DE895822C

DE895822C - Process for obtaining vitamin B.

Info

Publication number: DE895822C
Application number: DEM10915A
Authority: DE
Inventors: Arnold John Holland
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 1950-09-08
Filing date: 1951-09-08
Publication date: 1953-11-05

Description

Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B12 Die Erfindung bezieht sich aulf die Gewinnung von Vitamin Bt2, besonders auf Metallsalzkomplexe von Vitamin B12 und' ein Verfahren zur Nutzbarmachung dieser Verbindungen zwecks Gewinnung des Vitamins aus Konzentraten, die Verunreinigungen enthalten.Process for obtaining vitamin B12 The invention relates to aulf the extraction of vitamin Bt2, especially on metal salt complexes of vitamin B12 and 'a process for utilizing these compounds for the purpose of obtaining the Vitamins from concentrates that contain impurities.

Gemäß der Erfindung wird ein Metallcyanid-Vitamin-B12-Komplex aus einer wäßrigen Lösung, die Vitamin Bt2 enthält, ausgefällt; als Meta'llcyanild wird dabei Kupfer-, Kobalt-, Nickel-, Zink oder Silbercyanid verwendet. According to the invention, a metal cyanide-vitamin B12 complex is made from an aqueous solution containing vitamin Bt2 precipitated; as meta'llcyanild will copper, cobalt, nickel, zinc or silver cyanide are used.

Vitamin Bl2, eine therapeutisch wichtige Substanz, wird großtechnisch aus Fermentationsflüssigkeiten gewonnen, aus denen es in außerordentlich geringen Mengen isoliert wird. Das bisher übliche Verfahren zur Gewinnung von Vitamin B, 2 ist infolge der Gegenwart verschiedener Verunreinigungen, welche wegen ihrer gleichen Löslichkeitseigenschaften nur schwierig vom Vitamin zu trennen sind, kompliziert. Demgemäß ist es bisher als notwendig erachtet worden, die Vitamin B12 enthaltenden Konzentrate einem chromatographischen Reinigungsverfahren zu unterwerfen, bei dem als Adsorptionsmittel aktivierte Tonerde oder Aktivkohle zur Entfernung der Verunreinigungen und zur Gewinnung von Vitamin B12 diente. Vitamin Bl2, a therapeutically important substance, is becoming large-scale Obtained from fermentation fluids, from which it is obtained in extraordinarily small amounts Quantities is isolated. The previously common method of obtaining vitamin B, 2 is due to the presence of various impurities, which are due to their same Solubility properties are difficult to separate from the vitamin, complicated. Accordingly, it has heretofore been deemed necessary to contain those containing vitamin B12 Subjecting concentrates to a chromatographic purification process in which Alumina or activated carbon activated as adsorbent to remove the impurities and was used to obtain vitamin B12.

Indessen sind solche Verfahren in großem Maßstab schwierig auszuführen, und deshalb stellt. es einen erheblichen technischen Fortschritt dar, ein Mittel zur Vermeidung chromatographischer Verfahren zu finden.However, such processes are difficult to carry out on a large scale, and therefore poses. it represents a considerable technical advance, a means to avoid chromatographic processes.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren, durch welches die neuen, Vitamin B12 enthaltenden Komplexverbindungen erhalten werden können. Ein anderer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren, gemäß welchem die neuen Komplexverbindungen angewendet werden, um eine Trennung von Vitamin B12 von Verunreinigungen vorzunehmen, die in Vitaminkonzentraten, wie sie aus Fermentationsflüssigkeiten erhalten werden, enthalten sind. The invention relates to a method by which the new, Complex compounds containing vitamin B12 can be obtained. A another The invention relates to a process according to which the new complex compounds be used to separate vitamin B12 from impurities, those in vitamin concentrates as obtained from fermentation liquids, are included.

