DE3781686T2

DE3781686T2 - Fettsaeure und cyclosporin enthaltende zusammensetzung mit ermaessigter nephrotoxizitaet.

Info

Publication number: DE3781686T2
Application number: DE8787903559T
Authority: DE
Inventors: M Bennett; E Kelley
Original assignee: Brigham and Womens Hospital Inc; Oregon Health Science University
Current assignee: Brigham and Womens Hospital Inc; Oregon Health Science University
Priority date: 1986-05-02
Filing date: 1987-05-04
Publication date: 1993-03-11
Anticipated expiration: 2007-05-05
Also published as: DE3781686D1; EP0305400A1; AU7438287A; JP2574354B2; CA1302879C; JPH01503296A; AU588695B2; EP0305400A4; EP0305400B1; ATE80295T1; WO1987006463A1

Description

Diese Erfindung betrifft Zusammensetzungen, die eine wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Komponente enthalten, welche die nierenschädigenden Wirkungen von Cyclosporin mäßigen kann, sowie die Verwendung einer Komponente und/oder von die Komponente enthaltenden Zusammensetzungen und ein Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung.
Cyclosporin ist ein cyclisches, nichtwasserlösliches, hoch nichtpolares, aus 11 Aminosäuren bestehendes Molekül. Die Verbindung ist ein vielversprechendes immunsuppressives Mittel, das von Bodenpilz erhalten wird (Calne et al., Transplant Proc. 13 : 349-358 (1981); Ferguson et al., Surgery 92 : 175-182 (1982); Starzl et al., Gynecol. Obstet. 151 : 17-26 (1980)). Das Arzneimittel findet nun zur Verlängerung der Funktion verschiedener transplantierter Organe allgemein Anwendung. Seine immunsuppressive Wirkung hemmt selektiv die T-Zellfunktion und ermöglicht das Überleben von Allotransplantaten ohne Myelosuppression, d. h. von Herztransplantaten, Myers et al., N. Eng. J. Med. 311 : 699 (1984).
Neben seiner Verwendung bei Allotransplantatempfängern wurden kürzlich und werden noch immer klinische Versuche zur Untersuchung der Wirksamkeit von Cydosporin bei der Behandlung einer Reihe von Autoimmunerkrankungen, wie Polymyositis, Lupus erythematodes, Arthritis deformans und früher insulinabhängiger Diabetes durchgeführt (siehe einschlägige Kapitel in: Cyclosporine in Autoimmune Diseases, Hrsg. Schindler, R., Springer-Verlag, Berlin (1985), besonders von Graffenried, B., et al., S. 59-73).
Cyclosporin ist ein lipophiles Molekül mit einem Molekulargewicht von 1202 Dalton. Wenn das Arzneimittel in Olivenöl oder einer besonderen, vom Hersteller bereiteten Lösung gelöst wird, werden maximale Bioverfügbarkeit und Absorption erzielt. Das Arzneimittel bindet sofort an Plasmaproteine und besitzt eine Endhalbwertzeit von 24 Stunden. Es wird in der Leber stark metabolisiert, wobei Gallenproduktion den Hauptausscheidungsweg darstellt (Beveridge, T., Cyclosporine A: Proceedings of the International Symposium, Cambridge, White D.J., Hrsg., Seite 35-44 (1982)). Neben seinen immunsuppressiven Eigenschaften weist das Arzneimittel auch interessante Aktivitäten gegen Schistosoma und Malaria auf (Kolata, Science (Washington, D.C.) 221 : 40-42 (1983); Sanches et al., First Int'l. Montreux Conf. on Biol. Rhythms and Medications, Montreux, Schweiz, 26.-30. März 1984. Pergamon Press, Oxford (in Druck).
Trotz der vielversprechenden Aussicht als Immunsuppressivum ist seine Verwendung jedoch sowohl durch die Verbindung mit Infektionen als auch aufgrund hepatischer und renaler Toxizität etwas eingeschränkt (Ryffel, OL 27-400: "Summary of Toxicity Data", Sandoz, Basel, Schweiz (1981)).
Die klinische Verwendung von Cyclosporin ist mit reversiblen, dosisabhängigen Anstiegen der Harnstoff-Stickstoffwerte im Blut (BUN) und des Serumkreatininspiegels und Verringerung der Kreatinin-Clearance verbunden. Es wurde berichtet, daß eine gewisse Nephrotoxizität bei nahezu 80% der Patienten mit Nierentransplantaten bei Verwendung von Cyclosporin auftrat (Kahan, B.D., Dial. Transplant. 12 : 620-30 (1983)). Oft ist der Harnstickstoffspiegel im Verhältnis zum Serumkreatininspiegel unproportional erhöht.
Zu häufigen Nebenwirkungen der Cyclosporin-Behandlung bei verschiedenen Autoimmunerkrankungen zählen Nephrotoxizität, Hypertonie, Hyperkaliämie, erhöhter Blut- Harnsäurespiegel, Hepatoxizität, Anämie, Hypertrichosis, Zahnfleischhyperplasie, Magendarmunverträglichkeit, Tremor und Parästhesie. von Graffenried, B., et al., in Cyclosporine in Autoimmune Diseases, R. Schindler, Hrsg., Springer-Verlag, Berlin, S. 59-73 (1985). Die am häufigsten berichtete Nebenwirkung aus dieser Gruppe ist Nephrotoxizität.
Bennet, W.M., et al., Ann. Int. Med. 99 : 851-854 (1983) wiesen auf das beträchtliche nierenschädigende Potential hin, das mit der Cyclosporintherapie bei Patienten verbunden ist, die Nieren-, Herz-, Knochenmark- und Lebertransplantate empfangen. Akute Cyclosporin-Nephrotoxizität ist dosisabhängig, hängt mit dem Cyclosporinspiegel in Blut oder Plasma zusammen, Kahan, B.D. et al., Transplantation 34 : 36 (1982), und ist nach Herabsetzung der Dosis, Verani, R.R., et al., Am. J. Kidney Dis. 4 : 185 (1984), oder nach Beendigung der Cyclosporin-Therapie, Chapman, J.F., et al., Lancet I: 128 (1985) reversibel.
Akute Cyclosporin-Nephrotoxizität steht morphologisch mit tubulären Affektionen in Zusammenhang, die durch Einschlußkörper, isometrische Vakuolisierung und Mikrokalzifikation gekennzeichnet sind, Mihatsch, M.J., et al., Transplant Proc. 15 : 2821 (1983). Es wurden verschiedene Hypothesen zur Erklärung des Absinkens des glomerulären Filtrationsvolumens aufgestellt, das sich in dem raschen Anstieg des Serumkreatinins bei Cyclosporin-behandelten Patienten zeigt. Diese umfassen die Stimulierung tubuloglomerulärer Rückkopplung, Gutshe, H.U. et al., Ninth Int. Congress of Nephrology, Los Angeles, Juni 1984, Referat Nr. 475A (1984), und Störung der Mikrozirkulation durch die Wirkung von Cyclosporin auf die lokale Prostacyclinsynthese, Neild, G.H. et al., in B.D. Kahan, Hrsg., Cyclosporine, Gruen & Stratton, Orlando, Florida, Seite 182, (1984).
Im Gegensatz zu der bei Transplantat-Patienten angewendeten Cyclosporintherapie erhalten Patienten mit Autoimmunerkrankungen oft geringere Anfangsdosen von Cyclosporin über längere Zeiträume. Von Graffenried et al., supra, gibt Daten an, die aus Krankenberichten von laufenden klinischen Studien an Patienten stammen, die an multipler Sklerose, Arthritis deformans, Diabetes Mellitus Typ I, Uveitis posterior, primärer biliärer Leberzirrhose, endokrinem Augenleiden und systemischem Lupus erythematodes leiden. Diese Daten bezogen sich auf die Nierenfunktion bei Patienten in Cyclosporin-Dauertherapie von bis zu 24 Monaten und auf die Reversibilität nierenschädigender Wirkungen bei Patienten nach Beendigung der Cyclosporin-Behandlung. Sie berichteten, daß Cyclosporin einen Anstieg im Serumkreatinin innerhalb der ersten beiden Therapiewochen bewirkt und daß die stärkste Abnahme der Nierenfunktion innerhalb der ersten drei Monate der chronischen Behandlung eintritt, wobei die mittlere Verringerung der Kreatinin-Clearance (CRCL) 14% im Monat sechs beträgt. Nach dem Monat sechs trat nur eine geringfügige weitere CRCL- Verschlechterung ein und es wurde keine weitere Verschlechterung bis zu Monat 24 der Cyclosporin-Therapie berichtet, obwohl die Daten für diese Behandlungsdauer begrenzt sind. Das Ausmaß der Nephrotoxizität wurde auf die Cyclosporindosis und die Cyclosporinspiegel bezogen und könnte altersbezogen sein. Die Autoren schlossen, daß sich diese Faktoren wahrscheinlich bei Patienten mit Arthritis deformans, die auch eine überdurchschnittliche Nephrotoxizität zeigten, wechselseitig beeinflußten. Patienten mit unterdurchschnittlicher Basis-Nierenfunktion zeigten jedoch nur eine geringfügige und stabile Nierenfunktionsstörung trotz durchschnittlicher klinischer Dosierung von Cyclosporin. Die Autoren beobachteten, daß sich eine durch Cyclosporin hervorgerufene Nierenfunktionsstörung deutlich verbesserte, nachdem die Cyclosporindosis herabgesetzt und dadurch die Kreatininspiegel gesenkt wurden, und innerhalb von zwei Monaten nach Beendigung der Cyclosporin-Therapie vollständig reversibel ist. Eine ähnliche Reversibilität von Cyclosporin-bedingter Nephrotoxizität wurde bei Diabetes Mellitus Typ I-Patienten berichtet (Stiller, C.R., et al., Science 223 : 1362 (1984)) und bei entzündlichen Augenerkrankungen mit autoimmunem Ursprung (Palestine, A.G., et al., Am. J. Med. 77 : 652 (1984)).
Im Gegensatz zur Reversibilität einer Nierenfunktionsstörung, die durch chronische Cyclosporin-Therapie bei der Behandlung von Autoimmunerkrankungen hervorgerufen wird, wurde eine fortschreitende und möglicherweise irreversible Cyclosporin-bedingte Verschlechterung der Nierenfunktion bei Herztransplantationspatienten beschrieben (Myers, B.D., et al., N. Engl. J. Med. 311 : 699 (1984)). Es wurden auch mögliche irreversible histologische Befunde bei Nieren von Transplantat-Patienten, die eine Cyclosporin- Therapie erhalten haben, veröffentlicht (Mihatsch, M.J., et al., Transplant Proc. 15:2821 (1983); Myers, B.D. et al., N. Engl. J. Med. 311:699 (1984)). Tatsächlich stellte von Graffenried et al., supra, fest, daß obwohl die Daten von Cyclosporin-behandelten Patienten, die an Autoimmunerkrankungen leiden, die volle Reversibilität von Cyclosporinbedingter akuter Nephrotoxizität zu zeigen scheinen, eine sehr langsam fortschreitende chronische Nephropathie nicht ausgeschlossen werden kann, da der Parameter, der zur Bewertung der Nierenfunktion herangezogen wurde (Serumkreatinin), nicht empfindlich genug ist, um eine frühe Nephronbeeinträchtigung zu erkennen, und da die Anzahl der Daten für eine Patientenbehandlung von mehr als einem Jahr gering ist.
