DE3883596T2 - Reinigung von rekombiniertem Hepatitis-B-Oberflächen-Antigen. - Google Patents
Reinigung von rekombiniertem Hepatitis-B-Oberflächen-Antigen.Info
- Publication number
- DE3883596T2 DE3883596T2 DE88301779T DE3883596T DE3883596T2 DE 3883596 T2 DE3883596 T2 DE 3883596T2 DE 88301779 T DE88301779 T DE 88301779T DE 3883596 T DE3883596 T DE 3883596T DE 3883596 T2 DE3883596 T2 DE 3883596T2
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- yeast
- daltons
- hbsag
- agent
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 22
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 22
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 title claims description 11
- 238000000746 purification Methods 0.000 title description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims abstract description 21
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 4
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 229960000789 guanidine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 2
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 3
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 claims 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 claims 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 claims 1
- 125000000532 dioxanyl group Chemical group 0.000 claims 1
- 125000001814 trioxo-lambda(7)-chloranyloxy group Chemical group *OCl(=O)(=O)=O 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 16
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 15
- 108010058643 Fungal Proteins Proteins 0.000 abstract description 13
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 abstract description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 3
- ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M potassium thiocyanate Chemical compound [K+].[S-]C#N ZNNZYHKDIALBAK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 229910002012 Aerosil® Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M sodium bromide Chemical compound [Na+].[Br-] JHJLBTNAGRQEKS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- SAQSTQBVENFSKT-UHFFFAOYSA-M TCA-sodium Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C(Cl)(Cl)Cl SAQSTQBVENFSKT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 alkali metal thiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000012471 diafiltration solution Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229910021485 fumed silica Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 238000011085 pressure filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M sodium perchlorate Chemical compound [Na+].[O-]Cl(=O)(=O)=O BAZAXWOYCMUHIX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910001488 sodium perchlorate Inorganic materials 0.000 description 1
- VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M sodium thiocyanate Chemical compound [Na+].[S-]C#N VGTPCRGMBIAPIM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- UYCAUPASBSROMS-AWQJXPNKSA-M sodium;2,2,2-trifluoroacetate Chemical compound [Na+].[O-][13C](=O)[13C](F)(F)F UYCAUPASBSROMS-AWQJXPNKSA-M 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Description
- Bei der Herstellung eines rekombinanten Hepatitis B- Oberflächenantigens in Hefe assoziiert sich ein verunreinigendes 60 000 Dalton-Hefeprotein mit dem Hepatitis B- Oberflächenantigen und wird durch die Reinigungsprozedur des Oberflächenantigens mitgeschleppt und erscheint im Endprodukt. Das verunreinigende Hefeprotein ist eng mit dem Oberflächenantigen assoziiert und kann durch herkömmliche Trennverfahren nicht aus dem 2 000 000 Dalton-Oberflächenantigen entfernt werden. Diese Verunreinigung setzt sich anscheinend im Inneren der Oberfläche des Antigenteilchens fort.
- Das Vorliegen des verunreinigenden Hefeproteinsin einem Impfstoff-Produkt ist unerwünscht.
- Demgemäß ist es Aufgabe der Erfindung, ein verbessertes Verfahren bereitzustellen, um HBsAg zu reinigen, das in transformierter Hefe hergestellt worden ist. Eine weitere Aufgabe ist es, ein Verfahren bereitzustellen, um Hefe- Verunreinigungen aus HBsAg zu entfernen, das in transformierter Hefe hergestellt worden ist. Diese und weitere Aufgaben der Erfindung gehen aus der folgenden Beschreibung hervor.
- Proteine, die aus Hefe stammen, werden aus dem in transformierter Hefe hergestellten HBsAg durch Diafiltration von HBsAg mit einem Dissoziationsmittel über eine Membran entfernt, die einen Molekulargewichtsausschluß bzw. -grenze aufweist von mehr als etwa 100 000 Dalton, jedoch weniger als etwa 1 000 000 Dalton, vorzugsweise etwa 100 000 Dalton bis etwa 300 000 Dalton.
- Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Entfernung von verunreinigendem Hefeprotein aus in transformierter Hefe hergestelltem HBsAg.
- Typischerweise umfaßt das erfindungsgemäße Verfahren die Fermentation von Hefe, die mit einem Vektor transformiert worden ist, der für HBsAg codiert.