Es wurde gefunden, daß Vitamin B12 zusammen mit den Metallsazen ausgefällt wird, wenn die obengenannten wasserunlöslichen Schwermetallsalze in wäßrigen Lösungen, die Vitamin B12 enthalten, gebildet werden, Diese ausgefällten Metallsaze, die Vitamin B, 2 enthalten, haben anscheinend die Natur von Komplexen, in denen das Vitamin an das Metallsalz in einer Weise gebunden ist, die bisher noch nicht völlig aufgeklärt ist. Der unlösliche Komplex wird aus der Lösung durch übliche Maßnahmen, wie Filtration oder Zentrifugieren, getrennt. Aus dem so isolierten Produkt wird dann das Vitamin B12 leicht durch Methoden gewonnen, die weiter unten beschrieben sind. It was found that vitamin B12 precipitated along with the metal acids if the above-mentioned water-insoluble heavy metal salts in aqueous solutions, which contain vitamin B12 are formed, these precipitated metallic gelatin, the vitamin B, containing 2, apparently have the nature of complexes in which the vitamin is bound to the metal salt in a way that has not yet been fully elucidated is. The insoluble complex is removed from the solution by the usual means such as filtration or centrifugation, separately. The product isolated in this way then becomes the vitamin B12 is easily obtained by methods described below.

Gemäß einer besonderen Ausführungsform der erfindung liefern: diese unlöslichen Metallsalz-Vitamin-B12-Komplexe einen bequemen und einfachen Ausgangsstoff zur Gewinnung von Vitamin B12 aus dessen Konzentraten, in denen das Vitamin verunreinigt vorliegt. So wird beim Auflösen eines Vitamin-Bl2-haltigen Konzentrats in Wasser und beim Ausfällen eines Schwermetallcyanids in der verdünnten Lösung das Vitamin mit dem Cyanid ausgefällt, während die Masse der begleitenden Verunreinigungen in der Lösung zurückbleibt. Das Verfahren gemäß der Erfidnung zeigt einen einfachen Weg zur Reinigung von Vitamin-'312-haltigen Konzentraten und zur Isolierung des Vitamins. According to a particular embodiment of the invention: these insoluble metal salt-vitamin-B12-complexes a convenient and simple starting material to obtain vitamin B12 from concentrates in which the vitamin is contaminated is present. This is what happens when a concentrate containing vitamin Bl2 is dissolved in water and if a heavy metal cyanide precipitates in the dilute solution, the vitamin precipitated with the cyanide, while the bulk of the accompanying impurities in the solution remains. The method according to the invention shows a simple one Way of purifying concentrates containing vitamin '312 and isolating the Vitamins.

Es wurde gefunden, daß die wasserunlöslichen Salze von Schwermetallen, wie Kupfer-, Kobalt-, Nickel-, $Zink- und Silbercyanide, Kupfer- und Silberthiocyanate, Silber- und Bleijodide, Silberbromid, -triodid und -cyanat, zur Ausführung des Verfahrens nach der Erfindung geeigent sind. In der Praxis wird so vorgegangen, daß diese Schwermetallsalze in wäßrigen Lösungen, die Vitamin B12 enthalten, ausgefällt werden, wobei das Vitamin mit dem unlöslichen Metallsalz zugleich ausfällt. Zum Beispiel wird ein unreines Konzentrat mit einer geringen Menge Vitamin B12 in Wasser gelöst und ein wasserlösliches Sallz eines Schwermetatl'sl und ein wasserlösliches Salz eines geeigneten Anions der Lösung zugegeben, wodurch die Fällung des Schwermetallsalzes, das das mitgefällte Vitamin B12 enthält, hervorgeruten wird Das ausgefällte Produkt wird von der Lösung getrennt, und das Vitamin wird aus diesem Produkt durch Maßnahmen, die später im einzelnen beschrieben werden, isoliert. It has been found that the water-insoluble salts of heavy metals, such as copper, cobalt, nickel, zinc and silver cyanides, copper and silver thiocyanates, Silver and lead iodides, silver bromide, triodide and cyanate, for carrying out the process are suitable according to the invention. In practice, the procedure is that these heavy metal salts in aqueous solutions containing vitamin B12, precipitated, with the vitamin precipitates at the same time as the insoluble metal salt. For example, an unclean one becomes Concentrate with a small amount of vitamin B12 dissolved in water and a water-soluble one Salt of a heavy metal and a water-soluble salt of a suitable anion added to the solution, which causes the precipitation of the heavy metal salt that co-precipitated Containing vitamin B12, the precipitated product is removed from the solution separately, and the vitamin is removed from this product through action later in the individually described, isolated.