Aus der vorangehenden Diskussion geht hervor, daß eine Verschlechterung der Nierenfunktion eine wesentliche Nebenwirkung darstellt, welche die praktische klinische therapeutische Wirksamkeit der Cyclosporin-Behandlung für Patienten mit oder ohne Transplantaten verringert. Der Zusammenhang von Cyclosporindosis (und -spiegel) und Nephrotoxizität läßt darauf schließen, daß Cyclosporinspiegel innerhalb eines sehr schmalen therapeutischen Bereichs gehalten werden müssen, d. h. nieder genug, um die Nephrotoxizität auf ein Minimum zu senken, aber hoch genug, um die immunsuppressiven therapeutischen Zielsetzungen zu erfüllen.
Wenn zum Beispiel Cyclosporin mit dem Ziel verabreicht wird, eine Allotransplantatabstoßung zu vermeiden, ist ein Fließgleichgewichtswert von weniger als 200 ng/ml wahrscheinlich nicht immunsuppressiv genug, um eine Abstoßung zu vermeiden, während Nephrotoxizität und andere Nebenwirkungen bei Konzentrationen von mehr als 400 nglml häufiger auftreten. Ein derartiges schmales therapeutisches Fenster kann in der klinischen Praxis nur schwierig eingehalten werden. Bennett, W.M., et al., Ann. Int. Med. 98:851-854 (1983). Ferner wurde darauf hingewiesen, das jeder Vorteil, der sich aus der verringerten Abstoßung von Nierentransplantaten ergibt, langfristig durch die chronische Nephropathie, die durch die Cydpsporin-Therapie selbst bewirkt wird, mehr als ausgeglichen wird. Myers, B.D., et al., N. Eng. J. Med. 311 : 699-705 (1984). Bei Verwendung von Cyclosporin zur Suppression der mit Autoimmunerkrankungen verbundenen immunen Entzündung wurden dieselben Bedenken wegen der Gefahr, eine schwere chronische Nephropathie auszulösen, geäußert, Ld. Als Ergebnis dieser Überlegungen haben Myers et al., supra, auch die Notwendigkeit von Maßnahmen zum Ausdruck gebracht, die den Sicherheitsbereich zwischen der Cyclosporindosis, die zur Erzielung einer wirksamen Immunsuppression erforderlich ist, und der Dosis, die wahrscheinlich zu einer Nierenschädigung führt, erweitern.
Während der Mechanismus der Nierenfunktionsstörung unklar ist, wurde eine verstärkte Nierensynthese von Thromboxan im Verlauf von immunvermittelten und nichtimmunologisch bewirkten Arten von Nierenschäden nachgewiesen.- Lianos, E.A., et al., J. Clin. Invest. 72 : 1439-1448 (1983); Okegawa, T., et al., J. Clin. Invest. 71 : 81-90 (1983); Purkeroon, M.L., et al., Kid. Inter. Abstr. 25:251 (1984); Remuzzi, G., et al., Kid. Inter. Abstr. 25:217 (1984); Ichikawa, 1., et al., Kid. Inter. Abstr. 25 : 231(1984). Thromboxan, ein Prostanoid, ist ein Metabolit der Arachidonsäure, der auf dem Cyclooxygenaseweg erhalten wird. Die anderen Prostanoide sind die Prostaglandine und Prostacycline. Die Prostanoide sind hochwirksame Mediatoren, die während immunologisch bedingter Entzündungen erzeugt werden und die Nierenhämodynamik stark verändern können. Morley, J., in Lymphokines, E. Pick, Hrsg., Academic Press, New York, 4 : 377-391(1981); Lewis, G.P., Br. Med. Bull. 39:243-248 (1983); Dunn, M.J., in Renal Prostagiandins, M.J. Dunn, Hrsg., Williams & Wilkins, Baltimore, S. 1-74 (1983). Prostanoide und Eikosanoide, die Arachidonsäuremetaboliten sind, werden nach dem unmittelbaren Bedarf von Zellen synthetisiert und nicht in beträchtlichen Mengen zur späteren Freisetzung gespeichert. Harrison's Principles of Internal Medicine, 10. Auflage, S. 482-487 (1983).
Kawaguchi, A., et al., Transplantation 40(2):214-216 (1985) fanden heraus, daß die Ausscheidung von Thromboxan B2, eines Harnzerfallsprodukts von Thromboxan A2, stark mit den Serumcyclosporinspiegel bei Ratten in Zusammenhang steht. Die Autoren schlossen, daß hohe Cyclosporindosen mit einer verstärkten Synthese von Thromboxan B2 von der Niere oder anderen extrarenalen Quellen verbunden sind. Es wird festgestellt, daß obwohl die klinische Toxizität von Cyclosporin eine Ähnlichkeit mit den pathogenen Eigenschaften von Thromboxan A2 aufweist, es unklar ist, ob der beobachtete Anstieg der Thromboxan B2-Synthese mit der Cyclosporin-bedingten Nephrotoxizität zusammenhängt. Es wurde auch berichtet, daß Cyclosporin eine erhöhte Bildung von Prostaglandinen der E-Reihe (PGE) in gezüchteten menschlichen Monocyten bewirkt. Whisler, R.L., et al., Transplantation 38:377-381 (1984). Die Autoren stellen fest, daß die erhöhte PGE-Bildung eine Cyclooxygenaseaktivität erfordert, und behaupten, daß diese hauptsächlich durch die größere Verfügbarkeit von endogener Arachidonsäure für den Cyclooxygenaseweg vermittelt wird.
Es wurde gezeigt, daß die Abstoßung menschlicher Nierentransplantate mit einem frühen Anstieg in der Urinausscheidung von immunreaktivem Thromboxan B2 (iTXB2) verbunden ist (Foegh, M.L. et al., Transplantation Proc. 16(6): 1606-1608 (1984)) und dies wurde als immunologische Kontrolle bei Nierentransplantationspatienten vorgeschlagen (Foegh, M.L. et al., Transplantation Proc. 16(6):1603-1605 (1984)). Khiabadi, B.S., et al., Transplantation 39(1):6-8 (1985) berichten, daß Anstiege im Harn-iTXB2 bei einem Rattenmodell mit heterotropen Herztransplantatsabstoßungen verbunden sind. Die Autoren stellen fest, daß das genaue Verhältnis von Harn-iTXB2 während des Abstoßungsprozesses noch immer auf Vermutungen beruht und in Erfahrung gebracht werden muß.
Aktive Metaboliten der Arachidonsäure werden auf einem von zwei synthetischen Wegen gebildet - dem Cyclooxygenase- oder dem Lipoxygenasesystem. Die Produkte des Cyclooxygenasewegs - die Prostaglandine, Prostacycline und Thromboxane - werden zusammenfassend als Prostanoide bezeichnet. Der Begriff "Eicosanoide" umfaßt die Produkte des Lipoxygenasewegs - 5-Hydroxyeicosatetraensäure und Leukotrien - und die Prostanoide.
Der erste synthetische Schritt in beiden Wegen beinhaltet die Abspaltung der Arachidonsäure von der Phospholipidplasmamembran der Zellen. Dann kann die freie Arachidonsäure durch den Cyclooxygenase- oder Lipoxygenaseweg metabolisiert werden. Das erste Produkt des Cyclooxygenasewegs ist das cyclische Endoperoxid PGG&sub2;, das danach zu PGH&sub2; umgewandelt wird. Diese stellen in der Bildung der klassischen Prostaglandine (PGA&sub2;, PGD&sub2;, PGE&sub2; und PGF&sub2;-Alpha), von Prostacyclin (PGI&sub2;) und Thromboxan A&sub2; (TXA&sub2;) Schlüsselverbindungen dar. Das erste Produkt des Lipoxygenasewegs ist die Hydroperoxeicosatetraensäure (HPETE), die eine Zwischenverbindung in der Bildung der 5-Hydroxeicosatetraensäure (HETE) und der Leukotriene (LTA, LTB, LTC und LTD) darstellt. Es ist bekannt, daß zwei Fettsäuren außer der Arachidonsäure - 3,11,14-Eicosatriensäure (Dihomo-gamma-linolensäure) und 5,8,11,14, 17-Eicosapentansäure - zu Metaboliten umgewandelt werden können, die eng mit den Prostanoiden und Eicosanoiden verwandt sind. Die Produkte dieser verschiedenen Fettsäuresubstrate werden durch ihren tiefgestellten Index unterschieden: Produkte der Dihomo-gamma-Linolensäure erhalten den Index 1; Arachidonsäureprodukte erhalten den Index 2; und Produkte der 5,8,11,14,17-Eicosapentansäure erhalten den Index 3. Die Indizes bezeichnen zusätzlich die Anzahl der Doppelbindungen zwischen Kohlenstoffatomen in der Seitenkette der Produkte.
Metaboliten der Arachidonsäure werden in vivo rasch katabolisiert. Die Prostaglandine der E- und F-Reihe sind chemisch stabil, werden aber dennoch nahezu vollständig in einem einzigen Durchgang durch Leber und Lunge abgebaut. Daher stammt im Prinzip jedes nichtmetabolisierte PGE, das im Harn gemessen werden kann, von der Nieren- und Samenbläschenausscheidung, während PGE-Metaboliten im Harn die PGE-Synthese durch andere Organe darstellen. PG1&sub2; und TXA&sub2; sind chemisch instabil und werden auch rasch katabolisiert. PGI&sub2; wird zu 6-Keto-PGF&sub1;-alpha und TXA&sub2; zu TXB&sub2; umgewandelt. Sowohl PGI&sub2; als auch TXA&sub2; sind in vivo kurzlebig und die Messung ihrer inaktiven Metaboliten stellt die herkömmliche Methode zur Erstellung eines Index für ihr Bildungsausmaß dar.
Von Arachidonsäuremetaboliten wird behauptet, daß sie eine Rolle in der Pathologie einer Reihe von Erkrankungen spielen, einschließlich der bösartigen Hyperkalzämie, Knochenresorption bei Arthritis deformans und Zahnzysten, des Bartter-Syndroms, der Diabetes mellitus, essentiellen Hypertonie, des offenen Ductus arteriosus, der gastrointestinalen Ulcuserkrankung, Dysmenorrhoe und von Asthma.
Einige Argumente sprechen für einen Zusammenhang zwischen den Arachidonsäuremetaboliten und der Entzündungsreaktion: endogene Prostaglandine werden gleichzeitig durch Hystamin und Bradykinin freigesetzt; von einigen Arachidonsäuremetaboliten weiß man, daß sie Vasodilation und Hyperalgesie verursachen; Prostaglandine sind in Entzündungsbereichen vorhanden, polymerphonucleare Zellen setzen während der Phagozytose PGE frei und PGE ist für Leukozyten chemotaktisch; erhöhte Gefaßdurchlässigkeit, die zu lokalen Ödemen führt, wird durch einige Arachidonsäuremetaboliten verursacht; PGE- bedingte Vasodilatation wird durch Atropin, Propanoiol, Methysergid oder Antihistamine nicht beseitigt, die dafür bekannt sind, anderen vermeintlichen Entzündungsreationsmediatoren entgegenzuwirken, was auf eine direkte Entzündungswirkung von PGE schließen läßt; Arachidonsäuremetaboliten verursachen in Tiermodellen Schmerz und bei Menschen Hyperalgesie oder erhöhte Schmerzempfindlichkeit; PGE verursacht Fieber nach Injektion in die Hirnventrikel oder in den Hypothalamus von Versuchstieren; und Pyrogene führen zu erhöhten Konzentrationen von Prostaglandinen in der Zerebrospinalflüssigkeit, aber Hemmstoffe der Prostaglandinsynthese setzen das Fieber herab und verringern die Freisetzung von Prostagiandinen in die Zerebrospinalflüssigkeit.
