DE4234071C2 - Phase fluorometer for substance determination - Google Patents
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Description
Die Erfindung betrifft ein Phasenfluorometer gemäß dem Oberbegriff des Anspruches 1, wie aus der DD 245 491 A1 bekannt.The invention relates to a phase fluorometer according to the The preamble of claim 1, as known from DD 245 491 A1.
Aus der DD-PS 215 398 ist ein Phasenfluorometer bekannt, das mit mehreren Frequenzen betrieben wird, wobei die Anregungslichtquelle ein modensynchronisierter kontinuierlich arbeitender Laser ist.A phase fluorometer is known from DD-PS 215 398, which is operated with several frequencies, whereby the excitation light source is a mode-locked continuously working laser.
Die charakteristischen Relaxationszeiten, mit denen angeregte Moleküle unter Emission von Fluoreszenzstrahlung relaxieren, ergeben sich durch Phasendifferenzmessung zwischen intensitätsmoduliertem Meß- und Referenzsignal.The characteristic relaxation times with which stimulated Relax molecules with emission of fluorescence radiation, result from phase difference measurement between intensity-modulated measurement and reference signal.
Bei diesem Phasenfluorometer lassen sich trotz erheblichem gerätetechnischen Aufwand lediglich einige diskrete Modulationsfrequenzen einstellen, mit denen die aufgefundenen Phasendifferenzen nur beschränkte Aussagen über die Relaxationszeiten zulassen. Außerdem erfordert der Übergang von einer Modulationsfrequenz zu einer anderen eine umständliche Neukalibrierung.This phase fluorometer can be used despite considerable equipment expenditure only a few discrete Set the modulation frequencies with which the found Phase differences are only limited statements about the Allow relaxation times. It also requires the transition from one modulation frequency to another one cumbersome recalibration.
Aus der DD 242 485 A1 sowie der GB 2 231 958 A sind Phasenfluorometer bekannt, die Laserlichtquellen mit modulierbarer Intensität und veränderbarer Frequenz aufweisen. Dabei ist die Modulationsfrequenz in vergleichsweise großen Sprüngen verstellbar, wobei sich aus der Länge des Resonators eine ganz bestimmte Impulsfolgefrequenz, z. B. 125 MHz und weiterhin nur noch Frequenzen entsprechend dem ganzzahligen Vielfachen dieser Grundfrequenz ergeben. Diese groben Frequenzsprünge lassen eine genaue und tatsächlich aufschlußreiche Untersuchung insbesondere von Stoffgemischen nicht zu, weil für bestimmte Stoffkomponenten die gerade passende Modulationsfrequenz nicht einstellbar ist.From DD 242 485 A1 and GB 2 231 958 A. Live fluorometer known to use laser light sources have modulable intensity and variable frequency. The modulation frequency is comparatively large Jumps adjustable, being based on the length of the resonator a very specific pulse repetition frequency, e.g. B. 125 MHz and still only frequencies corresponding to the integer Result in multiples of this fundamental frequency. These rough ones Frequency hops leave an accurate and actual revealing investigation especially of mixtures of substances not too, because for certain fabric components suitable modulation frequency cannot be set.
Eine gattungsgemäße Anordnung ist aus der bereits genannten DD 245 491 A1 bekannt, bei der die Intensitätsmodulation eines Lasers weitgehend optisch erfolgt, indem das Fluoreszenzlicht durch einen elektrisch steuerbaren optischen Modulator hindurchläuft.A generic arrangement is from the DD 245 491 A1 already mentioned known in which the intensity modulation of a laser largely done optically by the fluorescent light an electrically controllable optical modulator runs through.
Solche elektro-optischen Modulatoren erfordern Modulations spannungen in der Größenordnung von etlichen tausend Volt. Die hochfrequente Variation solcher Hochspannungen setzt einen erheblichen gerätetechnischen Aufwand voraus, der sich in entsprechenden Beschaffungs- und Betriebskosten niederschlägt. Außerdem führt die Verwendung elektro-optischer Modulatoren wegen ihrer starken Lichtabsorption zu einer Minderung der Lichtintensität und einem damit verbundenen Empfindlichkeitsverlust.Such electro-optical modulators require modulation voltages in the order of several thousand volts. The high frequency variation of such high voltages sets one considerable expenditure in terms of equipment, which is reflected in corresponding procurement and operating costs. In addition, the use of electro-optical modulators due to their strong light absorption to reduce the Light intensity and a related loss of sensitivity.
