DK145302B - Cephalosporansyrederivater til anvendelse som mellemprodukter - Google Patents

Description

(19) DANMARK

fjP <’2) FREMUEGGELSESSKRIFT au 145302 B

DIREKTORATET FOR PATENT- OG VAREMÆRKEVÆSENET

(21) Ansøgning nr. 68l/80 (51) IntCI.3 C 07 D 519/00 (22) Indleveringsdag 15. feb. 1980 (24) Løbedag 1 1 . jul. 1 977 (41) Aim. tilgængelig 15. fel3> 1 ^qq (44) Fremlagt 25. okt. I982 (86) International ansøgning nr. « (86) International indleveringsdag (85) Videreførelsesdag - (62) Stamansøgning nr. 51 26/77

(30) prioritet 13. jul. 1976, 705226, US 16. mar. 1977, 777986, US 24. féb. 1977, 771859, US 15. apr. 1977, 788Ο56, US

(71) Ansøger BRISTOL-MYERS COMPANY, New York, US.

(72) Opfinder Takayuki Nalto, JP: Jun Okumura, JP: Hajlme Kamachi, JP: Seljl LLmura, JP.

(74) Fuldmægtig Th. Ostenfeld Patentbureau A/S.

(54) Cephalosporansyrederlvater til anvendelse som mellemprodukter.

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte cephalosporan-syrederivater til anvendelse som mellemprodukter til fremstilling af hidtil ukendte cephalosporansyrederlvater med den almene formel

S

ANH—r-Γ | ^-====. N

O I 1 ]_ i

^ /-N CH2S“^ n.N Vy'N-A

ό 0 I o

J COOH

§ 2 145302 hvori A er 0 /-v. 0 cqe5 - CH - c - eller ([ \-C - C - 0r1 "'-or2 hvori R1 er hydrogen eller formyl, r2 er alkyl med 1 - 4 carbonatomer, og A1 er methyl eller -(CH2)nCOOH/ og n er 1 eller 2, samt let hydrolyserbare estere og ikke-toxiske, farmaceutisk acceptable salte deraf, hvilke mellemprodukter er ejendommelige ved, at de har den almene formel

h2h-ch-f s S

j-k^-CH2 - " Al W

COOH 0 hvori A1 er methyl eller (CH2)nCOOH, og n er 1 eller 2, eller er salte, let hydrolyserbare estere eller Schiff-baser heraf.

De let hydrolyserbare estere af syrerne, som har formel I, omfatter de estere, som indeholder en gruppe med den almene formel

-CH

Z

hvori Z betegner (lavere)alkanoyl, benzoyl, naphthoyl, furoyl, thenoyl, nitrobenzoyl, methylbenzoyl, halogenbenzoyl, phenylbenzoyl, N-phthal-imido, N-succin imido, N-saccharino, N-(lavere)alkylcarbamoyl, (lavere)-alkoxy, (lavere)alkylthio, phenoxy, carbalkoxy, carbobenzoxy, carbamoyl, benzyloxy, chlorbenzyloxy, carbophenoxy, carbo-tert.-butoxy eller (lavere)alkylsulfony1, når W betegner hydrogen, Z betegner carbalkoxy, når W betegner carbalkoxy, og Z betegner benzoyl eller cyano, når W

3 145302 betegner phenyl, eller hvori W og Z tilsammen betegner 2-oxocycloalkyl indeholdende fra 4 til 8 carbonatomer.

Saltene omfatter de ikke-toxiske carboxylsyresalte deraf, omfattende ikke-toxiske metalsalte, såsom natrium-, kalium-, calcium-og aluminiumsaltene, ammoniumsaltet og substituerede ammonium-salte, f.eks. salte af ikke-toxiske aminer, såsom trialkylaminer, omfattende triethylamin, procain, dibenzylamin, N-benzyl-beta-phenethylamin, 1-ephenamin, N, Ν'-diben zylethylendiamin, dehydroabietylamin, Ν,Ν'-bis-dehydroabietylethylendiamin, og andre aminer, som har været anvendt til dannelse af salte med benzylpenicillin, samt L-lysin, arginin og histidin. Den bicykliske kernes stereokemi er den, som findes i Cephalosporin C.

Når slutprodukterne med formel I har den almene formel III

π f ° ^

11 i^C-C-NH-CH-CH CH0 S' I -= N

^ " || i 2 I I , in

V

COOH

12 hvori A , n og R har de ovenfor anførte betydninger, kan de være enten syn-isomere eller blandinger af syn- og anti-isomere indeholdende i det mindste 75% af den syn-isomere. Fortrinsvis indeholder sådanne blandinger af isomere i det mindste 90% af den syn-isomere og ikke piere end 10% af den anti-isomere. Især foretrækkes det, at forbindelserne med formel III er syn-isomere, som i det væsentlige er fri for den tilsvarende anti-isomere. Henvisning til den syn-(cis)-isomere form 2 henviser til konfigurationen af gruppen OR i forhold til carboxamido-gruppen.

De yærdifulde slutprodukter med formel I kan fremstilles ved, at man behandler mellemproduktet IV eller et salt eller en let hydrolyserbar ester deraf med et acyleringsmiddel, som har den almene formel

A - X

hvori X er halogenid eller et funktionelt ækvivalent deraf, og A har den ovenfor anførte betydning, idet dog, når A-gruppen inde- 4 145302 holder en fri hydroxylgruppe, denne gruppe på forhånd blokeres ved hjælp af en konventionel beskyttende gruppe, som bagefter fjernes til tilvejebringelse af en forbindelse med formel I, og man om ønsket omdanner den resulterende forbindelse med formel I i form af fri syre eller salt til en let hydrolyserbar ester eller et ikke-toxisk, farmaceutisk acceptabelt salt deraf, og om ønsket omdanner en forbindelse med formel I i form af et resulterende salt eller let hydrolyserbar ester til den tilsvarende frie syre med formlen I.

Ifølge et udførelseseksempel på denne fremgangsmåde omsætter man mellemproduktet IV eller et salt, en let hydrolyserbar ester eller en Schiff-base deraf, f.eks. med benzaldehyd eller salicylaldehyd, (omfattende de salte, estere eller

Schiff-baser, som er omhandlet af USA-patentskrift nr. 3.284.451 og britisk patentskrift nr. 1.229.453, samt en hvilken som helst af de silylestere, som er beskrevet i USA-patentskrift nr. 3.249.622 til anvendelse sammen med 7-aminopenicillansyre, og som beskrevet anvendt i britisk patentskrift nr. 1.073.530, og især omfattende pivaloyloxymethyl-, acetoxymethyl-, methoxymethyl-, acetonyl-, phenacyl-, p-nitrobenzyl-, β,β,β-trichlorethyl-, 3-phthalidyl- og 5-indanylestrene) med et organisk monocarboxylsyrechlorid eller et funktionelt ækvivalent deraf som acyleringsmiddel.

Sådanne funktionelle ækvivalenter omfatter de tilsvarende syrer og anhydrider, omfattende blandede anhydrider, og især de blandede anhydrider fremstillet fra stærkere syrer, såsom de lavere alifatiske monoestre af carbonsyre eller alkyl- og arylsulfonsyrer eller af mere hæmmede syrer, såsom diphenyleddikesyre. Tillige kan et syreazid eller en aktiv ester eller thioester (f.eks. med p-nitrophenol, 2,4-dinitrophenol, thiophenol eller thioeddikesyre) anvendes, eller den frie syre i sig selv kan kobles med forbindelse IV efter en første omsætning af denne frie syre med N,N'-dimethylchlorformiminiumchlorid [se britisk patentskrift nr. 1.008.170 og Novak og Weichet, Experientia XXI, 6, 360 (1965)] eller ved anvendelse af enzymer eller af en Ν,Ν'-carbo-nyl-diimidazol eller en N,N'-carbonylditriazol [se sydafrikansk patentskrift nr. 63/2684] eller et carbodiimod-reagens [især Ν,Ν'-dicyclo-hexylcarbodiimid, Ν,Ν'-diisopropylcarbodiimid eller N-cyclohexyl-N'-(2-morpholinoethyl)carbodiimid/ se Sheehan og Hess, J. Amer. Chem. Soc., 77, 1967 (1955)] eller af et alkylylamin-reagens [se R. Buijle og H.G.

5 145302

Viehe, Anqew. Chem. International Edition 3, 582, (1964)] eller af et isoxasoliumsalt-reagens [se R.B. Woodward, R.A. Olofson og H. Mayer, J. Amer. Chem. Soc«, 83, 1010 (1961)] eller af et ketenimin-reagens [se C.L. Stevens og M.E. Munk, J. Arner. Chem. Soc., 80, 4065 (1958)] eller af hexachlorcyclotriphosphatriazin eller hexabromcyclotriphos-phatriazin (se U.S.A. patentskrift nr. 3.651.050) eller af diphenyl-phosphorylazid [DPPA] [se J. Arner. Chem. Soc., 94, 6203-6205 (1972Π eller af diethylphosphorylcyanid [DEPC] [se Tetrahedron Letters No. 18, pp. 1595-1598 (1973)] eller diphenylphosphit [se Tetrahedron Letters No. 49, pp. 5047-5050 (1972)]. Et andet ækvivalent af syrechloridet er et tilsvarende azolid, d.v.s. et amid af den tilsvarende syre, hvis amid-nitrogen er et element af en kvasi-aromatisk fem-leddet ring, som i det mindste indeholder to nitrogenatomer, d.v.s. imidazol, pyra-zol, triazolerne, benzimidazol, benzotriazol og deres substituerede derivater. Som et eksempel på den almene fremgangsmåde til fremstilling af et azolid omsættes N,N'-carbonyldilmidazol med en carboxylsyre i ækvimolære forhold ved stuetemperatur i tetrahydrofuran, chloroform, dimethylformamid eller et lignende inert opløsningsmiddel til dannelse af carboxylsyre-imidazolidet i praktisk taget kvantitativt udbytte under frigørelse af carbondioxid og et mol imidazol. Dicarboxylsyrer giver <31--imidazolid. Biproduktet, imidazol, fælder ud og kan adskilles, og imidazolidet kan isoleres, men dette er ikke væsentligt. Fremgangsmåderne til udførelse af disse omsætninger til fremstilling af cephalosporin og de til isolering af den således fremstillede cephalosporin anvendte metoder er velkendte i teknikken.

Ovenfor omtaltes anvendelse af enzymer til kobling af den frie syre med forbindelse IV. Indenfor rammerne af sådanne processer er anvendelse af en ester, f.eks. methylesteren, af den frie syre sammen med enzymer tilvejebragt ved hjælp af forskellige mikroorganismer, f.eks. de, som er beskrevet af T. Takahashi et al., J. Amer. Chem.

Soc., 94 (11), 4035-4037 (1972) og af T. Nara et al., J. Antibiotics (Japan) 24 (5), 321-323 (1971) samt i U.S.A. patentskrift nr. 3.682.777.

Med henblik på kobling af den organiske carboxylsyre som ovenfor beskrevet med forbindelse IV (eller et salt eller fortrinsvis en let hydrolyserbar ester eller Schiff-base, som f.eks. med benzaldehyd/ deraf) er det også bekvemt og virkningsfuldt som koblingsmiddel at anvende trimer phosphonitrilchlorid (se J. Org. Chem., 33(7), 2979-81, 1968) eller N-ethoxy-l,2-dihydroquinolin (EEDQj som beskrevet i J.

Amer. Chem. Soc., 9j0, 823-824 og 1652-1653 (1968) og i U.S.A. patent-skrift nr. 3.455.929. Omsætningen udføres fortrinsvis ved 30-35 C i 6 U53Q2 benzen, ethanol eller tetrahydrofuran under anvendelse af omtrent ækvimolaare masngder af alle tre reagenser og efterfølges af konventionel isolering og fjernelse ved konventionelle metoder af eventuelt tilstedeværende blokerende grupper.

