DE3539922A1

DE3539922A1 - METHOD FOR OPERATING A MICROSCOPE

Info

Publication number: DE3539922A1
Application number: DE19853539922
Authority: DE
Inventors: Fred H. Northridge Calif. Deindoerfer
Original assignee: International Remote Imaging Systems Inc
Current assignee: Iris International Inc
Priority date: 1984-11-29
Filing date: 1985-11-11
Publication date: 1986-06-05
Also published as: AU4906085A; AU563260B2; JPH0659782B2; JPS61132841A; GB2167880A; GB2167880B; GB8529039D0; FR2573870A1

Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Betrieb eines Mikroskopiergeräts und bezieht sich insbesondere auf ein mikroskopisches Instrument mit einer Strömungszelle zum Analysieren von Teilchen in einer in der Zelle fließenden Fluidprobe.The invention relates to a method for operating a microscope device and more particularly relates to a microscopic instrument having a flow cell for analyzing of particles in a fluid sample flowing in the cell.

Mikroskopiergeräte zum Analysieren von Teilchen, beispielsweise biologischen Partikeln sind allgemein bekannt. Es ist typisch, die Mikroskopiergeräte auf die Teilchen zu fokussieren, die sich entweder auf einem Objektträger befinden oder in einer in einer Strömungszelle fließenden Fluidprobe suspendiert sind. Der zuletzt genannte Fall ist allgemein bekannt. In US-PSMicroscopy devices for analyzing particles, for example biological particles, are generally known. It is typical focus the microscope devices on the particles that are either on or in a slide a fluid sample flowing in a flow cell are suspended. The latter case is well known. In U.S. PS

3 893 766 und RE 29 141 sowie US-PS 4 338 024 ist eine Art von Strömungszelle für ein Mikroskopiergerät offenbart, mit dem die darin fließenden Partikel analysiert werden können. In den beiden genannten Veröffentlichungen ist die Strömungszelle durch einen Einlaß und einen Auslaß sowie einen vom Einlaß zum Auslaß führenden Kanal gekennzeichnet. Der Kanal hat einen Abbildungsbereich, auf den das Mikroskopiergerät gerichtet ist. Die Dicke der Strömungszelle nimmt mit zunehmender Entfernung des Kanals vom Einlaß zum Abbildungsbereich ab. Gemäß US-PS3,893,766 and RE 29,141 and US Pat. No. 4,338,024, a type of flow cell for a microscope apparatus is disclosed with which the particles flowing in it can be analyzed. In the two publications mentioned, the flow cell is characterized by an inlet and an outlet and a channel leading from the inlet to the outlet. The channel has a mapping area, at which the microscope device is aimed. The thickness of the flow cell increases with increasing distance of the channel from the inlet to the imaging area. According to US-PS

4 338 024 wird in die Strömungszelle auch ein umhüllendes Fluid eingeleitet, um die Fluidprobe vom Einlaß zum Auslaß zu führen. Gemäß US-PS 3 893 766 wird das umhüllende Fluid von einer Hüllfluidströmungseinrichtung gefördert, die eine Vielzahl von Röhrchen aufweist, welche sich in Richtung der Fluidströmung erstrecken und das Probenröhrchen umgeben. In keiner der genannten Veröffentlichungen sind jedoch die nötigen Parameter zum Betrieb des Mikroskopiergeräts im Zusammenhang mit den Abmessungen der Strömungszelle gelehrt oder vorgeschlagen.4,338,024, an enveloping fluid is also introduced into the flow cell to carry the fluid sample from the inlet to the outlet. According to US Pat. No. 3,893,766, the enveloping fluid is passed from an enveloping fluid flow device promoted, which has a plurality of tubes, which extend in the direction of the fluid flow and surround the sample tube. In none of the publications mentioned are the necessary parameters taught or suggested for the operation of the microscope device in connection with the dimensions of the flow cell.