Es besteht daher die Aufgabe, ein Phasenfluorometer der eingangs erwähnten Art zu schaffen, bei dem der technische Aufwand reduziert ist, das einfacher herstellbar und auch bei höheren Modulationsfrequenzen einsetzbar ist.There is therefore the task of a phase fluorometer to create the kind mentioned above, in which the technical Effort is reduced, which is easier to manufacture and also at higher modulation frequencies can be used.
Die Lösung dieser Aufgabe besteht darin, daß die Laserlichtquelle eine Laserdiode ist, die zur kontinuier lich durchstimmbaren hochfrequenten Intensitätsmodulation mit einem Hochfrequenz-Signalgenerator verbunden ist und daß ein optisches System zur Fokussierung der von der Laserdiode herrührenden Strahlung auf die Probe vorgesehen ist. The solution to this problem is that the laser light source is a laser diode that is used for continuous with tunable high-frequency intensity modulation a high frequency signal generator is connected and that a optical system for focusing the laser diode resulting radiation is provided on the sample.
Durch Verwendung einer solcher Laserdiode werden einerseits höhere Modulationsfrequenzen erreichbar, andererseits lassen sich dabei die Modulationsfrequenzen kontinuierlich verändern. Dadurch können auch komplexe organische Moleküle wie beispielsweise Proteine untersucht werden. Der technische Aufwand verringert sich, da kein externer Modulator erforderlich ist. Die Modulation kann harmonisch periodisch oder auch periodisch mit nichtharmonischer Variation, z. B. in Form eines periodischen Rechtecksignals erfolgen. Gleichzeitig auftretende spektral unterschiedliche Fluoreszenzen können durch einen Monochromator voneinander unterschieden und analysiert werden. Da sich der Phasenwinkel und die damit verbundene Relaxationszeit nur in einem Bereich, der kleiner als 90 Grad ist, praktisch eindeutig bestimmen läßt, läßt sich durch Verwendung einer Laserdiode ein günstiger Phasenwinkel beispielweise bei 45 Grad durch kontinuierliche Variation der Modulationsfrequenz finden. Durch die zusätzliche Messung des Modulationsgrades des Fluoreszenzlichtes können die Einzelrelaxationszeiten von mehreren Fluoreszenzen, die beispielweise bei Stoffgemischen auftreten, bestimmt werden.By using such a laser diode, on the one hand higher modulation frequencies achievable, on the other hand, leave the modulation frequencies change continuously. This means that even complex organic molecules such as for example proteins are examined. The technical Effort is reduced because there is no external modulator is required. The modulation can be periodically harmonic or also periodically with non-harmonic variation, e.g. B. in Form a periodic square wave signal. At the same time occurring spectrally different fluorescence can distinguished from each other by a monochromator and to be analyzed. Because the phase angle and the so associated relaxation time only in an area that is smaller than 90 degrees, can be determined practically unambiguously a favorable phase angle by using a laser diode for example at 45 degrees by continuously varying the Find modulation frequency. By the additional measurement of the The degree of modulation of the fluorescent light can Single relaxation times of several fluorescences occur, for example, in mixtures of substances.
Vorteilhaft ist es, wenn sich zwischen dem Strahlteiler und dem Referenzdetektor ein weiteres fokussierendes optisches System befindet. Dadurch läßt sich die Intensität im Referenzkanal steigern und die Nachweisempfindlichkeit verbessern.It is advantageous if there is between the beam splitter and the reference detector another focusing optical System is located. This allows the intensity in the Increase reference channel and detection sensitivity improve.
Zweckmäßig ist es, wenn der Meßdetektor und der Referenzdetek tor jeweils ein etwa identisches Empfindlichkeitsverhalten in Abhängigkeit von der Frequenz aufweisen. Dadurch läßt sich die Auswertung vereinfachen.It is useful if the measuring detector and the reference detector each have an approximately identical sensitivity behavior in Dependence on the frequency. This allows the Simplify evaluation.
Vorteilhaft ist es, wenn der Meßdetektor und der Referenzde tektor Lawinendioden aufweisen. Solche Lawinendioden haben auch bei hohen Frequenzen gute Nachweisempfindlichkeiten bei geringen Ansprechzeiten. Zudem sind Lawinendioden technisch leicht handhabbar im Gegensatz zu aufwendigen Photomulti pliern, wo Betriebsspannungen im Kilovolt-Bereich notwendig sind.It is advantageous if the measuring detector and the reference end detector avalanche diodes. Such avalanche diodes have good detection sensitivity even at high frequencies short response times. Avalanche diodes are also technical easy to handle in contrast to complex photomulti plier where operating voltages in the kilovolt range are necessary are.