Metaboliten der Arachidonsäure spielen auch eine vermeintliche Rolle in der Immunantwort. Es ist bekannt, daß kleine Mengen von PGE die Stimulation menschlicher Lymphozyten durch Mitogene wie Phytohämagglutinin unterdrücken, was zu der Annahme führt, daß diese Substanzen als negative Modulatoren der Lymphozytfunktion dienen, vielleicht durch einen negativen Rückkopplungssteuermechanismus. Die Empfindlichkeit der Lymphozyten auf die Hemmwirkungen von PGE&sub2; nimmt mit dem Alter zu und Indometacin erhöht bei Älteren die Lymphozytreaktionsfähigkeit auf Mitogene in einem größeren Ausmaß. Lymphozyten, die von Patienten mit Hodgkin-Krankheit kultiviert wurden, setzen nach der Zugabe von Phytohämagglutinin mehr PGE&sub2; frei, und die Lymphozytreaktionsfähigkeit wird durch Indometacin verstärkt. Wenn Suppressor-T-Zellen aus den Kulturen entfernt werden, wird die Menge an synthetisiertem PGE&sub2; verringert und die Reaktionsfähigkeit der Lymphozyten von den Hodgkin-Patienten unterscheidet sich nicht mehr von Kontrollen. Die herabgesetzte Zellimmunität bei Patienten mit der Hodgkin-Krankheit kann das Ergebnis der PGE-Hemmung der Lymphyzytfunktion sein. Eine allgemeine, medizinisch relevante Besprechung der Arachidonsäuremetaboliten findet man in Harrison's Principles of Internal Medicine, 10. Aufl., S. 482-487 (1983).
Der obligatorische Vorläufer der Arachidonsäure ist die Linolsäure (C18 : 2 Omega-6). Die Linolsäure ist eine mehrfach ungesättigte Fettsäure der Omega-6-Familie. Die Omegazahl gibt die Stelle der ersten Doppelbindung, ausgehend von Methylende der Fettsäure, an. Die beiden anderen wichtigen Familien der ungesättigten Fettsäuren sind die Oleinsäure- (Omega-9-) Familie und die Linolensäure- (Omega-3-) Familie. Die drei Fettsäurefamilien sind metabolisch nicht interkonvertierbar. Der Hauptmetabolit der Oleinsäure ist die Eicosatriensäure (C20 : 3 Omega-9). Die Hauptmetaboliten der Omega-3- (Linolen-) Säurefamilie sind die Eicosapentansäure (C30 : 5 Omega-3) und die Docosahexaensäure (C22 : 6 Omega-3). Die Hauptnahrungsquellen von Linol- und Linolensäure sind Samen und Blätter. Die wichtigsten Omega-3-Fettsäuren, Eicosapentansäure und Docosahexaensäure, werden jedoch durch Phytoplankton synthetisiert, die den Boden der Nahrungskette von Meerestieren bilden. Daher sind Fisch und besonders Fischöl mit Omega-3-Fettsäuren angereichert, vor allem mit Eicosapentansäure und Docosahexaensäure. Die Omega-6- und Omega-3-Fettsäurefamilien können von Menschen nicht de novo synthetisiert werden, und werden als essentielle Fettsäuren betrachtet.
Andere mehrfach ungesättigte Fettsäuren neben der Arachidonsäure können als Substrate für die Prostagiandinsynthese dienen. Zum Beispiel dient die Dihomo-gammalinolensäure (DHLA) (C20 : 3 Omega-6) als Substrat für Prostagiandine der "1"-Reihe, wie das klassische Prostagiandin PGE&sub1;. Willis, A.L., Nutr.Rev. 39:289-301 (1981). Eicosapentansäure (C20 : 5 Omega-3) ist das Substrat für Prostaglandine der "3"-Reihe und führt unter gewissen Bedingungen zur Bildung von Thromboxan A&sub3;, PGA&sub3; und PGI&sub3;. Id. Während die Einnahme von Linolensäure (C18 : 3 Omega-3) keinen signifikanten Anstieg der Eicosapentansäure im Plasma von erwachsenen Menschen bewirkt (Dyerberg, J. et al., Lancet 1 : 199 (1980)), führt die Einnahme von Meerestieren, die reich an Eisosapentansäure sind, zu einer raschen Aufnahme dieser Fettsäuren sowohl in den Thrombozyten als auch in den endothelialen Zellmembranen. Siehe z. B. Sless, W., et al., Lancet 1:441-441 (1980); Sanders, T.A.B., et al., Lancet 1:1189 (1980); und Bezugsliteratur, die bei Goodnight, S.H., et al., Arterioscierosis 2 : 87-113 (1982) angeführt ist. Bei der Besprechung der Wirkungen von mehrfach ungesättigten Diätfettsäuren schließen Goodnight et al., daß die Verabreichung von Omega-3-fettsaurereichen Fischölen an Menschen zu einer reproduzierbaren Verlängerung der Blutungszeit, Hemmung der Thrombozytenaggregation durch ADP und Collagen, wie auch zu einer Abnahme der Thrombozytenretention auf Glaskugeln führt. In einigen Fällen, so stellen die Autoren fest, kann es auch zu einer Verminderung in der Thrombozytenzahl kommen. Die Autoren schließen, daß die Aufnahme von Speisefischölen, welche die Omega-3-Fettsäure Eicoapentansäure enthalten, eine starke Wirkung auf die Thrombozyten- oder Gefaßzusammensetzung und -funktion haben könnte. Zelluläre Phospholipidkonzentrationen der Arachidonsäure werden verringert, die Blutungszeit verlängert und verschiedene in vitro-Tests der Thrombozytenfunktion sind unterbunden. Eine Erklärung, die von den Autoren für die Thrombozytenhemmung geboten wird, ist die signifikante Verringerung der Thrombozyten-Thromboxansynthese.
Die Einnahme großer Mengen an Speisefischölen kann zu unerwünschten Nebenwirkungen führen. Zum Beispiel enthalten einige Fischöle hohe Werte an Cetoleinsäure (C22 : 1 Omega-11), einem Isomer der Erukasäure (C22 : 1 Omega-9). Es ist bekannt, daß hohe Werte der Erukasäure eine vorübergehende myokardiale Lipidspeicherkrankheit und Fibrose bei Versuchstieren bewirken. Food and Agriculture Organization of the United Nations, Joint FAO/WHO Report, FAO Food & Nutrition Paper, Nr. 3, Rom, Italien (1977). Die Verabreichung hoher Werte an Fischöl führt auch zur Entwicklung der Gelbfett-Krankheit bei Versuchstieren. Diese Krankheit steht mit einem Vitamin-E-Mangel in Zusammenhang, der durch die stark ungesättigte Natur der Omega-3-Fettsäuren verschlechtert werden kann. Garton, G.A., et al., Biochem. J. 50:517-524 (1952). Die Verabreichung von Fischöl beeinträchtigt die Thrombozytenfunktion, erhöht die Blutungszeiten und führt zu einer Thrombozytenverminderung bei Menschen. All dies läßt darauf schließen, daß es für Menschen unbrauchbar oder sogar unsicher sein könnte, sehr große Mengen an Speisefischölen einzunehmen, oder sich nur auf Fischöle als Lipidquelle zu verlassen. Andererseits lassen Studien, die an menschlichen Bevölkerungsgruppen durchgeführt wurden, die historisch große Mengen an Omega-3-Fettsäuren zu sich nehmen, besonders die Eskimos an der Küste von Grönland, darauf schließen, daß es neben den verlängerten Blutungszeiten und der Thrombozytenverminderung keine signifikanten Nebenwirkungen einer Ernährung mit großem Fischölanteil gibt. Bang, H.O., et al., Acta. Med. Scan. 192:85-94 (1972); Bang, H.O., et al., Acta. Med. Scan. 200:69-73 (1976); Dyerberg, J., et al., Lancet 2 : 117-119 (1978).
Kelley, V.E., et al., J. Immunol. 134(3):1914-1919 (1985), ergänzte die Nahrung von MRL-1pr-Mäusen mit Fischöl als ausschließliche Lipidquelle und berichtete, daß dadurch autoimmuner Lupus unterdrückt wurde. Durch die Meeresöldiät wurde die lymphoide Hyperplasie, die durch das 1pr-Gen reguliert wird, verringert, Anstiege in der Makrophagenoberflächen-Ia-Expression verhindert, die Bildung zirkulierender retroviraler gp70 Immunkomplexe vermindert, der Beginn der Nierenerkrankung verzögert und das Überleben dieser Mäuse im Vergleich zu Mäusen verlängert, die Safloröl als Lipidquelle erhielten. Die Autoren setzen voraus, daß die einzigartigen Fettsäuren, Eicosapentansäure oder Docosahexaensäure, die in Fischölen aber nicht in pflanzlichen oder fleischlichen Ölen vorhanden sind, für die beobachtete Verringerung der Autoimmunität verantwortlich sind, da beide Fettsäuren Gewebe- und zelluläre Cyclooxygenase-Metabolitwerte verändern können. Die Autoren gehen davon aus, daß eine oder beide dieser einzigartigen Fettsäuren nicht nur Veränderungen in der Autoimmunität bewirken können, sondern auch Cyclooxygenasemetaboliten vermindern und die Niere vor Nierenerkrankung schützen können. Kelley, V.E., et al., J. Clin. Invest. 77 : 252 (1986). Unter Verwendung von zwei verschiedenen autoimmunen Mausstämmen - MRL-1pr und NZBxNZW FI Hybrid - mit vorhersagbaren fortschreitenden Formen von Lupus nephritis, die der menschlichen Nierenerkrankung ähnlich ist, zeigten die Autoren einen zunehmenden Anstieg in der intrarenalen TXB&sub2;-Synthese, sobald sich die Nierenfunktion verschlechterte und sich pathologische Nieren alle weiterentwickelten, aber es wurden keine kontinuierlichen Anstiege von PGE&sub2; oder 6-Keto-PGF&sub1;-alpha zu anderen Cyclooxygenasemetaboliten beobachtet. Nierenerkrankungen wurden entweder durch pharmakologische Dosen von PGE&sub2; oder Nahrungsergänzungen mit Fischöl verhindert, wobei TXB&sub2; nicht anstieg.
Vor der vorliegenden Erfindung bestand daher ein Bedarf, die wesentlichen nierenschädigenden Wirkungen von Cyclosporin zu verringern, um die Verwendung dieses Arzneimittels in der klinischen Behandlung von Patienten mit oder ohne Transplantation verwenden zu können. Es wurde festgestellt, daß Fließgleichgewichtswerte von Cyclosporin genau eingehalten werden müssen, um zur Verhinderung einer Transplantatsabstoßung ausreichend immunsuppressiv zu wirken und dennoch die Nephrotoxizität und andere Nebenwirkungen von Cyclosporin zu vermeiden, und daß dieses enge Therapiefenster in der Praxis schwierig einzuhalten ist. Ein Verfahren, das den Klinikern eine Ausweitung des Sicherheitsbereichs zwischen der Cyclosporindosis, die zur Erzielung einer effektiven Immunsuppression erforderlich ist, und der Dosis, die wahrscheinlich eine Schädigung der Niere bewirkt, ermöglicht, besäße in der Behandlung von Transplantat-Patienten und von Patienten, die an Immunerkrankungen leiden, großen therapeutischen Wert.
Gemäß einem ersten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird eine Zusammensetzung geschaffen, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mäßigt.
Eine bevorzugte Fettsäurekomponente umfaßt Eicosapentansäure.