Die Anwendung von unlöslichen Kupfer-, Kobalt-, Nickel-, Zink- oder Silbercyaniden gestattet die Gewinnung der Hauptmenge des Vitamines B12. The application of insoluble copper, cobalt, nickel, or zinc Silver cyanides allow the majority of the vitamin B12 to be obtained.

Außerdem kann Vitamin Bt2 aus den Schwermetallcyanidniederschlägen leicht isoliert werden. Wenn auch zufriedenstellende Ergebnisse mit allen vorstehend erwähnten Schwermetallcyandien erzielt werden, so wurde dooh gefunden, daß die Anwendung von Kupfer- oder Zinkcyaniden besonders vorteilhaft ist. In Ausübund der Trennung von Vitamin B12 von Konzentraten mit Hilfe des Kupfercyanidkomplexes wird das Vitaminkonzentrat in Wasser aufelöst, zu welcher Lösung dann Kupfer- und Cyanidionen zugegeben werden, wobei die Bildung und die Ausfällung des Kupfercyanid-Vitamin-B12-Komplexes erfolgt. Wie Verscuhe ergeben haben, wird Vitamin Bl2 am vollständigsten ausgefällt, wenn ein großer Überschuß an Kupfercyanid angewendet wird, Die optimale Menge des zuzufügenden Kupfercyanids bängt natürlich von der Konzentration, und dem Reinheitsgrad der Lösung, aus der das Vitamin, Bl2 gewonnen werden soll, ab. Im allgemeinen ist es zweckmäßig, einen mehrhundertfachen Überschuß an Kupfer- und Cyanidionen pro Mol Vitamin B12 zuzugeben, wenn die Konzentration des Vitamins B12 sehr niedrig ist, d. h. I °/o oder weniger beträgt. Wenn Konzentrate mit etwa 5% Vitamin B12 vorliegen, so wird eine solche Menge Kupfer- und Cyanidionen zugegeben, daß die Lösung etwa 150 Mol Kupfercyanid pro Mol Vitamin Bf2 enthält. Außerdem ist es zur Sicherung einer optimalen Ausbeute an Vitamin B12 zweckmäßig, einen Überschuß an Kupferionen in der wäßrigen Lösung vorliegen zu haben; vorzugsweise beträgt der Übereschuß etwa 100%. In addition, vitamin Bt2 can be extracted from the heavy metal cyanide precipitates easily insulated. Albeit satisfactory results with all of the above Heavy metal cyanides mentioned are achieved, so it was found that the application of copper or zinc cyanides is particularly advantageous. In exercising the separation Vitamin B12 from concentrates with the help of the copper cyanide complex becomes the vitamin concentrate dissolved in water, to which solution copper and cyanide ions are then added, whereby the formation and precipitation of the copper cyanide-vitamin-B12-complex takes place. As shown by Verscuhe, vitamin Bl2 is most completely precipitated when a large excess of copper cyanide is used, the optimum amount of that to be added Copper cyanide depends of course on the concentration and the purity of the solution, from which the vitamin, Bl2 is to be obtained. In general it is advisable to a hundreds of times excess of copper and cyanide ions per mole of vitamin B12 to be added when the concentration of vitamin B12 is very low, d. H. I ° / o or less. If there are concentrates with about 5% vitamin B12, so will such an amount of copper and cyanide ions are added that the solution is about 150 moles Contains copper cyanide per mole of vitamin Bf2. It is also used to ensure optimal Yield of vitamin B12 appropriate, an excess of copper ions in the aqueous To have a solution; the excess is preferably about 100%.

