i princippet af nøjagtigheden af separationen af bakterier fra væskeprøven. Følgelig er det af den yderste vigtighed at kunne foretage en meget nøjagtig separationsproces, ved hvilken udelukkende bakterierne separeres fra væskeprøven, 25 medens andre partikler, fx fedtdråber, blodceller eller lignende, ikke separeres fra væskeprøven.In many different cases, it is desirable to be able to separate bacteria from a liquid sample containing bacteria, since the bacterial content of the sample can be determined after the bacteria have been separated from the sample by simply counting the number of bacteria separated from the sample into one and optical measuring device known per se. The liquid sample may have any organic origin. Thus, the sample may be a blood sample or a urine sample or a suspension or solution of a solid sample (e.g., an aqueous solution or an alcohol suspension of an organic component, e.g., a tissue or food sample). A very important example of a liquid sample containing bacteria is a 20 milk sample. As will be understood, the measurement of bacterial content is determined in the original fluid sample in principle by the accuracy of the separation of bacteria from the liquid sample. Accordingly, it is of the utmost importance to be able to perform a very accurate separation process in which only the bacteria are separated from the liquid sample, while other particles, e.g., fat droplets, blood cells or the like, are not separated from the liquid sample.
Et formål med den foreliggende opfindelse er at tilvejebringe en fremgangsmåde af den ovenfor beskrevne type, i overensstemmelse med hvilken fremgangsmåde det bliver muligt at foretage en meget 30 nøjagtig separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier, idet andre partikler udelukkes fra at blive separeret fra væskeprøven, og i overensstemmelse med hvilken fremgangsmåde det er muligt at foretage separationen automatisk og med stor hastighed.It is an object of the present invention to provide a method of the type described above, in accordance with which it becomes possible to make a very accurate separation of bacteria from a liquid sample containing bacteria, excluding other particles from being separated from the liquid sample. , and according to which it is possible to make the separation automatically and at high speed.
149638 2149638 2
Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at fremgangsmåden udøves ved hjælp af en tallerkenlignende centrifugebehol-der, der har en øverste åbning, der afgrænses af en radialt indad rettet randdel, hvilken fremgangsmåde omfatter følgende sekvens af 5 trin: (a) rotation af centrifugebeholderen med stor rotationshastighed, (b) indføring af et volumen af en væskeformig komponent med stor massefylde i centrifugebeholderen, hvilken massefylde er større end bakteriernes massefylde, 10 (c) indføring af et volumen af en væskeformig komponent med lille massefylde i centrifugebeholderen, hvilken massefylde er mindre end massefylden af bakterierne, så at der dannes et tokomponent-gradi-entseparationslag i centrifugebeholderen, (d) indføring af en kontinuerlig strøm af væskeprøven med en masse-15 fylde, der er mindre end massefylden af den væskeformige komponent med lille massefylde, i centrifugebeholderen, hvorved bakterierne placeres i grænselaget mellem komponenterne med stor og lille massefylde i tokomponent-gradientseparationslaget, medens væskeprøven afgives gennem centrifugebeholderens øverste åbning, 20 (e) indføring af et skyllemiddel i centrifugebeholderen, idet skyl lemidlet afgives fra centrifugebeholderens øverste åbning, (f) decel leration af centrifugebeholderen og rotation af samme med lav rotationshastighed, (g) aktivering og bevægelse af en sugepipette fra en første stilling, i 25 hvilken pipetten har sin spids placeret i afstand fra inderfladen af centrifugebeholderens periferivæg, til en anden stilling, i hvilken pipetten har sin spids placeret grænsende op til inderfladen, så at væskesubstansen suges fra centrifugebeholderen, medens der indføres et volumen af en overføringsvæske i centrifugebeholderen uden afgi-30 velse af overføringsvæske gennem centrifugebeholderens øverste åbning, og (h) tilbageføring af sugepipetten til dens første stilling.The method according to the invention is characterized in that the method is carried out by means of a plate-like centrifuge container having a top opening defined by a radially inwardly directed edge part, which method comprises the following sequence of 5 steps: (a) rotation of the centrifuge container with high rotational speed, (b) introducing a volume of a high-density liquid component into the centrifuge container, which is greater than the bacterial density, (c) introducing a volume of a low-density liquid component into the centrifuge container, which is less than the density of the bacteria to form a two-component gradient separation layer in the centrifuge container, (d) introducing a continuous flow of the liquid sample with a bulk density less than the density of the liquid component of low density into the centrifuge container. , whereby the bacteria are placed in the interface between the large and l components poor density in the two-component gradient separation layer while the liquid sample is dispensed through the top opening of the centrifuge container; (g) activating and moving a suction pipette from a first position in which the pipette has its tip spaced from the inner surface of the centrifuge container peripheral wall to a second position in which the pipette has its tip located adjacent the inner surface so that the liquid substance is sucked from the centrifuge container while introducing a volume of transfer fluid into the centrifuge container without dispensing transfer fluid through the top opening of the centrifuge container, and (h) returning the suction pipette to its first position.
I overensstemmelse med den foreliggende opfindelse indføres komponenterne med stor og lille massefylde af tokomponent-gradientseparati-35 onslaget efter hinanden i centrifugebeholderen, medens denne ved hjælp af en tohastighedsmotor roterer med sin største rotationshastig- 149638 3 hed. Væskeprøven indføres i en kontinuerlig strøm og fremgangsmåden til separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier kan følgelig i princippet udføres som en kontinuerlig separationsproces. Ved indføringen af skyllemidlet i centrifugebeholderen, efter 5 at selve separationsprocessen er foretaget, skylles eventuelt materiale, der hæfter fast til tokomponent-gradientseparationslaget, fx fedtdråber eller lignende, bort og afgives fra centrifugebeholderens øverste åbning. Fjernelsen af tokomponent-gradientseparationslaget indeholdende bakterierne, der er separeret fra den oprindelige væs-10 keprøve, foretages i overensstemmelse med den foreliggende opfindelse ved hjælp af en sugepipette, der kan bevæges fra en første stilling til en anden stilling, i hvilken anden stilling pipetten har sin spids strakt ind i centrifugebeholderen, medens centrifugebeholderen renses ved hjælp af overføringsvæske.In accordance with the present invention, the large and small density components of the two-component gradient separation layer are introduced one after the other into the centrifuge container while rotating at its highest rotational speed by means of a two-speed motor. The liquid sample is introduced into a continuous stream and the process of separating bacteria from a liquid sample containing bacteria can, in principle, be carried out as a continuous separation process. Upon insertion of the purgative into the centrifuge container, after the separation process itself, any material adhering to the two-component gradient separation layer, e.g., grease droplets or the like, is purged and dispensed from the top opening of the centrifuge container. The removal of the two-component gradient separation layer containing the bacteria separated from the original liquid sample is carried out in accordance with the present invention by a suction pipette which can be moved from a first position to a second position in which the pipette has its tip stretched into the centrifuge vessel while the centrifuge vessel is cleaned by means of transfer fluid.