Eine andere bevorzugte Fettsäurekomponente umfaßt Docosahexaensäure.
In einer bevorzugten Form wird die Fettsäurekomponente synthetisch hergestellt.
In einer weiteren bevorzugten Form stammt die Fettsäurekomponente von einer natürlichen Quelle, die vorzugsweise Fischöl umfaßt.
Gemäß einem zweiten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird eine Zusammensetzung geschaffen, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins zur Verwendung in der Medizin verringert.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des zweiten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem dritten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird die Verwendung einer Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder eines pharmakologisch verträglichen Salzes davon in der Bereitung eines Mittels zur Mäßigung der nierenschädigenden Wirkung von Cyclosporin vorgesehen.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des dritten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem vierten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird die Verwendung einer Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mäßigt, in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung der nierenschädigenden Wirkung von Cyclosporin vorgesehen.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des vierten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem fünften Merkmal der vorliegenden Erfindung wird die Verwendung einer Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder eines pharmakologisch verträglichen Salzes davon in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung von Cyclosporin-bedingtem Nierenthromboxan vorgesehen.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des fünften Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem sechsten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird die Verwendung einer Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mäßigt, in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung von Cyclosporin-bedingtem Nierenthromboxan vorgesehen.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des sechsten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem siebenten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird eine Zusammensetzung geschaffen, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin und eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mäßigt, als kombiniertes Präparat zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung zur Verringerung der nierenschädigenden Wirkungen von Cyclosporin.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des siebenten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Gemäß einem achten Merkmal der vorliegenden Erfindung wird ein Verfahren für die Bereitung einer Zusammensetzung geschaffen, welches das Vermischen einer therapeutisch wirksamen Menge von Cyclosporin und einer Fettsäurekomponente umfaßt, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mäßigt.
Bevorzugte kennzeichnende Teile des achten Merkmals der vorliegenden Erfindung entsprechen jenen des ersten Merkmals.
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf die Entdeckung, daß Fischöl oder einige wirksame Bestandteile davon, die Nephrotoxizität verringern, die durch die Verabreichung von Cyclosporin herbeigeführt wird. Die Erfinder haben entdeckt, daß Zusammensetzungen, die Emulsionen von Cyclosporin in Fischöl oder in aktiven Wirkstoffen von Fischöl enthalten, und therapeutische Methoden, welche diese Zusammensetzungen beinhalten, die Verabreichung von Cyclosporin in höheren wirksamen klinischen Dosen ermöglichen, wobei die Nephrotoxizität signifikant verringert wird. Die Verwendung von Fischöl oder anderem Öl, das vorwiegend aus Omega-3 mehrfach ungesättigten Fettsäuren wie Eicosapentansäure oder Docosahexaensäure als Träger für die Cyclosporinverabreichung besteht, erhöht die wirksame therapeutische Dosis des darin enthaltenen Cyclosporins und verringert die durch Cyclosporin verursachte Nierenfunktionsstörung. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung ermöglichen die Verwendung höherer Gleichgewichts- Cyclosporindosen für die klinische Behandlung von Patienten mit oder ohne Transplantationen, mit verminderten oder beseitigten nierenschädigenden Nebenwirkungen. Die Zweckmäßigkeit der vorliegenden Erfindung in der Behandlung von Transplantat-Patienten und Patienten, die an Autoimmunerkrankungen leiden, wird für den Fachmann in der betroffenen Wissenschaft offensichtlich sein.
Fig. 1 zeigt die Wirkung von Cyclosporin A auf A23187-stimulierte Makrophagen- Cyclooxygenaseprodukte.
Unter "Cyclosporin" wird ein Mitglied der Gruppe biologisch aktiver Metaboliten verstanden, die durch Tolyplocadium inflatum Gams (vormals Trichoerma polysporum Rifia) und andere fungi imperfecti erzeugt werden. Es wurden etwa neun Haupt- und Nebenmetaboliten identifiziert, die als Cyclosporin A-I bezeichnet werden. Von diesen werden die nichtpolaren cyclischen Oligopeptide, Cyclosporin A und Cyclosporin C mit immunsuppressiver, antifungaler und antiphlogistischer Wirksamkeit bevorzugt. Besonders bevorzugt ist Cyclosporin A.
Unter "therapeutisch wirksamer Menge" wird eine Menge an Cyclosporin verstanden, die zur Herbeiführung eines klinisch günstigen Ergebnisses in der Behandlung von Tieren, vorzugsweise Säugetieren und besonders bevorzugt Menschen, ausreicht. Für den Fachmann in der Heilkunst ist es offenkundig, daß die therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin für eine bestimmte klinische Indikation notwendigerweise den Bedürfnissen und Symptomen des Patienten entsprechend unterschiedlich ist und vom Fachmann selbstverständlich diesen Bedürfnissen entsprechend verändert werden kann. Es ist daher weder möglich noch wünschenswert, diese therapeutisch wirksame Menge willkürlich durch Zahlen zu begrenzen. Eine übliche therapeutische Cyclosporinmenge liegt im Bereich von 5-25 mg/kg/Tag.
Die "Fettsäurekomponente" der vorliegenden Erfindung umfaßt eine Fettsäure, die eine Omega-3-Fettsäure enthält, wobei diese Omega-3-Fettsäure entweder ein synthetisches Produkt ist, oder von einem natürlichen Produkt wie Fischöl, Samen, Blätter oder Phytoplankton stammt. Die "Fettsäurekomponente" kann entweder im wesentlichen reine Omega-3-Fettsäure sein oder die Omega-3- Fettsäure in einer Menge enthalten, die zur Verringerung der Thromboxanwerte und/oder Mäßigung der nierenschädigenden Wirkungen von Cyclosporin ausreicht.
Eine übliche Dosierung des aktiven Wirkstoffs liegt im Bereich von 1,25 bis 6,25 mg/kg/Tag der Omega-3-Fettsäure oder einer entsprechenden Menge von Fischöl.
Ferner werden mit 30-400 Gramm Fisch pro Tag ausreichende Werte des aktiven Wirkstoffs erhalten.
Unter "Omega-3" wird eine mehrfach ungesättigte Fettsäure verstanden, welche die erste Doppelbindung drei Kohlenstoffe ausgehend von Methylende der Fettsäure aufweist. Diese Familie umfaßt die Linolensäure (C18 : 3 Omega-3), Eicosapentansäure (C20 : 5 Omega-3) und die Docosahexaensäure (C22 : 6 Omega-3). Von diesen werden die Eicosapentansäure und die Docosahexaensäure, welche die vorwiegenden Bestandteile von Meeresölen darstellen, bevorzugt. Besonders bevorzugt ist die Eicosapentansäure.
Unter "Fischöl" wird jedes Öl verstanden, das von Fisch oder jeder anderen Form von Meereslebewesen stammt, aber vorzugsweise von Fisch. Bevorzugte Meeresöle für den Zweck der vorliegenden Erfindung sind Lachsöl, Dorschlebertran, Welsöl, Makrelenöl und Walöl. Von diesen wird Dorschlebertran bevorzugt und Makrelenöl besonders bevorzugt. Fischöl enthält Fettsäuren vorwiegend aus der Omega-3-Familie.
Unter "pharmakologisch verträglich" wird eine Zusammensetzung verstanden, die eine ausreichende Reinheit, Stabilität und andere derartige Eigenschaften aufweist, die sie für die klinische oder versuchsweise Verabreichung an Tiere verträglich machen.
Unter "Mäßigung" wird eine Wirkung, insbesondere eine verringernde Wirkung verstanden. In Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung bezieht sich "Mäßigung" auf die Wirkung zur Verringerung der Cyclosporin-bedingten Nephrotoxizität.
Unter "Verabreichung" wird die Gabe an ein Tier, vorzugsweise an einen Menschen verstanden. Verabreichungsformen sind in der Heilkunst gut bekannt und umfassen die orale, rektale, vaginale, parenterale, intramuskuläre, intravenöse oder intraperitoneale. Die Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können zum Beispiel als Suspensionen, Lösungen, Tabletten oder Salben verabreicht werden.
Ein Ersatz des herkömmlichen Olivenölträgerstoffs für die Cyclosporinverabreichung durch die Fettsäurekomponente der vorliegenden Erfindung, vorzugsweise Fischöl, das reich an Fettsäuren der Omega-3-Familie ist, und besonders bevorzugt Eicosapentansäure, wird die Nierenfunktion und Histologie in der Cyclosporintherapie deutlich verbessert. Nierenthromboxan wird ebenso vermindert. Das Ergebnis der vorliegenden Erfindung ist, daß klinische Cyclosporin-Nephrotoxizität verringert wird, wodurch die Behandlung mit höheren Werten als bisher möglich waren durchgeführt werden kann, und daß bei einer bestimmten Cyclosporindosis eine größere klinische Reaktion erzielt wird. Dieses günstige Ergebnis, das durch die Verwendung der Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindungen zustandekommt, kann gegebenenfalls ohne den Bedarf an fischölreichen Diäten erzielt werden, die ihrerseits zu unerwünschten Nebenwirkungen führen können.
Nachdem die Erfindung nun allgemein beschrieben wurde, wird zur näheren Erklärung auf die folgenden Beispiele bezug genommen, die den Bereich der beanspruchten Erfindung in keiner Weise einschränken sollen.