- Das so erhaltene Antigen wird dann durch herkömmliche Reinigungsverfahren gereinigt, die üblicherweise zur Isolierung und Reinigung biologisch aktiver Substanzen verwendet werden, wie Zellaufbruch, Extraktion der aufgebroche nen Zellen, Aussalzen mit Ammoniumsulfat, Gelfiltration, Ionenaustauschchromatographie, Fraktionierung mit Polyethylenglycol, Affinitätschromatographie, Ultrazentrifugation mit einem Dichtegradienten aus Saccharose und Caesiumchlorid oder Natriumbromid oder dergleichen.
- Wird die herkömmliche Reinigung befolgt, wird HBsAg erfindungsgemäß behandelt, um das Verunreinigende Hefeprotein zu entfernen. Die erfindungsgemäße Behandlung umfaßt eine Diafiltration des gewünschten HBsAg mit einem Dissoziationsmittel über eine Membran mit einem Molekulargewichtsausschluß von mehr als etwa 50 000 Dalton, jedoch weniger als etwa 1 000 000 Dalton, vorzugsweise etwa 100 000 Dalton bis etwa 300 000 Dalton.
- Am Ende der Fermentation werden die Hefezellen zur Freisetzung von HBsAg aufgebrochen. Die Zellen und Zellabfälle werden durch Zentrifugieren entfernt. Die Überstandsflüssigkeit wird dann zur Entfernung von Abfall- Proteinen behandelt, beispielsweise indem konzentriert oder diafiltriert wird. Die Flüssigkeit, die das Produkt enthält, wird dann auf Aerosil (pyrogene Kieselsäure) adsorbiert und gewaschen, um die verunreinigenden Proteine zu entfernen. Das Aerosil wird mit einem geeigneten Puffer eluiert. Das HBsAg-haltige Material wird konzentriert, diafiltriert und gegebenenfalls zentrifugiert. Die Überstandsflüssigkeit aus der Zentrifugation wird über eine Säule aus Butylagarose gegeben. Das adsorbierte Antigen wird mit einem geeigneten Puffer eluiert. Das Material wird dann konzentriert und auf eine Sepharose 6B-Säule aufgegeben. Die Antigen-haltigen Fraktionen der Sepharose -Säule werden vereinigt, auf eine gewünschte HBsAg-Protein-Konzentration verdünnt und mit einem Dissoziationsmittel verdünnt, was zur Dissoziation des Hefeproteins von dem Hepatitis B-Protein führt. Da das Hefeprotein in das gewünschte, von der Hefe produzierte HBsAg-Teilchen mitgeschleppt wird, wird die Abtrennung des Hefeproteins behindert und nicht schnell durchgeführt. Typischerweise beträgt die Zeitdauer, die eine Dissoziation der verunreinigenden Hefeproteine ermöglicht, bei Raumtemperatur etwa 6 Stunden bis etwa 24 Stunden, obwohl bei höheren Temperaturen kürzere Zeiten angewendet werden können. Das Gemisch wird dann konzentriert und über eine Hohlfasermembran mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100 000 diafiltiert, wobei mindestens etwa fünf Volumina Dissoziationsmittel als Diafiltrationslösung verwendet werden. Das Antigen wird dann mit mindestens etwa 15 Volumina Phosphat-gepufferter Salzlösung diafiltriert, um das Dissoziationsmittel zu entfernen.
- Die transformierte Hefe kann auf bekannte Weise hergestellt werden, indem ein für ein gewünschtes Polypeptid oder Protein codierendes Gen in die Hefezellen eingebaut wird, die dann das codierte Polypeptid oder Protein exprimieren. Beispielsweise wird die Herstellung des HBsAg-Antigens aus transformierter Hefe beschrieben von Valenzuela et al., Nature 298:347 et seq.(1982). Ein weiteres bekanntes Verfahren zur Herstellung von aus Hefe stammendem HBsAg wird beschrieben von Miyanohara et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 80:1 et seq. (1983).
- Das Dissoziationsmittel kann ein Mittel sein, das die Polarität verringert, wie Dioxan oder Ethylenglycol, Harnstoff, Guanidin-Hydrochlorid oder chaotrope Mittel, wie Cl&supmin;, I&supmin;, CLO&sub4;&supmin;, CF&sub3;COO&supmin;, SCN&supmin; oder CCl&sub3;COO&supmin;. Spezielle Beispiele geeigneter chaotroper Mittel sind Natriumperchlorat, Natriumtrifluoracetat, Natriumtrichloracetat und Alkalimetallthiocyanate, z.B. NaSCN, KSCN und NH&sub4;SCN.
- Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung, ohne jedoch dieselbe darauf zu beschränken.
- Eine Präparation aus dem rekombinanten Hepatitis B- Oberflächenantigen, bestehend aus 8 l gereinigtem Hepatitis B-Oberflächenantigen in PBS, enthält gemäß dem Lowry- Proteintest etwa 100 mg/ml Protein.
- Typischerweise bestehen 5 Prozent des gemessenen Proteins aus einem verunreinigenden 60 000 Dalton-Hefeprotein. Zu der obigen Lösung werden 8 l 6M KSCN in PBS hinzugegeben. Die resultierenden 16 l Lösung enthalten 50 mg/ml Protein und weisen eine Konzentration von 3M KSCN auf. Diese Lösung wird unter Rühren bei 4 ºC 16 Stunden lang inkubiert. Am Ende des Inkubationszeitraums wird die Lösung in einem Hohlfaserbündel mit einem Molekulargewichtsausschluß von 100 K (Amicon H10 P100-20) auf 4 l konzentriert. Das resultierende Konzentrat enthält etwa 200 mg/ml Protein in 3M KSCN. Die Hohlfaserbündel-Einheit wird dann von dem Konzentrationsmodus auf den Diafiltrationsmodus umgeschaltet. Das Produkt wird unter Verwendung von 20 l 3M KSCN diafiltriert. Durch den Diafiltrationsmodus wird das verunreinigende 60 000 Dalton-Hefeprotein, das den Filter passiert, von dem Hepatitis B-Oberflächenantigen-Teilchen von 2 000 000 Dalton, das hinter dem Filter zurückgehalten wird, abgetrennt. Nachdem die Diafiltration beendet ist, wird das Produkt zur Entfernung von KSCN nochmals mit 60 l PBS diafiltriert. Das resultierende Produkt enthält typischerweise 100 mg/ml Protein in 6 l, wovon weniger als 1 % des Proteins, wie durch HPLC gemessen, eine Hefe-Verunreinigung darstellt.
- Ein gereinigtes rekombinantes Hepatitis B-Oberflächenantigen, das den Ablauf von Sepharose 6B enthält, wird bezüglich KSCN in einer Konzentration von 3M hergestellt, indem festes KSCN zugegeben wird. Es wird dann bei 4 ºC über Nacht aufbewahrt. 2 ml dieses Materials werden mit 8 ml 3M KSCN in PBS vermischt und dann auf 2 ml konzentriert, wobei eine Amicon-Minicon-Konzentrationsvorrichtung mit einer XM300-Membran verwendet wird, die einen Größenausschluß von mehr als 300 000 Dalton aufweist. Dann werden 5 ml 3M KSCN hinzugegeben und das Gesamtvolumen durch Druckfiltration erneut auf 2 ml reduziert. Weitere 5 ml 3M KSCN werden zugegeben und das Gesamtvolumen auf 1 ml reduziert. Dieser eine ml Produkt wird dann über Nacht bei Raumtemperatur gegen PBS dialysiert, um das KSCN zu entfernen. Die Lösungen vor und nach der Behandlung wurden auf Polyacrylamidgel und durch einen Immunblot analysiert. Es wurde gefunden, daß die behandelte Lösung frei ist von Hefeprotein, während die unbehandelte Lösung eine Bande aufweist, die durch einen Antikörper als Hefe-Verunreinigung identifiziert wurde.
- Gereinigtes rekombinantes Hepatitis B-Oberflächenantigen wird, bezogen auf KSCN, in einer Konzentration von 3 M hergestellt. Eine zweite Probe wird dann, bezogen auf KSCN, in einer Konzentration von 2,5 M hergestellt. Eine dritte Probe wird, bezogen auf KSCN, in einer Konzentration von 2 M hergestellt, durch Zugabe von jeweils festem KSCN. Nach dem Inkubieren wurde jede dieser Proben gegen 5 Volumina KSCN diafiltriert, die bezogen auf KSCN dieselbe Molarität aufwiesen, wobei entweder eine XM300-Membran (Molekulargewichtsausschluß 300 000) oder eine XM100-Membran (Molekulargewichtsausschluß 100 000) verwendet wurde. Nach der Behandlung mit KSCN wurden alle Proben bei Raumtemperatur über Nacht gegen PBS dialysiert, um das KSCN zu entfernen. Alle Proben wurde auf Polyacrylamidgel und durch einen Immunblot analysiert. Alle Bedingungen für Membrangröße und KSCN-Konzentration entfernten die Hefe- Verunreinigung aus dem Hepatitis B-Oberflächenantigen.