Die Erfindung offenbart ein Verfahren zum Betrieb eines Mikroskopiergeräts. Das Mikroskopiergerät weist eine Mikroskopiereinrichtung zum Analysieren von Teilchen auf, die in einer Strömungszelle fließen. Die Strömungszelle hat einen Einlaß und einen Auslaß sowie einen vom Einlaß zum Auslaß führenden Kanal. Die Mikroskopiereinrichtung ist auf einen Abbildungsbereich zwischen dem Einlaß und dem Auslaß des Kanals gerichtet. Der Kanal zeichnet sich dadurch aus, daß seine Dicke zunächstThe invention discloses a method for operating a microscope device. The microscope device has a microscope device for analyzing particles flowing in a flow cell. The flow cell has an inlet and an outlet and a channel leading from the inlet to the outlet. The microscope device is on an imaging area directed between the inlet and the outlet of the channel. The channel is characterized by the fact that its thickness is initially

vom Einlaß zum Abbildungsbereich abnimmt, eine gleichbleibende Dicke erreicht und dann im Abbildungsbereich unverändert bleibt. Die Fluidprobe wird mit einem umhüllenden Fluid vom Einlaß zum Auslaß gefördert. Zu der Mikroskopiereinrichtung gehört auch eine auf den Abbildungsbereich fokussierte Optik. Zu dem erfindungsgemäßen Verfahren gehört es, den Durchsatz des umhüllenden Fluids so zu wählen, daß im Abbildungsbereich eine planare, laminare Strömung erzeugt wird. Die Mikroskopiere inrichtung ist in Richtung parallel zur Dicke auf den Abbildungsbereich gerichtet. Die Arbeitsentfernung der Linse ist so gewählt, daß sie größer ist als die Hälfte der Dicke der Strömungszelle im Abbildungsbereich. Die Tiefenschärfe der Linse ist so gewählt, daß sie beträchtlich geringer ist als die Dicke der Strömungszelle im Abbildungsbereich. Es wird ein solcher Durchsatz der Fluidprobe aufrechterhalten, daß die Dicke der Fluidprobe im Abbildungsbereich geringer ist als die Tiefenschärfe der Linse.decreases from the inlet to the imaging area, a constant one Thickness reached and then remains unchanged in the imaging area. The fluid sample is with an enveloping fluid from the inlet to the Outlet promoted. The microscope device also includes a device focused on the imaging area Optics. The method according to the invention includes the throughput of the enveloping fluid to be selected so that a planar, laminar flow is generated in the imaging area. The microscopists direction is directed towards the imaging area in a direction parallel to the thickness. The working distance of the lens is chosen so that it is greater than half the thickness of the flow cell in the imaging area. The depth of field of the lens is chosen to be considerably less than the thickness of the flow cell in the imaging area. It will be one Maintaining throughput of the fluid sample that the thickness of the fluid sample in the imaging area is less than the depth of field the lens.

Im folgenden ist die Erfindung mit weiteren vorteilhaften Einzelheiten anhand eines schematisch dargestellten Ausführungsbeispiels näher erläutert. In den Zeichnungen zeigt: Fig. 1 eine Schnittansicht einer Vorrichtung, an der das erfindungsgemäße Verfahren angewandt ist; Fig. 2 einen stark vergrößerten Schnitt durch einen Teil der Vorrichtung gemäß Fig. 1;The following is the invention with further advantageous details explained in more detail using a schematically illustrated embodiment. In the drawings shows: Fig. 1 is a sectional view of a device on which the inventive Procedure is applied; Fig. 2 is a greatly enlarged section through part of the Device according to FIG. 1;

Fig. 3 eine Draufsicht auf eine Vorrichtung, die bei der Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens verwendet wird; Fig. 4 einen Schnitt durch die Vorrichtung gemäß Fig. 3.Fig. 3 is a plan view of a device that is used when carrying out of the method according to the invention is used; FIG. 4 shows a section through the device according to FIG. 3.