Vorteilhaft ist es, wenn die Probe auf einem drehbaren Probenhalter angeordnet ist, dessen Drehachse quer zur Strahlrichtung verläuft. Dadurch läßt sich der Raumwinkel mit der größten Intensitätsverteilung erfassen.It is advantageous if the sample is on a rotatable Sample holder is arranged, the axis of rotation transverse to Beam direction runs. This allows the solid angle to be used the largest intensity distribution.
Die Bedienung und die Auswertung läßt sich vereinfachen, wenn die Auswerteeinheit einen mit den Detektoren und dem Hochfrequenz-Signalgenerator verbundenen Computer umfaßt. Dadurch können die Daten schnell erfaßt und ausgewertet werden und die Steuerung der Laserdiode bezüglich Anregungswellen länge und Modulationsfrequenz durchgeführt werden.Operation and evaluation can be simplified if the evaluation unit one with the detectors and the High frequency signal generator connected computer includes. This means that the data can be quickly recorded and evaluated and the control of the laser diode with respect to excitation waves length and modulation frequency.
Nachstehend ist die Erfindung mit ihren ihr als wesentlich zugehörenden Einzelheiten anhand der Zeichnung noch näher beschrieben.Below is the invention with its as essential associated details with reference to the drawing described.
Die einzige Figur zeigt in schematischer Darstellung die optische Anordnung der einzelnen zum Phasenfluorometer gehörenden Elemente, wobei der optische Weg strichliniert ist.The only figure shows a schematic representation of the optical arrangement of the individual for Elements belonging to phase fluorometer, the optical path is dashed.
Ein in der Figur im ganzen mit 1 bezeichnetes Phasenfluoro meter dient zur Stoffbestimmung beispielsweise von organischen Molekülkomplexen wie Proteinen. Dazu wird eine Probe 2 des zu untersuchenden und zu identifizierenden Stoffes mit einer Laserdiode 3 bestrahlt und zur Fluoreszenzemission angeregt. Aus der Analyse der charakteristischen Relaxationszeiten mit der die angeregten Moleküle des Stoffes unter Aussendung von Fluoreszenzstrahlung in niederenergetische Zustände relaxieren, können Rückschlüsse auf die entsprechenden Molekülzustände gezogen und damit eine Stoffbestimmung durchgeführt werden.A phase fluorometer, denoted overall by 1 in the figure, is used to determine the substance, for example, of organic molecular complexes such as proteins. For this purpose, a sample 2 of the substance to be examined and identified is irradiated with a laser diode 3 and excited to emit fluorescence. From the analysis of the characteristic relaxation times with which the excited molecules of the substance relax into low-energy states by emitting fluorescent radiation, conclusions can be drawn about the corresponding molecular states and a substance determination can thus be carried out.
Die Anregung erfolgt im Ausführungsbeispiel mit harmonisch moduliertem Licht, so daß die Phasenlage und die Modulationstiefe des Fluoreszenzlichtes relativ zu den entsprechenden Werten des Anregungslichtes gemessen werden können. Möglich ist auch eine nichtharmonische periodische Modulation.In the exemplary embodiment, the excitation occurs with harmonic modulated light so that the phase position and the Depth of modulation of the fluorescent light relative to the corresponding values of the excitation light can be measured can. A non-harmonic periodic is also possible Modulation.
Das Phasenfluorometer 1 weist als Anregungslichtquelle, wie bereits erwähnt, eine Laserdiode 3 auf. Solche Laserdioden 3 (oder Halbleiterlaser) sind technisch einfach handhabbar und ermöglichen aufgrund ihres Funktionsprinzips und ihrer Technologie eine interne harmonische Modulation des Laserlichtes mit Modulationsfrequenzen bis in den Hochfrequenzbereich oberhalb 100 Megahertz. Zudem ist die Frequenz kontinuierlich durchstimmbar. Dazu wird ein Hochfrequenz-Signalgenerator 12 an die Kontakte der Laserdiode 3 angeschlossen, der einen durchstimmbaren hochfrequenten und harmonischen Wechselstrom zur Modulation der Laserlichtintensität liefert.As already mentioned, the phase fluorometer 1 has a laser diode 3 as the excitation light source. Such laser diodes 3 (or semiconductor lasers) are technically easy to handle and, because of their functional principle and their technology, enable internal harmonic modulation of the laser light with modulation frequencies up to the high-frequency range above 100 megahertz. In addition, the frequency can be continuously tuned. For this purpose, a high-frequency signal generator 12 is connected to the contacts of the laser diode 3 , which delivers a tunable, high-frequency and harmonic alternating current for modulating the laser light intensity.
