DE932576C

DE932576C - Process for the purification of impure aqueous solutions which contain vitamin B and variants thereof

Info

Publication number: DE932576C
Application number: DEA16555A
Authority: DE
Inventors: Merton Cooke Lockhart; George Herman Michel
Original assignee: American Cyanamid Co
Current assignee: Wyeth Holdings LLC
Priority date: 1951-10-25
Filing date: 1952-09-20
Publication date: 1955-09-05

Description

Verfahren zur Reinigung von unreinen wäßrigen Lösungen, welche Vitamin B12 und Varianten desselben enthalten Die Erfindung betrifft die Reinigung von unreinen wäßrigen Lösungen, welche Vitamin B12 und Varianten desselben enthalten, unter Verwendung von Adsorptionsmitteln.Process for the purification of impure aqueous solutions containing vitamin B12 and variants of the same included The invention relates to the cleaning of impure aqueous solutions containing vitamin B12 and variants thereof, using of adsorbents.

Kürzlich wurde eine Substanz mit vitaminähnlichen Eigenschaften in kfistalliner Form aus Leberextrakten und gewissen Fermentationsflüssigkeiten isoliert. Diese Substanz, welche allgemein als Kobaltkoordinationskomplex charakterisiert wurde, erhielt die Bezeichnung Vitamin B12. Seit der Entdeckung von Minot und Murphy im Jahre I926 (vgl. J. Amer. Med. Ass. 87, S. 470 [I926]), daß Leber eine Substanz enthält, welche bei der Behandlung von perniztöser Anämie wirksam ist, wurden viele Versuche unternommen, dieses Material in kristalliner Form zu erhalten. Durch zahlreiche Wissenschaftler wurden Präparate von immer größerer Reinheit und immer besserer therapeutischer Wirksamkeit erhalten, bis das Vitamin schließlich in kristalliner Form erhalten wurde. Recently, a substance with vitamin-like properties was found in Crystalline form isolated from liver extracts and certain fermentation fluids. This substance, which is generally characterized as a cobalt coordination complex was named vitamin B12. Since the discovery of Minot and Murphy in 1926 (cf. J. Amer. Med. Ass. 87, p. 470 [1926]) that liver is a substance which is effective in the treatment of pernicious anemia, have become many Attempts have been made to obtain this material in crystalline form. By numerous Scientists became preparations of ever greater purity and better and better therapeutic efficacy obtained until the vitamin finally turns into crystalline Shape was obtained.

Die Versuche zur Isolierung des Vitamjns von den dieses begleitenden Verunreinigungen wurden durch die Tatsache kompliziert, daß Vitamin B12 in den natürlichen Materialien in außerordentlich geringen Mengen, in der Größenordnung von 1 Teil je Million, vorkommt. Darüber hinaus scheint Vitamin2 in mehreren verschiedenen Modifikationen und möglicherweise vergeselischaftet mit eiweiß artigen Materialien vorzulkommen. Auch andere in der Leber vorhandene Substanzen besitzen ähnliche physiologische Eigenschaften, welche die Auswertung von konzentrierten Präparaten schwierig gestalteten. Attempts at isolating vitamin from those accompanying it Impurities were complicated by the fact that vitamin B12 is in natural Materials in extremely small quantities, on the order of 1 part per million. In addition, Vitamin2 appears in several different ways Modifications and possibly associated with protein-like materials to occur. Also have other substances present in the liver similar physiological properties affecting the evaluation of concentrated preparations difficult designed.

Im allgemeinen umfaßten die Methoden der Konzentrierung und Reinigung physikalische Methoden, wie Adsorption des Vitamins an Adsorbentien, wie Aktivkohle, Aluminiumoxyd, Kieselgel, Kieselerden u. dgl., und die anschließendeElution mit verschiedensten Lösungsmitteln. Bei diesen Adsorptionsverfahren wird das aktive Material gewöhnlich adsorbiert, während die Verunreinigungen in der Lösung verbleiben. Modifikationen des Adsorptionsverfahrens, wie z. B. Chromatographie, wurden mit Erfolg angewandt. Auch andere Methoden, welche die verschiedene Löslichkeit des Vitamins in speziellen Lösungsmitteln verwendeten, wurden in ger wissem Ausmaß angewandt. Auch die Ausfällung des Vitamins wurde versucht. Die Gewinnung des Vitamins in kristalfiner Form erforderte eine Kombination von physikalischen Methoden, welche unbequem und in technischem Maßstab schwer anzuwenden waTen. In general, the methods included concentration and purification physical methods, such as adsorption of the vitamin on adsorbents, such as activated carbon, Aluminum oxide, silica gel, silica and the like, and the subsequent elution with various solvents. In these adsorption processes, the active Material usually adsorbed while the impurities remain in solution. Modifications to the adsorption process, such as B. Chromatography, were with Success applied. Also other methods, which the different solubility of the Vitamins used in special solvents have been used to a certain extent. The precipitation of the vitamin has also been attempted. The extraction of the vitamin in Kristallfiner Form required a combination of physical methods, which are inconvenient and difficult to apply on an industrial scale.