Der maximale Vitamin-B12-Gehalt eines Konzentrats kann in bequemer Weise durch Messen der optischen Dichte einer Probe bestimmt werden, indem man Licht von 5500 Ä anwendet, welche Wellenlänge einen der charakteristischen Höhepunkte der Absorption von reinem Vitamin darstellt, und indem man den erhaltenen Wert mit der optischen Dichte von reinem Vitamin B12 (Elc*m 63) vergleicht. Der so erhaltene Wert wird auf einen Molekularwert umgerechnet, wobei I350 als angenähertes Molekulargewicht von Vitamin B1, angenommen wird. The maximum vitamin B12 content of a concentrate can be more convenient Way can be determined by measuring the optical density of a sample by looking at light of 5500 Å, which wavelength is one of the characteristic peaks represents the absorption of pure vitamin, and by using the value obtained with compares the optical density of pure vitamin B12 (Elc * m 63). The thus obtained Value is converted to a molecular value, with I350 being the approximate molecular weight of vitamin B1, is believed.

In Ausübung dieser Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens können Kupfer- und Cyanionen in jeder zugänglichen Form verwendet werden. Im allgemeinen ist es am bequemsten, ein Alkalimetallcyanid als Ausgangsstoff für Cyanionen und ein lösliches Kupfersalz, wie Kupfersulfat, als Ausgangs stoff für Kupferionen zu verwenden. In exercising this embodiment of the method according to the invention For example, copper and cyanions can be used in any accessible form. In general it is most convenient to use an alkali metal cyanide as a raw material for cyanions and a soluble copper salt, such as copper sulfate, as a starting material for copper ions use.

Andere übliche Ausgangsstoffe für diese Ionen können selbstverständlich vom Fachmann auch verwendet werden. Other common starting materials for these ions can of course be used can also be used by those skilled in the art.

Das Vitamin B12 kann aus dem Kupfercyanid-Vitamin-B12-Komplex-Niederschlag durch eine Reihe von einfachen Methoden gewonnen werden. The vitamin B12 can precipitate from the copper cyanide-vitamin B12 complex can be obtained through a number of simple methods.

Eine dieser Methoden besteht darin, eine wäßrige Cyanionen enthaltendelösungin einer solchen Menge zuzugeben, daß der ganze Kupfercyanidkomplex gelöst wird. Das Vitamin B12 wird dairn aus dieser Lösung durch Extraktion mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel, wie Butanol, Benzylakohol, mit einer Mischung von Kresol und Kohlenstofftetrachlorid u. dgl., in dem der gebildete Vitamin-B12-Cyanid-Komplex leicht löslich ist, abgeschieden. Ein anderes Verfahren zur Trennung von Vitamin B12 aus dem Niederschlag besteht darin, diesen innig mit einer wäßrigen Säure, z. B. verdünnter Essigsäure oder Salzsäure, in Verbidung zu bringen. Diese Säurelösungen lösen das Vitamin B12,, das dann aus der angesäuerten Lösung durch Extraktion mit einem mit Wasser nicht mischbaren organischen Lösungsmittel der vorstehend erwähnten Art isoliert werden kann. Statt dessen kann des Vitamin B12 auch aus dem Kupfercyanid-B12-Komplex durch unmittelbare extraktion mit einem geeigneten orgeanischen Lösungsmittel, wie Kresol oder Benzylalkohol, gewonnen werden. One such method is to use an aqueous solution containing cyanions to add such an amount that the entire copper cyanide complex is dissolved. That Vitamin B12 is not made from this solution by extraction with water miscible organic solvents such as butanol, benzyl alcohol, with a mixture of cresol and carbon tetrachloride and the like, in which the vitamin-B12-cyanide complex formed is easily soluble, deposited. Another method of separating vitamin B12 from precipitation consists in this intimately with an aqueous Acid, e.g. B. dilute acetic acid or hydrochloric acid to bring in connection. These Acid solutions dissolve the vitamin B12, which then from the acidified solution Extraction with a water-immiscible organic solvent of the above mentioned type can be isolated. Instead, the vitamin B12 can also be obtained from the Copper cyanide-B12 complex by direct extraction with a suitable organic Solvents such as cresol or benzyl alcohol can be obtained.

Das Vitamin B12 wird dann aus den entstehenden Lösungsmittelextrakten in üblicher Weise erhalten.The vitamin B12 is then made from the resulting solvent extracts received in the usual way.

Wenn das aus dem Kupfercyanid-Vitamin-B12-Komplex-Niederschlage gewonnene Vitamin B12 noch beträchtliche Megen an Verunreinigungen enthält, wie es der Fall sein kann, wenn von einem. sehr unreinen Konzentrat ausgegangen wird, empfiehlt es sich, das gewonnene Produkt einem zweiten Reinigungsverfahren durch wiederholte Fällung von Vitamin B12 als Kupfercyanidkomplex zu unterwerfen. If that is obtained from the copper cyanide-vitamin B12 complex precipitate Vitamin B12 still contains considerable amounts of impurities, as does the case can be if from one. very impure concentrate is recommended the product obtained was repeated through a second purification process Subject to precipitation of vitamin B12 as a copper cyanide complex.

In entsprechender Weise können Zink-, Kobalt-, Nickel- und Silbercyanide an Stelle von Kupfercyaniden zur Isolation von Vitamin B12 aus dessen Konzentraten angewendet werden. Zinc, cobalt, nickel and silver cyanides can be used in a corresponding manner instead of copper cyanides to isolate vitamin B12 from its concentrates be applied.

Die folgenden Beispiele veranschaulichen einige spezielle Ausführungsformen der Erfindung. The following examples illustrate some specific embodiments the invention.

Beispiel I Ein festes Vitamin-B12-Konzentrat von 1,3 g mit einem Gehalt von 155 mg (11,9%) an potentiellem Vitamin B12 wird in 100 ccm Wasser gelöst. Dieses Vitamin-B12-Konzentrat war gewonnen aus einer Fermentationsflüssigkeit, die durch Züchtung eines Stammes von S.griseus hergestellt wurde. Zu dieser Lösung wurden 31 ccm einer einmolaren wäßrigen Natriumcyanidlösung und 3I ccm einer einmolaren wäßrigen Kupfersulfatlösung zugegeben. Der Kupferyanid- Vitamin-B12-Komplex-Niederschlag bildet sich augenblicklich. Example I A solid vitamin B12 concentrate of 1.3 g with a Content of 155 mg (11.9%) of potential vitamin B12 is dissolved in 100 ccm of water. This vitamin B12 concentrate was obtained from a fermentation liquid that was produced by breeding a strain of S.griseus. To this solution were 31 ccm of a one molar aqueous sodium cyanide solution and 3I ccm of a one molar aqueous copper sulfate solution added. The copper anide-vitamin B12 complex precipitate forms instantly.

Der Niederschlag wurde durch Filtration abgeschieden, mit 30 ccm Wasser und anschließend mit 100 ccm einer 15%iger wäßrigen Essigsäure geweaschen. Der Niederschlage wurde mit einer Gesamtmenge von 400 ccm einer 50%igen wäßrigen Essigsäure extrahiert. Statt dessen kann auch eine größere Menge stärker verdünnter Säure angewendet werden. DieExtrakte werden dann mit iiooccm Wasser verdünnt. Diese Lösung wird mit 650 ccm einer Mischung von Kresol und Kohlenstofftetrachlorid im Verhältnis 1:1 extrahiert. Zum Lösungsmittelextrakt werden dann 1 Raumteil Aceton und 2 Raum-teile Ather zugegeben. Es entsteht ein Niederschlag, der durch Filtration gewonnen wird. The precipitate was collected by filtration, with 30 cc Water and then washed with 100 cc of 15% aqueous acetic acid. The precipitate was with a total amount of 400 ccm of a 50% aqueous Acetic acid extracted. Instead, a larger amount can be diluted more strongly Acid can be applied. The extracts are then diluted with 100 cm of water. These Solution is with 650 ccm of a mixture of cresol and carbon tetrachloride im Ratio 1: 1 extracted. 1 part by volume of acetone then becomes the solvent extract and 2 parts of ether are added. A precipitate is formed, which is removed by filtration is won.