Claims (8)
1. Verfahren zur Entfernung proteinartiger Substanzen, die
von der Hefe abstammen, aus einer Lösung von Hepatitis B
Oberflächenantigen (HBsAg)-Teilchen, hergestellt in
einer transformierten Hefe, welches umfaßt Diafiltrieren
der kontaminierenden proteinartigen Hefesubstanz durch
eine Membran mit einer Molekulargewichtsgrenze von
mehr als etwa 100 000 Dalton bis 1 000 000 Dalton in
Gegenwart eines Dissoziationsmittels, welches wirksam
ist, um die kontaminierende proteinartige Hefesubstanz
von HBsAg zu dissoziieren, wobei das Dissoziationsmittel
nicht Triton X-100 ist.
2. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem das
Dissoziationsmittel ein polaritätsreduzierendes Mittel oder ein
chaotropes Mittel ist.
3. Verfahren nach Anspruch 2, bei dem das
polaritätsreduzierende Mittel Dioxan, Ethylenglycol, Harnstoff oder
Guanidinhydrochlorid ist.
4. Verfahren nach Anspruch 2, bei dem das chaotrope Mittel
CCl&sub3;COO&supmin;, CF&sub3;COO&supmin;, Cl&supmin;, ClO&sub4;&supmin;, I&supmin; oder SCN&supmin; ist.
5. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem die Membran eine
Molekulargewichtsgrenze von etwa 100 000 Dalton bis
etwa 300 000 Dalton aufweist.
6. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem die Lösung der HBsAg-
Teilchen vor dem Diafiltrieren in Gegenwart des
Dissoziationsmittels inkubiert wird.
7. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem die Lösung der HBsAg-
Teilchen vor dem Diafiltrieren konzentriert wird.
8. Verfahren nach Anspruch 1, bei dem die Lösung der HBsAg-
Teilchen nach dem Diafiltrieren entfernt wird.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2334787A | 1987-03-09 | 1987-03-09 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE3883596D1 DE3883596D1 (de) | 1993-10-07 |
| DE3883596T2 true DE3883596T2 (de) | 1994-02-17 |
Family
ID=21814559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE88301779T Expired - Fee Related DE3883596T2 (de) | 1987-03-09 | 1988-03-01 | Reinigung von rekombiniertem Hepatitis-B-Oberflächen-Antigen. |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0291146B1 (de) |
| JP (1) | JPS63270629A (de) |
| AT (1) | ATE93891T1 (de) |
| AU (1) | AU608813B2 (de) |
| CA (1) | CA1304887C (de) |
| CY (1) | CY1790A (de) |
| DE (1) | DE3883596T2 (de) |
| DK (1) | DK123288A (de) |
| ES (1) | ES2043808T3 (de) |
| HK (1) | HK48094A (de) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR960023066A (ko) * | 1994-12-10 | 1996-07-18 | 성재갑 | 전에스 (s) 2 펩티드 함유 비 (b) 형 간염 표면항원의 정제 방법 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU584580B2 (en) * | 1982-09-08 | 1989-06-01 | Smith Kline - Rit | Hepatitis B virus vaccine |
| EP0171908A3 (de) * | 1984-07-11 | 1987-07-15 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Hepatitis-B-Virus-Oberflächenantigen und dessen Herstellung |
| US4895800A (en) * | 1985-11-26 | 1990-01-23 | Phillips Petroleum Company | Yeast production of hepatitis B surface antigen |
| JPS62298536A (ja) * | 1986-06-17 | 1987-12-25 | Green Cross Corp:The | 生理活性物質の自動精製方法および自動精製装置 |
| ATE91304T1 (de) * | 1987-02-27 | 1993-07-15 | Merck & Co Inc | Verfahren zur herstellung des pres 1/s2/shepatitis-b-antigens aus hefe. |
-
1988
- 1988-03-01 EP EP88301779A patent/EP0291146B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1988-03-01 DE DE88301779T patent/DE3883596T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-01 AT AT88301779T patent/ATE93891T1/de active
