DE3226398A1

DE3226398A1 - Liquid chromatograph

Info

Publication number: DE3226398A1
Application number: DE19823226398
Authority: DE
Inventors: Helmut Dipl.-Phys. 8039 Puchheim Apfel
Original assignee: ABC-ANALYTISCHE BIOCHEMIE GmbH; Abc Analytische Biochemie 8039 Puchheim GmbH; ANALYTISCHE BIOCHEMIE ABC
Current assignee: Abc-Biotechnologie/bioverfahrenstechnik 8217 GmbH
Priority date: 1982-07-15
Filing date: 1982-07-15
Publication date: 1984-01-19
Also published as: DE3226398C2

Abstract

By means of the invention, a liquid chromatograph is described which permits the individual fractions of a sample to be led at a uniform rate past a detector for detection by measurement independently of pressure conditions in the separating column. To this end, on the detector side (low-pressure side) of the separating column is arranged a metering element which allows the eluate coming out of the separating column to leave in a metered fashion. Only then is it possible to lead the eluate past the detector at a uniform rate, so that exact results of measurement are obtained.

Description

Flüssigkeitschromatograph Liquid chromatograph

Die Erfindung betrifft einen Flüssigkeitschromatographen mit einer mit einem Substanzgemisch (Probe) beschickbaren Trennsäule, in die von einer Hochdruckseite her ein Lösungsmittel (Eluent) zur Trennung der einzelnen Fraktionen der Probe gegeben wird, mit einem der Trennsäule nachgeschalteten, auf der Niederdruckseite angeordneten Detektor zur meßtechnischen Erfassung der Einzelfraktionen des Eluates (Probe + Eluent), mit einem Registriergerät zur Registrierung der am Detektor erhaltenen Meßsignale und mit einer den Durchfluß des Eluates beeinflussenden Dosiervorrichtung.The invention relates to a liquid chromatograph with a with a mixture of substances (sample) loadable separation column into which from a high pressure side a solvent (eluent) is added to separate the individual fractions of the sample is arranged on the low-pressure side with a downstream column Detector for the measurement of the individual fractions of the eluate (sample + Eluent), with a registration device for registering the received at the detector Measurement signals and with a metering device influencing the flow of the eluate.

Flüssigkeitschromatographen dieser Art sind bekannt und werden dazu verwendet, die einzelnen Fraktionen einer Probe voneinander zu trennen und meßtechnisch zu erfassen. Hierzu wird eine in Lösung befindliche Probe auf eine Trennsäule aufgebracht, in der sich ein Material befindet, das die einzelnen Fraktionen der gelösten Probe mehr oder weniger stark zurückhält, wenn durch die Trennsäule ein Lösungsmittel (Eluent) gepumpt wird.Liquid chromatographs of this type are known and are being used used to separate the individual fractions of a sample from each other and metrologically capture. For this purpose, a sample in solution is applied to a separation column, in which is a material that the individual factions holds back the dissolved sample to a greater or lesser extent when passing through the separation column a solvent (eluent) is pumped.

Als Folge davon durchwandern die einzelnen Fraktionen der Probe die Säule mit verschiedenen Geschwindigkeiten vom Säulenanfang auf der Hochdruckseite aus. Die Komponenten der Probe treten daher am Säulenende auf der Niederdruckseite getrennt in einzelnen Fraktionen aus. Sie werden dort durch einen Detektor geleitet und meßtechnisch erfaßt. Das resultierende Meßsignal wird in bekannter Weise registriert, z.B. mit einem Kompensationsschreiber. Die aufgezeichneten Diagramme geben im allgemeinen in Abszissenrichtung die Durchlaufzeit (durch die Küvette des Detektors) und in Ordinatenrichtung die Konzentration der Fraktionen an. Das Integral (Peakfläche gegen Basislinie) ist ein Maß für die Substanzmenge, die Relation der Peakflächen gegeneinander ergibt die gewünschte Information über die mengenmäßige Zusammensetzung der Einzelkomponenten in der Probe.As a result, the individual fractions of the sample migrate through the Column with different speeds from the beginning of the column on the high pressure side the end. The components of the sample therefore occur at the end of the column on the low pressure side separately in individual fractions. There they are passed through a detector and recorded by measurement. The resulting measurement signal is recorded in a known manner, e.g. with a compensation recorder. The recorded diagrams generally give in the abscissa direction the transit time (through the cuvette of the detector) and in The ordinate direction indicates the concentration of the fractions. The integral (peak area against baseline) is a measure of the amount of substance, the relation of the peak areas against each other gives the desired information about the quantitative composition of the individual components in the sample.

Um miteinander vergleichbare Integrale der einzelnen Fraktionsanteile zu erhalten und damit eine exakte Auswertung möglich zu machen, ist es entscheidend, daß die Einzelfraktionen durch den Detektor mit gleichförmiger Geschwindigkeit transportiert werden, da sonst die Peakbasen entweder zu schmal oder zu breit und damit die Peakflächen verfälscht werden. Aus diesem Grunde weisen die bekannten Flüssigkeitschromatographen eine den Durchfluß durch die Trennsäule beeinflussende Dosiervorrichtung auf, die bei den bekannten Flüssigkeitschromatographen eine Hochdruckdosierpumpe ist, die auf der Hochdruckseite der Trennsäule angeordnet ist und den Eluenten gleichmäßig durch die Trennsäule drückt. Nachteilig dabei ist, daß selbst dann, wenn mit einer Hochdruckdosierpumpe von der Hochdruckseite- her der Eluent gleichmäßig durch die Säule gedrückt wird, ein mit gleichförmiger Geschwindigkeit erfolgender Austritt des Eluates nicht garantiert werden kann. Dies liegt darin begründet, daß der strömungsmechanische Widerstand in der Trennsäule während der Analyse sich in Abhängigkeit verschiedener Betriebsparameter, wie z.B.To obtain integrals of the individual fraction shares that can be compared with one another to obtain and thus to make an exact evaluation possible, it is crucial to that the individual fractions transported through the detector at a uniform speed otherwise the peak bases are either too narrow or too wide and thus the peak areas be falsified. For this reason, the known liquid chromatographs a metering device influencing the flow through the separation column, which in the known liquid chromatograph is a high pressure metering pump which is arranged on the high pressure side of the separation column and the eluent is uniform pushes through the separation column. The disadvantage here is that even if with one High pressure dosing pump from the high pressure side - the eluent evenly through the Column is pushed, an exit occurring at a steady rate of the eluate cannot be guaranteed. This is due to the fact that the fluid mechanical Resistance in the separation column during the analysis become dependent various operating parameters, such as

Säulentemperatur, pH-Wert, Ionenstärke und Viskosität des Eluenten stark ändert. Auch wird bei manchen Trennvorgängen die sogenannte Gradientenmethode angewendet, bei der verschiedene Versuchsparameter, wie der pH-Wert, die Konzentration des Eluenten, seine chemische Zusammensetzung, die Säulentemperatur während der Trennung bewußt geändert werden, um bessere Trennergebnisse zu erzielen. Auch in diesen Fällen kann eine Hochdruckdosierpumpe vor der Säule nicht für einen gleichmäßigen Austritt des Eluates zur Niederdruckseite hin sorgen.Column temperature, pH value, ionic strength and viscosity of the eluent changes greatly. The so-called gradient method is also used in some separation processes applied in the various test parameters, such as the pH value, the concentration of the eluent, its chemical composition, the column temperature during the Separation can be changed consciously in order to achieve better separation results. Also in In these cases, a high-pressure metering pump in front of the column cannot ensure a steady flow Ensure that the eluate escapes to the low-pressure side.

Der Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, einen Flüssigkeitschromatographen zu schaffen, bei dem die Einzelfraktionen unabhängig von den Druckveränderungen in der Trennsäule mit gleichförmiger Geschwindigkeit durch den Detektor transportiert werden können.The invention is therefore based on the object of a liquid chromatograph to create in which the individual fractions are independent of the pressure changes transported in the separation column at a uniform speed through the detector can be.

Diese Aufgabe wird dadurch gelöst, daß als Dosiervorrichtung ein dem Auslaß der Trennsäule ein konstantes Volumen pro Zeiteinheit entnehmendes Dosiersystem vorgesehen ist, das auf der Detektorseite (Niederdruckseite) der Trennsäule angeordnet ist.This object is achieved in that as a metering device a dem Dosing system withdrawing a constant volume per unit of time at the outlet of the separation column is provided, which is arranged on the detector side (low pressure side) of the separation column is.