15 I overensstemmelse med en foretrukken udførelsesform for opfindelsen omfatter denne følgende yderligere sekvens af trin efter trinene (a)-(h): (i) indføring af et lille volumen overføringsvæske i centrifugebeholderen uden afgivelse af væske gennem centrifugebeholderens øverste 20 åbning, (j) acceleration af centrifugebeholderen og rotation af denne med stor rotationshastighed og (k) gentagelse af trinene (f)-(h).In accordance with a preferred embodiment of the invention, this comprises further sequence of steps following steps (a) - (h): (i) introducing a small volume of transfer fluid into the centrifuge container without dispensing liquid through the top 20 of the centrifuge container, (j) accelerating the centrifuge vessel and rotating it at high rotational speed and (k) repeating steps (f) - (h).
Ved indføring af et ekstra volumen af væsken i centrifugebeholderen 25 og acceleration af centrifugebeholderen til stor rotationshastighed bortskylles eventuelt resterende materiale af tokomponent-gradient-separationslaget eller eventuelle bakterier indeholdt i samme, fra centrifugebeholderen og overføres følgelig til målebeholderen.By introducing an additional volume of the liquid into the centrifuge vessel 25 and accelerating the centrifuge vessel at high rotational speed, any residual material of the two-component gradient separation layer or any bacteria contained in the same is flushed from the centrifuge vessel and consequently transferred to the measuring vessel.
For at rense centrifugebeholderen helt foretrækkes det at udføre føl-30 gende yderligere følge af trin efter trinene (a)-(k): (l) acceleration af centrifugebeholderen og rotation af samme med stor rotationshastighed, (m) intermitterende indføring af en strøm af skyllemidlet og varm luft i centrifugebeholderen i en spray til bortskylning af eventuelt mate- 35 riale, der hæfter fast til centrifugebeholderen, 149638 4 (n) deceleration af centrifugebeholderen og rotation af samme med lille rotationshastighed, (o) aktivering og bevægelse af sugepipetten fra dens første stilling til dens anden stilling, så at eventuel væskesubstans suges fra centrifu- 5 gebeholderen, og (p) tilbageføring af sugepipetten til dens første stilling.In order to completely purify the centrifuge vessel, it is preferred to perform the following additional sequence of steps following steps (a) - (k): (l) accelerating the centrifuge vessel and rotating the same at high rotational speed, (m) intermittently introducing a stream of the rinse agent and hot air in the centrifuge container in a spray to rinse any material adhering to the centrifuge container, deceleration of the centrifuge container and rotation of the same with a small rotational speed, (o) activating and moving the suction pipette from its first position to its second position so that any liquid substance is sucked from the centrifuge container, and (p) returning the suction pipette to its first position.
I overensstemmelse med den foreliggende opfindelse kan væsken med fordel afgives fra centrifugebeholderens øverste åbning gennem et indsnit, som definerer en minimal bredde af centrifugebeholderens 10 radialt indad rettede randdel, så at der frembringes en forsinkelse af afgivelsen af væske fra centrifugebeholderen. Som følge af forsinkelsen af afgivelsen af væske fra centrifugebeholderen holdes væsken i centrifugebeholderen i et længere tidsrum, og følgelig kan tilførselshastigheden for væske til centrifugebeholderen forøges, så at der kan 15 opnås en større separationshastighed.In accordance with the present invention, the liquid may advantageously be dispensed from the top opening of the centrifuge container through an incision which defines a minimum width of the radially inwardly directed edge portion of the centrifuge container 10 so as to produce a delay in the delivery of liquid from the centrifuge container. Due to the delay in the delivery of liquid from the centrifuge vessel, the liquid is kept in the centrifuge vessel for a longer period of time, and consequently the rate of delivery of liquid to the centrifuge vessel can be increased so that a greater separation rate can be obtained.
For at foretage separationen af bakterier fra væskeprøven indeholdende bakterier under kontrollerede betingelser foretrækkes det, at fremgangsmåden ifølge opfindelsen yderligere omfatter termostatering af centrifugebeholderen til en forudbestemt temperatur ved tilførsel af 20 luft med denne temperatur til centrifugebeholderen. Luften kan tilføres på en vilkårlig passende måde, fx nedefra, så at centrifugebeholderens ydre overflade holdes på den forudbestemte temperatur, og luften med den forudbestemte temperatur kan desuden eller i stedet tilføres til centrifugebeholderen oppefra, så at luften indføres i cen-25 trifugebeholderen gennem den øverste åbning af samme.In order to make the separation of bacteria from the liquid sample containing bacteria under controlled conditions, it is preferred that the method of the invention further comprises thermostating the centrifuge container to a predetermined temperature by supplying 20 air with this temperature to the centrifuge container. The air can be supplied in any suitable manner, for example from below, so that the outer surface of the centrifuge container is kept at the predetermined temperature and the air at the predetermined temperature can additionally or instead be supplied to the centrifuge container from above, so that the air is introduced into the centrifuge container through it. top opening of same.
For at sikre, at den væske, som afgives fra centrifugebeholderens øverste åbning, ikke igen føres ind i centrifugebeholderen som følge af den sugevirkning, der frembringes, når centrifugebeholderen roterer med sin store rotationshastighed, foretrækkes det, at der 30 indføres en strøm af trykluft i centrifugebeholderen, medens denne roterer med sin store rotationshastighed. Trykluften er fortrinsvis termostateret til den nævnte forudbestemte temperatur, så at strømmen af trykluft yderligere tjener det formål at termostatere centrifugebeholderen.To ensure that the liquid dispensed from the top opening of the centrifuge container is not re-introduced into the centrifuge container due to the suction effect produced when the centrifuge container rotates at its high rotational speed, it is preferred that a stream of compressed air be introduced into the centrifuge container. the centrifuge container while rotating at its high rotational speed. The compressed air is preferably thermostated to said predetermined temperature so that the flow of compressed air further serves the purpose of thermostating the centrifuge container.