In Fig. 1 ist eine Vorrichtung 10 im Schnitt gezeigt, die bei dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendbar ist. Zu der Vorrichtung 10 gehört eine Strömungszelle 12 mit einem Abbildungsbereich 14, auf den eine Mikroskopiereinrichtung 16 gerichtet ist. Die Mikroskopiereinrichtung 16 ist an einer Seite der Strömungszelle 12 angeordnet, während an der anderen Seite derselben eine Lichtquelle 18 zur Belichtung der Mikroskopiereinrichtung 16 vorgesehen ist. Die Strömungszelle 12 hat einen Einlaß 20, einen Auslaß 22 sowie einen vom Einlaß 20 zum AuslaßIn Fig. 1, a device 10 is shown in section, which at the method according to the invention can be used. To the device 10 includes a flow cell 12 with an imaging area 14 onto which a microscope device 16 is directed. The microscope device 16 is arranged on one side of the flow cell 12, while on the other side of the same a light source 18 for exposing the microscope device 16 is provided. The flow cell 12 has a Inlet 20, outlet 22 and one from inlet 20 to outlet

22 führenden Kanal 24, der durch den Abbildungsbereich 14. führt. Durch die Strömungszelle 12 wird eine Fluidprobe geleitet, die hier interessierende Teilchen enthält, beispielsweise Blut oder Urin, und die durch den Einlaß 20 eintritt und dann durch den Kanal 24 zum Auslaß 22 geführt wird. Der Strömungszelle 12 werden außerdem umhüllende Fluide durch Fluideinlässe 26 und 28 zugeführt. Die Fluideinlässe 26 und 28 sind jeweils an einer Seite des Einlasses 2 0 und stromaufwärts von demselben angeordnet. Die Entfernung vom Einlaß 20, an dem die Fluidprobe in den Kanal 24 eintritt, bis zum Abbildungsbereich 14 ist mit L bezeichnet. Der Kanal 24 ist dadurch gekennzeichnet, daß er eine Dicke und eine Breite hat, die mit zunehmender Entfernung des Kanals 24 vom Einlaß 20 bis zu einer Verengung 21 wesentlich abnimmt. Von der Verengung 21 bis zum Auslaß 22 bleibt die Dicke der Strömungszelle unverändert, während die Breite zunimmt. Die Querschnittsfläche der Strömungszelle nimmt vom Einlaß 20 zur Verengung 21 ab. Danach nimmt die Querschnittsfläche zu. 22 leading channel 24, which leads through the imaging area 14. A fluid sample is passed through the flow cell 12, which contains particles of interest, such as blood or urine, and which enters through inlet 20 and then is passed through the channel 24 to the outlet 22. The flow cell 12 is also provided with enveloping fluids through fluid inlets 26 and 28 supplied. The fluid inlets 26 and 28 are each on one side of the inlet 20 and upstream of the same arranged. The distance from inlet 20, where the fluid sample enters channel 24, to imaging area 14 is marked with L. The channel 24 is characterized by having a thickness and a width that increase with distance of the channel 24 from the inlet 20 to a constriction 21 decreases significantly. From the constriction 21 to the outlet 22 remains the thickness of the flow cell remains unchanged while the width increases. The cross-sectional area of the flow cell decreases Inlet 20 to constriction 21 from. After that, the cross-sectional area increases.

Zu der Mikroskopiereinrichtung 16 gehört eine Linse 30, die in Fig. 2 gezeigt ist.A lens 30, which is shown in FIG. 2, belongs to the microscope device 16.

Fig. 2 ist ein stark vergrößerter Querschnitt durch einen Teil der in Fig. 1 gezeigten Strömungszelle 12. Der in Fig. 2 dargestellte Teil der Strömungszelle 12 ist der Teil in der Nähe des Abbildungsbereichs 14. Die Linse 30 ist auf den Abbildungsbereich 14 fokussiert und zeichnet sich durch eine Arbeitsentfernung W, sowie eine Tiefenschärfe F, aus. Die Dicke der Strömungszelle 12 im Abbildungsbereich 14 ist mit D bezeichnet. Die Fluidprobe hat im Abbildungsbereich 14 eine mit t bezeichnete Dicke.Fig. 2 is a greatly enlarged cross-section through part the flow cell 12 shown in Fig. 1. The portion of the flow cell 12 shown in Fig. 2 is the portion in the vicinity of the imaging area 14. The lens 30 is focused on the imaging area 14 and is characterized by a working distance W and a depth of field F. The thickness of the flow cell 12 in the imaging area 14 is denoted by D. The fluid sample has a marked t in the imaging area 14 Thickness.

Das Verfahren gemäß der Erfindung sieht vor, die Fluidprobe in die Strömung des umhüllenden Fluids einzulassen. Das Fluid (bestehend aus Fluidprobe und umhüllendem Fluid), wird durch die Verengung 21 geleitet, die einen rechteckigen Querschnitt hat, dessen Breite ein Vielfaches seiner Dicke ist. Im Abbildungsbereich 14 wird das Fluid in einer planaren Strömung gehalten.The method according to the invention provides for the fluid sample to be let into the flow of the enveloping fluid. The fluid (consisting of fluid sample and enveloping fluid) is passed through the constriction 21, which has a rectangular cross-section has, the width of which is a multiple of its thickness. In the imaging area 14, the fluid is in a planar flow held.

Die Breite ist typischerweise 0,813 mm und die Dicke 0,050 mm. Der Durchsatz an Fluid ist so gewählt, daß eine laminare Strömung entsteht. Wie in ÜS-PS 3 893 766 angegeben, kann eine laminare Strömung mit Hilfe der Hüllfluidströmungseinrichtung aufrechterhalten werden, die eine Vielzahl von Röhrchen aufweist, welche sich durch die Mitte der Leitung in Richtung der Strömung erstrecken und das Probenröhrchen umgeben. Aufgabe der Röhrchen ist es, eine Turbulenz zu vermeiden, so daß das in die Strömungszelle eintretende Fluid "kollimiert" ist und nicht turbulent ist. Mit dem Eintritt in die Strömungszelle nimmt die Fluidprobe eine laminare Fluidströmung an. Eine laminare Strömung läßt sich ohne Röhrchen erzielen, wenn Fluid mit geringer Geschwindigkeit in eine ziemlich lange Leitung eingeführt wird, ehe es in die Strömungszelle 12 eintritt. Die Geschwindigkeit des umhüllenden Fluids in der Strömungszelle liegt im Abbildungsbereich 14 typischerweise im Bereich von 0,7 χ 10 mm/s bis 2,7 χ 10 mm/s. Sobald eine laminare Strömung hergestellt ist, hat die Strömung des umhüllenden Fluids ein Geschwindigkeitsprofil. Die Mikroskopiereinrichtung 16 ist vorzugsweise an der Stelle oder nach der Stelle angeordnet, an der das umhüllende Fluid ein im wesentlichen gleichbleibendes Geschwindigkeitsprofil erreicht hat, welches die Form einer Parabel hat. Die Entfernung L ist folglich typischerweise 12,7 mm.The width is typically 0.813 mm and the thickness 0.050 mm. The throughput of fluid is chosen so that a laminar flow arises. As indicated in US Pat. No. 3,893,766, a laminar flow can be achieved with the aid of the envelope fluid flow device which has a plurality of tubes extending through the center of the conduit towards the Extend flow and surround the sample tube. The task of the tubes is to avoid turbulence, so that the fluid entering the flow cell is "collimated" and is not turbulent. With the entry into the flow cell the fluid sample assumes laminar fluid flow. Laminar flow can be achieved without tubes if fluid is introduced at low speed into a fairly long conduit before entering the flow cell 12. the The speed of the enveloping fluid in the flow cell in the imaging area 14 is typically in the range of 0.7 10 mm / s to 2.7 χ 10 mm / s. Once a laminar flow is established, the flow of the enveloping fluid has a velocity profile. The microscope device 16 is preferably arranged at the point or after the point at which the enveloping fluid is a substantially constant Has reached the velocity profile, which has the shape of a parabola. The distance L is thus typical 12.7 mm.

Sobald die Entfernung vom Einlaß bis zum Abbildungsbereich festgelegt ist, wird die äußere Dicke D im Abbildungsbereich 14 der Strömungszelle 12 festgelegt. Dann muß die Arbeitsentfernung Wj der Linse 30 größer gewählt werden als der Abstand von der Abbildungsebene zur Außenseite der Strömungszelle 12 im Abbildungsbereich 14.Once the distance from the inlet to the imaging area is set, the outer thickness D is set in the imaging area 14 of the flow cell 12. Then the working distance must Wj of the lens 30 can be selected to be greater than the distance from the imaging plane to the outside of the flow cell 12 in the imaging area 14.

Nach dem Festlegen der Arbeitsentfernung W., der Linse 30 und der äußeren Dicke D im Abbildungsbereich 14 wird die Tiefenschärfe F_d der Linse 30 so gewählt, daß sie viel kleiner ist als die äußere Dicke D.After determining the working distance W., the lens 30 and the outer thickness D in the imaging area 14, the depth of field F _{d of} the lens 30 is selected so that it is much smaller than the outer thickness D.

Die Dicke T der Fluidprobe im Abbildungsbereich 14 muß mit der Tiefenschärfe F, der Linse 30 vergleichbar oder kleiner sein als diese. Die Dicke T der Pluidprobe im Abbildungsbereich 14 wird durch die Strömungsdurchsätze der Fluidprobe und des umhüllenden Fluids bestimmt. Die Strömungsdurchsätze der Fluidprobe und des umhüllenden Fluids sind einstellbar, wodurch die Dicke T der Fluidprobe im Abbildungsbereich 14 variierbar ist. Wie schon erwähnt, ist natürlich der Strömungsdurchsatz des umhüllenden Fluids beschränkt, um eine laminare Strömung zu erzeugen. The thickness T of the fluid sample in the imaging area 14 must be comparable to the depth of field F of the lens 30 or smaller as this. The thickness T of the fluid sample in the imaging area 14 is determined by the flow rates of the fluid sample and the enveloping Fluids determined. The flow rates of the fluid sample and the enveloping fluid are adjustable, whereby the Thickness T of the fluid sample in the imaging area 14 can be varied. As already mentioned, the flow rate is of course the enveloping fluids restricted to create a laminar flow.

Falls die Dicke T der Fluidprobe im Abbildungsbereich 14 größer ist als die Tiefenschärfe F, der Linse 30, kann das Verfahren gemäß der Erfindung doch immer noch angewandt werden, indem die Durchsätze der Fluidprobe und des umhüllenden Fluids so geändert werden, daß die in der Fluidprobe enthaltenen, interessierenden Teilchen in der Mitte der Fluidprobenströmung fliessen, wo sie sich innerhalb der Tiefenschärfe der Linse 30 befinden. If the thickness T of the fluid sample in the imaging area 14 is greater than the depth of field F, of the lens 30, the method can can still be used according to the invention by changing the flow rates of the fluid sample and the enveloping fluid that the particles of interest contained in the fluid sample flow in the middle of the fluid sample flow, where they are within the depth of field of lens 30.

Um schließlich die in der Fluidprobe enthaltenen Teilchen zu betrachten, ist als Lichtquelle 18 eine Stroboskoplampe vorgesehen. Die Dauer der Blitze der Lichtquelle 18 muß so kurz sein, daß die Abbildung der Fluidprobe "eingefroren" wird. Die Dauer des Blitzes der Lichtquelle, die zum Einfrieren einer Abbildung nötig ist, wird selbstverständlich durch den Strömungsdurchsatz der Fluidprobe bestimmt. Sobald jedoch der Strömungsdurchsatz der Fluidprobe festgelegt ist, wie vorstehend erläutert, liegt auch die Mindestdauer des Stroboskoplichts fest.In order to finally observe the particles contained in the fluid sample, a stroboscopic lamp is provided as the light source 18. The duration of the flashes of the light source 18 must be so short that the image of the fluid sample is "frozen". The duration of the The flash of the light source, which is necessary to freeze an image, is of course caused by the flow rate of the fluid sample determined. However, once the flow rate of the fluid sample is established, as explained above, the minimum duration of the strobe light is also determined.

Es soll nun ein bestimmtes Ausführungsbeispiel beschrieben werden. Eine Strömungszelle 12 hat folgende Abmessungen: 0,4 cm (Breite) mal 0,005 cm (Tiefe, innere Abmessung) im Abbildungsbereich. Die Länge beträgt 3,81 cm. Die Entfernung L vom Einlaß 20 bis zum Abbildungsbereich 14 ist größer als das Fünffache der inneren Dicke d der Strömungszelle im Abbildungsbereich Die Entfernung L beträgt vorzugsweise 1,27 cm. Im Abbildungsbereich 14 hat die Strömungszelle 12 eine äußere Dicke D von A specific embodiment will now be described. A flow cell 12 has the following dimensions: 0.4 cm (Width) by 0.005 cm (depth, inner dimension) in the illustration area. The length is 3.81 cm. The distance L from the inlet 20 to the imaging area 14 is greater than five times the inner thickness d of the flow cell in the imaging area The distance L is preferably 1.27 cm. In the imaging area 14, the flow cell 12 has an outer thickness D of

_ Q —_ Q -

0,7 cm oder weniger. Vorzugsweise liegt die Dicke D im Größenordnungsbereich von 0,157 cm. Das Mikroskopiergerät ist in Richtung parallel zur Dicke D im Abbildungsbereich 14 ausgerichtet. Die Arbeitsentfernung W, der Linse 30 beträgt 0,137 cm, was mehr als die Hälfte der Dicke D im Abbildungsbereich ist. Die Tiefenschärfe F, der Linse 30 wird zwischen 0,6 und0.7 cm or less. The thickness D is preferably in the order of magnitude 0.157 cm. The microscope device is aligned in the direction parallel to the thickness D in the imaging area 14. The working distance, W, of lens 30 is 0.137 cm, which is more than half the thickness D in the imaging area is. The depth of field F, the lens 30 is between 0.6 and

4,5 μπι gewählt, was erheblich weniger ist als die Dicke D der Strömungszelle 12 im Abbildungsbereich 14 . Die Optik 30 ist typischerweise eine von der American Optical Manufacturing Corporation hergestellte, die eine Tiefenschärfe von _+ 1,1 μια4.5 μπι selected, which is significantly less than the thickness D of the Flow cell 12 in imaging area 14. Optics 30 are typical one from American Optical Manufacturing Corporation produced, which has a depth of field of _ + 1.1 μια

Schließlich werden die Strömungsdurchsätze des umhüllenden Fluids und der Fluidprobe so eingestellt, daß die Dicke T der Fluidprobe im Abbildungsbereich 14 geringer ist als die Tiefenschärfe F, der Linse 30 oder mit dieser vergleichbar. Typische Verhältnisse der Strönungsdurchsätze der Fluidprobe und des umhüllenden Fluids liegen im Bereich von 1:2 bis 1:50. Vorzugsweise betragen die Strömungsdurchsätze 0,0036 ml/s bzw. 0,050 ml/s bei einem Gesamtfluiddurchsatz von 0,054 ml/s. Das Licht von der Stroboskoplampe 12 liegt bei einer Dauer von 2 Mikrosekunden, 60 mal pro Sekunde.Finally, the flow rates of the enveloping fluid and the fluid sample are adjusted so that the thickness T of Fluid sample in the imaging area 14 is less than the depth of focus F, the lens 30 or comparable with this. Typical conditions the flow rates of the fluid sample and the envelope Fluids range from 1: 2 to 1:50. The flow throughputs are preferably 0.0036 ml / s or 0.050 ml / s a total fluid flow rate of 0.054 ml / s. The light from the Strobe lamp 12 has a duration of 2 microseconds, 60 times per Second.

Mit der Erfindung wird ein Verfahren offenbart, um die optimalen Betriebsparameter der auf den Abbildungsbereich einer von einer Fluidprobe durchströmten Strömungszelle gerichteten Mikroskopiereinrichtung festzulegen.With the invention, a method is disclosed in order to determine the optimal operating parameters of the image area of one of A microscope device directed through a fluid sample through which the flow cell flows to be determined.

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Claims

Method of Operating a Microscope Priority: November 29, 1984 - U.S.A. - Serial No. 676 I90 claims

1. A method for operating a microscope apparatus with a microscope device for analyzing particles in a fluid sample which flows with an enveloping fluid in a flow cell which has an inlet and an outlet and a channel leading from the inlet to the outlet with an imaging area on which the Microscopic means, and means for distributing the fluid sample and the enveloping fluid in a substantially planar flow from the inlet to the imaging area, the planar flow having a width and a thickness and the enveloping fluid and the fluid sample being conveyed from the inlet to the outlet and the microscope device has optics for focusing on the imaging area,
characterized in that

- The flow rate of the enveloping fluid is chosen so that a planar, laminar flow is generated in the imaging area,

- the microscope device is aligned in the imaging area in the direction parallel to the thickness,

- The working distance of the optics is chosen so that it is greater than the distance from the image plane to the outside the flow cell in the imaging area,

- the depth of field of the optics is chosen so that it is much smaller than the thickness of the flow cell in the imaging area, and

- The flow rate of the fluid sample and the enveloping fluid is maintained so that the particles of the fluid sample flow in the imaging area within the depth of field of the lens.

2. The method according to claim 1,

characterized in that the fluid sample is introduced into the flow of the enveloping fluid, and in that the enveloping fluid with the fluid sample is passed through a constriction which has a rectangular cross-sectional shape, whose width is much greater than the thickness.

3. The method according to claim 1,

characterized in that the microscope device is arranged at a distance at that point at which the enveloping fluid reaches a substantially constant velocity profile.

4. The method according to claim 3,

characterized in that the profile has the shape of a parabola.

5. The method according to claim 1,

characterized in that the thickness of the fluid sample in the imaging area is comparable to the depth of field of the lens or less than this.

6. The method according to claim 1,

characterized in that the outer thickness of the flow cell in the imaging area is 0.7 cm or less amounts to.

7. The method according to claim 1,

characterized in that the optics have a depth of focus of 0.6 and 4.5 μΐη.

ο

8. The method according to claim 3,

characterized in that the distance from the imaging area to the inlet is greater than five times that inner thickness of the flow cell.

9. The method according to claim 1,

characterized in that the ratio of the flow rate of the fluid sample to the enveloping fluid in the Range from 1: 2 to 1:50.

10. The method according to claim 1,

characterized in that the fluid sample is in the imaging area is exposed to strobe light of such duration that the image of the fluid sample is "frozen".

11. The method according to claim 9,

characterized in that the flow rate of the fluid sample is approximately 0.0036 ml / s.

12. The method according to claim 10,

characterized in that the stroboscopic light approx. Operated 60 times per second with a flash duration of 2 microseconds will.