Das intensitätsmodulierte Licht der Laserdiode 3 gelangt auf ein optisches System 4, welches das aus der Laserdiode 3 austretende, divergente und astigmatische Licht auf den Ort der Probe 2 bündelt. Das von der Probe 2 emittierte Fluoreszenzlicht gelangt auf ein weiteres optisches System 5, das das Fluoreszenzlicht auf eine Eintrittsöffnung bzw. einen Eintrittsspalt eines Monochromators 6 fokussiert. Dort wird das Fluoreszenzlicht spektral zerlegt, wobei ein von dem Monochromator 6 ausgelesener spektraler Anteil durch einen Austrittsspalt des Monochromators 6 hindurchtritt und auf einen Meßdetektor 7 gelangt. Da das aus dem Austrittsspalt austretende Strahlenbündel divergent ist, ist ein weiteres optisches System 8 so zwischen Monochromator 6 und Meßdetektor 7 angeordnet, daß der Abstand zwischen Meßdetektor 7 und dem optischen System 8 etwa der Brennweite des optischen Systems 8 entspricht. Durch den Monochromator 6 kann einerseits das den Meßvorgang des Fluoreszenzlichtes störende monochromatische Anregungslicht der Laserdiode 3 durch eine entsprechende Einstellung des Monochromators 6 ausgeblendet werden, andererseits können bei Auftreten mehrerer spektral unterschiedlicher Fluoreszenzen diese voneinander unterschieden und analysiert werden.The intensity-modulated light from the laser diode 3 reaches an optical system 4 , which bundles the divergent and astigmatic light emerging from the laser diode 3 to the location of the sample 2 . The fluorescent light emitted by the sample 2 arrives at a further optical system 5 , which focuses the fluorescent light on an entry opening or an entry slit of a monochromator 6 . There, the fluorescent light is spectrally dispersed, wherein a read-out of the monochromator 6 spectral component passing through an exit slit of the monochromator 6 and arrives at a measurement detector. 7 Since the light exiting from the exit slit is divergent bundle of rays, a further optical system 8 is arranged between the measuring detector and monochromator 6 7, that the distance between the measuring detector 7 and the optical system 8 corresponds approximately to the focal length of the optical system. 8 The monochromator 6 , on the one hand, can suppress the monochromatic excitation light of the laser diode 3, which disturbs the measuring process of the fluorescent light, by appropriate adjustment of the monochromator 6 ;
Zwischen Laserdiode 3 und dem optischen System 4 ist ein Strahlteiler 9 angeordnet, der einen Teil des Laserlichtes auf einen Referenzdetektor 10 abzweigt, so daß die von Meßdetektor 7 und von Referenzdetektor 10 gelieferten intensitätsmodulierten Signale die Phasenlage der Signale zueinander und deren Modulationsgrad bestimmen. Zu diesem Zweck weisen der Meßdetektor 7 und der Referenzdetektor 10 einen etwa identischen Empfindlichkeitsverlauf in Abhängigkeit von der Frequenz auf. Dies wird im Ausführungsbeispiel dadurch realisiert, daß als Meßdetektor 7 und als Referenzdetektor 10 jeweils Lawinendioden verwendet werden, die sich kostengünstig mit geringen Exemplarstreuungen fertigen lassen. Es lassen sich aber auch statt dessen Photomultiplier einsetzen. Um die Nachweisempfindlichkeit für das intensitätsmodulierte Laserdiodenlicht im Referenzkanal zu steigern, kann zwischen Strahlteiler 9 und dem Referenzdetektor 10 ein - nicht dargestelltes - optisches System angeordnet sein, um das Strahlenbündel auf den Referenzdetektor 10 zu fokussieren. Alle oben beschriebenen optischen Systeme weisen jeweils zumindest eine Linse auf. Das zwischen Laserdiode 3 und der Probe 2 angeordnete optische System 4 ist eine sogenannte Kollimationsoptik, die den Strahl nicht nur konvergent bündelt, sondern auch den stark elliptischen Strahlquerschnitt der Laserdiode 3 in einen praktisch kreisförmigen umformt, so daß sich eine etwa punktförmige Fokussierung auf der Probe 2 ergibt.Between the laser diode 3 and the optical system 4 , a beam splitter 9 is arranged which branches part of the laser light onto a reference detector 10 , so that the intensity-modulated signals supplied by the measuring detector 7 and by the reference detector 10 determine the phase relationship of the signals to one another and their degree of modulation. For this purpose, the measuring detector 7 and the reference detector 10 have an approximately identical sensitivity curve as a function of the frequency. In the exemplary embodiment, this is achieved in that avalanche diodes are used as the measuring detector 7 and as the reference detector 10 , which can be produced inexpensively with little specimen scatter. However, photomultipliers can also be used instead. To increase the sensitivity of detection of the intensity-modulated laser diode light in the reference channel, can be between beam splitter 9 and the reference detector 10 a - not shown - optical system may be arranged to focus the radiation beam to the reference detector 10 degrees. All of the optical systems described above each have at least one lens. The optical system 4 arranged between the laser diode 3 and the sample 2 is a so-called collimation optics which not only converges the beam, but also converts the strongly elliptical beam cross-section of the laser diode 3 into a practically circular one, so that there is an approximately punctiform focus on the sample 2 results.
Da das von der Probe 2 emittierte Fluoreszenzlicht in alle Richtungen abgestrahlt wird, ist die Probe 2 auf einem drehbaren Probenhalter angeordnet, dessen Drehachse etwa quer zur Richtung des einfallenden Lichtstrahls verläuft, um durch Drehen um diese Drehachse eine größtmögliche Fluoreszenzlichtintensität auf den Meßdetektor 7 zu lenken. Zur Auswertung der Signale im Meßkanal und Referenzkanal ist ein Computer 11 vorgesehen, der mit den Detektoren 7, 10 und der Laserdiode 3 verbunden ist.Since the fluorescent light emitted by the sample 2 is emitted in all directions, the sample 2 is arranged on a rotatable sample holder, the axis of rotation of which extends approximately transversely to the direction of the incident light beam, in order to direct the greatest possible fluorescence light intensity onto the measuring detector 7 by rotating about this axis of rotation . To evaluate the signals in the measuring channel and reference channel, a computer 11 is provided, which is connected to the detectors 7 , 10 and the laser diode 3 .
Die Vorspannung der Detektoren 7, 10 wird von dem Hochfrequenz-Signalgenerator 12 moduliert. Dadurch wird die Verstärkung der Detektoren 7, 10 variiert und ein elektrisches Ausgangssignal erzeugt, das aus einer Überlagerung des empfangenen Fluoreszenzlichtsignals und des elektrischen Vorspannungssignals besteht. Dieses sog. Heterodynprinzip wird hier angewendet, um eine Frequenzkonversion zu niedrigen Frequenzen etwa unterhalb 50 Megahertz durchzuführen, wo Phasendetektoren einsetzbar sind, mit denen sich die zu messende Phasendifferenz zwischen dem Meßkanal und dem Referenzkanal nachweisen läßt. Dieses Heruntermischen durch Überlagerung mit einem zusätzlichen Signal - der Verstärkungsmodulation der Detektoren 7,10 - hat die Generierung von Summen- und Differenzfrequenzen zur Folge, wobei das Differenzfrequenzsignal zur Bestimmung der Phasendifferenz benutzt wird.The bias of the detectors 7, 10 is modulated by the high-frequency signal generator 12 . As a result, the amplification of the detectors 7, 10 is varied and an electrical output signal is generated which consists of a superimposition of the received fluorescent light signal and the electrical bias signal. This so-called heterodyne principle is used here to carry out a frequency conversion to low frequencies approximately below 50 megahertz, where phase detectors can be used with which the phase difference to be measured between the measuring channel and the reference channel can be detected. This mixing down by superimposition with an additional signal - the gain modulation of the detectors 7, 10 - results in the generation of sum and difference frequencies, the difference frequency signal being used to determine the phase difference.
Der Phasenwinkel wird dadurch bestimmt, daß die harmonisch modulierten Signale von Meßdetektor 7 und von Referenzdetektor 10 bezüglich ihrer Phasenlage relativ zueinander verglichen werden. Die Phasenverschiebung des Meßsignales bezüglich des Referenzsignales ergibt den Phasenwinkel, der sich aus dem Arkustangens des Produktes von Modulationsfrequenz und Relaxationszeit bestimmen läßt. Da die Arkustangens-Funktion bei 90 Grad und ganzzahligen Vielfachen davon asymptotisch verläuft, läßt sich eine aussagekräftige und eindeutige Messung der Relaxationszeit im Phasenwinkelbereich von etwa 0° bis 45° durchführen. Die Suche nach einem auswertbaren Phasenwinkel bei etwa 45° wird also durch die Verwendung der Laserdiode 3 begünstigt, da sich die Modulationsfrequenz kontinuierlich variieren läßt, bis ein solcher Phasenwinkel gefunden ist. Dies ist bei bisherigen Phasenfluorometern nicht möglich, so daß damit die Auswertung aufgefundener Phasenwinkel nur eingeschränkt realisierbar ist.The phase angle is determined by comparing the harmonic modulated signals from measuring detector 7 and from reference detector 10 with respect to one another with respect to their phase position. The phase shift of the measurement signal with respect to the reference signal gives the phase angle, which can be determined from the arctangent of the product of the modulation frequency and relaxation time. Since the arctangent function is asymptotic at 90 degrees and integer multiples thereof, a meaningful and unambiguous measurement of the relaxation time in the phase angle range from approximately 0 ° to 45 ° can be carried out. The search for an evaluable phase angle at approximately 45 ° is therefore favored by the use of the laser diode 3 , since the modulation frequency can be varied continuously until such a phase angle is found. This is not possible with previous phase fluorometers, so that the evaluation of phase angles found can only be realized to a limited extent.
Die Messung der Modulationstiefe oder des Modulationsgrades ist dann erforderlich, wenn sich wie bei Stoffgemischen mehrere Fluoreszenzen gleichzeitig überlagern, deren Einzelrelaxationszeiten bzw. Einzellebensdauern sich zu einer Gesamtrelaxationszeit d. h. einer Gesamtphasenverschiebung überlagern. Zur Bestimmung der einzelnen Relaxationszeiten wird der Modulationsgrad zusätzlich zu dem Phasenwinkel ausgewertet.The measurement of the modulation depth or the degree of modulation is then required if there are several, as with mixtures of substances Fluorescence overlap at the same time Individual relaxation times or individual lifetimes become one Total relaxation time d. H. an overall phase shift overlay. To determine the individual relaxation times becomes the degree of modulation in addition to the phase angle evaluated.
Claims (6)
- - einer die Probe zur Fluoreszenz anregenden Laserlichtquelle mit periodischer Intensitätsmodulation,
- - einem das von der Probe emittierte Fluoreszenzlicht auf die Eintrittsöffnung eines Monochromators abbildenden optischen System, das zwischen der Probe und dem Monochromator angeordnet ist,
- - einem sich an die Austrittsöffnung des Monochromators anschließenden Meßdetektor zur Erzeugung eines Meßsignales,
- - einem weiteren optischen System zur Fokussierung zwischen dem Monochromator und dem Meßdetektor, sowie
- - einem im Strahlengang der Laserlichtquelle angeordneten, einen Teil der Strahlung der Laserlichtquelle auf einen Referenzdetektor ablenkenden Strahlteiler und
- - mit einer Auswerteeinheit zur Bestimmung der
Phasendifferenz und der Änderung des Modulationsgrades der
von Referenz- und Meßdetektor gelieferten Meßsignale,
dadurch gekennzeichnet, daß die Laserlichtquelle eine Laserdiode (3) ist, die zur kontinuierlich durchstimmbaren hochfrequenten Intensitätsmodulation mit einem Hochfrequenz-Signalgenerator (12) verbunden ist und daß ein optisches System zur Fokussierung der von der Laserdiode (3) herrührenden Strahlung auf die Probe vorgesehen ist.
- a laser light source with periodic intensity modulation, which stimulates the sample for fluorescence,
- an optical system which images the fluorescent light emitted by the sample onto the inlet opening of a monochromator and which is arranged between the sample and the monochromator,
- a measuring detector adjoining the outlet opening of the monochromator for generating a measuring signal,
- - Another optical system for focusing between the monochromator and the measurement detector, and
- a beam splitter arranged in the beam path of the laser light source and deflecting part of the radiation from the laser light source onto a reference detector and
- with an evaluation unit for determining the phase difference and the change in the degree of modulation of the measurement signals supplied by the reference and measurement detectors,
characterized in that the laser light source is a laser diode ( 3 ) which is connected to a high-frequency signal generator ( 12 ) for continuously tunable high-frequency intensity modulation and that an optical system is provided for focusing the radiation originating from the laser diode ( 3 ) onto the sample .
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| DE4234071A1 (en) | 1994-04-14 |
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