149638 5 I en foretrukken udførelsesform for opfindelsen er den komponent med stor massefylde i tokomponent-gradientseparationslaget, som har en massefylde, der er større end massefylden af bakterierne, en vandig opløsning af dextran, og den komponent med lille massefylde i tokom-5 ponent-gradientseparationslaget, som har en massefylde, der er mindre end massefylden af bakterierne, er en vandig opløsning af saccharose. Overføringsvæsken, der tjener til at rense centrifugebeholderen, når tokomponent-gradientseparationslaget og de i dette indeholdte bakterier overføres fra centf rif ugebeholderen, og som desuden 10 tjener det formål at bortskylle eventuelt materiale af tokomponent-gra-dientseparationslaget og eventuelle bakterier indeholdt i dette, kan med fordel være en enzymopløsning, der desuden tjener det formål at forbehandle bakterierne til den ovenfor nævnte optiske tælleprocedure.In a preferred embodiment of the invention, the high density component of the two component gradient separation layer which has a density greater than the density of the bacteria is an aqueous solution of dextran and the low density component of two component. the gradient separation layer, which has a density less than the density of the bacteria, is an aqueous solution of sucrose. The transfer fluid which serves to purify the centrifuge container when the two-component gradient separation layer and the bacteria contained therein are transferred from the centrifuge container, and which further serves the purpose of rinsing off any material of the two-component gradient separation layer and any bacteria contained therein advantageously being an enzyme solution which further serves the purpose of pretreating the bacteria for the above optical counting procedure.
15 I den foretrukne udførelsesform for opfindelsen er centrifugebeholderens høje rotationshastighed af størrelsesordenen 45.000 omdrejninger pr. minut og centrifugebeholderens lave rotationshastighed af størrelsesordenen 250 omdrejninger pr. minut, det nettovolumen, som afgrænses i centrifugebeholderen, når denne roterer med sin høje 20 rotationshastighed, af størrelsesordenen 2 ml, volumenet af komponenten med stor massefylde i tokomponent-gradientseparationslaget af størrelsesordenen 0,5 ml, og volumenet af komponenten med lille massefylde i tokomponent-gradientseparationslaget er af størrelsesordenen 1,5 ml. Når centrifugebeholderen roterer med en rotationshas-25 tighed på 45.000 omdrejninger pr. minut, frembringes der et voldsomt virtuelt gravitationsfelt af størrelsesordenen 50.000 G i centrifugebeholderens indre rum, der har en indre diameter af størrelsesordenen 47 mm. Ved tilvejebringelse af et gravitationsfelt med en sådan ekstrem intensitet frembringes der en separation s kapacitet på 1,33 ml/s, 30 dvs. en 20 ml prøve separeres i løbet af 15 s.In the preferred embodiment of the invention, the high rotational speed of the centrifuge container is of the order of 45,000 rpm. and the low rotational speed of the centrifuge container in the order of 250 rpm. per minute, the net volume bounded in the centrifuge vessel as it rotates at its high rotational speed of the order of 2 ml, the volume of the high density component of the two component gradient separation layer of the order of 0.5 ml, and the volume of the small density component of the two component. The gradient separation layer is of the order of 1.5 ml. When the centrifuge container rotates at a rotational speed of 45,000 rpm. per minute, a violent virtual gravitational field of the order of 50,000 G is produced in the inner compartment of the centrifuge vessel having an inner diameter of the order of 47 mm. By providing a gravitational field of such extreme intensity a separation s capacity of 1.33 ml / s is produced, i.e. a 20 ml sample is separated over 15 s.
Den foreliggende opfindelse vedrører desuden et apparat til separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier i overensstemmelse med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde, hvilket apparat har 149638 6 en tallerkenlignende centrifugebeholder med en øverste åbning/ der afgrænses af en radialt indad rettet randdel, en tohastighedsmotor, der er forbundet til centrifugebeholderen, til selektiv rotation af denne med en lav rotationshastighed og en høj ro-5 tationshastighed, væsketilførselsorganer, der strækker sig ind i centrifugebeholderen til tilførsel af en komponent med stor massefylde, hvilken komponent har en massefylde, der er større end massefylden af bakterierne, til centrifugebeholderen, til tilførsel af en komponent med lille massefyl-10 de, hvilken komponent har en massefylde, der er mindre end massefylden af bakterierne, til centrifugebeholderen, til tilførsel af et skyllemiddel til centrifugebeholderen, til tilførsel af en overføringsvæske til centrifugebeholderen og til tilførsel af væskeprøven til centrifugebeholderen, samt 15 en sugepipette, der er monteret på en sådan måde, at den kan bevæges mellem en første stilling, i hvilken pipetten har sin spids placeret i afstand fra inderfladen af centrifugebeholderens perifere væg, og en anden stilling, i hvilken pipetten har sin spids placeret grænsende op til den nævnte inderflade, og som er indrettet til at blive aktiveret, 20 så at den suger væskesubstans fra centrifugebeholderen.The present invention further relates to an apparatus for separating bacteria from a liquid sample containing bacteria in accordance with the method described above, said apparatus having a plate-like centrifuge container having an upper opening / bounded by a radially inwardly directed rim portion, a two speed motor which is connected to the centrifuge container for selectively rotating it at a low rotational speed and a high rotational speed, liquid supply means extending into the centrifuge container for supplying a high density component, which component has a density greater than the density of the bacteria, to the centrifuge container, to supply a component of small density, which component has a density less than the density of the bacteria, to the centrifuge container, to supply a rinse agent to the centrifuge container, to supply a transfer fluid to the centrifuge container.and for supplying the liquid sample to the centrifuge container, and a suction pipette mounted in such a way that it can be moved between a first position in which the pipette has its tip spaced from the inner surface of the peripheral wall of the centrifuge container, and a second position. , in which the pipette has its tip positioned adjacent to said inner surface and which is adapted to be actuated, so as to suck liquid substance from the centrifuge container.
Ved hjælp af apparatet ifølge opfindelsen er det muligt at foretage separationen af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier i en automatiseret og meget nøjagtig separationsproces med høj hastighed.By means of the apparatus according to the invention, it is possible to make the separation of bacteria from a liquid sample containing bacteria in an automated and very accurate high speed separation process.
Et specielt træk ved apparatet ifølge opfindelsen er sugepipetten, der 25 er monteret på en sådan måde, at den kan bevæges ind i centrifugebeholderen fra en første til en anden stilling. Ved brug af en sådan sugepipette opnås en meget pålidelig og nøjagtig overførsel af materiale, der er indeholdt i centrifugebeholderen, uden nogen risiko for beskadigelse af centrifugebeholderen, da sugepipettens spids altid 30 holdes ude af kontakt med centrifugebeholderens inderflade.A particular feature of the apparatus according to the invention is the suction pipette 25 which is mounted in such a way that it can be moved into the centrifuge container from a first to a second position. By using such a suction pipette, a very reliable and accurate transfer of material contained in the centrifuge container is achieved, without any risk of damage to the centrifuge container, since the tip of the suction pipette is always kept out of contact with the inner surface of the centrifuge container.