- 1988-03-01 ES ES88301779T patent/ES2043808T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1988-03-08 CA CA000560864A patent/CA1304887C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-08 AU AU12778/88A patent/AU608813B2/en not_active Ceased
- 1988-03-08 DK DK123288A patent/DK123288A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-03-09 JP JP63055919A patent/JPS63270629A/ja active Pending
-
1994
- 1994-05-12 HK HK48094A patent/HK48094A/xx unknown
-
1995
- 1995-10-20 CY CY179095A patent/CY1790A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0291146A2 (de) | 1988-11-17 |
| EP0291146A3 (en) | 1989-12-06 |
| DE3883596D1 (de) | 1993-10-07 |
| ATE93891T1 (de) | 1993-09-15 |
| CA1304887C (en) | 1992-07-07 |
| CY1790A (en) | 1995-10-20 |
| HK48094A (en) | 1994-05-20 |
| EP0291146B1 (de) | 1993-09-01 |
| ES2043808T3 (es) | 1994-01-01 |
| JPS63270629A (ja) | 1988-11-08 |
| DK123288A (da) | 1988-09-10 |
| AU1277888A (en) | 1988-09-08 |
| DK123288D0 (da) | 1988-03-08 |
| AU608813B2 (en) | 1991-04-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE68923115T2 (de) | Reinigung von Hepatitis-Proteinen. | |
| DE69127384T2 (de) | Verfahren zur Reinigung von Immunserumglobulinen | |
| US4667016A (en) | Erythropoietin purification | |
| Connell et al. | The purification of haptoglobin | |
| EP0830376A1 (de) | Verfahren zur herstellung von erythropoietin frei von tierischen proteinen | |
| DE3521679A1 (de) | Verfahren zum binden von igg an protein a | |
| EP0228452B1 (de) | Proteinreinigung | |
| EP0447585A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verträglichen Immunglobulin-G-Präparates | |
| DE69125764T2 (de) | Verfahren zur Herstellung des Von Willebrand-Faktors von höchster Reinheit | |
| DE68918673T2 (de) | IgG-bindendes Protein H, kodierendes Gen dafür und Verfahren zu seiner Herstellung. | |
| DE69027013T2 (de) | Verfahren zur Reinigung eines 69000 Dalton antigenischen Proteins aus Bordetella pertussis | |
| DE3587391T2 (de) | Verfahren zur Rückgewinnung von gereinigten Wachstumshormonen aus genetisch modifizierten Mikro-organismen. | |
| US4612283A (en) | Method for purification of HBs antigen | |
| EP0764658B1 (de) | Verfahren zur Gewinnung von Immunglobulinen aus Fraktionen, die bei der Fraktionierung von menschlichem Blutplasma entstehen | |
| DE3883596T2 (de) | Reinigung von rekombiniertem Hepatitis-B-Oberflächen-Antigen. | |
| DE69212660T2 (de) | Verfahren zur Reinigung eines hochglykosylierten Proteins | |
| EP0367840A1 (de) | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen, nicht infektiösen Antihämophiliefaktors mittels Chromatographie | |
| DE3687995T2 (de) | Verfahren zur reinigung von interferon und so hergestellte zusammensetzung. | |
| DE3882154T2 (de) | Verfahren zur Herstellung des pres 1/S2/S-Hepatitis-B-Antigens aus Hefe. | |
| DE3783261T2 (de) | Reinigung von pre-s hbsag durch affinitaetbindung mit polymerisiertem serumalbumin. | |
| DE2611723C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von einheitlichen kugelförmigen HBsAg-Teilchen | |
| EP0536564B1 (de) | Verfahren zur Reinigung von Streptolysin 0, intaktes Streptolysin 0 erhältlich nach diesem Verfahren und seine Verwendung | |
| EP0203909B1 (de) | Frühsommer-Meningoenzephalitis-Virus(FSME-Virus)-Vakzine und Verfahren zu ihrer Herstellung | |
| EP0196146A2 (de) | Verfahren zur Isolierung und Reinigung von alpha-Interferonen | |
| EP0321606B1 (de) | Zelluläre amphipatische Proteine in aggregierten Formen und Verfahren zur Herstellung und Reinigung diese Proteine |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |