Verfahren zur Gewinnung von männliche und Corpus-luteum-Hormonwirksamkeit
besitzenden Stoffen Windaus teilt in den Berichten der Deutschen Chemischen Gesellschaft,
Bd.3g, S. 520, mit, daß Cholestenon im Gegensatz zu Cholesterin, das durch
Chromsäure leicht in Oxycholestenon übergeführt wird, in der Kälte gegen Chromsäure
beständig sei. Auch in der Wärme erfolge ein Angriff nur langsam, denn auch nach
Verbrauch von 6 Atomen Sauerstoff verblieben noch 5o bis 6o °,l, Cholestenon unverändert.
Diese Bemerkungen lassen im Verein mit der Tatsache, daß auch das Ringsystem des
Cholesterins bei einer stärkeren Einwirkung von Chromsäure, bei der eine Aboxydation
der aliphatischen Seitenkette erfolgt, aufgespalten wird, nur den Schluß zu, daß
bei der Oxydation des Cholestenons mit Chromsäure trotz der Unvollständigkeit der
Reaktion ein tiefer gehender Eingriff in das Molekül unter Sprengung einer Ringdoppelbindung
stattfindet.Process for obtaining male and corpus luteum hormone-active substances Windaus reports in the reports of the German Chemical Society, Vol.3g, p. 520 , that cholestenone, in contrast to cholesterol, which is easily converted into oxycholestenone by chromic acid, the cold is resistant to chromic acid. Even in the warmth, an attack takes place only slowly, for even after 6 atoms of oxygen have been consumed, 50 to 60 ° .1, cholestenone remains unchanged. These remarks, in conjunction with the fact that the ring system of cholesterol is also split up under a stronger action of chromic acid, during which the aliphatic side chain is oxidized, only allows the conclusion that the oxidation of cholestenone with chromic acid despite the incompleteness the reaction takes place a deeper intervention in the molecule by breaking a ring double bond.
Wider Erwarten wurde nun gefunden, daß bei der Oxydation des Cholestenons
mit Chromsäure in der Wärme das q.-Ring-System mehr oder weniger erhalten bleibt,
auch wenn die aliphatische Seitenkette zum Teil oder ganz aboxydiert wird. Dran
erhält dabei, wie weiter gefunden wurde, physiologisch sehr interessante Körper,
da ein 4-Ring-System enthaltende Diketone gebildet werden, die die Eigenschaften
von Sexualhormonen besitzen. Vorliegendes Verfahren hat nun die Anreicherung und
Isolierung der bei der Oxydation.des Cholestenons mit Chromsäure in der Wärme entstehenden
4-Ring-Diketone zum Gegenstand und besteht darin, daß man zunächst die aus der aliphatischen
Seitenkette entstandenen Spaltstücke, z. B. durch Wasserdampfdestillation, entfernt
und hierauf, gegebenenfalls nach Abtrennen von sich beim Eindampfen ausscheidendem
unverändertem Ausgangsmaterial, die Lösung mit Ketoreagenzien behandelt. Die dabei
entstehenden, vornehmlich die wirksamen Bestandteile darstellenden Diketone und
das ein Monoketon darstellende Ausgangsmaterial werden durch Fraktionierung getrennt,
worauf die wirksamen Diketone aus den sie enthaltenden Verbindungen auf bekannte
Weise in Freiheit gesetzt werden können.Contrary to expectations, it has now been found that in the oxidation of cholestenone
with chromic acid in the warmth the q.-ring system is more or less preserved,
even if the aliphatic side chain is partially or completely oxidized. Your turn
receives, as was further found, physiologically very interesting bodies,
because diketones containing a 4-ring system are formed which have the properties
of sex hormones. The present process now has the enrichment and
Isolation of the heat produced by the oxidation of cholestenone with chromic acid
4-ring diketones to the subject and consists in that one first of all those from the aliphatic
Side chain resulting split pieces, z. B. by steam distillation removed
and then, optionally after separating off from the evaporation
unchanged starting material, the solution treated with keto reagents. The one with it
resulting, mainly the active ingredients, which are diketones and
the starting material representing a monoketone is separated by fractionation,
whereupon the active diketones from the compounds containing them on known
Wise can be set in freedom.