BEISPIEL I

FISCHÖL ALS TRÄGER FÜR CYCLOSPORIN VERÄNDERT DIE EXPERIMEN- TELLE NEPHROTOXIZITÄT UND VERRINGERT NIERENPROSTANOIDE

1 cc Fischöl (MaxEPA, RP., Scherer Corp., Troy, Michigan) oder Olivenöl (The Napoleon Company, Seattle, Washington) wurde einmal täglich durch künstliche Sondenernährung an Gruppen von männlichen Fischer 344 Ratten (Simonsen Laboratories, Inc., Gilroy, Kalifornien) mit einem Gewicht von 250-300 Gramm verabreicht. Nach 7 Tagen (14 Tagen in der laufenden Studie) wurde dem Fischöl und Olivenöl Cylosporin (Sandoz, Inc., E. Hanover, New Jersey) mit 12,5 mg/cc beigegeben und die Tiere wurden 14 Tage lang täglich mit 50 mg/kg Cyclosporin durch künstliche Sondenernährung behandelt. Kontrollgruppen erhielten weiterhin nur Fischöl- oder Olivenölträger in entsprechenden Dosen. Die Tiere wurden paarweise mit Standardrattenfutter gefüttert, um Wirkungen des Cyclosporin-bedingten Gewichtsverlusts zu kontrollieren, und erhielten Leitungswasser ad libitum. Vergleichbar behandelte Tiere und Kontrolltiere wurden entweder für Nierenprostanoidtests oder zur Bestimmung des glomerulären Filtrationsvolumen herangezogen.
Nierenfunktion und Pathologie: 48 Stunden vor der Tötung wurden die Tiere einzeln in Stoffwechselkäfigen untergebracht. Der Harn wurde 24 Stunden vor der Tötung gesammelt und die Kreatininkonzentration mit einem Cobas Biozentrifugationsanalysator (Roche Biomedical Instruments) und die Natriumkonzentration mit einem automatischen Flammenfotometer (Instrumentation Laboratories, Lexington, Massachusetts) analysiert. Bei der Tötung wurden die Tiere mit Äther anästhesiert und Blut wurde durch direkte Herzpunktion zur Bestimmung der Konzentration des Harnstoff-Stickstoffs im Blut mittels Cobas Biozentrifugationsanalysator, Kreatinins und Natriums entnommen. Vollblut- Cyclosporinkonzentrationen wurden durch Radioimmunotest (Sandoz, Inc., E. Hannover, New Jersey) bestimmt. Beide Nieren wurden entfernt und gewogen. Eine Niere wurde aufgeschnitten und formalinfixiert und von einer Person, die die Behandlungsgruppen nicht kannte, durch Lichtmikroskopie bewertet. Von den anderen Nieren wurde Rindengewebe erhalten und die Prostanoidwerte durch Verfahren, wie in der Folge beschrieben, analysiert.

