DE370327C

DE370327C - Process for the production of vaccines from pathogenic germs, especially gonococci

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Publication number: DE370327C
Application number: DET24814D
Authority: DE
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1920-01-23
Filing date: 1921-01-08
Publication date: 1923-03-01

Description

Verfahren zur Herstellung von Vaccinen aus pathogenen Keimen, - besonders Gonokokken. Die Erfindung bezieht sich auf eine Herstellung von Vaccinen aus pathogenen Keimen, die frei von den giftigen Eigenschaften sind, welche bisher der Verwendung der nach bekannten Methoden erhaltenen Väccine entgegenstanden: Es ist möglich, die Dösis an so entgifteter Vaccine bis zu einem - Grade heraufzusetzen,- den man bisher nicht für erreichbar hielt. -Es ist von dem Erfinder bereits früher ein Verfahren gefunden worden, die Keime in Alkalien zu lösen und einen Teil der so gelösten Keimsubstanz aus dieser Lösung durch Zufügung von Säure abzuscheiden. Diese Substanz war ungiftig und halte antigene Eigenschaften, stellte aber nur einen Teil der antigenen Stoffe där, die in den Keimen enthalten sind'.Process for the production of vaccines from pathogenic germs, - especially Gonococci. The invention relates to the production of vaccines from pathogens Germs that are devoid of the toxic properties that have hitherto been used the vaccine obtained by known methods opposed: It is possible to raise the dose of vaccine detoxified in this way up to a degree that one can previously not thought to be achievable. -It is a process from the inventor earlier have been found to dissolve the germs in alkalis and a part of the germ substance thus dissolved to be separated from this solution by adding acid. This substance was non-toxic and keep antigenic properties, but provided only some of the antigenic substances that are contained in the germs'.

Das Verfahren nach vorliegender Erfindung beruht auf der Entdeckung, d'aß die Keimsubstanz aus verschiedenen antigenen Körpern besteht, die je nachdem in Alkalien, Säuren und Alkohol löslich sind, manche auch nur in Chloroform, und daß diese antigenen Körper, die sich, im Keime im, Gemisch: mit toxischen Substanzen befinden, fast frei von toxischen Eigenschaften erhalten werden können, wenn sie aus ihren Lösungen in den drei bvw. vier erwähnten Agenzien durch geeignete Zusätze wieder niedergeschlagen werden.The method according to the present invention is based on the discovery d'ass the germinal matter consists of different antigenic bodies, depending on are soluble in alkalis, acids and alcohol, some only in chloroform, and that these antigenic bodies are, in the germ in, mixture: with toxic substances located, almost free of toxic properties can be obtained if they are from their solutions in the three bvw. four agents mentioned by suitable additives to be knocked down again.

In den. verschiedenen Keimen sind die antigenen Substanzen, die sich in Alkalien, Säuren oder Alkohol lösen, in verschieden großen Mengen enthalten. Zur Herstellung gebrauchsfertiger Vaccine kombiniert man die einzelnen Fraktionen im. allgemeinen in den gleichen Mengenverhältnissen, wie sie in den Keimen selbst enthalten sind. Man arbeitet in folgender Weise: Man befreit die Keime durch Waschen mit einer fünfprozentigen Kochsalzlösung, die 0,5 Prozent Karbolsäure enthält, von der Nährlösung und zentrifugiert die entstandene Emulsion der Keime in einem graduierten Rohr. Die überstehende Flüssigkeit wird abgegossen und das Volumen des halbfesten Niederschlages von feuchten Keimen gemessen. Es ist kaum praktisch, Mengen von Keimen zu entgiften, welche weniger betragen als 5 ccm an feuchter, halbfester Masse. Gewöhnlich behandelt man- nur eine Art von Keimen auf einmal, man kann aber auch, mit Mischungen arbeiten.In the. Different germs are the antigenic substances that are Dissolve in alkalis, acids or alcohol, contained in different amounts. The individual fractions are combined to produce ready-to-use vaccines in the. generally in the same proportions as they are in the germs themselves are included. One works in the following way: one frees the germs by washing with a five percent saline solution containing 0.5 percent carbolic acid of the nutrient solution and centrifuged the resulting emulsion of the germs in a graduated Pipe. The supernatant liquid is poured off and the volume of the semi-solid Precipitation of moist germs measured. It is hardly practical to have amounts of germs to detoxify, which are less than 5 ccm of moist, semi-solid mass. Usually one treats only one kind of germs at a time, but one can also, with mixtures work.

Zu einer Masse von io ccm der feuchten, halbfesten Keime, etwa von Gonokokken, setzt man io bis a0 ccrn Normalnatronlauge und mischt das Ganze durch Schütteln mit Glasperlen oder Rühren mit einem Glasstabe. Jetzt wird die Mischung in einen Brutschrank, der auf 37,5° erwärmt ist, für ungefähr drei Stunden, gebracht. Die Masse wird allmählich durchscheinend. Sobald die Keime gelöst oder zum mindesten gesprengt sind, wird die Mischung zentrifugiert, wobei sich das ungelöste Material zu Boden setzt.To a mass of 10 ccm of the moist, semi-solid germs, approximately from Gonococci, one puts 10 to 0 ccn normal sodium hydroxide solution and mixes the whole thing by shaking with glass beads or stirring with a glass rod. now the mixture is placed in an incubator heated to 37.5 ° for approximately three hours, brought. The mass will gradually become translucent. Once the germs are dissolved or at least exploded, the mixture is centrifuged, wherein the undissolved material settles on the ground.

Die klare alkalische Flüssigkeit wird mit einer Pipette abgezogen: und dann filtriert, wobei die Filtration durch Zugabe weiterer Mengen Alkalilösung erleichtert werden kann. Die filtrierte alkalische Flüssigkeit wird mit verdünnter Salzsäure versetzt, wobei im Falle der Gonokokken schon ein Niederschlag eintritt, wenn die Lösung noch ganz schwach alkalisch ist. Der Niederschlag wird durch Zentrifugieren abgeschieden, von der überstehenden Flüssigkeit durch Abgießen getrennt und nach evtl. erfolgter völliger Neutralisation mehreremal mit absolutem Alkohol gewaschen, um letzte Spuren einer in # Alkohol löslichen, toxischen Substanz zu entfernen. Der so gereinigte Niederschlag (Fraktion A) bildet bei Gonokokken dem Volumen nach 70 Prozent des Ausgangsmaterials.The clear alkaline liquid is drawn off with a pipette: and then filtered, whereby the filtration can be facilitated by adding further amounts of alkaline solution. The filtered alkaline liquid is mixed with dilute hydrochloric acid, whereby in the case of gonococci a precipitate occurs when the solution is still very weakly alkaline. The precipitate is separated off by centrifugation, separated from the supernatant liquid by pouring it off and, after possibly complete neutralization, washed several times with absolute alcohol in order to remove the last traces of a toxic substance soluble in alcohol. In the case of gonococci, the precipitate purified in this way (fraction A) makes up 70 percent of the original material in volume.

Die von ihm getrennte, im Falle der Gonokokken schwach alkalische Flüssigkeit wird neutralisiert und mit dem dreifachen Volumen absoluten Alkohols versetzt. Es bildet sich über Nacht ein Niederschlag, der abzentrifugiert und mit Alkohol gewaschen bei Gonokokken io Prozent des Ausgangsmaterials beträgt (Fraktion B).The one separated from it, weakly alkaline in the case of the gonococci Liquid is neutralized and with three times the volume of absolute alcohol offset. A precipitate forms overnight, which is centrifuged off and with Alcohol washed in gonococci is 10 percent of the starting material (fraction B).

Die Keimmenge, welche sich nicht in Alkali löste, wird jetzt mit dem Mehrfachen ihres Volumens Normalsalzsäure versetzt und nach einstündigem Stehen zentrifugiert. Die Säurelösung wird abgezogen, filtriert und mit Normalnatronlauge neutralisiert. Dabei entsteht ein Niederschlag, der durch Zentrifugieren abgetrennt und mit Alkohol *gewaschen wird (Fraktion C, bei Gonokokken 15 Prozent).The amount of germs which did not dissolve in alkali is now mixed with several times its volume normal hydrochloric acid and centrifuged after standing for one hour. The acid solution is drawn off, filtered and neutralized with normal sodium hydroxide solution. In this case, a precipitate, which is separated by centrifugation and washed with alcohol * produced (fraction C, at gonococcal 1 5 percent).

