DE395736T1 - Gereinigte thermostabile enzyme. - Google Patents
Gereinigte thermostabile enzyme.Info
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Claims (1)
- Europäische Patentanmeldung No. 89.902422.8 (aus PCT/US89/00127)Patentansprüche1. Gen, kodierend für eine gereinigte, native, thermostabile DNA *" Polymerase aus Thermus aquaticus die ein Molekulargewicht von86-95 000 Daltons und bei pH 6,4 mindestens die halben Aktivität wie bei pH *8.0 hat.2. Das Gen gemäss Anspruch 1, welches aus dem Genom von Thermus aquaticus kloniert wurde.3. Das Gen gemäss Anspruch 2, welches die DNA Sequenz gemäss Figur 1 hat oder eine allelische Variante davon.4. Das Gen gemäss Anspruch 2, kodierend für eine Polymerase mit einem Molekulargewicht von ungefähr 86-95 000 Daltons.5. Das Gen gemäss Anspruch 4, kodierend für eine Polymerase mit den Aminosäuren 4-832 aus Figur 1.6. Das Gen gemäss Anspruch 4, kodierend für eine Polymerase mit den 832 Aminosäuren umfassenden Sequenz aus Figur 1.7. Das Gen gemäss Anspruch 2, kodierend für eine Polymerase mit einem Molekulargewicht von ungefähr 60 000-65 000 Daltons.8. Das Gen gemäss Anspruch 7, kodierend für eine Polymerase mit den Aminosäuren 290-832 aus Figur 1.9. Thermostabiles Enzym, das eine Polymerase ist, die mindestens 50% Homologie zu jedem durchgehenden Stück von neun oder mehr Aminosäuren aus Figur 1 hat.10. Thermostabile Polymerase gemäss Anspruch 9, worin das besagteStück von neun oder mehr Aminosäuren aus den folgenden Sequenzen *ausgewählt wird:a) Reste 190-204;b) Reste 262-270;c) Reste 569-587;
d) Reste 718-732;Lö/22.5.92e) Reste 743-759; und
O Reste 778-790.11. Enzym rekombinant hergestellt aus dem Gen gemäss Anspruch 1.12. Enzym gemäss Anspruch 11, mit einem nicht-blockierten Aminoterminus.13. Enzym, rekombinant hergestellt aus dem Gen gemäss Anspruch 4.14. Enzym, rekombinant hergestellt aus dem Gen gemäss Anspruch 7.15. Stabile Enzymzusammensetzung enthaltend das Enzym gemäss Anspruch 11 in einem Puffer enthaltend ein oder mehrere nicht-ionische polymere Detergenzien.16. Verfahren zur Reinigung einer thermostabilen Polymerase, dadurch gekennzeichnet, dass man eine wässrige Mischung, die die thermostabile Polymerase enthält, mit einem hydrophoben Wechselwirkungsträger unter Bedingungen behandelt, welche hydrophobe Wechselwirkungen fördern, und die besagte thermostabile Polymerase vom besagten Träger mit einem Lösungsmittel, das hydrophobe Wechselwirkungen abschwächt, eluiert.17. Verfahren gemäss Anspruch 16, worin der hydrophobe Chromatographie-Träger Phenyl-Sepharose ist.18. Verfahren gemäss Anspruch 16, worin besagte hydrophobe Wechselwirkungen durch einen Puffer mit einer Ionenstärke von grosser oder gleich 0,05 M NaCl ermöglicht wird.19. Verfahren gemäss Anspruch 18, worin besagte Bedingungen zur Förderung der hydrophoben Wechselwirkungen durch die Verwendung eines Puffers enthaltend mehr oder gleich 0,2 M Amoniumsulfat ermöglicht wird.20. Verfahren gemäss Anspruch 16, worin als Elutionsmittel ein Gradient von 0-4 M Harnstoff verwendet wird.21. Verfahren gemäss Anspruch 16, worin die thermostabile Polymerase eine aus Thermus aquaticus isolierte DNA Polymerase ist.22. Verfahren gemäss Anspruch 16, worin die thermostabile Polymerase ein rekombinantes Enzym ist.23. Verfahren gemäss Anspruch 22, worin in der wässrigen Mischung die thermostabile Polymeraseaktivität durch vorherige Hitzebehandlung des Zellysates angereicht wird.24. Verfahren gemäss Anspruch 23, worin die Hitzebehandlung bei einer Temperatur im Bereich von mindestens 45° bis ungefähr 900C durchgeführt wird.25. Methode zum Reinigen einer rekombinanten thermostabilen Polymerase, die in einer hitzelabilen Wirtszelle hergestellt wird, welches Verfahren das Behandeln des Zellysates bei einer Temperatur im Bereich von mindestens 450C bis ungefähr 9O0C und das Rückgewinnen der thermostabilen Polymeraseaktivität umfasst.26. Verfahren gemäss Anspruch 25, worin die thermostabile Polymerase aus Thermus aquaticus ist.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14344188A | 1988-01-12 | 1988-01-12 | |
| PCT/US1989/000127 WO1989006691A2 (en) | 1988-01-12 | 1989-01-12 | Purified thermostable enzyme |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE395736T1 true DE395736T1 (de) | 1992-09-03 |
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ID=26779298
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| DE1989902422 Pending DE395736T1 (de) | 1988-01-12 | 1989-01-12 | Gereinigte thermostabile enzyme. |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| DE (1) | DE395736T1 (de) |
-
1989
- 1989-01-12 DE DE1989902422 patent/DE395736T1/de active Pending
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