Da nunmehr verhältnismäßig unbegrenzte Quellen für Vitamin B12 in den fermentierten Flüssigkeiten, welche von verschiedenen Mikroorganismen erzeugt werden, zugänglich sind und da Vitamin B12 als antiperniziosa-anämischer Faktor gilt und in der Medizin in großem Umfang verwendet wird, so sind vereinfachte Methoden zur Erzielung größerer Mengen des Vitamins in einer für die therapeutische Anwendung geeigneten Form notwendig geworden. Since there are now relatively unlimited sources of vitamin B12 in the fermented liquids produced by various microorganisms are accessible and because vitamin B12 is used as an antipernicious anemic factor applies and is widely used in medicine, so are simplified methods to obtain larger amounts of the vitamin in one for therapeutic use suitable form has become necessary.

Die Quellen für Vitamin B,2 zur Verwendung bei der Erfindung umfassen zahlreiche wäßrige Lösungen, welche das Vitamin enthalten. Sie umfassen auch wäßrige Leberextrakte. Eine ergiebigere Quelle ist die Abfallflüssigkeit bei der Herstellung von Antibiotika durch einige Sfteptomycesarten, insbesondere einschließlich 5. aureofaciens und S.griseus. Andere Mikroorganismen, wie S.rimosus, Clostridium butyricum, Bacillus megatherium, Eremethecium ashbyii, Flavabacterium solare und viele andere Bakterien, Hefen und Fungi erzeugen beim Fermentationsverfahren Vitamin B12, und diese Flüssigkeiten können erfindungsgemäß verwendet werden. Es wurde gefunden, daß auch Abwässer (sewage effluent) Vitamin B12 enthalten, und solche geklärten Flüssigkeiten können eine wirtschaftliche Quelle für Vitamin B12 unter Verwendung des erfindungsgemäßen Verfahrens darstellen. The sources of vitamin B, 2 for use in the invention include numerous aqueous solutions containing the vitamin. They also include aqueous ones Liver extracts. A more abundant source is the waste liquid from manufacturing of antibiotics by some species of Sfteptomyces, particularly including 5. aureofaciens and S.griseus. Other microorganisms such as S.rimosus, Clostridium butyricum, Bacillus megatherium, Eremethecium ashbyii, Flavabacterium solare and many other bacteria, Yeasts and fungi produce vitamin B12 in the fermentation process, and so do these liquids can be used in the present invention. It was found that sewage (sewage effluent) contain vitamin B12, and such clarified liquids can be a economical source of vitamin B12 using the method of the invention represent.

Das erfindungsgemäße Verfahren zur Reinigung unreiner wäßriger Lösungen, welche Vitamin B12 und dessen Varianten enthalten, besteht darin, daß man die unreine, wäßrige Lösung mit einer im wesentlichen in Wasser unlöslichen Zirkoniumverbindung in Berührungibringt, wodurch die Verunreinigungen an der Zirkoniumverbindung adsorbiert werden, und daß man die gereinigte wäßrige, das Vitamin2 enthaltende Lösung von der Zirkoniumverbindung und den daran adsorbiertenVerunreinigungen abtrennt. The inventive method for cleaning impure aqueous solutions, which vitamin B12 and its variants contain, consists in removing the impure, aqueous solution with a substantially water-insoluble zirconium compound brought into contact, whereby the impurities are adsorbed on the zirconium compound be, and that the purified aqueous solution containing the vitamin2 of the zirconium compound and the impurities adsorbed thereon.