Die neutralisierte und vom Niederschlag C befreite Flüssigkeit gibt beim Versetzen mit dem dreifachen Volumen absoluten Alkohols über Nacht einen Niederschlag, der durch Zentrifugieren abgetrennt und mit Alkohol gewaschen wird (Fraktion D, bei Coiiolcokken 3 Prozent).The neutralized and freed from the precipitate C liquid gives if three times the volume of absolute alcohol are added overnight, a precipitate occurs, which is separated by centrifugation and washed with alcohol (fraction D, in coli cocci 3 percent).

Der in Alkalien und Säuren ungelöst gebliebene Rest von Keimsubstanz wird mit dem Mehrfachen seines Volumens absoluten Alkohols etwa eine Stunde lang behandelt und dann zentrifugiert. Die alkoholische Lösung wird filtriert, mit dem Doppelten ihres Volumens einer Normallösung von Chlornatrium versetzt und 24 Stunden stehengelassen. Es entsteht ein flockiger Niederschlag E, der durch Filtration abzutrennen ist (bei Gonokokken :2 Prozent).The remainder of the germinal substance that has remained undissolved in alkalis and acids becomes with several times its volume of absolute alcohol for about an hour treated and then centrifuged. The alcoholic solution is filtered with the Double their volume of a normal solution of sodium chloride and added for 24 hours ditched. A flocculent precipitate E is formed, which can be separated off by filtration is (for gonococci: 2 percent).

Manche Keime zeigen ein etwas anderes `erhalten als Gonokokken, Pneumokokken, Influenzahazillen oder Staphylokokken. Dies gilt besonders von Tuberkelbazillen. Sie sind durch Behandlung mit Normalnatronlauge nur unvollkcm;men aufzusprengen, weswegen zu ihrem Aufschluß ein Gemisch von gleichen Teilen 2t1 Normalnatronlauge und Natriumhypochloritlösung verwendet wird. Es scheidet sich bei der Behandlung der Tuberkelbazillen mit diesem Gemisch bei späterem Zentrifugieren Lipoid zum Teil auf der Oberfläche der Flüssigkeit ab.Some germs show something different than gonococci, pneumococci, Influenza bacilli or staphylococci. This is especially true of tubercle bacilli. They can only be partially blown open by treatment with normal sodium hydroxide solution, therefore a mixture of equal parts 2t1 normal sodium hydroxide solution for their digestion and sodium hypochlorite solution is used. It differs in treatment some of the tubercle bacilli with this mixture were later centrifuged lipoid on the surface of the liquid.

Dieses Lipoid ist nicht ganz in Alkohol löslich wie das Lipoid der Gonokokkenkeime; man. behält also nach Behandlung der Tuberkelbazillen mit der alkalischen Lösung, der Säure und dein Alkohol noch einen Rückstand. Dieser wird mit dem Doppelten seines Volumens Chloroform behandelt. Die gebildete Lösung wird filtriert und abgedampft, der Rückstand mit einer kleinen Menge Alkohol im Mörser zerrieben und dann zentrifugiert. Er bildet die Fraktion F, bei Tuberkelbazillen $ Prozent, während die Fraktion E bei dieser Bazillenart 2o Prozent beträgt. Im Gegensatz dazu beträgt die Fraktion A nur 30 Prozent, die Fraktion D nur 2 Prozent, während B wie bei den Gonokokken io Prozent, C mehr, nämlich 30 Prozent beträgt.This lipoid is not completely soluble in alcohol like the lipoid of the gonococcal germs; man So after treating the tubercle bacilli with the alkaline solution, the acid and your alcohol, it still retains a residue. This is treated with twice its volume of chloroform. The resulting solution is filtered and evaporated, the residue ground with a small amount of alcohol in a mortar and then centrifuged. It forms fraction F, in tubercle bacilli $ percent, while fraction E in this type of bacilli is 20 percent. In contrast, fraction A is only 30 percent, fraction D is only 2 percent, while B, as with the gonococci, is 10 percent, C is more, namely 30 percent.