Das durch eine Aboxydation der ganzen aliphatischen Seitenkette entstehende
Diketon erweist sich sowohl am Hahnenkamm als auch an der Samenblase der kastrierten
Maus als männlich wirksames Hormon und dürfte dem Androstendion entsprechen. Das
durch unvollständige Aboxydation der Seitenkette erhaltene Diketon besitzt die physiologische
Wirkung und vermutlich auch die Konstitution eines Corpusluteum-Hormons. Je nach
den Versuchsbedingungen bei der Oxydation und der Aufarbeitung
brauchen
natürlich nicht in jedem Fall beide wirksame Diketone nebeneinander zu entstehen
und erhalten zu werden. Beispiel
Ein durch Oxydation einer Lösung von q
Cholestenon in 21 Eisessig mittels einer Lös ü
von 67 g Chromsäureanhydrid in 16o ccm Eis-
essig und 20 ccm Wasser bei etwa 50' erhaltenes Reaktionsgemisch wird der
Vakuumdestillation unterworfen, bis der Eisessig abdestilliert ist. Hierauf wird
mit Wasser aufgenommen und mehrmals ausgeäthert. Der ätherische Auszug wird nach
Waschen mit Wasser mit verdünnter Natronlauge und nochmals mit Wasser eingedampft;
der Rückstand wird einer Wasserdampfdestillation unterworfen und wiederum mit Äther
aufgenommen. Nach dem Trocknen mit Natriumsulfat wird der Äther größtenteils verdampft
und der etwa 25 g betragende Rückstand im Eisschrank stehengelassen. Dabei kristallisieren
ungefähr io g des unverändert gebliebenen Ausgangsmaterials aus, von dem abgesaugt
wird. Das Filtrat wird mit Alkohol verdünnt und mit einer alkoholischen Lösung von
Semicarbazidacetat versetzt, worauf etwa 1/2 Stunde auf dem Wasserbad erwärmt wird.
Dabei scheiden sich 2o g eines in der Hauptsache oder ausschließlich aus dem Semicarbazon
noch vorhandenen unveränderten Cholestenons und den Disemicarbazonen der wirksamen
Verbindungen bestehenden Gemisches aus. Durch fraktionierte Kristallisation gelingt
es, die Disemicarbazone der wirksamen Verbindungen abzutrennen. Zuerst wird aus
Eisessig umkristallisiert, dann in Benzol gelöst
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sauren Diketone. Diese können als Semicarbazone oder in Form anderer Verbindungen
oder auch frei, z. B. durch Hochvakuumdestillation, weiter voneinander getrennt
werden.The diketone produced by the aboxidation of the entire aliphatic side chain proves to be a male hormone both on the cockscomb and on the seminal vesicle of the castrated mouse and is likely to correspond to androstenedione. The diketone obtained by incomplete oxidation of the side chain has the physiological effect and presumably also the constitution of a corpus luteum hormone. Depending on the experimental conditions during the oxidation and the work-up, it is of course not necessary in every case for both effective diketones to arise and be maintained next to one another. example A solution obtained by oxidation of a solution of q
Cholestenone in 21 glacial acetic acid by means of a loosening u
of 67 g of chromic anhydride in 16o ccm of ice
vinegar and 20 ccm of water at about 50 ' obtained reaction mixture is subjected to vacuum distillation until the glacial acetic acid has distilled off. It is then taken up with water and extracted with ether several times. After washing with water, the essential extract is evaporated with dilute sodium hydroxide solution and again with water; the residue is subjected to steam distillation and again taken up with ether. After drying with sodium sulfate, most of the ether is evaporated and the residue, which is about 25 g, is left to stand in the refrigerator. Approximately 10 g of the unchanged starting material crystallize out, which is then suctioned off. The filtrate is diluted with alcohol and mixed with an alcoholic solution of semicarbazide acetate, whereupon it is heated on the water bath for about 1/2 hour. In this case, 20 g of a mixture consisting mainly or exclusively of the semicarbazone still present unchanged cholestenone and the disemicarbazones of the active compounds are eliminated. Fractional crystallization succeeds in separating the disemicarbazones from the active compounds. First it is recrystallized from glacial acetic acid, then dissolved in benzene mi n la 7e "sets that in
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acidic diketones. These can be used as semicarbazones or in the form of other compounds or also freely, e.g. B. by high vacuum distillation, further separated from each other.