Obwohl wasserunlösliche Zirkoniumverbindungen bereits seit langem als Adsorbentien für andere Stoffe verwendet werden, ist es jedoch außerordentlich überraschend, daß diese Materialien Vitamin B12 nicht adsorbieren, das- sonst von den meisten üblichen, im Gebrauch befindlichen Adsorbentien so leicht adsorbiert wird. Unter den unlöslichen Zirkoniumverbindungen, welche bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden können, seien beispielsweise folgende genannt: Zirkoniumdioxyd, Zirkoniumcarbonat, Zirkoniumhydroxyd, Zirkoniumsilikat und andere in Wasser unlösliche Zirkoniumverbindungen. Durch-den Ausdruck »unlöslich« sollen solche Verbindungen umfaßt werden, welche in wäßriger Lösung nicht in einem solchen Grade löslich sind; daß sie das Adsorptionsverfahren stören könnten. Bei der Anwendung der verschiedenen möglichen Methoden soll die Zirkonverbindung vorzugsweise nicht mehr als zu etwa 1 Gewichtsprozent in wäßrigen Lösungen bei der Wasserstoffionenkonzentration des weiter unten geschilderten Verfahrens löslich sein. Although water-insoluble zirconium compounds have been around for a long time used as adsorbents for other substances, however, it is extraordinary Surprisingly, that these materials do not adsorb vitamin B12, otherwise by so easily adsorbed by most common adsorbents in use will. Among the insoluble zirconium compounds used in the present invention Processes that can be used include, for example, the following: zirconium dioxide, Zirconium carbonate, zirconium hydroxide, zirconium silicate and others insoluble in water Zirconium compounds. The expression "insoluble" is intended to mean such connections include which are not soluble to such an extent in aqueous solution; that they could interfere with the adsorption process. When applying the various possible methods, the zirconium compound should preferably not be more than about 1 percent by weight in aqueous solutions at the hydrogen ion concentration of the be soluble in the process described below.

Für die Verwendung bei dem erfindungsgemäßen Verfahren-eignen sich verschiedene Zirkonverbindungen, beispielsweise Zirkondioxyhydrat und basisches Zirkoncarbonat. Zirkondioxyd ist in Form eines Hydrats der Formel Zr O2 H2 0 (x ist eine kontinuierlich variable Zahl) und Zirkoncarbonat ebenfalls in Form eines Hydrats erhältlich. Die beiden genannten Materialien stellen in der handelsüblichen Form wäßrige weiße Dispersionen von mäßig steifer Konsistenz dar. Man soll diese Dispersionen nicht austrocknen lassen, da sie beim Trocknen ihre Fähigkeit, die Verunreinigungen zu adsorbieren, zu verlieren scheinen. Sie können direkt zur Adsorption der Verunreinigungen von Vitamin B12 enthaltenden wäßrigen Lösungen eingesetzt werden. Suitable for use in the method according to the invention various zirconium compounds such as zirconium dioxide and basic Zirconium carbonate. Zirconia is in the form of a hydrate of the formula Zr O2 H2 0 (x is a continuously variable number) and zirconium carbonate also in the form of a Hydrates available. The two materials mentioned represent in the commercially available Form aqueous white dispersions of moderately stiff consistency. One should these Do not allow the dispersions to dry out, as they reduce their ability to dry out To adsorb impurities seem to lose. You can go straight to adsorption the impurities of vitamin B12-containing aqueous solutions can be used.

Ein für die Verwendung bei dem erfindungsgemäßen Verfahren geeignetes Zirkonhydroxyd kann aus dem obengenannten Zirkoncarbonat folgendermaßen hergestellt werden: Man gibt zu In6,6 kg basischem Zirkoncarbonat 2001 Wasser, wonach die Mischung aufgeschlämmt und dann so verrührt wird, daß sich ein homogenes Gemisch bildet. Unter weiterem Rühren werden 61,2 kg 930/oige Schwefelsäure zugegeben. Durch dieses Verfahren erhält man eine wasserhelle Lösung von Zirkonsulfat. Dann werden 65,3 kg Ammoniumhydroxyd (26 bis 280/o) zugegeben, so daß man einen pH-Wert von 8 erhält. Dadurch wird eine weiße gelatinöse Ausfällung von Zirkoniumhydroxyd erhalten. Die Mischung wird filtriert und der Filterkuchen gewonnen. Dieser Kuchen wird dann in 3501 Wasser suspendiert und wieder filtriert. Der entstandene Preßkuchen ist als Zirkoniumhydroxyd anzusehen. Das Zirkoniumhydroxyd soll ähnlich wie das Zirkoniumcarbonat nicht getrocknet werden. Zirkonium kann verschiedenste Verbindungen außer den oben angegebenen bilden. Diejenigen, welche in den erfindungsgemäßen Grenzen unlöslich sind, können bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet werden. One suitable for use in the method of the invention Zirconium hydroxide can be prepared from the above-mentioned zirconium carbonate as follows are: One adds to In6.6 kg of basic zirconium carbonate 2001 water, after which the mixture slurried and then stirred so that a homogeneous mixture is formed. 61.2 kg of 930% sulfuric acid are added with further stirring. Because of this In the process, a water-white solution of zirconium sulfate is obtained. Then it becomes 65.3 kg of ammonium hydroxide (26 to 280 / o) are added so that a pH of 8 is obtained. This gives a white gelatinous precipitate of zirconium hydroxide. the The mixture is filtered and the filter cake is recovered. This cake is then put in Suspended 3501 water and filtered again. The resulting press cake is as To look at zirconium hydroxide. The zirconium hydroxide is said to be similar to the zirconium carbonate not be dried. Zirconium can have a wide variety of compounds besides the above specified form. Those which are insoluble within the limits of the invention can be used in the method of the invention.

Bei der Durchführung der Erfindung kann die Adsorption der Verunreinigungen durch mehrere Methoden erfolgen. Bei einer Methode wird die wäßrige, Vitamin2 enthaltende Lösung mit der gewünschten Menge der Zirkoniumverbindung aufgeschlämmt und dann filtriert. Das Filtrat enthält das Vitamin B12, während der größte Teil der Verunreinigungen in dem Filterkuchen zurückgehalten wird. Bei einer anderen Methode wird eine Säule der Zirkoniumverbindung, welche im allgemeinen mit einer Filterhilfe vermischt ist, hergestellt und die zu verarbeitende wäßrige Lösung durch die Säule geleitet. Die von einer beliebigen Methode stammende verbrauchte Zirkoniumverbindung kann durch übliche Mittel gereinigt und in den Kreislauf zurückgeführt werden. Diese beiden Methoden sollen weiter unten näher erläutert werden. In the practice of the invention, the adsorption of the contaminants be done by several methods. One method uses the aqueous, Solution containing vitamin2 slurried with the desired amount of the zirconium compound and then filtered. The filtrate contains the vitamin B12, while most of it the impurities is retained in the filter cake. With another Method is a column of the zirconium compound, which is generally with a Filter aid is mixed, produced and the aqueous solution to be processed through passed the column. The spent zirconium compound obtained from any method can be cleaned by conventional means and returned to the cycle. These both methods will be explained in more detail below.

Offensichtlich wird die anzuwendende Menge an Zirkoniumverbindung mit der in der Vitamin-Bl2-Lösung vorhandenen Menge an Verunreinigungen variieren. Da Vitamin2 unter den Bedingungen des erfindungsgemäßen Verfahrens keinesfalls in merklichem Ausmaß an der Zirkoniumverbindung adsorbiert wird, so hat eine überschüssige Menge keine nachteiligen Folgen. Wenn die Menge an Verunreinigungen groß ist und diese nicht alle adsorbiert werden, können die Verunreinigungen andererseits leicht im Filtrat nachgewiesen werden und durch weitere Berührung mit der Zirkoniumverbindung in einem zweiten Arbeitsgang entfernt werden. Obviously, the amount of zirconium compound to be used becomes vary with the amount of impurities present in the vitamin B1 solution. Since vitamin2 under the conditions of the method according to the invention is by no means in is adsorbed to the zirconium compound to an appreciable extent, it has an excess Amount no adverse consequences. When the amount of impurities is large and On the other hand, if these are not all adsorbed, the impurities can easily can be detected in the filtrate and by further contact with the zirconium compound can be removed in a second operation.

Die Temperatur bei der Adsorption kann über einen großen Bereich, von o bis 750, variieren, jedoch wird das Verfahren vorzugsweise bei Zimmertemperatur durchgeführt. Der pH-Wert kann bei dem Adsorptionsverfahren zwischen 5 und 9 variieren. Die wäßrige Vitamin-B12-Lösung soll vor der Behandlung in dem Bereich vom PH 2,5 bis 8,5 und vorzugsweise bei PH 4,5 gehalten werden, und zwar deshalb, weil Vitamin B12 in starken Konzentrationen von Säure oder Alkali nicht beständig ist. The temperature during adsorption can be over a wide range, from 0 to 750, however the process is preferably carried out at room temperature carried out. The pH value can vary between 5 and 9 in the adsorption process. The aqueous vitamin B12 solution should be in the range of pH 2.5 before treatment to 8.5 and preferably at pH 4.5, because vitamin B12 is not stable in strong concentrations of acid or alkali.