Der Niederschlag wird in 130 ccm Methanol gelöst, worauf I000 ccm Äther zugegeben werden. Die entstandene Fällung wird gleichfalls durch Filtration abgeschieden. Ihr Gewicht beträgt 380 mg und enthält I40 mg (36,80/0) an potentiellem Vitamin B12.The precipitate is dissolved in 130 cc of methanol, whereupon 1000 cc Ether can be added. The resulting precipitate is also filtered through deposited. Her weight is 380 mg and contains I40 mg (36.80 / 0) of potential Vitamin B12.

Diese Fällung von 380 mg wird in 1-00 ccm Wasser gelöst, worauf 28 ccm einmolare wäßrige Natriumcyanidlösung und 28 ccm einmolare wäßrige Kupfersulfatlösung zugegeben werden. Der gebildete Niederschlag wird zunächst mit 20 ccm Wasser und dann mit 50 ccm I5°/oiger wäßriger Essigsäure gewaschen. Der Niederschlag wird mit einer Gesamtmenge von 200 cmm 50%iger wäßriger Essigsäure extrahiert und dann mit 120 ccm Wasser gewaschen. This precipitation of 380 mg is dissolved in 1-00 ccm of water, whereupon 28 ccm one molar aqueous sodium cyanide solution and 28 ccm one molar aqueous copper sulfate solution be admitted. The precipitate formed is first with 20 ccm of water and then washed with 50 cc of 15% aqueous acetic acid. The precipitate is with a total of 200 cmm 50% aqueous acetic acid extracted and then with Washed 120 cc of water.

Die Extrakte und Waschwässer werden darauf mit Wasser auf 1000 ccm verdünnt. Diese Lösung wird mit 500 ccm einer Kresol-Kohlenstofftetrachlorid-Mischung im Verhältnis 1:1 extrahiert. Zum Extrakt werden 1 Raumteil Aceton und 3 Raumteile Äther zugegeben. Der entstandene Niederschlag wird abgeschieden und in 170 ccm Methanol gelöst, worauf 1700 ccm Äther zugegeben werden. Die hierauf entstehende Fällung wird durch Filtration abgetrennt. Ihr Gewicht beträgt 247 mg und enthält, wie analytisch ermittelt wurde, I30 mg (52,70/0) an potentiellem Vitamin B12.The extracts and wash water are then mixed with water to 1000 ccm diluted. This solution is mixed with 500 cc of a cresol-carbon tetrachloride mixture extracted in a ratio of 1: 1. 1 volume acetone and 3 volume parts become the extract Ether added. The resulting precipitate is deposited and dissolved in 170 cc of methanol dissolved, whereupon 1700 cc of ether are added. The resulting precipitate is separated by filtration. Her weight is 247 mg and includes how analytical was determined to be 130 mg (52.70 / 0) of potential vitamin B12.

Die Fällung von 247 mg wird in 0,3 ccm Wasser gelöst. Man läßt die Lösung über Nacht stehen. Die gebildeten Kristalle werden durch Filtration gewonnen und mit 0,5 ccm kalten Wassers (0°) gewaschen. Das Filtrat und das Waschwasser enthalten nach der Analyse 24 mg an potentiellem Vitamin B12. Die Kristalle werden in 9,5 ccm Wasser gelöst, und die Lösung wird mit 110 ccm Aceton verdünnt, Beim Kühlen auf 0° und Stehenlassen bilden sich Kristalle, die man durch Filtrieren sbtrennt und trocknet. Die Kristalle wiegen 103,3 mg und stellen zu etwa 95 bis 98% reines Vitamin B12 dar. The precipitation of 247 mg is dissolved in 0.3 cc of water. You let them Solution stand overnight. The crystals formed are collected by filtration and washed with 0.5 ccm of cold water (0 °). Contain the filtrate and wash water after the analysis 24 mg of potential vitamin B12. The crystals are in 9.5 cc of water is dissolved, and the solution is diluted with 110 cc of acetone, while cooling at 0 ° and left to stand, crystals form, which are separated by filtration and dries. The crystals weigh 103.3 mg and are approximately 95 to 98% pure Vitamin B12.