Es hat sich herausgestellt, daß die beiden Niederschläge B und D, die durch Zufügen von Alkohol zur Flüssigkeit erhalten werden, Proteosencharakter besitzen und gewisse keizwirkungen hervorrufen, so daß sie sich gut für die Diagnose verwenden lassen. V4 To die Reizwirkung unerwünscht ist, z. B. bei Tuberkulose, läßt man diese Fraktion bei der Zusammenstellung der Vaccine besser fort.It has been found that the two precipitates B and D, obtained by adding alcohol to the liquid, proteose character possess and cause certain germs, so that they are good for diagnosis let use. V4 To the irritant effect is undesirable, e.g. B. in tuberculosis, it is better to leave this fraction out of the compilation of the vaccines.

Zur Herstellung der gebrauchsfertigen Vaccine werden die Niederschläge in Flaschen mit Glasperlen mit Normalkochsalzlösungen, die 5 Prozent Karbolsäure enthalten, aufgeschwemmt und, wenn man von etwa io ccm Keimen ausgegangen ist, auf ioo ccm aufgefüllt. Es enthält dann eine solche Emulsion im Kubikzentimeter etwa die entgiftete Substanz von io Milliarden Keimen.The precipitates are used to produce the ready-to-use vaccine in bottles with glass beads with normal saline solutions containing 5 percent carbolic acid contained, floated and, if one assumed about 10 cc germs, on 100 cc filled up. It then contains such an emulsion in about a cubic centimeter the detoxified substance of ten billion germs.

Man kann bei der Vaccinekur im allgemeinen mit einer subkutanen Einspritzung von 1-14 ccm mit den Substanzen aus 2 5oo Millionen Keimen beginnen und die Dosis in Abständen von fünf bis sieben Tagen auf io Milliarden Keime oder mehr steigern. Nur bei sehr akuten Krankheiten, wie Lungenentzündung, Influenza- und akuter Tuberkulose, ist es zweckmäßig, mit weit kleineren Dosen zu beginnen, etwa .der Vaccine aus 5o bis 5oo Millionen Keimen. Auf alle- Fälle ist diese Dosis viel höher als die, welche bei den auf anderem Wege gewonnenen., weniger gut entgifteten Vaccinen gegeben werden kann.The vaccine regimen can generally be administered with a subcutaneous injection of 1-14 ccm with the substances from 2,500 million germs and the dose increase to 10 billion germs or more at intervals of five to seven days. Only for very acute diseases such as pneumonia, influenza and acute tuberculosis, it is advisable to start with much smaller doses, such as the vaccine from 5o up to 500 million germs. In any case, this is Dose much higher than those obtained with the vaccines obtained in other ways, less well detoxified can be given.

Claims

PATENT CLAIMS: r. Process for the production of Vaccines from pathogenic germs, especially gonococci, characterized in that the germs are treated one after the other with dilute alkalis, dilute acids and alcohol, whereupon the substances which have passed into the individual solvents are partly excreted again by precipitation and optionally in an appropriate manner for the production of the ready-to-use vaccine.

2. Procedure according to claim r for the production of vaccines from acid-fast germs, characterized in that d'ass the germs first with a solution containing alkali and alkali hypochlorite digested and then treated further according to claim r.

3. The method according to claim r and 2, characterized in that 'the precipitation in the alkaline solution by Addition of acid, in the acid solution by the addition of alkali, in the alcoholic Solution is effected by adding saline solution. q ..

Method according to claim z, 2 and 3, characterized in that the remaining after separation of the precipitation neutralized solutions are mixed with alcohol, making another usable Precipitation is obtained.

5. The method according to claim r and 2, characterized in that that a possibly still undissolved after treatment with alcohol Part of the germs in chloroform; and dissolved in this solution by adding alcohol a precipitate is generated.