Mellemproduktet XV kan i sig selv fremstilles ved, at man omsætter 7-aminocephalosporansyre med formlen m2-c-o ^_N -CH2OCCH3

0 COOH

eller et salt eller en let hydrolyserbar ester deraf, med en forbindelse, som har den almene formel η-8-ΛνΛ/η-α Π o hyori A^* har den ovenfor anførte betydning.

Slutprodukterne med den almene formel X besidder bredspektret antibakteriel aktivitet og er uventet mere aktive end Cefamandol, der er trivialnavnet for 7-(D--mandelamido)-3-(l-methyl-lH-tetrazol-5-yl-thiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre, og Cefuroxim, der er trivialnavnet for natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7-(2Z)-2-methoxyimino-(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4-carboxylat. Det har endvidere overraskende vist sig, at den mest aktive blandt slutprodukterne (BB-S510, se nedenfor), som har en 2-methylsubstituent på triazolopyridazinonen, udviser en in vitro antibakteriel styrke , som er betydeligt bedre end den tilsvarende styrke af den tilsvarende forbindelse, som mangler en sådan methylgruppe (BB-S515, se nedenfor). De omhandlede forbindelser kan derfor med fordel anvendes til bekæmpelse af bakterielle infektioner, herunder Shig. dysenteriae-infektioner, Sal. enteritidis-infektioner, Haemophilus-infektioner og Neisseria-infektioner.

Ved behandling af bakterielle infektioner i mennesker administreres de omhandlede forbindelser parenteralt i en fra 5-200, især 10-90 mg/kg/dag, og fortrinsvis 5-20, især 14-20 mg/kg/dag i opdelt dosering, fx 2-4 gange pr. dag. De administreres i doserings- 7 145302 enheder, som fx indeholder 125, 250 eller 500 mg aktiv bestanddel sammen med velegnede fysiologisk acceptable bærere eller excipienter. Doseringsenhederne er i form af flydende præparater, såsom opløsninger eller suspensioner, og er fortrinsvis vandige opløsninger af et natriumsalt eller et kaliumsalt, som injiceres intravenøst eller intramuskulært eller ved kontinuert eller periodisk infusion i koncentrationer på ca. 125-500 mg/ml, og fortrinsvis 250 mg/ml, således som det er sædvanligt i terapien med cephalosporin-antibiotika.

I det følgende belyses fremstilling af udgangsmaterialer og mellemprodukterne ifølge opfindelsen.

"Skellysolve B" er en petroleumsetherfraktion med kogepunkt 60-68°C og i det væsentlige bestående af n-hexan.

Π Π O KCN „ π “ II 7 j

U J—C-Cl acetonitril L J—C-CN

π Δ i 0 H+ HC1 -4· 0 1 ch3oNh2.hci jj j].

ϋ JJ—C-C-OH U JJ— C-C-OH

NQ/ π ri M 11

3 N O 2 OO

0CH3

Na CH3OH

ΓΓ—π o <coci)2 ? [THI i? U JJ—C-C-ONa 7 U JJ—C-C-Cl " ^o^ "

. N c N

4 \ 5 \ ^ OCII3 "" OCiI3 2-furoylcyanid Q.)

Til en opslæmning af 78,3 g pulveriseret kaliumcyanid i 900 ml acetonitril ved 5°C sattes 59,25 ml (68,5 g) α-furoylchlorid under kraftig omrøring og under opretholdelse af temperaturen ved 4-8°C. Blandingen omrørtes ved 4-8°C i 15 minutter, og opvarmedes derefter up-der tilbagesvaling i 30 minutter. Blandingen afkøledes til 23-25°C, 8 145302 filtreredes, udvaskedes med 50 ml acetonitril, som sattes til filtratet, og acetonitrilet fjernedes ved 60°C (15 mm Hg) til efterladelse af 51 g produkt 1 som en mørk olie. Et IR-spektrum viste et nitril-^1 bånd ved 2265 cm , og et NMR-spektrum viste et forhold på ca. 70/30 af produkt J./furansyre. Det rå produkt 1 anvendtes uden yderligere rensning (49% udbytte af produkt).

Fury 1- 2-glyoxylsyre (2)

De 51 g rå 2-furoylcyanid 1 blandedes med 500 ml koncentreret saltsyre ved 25°C. Reaktionsblandingen omrørtes i 24 timer ved 25°C og fortyndedes derefter med 240 ml vand. Blandingen omrøres i 5 minutter og filtreredes. Det sorte filtrat mættedes med natriumchlorid og ekstraheredes med 6 x 500 ml 1:1 ether-ethylacetatopløsning. (Bemærkning: I begyndelsen var ekstraktionerne vanskelige på grund af, at man ikke kunne se adskillelsen mellem to sorte faser. Efterhånden som yderligere ether-ethylacetat-ekstraktioner udførtes, forenkledes opgaven) . Ekstrakterne kombineredes og inddampedes til tørhed ved 60°C (15 mm Hg). Det resulterende faststof opløstes i 600 ml ether, (Bemærkning: Anvendelse af alkohol bør undgås på dette punkt, da der kan dannes estre), behandledes med 10 g trækul ("Darko-KB"), filtreredes efter omrøring i 0,5 time og inddampedes til tørhed ved 50°C (15 mm Hg) til dannelse af 46,6 g produkt_2 som en lys gylden farvet syre.

Dette produkt^ viste sig at indeholde et forhold på ca, 56/44 af produkt 2/furansyre. Dette svarede til et 63% udbytte af produkt 2.

Rensning udførtes ved opløsning af det ovennævnte rå produkt 2 i H20 (50 mg/ml), titrering til pH-værdi 2,8 med HC1 og ekstraktion med 2 x 200 ml ethylacetat. Inddampning af ethylacetatekstrakterne gav 35% furansyre og 15% produkt ^2. Den vandige fase med pH-værdi 2,8 indstilledes til pH-værdi 0,8 (HC1) og ekstraheredes med 2 x 200 ml ethylacetat. De organiske ekstrakter kombineredes og udvaskedes med 50 ml H20. Den organiske fase inddampedes ved 50°C (15 mm Hg) til dannelse af et faststof med forhold på ca. 86/14 af produkt 2/furansyre. Dette faststof omkrystalliseredes derefter ved opløsning af produktet 2, i toluen ved 50 mg/ml ved 80°C, dekantering og henstilling til udkrystallisering ved stuetemperatur i 18 timer til dannelse af 13,3 g ved NMR-spektrum påvist ren syre 2. Dette svarede til et 51% udbytte i rensnings- og omkrystallisationstrinet og et totaludbytte fra 2-furoylchlorid til den rene fury1-2-glyoxylsyre 2^på 16%.

9 145302

Syn-a-methoxyiminofuryleddikesyre (^)

En opløsning af 4,5 g furyl-2-glyoxylsyre 2, i 40 ml 50% ethanol titreredes til pH-værdi 6 med IN natriumhydroxid, og derefter tilsattes 3,1 g methoxyamin, HC1 i 6 ml vand ved 20°C. Opløsningen titreredes til en konstant pH-værdi på 4,9 og omrørtes ved pH-værdi 4,9 i 24 timer ved 20-23°C. Ethanolen fjernedes derefter ved 50°C (15 mm Hg) og den resterende vandige opløsning titreredes til pH-værdi 8 med 50% natriumhydroxid og udvaskedes med 3 x 50 ml ether (pH indstilledes til 8 efter hver udvaskning). Det vandige lag titreredes til pH-værdi 1,9 med koncentreret HC1 og ekstraheredes med 5 x 50 ml ethylacetat, idet pH-værdien geninstilledes til 1,9 efter hver ekstraktion. Ethylacetat-ekstrakterne kombineredes og inddampedes til faststof ^ ved 50°C (15 mm Hg). Dette faststof opslæmmedes med 75 ml "Skellysolve B". Opslæmningen filtreredes, og faststofferne genopløstes i 16 ml toluen ved 80°C. Den varme opløsning dekanteredes og henstilledes til krystallisering ved 20-23°c i 18 timer til dannelse af 1,17 g produkt ^ (22% udbytte af produkt). NMR-spektret var rent og konsistent for strukturen 3, med spor af anti-isomer til stede.

Natrium-syn-a-methoxyiminofurylacetat (4J

Til 40 ml methanol sattes 0,16 g natrium. Blandingen omrørtes, indtil alt natriumet var opløst og dekanteredes derefter. Den resulterende natriummethoxid-opløsning afkøledes til 3°C og 1,12 g syn-a-methoxyiminofuryleddikesyre 3, i 7,8 ml methanol tilsattes. Opløsningen omrørtes i 10 minutter ved stuetemperatur. Opløsningsmidlet afdampedes ved 40°C (15 mm Hg). Remanensen £ tørredes ved azeotropisk destillation med 3 x 20 ml benzen ved 40°C (15 mm Hg). Produktet 4, tørredes i 18 timer ved 23°C under højvakuum (0,7 mm Hg) over P2°5 efter-ladelse af 1,25 g (99% udbytte af produktet). NMR-spektret viste, at dette produkt £ var rent og konsistent for strukturen med 0,15 mol methanol og et spor af anti-isomer.

Til 0,63 g natrium-syn-g-methoxyiminofurylacetat 4^ opslæmmet i 25 ml benzen sattes fire dråber tør dimethylformamid og 0,31 ml (1,1 ækvivalent) oxalylchlorid. Denne blanding omrørtes i 40 minutter ved 20-23°C Benzenen fjernedes ved 35°C (15 mm Hg) til tilvejebringelse af syre-chloridet 5 som en gummiagtig remanens.

10 145302 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolof4,3-b]-pyridazin-3-on

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3-on [P. Francabilla og F. Lauria, J. Het. Chem. j3, 415 (1971)] (17 g, 0,1 mol) i tør DMF (300 ml) sattes kalium-tert.-butoxid (0,5 g, 4,5 mmol) under omrøring. Acrylonitril (6,6 g, 0,12 mol) i tør DMF (10 ml) sattes til blandingen. Blandingen omrørtes ved 100-110°C i 24 timer, hældtes derefter i vand (700 ml) og ekstraheredes med ethyl-acetat (5 x 400 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over Na2SO^ og inddampedes. Remanensen udkrystalliseredes fra ethyl-acetat til dannelse af lysegule nåle af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on (2,5 g, 11%). Smeltepunkt 166 - 168°C.

IR: V KBr 2230, 1720, 1550, 1500 cm"1, max ' UV: λ d^oxan 3?3 ^ 2000).

max NMR: 3,03 (2H, t, J=6,0 Hz, (¾) , 4,21 (2H, t, J=6,0 Hz, CH2), 7,23 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,93 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgHg^OCl: C: 42,97; H: 2,70; N: 31,32; Cl: 15,86.

Fundet: C: 42,73, H: 2,57, N: 31,36, Cl, 15,96, 42,56; 2,50; 31,68; 15,81.

11 145302 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolQ[4,3-b]pyrldazin-3-on En opløsning af 6-chlor-2-(2-cyanoethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on (724 mg) i 6N-HC1 (15 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 6 timer. Reaktionsblandingen ekstraheredes med ethyl-acetat (10 x 20 ml). De kombinerede ekstrakter udvaskedes med mættet vandig natriumchlorid (50 ml), tørredes over Na2S04 og inddampedes til dannelse af lysegult, fast 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 72%). Smeltepunkt 170°C (sublimation) .

IR: V KBr 3400-2400, 1730, 1710, 1540 cm"1.

ItlclX

UV: λ dloxan 377 nm (£, 1500). max NMR: S D20+NaHC03 2,70 (2H, t, J=7,0 Hz, CH0), 4,24 (2H, t, ppm —*· J=7,0 Hz, CH2), 7,17 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,70 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for CgH^OgCl: C: 39,60? H: 2,91; N: 23,09; Cl: I4y61.