Die Erfindung geht dabei von dem Gedanken aus, daß es mit einer auf der Detektorseite angeordneten Dosiervorrichtung möglich ist, unabhängig von den Druckverhältnissen in der Säule während des Trennungsvorganges am Auslaß der Trennsäule ein konstantes Volumen pro Zeiteinheit zu entnehmen, so daß dann auch die einzelnen Fraktionen mit einem konstanten Volumen pro Zeiteinheit, d.h. mit gleichförmiger Geschwindigkeit, den Detektor passieren. Nur dadurch sind exakte Meßergebnisse möglich.The invention is based on the idea that it is with a the detector side arranged dosing device is possible, regardless of the Pressure conditions in the column during the separation process at the outlet of the separation column to take a constant volume per unit of time, so that then also the individual Fractions with a constant volume per unit of time, i.e. with more uniform Speed to pass the detector. This is the only way to achieve exact measurement results.

In Weiterbildung der Erfindung umfaßt die Dosiervorrichtung einen an den Auslaß der Trennsäule angeschlossenen, geschlossenen Strömungskanal sowie ein Dosiersystem zur gesteuerten Vergrößerung des Strömungskanalvolumens. Es besteht dann die Möglichkeit, das Strömungskanalvolumen während des Trennvorgangs zeitlinear zu vergrößern, wobei dann eine der der Volumenvergrößerung entsprechende Menge an Eluat aus der Trennsäule austreten kann.In a further development of the invention, the metering device comprises a connected to the outlet of the separation column, closed flow channel and a dosing system for controlled enlargement of the flow channel volume. It exists then the possibility of that Flow channel volume during the separation process to increase linearly in time, then one corresponding to the volume increase Amount of eluate can escape from the separation column.

Wenn diese Volumenvergrößerung mit konstanter Geschwindigkeit vorgenommen wird, ist garantiert, daß pro Zeiteinheit jeweils gleiche Volumenmengen des Eluats der Trennsäule entnommen wird, wodurch die im Eluat enthaltenen Fraktionen mit gleichförmiger Geschwindigkeit den Detektor passieren. Der Detektor wird dabei vorteilhaft zwischen dem Auslaß der Trennsäule und dem Dosiersystem in den Strömungskanal einbezogen.When this volume increase is done at a constant rate is guaranteed that the same volume of eluate per unit of time the separation column is removed, whereby the fractions contained in the eluate with uniform Speed pass the detector. The detector is advantageously between the outlet of the separation column and the metering system included in the flow channel.

In vorteilhafter Weiterbildung des Dosierelementes weist dieses einen mit einer Gegenkraft zum Druck in der Trennsäule beaufschlagten Kolben auf, der in einem das Ende des Strömungskanals bildenden Hubraum axial verschiebbar angeordnet ist und der während des Trennvorgangs im Sinne einer Vergrößerung des Hubraumes mit einer bestimmten Geschwindigkeit axial bewegt wird. Vorteilhaft dabei ist, wenn das Dosierelement eine Glaskolbenpumpe ist, die in bekannter Weise einen Gleitkolben und einen Hubraummantel besitzt, der dann in der angegebenen Weise vorteilhaft mit einem aus Glas stufenlos regelbaren Schrittmotorantrieb betätigt wird.In an advantageous development of the metering element, this has a with a counterforce to the pressure in the separation column on the piston, the arranged axially displaceably in a displacement which forms the end of the flow channel and that during the separation process in the sense of increasing the displacement is moved axially at a certain speed. It is advantageous if the metering element is a glass piston pump which, in a known manner, is a sliding piston and has a displacement jacket, which is then advantageously with in the specified manner operated by a stepper motor drive made of glass.

In vorteilhafter Weiterbildung der Erfindung wird der Druck im Strömungskanal der Dosiervorrichtung auf einen konstanten Wert geregelt. Durch diese Maßnahme wird sichergestellt, daß der Druck im Strömungskanal nicht über einen Druckwert ansteigt, der die Gefahr der Beschädigung des Detektors mit sich bringen würde.In an advantageous development of the invention, the pressure in the flow channel is the dosing device is regulated to a constant value. This measure will ensures that the pressure in the flow channel does not rise above a pressure value, which would bring with it the risk of damaging the detector.