Selv om tilførselsorganerne kan udgøres af et enkelt organ til tilførsel af alle væsker og komponenter til centrifugebeholderen og kan ende i en vilkårlig del af denne, fx strække sig gennem centrifugebeholderens bundvæg, udgøres tilførselsorganerne fortrinsvis af individu-35 elle tilførselsrør, der strækker sig ind i centrifugebeholderen gennem 149638 7 den øverste åbning af denne til tilførsel af henholdsvis komponenten med stor massefylde, komponenten med lille massefylde, skyllemidlet, overføringsvæsken og væskeprøven.Although the delivery means may be a single means for supplying all liquids and components to the centrifuge container and may end in any part thereof, e.g., extending through the bottom wall of the centrifuge container, the delivery means are preferably constituted by individual supply pipes extending into the the centrifuge container through the upper opening thereof for supplying the high density component, the low density component, the rinse agent, the transfer fluid and the liquid sample, respectively.
Som forklaret ovenfor indføres der en strøm af trykluft i centrifuge-5 beholderen, medens denne roterer med sin høje rotationshastighed.As explained above, a stream of compressed air is introduced into the centrifuge container while it is rotating at its high rotational speed.
Trykluften tilføres fortrinsvis også fra et tilførselsrør, der strækker sig ind i centrifugebeholderen gennem den øverste åbning i centrifugebeholderen.The compressed air is preferably also supplied from a supply pipe extending into the centrifuge container through the top opening of the centrifuge container.
I overensstemmelse med en foretrukken udførelsesform for apparatet 10 ifølge opfindelsen har den tallerkenlignende beholder yderligere et indsnit, som definerer den minimale bredde af centrifugebeholderens radialt indadrettede randdel. Som følge af dette indsnit dannes der et væskereservoir inden i centrifugebeholderen, da væsken kun afgives fra centrifugebeholderens øverste åbning gennem indsnittet, og væs-15 ken holdes følgelig i centfrifugebeholderen i et længere tidsrum.In accordance with a preferred embodiment of the apparatus 10 according to the invention, the plate-like container further has an incision defining the minimum width of the radially inwardly directed edge portion of the centrifuge container. As a result of this incision, a fluid reservoir is formed within the centrifuge container, since the liquid is dispensed only from the top opening of the centrifuge container through the incision, and the liquid is consequently kept in the centrifuge container for an extended period of time.
I den foretrukne udførelsesform for apparatet ifølge opfindelsen er den tallerkenlignende centrifugebeholder fremstillet af titan og har en indre overfladebelægning af polytetrafluorethylen. Centrifugebeholderens indre diameter er af størrelsesordenen 47 mm, og nettovolumenet 20 af centrifugebeholderens indre rum er af størrelsesordenen 2 ml. Ved tilvejebringelse af centrifugebeholderen som en titancentrifugebehol-der, opnås en meget stiv og stærk, men stadig ekstrem let centrifugebeholder.In the preferred embodiment of the apparatus according to the invention, the plate-like centrifuge container is made of titanium and has an inner coating of polytetrafluoroethylene. The inner diameter of the centrifuge container is of the order of 47 mm and the net volume 20 of the inner space of the centrifuge container is of the order of 2 ml. By providing the centrifuge container as a titanium centrifuge container, a very rigid and strong but still extremely light centrifuge container is obtained.
Et ekstremt virtuelt gravitationsfelt af størrelsesordenen 50.000 G kan 25 frembringes i den ovenfor beskrevne centrifugebeholder ved rotation af centrifugebeholderen med den høje rotationshastighed, der er af størrelsesordenen 45.000 omdrejninger pr. minut. Centrifugebeholderens lave rotationshastighed er fortrinsvis af størrelsesordenen 250 omdrejninger pr. minut. I denne foretrukne udførelsesform for opfin-30 delsen er tohastighedsmotoren forbundet direkte til centrifugebeholderen via motorens aksel.An extremely virtual gravitational field of the order of 50,000 G can be produced in the centrifuge container described above by rotating the centrifuge container at the high rotational speed of the order of 45,000 rpm. minute. The low rotational speed of the centrifuge container is preferably of the order of 250 rpm. minute. In this preferred embodiment of the invention, the two-speed motor is connected directly to the centrifuge vessel via the motor shaft.
8 1496388 149638
Opfindelsen vil i det følgende blive nærmere forklaret under henvisning til tegningen, på hvilken fig. 1 viser et lodret snit gennem en foretrukken udførelsesform for et apparat til separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende 5 bakterier og fig. 2 delvis i snit og delvis skematisk den generelle separationsfremgangsmåde ifølge opfindelsen.The invention will now be explained in more detail with reference to the drawing, in which: FIG. 1 is a vertical section through a preferred embodiment of an apparatus for separating bacteria from a liquid sample containing 5 bacteria; and FIG. 2 partly in section and partly schematically the general separation method according to the invention.
I fig. 1 er vist et apparat til separation af bakterier fra en væskeprøve indeholdende bakterier, fx en mælkeprøve. Apparatet er under 10 ét angivet med henvisningsbetegnelsen 10 og har en bunddel 11, på hvilken der er monteret en cylindrisk indkapsling 12. Den cylindriske indkapsling 12's 'nederste endedel er fastgjort til bunddeien 11 og optaget i en cylindrisk, periferisk udsparing i denne. Oven på den cylindriske indkapsling 12 er monteret et gulv 14. Gulvet 14 er i for-15 hold til den cylindriske indkapsling 12 fastgjort ved hjælp af en cylindrisk rand, der rager frem fra gulvet 14’s underside. I den cylindriske indkapsling 12 er indkapslet en motor 16. Motoren 16 er en tohastighedsmotor, der er indrettet til at frembringe en høj rotationshastighed af størrelsesordenen 45.000 omdrejninger pr. minut og 20 en lav rotationshastighed af størrelsesordenen 250 omdrejninger pr. minut. Motoren 16 har sin aksel 17 lejret i et topleje 18 og et bundleje 19, der er anbragt i henholdsvis gulvet 14 og bunddelen 11. Akselen 17 strækker sig forbi toplejet 18 og er ved sin øverste ende udformet med en konus 20, der spidser til indefter.In FIG. 1, an apparatus for separating bacteria from a liquid sample containing bacteria, for example a milk sample, is shown. The apparatus is below 10 designated by reference numeral 10 and has a bottom portion 11 on which is mounted a cylindrical casing 12. The lower end portion of the cylindrical casing 12 is attached to the bottom portion 11 and accommodated in a cylindrical peripheral recess therein. On top of the cylindrical casing 12 is mounted a floor 14. The floor 14 is fixed in relation to the cylindrical casing 12 by means of a cylindrical rim protruding from the underside of the floor 14. In the cylindrical casing 12, an engine 16 is enclosed. The engine 16 is a two-speed motor adapted to produce a high rotational speed of the order of 45,000 rpm. and a low rotational speed of the order of 250 rpm. minute. The motor 16 has its shaft 17 housed in a top bearing 18 and a bottom bearing 19 disposed in the floor 14 and the bottom part 11, respectively. The shaft 17 extends past the top bearing 18 and is formed at its upper end with a cone 20 which points to the inside .