Fundet: C: 39,62, H: 2,97, N: 23,05, Cl: 13,93, 39,48; 2,67; 22,70; . 14,12.

2- (2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3- on

En blanding af 2-(2-carboxyethyl)-6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on (567 mg, 2,34 mmol) og 70% natriumhydrogensulfid, dihydrat (924 mg, 7,02 mmol) i vand (10 ml) omrørtes ved stuetemperatur i 2 timer. Reaktionsblandingen indstilledes i rækkefølge til pH-vær-di 1 med koncentreret HC1, til pH-værdi 10 med NaOH og derefter til pH-værdi 1 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald af 2-{2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 418 mg (74%). Smeltepunkt 174-176°C.

12 145302 IR: i>KBr 3600-2600, 2440, 1730, 1720 (skulder) cnf1.

IUciX

UV: λΡΗ 3^Uffer 262 nm (£, 17000), 318 nm (ε, 6600).

ΙΧΙαΧ NMR: S°pp°’d6 2,73 (2H, t, J=7,0 Hz, CHj), 4,07 (2H, t, J=7,0 Hz, CH2) , 7,30 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H) , 7,74 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C8H8N4°3S: C: 40,00; H: 3,36; N: 23,32; S: 13,35.

Fundet: C: 39,08, H: 3,12, N: 22,65, S: 14,23, 39,06; 3,20; 22,70; 14,29.

7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3—b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre

En blanding af 7-ACA (405 mg, 1,49 mmol), thiolen 2-(2-carboxy-ethyl)-2,3-dihydro-6~mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (357 mg, 1,49 mmol) og NaHCOg (375 mg, 4,47 mmol) i 0,1 M phosphatpuffer (pH-vasrdi 7, 8 ml) omrør tes ved 80°C i 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Filtratet indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte: 519 mg (77%).

IR: * KBr 3600-2200, 1800, 1725, 1620, 1550, 1480 cm"1, max UV: A PH 7 Puffer 253 nm 20000), 298 nm (f 10000). max NMR:S D20+K2C03 2,20 (2H, t, J=7,0 Hz, CH„), 3,40 (IH, d, J=17,5 ppm «

Hz, 2-H), 3,85 (IH, d, J=17,5 Hz, 2-H), 4,00-4,50 (4H, m, 3-CH2 og N-CH2-), 5,01 (IH, d, J=4,0 Hz, 6-H), 5,40 (IH, d, J=4,0 Hz, 7-H), 6,94 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H), 7,44 (IH, d, J=10,0 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C-^gH^gNgOgS2,3/2H20: C: 40,09; H: 3,99; N: 17,52; S: 13,37.

Fundet: C: 40,06, H: 3,33, N: 16,96, S: 13,87.

40,12; 3,34; 16,98; 13,98.

13 145302 7-ACA henviser til 7-aminocephalosporansyre og DMF til dimethyl-formamid.

Skema 1: Fremstilling af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s- triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthlomethvl)-3-cephem-4-carboxylByre

NaH/DMF

γ=-Ν cicH-jCOOc^Hj. . η——-,. n I i -2-2-5-> Il cl—Cl-^/N^N-C^COOC^j 1 2

NaSH ^ —-N, 7-ACA

-I | “-f Η5~^ν^ΝΎΝ"°Η2 3 °

h2n—i—f1'': V

J_N —CH2S-^„^Nv-N-CH-COOH

° T T

CO~H

4 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on (2)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem., 8, 415 (1971)] (1, 1,00 g, 5,9 mmol) i tør DMF (30 m3) sattes natriumhydrid (50% i paraffin, 0,3 g, 6,3 mmol) under omrøring med dannelse af gule krystaller til følge. Til denne blanding sattes ethylchloracetat (1,4 ml, 13 mmol), og blandingen opvarmedes ved 90°C i 8 timer under omrøring. Efter afkøling hældtes reaktionsblandingen i vand (50 ml) og ekstraheredes med toluen (5 x 40 ml). De organiske ekstrakter kombineredes, tørredes over vandfri natriumsulfat og inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen udkrystalliseredes fra benzen-n-hexan til dannelse af gule nåle af produkt 2 (1,16 g, 77%), smeltepunkt 114-115°C (litteratur 110°C).

14 145302 IR: τ> 1735, 1710 cm"1.

lUaX

UV: λ mSH 231 ** (f ' 26000)- cnri NMR: Sppm 3 7/58 (1H, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 6,98 (1H, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 4,80 (2H, s, -CH2CO), 4,27 (2H, q, J=7,5 Hz, CH2CH3), 1,29 (3H, t, J=7,5 Hz, CH2CH3).

Analyse beregnet for C9HgN403Cl: C: 42,12; H: 3,53; N: 21,83; Cl: 13,81.

r. μ c/i tr. η ->-> N: 21,51, Cl: 13,88, Fundet. C: 41,54, H. 3,22, o-ι co. itqq 41,46; 3,49; 1J,99.

2- carboxymethyl-2,3-dihydro-6-mercapto-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3- on (3)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-2-ethoxycarbonylmethyl-s-triazolot4,3-b]pyridazin-3-on (2, 30 g, 0,12 mol) i ethanol (900 ml) sattes NaSH,2H20 (70% ren, 45,9 g, 0,36 mol), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 0,5 time. Reaktionsblandingen inddampedes ved formindsket tryk. Remanensen opløstes i vand (200 ml), og koncentreret HC1 sattes til opløsningen til indstilling til pH-værdi 2. Bundfaldet (_3) opsamledes ved filtrering og udvaskedes med vand. Udbytte 18,3 g (69%).

IR: ^ KBr 2900, 2450, 1750, 1660 cm"1, max UV: λ maxaHC03aq. 260 nm (£, 19500), 313 nm (£, 7000).

NMR: £ DMS0”d6 7,88 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,45 (IH, ppm d, J=10 Hz, pyridazin-H), 4,72 (2H, s, CH3CO).

Analyse beregnet for C^H^N^C^S: C: 37,17; H: 2,67; N: 24,77; S: 14,17.

Fundet: C: 37,35, H: 2,26, N: 23,58, S: 14,32.

37,23; 2,28; 23,69; 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on- 6-ylthiomethy1)-3-cephem-4-carboxylsyre U)

Til en opslæmning af 7-aminocephalsoporansyre (8,79 g, 32,2 mmol) i' 0,1 M phosphatpuffer (pH-værdi 7, 149 ml) sattes NaHC03 (8,14 g, 97,0 mmol), og thiolen 3 (7,30 g, 32,2 mmol) under omrøring. Blandingen opvarmedes ved 80°C i 0,5 time under N2-strøm. Blandingen behandledes 15 145302 med aktivt carbon og indstilledes til pH-værdi 3 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering og udvaskedes. med vand til dannelse af 7,59 g (54%) af jl.

IR: ^ 1800, 1720, 1600, 1540, 1470 cm"1.

IUctX

UV: λ S=!fer (PH ?) 252 nm (g, 19500), 298 nm (g, 8400).

IuaX

NMR: £°2°+K2C03 7,56 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 7,05 (IH, d, J=9 Hz, pyridazin-H), 5,45 (IH, d, J=5 Hz, 6-H), 5,05 (IH, d, 5 Hz, 7-H), 4,43 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 4,04 (IH, d, J=14 Hz, 3-CH2), 3,88 (IH, d, J=18 Hz, 2-H), 3,45 (IH, d, J*»18 Hz, 2-H) .

Pivalovloxymethyl-7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-trlazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat

Fremgangsmåde A. - Titelforbindelsen fremstilles ved erstatning af den ved den umiddelbart ovenfor belyste fremgangsmåde anvendte 7-aminocephalosporansyre med en ækvimolær vægtmængde pivaloyloxymethyl-7-aminocephalosporanat,hydrochlorid fremstillet ifølge eksempel 2 i britisk patentskrift nr. 1.229.453 ud fra 7-aminocephalosporansyre.

Tysk patentskrift nr. 1.904.585 (Farmdoc 39.445) er ækvivalent med britisk patentskrift nr. 1.229.453.

Fremgangsmåde B. ~ Titelforbindelsen fremstilles ved erstatning af de i eksempel 2 af britisk patentskrift nr. 1.229.453 belyste fram*-gangsmåder anvendte 0,025 mol (6,8 g) 7-aminocephalosporansyré med en ækvimolær vægtmængde 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre- (4).

De respektive acetoxymethyl-, methoxymethyl-, acetonyl- og phenaeyl estre af 7-amino-3-(2-carboxymethyl~2,3-dihydro-s-triazolo[4,3~b]“ pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre fremstillet ved erstatning af det i fremgangsmåde B ovenfor anvendte chlormethylpivel·1-lat med en ækvimolær vægtmængde af henholdsvis chlormethylacetat, ''> chlormethyl-methylether, chloracetone og phenacylbromid.

i6 145302

Fremstilling af 7-aroino-3-(2-methyl-2,3-dihydro-s-tria2olo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl-3-cephem-4-carboxylsyre I -> I i

Cl-Ln NH ' Cl-U N N-CH,

N YY tSt Y J

0 / O

1 2 HS k. .N N—CH,

“ Y

3 O

V

Y1"™3 1 o CQ2H 4 6"-chlor-2,3-dihydro-2-methyl-s-triazolo [4,3-b] pyridazin-3-on (_2)

Til en opløsning af 6-chlor-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin- 3-on [P. Francavilla og F. Lauria, J. Het. Chem. 8, 415 (1971)] (1, 8,5 g, 50 mmol) i tør DMF (12 ml) sattes NaH (50% dispersion i paraffin, 2,64 g, 55 mmol), og blandingen omrørtes i 1 time ved stuetemperatur. Efter tilsætning af methyliodid (21,3 g, 150 mmol) omrørtes blandingen i' 40 timer ved stuetemperatur, fortyndedes med vand (200 ml) og ekstra-herpdes med CHClg ( 4 x 100 ml) . De kombinerede ekstrakter udvaskedes med vand (3 x 50 ml), behandledes med en lille mængde carbon og tørredes pver vandfri Na2SO^. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk tilvejebragte bleggul remanens, som udkrystalliserede fra chloro-form-n-hexan. Udbytte: 7,23 g (79%). Smeltepunkt 180-181°C.

ΤΌ λ) *i *7 on «i.- IR: v £_q 1720 cm UV: λ Et0H 233 nm ( , 25200), 363 nm ( , 1600). max NMR:S CDC13 3,72 (3H, s, N-CH,), 6,88 (IH, d, J=10Hz, pyridazin-ppm ^ H), 7,48 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H).

17 145302

Analyse beregnet for C6H5C1N40: C: 39,04; H: 2,73; N: 30,35; Cl; 19,21.

Fundet: C: 39,24, H: 2,54, N: 30,63, Cl: 19,59, 39,28; 2,61; 30,80; 19,26.

6- mercapto-2,3-dlhydro-2-methyl-s-trlazolo [4,3-b] pyridazin-3-on (_3)

En blanding af produkt 2 (6,50 g, 35,7 mmol) og NaSH,2H20 (70% ren, 9,4 g) i vand (100 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 15 minutter. Blandingen afkøledes og gjordes sur til pH-værdi 1 med kon- centeret HC1 til udfældning af thiolen 3r som opsamledes ved filtre ring og opløstes i vandig mættet NaHCO^ (100 ml). Opløsningen behandledes med en lille mængde carbon og gjordes sur med fortyndet HC1 til udfældning af forbindelsen 3^ som bleggule prismer. Udbytte 5,72 g (89%). Smeltepunkt >280°C.

IR: ^ max 2450 1710 (C-0) cm_1· UV: λ l%NaHC03 261 nm (£^ 16300), 315 nm (£, 5800). max NMR: S °2pp^°H 3,60 (3H, s, N-CHj), 7,08 (2H, s, pyridasin-H).