Beispiel 2 Zu 100 ccm eines wäßrigen Vitamin-B12-Konzentrats, das aus einem Verfahren zur gewinnung von Vitamin Bl2 aus einer S.-griseus-Fermentationsflüssigkeit stammt und etwa 30 bis 40 mg Vitamin Bt2 enthält, werden 50 ccm einer zweimolaren wäßrigen Zinkchloridlösung und 50 ccm einer einmolarn wäßrigen Kaliumcyanidlösung zugegeben. Example 2 To 100 cc of an aqueous vitamin B12 concentrate which from a process for the extraction of vitamin Bl2 from an S. griseus fermentation liquid and contains about 30 to 40 mg of vitamin Bt2, 50 cc of a two molar aqueous zinc chloride solution and 50 ccm of a one molar aqueous potassium cyanide solution admitted.

Der Zinkcyanid-Vitamin-B12-Komplex-Niederschlag bildet sich augenblicklich.The zinc cyanide-vitamin B12 complex precipitate forms immediately.

Der Niederschlag wird durch Filtration abgeschieden, mit Wasser gewaschen und dann mit 660 ccm 0,25 normaler wäßriger Salzsäure extrahiert. Die Sürelösung wird nacheinander mit I32 und 60 ccm einer Mischung von Kresol und' Petroläther (30 bis 600) im Verhältnis 1:1 extrahiert; hierbei liegt ein dreiphasiges Flüssig keitssystem aus Wasser, Kresol und Petroläther vor. Die vereinigten Lös ungsmittelextrakte werden mit etwa 500 ccm Wasser gewaschen, dann wird zu den Extrakten 190 ccm Wasser und 95 ccm n-Butanol zugegeben, wodurch die Lösungsmittel in einer Phase vereint und die aktiven Stoffe in die wäßrige Schicht übergführt werden. Nach Trannung der beiden Phasen wird die Lösungsmittelphase mehrfach mit Wasser in der Gesamtmenge von r8o ccm extrahiert. Die wäßrigen Extrakte werden vereint und auf ein geringes Volumen konzentriert. Dann wird Aceton zur Ausfällung der aktiven Bestandteile zugegeben. Die Untersuchung des Niederschlages zeigt, daß eine wesentliche Reinigung stattgefunden hat und daß das Vitamin B12 in guter Ausbeute vorliegt. The precipitate is collected by filtration, washed with water and then extracted with 660 cc of 0.25 normal aqueous hydrochloric acid. The acid solution is successively with 132 and 60 cc of a mixture of cresol and petroleum ether (30 to 600) extracted in a ratio of 1: 1; here is a three-phase liquid system of water, cresol and petroleum ether. The combined solvent extracts are washed with about 500 cc of water, then 190 cc of water is added to the extracts and 95 cc of n-butanol added, whereby the solvents combined in one phase and the actives are transferred to the aqueous layer. After the In both phases, the solvent phase is repeatedly mixed with the total amount of water extracted from r8o cc. The aqueous extracts are combined and reduced to a small one Volume concentrated. Acetone is then added to precipitate the active ingredients. The investigation of the precipitation shows that a substantial Purification has taken place and that the vitamin B12 is present in good yield.

Beispiel 3 Weitere wäßrige Vitamin-B12-Konzentrate der in Beispiel 1 und 2 beschriebenen Art werden unter Anwendung von Niederschlägen mit Kobaltcyaniden, Nickelcyanilden oder Sibercyaniden gereinigt. Example 3 Further aqueous vitamin B12 concentrates from the example 1 and 2 are described using precipitation with cobalt cyanides, Nickel cyanides or silver cyanides purified.

In jedem Fall wird zunächst ein wasserlösliches Cyanid, wie Kaliumcyanid, zur Vitamin-B12-haltigen Lösung zugegeben, und dann erst wird ein wasserlösliches MetaLlsalz z. B. als Nitrat zugegeben. Die angewendeten Metall salz- und Cyanidmengen sind von der gleichen Größenordnung wie in den Beispielen 1 oder 2 angegeben. Nach jedem Niederschlag ergibt sich, daß im wesentlichen die Gesamtmenge an potentiellem Vitamin B12 aus der Lösung abgeschieden ist.In any case, first a water-soluble cyanide, such as potassium cyanide, is added to the vitamin B12-containing solution, and only then does it become a water-soluble one Metal salt e.g. B. added as nitrate. The amount of metal used, salt and cyanide are of the same order of magnitude as given in Examples 1 or 2. To Each precipitate shows that essentially the total amount of potential Vitamin B12 is deposited from the solution.

Die Niederschläge werden, in jedem Fall durch Filtration und Anwendung von Diatomeenerde als Hilfsfiltersubs, tanz abgetrennt. Bei der Extraktion des Filterkuchens mit Ammoniumhydroxyd, das in 1 bis 6 normaler Konzentration angewender wird, ergibt sich, daß die Extrakte in allen Fällen etwa die Gesamtmenge an potentiellem Vitamin Bi2 enthalten. Die alkalischen Lösungen werden auf PH7 eingestellt und dann mit Kresol-Kohlenstofftetrachlorid extrahiert und, wie in Beispiel I beschrieben, ausgefällt. Eine deutliche Reinigung, die mit der durch Ausfällung des Kupfercyanid-Vitamin-B12-Komplexes vergleichbar ist, ist in jedem Fall festzustellen, wobei natürlich ein geringfügiger Verlust an Vitamin Bj2 entsteht. The precipitates are, in each case, by filtration and application separated from diatomaceous earth as auxiliary filter subsets. During the extraction of the filter cake with ammonium hydroxide applied in 1 to 6 normal concentrations that the extracts in all cases approximately the total amount of potential vitamin Bi2 included. The alkaline solutions are adjusted to PH7 and then with Extracted cresol carbon tetrachloride and, as described in Example I, precipitated. A clear cleaning that comes with the precipitation of the copper cyanide-vitamin-B12-complex is comparable can be determined in each case, although of course a minor one Loss of vitamin Bj2 occurs.

Claims

PATENT CLAIMS: 1. Process for obtaining vitamin B12, thereby characterized in that a metal cyanide-vitamin B12 complex is formed from an aqueous solution containing vitamin Bi2 is precipitated, with alis metal cyanide component copper, cobalt, @ nickel, zinc or Silver cyanide is used.

2. The method according to claim I, characterized in that the off, precipitation is carried out from aqueous solutions containing impurities.

3. The method according to claim I or 2, characterized in that the insoluble metal cyanide-vitamin-B12-complex deposited and the vitamin IB12 is obtained from the complex.

4. The method according to claims I to 3, d; a characterized in that Copper cyanide is formed in the solution containing vitamin B12 and a copper cyanide-vitamin B12 complex is knocked down.

5. Process according to Claims I to 3, characterized in that Zinkcyani'd is formed in the solution containing vitamin B12 and a zinc cyanide vitamin Bk, -I (complex is knocked down.

6. Process according to Claims I to 4, characterized in that a copper cyanide-vitamin B12 complex from an aqueous solution of a vitamin B12-containing Concentrate is precipitated ', the precipitated complex with an aqueous acid solution the aqueous acid solution is brought into intimate contact to extract the vitamin B12 extracted with a water-immiscible solvent and vitamin B12 from the separated, water-insoluble solvent is obtained.

7. The method according to claims I to 3 or 5, characterized in that that a zinc cyanide-vitamin B12 complex from an aqueous solution of a vitamin B12-containing Concentrate precipitated, the precipitated complex with an aqueous acid solution for extraction of vitamin B12 brought into intimate contact and the aqueous acid solution with a extracted in water immiscible solvent and the vitamin B12 from the separated, immiscible solvent is obtained.