25 På akslen 17 er der monteret en tallerkenlignende centrifugebeholder 21, der ved sin nederste ende har en konisk reces, som spidser til udefter, med en tilspidsningsstigning, der er identisk med stigningen af akslen 17's konus 20, som spidser til indefter. Følgelig fastholder akslen 17's og den tallerkenlignende centrifugebeholder 21's konuser 30 centrifugebeholderen i forhold til motorakslen 17. Centrifugebeholderen 21, der er vist mere detaljeret i fig. 2, og som vil blive beskrevet nedenfor, har en konisk bunddel 22, en lodret cylindrisk del 23 og en indad rettet randdel 24, der afgrænser en øverste åbning 25 i centrifugebeholderen. I centrifugebeholderen 21's øverste åbning 25 35 har den indadrettede randdel 24 et indsnit 26, som definerer den 149638 9 minimale radiale bredde af randdelen. Centrifugebeholderen 21 har desuden et nedadragende adskillelsesskørt 27, der tjener det formål at forhindre væske i at komme i kontakt med toplejet 18. For yderligere at forhindre væske eller små dråber i at komme i kontakt med toplejet 5 18 tilføres der en luftstrøm, som yderligere tjener det formål at termostatere centrifugen til en forudbestemt temperatur, med den forudbestemte temperatur til centrifugebeholderen nedefra gennem et tilførselsrør, der ikke er vist på tegningen, så at der frembringes et adskillelseslufttæppe, som omslutter centrifugebeholderens nederste 10 del.25 On the shaft 17 is mounted a plate-like centrifuge container 21, which at its lower end has a tapered recess, which points outwards, with a taper rise which is identical to the rise of the shaft 20 of the shaft 17, which points inward. Accordingly, the cones 30 of the shaft 17 and the plate-like centrifuge container 21 retain the centrifuge container relative to the motor shaft 17. The centrifuge container 21, shown in more detail in FIG. 2, which will be described below, has a tapered bottom portion 22, a vertical cylindrical portion 23, and an inwardly directed rim portion 24 defining a top opening 25 of the centrifuge container. In the upper opening 25 35 of the centrifuge container 21, the inwardly directed rim portion 24 has a notch 26 which defines the minimum radial width of the rim portion. The centrifuge container 21 also has a downwardly separating skirt 27 which serves the purpose of preventing liquid from coming into contact with the top bed 18. To further prevent liquid or small droplets from coming into contact with the top bed 5 18, an air stream is provided which further serves the purpose of thermostating the centrifuge to a predetermined temperature, with the predetermined temperature of the centrifuge container from below, through a supply pipe not shown in the drawing, so as to produce a separation air blanket enclosing the bottom portion of the centrifuge container.
Oven på gulvet 14 er anbragt et hus 30, som indkapsler centrifugebeholderen 21. Huset 30 har i sin lodrette cylindriske sidevæg udløb 31, der tjener det formål at lede væske bort fra huset 30. Til tilførsel af en væskeprøve strækker der sig et tilførselsrør 32 ind i huset 30's 15 indre gennem en boring i huset 30 og videre gennem ceritrifugebehol- deren 21's øverste åbning 25 og ind i centrifugebeholderens indre.At the top of the floor 14 is a housing 30 which encapsulates the centrifuge container 21. The housing 30 has in its vertical cylindrical sidewall outlet 31, which serves the purpose of passing liquid away from the housing 30. For supply of a liquid sample, a supply pipe 32 extends in in the interior of the housing 30 through a bore in the housing 30 and further through the upper opening 25 of the citrifuge container 21 and into the interior of the centrifuge container.
Tilførsels røret 32 er fastgjort og tætnet i forhold til huset 30 ved hjælp af en tætningsring eller en pakning 33 og har i sin øverste ende en tilslutningsfitting 34, der tillader tilslutning til et passende 20 rør, som ikke er vist på tegningen. Tilførselsrøret 32 er indrettet til at blive forbundet til en ydre væskeprøvebeholder via en tilslutningsfitting 34 og det nævnte rør, der ikke er vist på tegningen.The supply pipe 32 is secured and sealed with respect to the housing 30 by means of a sealing ring or gasket 33 and has at its top end a connection fitting 34 which allows connection to a suitable pipe not shown in the drawing. The supply tube 32 is adapted to be connected to an outer liquid sample container via a connection fitting 34 and said tube not shown in the drawing.
I en anden cylindrisk boring i huset 30's top er placeret en sugepipette, der under ét er angivet med henvisningsbetegnelsen 40. Suge-25 pipetten 40 har et pipetterør 41, som strækker sig ind i huset 30's indre og videre gennem centrifugebeholderen 21's åbning 25 ind i centrifugebeholderens indre. I den øverste ende har pipetterøret 41 en tilslutningsfitting 42, der tillader tilslutning til ydre beholdere, der ikke er vist på tegningen, via passende rør og ventiler, der ikke 30 er vist på tegningen. Sugepipetten 40 har desuden et pipettehus 43, gennem hvilket pipetterøret 41 strækker sig. Som det fremgår af fig.In another cylindrical bore in the top of the housing 30 is located a suction pipette, which is generally indicated by the reference numeral 40. The suction pipette 40 has a pipette tube 41 which extends into the interior of the housing 30 and further through the opening 25 of the centrifuge container 21 into the centrifuge container interior. At the upper end, the pipette tube 41 has a connection fitting 42 which allows connection to outer vessels not shown in the drawing, through suitable pipes and valves not shown in the drawing. The suction pipette 40 further has a pipette housing 43 through which the pipette tube 41 extends. As shown in FIG.
1, har pipetterøret 41 en stempeldel 44, der er monteret forskydeligt i pipettehuset 43. I pipettehuset 43 er der ligeledes anbragt en fjeder 45, som indgriber med stempeldelen 44's underside og forspænder 35 stempeldelen og dermed pipetterøret 41 udefter i forhold til huset 30's 149638 10 indre rum. En tilslutningsfitting 46 tilvejebringer adgang til oversiden af stempeldelen 44 og er indrettet til at blive forbundet til en trykluftkilde, der ikke er vist på tegningen, via et passende rør eller en passende slange, der ikke er vist på tegningen. Ved tilførsel af 5 trykluft til oversiden af stempeldelen 44 tvinges stempeldelen 44 nedefter i pipettehuset 43 mod den forspændingskraft, som tilføres til stempeldelen 44's underside fra fjederen 45 og bevæger dermed pipetterøret 4T's spids længere ind i centrifugebeholderen 2T's indre rum, 10 I centrum af huset 30 er der monteret et legeme 50. ! en gennemgående boring i huset 50 er der anbragt et rør 51, som er tætnet i forhold til legemet 50 ved hjælp af en tætningsring eller en pakning 52. Røret 51's øverste ende har en tilslutningsfitting 53, som tillader tilslutning til en ydre væskekilde, via et passende rør eller en pas-15 sende slange, der ikke er vist på tegningen. Vinkelret på legemet 50's gennemgående boring er der udformet en boring 54, der tilvejebringer en forbindelse til den gennemgående boring fra tilslutningsfittingen 55. Tilslutningsfittingen 55 er indrettet til at blive forbundet til en ydre trykluftkilde, der ikke er vist på tegningen, via 20 et passende rør eller en passende slange, der ikke er vist på tegningen, fx den ovennævnte trykkilde, som er forbundet til sugepipetten 40's tilslutningsfitting 46. Tilførsel af trykluft gennem tilslutningsfittingen 55 og videre gennem legemet 50's gennemgående boring tjener to formål. For det første tjener den luft, som holdes på 25 en forudbestemt temperatur, det formål at termostatere centrifugebeholderen til den forudbestemte temperatur. For det andet tjener trykluften det formål at forhindre væske i at blive opsamlet på huset 30's inderflade og i at blive suget ind i centrifugebeholderen, når denne roterer med sin høje rotationshastighed på 45.000 omdrejninger 30 pr. minut.1, the pipette tube 41 has a plunger portion 44 slidably mounted in the pipette housing 43. In the pipette housing 43 is also provided a spring 45 which engages the underside of the plunger portion 44 and biases the plunger portion and hence the pipette tube 41 outwardly of the housing 30's. interior space. A connection fitting 46 provides access to the upper side of piston portion 44 and is adapted to be connected to a compressed air source not shown in the drawing, via a suitable pipe or tubing not shown in the drawing. By supplying 5 compressed air to the upper surface of the piston part 44, the piston part 44 is forced downwards in the pipette housing 43 against the biasing force applied to the underside of the piston part 44 from the spring 45, thus moving the tip of the pipette tube 4T further into the inner space of the centrifuge vessel 2T, 10 In the center of the housing 30 a body 50 is mounted.! a through bore in the housing 50, a tube 51 is sealed relative to the body 50 by means of a sealing ring or a seal 52. The upper end of the tube 51 has a connection fitting 53 which allows connection to an external source of fluid via a suitable tubing or a suitable hose not shown in the drawing. Perpendicular to the through bore of the body 50, a bore 54 is provided which provides a connection to the through bore from the connection fitting 55. The connection fitting 55 is adapted to be connected to an external compressed air source not shown in the drawing, via a suitable pipe or a suitable hose not shown in the drawing, for example, the above pressure source which is connected to the suction fitting 40 of the suction pipe 40. Supply of compressed air through the connection fitting 55 and further through the bore of the body 50 serves two purposes. First, the air maintained at a predetermined temperature serves the purpose of thermostating the centrifuge vessel to the predetermined temperature. Second, the compressed air serves the purpose of preventing liquid from being collected on the inner surface of the housing 30 and from being sucked into the centrifuge container as it rotates at its high rotational speed of 45,000 rpm. minute.
I fig. 2 er centrifugebeholderen 21 vist mere detaljeret. Medens centrifugebeholderen 21 roterer med sin høje rotationshastighed drevet af motoren 16 som angivet med en pil 64, anbringes et tokomponent-gradientseparationslag 60 i et perifert inderrum af centrifugebeholde-35 ren 21, hvilket rum defineres af det indsnit 26, som definerer den U9638 11 minimale bredde, i den indadrettede randdel 24. Tokomponentseparationslaget 60 har en komponent, der har stor massefylde og udgør et første lag 61, og en komponent, der har lille massefylde og udgør et andet lag 62, der er anbragt oven på det første lag 61. Komponenten 5 med stor massefylde og komponenten med lille massefylde i henholdsvis det første og det andet lag 61 og 62 har massefylder, der er henholdsvis større og mindre end massefylden af de bakterier, som skal separeres. I grænselaget mellem lagene 61 og 62 er vist et bakterielag 63. Væskeprøven tilføres til centrifugebeholderen 21's centrum via 10 tilførselsrøret 32 og afgives fra dette. Takket være den centrifugalkraft, som genereres ved rotation af centrifugebeholderen 21 med den store rotationshastighed, slynges væsken udefter fra centrifugebeholderens centrum og tvinges opefter langs laget 62's inderflade.In FIG. 2, the centrifuge container 21 is shown in more detail. While the centrifuge container 21 rotates at its high rotational speed driven by the motor 16 as indicated by an arrow 64, a two-component gradient separation layer 60 is placed in a peripheral inner compartment of the centrifuge container 21, which space is defined by the incision 26 defining the minimum U9638 11. width, in the inwardly directed edge portion 24. Two-component separation layer 60 has a high density component constituting a first layer 61, and a low density component forming a second layer 62 disposed on top of the first layer 61. The high density component 5 and the low density component of the first and second layers 61 and 62, respectively, have densities that are larger and smaller, respectively, than the density of the bacteria to be separated. A bacterial layer 63 is shown in the boundary layer between layers 61 and 62. The liquid sample is applied to the center of the centrifuge container 21 via the feed tube 32 and is discharged therefrom. Thanks to the centrifugal force generated by rotation of the centrifuge container 21 at the high rotational speed, the liquid is thrown outwards from the center of the centrifuge container and forced upwards along the inner surface of the layer 62.
Væsken, der tilføres fra tilførselsrøret 32 i en kontinuerlig strøm, 15 frembringer et væskefilmlag 65 på indersiden af laget 62 af komponenten med lille massefylde og afgives fra indsnittet 26 som angivet med henvisningsbetegnelsen 66. Da væsken kun afgives gennem indsnittet 26, holdes væsken i centrifugebeholderen i et længere tidsrum sammenlignet med en tallerkenlignende centrifugebeholder, der ikke har 20 det indsnit 26, som definerer den minimale bredde, idet væsken i en sådan centrifugebeholder afgives fra hele den øverste åbning i centrifugebeholderen, og følgelig kan væsketilførselshastigheden til centrifugebeholderen med indsnittet 26 forøges yderligere, hvilket forøger bakterieseparationshastigheden i forhold til et apparat, der ikke har 25 indsnittet 26. Da bakterierne har en større massefylde end laget af komponenten med lille massefylde eller inderlaget 62, tvinges bakterierne radialt udefter gennem laget 62 til grænsefladen mellem lagene 61 og 62.The liquid supplied from the feed tube 32 in a continuous stream 15 produces a liquid film layer 65 on the inside of the layer 62 of the low density component and is dispensed from the notch 26 as indicated by the reference numeral 66. As the liquid is dispensed only through the notch 26, the liquid is held in the centrifuge container. for a longer period of time compared to a plate-like centrifuge container which does not have the incision 26 which defines the minimum width, the liquid in such a centrifuge container being dispensed from the entire top opening of the centrifuge container, and consequently the fluid delivery rate to the centrifuge container with the incision 26 can be further increased. which increases the rate of bacterial separation relative to an apparatus not having the incision 26. Since the bacteria have a greater density than the layer of the low density component or the inner layer 62, the bacteria are radially forced outward through the layer 62 to the interface between layers 61 and 62.