Analyse beregnet for CgHgN4OSi C: 39,55; H: 3,32; N: 30,75; S: 17,60...

Fundet: C: 39,57, H: 3,14, N: 30,32, Si 17,80, 39,66; 3,22; 30,61; 17,89.

7- amino-3-(2-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (_4)

En blanding af 7-aminocephalosporansyre (7-ACA, 5,44 g, 20 mmol), forbindelse 3 (3,64 g, 20 mmol) og NaHCO^ (3,36 g, 40 mmol) i 0,1 M

phosphatpuffer (pH-værdi 7, 100 ml) opvarmedes under omrøring ved 80°C i 30 minutter. Den varme blanding behandledes med en lille mængde carbon og filtratet gjordes surt til pH-værdi 4 med fortyndet HC1 til udfældning af produktet 4, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (50 ml) og tørredes. Udbytte: 5,73 g (73%). Smeltepunkt 240-245°C (dekomponering).

KBf ·* IRi v m»Z 1800 (3-lactam C=0), 1725 (C=0), 1610 og 1410 (COO ) cm UV: A 1%^?C°3 253 nm (e, 20000), 305 (C, 8400).

max 145302 18 NMR: SD20+NaHC03 3,69 (3H, s, N-CH ), 5,08 (IH, d, J=4,5 Hz, ppm «3 6-H), 5,48 (IH, d, J=4,5 Hz,. 7-H), 7,00 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,52 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for H14N6°4S2'H20: C: 40,76? H: 3,91? N: 20,39? S: 15,55.

Fundet: C: 40,84, H: 3,44, N: 20,50, S: 15,19, 40,63? 3,31? 20,36? 15,57.

Fremstilling af BB-S515 (Sammenligningsforbindelse) firVT=r!i ϊ ci|2s "h CO^EJa . 0 BB-S515 BB-S515? 7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)-eddikesyre (169 mg, 1 mmol) og triethylamin (0,14 ml, 1 mmol) i dichlormethan (2 ml) sattes oxalylchlorid (0,09 ml, 1 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrørtes i 30 minutter. Opløsningsmidlet afdampedes under formindsket tryk til tilvejebringelse af en olieagtig remanens. En opløsning af den olieagtige remanens i tør acetone (5 ml) sattes efter filtrering til en blanding af 7-amino-3-(2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (380 mg, 1 mmol) (se USA patentskrift nr. 3.907.786) og natriumhydrogencarbonat (336 mg, 4 mmol) i vand (10 ml) ved 0-5°C. Reaktionsblandingen omrørtes ved 0-5°C i 2 timer. Det meste af acetonen afdampedes ved formindsket tryk, hvorefter det vandige koncentrat udvaskedes med ether (2 x 30 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1. Det resulterende bundfald (338 mg) opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum.

En opslæmning af den frie syre (303 mg) i vand (10 ml) indstilledes til pH-værdi 6,5 med vandig NaOH (IN, 0,6 ml) og filtreredes til dannelse af en klar opløsning, som lyofiliseredes til dannelse af 7- [ (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natrium- 19 U5302 salt som et lysebrunt pulver (222 mg, 46%), smeltepunkt > 230°C (dekomponer ing).

IR: ^ KBr 3410, 1760, 1720, 1600 cm-1, max UV: A pH7 Puffer 256 nm (£, 20600), 274 (6, 18800).

IuaX

Fremstilling af D-mandelsyre-carboxyanhydrld.

con

CgH5-CH-COOH 2 ^ C6H5n-|=0

1 2 O

D-mandelsyre-carboxyanhydrid (2)

Phosgen bobledes gennem en opløsning af 2,0 g (0,013 mol) D(-)-mandelsyre (1) i tør tetrahydrofuran i 30 minutter. Opløsningen henstilledes natten over, hvorefter den opvarmedes under tilbagesvaling i 10 minutter. Afdampning af opløsningsmidlet under formindket tryk tilvejebragte en olieagtig remanens, som størknedes ved triturering med n-hexan (20 ml). Produktet opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum over KOH. Udbytte 2,3 g D-mandelsyre-carboxyanhydrid.

IR:^max01 1895' l875' 1780 cm_1·

De foretrukne og mest aktive af de omhandlede forbindelser er de forbindelser, som har D-konfiguration ved α-carbonatomet i 7-sidekæden, d.v.s. de forbindelser, som er fremstillet ud fra D-mandelsyre eller en monosubstitueret D-mandelsyre, som belyst her. Tillige er konfigurationen i de to optisk aktive, asymmetriske positioner i 0-lactam- , kernen den konfiguration, som findes i ved fermentering fremstillet cephalosporin C og i den derfra afledte 7-aminocephalosporansyre.

I de følgende eksempler belyses omdannelsen af de omhandlede mellemprodukter til værdifulde slutprodukter.

145302 20

Eksempel 1 • / s ^

C6Vf-C\ VTfS

l_c/ + ^N^i-CH2-sAt)^y-H-CH2C02H

COgH 0 1 .2 _v CiHj.-CH-COKH— f^

I /r_ll ^-CH _G — \ .N-CH COpH

OH ^NVj^ClI2° Y 2 2 co2h 0 3, BB-S488 BB-S488; 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo- [4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (3_) D-(-)-mandelsyre-O-carboxyanhydrid (se USA patentskrifterne nr. 3.167,549, 3.840.531 og 3.910.900), (1, 400 mg, 2,3 mmol) sattes portionsvis til en opløsning af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxyl-syre (2, 657 mg, 1,5 mmol) og natriumhydrogencarbonat (445 mg, 5,3 mmol) i 50% vandig acetone (30 ml) ved ca. 0°C under kraftig omrøring. Blandigen omrørtes i 1 time ved stuetemperatur og inddampedes under formindsket tryk under 40°C til fjernelse af acetone. Den resulterende vandige opløsning udvaskedes med ether og gjordes sur til pH-værdi 1 med fortyndet HC1 til tilvejebringelse af et gummiagtigt bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og opløstes i tetrahydro-furan (THF) (100 ml). TIIF-opløsningen behandledes med en lille mængde aktiv carbon, tørredes over vandfri natriumsulfat og filtreredes. Filtratet inddampedes under formindsket tryk, og remanensen tritureredes med ether. Det bleggule bundfald opsamledes ved filtrering, og kromato-graferedes på en silicagel-søjle ("Wako-gel 0200", 10 g), idet der elueredes med en opløsning af chloroform-methanol (20:1). Fraktionerne, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes og koncentreredes under formindsket tryk. Koncentratet fortyndedes med ether (100 ml) til udfældning af produktet (2), som opsamledes ved filtrering, udva- .

21 145302 skedes med ether (30 ml) og tørredes. Udbytte: 279 mg (34%), smeltepunkt 173-176°C (dekomponering).

IR: Ό KBr 3600-2400, 1770, 1720, 1520, 1495, 1365, 1245 cm"1, max UV: Λ Et°H 254 nm (£, 18000), 297 nm (6, 9000, skulder).

^ max NMR: I DMS0_d6 3,68 (2H, m, 2-H) , 4,03 (IH, d, J=13 Hz, 3-H), ppm 4,34 (IH, d, J=13 Hz, 3-H), 4,64 (2H, s, NCH2C0), 5,00 (IH, d, J"4 Hz, 6-H), 5,02 (IH, s, PhCH), 5,63 (IH, d-d, J=4 & 9 Hz, en dublet med tilsætning af D20, J=4 Hz, 7-H), 6,97 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,1-7,4 (5H, m, phenyl-H), 7,60 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 8,60 (IH, d, J=9 Hz, forsvandt ved tilsætning af D20, CONH).

Analyse beregnet for C23H20N6^8^2'^^2^1 C: 47,50? H:· 3,64? N: 14,45? S: 11,03. Fundet: C: 47,34? H: 3,48? N: 13,90? S: 11,01.

In vitro-aktivitet (Tabel I) MIC-værdierne bestemtes ved Steers' agar-fortyndingsmetode ved anvendelse af Mueller-Hinton agar mod 4 gram-positive og 28 gram-negative bakterier, og resultaterne er vist i tabel I.

In vitro-aktivitet (Tabel II og III) MIC-bestemmelser udførtes ved rækkevis dobbeltagar-fortyndingsmetode under anvendelse af Steers apparat på Mueller-Hinton agarplade mod 51 gram-positive og 95 gram-negative bakterier. Resultaterne er vist i tabel II og III).

Mediers virkning på MIC

MIC-værdierne bestemtes under anvendelse af tre slags agarmedier [næringssubstrat-agar (NA), Mueller-Hinton agar (MHA) og hjerneinfu-sions-agar (HIA)]. Resultaterne opnået med BB-S488 og cefamandol er vist i tabel IV, som viser ringe virkning fra medier for disse cephalo-sporiners vedkommende.

Blodniveauer i mus

Til grupper af mus administreredes subkutant gradierede doser på 40, 20 og 10 mg/kg. Blodprøver opsamlet fra orbitale sinusser testedes ved papirplade-agar-diffusionsmetoden på Sarclna lutea PCI

22 145302 1001-plader. Resultaterne er vist i tabel V.

In vivo-aktivitet

Komparativ in vivo evaluering udførtes ved standard undersøgelsesinfektionen i mus mod de følgende pathogene bakterier: S. aureus Smith E. coli Juhl K. pneumoniae A 9977 Resultaterne er vist i tabel VI.

23 145302

Tabel I. In vitro-antibakterlel aktivitet af BB-S488 ved agarfortyndingsmetode (Mueller-Hinton agar) MIC ( /Ug/ml)_

Testorganisme BB-S488 Cefamandol S. aureus Smith A9537 0,2 0,05 S. aureus A949 7 0,1 0,05 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,1

St. faecalis A9536 100 50 E. coli NIHJ 0,025 0,025 E. coli ATCC 8739 0,1 0,05 E. coli Juhl A15119 0,2 0,4 E. coli BX-1373 0,2 0,8 E. coli A15810 0,1 0,4 E. coli A9660 0,05 0,1 Ξ. coli A15147 3,1 0,4

Kl. pneumoniae A9678 3,1 3,1

Kl. pneumoniae A9977 0,05 0,2

Kl. pneumoniae A15130 0,2 0,8

Kl. pneumoniae A9867 0,2 0,8

Pr. vulgaris A9436 0,1 0,4

Pr. vulgaris A9699 0.2 6,3

Pr. mirabilis A9554 0,05 0,4

Pr. mirabilis A9900 0,1 0,8

Pr. morganii A9553 >100 >100

Pr. morganii A20031 0,1 0,8

Pr. rettgeri A15167 0,05 0,2

Ps. aeruginosa A9930 >100 >100

Ps. aeruginosa A9843 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,025 0,1

Shig. flexneri A9684 12,5 6,3

Shig. sonnei A9516 0,025 0,05

Serr. marcescens A20019 100 100

Enterob. cloacae A9656 .3,1 3,1

Sal. enteritidis A9531 0,05 0,1

Sal. typhosa A9498 0,05 0,1 B. anthracis A9504 0,1 0,1 24 145302

Tabel XI. In vitro-antibakteriel aktivitet i Mueller-Hinton agar (gram-positive) MIC (yug/ml)_

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Sa-2 S. aureus Smith A9537 0,4 0,2