Inulin-Clearance

Ratten wurden mit Ketamin anästhesiert und erhielten eine Anfangsdosis von 0,25 uCi ¹&sup4;C-Inulin in 6 ml 1 % NaHCO&sub3; durch eine Oberschenkelvenenkanüle und anschließend eine Erhaltungsinfusion von 2,5 uCi ¹&sup4;C-Inulin in 10 ml 1 % NaHCO&sub3; mit einer Geschwindigkeit von 52 ul/Min. Nach 30 Min. Gleichgewichtszeit wurde Harn in vier Zeiträumen von zumindest 20 Minuten jeweils über eine Kanüle, die direkt in die Blase gelegt wurde, entnommen. Durch einen Jugularvenenkatheter wurden 0,35 ml Blut in der Mitte jeder Harnabnahme entnommen und durch gleiche Volumina 1 % NaHCO&sub3; ersetzt. Die Inulin-Clearancewerte, die in ml/Min/100 g Körpergewicht angegeben sind, stellen den Durchschnitt der vier Clearancezeiträume dar.

Extraktion der Cyclooxygenasemetaboliten

Nach Entfernung der Nierenkapsel wurde die Niere geteilt und das Mark und die Rinde durch Feinsektion getrennt. Zusätzlich wurde von jeder Maus die Lunge entfernt. Die Gewebe wurden sofort mit Krebs-Ringer-Hydrogencarbonatpuffer (KRB) bei pH 7,2 befeuchtet und 10-30 mg Gewebe wurden gleichförmig mit einer Rasierklinge zerkleinert und in 2 ml KRB in einem 25 ml Kolben auf einer Schüttelplatte in einem 5% CO&sub2;-Inkubator bei 37ºC 15 oder 30 Min. inkubiert. Alle Überstände wurden sofort bei -70ºC für PGE&sub2;, TXB&sub2; (stabiles Zerfallsprodukt von TXA&sub2;) und 6-Keto-F1a von Geweben gelagert, da Prostanoide sich eher im Medium als in den Geweben ansammeln.

PGE&sub2;-, TXB&sub2;- und 6-Keto-PGF1a-Tests

Der PGE&sub2;-, TXB&sub2;- und 6-Keto-PGF1a-Gehalt des Überstands wurde durch direkte, kompetitive Bindungs-Radioimmunotests bestimmt. Das Anti-PGE&sub2;-Serum, das von Dr. William Campbell, University of Texas Health Science Center at Dallas, Dallas, Texas erhalten wurde, hat eine 14% Kreuzreaktivität mit PGE1, aber nur eine 0,7% Kreuzreaktivität mit PGF2a·TXB&sub2; (das stabile Zerfallsprodukt von TXA&sub2;-Antisera, eine Gabe von DR. P.V. Halushka (Medical College of South Carolina, Charleston, Süd-Carolina)) zeigte keine Kreuzreaktion (0,04%) mit anderen Arachidonmetaboliten. ³H-PGE&sub2;, ³H-TXB&sub2; und ³H-6-Keto-PGF1a wurden von New England Nuclear (Boston, Massachusetts) erworben. Das Antiserum zu dem stabilen Hydrolyseprodukt von Prostacyclin, 6-Keto-PGF1a, stammt von Dr. Michael Dunn (Case Western Reserve Medical School, Cleveland, Ohio). Alle Standardsubstanzen stammen von Dr. John Pike, Upjohn Co., Kalamazoo, Michigan. Die für PGE&sub2;, TXB&sub2; und 6-Keto-PGF1a angegebenen Werte stellen die Durchschnittswerte von Doppelbestimmungen dar. Funktionell äquivalentes Anti-PGE&sub2;-Serum, TXB&sub2; und Antiseren zu 6-Keto-PGF1a sind auch im Handel erhältlich.

Statistische Analyse

Alle Daten werden als Durchschnitt ± Standardabweichung vom Mittelwert angegeben. Vergleiche zwischen Tieren, die mit Cyclosporin in Fischöl behandelt wurden, und jenen, die mit Cyclosporin in Olivenöl behandelt wurden, wurden mit dem Student-T-Test durchgeführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 angeführt.

Ergebnisse

Olivenöl oder Fischöl allein führten zu keiner Nierenfunktionsstörung, obwohl das Fischöl die Prostanoide wie erwartet verringerte. Vollblut-Cyclosporin A zeigte keinen Unterschied, ob nun Olivenöl oder Fischöl als Träger verwendet wurde. Wenn Cyclosporin A mit dem Fischölträger verabreicht wurde, konnte es qualitativ vom Cyclosporin A in Olivenöl durch eine deutliche Verringerung in der proximalen tubulären Vakuolisierung unterschieden werden. Tabelle 1 Vergleich der Nierenfunktion und der Nierenprostanoide bei Ratten, die Cyclosporin A in Olivenöl- oder Fischölträger erhielten BUN (mg/dl) CIn KR (ml/Min, 100 g) PGE&sub2; TXB&sub2; PGF1a FÖ+CSA OÖ+CSA n =4 in jeder Gruppe *n = 6 Werte sind DURCHSCHNITT ± SEM Abkürzungen: FÖ Fischöl OÖ Olivenöl CSA Cyclosporin A BUN Harnstoff-Stickstoff im Blut KR Kreatinin In ¹&sup4;C-Inulin-Clearance PGE&sub2; Prostagiandin E&sub2; TXB&sub2;Thromboxan B&sub2; PGF1a 6-Keto-PGF1alpha

BEISPIEL 11

FISCHÖL ALS LIPIDDIÄTKOMPONENTE SCHÜTZT GEGEN CYCLOSPORIN- BEDINGTE NIERENFUNKTIONSSTÖRUNG

Männlichen F 344 Ratten (Simonsen Laboratories, Inc., Gilroy, Kalifornien), mit einem Gewicht von 280-315 g, wurden 12,5 mg/kg/Tag Cyclosporin A (CSA) (Sandoz Pharmaceuticals, East Hanover, NJ) durch intraporitoneale Injektion 2 Wochen lang verabreicht. Kontrollratten erhielten isovolumetrische Dosen des Trägers Cremophor EL (BASF, Parsil, NJ). Die paarweise Fütterung der Versuchs- und Kontrollratten begann 4 Wochen vor Beginn der CSA- oder Trägerverabreichung. Die Diät für Speisefischöl wurde von Kelley et al., J. Clin. Invest. 77 : 252 (1986) beschrieben. Allee Ratten wurde paarweise eine Basisdiät von 25% Protein (Casein), 49,5% Kohlehydrat (Sucrose und Dextrin), 20% Lipid und Zusätzen (Salzmischung und L-Cystin) gegeben. Die Lipiddiätkomponente war entweder ein Omega-3-fettsäurereiches (35 %) Fischöl (Max-EPA, RP Scherer Inc., Clearwater, FL) oder Maiskeimöl ohne diese Fettsäuren.

Inulin-Clearance

Inulin-Clearance wurde nach der Beschreibung von Elzinga et al., Transpian. 43:271 (1987) bestimmt. Die Ratten wurden anästhesiert und erhielten eine Dosis von 0,25 uCi ¹&sup4;C-Inulin (New England Nuclear) in NaHCO&sub3; mit einer Geschwindigkeit von 52u I/Min. Nach 30 Min. Äquilibrierung wurde Harn in Abständen von 20 Minuten über eine Kanüle, die in die Blase gelegt wurde, entnommen. Durch einen Halsschlagaderkatheter wurde Blut (0,35 ml) in der Mitte jeder Harnabnahme entnommen und quantitativ durch NaHCO&sub3; ersetzt. Die Serum- und Harnradioaktivität wurde mit einem Beckman LS-100-Flüssigkeitsszintillationszahler bestimmt. Die Inulin-Clearancewerte, die in ml/Min/100 g Körpergewicht angegeben sind, steilen den Durchschnitt von vier Clearancezeiträumen dar.

Nierenstudien

Ratten wurden mit Äther anästhesiert und durch direkte Herzpunktion wurde Blut zur Bestimmung der Serumkreatinin- (Cobas Autoanalysator, Roche Diagnostics) wie auch der Vollblut-Cyclosporinwerte (Sandoz, Inc.) verwendet. Eine Niere wurde für den Test von TXB&sub2;, 6-Keto-PGF&sub1; und PGE&sub2; exzidiert. Rindengewebe (10-25 mg) wurde entnommen, gleichförmig zerkleinert und in 2 ml Krebs-Ringer-Hydrogencarbonatpuffer (pH 7,2) 30 Minuten bei 37ºC und 5% CO&sub2; inkubiert. Der Überstand wurde bis zur Bestimmung der Werte der Cyclooxygenaseprodukte durch Radioimmunotest eingefroren. Die andere Niere jedes Tieres wurde zur Lichtmikroskopieanalyse verwendet und von einer Person, die mit der Behandlungsgruppe nicht vertraut war, mit den Kontrollen verglichen. Nierenscheiben wurden in Formalin fixiert, in Paraffin eingebettet und mit Hämatoxylin und Eosin gefärbt.