Apparatet 10’s drift beskrives i eksemplet nedenfor.The operation of the apparatus 10 is described in the example below.
30 EKSEMPELEXAMPLE
I en praktisk udførelsesform af den type, som findes beskrevet ovenfor under henvisning til tegningen var den tallerkenlignende centrifugebeholder 21 fremstillet af titan og havde en indre overfladebelæg- 149638 12 ning af polytetrafluorethylen. Centrifugebeholderen 21's indre diameter var 47 mm. Motoren 16 var indrettet til at blive drevet med en lav rotationshastighed på 250 omdrejninger pr. minut og en høj rotationshastighed på 45.000 omdrejninger pr. minut, hvilket gav et virtuelt 5 gravitationsfelt i centrifugebeholderen af størrelsesordenen 50.000 G. Centrifugebeholderen 21's perifere inderrum, hvis højde blev defineret af indsnittet 26, som definerede den minimale bredde, i den indadret-tede randdel 24, var af størrelsesordenen 2 ml. I denne udførelsesform blev en 15 ml væskeprøve separeret i løbet af 15 s. Denne 15 ml 10 væskeprøve var en vandig opløsning af en 5 ml mælkeprøve. Gennem tilslutningsfittingen 55 og gennem legemet 50's gennemgående boring blev der kontinuerligt tilført en strøm af trykluft, der var opvarmet til en temperatur på 40°C, fra en 1,5 Bar trykkilde gennem en slange med en indre diameter på 1,5 mm og en længde på 250 mm. Som 15 nævnt ovenfor blev der ligeledes tilført en strøm af luft med en temperatur på 40°C til centrifugebeholderen nedefra.In a practical embodiment of the type described above with reference to the drawing, the plate-like centrifuge container 21 was made of titanium and had an inner surface coating of polytetrafluoroethylene. The inner diameter of the centrifuge container 21 was 47 mm. The motor 16 was designed to be driven at a low rotational speed of 250 rpm. and a high rotational speed of 45,000 rpm. per minute, giving a virtual gravitational field in the centrifuge container of the order of 50,000 G. The peripheral inner space of the centrifuge container 21, the height of which was defined by the notch 26, which defined the minimum width, in the inwardly directed rim portion 24, was of the order of 2 ml. In this embodiment, a 15 ml liquid sample was separated over 15 s. This 15 ml 10 liquid sample was an aqueous solution of a 5 ml milk sample. Through the connection fitting 55 and through the bore of the body 50, a stream of compressed air heated to a temperature of 40 ° C was continuously supplied from a 1.5 Bar pressure source through a hose having an internal diameter of 1.5 mm and a length of 250 mm. As mentioned above, a stream of air with a temperature of 40 ° C was also supplied to the centrifuge container from below.
Ved udførelse af separationsprocessen ifølge opfindelsen blev det ovenfor beskrevne apparat ifølge opfindelsen drevet i en automatiseret sekvens omfattende følgende trin: 20 (a) motoren 16 blev accelereret til sin høje rotationshastighed til ro tation af centrifugebeholderen 21 med dens høje rotationshastighed på 45.000 omdrejninger pr. minut, (b) en 0,5 ml vandig dextranopløsning, der udgjorde komponenten med stor massefylde, blev tilført fra et separat tilførselsrør, der ikke 25 er vist på tegningen, til centrifugebeholderens centrum, hvorefter den vandige dextranopløsning blev slynget ind i centrifugebeholderen 21’s perifere inderrum og ind i det i fig. 2 viste komponentlag med stor massefylde eller første lag 61, (c) en 1,5 ml saccharoseopløsning, der udgjorde komponenten med 30 lille massefylde, tilførtes gennem et separat tilførselsrør, der ikke er vist på tegningen, til centrifugebeholderens centrum, hvorefter sac-charoseopløsningen blev slynget ind i det i fig. 2 viste komponentlag med lille massefylde eller andet lag 62, medens eventuelt overskydende saccharosevolumen blev afgivet fra centrifugebeholderens øver-35 ste åbning 25 gennem det indsnit 26, som definerer den minimale bredde, i den indadrettede randdel 24, 149638 13 (d) væskeprøven blev tilført fra tilførselsrøret 32 i en kontinuerlig strøm, så at bakterierne blev anbragt i bakterielaget 63 i grænsefladen mellem det første og det andet lag henholdsvis 61 og 62, og væsken blev afgivet gennem centrifugebeholderens øverste åbning som 5 angivet med henvisningsbetegnelsen 66 i fig. 2, (e) efter således at have kontrolleret selve separationsprocessen, blev der tilført et skyllemiddel, der bestod af en enzymopløsning, fra et separat tilførselsrør, der ikke er vist på tegningen, til centrifugebeholderens centrum, så at eventuelle partikler, fx fedtdråber, der 10 kunne påvirke bakterietælleprocessen, som skulle udføres senere, blev renset bort og afgivet fra centrifugebeholderen 21, (f) motoren 16 blev decellereret til sin lave rotationshastighed til rotation af centrifugebeholderen 21 med dens lave rotationshastighed på 250 omdrejninger pr. minut, 15 (g) sugepipetten 40 blev aktiveret og flyttet fra en første stilling, i hvilken dens spids var placeret fjernt fra inderfladen af centrifugebeholderens periferivæg, til en anden stilling, i hvilken den havde sin spids anbragt grænsende op til denne inderflade, således som vist i fig. 2, medens et 1,5 ml volumen af enzymopløsningen blev tilført 20 fra det ovennævnte tilførselsrør, der ikke er vist på tegningen, til centrifugebeholderen 21's centrum, så at materialet i lagene 61 og 62 også indeholdende bakteriegrænsefladeaf lej ringen 63 blev overført i en enzymopløsning gennem pipetterøret 41 og videre gennem tilslutningsfittingen 42 og en ydre slange, der ikke er vist på tegningen, til en 25 ydre målebeholder eller et ydre måleudstyr, der ikke er vist på tegningen, (h) sugepipetten blev ført tilbage til sin første stilling, (i) et 1,5 ml volumen af enzymopløsningen blev tilført gennem det ovennævnte tilførselsrør, der ikke er vist på tegningen, til centrifu- 30 gebeholderen 21's centrum, (j) motoren 16 blev accelereret til rotation af centrifugebeholderen 21 med dens høje rotationshastighed på 45.000 omdrejninger pr. minut, så at eventuelt materiale placeret i centrifugebeholderen 21's perifere inderrum blev renset bort ved hjælp af enzymopløsningen, og 35 (k) derefter blev trinene (f)-(h) gentaget til overførsel af det rensende 1,5 ml volumen af enzymopløsningen sammen med et naturligt materiale opløst i dette til den ovennævnte målebeholder eller det ovennævnte måleudstyr, der ikke er vist på tegningen,In carrying out the separation process according to the invention, the above-described apparatus according to the invention was operated in an automated sequence comprising the following steps: (a) the engine 16 was accelerated to its high rotational speed to rotate the centrifuge container 21 with its high rotational speed of 45,000 rpm. (b) a 0.5 ml aqueous dextran solution constituting the high density component was fed from a separate feed tube not shown in the drawing to the center of the centrifuge vessel, after which the aqueous dextran solution was poured into the peripheral of centrifuge vessel 21 inner compartment and into the embodiment of FIG. (C) a 1.5 ml sucrose solution constituting the 30 small density component was fed through a separate feed tube not shown in the drawing to the center of the centrifuge container, after which the sucrose solution was hurled into the one shown in FIG. 2, with low density or second layer 62, while any excess sucrose volume was dispensed from the top opening 25 of the centrifuge container through the notch 26 defining the minimum width in the inwardly directed rim portion 24, (d) the liquid sample was applied. from the feed tube 32 in a continuous stream such that the bacteria were placed in the bacterial layer 63 at the interface between the first and second layers 61 and 62, respectively, and the liquid was discharged through the top opening of the centrifuge container as indicated by reference numeral 66 in FIG. 2, (e) after thus controlling the separation process itself, a rinse agent consisting of an enzyme solution was fed from a separate feed tube not shown in the drawing to the center of the centrifuge container so that any particles, e.g. 10 could affect the bacterial counting process to be performed later, was purged and discharged from the centrifuge container 21; (f) the engine 16 was decelerated to its low rotational speed to rotate the centrifuge container 21 at its low rotational speed of 250 rpm. minute, 15 (g) suction pipette 40 was activated and moved from a first position in which its tip was located distant from the inner surface of the peripheral wall of the centrifuge container to a second position in which it had its tip disposed adjacent to this inner surface, such as shown in FIG. 2, while adding a 1.5 ml volume of the enzyme solution 20 from the aforementioned feed tube, not shown in the drawing, to the center of the centrifuge container 21 such that the material in layers 61 and 62 also containing the bacterial interface deposit 63 was transferred into an enzyme solution. through the pipette tube 41 and further through the connection fitting 42 and an outer hose not shown in the drawing to an outer measuring container or outer measuring device not shown in the drawing, (h) the suction pipette was returned to its first position, ( i) a 1.5 ml volume of the enzyme solution was fed through the aforementioned feed tube not shown in the drawing to the center of the centrifuge container 21; (j) the engine 16 was accelerated to rotate the centrifuge container 21 with its high rotational speed of 45,000 RPM so that any material placed in the peripheral inner compartment 21 of the centrifuge container was purified by the enzyme solution, and 35 (k) were then repeated (f) - (h) to transfer the purifying 1.5 ml volume of the enzyme solution together with a natural material dissolved therein for the aforementioned measuring vessel or measurement apparatus not shown in the drawing,
Claims (16)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK285684A DK149638C (en) | 1983-06-10 | 1984-06-08 | METHOD AND APPARATUS FOR BACTERIAL SEPARATION |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK268283 | 1983-06-10 | ||
| DK2682/83A DK268283D0 (en) | 1983-06-10 | 1983-06-10 | METHOD AND APPARATUS FOR BACTERIAL SEPARATION |
| DK285684 | 1984-06-08 | ||
| DK285684A DK149638C (en) | 1983-06-10 | 1984-06-08 | METHOD AND APPARATUS FOR BACTERIAL SEPARATION |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK285684D0 DK285684D0 (en) | 1984-06-08 |
| DK285684A DK285684A (en) | 1984-12-11 |
| DK149638B true DK149638B (en) | 1986-08-18 |
| DK149638C DK149638C (en) | 1987-02-09 |
Family
ID=26066665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK285684A DK149638C (en) | 1983-06-10 | 1984-06-08 | METHOD AND APPARATUS FOR BACTERIAL SEPARATION |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DK (1) | DK149638C (en) |
-
1984
- 1984-06-08 DK DK285684A patent/DK149638C/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK285684A (en) | 1984-12-11 |
| DK285684D0 (en) | 1984-06-08 |
| DK149638C (en) | 1987-02-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6464624B2 (en) | Blood processing method and apparatus using a centrifugation bowl with filter core | |
| JP5923446B2 (en) | Regenerative cell extraction unit and regenerative cell extraction system | |
| US6629919B2 (en) | Core for blood processing apparatus | |
| JP4183915B2 (en) | Apparatus and method for collecting platelets and other blood components | |
| US3235173A (en) | Agitating and/or fractioning centrifuge | |
| Tullis et al. | New principle of closed system centrifugation | |
| JP5340274B2 (en) | Cartridge and centrifuge having cartridge | |
| US20180353954A1 (en) | Dual Piston Centrifuge Tube | |
| JP5272144B2 (en) | How to separate cells | |
| EP0008826A2 (en) | Method and apparatus for counting bacteria in a bacteria-containing suspension, method for fluorescence staining of bacteria, and method for separating bacteria from a sample | |
| US2712897A (en) | Steady flow centrifugal defoamer | |
| DK149638B (en) | Process and apparatus for separating out bacteria | |
| CN111803997A (en) | Full-automatic oscillation extraction and purification device and pretreatment method | |
| JP2011097878A (en) | Cell separation apparatus | |
| FI76370C (en) | FOERFARANDE OCH ANORDNING FOER SEPARERING AV BAKTERIER FRAON ETT BAKTERIER INNEHAOLLANDE VAETSKEPROV. | |
| KR101953868B1 (en) | Centrifugation-kit for divide extraction easy by ingredient specific and grab of sample | |
| JP2010104918A (en) | Separating equipment | |
| JPH04503603A (en) | Methods and gradient separation components for separating bacteria from bacteria-containing liquid samples | |
| JPH08257519A (en) | Cleaning tank | |
| EP2842633A1 (en) | Apparatus and method for separating materials of different densities | |
| JPH03140867A (en) | Washing method of specimen particle | |
| KR101813678B1 (en) | Cell extracting decive and cell extracting method | |
| JPS62120855A (en) | Serum sampling apparatus | |
| US8911634B2 (en) | Apparatus and method for separating materials of different densities | |
| SU716645A1 (en) | Method and apparatus for liquid washing and liquid treatment of lightweight articles |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |