DE632366C

DE632366C - Process for the preparation of the yellow oxidizing ferment

Info

Publication number: DE632366C
Application number: DESCH101390D
Authority: DE
Original assignee: Schering Kahlbaum AG
Current assignee: Schering Kahlbaum AG
Priority date: 1932-12-16
Filing date: 1932-12-16
Publication date: 1936-07-07

Description

Verfahren zur Darstellung des gelben Oxydationsfermentes Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Darstellung des gelben Oxydationsfermentes. Als Ausgangsmaterial dienen Lösungen, die man aus tierischen oder pflanzlichen Zellen gewinnt und die neben anderen Fermenten und Zeltbestandteilen auch dieses sauerstoffübertragende Ferment enthalten.Process for the preparation of the yellow oxidizing ferment. The invention relates to a process for the preparation of the yellow oxidizing ferment. As a starting material serve solutions which are obtained from animal or plant cells and which in addition to other ferments and tent constituents, this also carries oxygen Ferment included.

Die genannten Lösungen lassen sich aus Hefe, .aus Bakterien, wie Essigsäurebakterien (Bacterium Pasteurianum), Milchsäurebakterien (Bacterium Delbrückii), Buttersäurebakterien (Clostridium butyricum), und aus anderem Zeltmaterial in bekannter Weise herstellen.The solutions mentioned can be obtained from yeast, from bacteria such as acetic acid bacteria (Bacterium Pasteurianum), lactic acid bacteria (Bacterium Delbrückii), butyric acid bacteria (Clostridium butyricum), and made from other tent material in a known manner.

Versetzt man solche Lösungen mit ausreichenden Mengen von mit Wasser mischbaren organischen Lösungsmitteln, wie Aceton, Methanol, Äthylalkohol u. a., so werden die Begleitstoffe, nämlich die 4ndern Fernente und Zeltbestandteile, ausgefällt, während das gelbe Oxydationsferment in Lösung bleibt. Durch Zusatz weiterer Mengen solcher mit Wasser mischbaren Lösungsmittel und durch Umfällen aus wäßriger Lösung mit den letzteren, Sättigen mit Kohlensäure und erneute Behandlung einer wäßrigzn Lösung des ausgefallenen Stoffes mit Lösungsmitteln der gekennzeichneten Art wird das Ferment in reinen Zustande als gelbes Pulver abgeschieden. Das so erhaltene Produkt findet für therapeutische Zwecke, z. B. zur Beeinflussung des Stoffwechsels sowie als accessorischer Nährstoff. Verwendung.If such solutions are mixed with sufficient amounts of water miscible organic solvents such as acetone, methanol, ethyl alcohol and others, in this way the accompanying substances, namely the other distant duck and tent components, are precipitated, while the yellow oxidizing ferment remains in solution. By adding further amounts such water-miscible solvents and by reprecipitation from aqueous solution with the latter, saturation with carbonic acid and renewed treatment of an aqueous solution Solution of the precipitated substance with solvents of the type indicated the ferment deposited in its pure state as a yellow powder. The thus obtained Product is used for therapeutic purposes, e.g. B. to influence the metabolism as well as an accessory nutrient. Use.

Beispiel 11 frischen Lebedew-Saftes aus Bierhefe, erhalten nach der Vorschrift von A. v. L e b e -dew, Hoppe-Seyler 73, 447, igii, wird mit 400 ccm Bleisubacetat (Liquor Plumbi subacetici D. A. B. 6) versetzt und unter Zusatz von etwas Octanol kräftig geschüttelt. Nach 12stündigem Stehen bei o° zentrifugiert man und fällt aus der überstehenden Lösung, die das Ferment enthält, das überschüssige Blei mit Zoo ccm einer Phosphatmischung aus 85 Volumenteilen m/2-Natriumdiphosphat und 15 Volumenteilen m/2-Kaliummonophosphat. Das ausgefällte Bleiphosphat wird abzentrifugiert und die erhaltene Lösung, die das Ferment enthält, dem. Abscheidungsverfahren entsprechend der Erfindung unterworfen.Example 11 fresh Lebedev juice from brewer's yeast obtained after Regulation by A. v. L e b e -dew, Hoppe-Seyler 73, 447, igii, is 400 cc Lead subacetate (Liquor Plumbi subacetici D. A. B. 6) added and with the addition of shaken some octanol vigorously. After standing for 12 hours, centrifuged at 0 ° one and falls from the supernatant solution, which contains the ferment, the excess Lead with zoo cc of a phosphate mixture of 85 parts by volume of m / 2 sodium diphosphate and 15 parts by volume of m / 2 potassium monophosphate. The precipitated lead phosphate is centrifuged off and the obtained solution containing the ferment, dem. Deposition process accordingly subject to the invention.

Zu 1 1 dieser Lösung werden unter Rühren bei o° 5oo ccm Aceton zugegeben. Die Lösung wird darauf 24 Stunden bei o° stehengelassen. Der abgeschiedene weiße Niederschlag wird durch Abzentrifugieren entfernt. Die überstehende Lösung, die das gelbe Oxydationsferment enthält, wird finit weiteren 500 cccn Aceton versetzt, wobei das gesamte gelbe Oxydationsferment als zähes, gelbes Öl ausfällt. -,Nach dem Abgießen des Acetons wird das Öl wieder in 5oo ccm Wasser gelöst und die wäßrige Lösung mit 250 Ccm Aceton bei o° gefällt. Nach dem Abschleüdern wird die Lösung mit Kohlensäure gesättigt und mit weiteren 25o ccm Aceton versetzt. Diese Behandlung, Vorfällung mit Aceton, Sättigen der verbliebenen wäßrigen Lösung mit Kohlensäure und endliche Ausfällung des Fermentes durch Zusatz weiterer Mengen von Aceton kann noch -ein- oder zweimal wiederholt werden. Die Umwand= Jung des öligen Produktes in ein gelbes Pulvet wird durch wiederholtes Auflösen in, Wasser und' Ausfällen mit eisgekühltem Methanol bei o° durchgeführt. Man saugt das Pulver schließlich ab, wäscht es mit absolutem Methanol und trocknet es im Vakuumetsiccator mit Schwefelsäure.To 1 liter of this solution, 500 cc of acetone are added with stirring at 0 °. The solution is then left to stand at 0 ° for 24 hours. The deposited white precipitate is removed by centrifugation. The supernatant solution, which contains the yellow oxidizing ferment, is finely added a further 500 cccn acetone, the entire yellow oxidizing ferment precipitating out as a viscous, yellow oil. After the acetone has been poured off, the oil is dissolved again in 500 cc of water and the aqueous solution is precipitated at 0 ° with 250 cc of acetone. After spinning off, the solution is saturated with carbonic acid and a further 250 cc of acetone is added. This treatment, pre-precipitation with acetone, saturation of the remaining aqueous solution with carbonic acid and final precipitation of the ferment by adding further amounts of acetone can be repeated once or twice. The conversion of the oily product into a yellow pulvet is carried out by repeated dissolving in "water" and "precipitation" with ice-cold methanol at 0 °. Finally, the powder is suctioned off, washed with absolute methanol and dried in a vacuum setter with sulfuric acid.

Bei dem Verfahren ist gute Kühlung der Flüssigkeiten bei Zugabe des Acetons oder Methanols wesentlich, da sonst Verluste durch Farbstoffabspaltung eintreten.The process requires good cooling of the liquids when adding the Acetone or methanol is essential, as otherwise losses occur through splitting off of the dye.

Aus i 1 Lebedew-Saft werden auf diese Art und Weise etwa ro bis i2 g gelbes Oxydationsferment erhalten. .In this way, i 1 Lebedev juice becomes roughly ro to i2 g yellow oxidizing ferment obtained. .

Das Absorptionsspektrum des Fermentes ist dreibandig, und zwar liegen die sichtbaren Banden im langwelligen Blau bei 45o bis 465 ml, und bei 49o bis 5o5 m#t.The absorption spectrum of the ferment is three-band, namely lying the visible bands in the long-wave blue at 45o to 465 ml, and at 49o to 5o5 m # t.

An Stelle von Aceton können auch andere finit Wasser mischbare organische Lösungsmittel Verwendung finden. Die Reaktionsbedingungen werdenrje nach den Eigenschaften der verwendeten Ausgangslösung und nach ihrer Vorreinigung entsprechend abgeändert.Instead of acetone, other finite water-miscible organic compounds can also be used Find solvents use. The reaction conditions vary depending on the properties of the starting solution used and modified accordingly after its pre-cleaning.

Claims

PATENT CLAIMS: i. Process for the preparation of the yellow oxidative ferment from animal or plant cells, characterized in that the added cell components and ferments are precipitated from the raw solutions of the ferment while cooling at about o ° by adding sufficient amounts of water-miscible organic solvents, whereupon the remaining ones are precipitated Separates ferment from the solution obtained and, if necessary, cleans it.

2. Another embodiment of the method according to claim i, characterized in that the fermentation is stopped the solution after saturation of the same with carbonic acid by adding further amounts of water-miscible organic solvents. Ä. Another embodiment of the method according to claim T and 2, characterized in that for the purpose of cleaning the ferment dissolves in water, the accompanying substances still present by adding it again sufficient quantities of vap with water-miscible organic solvents fails, the remaining solution is saturated with carbonic acid, from which the ferment is deposited and the cleaning repeated if necessary.