Makrophagenstimulation

Makrophagen wurden durch Bauchhöhlendurchspülung mit RPMI 1640 Medium mit L-Glutamin, enthaltend Penicillin (50 Einheiten/ml), Streptomycin (50 g/ml) und Natriumheparin (10 Einheiten/ml), entfernt. Die Zellen wurden auf 1· 10&sup6; verdünnt, auf Kunststoff-Petrischalen aufgebracht (4 ml/Schale) und 1 Stunde bei 37ºC in 5% CO&sub2; adhärieren gelassen. Nichthaftende Zellen wurden durch Waschen der Platten ·3 mit RPMI entfernt. Die verbleibenden anhaftenden Zellen sind 95% Makrophagen. Den anhaftenden Zellen wurde nur RPMI oder RPMI mit 50 g/ml E.coli-Endotoxin (List Biological Laboratories) oder 1 M A23187 beigegeben. Nach einer Inkubation von 15 Minuten oder 3 Stunden wurden die Überstände gesammelt und vor dem Radioimmunotest eingefroren. TABELLE 11 INULIN-CLEARANCE (Cin) UND BLUT-CsA-WERTE BEI MIT FISCHÖL (FÖ) UND MAISKEIMÖL (MÖ) GEFÜTTERTEN RATTEN Cin (ml/min/100 g) Blut-CsA-Werte (ng/ml) CsA/FÖ CsA/MÖ Zahlen sind als Durchschnitt ± SEM angegeben; n = 5-7/Gruppe; Cin wurde vom ¹&sup4;C-Inulin im Serum und Harn in vier 20-minütigen Clearanceperioden berechnet. CsA-Werte wurden durch Radioimmunotest bestimmt. + Die Ratten erhielten 1 Woche lang 25 mg/kg und in der zweiten Woche wurde die Dosis wegen der Toxizität auf 12,5 mg/kg verringert. * p < 0,025 im Vergleich zu CsA/MÖ.

Radioimmunotest

Der TxB&sub2;, 6-Keto-PGF&sub1; und PGE&sub2;-Gehalt im Überstand wurden durch direkten kompetitiven Bindungs-Radioimmunotest, wie bei Kelley et al., J. Clin. Invest. 77 : 252 (1986) beschrieben, bestimmt. Das Antiserum zu TxB&sub2;, das mit einer Endverdünnung von 1 : 50.000 verwendet wurde, zeigte keine Kreuzreaktion (0,04%) mit Arachidonsäure oder anderen Metaboliten. Anti-6-Keto-PGF&sub1; wurde mit einer 1 : 15000 Verdünnung verwendet. Anti-PGE&sub2; zeigt eine 14% Kreuzreaktivität mit PGE&sub1; und 2,7% mit PGF&sub2; und wurde mit einer Endverdünnung von 1 : 6000 verwendet. ³H-TxB&sub2;, ³H-6-Keto-PGF&sub1; und ³H-PGE&sub2; wurden von Amersham (Arlington Heights, IL) erworben. Die angegebenen Werte für die Metaboliten stellen Durchschnittswerte aus Doppelbestimmungen dar.

Statistik

Die angegebenen Werte sind Durchschnittswerte ± Standardabweichungen vom Mittelwert. Die statistische Analyse der Daten wurde unter Verwendung des Mann-Whitney U-Tests durchgeführt. Ein Wert von p < 0,05 wurde als signifikant erachtet. TABELLE III CsA-BEDINGTES TXB&sub2; IN DER NIERENRINDE - FISCHÖL Die Zahlen sind als x ± SEM angegeben; n=4-5/Gruppe. Nierenrinde (10-25 mg) wurde zerkleinert und bei 37ºC in Krebs-Ringers-Hydrogencarbonatpuffer 30 Min. inkubiert. Die Werte der in das Medium freigesetzten Cyclooxygenaseprodukte wurden durch Radioimmunotest gemessen. * p< 0,01; ** p< 0,05.

Nierensynthese von TXB&sub2;, PGE&sub2; und 6-Keto-PGF&sub1;

Wie in Tabelle III angeführt, führt die chronische CsA-Verabreichung an Ratten, die eine Kontrolldiät (MÖ) erhielten, zu einem veränderten Muster der Cyclooxygenase- Metaboliten, die von der Nierenrinde gebildet werden. CSA erhöhte die TxB&sub2;-Werte von 23,1 ± 1,4 auf 49,2 ±4,9 pg/mg (p< 0,01, MÖ im Vergleich zu CSA/MÖ). Im Gegensatz dazu führte die CSA-Behandlung zu einer Verringerung in PGE&sub2; (93,8 ± 8,0 im Vergleich zu 72,2 ± 7, 1 pg/mg, p < 0,05), während 6-Keto-PGF&sub1;-Werte durch die CSA-Behandlung nicht verändert wurden (19,5 ± 1,0 im Vergleich zu 20.3 ± 2.6 pg/mg).
Ratten, die eine Fischöldiät mit oder ohne CSA-Behandlung erhielten, zeigten eine verminderte Nierensynthese der drei untersuchten Cyclooxygenase-Produkte (Tabelle III). Die kombinierten Behandlungen (CSA/FÖ) führten zu noch geringeren Werten von TxB&sub2; im Vergleich zu der ausschließlichen FÖ-Gruppe (10,3 ± 1,0 im Vergleich zu 17,0 ± 1,3 pg/mg, p < 0,01). Die 6-Keto-PGF&sub1;-Werte, die durch die CSA-Behandlung in der Kontrolldiätgruppe nicht verändert wurden, wurden durch CSA in der Fischöldiätgruppe weiter verringert (11,9 ± 1,8 (FÖ) im Vergleich zu 6,8 ± 1,1 pg/mg (CSA/FÖ), p< &sup0;,&sup0;&sup5;).
Im Nierenmark erzeugte CSA TxB&sub2; bei Ratten, die eine MÖ-Diät erhielten (565,7 ± 33 pg/mg Gewebe) im Vergleich zu jenen Tieren, die eine FÖ-Diät erhielten (325,7 ± 48 pg/mg Gewebe). Diese Ergebnisse lassen darauf schließen, daß die verstärkte Tx-Synthese nicht ausschließlich die Nierenrinde betrifft, sondern auch im Nierenmark auftritt.

Makrophagenstimulationsstudien

Wie in Fig. 1 dargestellt, zeigen peritoneale Makrophagen von CSA-behandelten Ratten während einer 15-minütigen Inkubation eine erhöhte basale (5,2 ± 0,4 im Vergleich zu 2,4 ± 0,2 ng/ml, CSA im Vergleich zu Träger, p< 0,01) und A23187-stimulierte (21,9 ± 3,5 im Vergleich zu 9,6 ± 1,5 ng/ml, p< 0,0) TxB-Synthese im Vergleich zu Trägerkontrollen. Im Gegensatz dazu unterschieden sich die Basalwerte von PGE&sub2; und 6-Keto-PGF&sub1;, die von Makrophagen von CSA-behandelten Ratten erzeugt wurden, nicht von den mit Trägern behandelten Kontrollen. Zusätzlich wird die A23187-stimulierte PGE&sub2; und 6-Keto-PGF&sub1; Synthese als Ergebnis der CSA-Behandlung verringert (p< 0,05, CSA im Vergleich zu Träger).
In Tabelle IV ist die Wirkung der CSA-Behandlung auf die LPS- und A23187-stimulierten Cyclooxygenaseprodukte von Makrophagen während einer 3-stündigen Inkubation dargestellt. Die CSA-Behandlung führt zu erhöhten TxB&sub2;-Werten während der Stimulation mit LPS (36,4 ± 0,3 im Vergleich zu 16,0 ± 0,8 ng/ml, CSA im Vergleich zu Träger, p< 0,02) oder A23187 (34,0 ± 2,4 im Vergleich zu 13,6 ± 1,1 ng/ml, p < 0,02). Basale TxB&sub2;-Werte (10,7 ± 0,2 ng/ml) unterschieden sich nicht von Trägerkontrollen (11,2 ± 1,7 ng/ml). Basalwerte von PGE&sub2; wurden in der CSA-Gruppe verringert (0,9 ± 0,2 im Vergleich zu 1,9 ± 0,1 ng/ml, p< 0,02), aber die LPS- und A23187-stimulierte PGE&sub2;-Erzeugung wurde durch CSA nicht verändert (Tabelle IV). Gleichfalls wurden die Basalwerte von 6-Keto-PGF&sub1; in der CSA-behandelten Gruppe verringert (p< 0,02), während sich die LPS- und A23187-stimulierte Erzeugung nicht unterschied. IN VIVO WIRKUNG V. CsA AUF DIE MAKROPHAGENSTIMULATION BEHANDLUNG STIMULUS ng/ml Träger Peritoneale Makrophagen von CsA- und Träger-behandelten Ratten wurden auf 1·10&sup6;/ml verdünnt und in RPMI 1640, das 50 mg/ml LPS oder 1mM A23187 enthielt, 3 Stunden bei 37ºC inkubiert. * p < 0,02 im Vergleich zur Trägergruppe