Sa-3 S. aureus nr. 193 0,8 0,2

Sa-8 S. aureus 0,4 0,2

Sa-9 S. aureus nr. 193 0,8 0,2

Sa-10 S. aureus A20239 1,6 0,4

Sa-11 S. aureus BX-1633 A9606 0,4 0,2

Sa-12 S. aureus A9497 0,2 0,1

Sa-29 S. aureus nr. 193 1,6 0,8

Sa-33 S. aureus Terajima 0,0125 0,0125

Sa-34 S. aureus A15092 0,8 0,2

Sa-35 S. aureus A15094 0,8 0,4

Sa-36 S. aureus Russell 0,8 0,4

Sa-37 S. aureus A9524 1,6 0,8

Sa-38 S. aureus A9534 0,4 0,2

Sa-39 S. aureus A9578 0,8 0,4

Sa-40 S. aureus A9601 0,8 0,4

Sa-41 S. aureus A9602 0,8 0,2

Sa-44 S. aureus A15097 25 25

Sa-56 S. aureus A9630 3,1 0,8

Sa-57 S. aureus A9748 25 3,1

Sa-58 S. aureus A15033 12,5 1,6

Sa-59 S. aureus A15096 100 6,3

Sa-60 S. aureus A20604 50 3,1

Sa-61 S. aureus A20605 100 6,3

Sa-62 S. aureus A20606 3,1 0,8

Sa-63 S. aureus A20607 2100 12,5

Sa-64 S. aureus A20608 100 6,3

Sa-65 S. aureus A20609 100 6,3

Sa-66 S. aureus A20610 100 6,3

Sa-67 S. aureus A20611 100 6,3

Sa-68 S. aureus A20612 1,6 0,4

Sa-69 S. aureus A20613 100 6,3

Sp-1 S. pyogenes S-23 0,4 0,1

Sp-2 S. pyogenes Dick 0,4 0,1

Sp-3 S. pyogenes A9604 0,4 0,1

Sp-4 S. pyogenes A20065 0,2 0,1

Sp-5 S. pyogenes A15040 0,4 0,1

Sp-6 S. pyogenes A20066 0,4 0,1

Sp-7 S. pyogenes Dig 7 0,4 0,1

Sp-8 S. pyogenes A15041 0,4 0,1

Sp-9 S. pyogenes A20201 0,4 0,1

Sp-10 S. pyogenes A20202 0,4 0,1

Dp-1 D. pneumoniae Type II 0,2 0,2

Dp-2 D. pneumoniae Type I Neufeld 0,2 0,2

Dp-3 D. pneumoniae Type III 0,2 0,2

Dp-4 D. pneumoniae A9585 0,2 0,2

Dp-5 D. pneumoniae A15069 0,2 0,2

Dp-6 D. pneumoniae A20167 0,2 0,2

Dp-7 D. pneumoniae A20759 0,2 0,2

Dp-8 D. pneumoniae A20769 0,2 0,2

Dp-9 D. pneumoniae A20770 0,2 0,2 25 145302

Tabel III. In vitro-antibakteriel aktivitet i Mueller-Hlnton agar (gram-negative) MIC ( yucr/ml)

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Ec-1 E. coli NIHJ 0,2 0,1

Ec-3 E. coli Juhl A15119 0,2 0,8

Ec-4 E. coli A15169 12,5 6,3

Ec-5 E. coli K-12, ML-1630 A20363 0,2 0,8

Ec-11 E. coli A20366 50 25

Ec-15 E. coli ATCC 8739 0,2 0,1

Ec-34 E. coli A9660 0,1 0,1

Ec-35 E. coli A9435 0,4 0,8

Ec-36 Ξ. coli A15147 3,1 1,6

Ec-40 E. coli A20361 0,2 0,8

Ec-44 E. coli A9535 0,1 0,1

Ec-45 E. coli A15148 3,1 1,6

Ec-46 E. coli A15164 25 12,5

Ec-47 E. coli A15170 100 50

Ec-49 E. coli A20107 0,4 0,2

Ec-50 E. coli A2Q109 0,2 0,8

Ec-51 E. coli A20343 50 12,5

Ec-56 E. coli A20365 25 12,5

Ec-58 E. coli A9675 0,4 1,6

Ec-59 E. coli A20766 0,2 0,8

Ec-62 E. coli A20895 0,4 0,8

El-1 E. cloacae A9656 3,1 3,1

El-2 E. cloacae A20364 3,1 3,1

El-4 E. cloacae A20650 1,6 1,6

El-6 E. cloacae A9657 0,8 0,8

El-7 E. cloacae A9659 1,6 0,8

El-8 E. cloacae A9655 1,6 1,6

El-9 E. cloacae A20021 >100 100

El-11 E. cloacae A20344 >100 >100

El-12 E. cloacae A21006 1,6 3,1

El-14 E. cloacae A20953 0,8 3,1

Pm-1 P. mirabilis A9554 0,1 0,8

Pm-2 P. mirabilis A9900 0,2 1,6

Pm-3 P. mirabilis A20119 0,4 3,1

Pm-4 P. mirabilis A20454 0,2 1,6

Pm-5 P. mirabilis A9702 0,1 0,8

Pm-6 P. mirabilis A21222 1,6 1,6

Pg-1 P. morganii A95S3 >100 ’ >100

Pg-2 P. morganii A20031 0,2 1,6 '

Pg-3 P. morganii A9636 0,8 1,6

Pg-5 P. morganii Al5166 0,1 0,2

Pg-6 P. morganii A2Q455 . 0,4 1,6

Pg-7 P. morganii A20457 0,2 0,8

Pg-8 P. morganii A15153 0,1 0,8

Pg-9 P. morganii A15149 0,8 3,1

Pv-1 P. vulgaris A9436 0,2 0,8

Pv-2 P. vulgaris A9526 6,3 1,6

Pv-3 P. vulgaris A9699 6,3 50

Pv-4 P. vulgaris ATCC 9920 0,1 0,2

Pv-5 P. vulgaris A9539 25 >100

Pv-6 P. vulgaris A9716 0,1 0,8

Pv-7 P. vulgaris A21240 25 >100 26 145302

Tabel III(fortsat) MIC ( /Uq/ml)_

Kode nr. Testorganisme BB-S488 ' Cefamandol

Pr-1 P. rettgeri A15167 0,1 0,2

Pr-2 'E. rettgeri A9637 0,1 0,1

Pr-4 P. rettgeri A2Q645 0,1 0,1

Pr-5 P. rettgeri A20915 0,2 0,8

Pr-6 P. rettgeri A20920 0,1 0,2

Pn-1 P, inconstans A20615 0,1 0,8

Ps-1 P. stuartii A20745 0,4 0,8

Ps-2 P, stuartii A20894 0,2 0,8

Ps-3 P. stuartii A2Q911 0,8 0,8

Ps-4 P. stuartii A21051 50 25

Ps-5 P. stuartii A21057 0,2 0,8

Kp-1 K. pneumoniae Dll 0,1 0,8

Kp-2 K. pneumoniae A9678 3,1 1,6

Kp-3 K. pneumoniae A9977 0,1 0,8

Kp-4 K. pneumoniae A15130 0,2 0,8

Kp-7 K, pneumoniae A9867 0,4 0,8

Kp-8 K. pneumoniae A20680 25 12,5

Kp-9 K. pneumoniae A20636 12,5 12,5

Kp-10 K. pneumoniae A20328 6,3 3,1

Kp-11 K. pneumoniae A20330 1,6 12,5

Kp-12 K. pneumoniae A21228 6,3 6,3

Kx-2 Klebsiella sp. A9662 0,4 1,6

Kx-3 Klebsiella sp. A20346 0,2 0,8

Sm-1 S. marcescens A20019 25 25

Sm-2 S, marcescens A20335 3,1 12,5

Sm-3 S. marcescens A20336 6,3 12,5

Sm-4 S. marcescens A20442 6,3 12,5

Sm-5 S. marcescens A20222 3,1 12,5

Sm-6 S. marcescens A20460 6,3 12,5

Sm-9 S, marcescens A20333 6,3 50

Sm-10 S. marcescens A20334 6,3 50

Sm-11 S. marcescens A20459 6,3 25

Sm-12 S. marcescens A20461 6,3 50

Se-1 S, enteritidis A9531 0,1 0,2

St-1 S. typhosa 0,1 0,2

Sh-1 S. paratyphi 0,1 0,2

St-101 S. typhimurium 0,1 0,2

Sd-1 S. dysenteriae 0,1 0,2

Sr-1 S. flexneri A9684 12,5 3,1

Ss-1 S, sonnei Yale 0,1 0,1

Cx-1 Citrobacter sp. A20673 1,6 1,6

Cx-2 Citrobacter sp. A20694 1,6 1,6

Cx-3 . Citrobacter sp. A20695 1,6 1,6 27 145302 in < oh η η in η co οο η η οο co cd ο cm co cm η μ*

Hk«, k k V Κ S k k k k k k k k k k k k k k g oomooooomcMinmoooQoooooooHoHomoooo ο in η cm ιη ο in ο ooo

r“J H H HHH

Λ A Λ

i—l 0 'O

G <! CM Μ* H Η H .—I H in H 00 00 Η H COHrlrOrfn CM

0 [—4 ^ ^ k k k k k k k k k k k k < ^. ·« ·. ·· ·« k ga oomoooinomcMinmooooooooooomocoocooooo ret o cm i—i cm oo o o m m o

IJ-l i—l H H rH H rH

<D A A A.

U

cm m i—i cm hid in m m oo m* cm m cm rr m· co cm m m m· S S S k k k k k k k k k k k k k k k k k k k k k

p 3 OOcDOOOOOHinCMCOCOOOOOOCPOOOQHOCOOlOOOOO

a) omesHo o m m o

CO Η Η Η H

f—f A a. A A

(U

Ό

G

Ή XI in in

M rtjooco O CM CM m HH CM Hi* CM H CD H CM H «tf Ο Ο CM L0 CD CM

Q XJ k k k k k k k s k k ^ k k k k k k k k k k k m g oooooooocooommooopooooooooiMocMoooo

(U OOOOOO Ο , Η Η Ο O

U HHHHHH H rH i—I

g A A A A A A A

<D CD P CD

Φ ** in η p <| oo co om· cm m mm cm oo cm cm hcm cm co h m* cm QJ (I-j k k k k «.kb k k k k k k K k k k k kk k.

p mffi oHoooooocoopcocooppoooooooooooinoooo

P PO O PO O O O intMPOO

P HHHHHH HH HHH

q a A A A A A A A A A

CD

CO CO H HCM H m μΊ Ο >f CO CM CM 00 Η H CM M< -cr CO M*

Tj* k k k k k k k k k k k k k k k k k k k k

p S PCDOOPOPPPPOCMCMOOOOOOOOOOPOOOOOOOO

i oo o in in η η ο o inmooo

ft HHH Η H i—I Η H

PQ A A A A A A

H

<3 x O co

HO IK

g t" co co X

mo ο μ· p co •ret in< p p m m IK X h m o D. ο H IK IK [a η o X h oik HPr'inM'HommM' < m co h p M'M'PtniMvopinomminioM'PHoopo p ccm*i m m· ιοΐί'ίΡΗ<ηριηρΐίΐθ'ΐ|ΗΜΐοΡ(Μ(ΜθΗη G 0 χιοριη hik r-K IKK in m m >< <| M<iopoinooinooorf;i<<p •Η Cfl -PHOP rtJCOCDtA-^mcDOO «PPrtltflPCMCMHCMlMlM rtj G η h i m < co M'coM'pcMCMCuaiftrtJfl; rt|<j;ri!ri!<i<<!cnracd X OJggH bHcouHHn<<< u e ji wen c G w ω

P Ti PPrtjMffijCOUPmO HH (0 COHHHHHHHHH Q) 0) OH

H C HHtdCMEnHHCMCDQtCDGGidHHHHHHHMHHHOOGy > h tnmcnH3prtJrt!rt!isi!rt!(dnJn}OOHpMHHCCCO)4J-iJ-PtDWHce

X) tt 3 3 u oyoeeHntnJxjxjmidiocnPPMaicDtnM

CO P (Ua)a)OHHHHHHHid<d<d3i3<l)pPldidPPP4->idfdrdOU3.G

P O PPSHØHHHHHHHOOOyyHHHMMPMM+JppPMt-IP-P

0) <W GGGldOOOOOOOHHHGGMGGHHOQOCD-P-P-PididCDG +

η η ididnjHooDuoocjuuyft ΛΧΙ i>>gggggMtntomggcdnJ

τ3 cn Φ ai <D a)............. in g Eh ft ft ft ft M W W H W M W W W W « « « ft ft A ft A ft ft ft ft ft A ft ft A ft (3 fe M .

G id

rH i—I *3* i~H LO rH r—i rH

Ο) Ο) (NrlfnHnHrirO^LnrKNrHn^fOHfOHNHNlDnliHMrOrHnnfO I

Λ Tt i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i i ei cd O cdcdidHOUCJOt)OOHHH0j&,><!>>eSt3'B’0nMincnwgEG<d

Eh W P P p P w w μ η η μ Μ Μ M W W a a ft ft ft ft ft ft ft ft ft ft ft p p ft p IK

28 U5302

Tabely. Blodniveauer (^uq/ml) i subkutant behandlede mus

Dosis Tid BB-S488 Cefamandol 40 mg/kg 15 min. 19 18 30 min. 17 11 60 min. 12 3,9 120 min. 1,6 0,3 20 mg/kg 15 min. 7,4 9,5 30 min. 6 4,1 60 min. 4,3 1 120 min, 0,7 0,1 10 mg/kg 15 min. 5 3,8 30 min. 3 1,5 60 min. 0,8 0,3 120 min. ' — 0,1 29 145302

Tabel VI. In vivo-aktivitet

Testorganisme Dosis BB-S488 Cefamandol S. aureus Smith 25 mg/kg 5/51 5/5 6.3 5/5 5/5 1 1.6 5/5 5/5 0,4 5/5 1/5 0,1 2/5 PDj-q 0,12 mg/kg 0,6 mg/kg E. coli Juhl 25 mg/kg 5/5 5/5 6.3 5/5 5/5 1.6 5/5 2/5 0,4 5/5 0/5 0,1 2/5 PD50 0,12 mg/kg 1,8 mg/kg K. pneumoniae 25 mg/kg 5/5 5/5 A9977 6,3 5/5 1/5 1.6 5/5 0/5 0,4 4/5 0/5 0,1 0/5 PDc-g 0,26 mg/kg 6,25 mg/kg

Antal overlevende / Antal testede 30 145302

Yderligere PD5Q-data (enkelt sc.-behandling)

Forsøg Antal Dosis BB-S Cefam-

Testorganisme nr. LD50 (mg/kg) 488 andol K. pneumoniae C-805 3x10^ 25 5/5 5/5 A9977 (Kp-3) 6,3 5/5 1/5 1.6 5/5 0/5 0,4 4/5 0/5 0,1 0/5 PD5q (mg/kg) 0,26 9,4 P. vulgaris C-808 1x10 50 --- 3/5 A9436 (Pv-1 25 5/5 12.5 1/5 6.3 5/5 3.1 0/5 1.6 3/5 0,8 0/5 0,4 1/5 PD50 (mg/kg) 1,1 36 P. mirabilis C-810 1x10^ 50 --- 2/5 A9900 (Pm-2) 25 5/5 12.5 1/5 6.3 5/5 3.1 0/5 1.6 4/5 0,8 0/5 0,4 0/5 0,2 0/5 0,1 0/5 PD50 (mg/kg) 1,1 50 a 146302

Forsøg Antal Dosis BB-S Cefam-Testorganisme nr. LD50 (mg/kg) 488 andol E. cloacae C-811 1 x 10 100 5/5 5/5 · -A20464 (El-19) 25 .g/5 5/5 6,3 5/5 5/5 1,6 4/5 4/5 - 0,4 2/5 1/5 PD5q (mg/kg) 0,54 0,8 II ....... , —

Urinær genudvindlng i rotter % genudvinding (0-24 timer)

Dosis (sc.) BB-S488 Cefamandol 10 mg/kg 38,8 58,3

Neprotoxicitetstest i kaniner

Intet neprotoxisk tegn observeredes i kaninerne, som var behandlet med 100 mg/kg (iv) BB-S488, mens cephaloridin viste alvorlig nepro-toxicitet i den komparative test.

Stabilitet af BB-S488

Stabilitet af BB-S488 bestemtes i både en 10% og en 0,2% opløsning. Stabiliteten er angivet som den i testopløsningen tilbageblevne relative aktivitet ved givne tidspunkter i forhold til den oprindelige opløsning. Aktiviteten efterprøvedes ved anvendelse af papirplader på B. subtilis PCI 219-plade (pH-værdi 6).

(1) Stabilitet i en 10% vandig opløsning ved stuetemperatur ,,» Tilbageblivende aktivitet (%)

Forbindelse pH-vardi * Q 2 3 7 dage BB-S488 6,1 100 128 90 116 (1) Uindstillet pH-værdi for 10% opløsningen.

(2) Tilbageblivende aktivitet (%)

Forbindelse pH-vardi ' 0 1 2 3 7 dage Γ4 100 93 78 102 BB-S488 < 7 100 87 64 56 [ 9 100 20 14 13 0 32 145302 ^ pH-værdi 4: 0,1 M AcOH - NaOAc-puffer.

pH-værdi 7: 0,1 M phosphat-puffer.

pH-værdi 9: 0,1 M NH4OH-NH4Cl-puffer.

Eksempel 2 ^""^-CHCQOH ClgCHCQCl ^ <^~~^_CHC00H S0C12 ^ 1 OH 0C0CHClo

— ^ SJ

D-(-) N,

CHCOC1 H-å£å~S~CMTF(l)^ CHCO-ACA-S-CMTP

OCOCHClg L 0C0CHC12 CO^

CHCO-ACA-S-CMTP

OH

i BB-S488

Dichloracetylmandeloylchlorid (2)

En blanding af D(-)-mandelsyre (1, 1,52 g, 10 mmol) og dichloracetylchlorid (4,41 g, 30 mmol) opvarmedes ved 80-85°C i 1,5 time, og det overskydende dichloracetylchlorid fjernedes under formindsket tryk. Til remanensen sattes thionylchlorid (2,5 ml), og blandingen opvarmedes under tilbagesvaling i 1,5 time. Overskydende thionylchlorid fjernedes ved destillation, og tør benzen tilsattes. Inddampning gentoges. Den resterende olie henstilledes over KOH ved 1 mm Hg natten over ved stuetemperatur til fjernelse af dichloracetylchlorid. Udbytte: 2,8 g (100%). Dette produkt anvendtes i det næste trin uden yderligere rensning.

33 145302 IR: ^ max" 1780/ 1160 Γ*ΡΤ NMR: S ppn|4 591 UH, S, PhCH eller COCHCl2), 6,00 (IH, s, PhCH eller COCHCl.,), 7,32 (5H, s, phenyl-H).

BB-S488; 7-(D-mandelamido)-3-(2-carbQxymethyl-2,l-dlhydro-s-triazolo- [4,3-b] pyridazin-3-on-6-’-ylthiomethyl) ~3~cephem-4-carboxylsvre (j4)

En opløsning af dichloracetylmandeloylchlorid opnået som ovenfor (2, 2,8 g, 10 mmol) i tør acetone (30 ml) sattes dråbevis til en omrørt opløsning af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6“-ylthiomethyl)-3-cephem-'4-’carboxylsyre (H-ACA-S-CMTP) (3, 3,94 g, 9 mmol) og triethylamin (3,54 g, 35 mmol) i 50% vandig acetone (120 ml) ved 0 - 5°C. Blandingen henstilledes til opnåelse af stuetemperatur i løbet af 1 time under omrøring og indstilledes til pH-værdi 11 med 5% vandig natriumcarbonat (ca. 12 ml krævedes). Blandingen henstilledes ved stuetemperatur i 30 minutter, gjordes sur til pH-værdi 1 med fortyndet HC1 og inddampedes under formindsket tryk til fjernelse af acetone under 40°C, Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (20 ml) og lufttørredes. Det tørrede materiale opløstes i THP (150 ml), omrørtes i 5 minutter ved 40^-50^ og filtreredes til fjernelse af uopløselig uomsat forbindelse 3 (0-,54 g, 14% genudvinding). Filtratet kromatograferedes på en silicagei-søjle ("Wako-gel, C-200", 30 g), idet der elueredes med chloroform-methanol (100:5). Eluaterne opsamledes i 50 ml fraktioner under overvågning ved TLC (silicagel, opløsningsmiddel CH^CN-vand = 4:1, påvist med I2). Fraktionerne, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes, behand“-ledes med en lille mængde carbon og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med chloroform (50 ml) til opnåelse af 2,36 g (46%) 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxyméthyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (_4) , smeltepunkt 165-170°C (dekomponering).

IR: ^ 3600-2500, 1780, 1720, 1500, 1410, 1355, 1220, 1195 cm"1

ulciX

UV: λ 254 nm (£ , 18300), 297 nm (skulder, £ , 9300).

ΙΪΙαΧ NMR: ip^°”d6 3,84 (2H, m, 2-H) , 4,17 (2H, d, 13 Hz, 3-H), 4,50 (IH, d, 13 Hz, 3-H), 4,82 (2H, s, NCH^COO), 5,20 (IH, d, 4,5 Hz, 6«H) , 5,25 (IH, s, PhCH), 5,87 (IH, d-d, 4,5 & 9 Hz, 7-H, en dublet (J=4,5 Hz) ved tilsætning af P20), 7,25 (IH, d, 11 Hz, pyridazin-H), 7,4-7,7 (5H, 34 145302 m, phenyl-H), 7,90 (IH, d, 11 Hz, pyridazin-H), 9,0 (IH, d, 9 Hz, 7-CONH, forsvandt ved tilsætning af .

Analyse beregnet for C23H20N6^8S2'3/4CHC1.j: C: 43,08; H: 3,16; N: 12,69; S: 9,69.

Fundet: C: 43,11, H: 2,97, N: 12,80, S: 9,64.

43,22; 3,06; 12,77;

Eksempel 3 / \-CHCOOH 99% HCOOH ^ / \-CHCOOH S0C12 ^

V—J OH V-y OCHO

1 5

L V-CHCOCl H-ACA-S-CMTP (3) / \-CHCO-ACA-S-CMTP

V—y OCHO V-J OCHO

6 7 BB-S494 O-formyl-D(-)-mandelsyre (5)

En blanding af D(-)-mandelsyre (1, 5,0 g, 33 mmol) og 99% myresyre (80 ml) opvarmedes ved 80-90°C i 12 timer. Blandingen inddampedes, og toluen (100 ml) sattes til remanensen, hvorpå der inddampedes under formindsket tryk til fjernelse af myresyre azeotropisk. Remanensen opløstes i benzen (200 ml), og opløsningen udvaskedes med vand (2 x 50 ml). Det organiske lag fraskiltes, tørredes med vandfri natrium-sulfat og inddampedes under formindsket tryk. Den resterende olie tritureredes med cyclohexan (50 ml) til udkrystallisering. Udbytte: 3,70 g (63%) O-formyl-D(-)-mandelsyre (_5) som farveløse prismer, smeltepunkt 56-59°C (litteratur smeltepunkt 55-58°C).

IR; 3400-2800, 1755, 1720, 1160, 990 czif1.

ItlaX

NWR; 5^3 5,98 (IH, s, PhCH) , 7,31 (5H, m, phenyl-H), 8,05 (IH, s, OCHO), 10,05 (IH, s, COOH, forsvandt ved tilsætning af D2O).

Q-formyl-D(-)-mandeloylchlorid (6j

En blanding af forbindelse 5, (2,0 g, 11 mmol) og thionylchlorid (10 ml) opvarmedes under tilbagesvaling i 2 timer. Afdampning af det 35 145302 overskydende thionylchlorid og destillation af remanensen under formindsket tryk tilvejebragte syrechloridet O-formyl-D(r)-mandeloylchlorid (j>) . Udbytte: 1,53 g (70%), kogepunkt 120-122°C / 15 mm Hg.

IR: Ό llq' 1805, 1740, 1160, 1140 cm"1, max BB-S494; 7- (D-O-formylmandelamido)-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydrQ-s- triazolo [4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre. (_7 En opløsning af O-formyl-D(-)-mandeloylchlorid (j5) (1,0 g,' 5,1 ^ mmol) i tør acetone (10 ml) sattes dråbevis til en kold (0 - 5°C) opløsning af 7-amino-3- (2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,.3-bl-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre Π, 1,75 g, 4 mmol) i 50% vandig acetone (70 ml) indeholdende natriumhydrogen-carbonat (1,34 g, 16 mmol). Blandingen omrørtes i 30 minutter ved stuetemperatur og udvaskedes med ether. Det vandige lag gjordes surt til pH-værdi 1 med fortyndet HC1. Den fraskilte olieagtige gummi opsamledes og opløstes i THF (100 ml). Opløsningen behandledes med en lille mængde carbon og tørredes over vandfri natriumsulfat. Afdampning af opløsningsmidlet under formindsket tryk til 10 ml og fortynding med ether tilvejebragte titelforbindelsen (^) som et bleggult amorft: pulver, 0,91 g (38%), smeltepunkt 172-176°C (dekomponering).

IR: V K®r 3600-2400, 1775, 1720, 1550, 1355, 1230, 1160 cm"1. ·

HlciX

UV: λ Et0H 254 run (£ , 20800), 297 nm (skulder, £, 10500).

max NMR:£p^°"d6 3,4-4,5 (4H, m, 2-H og 3-H) , 4,67 (2H, s, NCHjCOO) , 4,97 (IH, d, 4 Hz, 6-H), 5,66 (IH, d-d, 4 & 8 Hz, 7-H), 7,2-7,5 (5H, m, phenyl-H), 7,64 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 8,29 (IH, s, CHO), -9,29 (IH, d, 8 Hz, 7-CONH, forsvandt ved tilsætning af D20).

Analyse beregnet for C24H20NgOgS2,lH2O: C: 46,60; II: 3,58; N: 13,59; S: 10,37.

Fundet: C: 46,70, H: 3,25, N: 13,37, S: 10,84.

47,20; 3,34; 13,78;

Eksempel 4 BB-S488: 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo- [4,3-b] pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl) -3-cephem-4-carboxylsyre (4.)

En blanding af 7-(D-O-formylmandelamido-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazln-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4- 36 145302 carboxylsyre (7), opnået ifølge eksqnpel 3, (484 mg, 0,81 irmol) og natriumhydrogen-carbonat (748 mg, 8,9 nmol) i vand (4 ml) anrørtes i 4 timer ved stuetemperatur og gjordes sur til pH-værdi 1 med fortyndet HCl. Bundfaldet (500 mg) opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand (2 ml) og kromatograferedes på silicagelsøjle ("Wako-gel, 0 200", 5 g). Søjlen elueredes med chloroform indeholdende voksende mængder methanol (3-5%) som elueringsmiddel, og fraktionerne, som indeholde produktet, kombineredes, blandedes med en lille mængde carbon og inddampedes under formindsket tryk. Remanensen tritureredes med ether til dannelse af 277 mg 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (BB-S488; 4.). NMR-estimering af dette produkt viste, at 10% af forbindelse J. stadig var til stede.

IR: V KBr 3600-2400, 1770, 1720, 1520, 1495, 1365, 1230 cm-1.

HieX

UV: Λ nm (£ , 20000), 297 nm (skulder, £ , 9600).

IIluX

Eksempel 5

Natriumsalt af BB-S488

Natrium-2-ethylhexanoat (SEH) (4,0 ml, 1 M opløsning i ethyl-acetat) sattes til en opløsning af 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazalo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephon-4-carboxylsyre (4), opnået ifølge eksempel 2, (2,25 g, 3,93 nmol) i THF (200 ml). Bundfaldet opsamledes ved filtrering, udvaskedes med THF (50 ml) og tørredes ved 60°C / 1 mm Hg i 3 timer. Udbytte af natriurn-7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylat, 1,96 g (bioudbytte 97%), smeltepunkt 230-240°C (dekomponering). pH-værdien af den 10% vandige opløsning var 3,6.

IR: 3600-3000, 1765, 1710, 1605, 1390, 1360, 1190, 1080, 1065 cm" , UV: λ maxd nm (Elcm} 252 t357)/·310 (skulder, 140).

NMR:Sp2° 3,43 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 3,87 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 4,15 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,53 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 5,16 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,36 (IH, s, PhCH), 5,73 (IH, d, 4,5 Hz, 7-H), 7,13 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 7,57 (5H, s, phenyl-H), 7,69 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H).

37 145302

Analyse beregnet for C23Hi9N608S2Na'5//4H20: C: 44,77/ H: 3,51; N: 13,62; S: 10,39.

Fundet: C: 44,93, H: 3,31, N: 13,41, S: 10,19.

44,79; 3,15; 13,33;

Eksempel 6

Vandig IN natriumhydroxidopløsning sattes dråbevis til en opslæmning af 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (_4opnået ifølge eksanpel 2, (3,51 g) i vand (20 ml) til indstilling af pH-værdien på 6,0. Opløsningen lyofiliseredes til dannelse af 3,4 g (bioudbytte, 97%) dinatrium- 7-(D-mandelamido)-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylat, smeltepunkt >240°C (dekomponering). pH-værdien af den 5% vandige opløsning var 5,4.

3600-3000, 1760, 1710, 1605, 1390, 1360, 1190, 1080, 1 ΙΓΙαχ 1060 cm-1.

UV: Avand nm (E?-% ) 252 (320), 310 (124).

Amax lem ' NMR: ^°3° 3,43 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 3,90 (IH, d, 19 Hz, 2-H), 4,15 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,53 (IH, d, 14 Hz, 3-H), 4,75 (2H, s, NCH2CO), 5,22 (IH, d, 4,5 Hz, 6-H), 5,42 (IH, s, PhCH), 5,73 (IH, d, 4,5 Hz, 7-H), 7,22 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H), 7,65 (5H,'s, phenyl-H), 7,77 (IH, d, 10 Hz, pyridazin-H).

Analyse beregnet for C23HlgN60gS2Na2,3/2 H20: ( C: 42,92; H: 3,29; N: 13,06; S: 9,96. .

Fundet: C: 42,90, H: 3,06, N: 13,04, S: 9,97.

43,19; 3,01; 13,03; 38 145302

Eksempel 7 Η2»Ί—Τ^5χ|

o CH2 S ^n^^vN-CI^CH^OOH

C02H O

C ,Hc o ΥΛ °-/ V 0 -CH—CON-T-{ ^ ^^y====r^

λ=/ OH J-N

co2h BB-S527; 7-[D(-)-mandelamido3-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s- triazolo-[4,3-b]pyridazin-3-on-6—ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre Til en blanding a£ 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-*b]pyridazin~3-on-6-ylthiomethyl]-3-cephem-4-carboxylsyre (679 mg, 1,5 mmol) og NaHCO^ (445 mg, 5,3 mmol) i 50% vandig acetone sattes D-(-)-mandelsyre-O-carboxyanhydrid (400 mg, 2,3 mmol) ved 0°C.

39 145302

Blandingen omrørtes ved stuetemperatur i 1 time og inddampedes til fjernelse af det organiske opløsningsmiddel. Den vandige opløsning udvaskedes med ether (3 x 10 ml), indstilledes til pH-værdi 1 med fort-yndet HC1 og filtreredes til opsamling af det rå produkt, som opløstes i THF (10 ml), filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer og inddampedes under formindsket tryk. Den olieagtige remanens triturere-des med ether. Faststoffet (476 mg) kromatograferedes på en søjle af ' silicagel ("Wako-gel C-200", 10 g) og elueredes med MeOH-CHClg (MeOH: 0-3%). Fraktioner, som indeholdt det ønskede produkt, kombineredes og inddampedes til opnåelse af 287 mg (33%) BB-S527, smeltepunkt ' >155°C (dekomponering).

IR: Ό KBr 3600 - 2400, 1780, 1720, 1550, 1520 cm-1, max UV: A pH 7 puffer 253 nm (E, 20000), 298 rim (£, 9000). max

Analyse beregnet for C24H22N6OgS2/3/2H20: C: 46,98; H: 4,11; N: 13,70; S: 10,45.

Fundet: C: 47,25, H: 3,80, N: 12,87, S: 10,17.

47,39; 3,76; 12,77;:

Natriumsaltet af BB-S 527

En opslæmning af den frie syre af BB-S 527 (240 mg, 0,4 m.mol) i vand (5 ml) indstilledes til pH-værdi 6,8 med 1 N-NaOH (0,7 ml) til dannelse af en klar opløsning, som frysetørredes til efterladelse af 234 mg (91% bioudbytte) af natriumsaltet af BB-S 527 som bleggult pulver. Smeltepunkt >210°C (dekomponering).

IR: vKBr 3600 - 2800, 1770, 1710, 1600 cm”1, max iii UV: Amax? PUffer 253 nm (ε 21000) 298 nm (ε 9300).

Analyse beregnet for C24H20N6O8S2Na2,2H2O: C: 43,24, H: 3,63, N: 12,61, S: 9,62

Fundet: C: 43,39, H: 3,20, N: 12,63, S: 9,42 43,43, 3,36, 12,68, 9,22

In vitro-antibakteriel aktivitet af BB-S 527 sammenlignet med BB-S 488 og cefamandol (bestemt ved Steers1 agar-fortyndingsmetode på Mueller-Hinton agar-plade).

40 145302 _MIC (mcg/ml)_

Organisme BB-S 527 BB-S 488 cefamandol S. aureus Smith 1,6 0,8 0,2 S. aureus 0,4 0,4 0,1 S. aureus BX-1633 3,1 3,1 0,4

St. faecalis >100 >100 >100 E. coli NIHJ 0,4 0,2 0,05 E. coli ATCC 8739 12,5 6,3 3,1 E. coli Juhl 0,4 0,2 0,8 E. coli BX-1373 6,3 3,1 3,1 E. coli 0,1 0,1 0,1 E. coli 0,1 0,05 0,1 E. coli - 6,3 3,1 1,6

Kl. pneumoniae 6,3 3,1 3,1

Kl. pneumoniae 0,2 0,1 0,8

Kl. pneumoniae 0,8 0,4 0,8

Kl. pneumoniae 0,4 0,2 0,8

Pr. vulgaris 0,1 0,1 0,2

Pr, vulgaris 12,5 0,8 50

Pr. mirabilis 0,2 0,05 0,8

Pr. mirabilis 0,1 0,05 0,2

Pr. morganii >100 >100 >100

Pr. morganii 0,4 0,2 0,8

Pr. rettgeri 0,2 0,2 0,4

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Ps. aeruginosa >100 >100 >100

Shig. dysenteriae 0,025 0,025 0,1

Shig. flexneri 50 25 6,3

Shig. sonnei 0,1 0,05 0,2

Serr. marcescens >100 >100 >100

Enterob. cloacae 6,3 3,1 3,1

Sal. enteritidis 0,05 0,025 0,05

Sal. typhosa 0,1 0,05 0,1 B. anthracis 0,4 0,2 0,4 41 145302

Eksempel 8

Il n s

Vocil Γ y^CK2'S - '‘yJ-CH^OOfla

3 0 C02Na O

BB-S 511: 7~[(2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-carboxy-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3—b]pyrldazin-3-on-6-ylthio-methyl)--3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)eddikesyre (507 mg, 3 mmol) og triethylamin (0,42 ml, 3 mmol) i dichlormethan (6 ml) sattes oxalylchlorid (0,26 ml, 3 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrør-tes i 30 minutter. Blandingen inddampedes ved formindsket tryk til dannelse af en olieagtig remanens af syrechloridet, som opløstes i tør acetone (10 ml). Efter filtrering sattes acetone-opløsningen til en blanding af 7-amino-3-(2-carboxymethyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-^cephem-4-carboxylsyre (1,31 g, 3 mmol) og NaHCO^ (504 mg, 6 mmoi) i vand (20 ml) ved 0-5°C. Blandingen omrør-tes ved 0-5°C i 2 timer, idet acetonen fjernedes under formindsket tryk. Den vandige opløsning udvaskedes ether (2 x 50 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HC1 til tilvejebringelse af et bundfald, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum. Faststoffet opløstes i THF (tetrahydrofuran) (40 ml) og filtreredes. Til filtratet sattes 1 M-SEH (natriumethylhexanoat) i ethylacetat (3 ml), og det resulterede bundfald opsamledes ved filtrering og tørredes i vakuum. Udbytte af 7-[(2Z)-2-methoxyimino(fur--2-yl)acetamido]-3-(2-carboxymethy1-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-dinatriumsalt var 1,0 g (54%) , smeltepunkt >210°C (dekomponering).

IR: vKB5 1770, 1710, 1680, 1610, 1550 cm"1 mdx UV: XpH 7 pUffer 257 nm (ε 25000), 277 nm (ε 24000)

IRcLX

NMR: 6ppBO_d6 7,70 (IH, br, furan-Ηα), 7,52 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,87 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,5-6,6 (2H, m, furan-Ηβ), 5,58 (IH, m, 7-H), 5,00 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 3,84 (3H, s, OCH3).

Analyse beregnet for C22H17N7°9S2Na2'H20: C: 40,55, H: 2,94, N: 15,05, S: 9,84

Fundet: C: 40,81, H: 3,08, N: 14,69, S: 9,70 41,02 3,22 14,86 9,62.

42 145302

Eksempel 9

I Π H

/>= i k rN\^J-cnp"s>-ch0ch„cooh ‘Vooii I 2 T 22 p COglt o BB-S526: 7-[ (2¾) -2-methoxyimino (fur-2—yl) acetamido] -3- [2-(2-carboxy-ethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl]--3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt

Syrechloridet, som fremstilledes ud fra (2Z)-2-methoxyimino(fur--2-yl)eddikesyre (169 mg, 1 mmol), opløstes i tør acetone (5 ml) og filtreredes til fjernelse af de uopløselige stoffer. Filtratet sattes til en opløsning af 7-amino-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro-s-triazolo [4 , 3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre (452 mg, 1 mmol) og NaHC03 (336 mg, 4 mmol) i vand (10 ml). Reaktions-blandingen omrørtes i 2 timer i et isvandbad. Acetone fjernedes ved formindsket tryk. Den vandige opløsning udvaskedes med ether (2 x 10 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HCl. Det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes under formindsket tryk. En opløsning af bundfaldet i THF (10 ml) behandledes med aktivt carbon. En SEH-opløsning i ethylacetat (1 m, 0,8 ml) sattes til THF-opløsningen til dannelse af 7—[(2Z)—2— -methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-[2-(2-carboxyethyl)-2,3-dihydro--s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthio-methyl]-3-cephem-4-carboxyl-syre-natriumsalt, som opsamledes ved filtrering. Udbytte 410 mg (66% som mono-Na-salt). Smeltepunkt >205°C (dekomponering).

IR: vKBr 3600-2800, 1770, 1710, 1600, 1550 cm-1 max UV: λρίΙ 7 Puffer 257 nm (ε 27000), 276 (ε 26100) max NMR: ,sDMSO-d6+D20 2,70 (2H, t, J=6 Hz, CH-) , 3,3-4,5 (9H, m, 2-H, ppm ^ 3-CH2, CH2 og OCH3), 4,96 (IH, d, J=5,5 Hz, 6-H), 5,53 (IH, d, J=5,5 Hz, 7-H), 6,55 (2H, m, furan-H), 6,92 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,53 (IH, d, J=10 Hz, pyridazin-H), 7,68 (IH, Br, furan-H).

Analyse beregnet for C23H20N7°9S2Na,H2O: C: 42,92, H: 3,45, N: 15,23, S: 9,96

Fundet: C: 43,08, H: 3,20, N: 14,96, S: 9,96 42,77, 3,03, 14,76 43 165302

Tabel VII

In vitro aktivitet bestemt ved rækkefortyndings- roetoden under anvendelse af Mueller-Hinton agar

Geometrisk middelværdi af MIC (pq/ml)

Organisme BB-S511 BB-S526 Cefuroxim (antal stammer) (Eks. 8) (Eks. 9 ) ___ S. aureus (3) 1,97 1,6 1,24 E. coli (7) 0,58 0,78 1,28

Kl. pneumoniae (4) 0,47 0,93 3,1

Proteus (6) 0,021 0,061 0,88

Shig. (3), Serr. (1)

Enterob. (1), Sal. (2) 1,11 2,41 4,06 B- anthracis (1) S. pyogenes (5) 0,032 0,032 0,025 S. viridans (5) 0,15 0,4 0,1 D. pneumoniae (5) 0,037 0,056 0,0125 N. meningitidis (5) 2,37 3,60 1,6 N. gonorrhoeae (5) 1,36 1,6 0,4 H. influenzae (7) 0,64 0,71 1,16

Cefuroxim er natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7-(2Z)-2-methoxyimino-(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4-carboxylat.

Tabel VIII

Geometriske middelværdier af MIC-vardier mod 3 stammer af S. aureus og 27 stammer af gram-negative bakterier (yg/ml), Mueller-Hinton agar)

Antal stammer BB-S511 BL-S786 S. aureus 1 1,6 1,6 " S. aureus, Penicillin-R 2 0,6 1,6 E. coli 6 0,2 0,2 E. coli, Cephalosporin-R 1 6,3 12,5 K. pneumoniae 4 0,7 0,3

Indole (-) Proteus 2 0,1 0,2

Indole (+) Proteus 3 0,05 0,3

Indole (+) Proteus, Cephalosporin-R 2 6,3 50,1 S. marcescens 1 25 >100 E. cloacae 1 3,1 1,6

Shigella, Salmonella 5 0,3 0,5 P. aeruginosa 2 >100 >100 44 145302 BL-S786 er 7-[α-(2-aminomethylphenyl) acetamido] -3- [ (1-carboxymethyl-tetrazol-5-ylthio)methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre.

TabeliX

Geometriske middelværdier af MIC-værdier mod 18 stammer af S. marcescens BB-S511 BL-S786 5,4 85,9

Eksempel 1Q

l 0<^K'vii:i-CH2S-VNYN-CH3 ^00¾ CO^Na ° BB-S51Q: 7-[(22)-2-methoxyimino(fur-2-yl)acetamido]-3-(2-methyl-2,3--dihydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem--4-carboxylsyre-natriumsalt

Til en opløsning af (2Z)-2-methoxyimino(fur-2-yl)eddikesyre (253 mg, 1,5 mmol) og triethylamin (0,2 ml, 1,5 mmol) i dichlormethan (3 ml) sattes oxalylchlorid (0,13 ml, 1,5 mmol) ved 0-5°C, og blandingen omrørtes i 30 minutter og inddampedes ved formindsket tryk til dannelse af syrechloridet som en olie, der opløstes i tør acetone (5 ml) og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Acetone--opløsningen sattes til en blanding af 7-amino-3-(2-methyl-2,3-di-hydro-s-triazolo[4,3-b]pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre (591 mg, 1,5 mmol) og NaHCOg (504 mg, 6 mmol) i vand (10 ml) ved 0-5°C. Reaktionsblandingen omrørtes ved 0-5°C i 3 timer. Acetone fjernedes ved formindsket tryk, og den resterende vandige opløsning udvaskedes med ether (2x30 ml) og indstilledes til pH-værdi 1-2 med koncentreret HCl. Bundfaldet, som opsamledes ved filtrering, udvaskedes med vand og tørredes i vakuum, opløstes i THF (30 ml) og filtreredes til fjernelse af uopløselige stoffer. Til THF-op-løsningen sattes en opløsning af natrium-2-ethylhexanoat (SEH, 1 M, 1,5 ml) i ethylacetat, og det resulterende bundfald opsamledes ved filtrering-og tørredes i vakuum. Udbytte 492 mg 7-[(2Z)-2-methoxyimino (fur-2-yl) acetamido]-3-(2-methyl-2,3-dihydro-s-triazolo[4,3-b]-pyridazin-3-on-6-ylthiomethyl)-3-cephem-4-carboxylsyre-natriumsalt (58%). Smeltepunkt >180°C (dekomponering).

45 145302 IR: vKBr 1770, 1720, 1670, 1600, 1550 cm"1

ItlcLX

UV: λρΗ 7 Puffer 257 nm (ε 22600), 277 nm (e 22300) max NMR: 7,53 (IH, d, J=l,5 Hz, furan-Ha), 7,35 (IH, d, J=9,5

Hz, pyridazin-H), 6,90 (IH, d, J=9,5 Hz, pyridazin-H), 6,72 (IH, d, j=3,0 Hz, furan-Ηβ), 6,48 (IH, g, J=l,5 og 3,0 Hz, furan-Ηβ), 5,72 (IH, d, J=4,5 Hz, 7-H), 5,14 (IH, d, J=4,5 Hz, 6-H), 2,94 (3H, s, 0-CH3), 3,61 (3H, s, N-CH3).

Analyse beregnet for C2^H^gN-,S2Na,l/2THF,H20: C: 44,44, H: 3,89, S: 10,32'

Fundet: C: 44,89, H: 3,92, S: 9,67.

Tabel x

In vitro aktivitet bestemt ved rækkefortyndings- metoden under anvendelse af Mueller-Hinton agar

Geometrisk middelværdi af MIC (yq/ml)

Organisme BB-S510 BB-S515 Cefuroxim (antal stammer) (Eks.^-Q ) _ _______ S. aureus (3). 0,62 2,48 1,24 E. coli (7) 2,11 2,33 1,28.

Kl. pneumoniae (4) 6,3 3,1 3,1

Proteus (6) 1,39 1,11 0,88

Shig. (3), Serr. (1)

Enterob. (1), Sal. (2) 6,26 5,26 4,06 B. anthracis (1) S. pyogenes (5) 0,0125 0,032 0,025 S. viridans (5) 0,13 0,59 0,1 D. pneumoniae (5) 0,021 0,1 0,0125 N. meningitidis (5) 1,03 5,45 1,6 N. gonorrhoeae (5) 0,26 2,07 0,4 H. influenzae (7) 0,35 2,11 1,16

Cefuroxim er natrium-6R,7R-3-carbamoyloxymethyl-7-(2Z)-2-methoxy-imino(fur-2-yl)acetamidoceph-3-em-4~carboxylat.

46 1*5302

Tabel X*

Geometriske middelværdier af MlC-vardier rood 3 stammer af S. aureus og 27 stammer af gram-negative bakterier (uq/ml), Mueller-Hinton agar)

Antal stammer BB-S510 BL-S786 S. aureus 1 0,1 1,6 S. aureus, Penicillin-R 2 Q,1 1,6 E. coli 6 0,1 0,2 E. coli, Cephalosporin-R 1 3,1 1?,5 K. pneumoniae 4 2,6 0,3

Indole (-) Proteus 2 ‘ 1,1 0,2

Indole (+) Proteus 3 0,2 0,3

Indole (+) Proteus, Cephalosporin-R 2 6,3 50,1 S. marcescens 1 6,3 >100 Ε» cloacae 1 3,1 1,6

Shigella, Salmonella 5 0,5 0,5 P. aeruginosa 2 >100 >100 BL-S786 er 7-[a-(2-aminomethylphenyl)acetamido]-3-[(1-carboxymethyl- tetrazol-5-ylthio)methyl]-3-cephem-4-carboxylsyre.

Tabel XU

Geometriske middelværdier af MXC-værdier mod 18 stammer af S. marcesceps BB-S510 BL-S786 7,9 85,9