Der hier verwendete Ausdruck Vitamin B12 soll ganz allgemein die verschiedenen physiologisch wirksamen Formen von Vitamin B12, welche in der Literatur beschrieben sind, umfassen. Nach der ursprünglichen Beschreibung in der Literatur scheint es, daß Vitamin B12 eine Cyangruppe enthält. Diese Gruppe wird leicht durch andere Radikal, wie Hydroxyl oder Sulfat, ersetzt, und auf diese Weise ist Vitamin B12 verschiedenartig chemisch modifiziert worden, dhne daß seine physiologische Wirksamlseit ernstlich beeinträchtigt wurde. Vitamin B12 scheint tatsächlich in der Natur in mehreren dieser Formen aufzutreten, und verschiedene Fermentationsflüssigkeiten enthalten eine Mischung von verschiedenen Formen des Vitamins B12. Diese wurden verschiedenartig als Vitamin B12a, Vitamin Bl2b, Vitamin Bl2c, Cobalamin, Cobalaminhydroxyd, Cobalaminsulfat u. dgl. bezeichnet. Diese Varianten des Vitamin-Bl2-Moleküls verhalten sich alle bei dem erfindungsgemäßen Verfahren ähnlich und werden an unlösliche Zirkoniumverbindungen weder adsorbiert, noch beeinflussen sie die Adsorption der verschiedenen Verunreinigungen an die Zirkoniumverbindungen. Demgemäß soll der hier verwendete Ausdruck »VitaminBl2« alle diese bekannten verwandten, physiologisch wirksamen, adsorbierbaren Formen, welche bisher beschrieben wurden, umfassen. The term vitamin B12 used here is intended to be very general various physiologically active forms of vitamin B12 which are found in the literature are described include. According to the original description in the literature it appears that vitamin B12 contains a cyano group. This group gets through easily other radical, like hydroxyl or sulfate, is replaced, and in this way is vitamin B12 has been chemically modified in various ways, without its physiological Effectively has since been seriously impaired. Vitamin B12 actually appears in naturally occurring in several of these forms, and various fermentation fluids contain a mixture of different forms of vitamin B12. These were various as vitamin B12a, vitamin Bl2b, vitamin Bl2c, cobalamin, cobalamin hydroxide, Cobalamin sulfate and the like. These variants of the vitamin Bl2 molecule behave are all similar in the process according to the invention and are attached to insoluble zirconium compounds neither adsorb nor affect the adsorption of the various impurities to the zirconium compounds. Accordingly, the term "VitaminBl2" used here is intended to all these known, related, physiologically active, adsorbable forms, which have been described so far include.

Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern. The following examples are intended to explain the invention in more detail.

Beispiel I Eine wäßrige, Vitamin12 enthaltende Lösung wird aus der Fermentationsflüssigkeit erhalten, welche bei der Erzeugung von Aureomycin durch S. aureofaciens erzeugt wird. Die Fermentationsflüssigkeit wird vorzugsweise nach der üblichen Butanolextraktion des Aureomycins und bei einem Gehalt von etwa 200 y Vitamin B12 je Liter in an sich bekannter Weise mit Aktivkohle behandelt (2 bis 4 g Aktivkohle je Liter Fermentationsflüssigkeit). Example I An aqueous solution containing vitamin 12 is prepared from the Fermentation liquor obtained, which in the production of aureomycin by S. aureofaciens is produced. The fermentation liquid is preferably after the usual butanol extraction of aureomycin and at a content of about 200 y Vitamin B12 per liter treated with activated charcoal in a manner known per se (2 to 4 g activated charcoal per liter of fermentation liquid).

Die Aktivkohle wird mit Leitungswasser gewaschen, um lösliche Salze, welche in der Fermentationsflüssigkeit vorhanden sind, zu entfernen, wonach das Vitamin B12 aus der Kohle eluiert wird. Dies wird dadurch bewerkstelligt, daß 1053 kg der Aktivkohle mit 37851 einer wäßrigen Lösung behandelt werden, welche etwa 7 Volumprozent Amylalkohol und 5 O/o Isopropylalkohol enthält.The activated carbon is washed with tap water to remove soluble salts, which are present in the fermentation liquid, after which the Vitamin B12 is eluted from the charcoal. This is accomplished by 1053 kg of activated carbon are treated with 37851 an aqueous solution, which is about Contains 7 percent by volume amyl alcohol and 5 O / o isopropyl alcohol.

Das Eluat wird auf etwa 284 1 im Vakuum eingedampft, um das Vitamin auf etwa 100 7 Vitamin B12 je ccm zu konzentrieren. Zu 500 ccm der so erhaltenen, dicken, dunkelbraunen, teerartigen Substanz werden 2000 ccm einer wäßrigen, mit Ammoniumsulfat gesättigten Lösung und 10 g Filterhilfe gegeben. Nach einstündigem Rühren bei Zimmertemperatur wird die Mischung über Nacht bei 40 stehengelassen. Die sich bildende Ausfällung wird abgetrennt und mit 2000 ccm 650/obigem Äthylalkohol extrahiert. Der Extrakt wird dann mit Salzsäure auf pn I,5 eingestellt und über Nacht stehengelassen. Die Lösung wird dann auf PH 4,5 eingestellt und zur Entfernung des Athylalkohols konzentriert. Die entstandene wäßrige Lösung wird dann folgendermaßen behandelt. The eluate is evaporated to about 284 l in vacuo to remove the vitamin to concentrate on about 100 7 vitamin B12 per cc. To 500 ccm of the thus obtained, thick, dark brown, tarry substance will be 2000 ccm of an aqueous, with Ammonium sulfate saturated solution and 10 g filter aid are added. After an hour Stirring at room temperature, the mixture is left to stand at 40 overnight. The precipitate that forms is separated off and mixed with 2000 cc of 650 / above ethyl alcohol extracted. The extract is then adjusted to pn 1.5 with hydrochloric acid and over Left for the night. The solution is then adjusted to pH 4.5 and allowed to remove of ethyl alcohol concentrated. The resulting aqueous solution then becomes as follows treated.

350 Volumteile wäßrige Zirkonerde (25 bis 300/( Zr O2 xH2O) x H, 0) werden mit 35oVolumteilenFilterhilfe und hinreichend Wasser (3 Volumteile) vermischt, so daß sich eine Aufschlämmung bildet. 350 parts by volume of aqueous zirconia (25 to 300 / (Zr O2 xH2O) x H, 0) are mixed with 35 parts by volume of filter aid and sufficient water (3 parts by volume), so that a slurry forms.

Diese Mischung wird in eine chromatographische Säule gegeben und 30 Minuten bei Atmosphärendruck absetzen gelassen. Dann wird an dem unteren Ende der Säule ein Vakuum angeschlossen, wonach sie mit etwas Wasser gewaschen wird.This mixture is placed in a chromatographic column and 30 Allowed to settle for minutes at atmospheric pressure. Then at the bottom of the The column is connected to a vacuum, after which it is washed with a little water.

700 ccm des konzentrierten Athylalkoholextraktes, der etwa 70 y Vitamin B12 je ccm enthält, wird durch die Zirkonerdesäule geleitet, wonach diese mit Wasser gewaschen wird, bis die gesamte darin zurückgehaltene rosa Farbe entfernt ist. Die klare, rosa Lösung enthält etwa 30y Vitamin B12 je ccm, und es wurde festgestellt, daß sie von den meisten ursprünglich darin enthaltenen Verunreinigungen frei und zur Verwendung bei vielen pharmazeutischen Anwendungen ohne weitere Konzentrierung oder Reinigung geeignet ist. 700 ccm of the concentrated ethyl alcohol extract, which contains about 70 y of vitamin B12 per ccm is passed through the zirconia column, after which it is filled with water washed until all of the pink color retained in it is removed. the clear, pink solution contains about 30y vitamin B12 per ccm, and it was found that they are free of most of the impurities originally contained therein and for use in many pharmaceutical applications without further concentration or cleaning is suitable.

Beispiel 2 Bei diesem Verfahren wird die gleiche Menge wäßriger Zirkonerde wie im Beispiel 1 mit einer gleichen Menge des konzentrierten Athylalkoholextraktes 20 Minuten lang aufgeschlämmt und dann filtriert. Der braune Kuchen wird mit wenig Wasser gewaschen, um das enthaltene Vitamin12 zu entfernen. Es wurde festgestellt, daß dieses Filtrat in ähnlicher Weise eine sehr verbesserte Reinheit aufwies. Example 2 This procedure uses the same amount of aqueous zirconia as in example 1 with a equal amount of the concentrated ethyl alcohol extract Slurried for 20 minutes then filtered. The brown cake comes with little Washed with water to remove the vitamin12 it contains. It was determined, that this filtrate was similarly much improved in purity.

Beispiel 3 Ein AktiVkohleadsorbat, das durch Behandlung der Fermentationsflüssigkeit von 5. aureofaciens erhalten wurde, wird durch Behandlung mit einer wäßrigen Lösung von gemischten niedrigeren Alkoholen, wie im Beispiel I beschrieben, extrahiert und der Extrakt konzentriert. Diese konzentrierte Lösung, welche etwa 1007 Vitamin B12 je ccm enthält, wird dann durch eine Säule von Zirkonerde geleitet, und es wird eine rosa Lösung erhalten, welche rein und für die pharmazeutische Anwendung geeignet ist. Bei diesem Verfahren wird die Ausfällung mit Ammoniumsulfat und die alkoholische Extraktion gemäß Beispiel 1 weggelassen, welche nur verwendet werden, wenn man es für notwendig erachtet, übermäßige Mengen an peptonähnlichen Substanzen und anderen etwa vorhandenen, in gesättigtem Ammoniumsulfat löslichen Verunreinigungen zu entfernen. Example 3 An active carbon adsorbate which, by treating the fermentation liquor from 5. aureofaciens is obtained by treatment with an aqueous solution from mixed lower alcohols as described in Example I, extracted and the extract is concentrated. This concentrated solution, which contains about 1007 vitamin B12 per cc is then passed through a column of zirconia and it becomes get a pink solution, which is pure and suitable for pharmaceutical use is. In this process, the precipitation with ammonium sulfate and the alcoholic Extraction according to Example 1 omitted, which can only be used if you have it deemed necessary excessive amounts of peptone-like substances and others remove any impurities that are soluble in saturated ammonium sulfate.

Beispiel 4 Zu 480 1 des hydrolysierten, mit 650/oigem Athylalkohol hergestellten B12-Extraktes (vgl. Beispiel I) werden 2001 Wasser und etwa 174,6 kg (Naßgewicht) Zirkoniumhydroxyd zugegeben. Der pe-Wert dieser Mischung wird mit Ammoniumhydroxyd (26 bis 28°/o) auf 8,7 eingestellt. Die Mischung wird dann 1 Stunde gerührt, etwa I4 Stunden stehengelassen und dann filtriert. Der Filterkuchen wird mit 100 1 Wasser gewaschen. Die Waschflüssigkeiten und das Filtrat werden dann vereinigt und ergeben 850 1 einer klaren, rosa Lösung, welche 50 y B12 je ccm enthält. Diese B12-Lösung wird zur Entfernung des Lösungsmittels konzentriert. Die entstandene Lösung ist ohne weitere Konzentration oder Reinigung zur Verwendung bei vielen pharmazeutischen Anwendungen geeignet. Example 4 To 480 1 of the hydrolyzed with 650% ethyl alcohol produced B12 extract (see. Example I) 2001 water and about 174.6 kg (wet weight) zirconium hydroxide added. The pe value of this mixture is given by Ammonium hydroxide (26 to 28%) adjusted to 8.7. The mixture is then 1 hour stirred, left to stand for about 14 hours and then filtered. The filter cake will washed with 100 l of water. The wash liquids and the filtrate are then combined and yield 850 liters of a clear, pink solution which contains 50 y B12 per ccm. These B12 solution is concentrated to remove the solvent. The resulting Solution is for use in many pharmaceuticals without further concentration or purification Applications suitable.

Der entstandene Filterkuchen, welcher braune Verunreinigungen enthält, wird folgendermaßen regeneriert: Er wird mit 200 1 Wasser aufgeschlämmt, und zu dieser Mischung werden langsam unter Rühren etwa 95,3 kg 930/oige Schwefelsäure gegeben. Die Mischung wird I Stunde gerührt. Zu dieser sauren Lösung von Zirkoniumsulfat werden etwa 34 kg Aktivkohle gegeben, das Rühren wird I Stunde fortgesetzt und anschließend wird filtriert und der Preßkudien mit 50 1 Wasser gewaschen. Der Filterkuchen wird verworfen. Das wasserhelle Zirkoniumsulfatfiltrat wird in Zirkoniumhydroxyd umgewandelt, indem man langsam unter Rühren eine 400/oige Natriumhydroxydlösung (etwa 6I,7kg [I36 lbs] NaOH mit Wasser auf 1541 aufgefüllt) zugibt. Der weiße, gelatinöse Niederschlag von Zirkoniumhydroxyd wird abfiltriert, mit 350 1 Wasser aufgeschlämmt und filtriert. Der erhaltene Zirkoniumhydroxydpreßkuchen ist zur Wiederverwendung geeignet. The resulting filter cake, which contains brown impurities, is regenerated as follows: it is slurried with 200 l of water, and closed About 95.3 kg of 930% sulfuric acid are slowly added to this mixture with stirring given. The mixture is stirred for 1 hour. About this acidic solution of zirconium sulfate about 34 kg of activated charcoal are added, stirring is continued for 1 hour and then is filtered and the Preßkudien washed with 50 l of water. The filter cake will discarded. The water-white zirconium sulfate filtrate is converted into zirconium hydroxide, by slowly stirring a 400% sodium hydroxide solution (about 61.7 kg [I36 lbs] NaOH made up to 1541 with water). The white, gelatinous precipitate zirconium hydroxide is filtered off, slurried with 350 l of water and filtered. The zirconium hydroxide press cake obtained is suitable for reuse.

Beispiel 5 Zu 444 g basischem »Zirkoncarhonat« wird I des im Beispiel 1 beschriebenen, konzentrierten Athylalkoholextraktes zugegeben und das Rühren I Stunde bei PH 6,I fortgesetzt. Die Mischung wird dann filtriert und der Filterkuchen mit Wasser gewaschen, bis das Filtrat farblos ist. Das Filtrat und die Waschflüssigkeiten werden vereinigt und zur Entfernung des Lösungsmittels auf ein Volumen von 250 ccm und einen Bt2-Gehalt von II6 y je ccm konzentriert. Example 5 To 444 g of basic “zirconium carbonate” becomes I des in the example 1 described, concentrated ethyl alcohol extract was added and stirring I Hour at PH 6, I continued. The mixture is then filtered and the filter cake washed with water until the filtrate is colorless. The filtrate and washing liquids are combined and to remove the solvent to a volume of 250 ccm and a Bt2 content of II6 y per ccm concentrated.

Wie oben erwähnt, ist das Adsorptionsverfahren unter Verwendung von Zirkoniumverbindungen auf wäßrige, Vitamin B12 enthaltende Lösungen mit einem pH-Wert zwischen 2,5 und 8,5 anwendbar. As mentioned above, the adsorption method is using Zirconium compounds to aqueous solutions containing vitamin B12 with a pH value applicable between 2.5 and 8.5.

Die Menge an Vitamin B12 in der wäßrigen Lösung kann in weiten Grenzen, von wenigen r Vitamin B12 je ccm bis zu verhältnismäßig Fkonzentrierten Lösungen dessellben, liegen. Demgemäß ist die Erfindung bei der Reinigung von Vitamin-BJ2-Lösungen, welche aus der ursprünglichen Fermentationsflüssigkeit erhalten werden, bis zu Stufen knapp vor der Kristallisation anwendbar.The amount of vitamin B12 in the aqueous solution can be varied within wide limits, from a few r of vitamin B12 per cc up to relatively concentrated solutions dessellben, lie. Accordingly, the invention is useful in the purification of vitamin BJ2 solutions, which are obtained from the original fermentation liquor, up to stages applicable just before crystallization.

Auf Grund der außerordentlich hohen Wirksamkeit der Zirkoniumverbindungen bei der Entfernung der Verunreinigungen ist die endgültige Kristallisation im allgemeinen nicht notwendig oder erwünscht. Die erfindungsgemäß hergestellten Produkte können nach den üblichen pharmakologischen Prüfungen auf Wirksamkeit, Reinheit, Gehalt an pyrogenen Stoffen u. dgl. als solche verwendet werden. Due to the extraordinarily high effectiveness of the zirconium compounds with the removal of the impurities, the final crystallization is generally not necessary or desired. The products produced according to the invention can according to the usual pharmacological tests for effectiveness, purity, content used as such on pyrogenic substances and the like.

Claims

PATENT CLAIMS: I. Process for the purification of impure aqueous Using solutions containing vitamin B12 and variants thereof of adsorbents, characterized in that the impure aqueous solution brings into contact with an essentially water-insoluble zirconium compound, whereby the impurities are adsorbed on the zirconium compound, and that the purified aqueous solution containing the vitamin B12 of the zirconium compound and the adsorbed thereon. Separates impurities.

2. The method according to claim I, characterized in that the pn value of the impure aqueous solution is maintained in the range of 5 to 9 during adsorption will.

3. The method according to claim I or 2, characterized in that the impure aqueous solution is passed through a column of the zirconium compound.

4. The method according to claim I, 2 or 3, characterized in that the impure aqueous solution is first pretreated by being known per se Way with one Bringing adsorbent for vitamin B12 into contact and the vitamin B ,, eluted from the adsorbent, after which the eluate with the zirconium compound is brought into contact.

5 The method according to claim I, 2 or 3, characterized in that the aqueous impure solution is first pretreated by adding ammonium sulfate, collects the resulting precipitate and dissolves it in an aqueous solution, after which the latter is brought into contact with the zirconium compound.

6. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized in, that zirconium hydroxide is used as the zirconium compound.

7. The method according to any one of claims I to 5, characterized in that that basic zirconium carbonate is used as the zirconium compound.

8. The method according to any one of claims 1 to 5, characterized in that that zirconium silicate is used as the zirconium compound.

9. The method according to any one of the preceding claims, characterized in, that the waste liquid used as an impure aqueous solution, which is from the Fermentation of a nutrient medium by an organism producing antibiotics.

10. The method according to any one of the preceding claims, characterized in, that the adsorption is in the range of o to 750 and preferably at room temperature performs.