Nierenfunktion und andere Studien

Speise-FÖ schützt gegen CSA-bedingtes Nierenversagen, wie aus der erhöhten (p< 0,025) Inulin-Clearance im Vergleich zur MÖ-Gruppe (Tabelle II) hervorgeht. CSA- Fließwerte im Blut (ng/ml) wurden nach 2 verschiedenen CSA Dosierungsschemen bestimmt. Eine Gruppe (25/12,5 mg/kg) erhielt 25 mg/kg CSA in der ersten Woche und danach wurde die Dosis für die folgenden 2 Wochen auf 12,5 mg/kg verringert. Die großen CSA-Dosen führten zu hohen CSA-Werten im Blut dieser Ratten. Die zweite getestete Gruppe erhielt 2 Wochen lang 12,5 mg/kg. Wie aus Tabelle 11 hervorgeht, waren die CSA- Werte im Blut bei den Ratten, die 25/12,5 mg/kg erhielten, ähnlich jenen der CSA/FÖ- (4108 ± 613 ng/ml) und CSA/MÖ- (5716 ± 373 ng/ml) Gruppen. Die Werte bei jenen Ratten, die Dosen von 12,5 mg/kg erhalten hatten, waren jedoch überraschenderweise nicht ähnlich. CSA-Konzentrationen waren in der CSA/FÖ-Gruppe (3218 ± 253 ng/ml) im Vergleich zur CSA/MÖ-Gruppe (5404 ± 198 ng/ml) verringert.
Es wurde die Wirkung der CSA- wie auch der FÖ-Diät auf Gewichtsveränderungen während der Behandlung untersucht. FÖ allein hatte keine Wirkung auf die Gewichtsveränderung im Vergleich zu MÖ allein (+24,8 ± 2,2 g im Vergleich zu +23,8 ± 2,3 g). Die CSA-Behandlung bewirkte einen Gewichtsverlust und FÖ hatte keine Auswirkung auf den Verlust [-5,2 + 2,7g (CSA/FÖ) im Vergleich zu -3,8+7,7g (CSA/MÖ)] aufgrund der wirksamen paarweisen Fütterung.
Histologische Untersuchungen durch Lichtmikroskopie zeigten morphologische Veränderungen im proximalen Tubulus von Tieren, die mit CSA behandelt worden waren, einschließlich intrazellulärer Vakuolen, ähnlich den zuvor beschriebenen (The Canadian Multicenter Transplant Study Group, N. Eng. J. Med. 301:809 (1983)). Die CSA/FÖ- Gruppe zeigten eine deutliche Verringerung in der tubulären Vakuolisierung. Bei den Gruppen, die nur mit dem Träger behandelt worden waren, wurden keine morphologischen Veränderungen festgestellt.
Die chronische Vorbehandlung von Ratten mit CSA führte zu einer erhöhten TxB&sub2;-Synthese durch Nierenrinde und peritoneale Makrophagen, während die 6-Keto-PGF&sub1;- und PGE&sub2;-Synthese nicht beeinträchtigt oder vermindert wird. Zusätzlich verhindert Speisefischöl den Anstieg von TxA&sub2; und schützt Ratten von CSA-bedingter Nephrotoxizität. Es wurden keine Nebenwirkungen des hochdiätären Fischöls beobachtet.
Verschiedene Forscher berichteten, daß CSA die Synthese der Arachidonsäuremetaboliten stimuliert. Die jüngsten Ergebnisse stimmen mit jenen von Perico et al., Am. J. Physiol. 251:F581 (1986) überein, worin erhöhte Harn-Thromboxanwerte bei CSA- behandelten Ratten berichtet werden. Coffman et al., Transplan. 43 : 282 (1987) berichteten jedoch eine erhöhte TxB&sub2;-, 6-Keto-PGF&sub1;- und PGE&sub2;-Bildung bei ex vivo perfundierten Nieren und erhöhte Harn-TxB&sub2;- und 6-Keto-PGF&sub1;-Werte bei Ratten, die mit CSA vorbehandelt wurden. Whisler et al., Transpian. 38:377 (1984) untersuchten die Wirkung der Inkubation mit CSA bei menschlichen Monozyten in vitro und fanden, daß CSA die PGE&sub2;-Erzeugung dosisabhängig stimuliert. Die Unterschiede zwischen diesen Berichten und den vorliegenden Studien beruhen wahrscheinlich auf den verschiedenen Versuchsprotokollen (ex vivo Perfusion im Vergleich zu zerkleinerter Rinde) und Verfahren der CSA- Exposition (in vitro im Vergleich zu in vivo).
Die Abnahme der Nierenfunktionsstörung bei Ratten, die CSA und FÖ erhielten, wurde nicht durch eine Veränderung in der Bioverfügbarkeit von CSA bewirkt. Die Blutwerte von CSA in FÖ oder Olivenöl waren ähnlich, trotz der Veränderung der Nephrotoxizität durch Speise-FÖ. Große Dosen von CSA, die Ratten unter FÖ- oder MO-Diät verabreicht wurden, führten zu extrem hohen Blutwerten von CSA: Alle Werte lagen stark über jenen Werten, die nachweislich mit einer ausgeprägten Nierenfunktionsstörung bei Mensch und Tier verbunden werden. Es erscheint daher unwahrscheinlich, daß Unterschiede in der Nierenfunktionsstörung auf einer pharmakokinetischen Basis erklärt werden können. Die kombinierten Angaben sprechen für die Annahme, daß FÖ nicht die Bioverfügbarkeit von CSA verändert und daß daher eine derartige Änderung nicht für das Fehlen von CSA- bedingter Nierentoxizität verantwortlich ist.
Makrophagen wurden als Ursprung von erhöhtem TxB&sub2; bei murinem Lupus nephritis (Jackson, et al., Kidney International 31:460 (1987) angenommen. Da CSA einen Anstieg der mononuklearen Zellen im Nierenzwischenraum bewirkt, könnten Makrophagen zumindest teilweise für eine erhöhte Nieren-TxB&sub2;-Produktion verantwortlich sein. Omega-3-fettsäurereiches FÖ senkt die TxB&sub2;-Werte. Diese Verringerung hängt mit der hohen Affinität der Omega-3-Fettsäuren für Cyclooxygenase zusammen und mit ihrer Unfähigkeit, wirksam als Substrat für zweifach ungesättigte Metaboliten verwendet zu werden. Funktionelle kompetitive Hemmung schränkt daher die Auslösung der CSA-bedingten TxB&sub2;-Erzeugung ein und hält das hämodynamische Gleichgewicht aufrecht, das für eine normale Nierenfunktion wesentlich ist. Kürzlich wurde eine verbesserte Nierenfunktion nach Hemmung der CSA-bedingten TxB&sub2;-Synthese von Perico et al., Am. J. Physiol. 251:F581 (1986) berichtet. Die Verabreichung des Tx-Synthetaseinhibitors UK-38.485 an Ratten, die mit CSA behandelt wurden, führte zu Harn-TxB&sub2;-Werten, die mit Kontrollwerten vergleichbar sind, wie auch zu einem verbesserten glomulären Filtrationsvolumen (GFR). Eine vollständige Hemmung von Tx führte jedoch nicht zu einer Angleichung des GFR an die Kontrollwerte, woraus geschlossen werden kann, daß andere Mediatoren an dem CSA-bedingten Verlust der Nierenfunktion beteiligt sind.
In Übereinstimmung mit dem obengenannten Beispiel kann die vorliegende Erfindung in einem Verfahren zur Mäßigung der nierenschädigenden Wirkung von Cyclosporin verwendet werden, wobei dieses Verfahren die Verabreichung einer Diät umfaßt, welche eine Fettsäurekomponente beinhaltet, oder in einem Verfahren zur Suppression eines CSA- bedingten TxB&sub2;-Anstiegs durch Verabreichung einer Diät, die eine Fettsäurekomponente enthält.

Claims

1. Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins verringert.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Fettsäurekomponente Eicosapentaensäure oder Docosahexaensäure enthält.

3. Verfahren nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Fettsäurekomponente synthetisch hergestellt wird.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die Fettsäurekomponente von einer natürlichen Quelle stammt.

5. Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins zur Verwendung in der Medizin verringert.

6. Verwendung einer Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder eines pharmakologisch verträglichen Salzes davon in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung der nierenschädigenden Wirkung von Cyclosporin.

7. Verwendung einer Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mindert, in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung der nierenschädigenden Wirkung von Cyclosporin.

8. Verwendung einer Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder eines pharmakologisch verträglichen Salzes davon in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung von Cyclosporin-bedingtem Nierenthromboxan.

9. Verwendung einer Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin in Verbindung mit einer Fettsäurekomponente enthält, wobei die Fettsäurekomponente eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mindert, in der Bereitung eines Mittels zur Verringerung von Cydosporin-bedingtem Nierenthromboxan.

10. Zusammensetzung, welche eine therapeutisch wirksame Menge von Cyclosporin und eine Fettsäure aus der Omega-3-Familie oder ein pharmakologisch verträgliches Salz davon in einer Menge enthält, welche die nierenschädigende Wirkung des Cyclosporins mindert, als kombiniertes Präparat zur gleichzeitigen, getrennten oder aufeinanderfolgenden Verwendung zur Verringerung der nierenschädigenden Wirkungen von Cyclosporin.