Ein typischer Druckbereich liegt zwischen 0,1 bis 2 bar über Luftdruck, da durch solche Drucke auf der Niederdruckseite eine Beschädigung des Detektors nicht zu befürchten ist. Verwirklichen läßt sich die Druckregelung vorteilhaft durch einen im Strömungskanal der Dosiervorrichtung angeordneten Druckmesser, der den Ist-Wert des Druckes erfaßt und an ein Druckregelelement angeschlossen ist. Das Druckregelelement ist in Serie zur Trennsäule angeordnet und beispielsweise als Hochdrucknadelventil verwirklicht, das seinen strömungsmechanischen Widerstand so nachregelt, daß auf der Niederdruckseite im Strömungskanal der gewünschte niedere Druck gleichmäßig aufrechterhalten bleibt.A typical pressure range is between 0.1 and 2 bar above air pressure, because such pressures on the low pressure side damage the detector is not to be feared. The pressure control can be realized advantageously through a pressure gauge arranged in the flow channel of the metering device, which controls the The actual value of the pressure is recorded and connected to a pressure control element. That Pressure control element is arranged in series with the separation column and, for example, as High pressure needle valve realizes its fluid mechanical Resistance readjusts so that on the low pressure side in the flow channel the desired low pressure is evenly maintained.

In Weiterbildung der Erfindung ist zur Erzeugung des Hochdrucks auf der Hochdruckseite ein abgeschlossenes Hochdruckgefäß vorgesehen, in das ein mit dem Eluenten gefüllter Innenbeutel eingelegt ist, der im Hochdruckgefäß mit einem auf seine Wände wirkenden Hochdruck beaufschlagt wird. Der Innenbeutel preßt daher den Eluenten mit dem im Hochdruckgefäß anstehenden Druck zur Trennsäule. Zwischen dem Hochdruckgefäß und der Trennsäule kann dann das Druckregelelement angeordnet sein, das entsprechend dem auf der Niederdruckseite gewünschten Druck durch seinen Innenwiderstand einen Druckabfall verursacht, so daß auf der Niederdruckseite der gewünschte Druck eingehalten wird.In a further development of the invention is to generate the high pressure the high pressure side a closed high pressure vessel is provided in which a with The inner bag filled with the eluent is inserted, which is filled in the high-pressure vessel with a high pressure acting on its walls is applied. The inner bag therefore presses the eluent with the pressure in the high pressure vessel to the separation column. Between The pressure regulating element can then be arranged in the high-pressure vessel and the separation column his, according to the pressure desired on the low-pressure side Internal resistance causes a pressure drop, so that on the low pressure side of the desired pressure is maintained.

In der Zeichnung ist die Erfindung anhand eines Ausführungsbeispieles weiter erläutert und beschrieben.In the drawing, the invention is based on an exemplary embodiment further explained and described.

Es zeigt: Fig. 1 eine Prinzipskizze eines erfindungsgeriäßen Flüssigkeitschromatographen, Fig.2a bis 2c den zeitlichen Ablauf eines mit dem erfindungsgemäßen Flüssigkeitschromatographen durchgeführten Trennvorgangs zu drei verschiedenen Zeitpunkten und Fig. 3 ein Meßdiagramm des in den Fig. 2a bis 2c beschriebenen Meßvorganges.It shows: FIG. 1 a schematic diagram of a liquid chromatograph according to the invention, 2a to 2c show the time sequence of a with the liquid chromatograph according to the invention performed separation process at three different times and FIG. 3 is a measurement diagram of the measuring process described in FIGS. 2a to 2c.

Ein Ausführungsbeispiel eines erfindungsgemäßen Flüssigkeitschromatographen ist in Fig. 1 dargestellt und im ganzen mit 1 bezeichnet. Kernstück des Flüssigkeitschromatographen ist eine Trennsäule 2, in der die einzelnen Fraktionen einer Probe 11 voneinander getrennt werden. Auf der Hochdruckseite 3 der Trennsäule 2 befindet sich ein Hochdruckbehälter 4, in dessen Innenraum 8 ein elastischer Innenbeutel 5 angeordnet ist, in den ein Lösungsmittel 9 eingebracht ist. Der Innenraum 8 des Hochdruckbehälters 4 kann mit einem aus einer vorzugsweise mit Heliumgas gefüllten Gasflasche über das Druckminderventil 7 gesteuerten Hochdruck beaufschlagt werden, so daß der Innenbeutel 5 den Eluenten 9 unter Druck der Trennsäule 2 zuführt.An embodiment of a liquid chromatograph according to the invention is shown in Fig. 1 and designated 1 as a whole. The core of the liquid chromatograph is a separation column 2, in which the individual fractions of a sample 11 from each other be separated. A high pressure container is located on the high pressure side 3 of the separation column 2 4, in the interior 8 of which an elastic inner bag 5 is arranged, into which a Solvent 9 is introduced. The interior 8 of the high pressure container 4 can with one from a gas cylinder, preferably filled with helium gas, via the pressure reducing valve 7 controlled high pressure are applied, so that the inner bag 5 the eluent 9 supplies the separation column 2 under pressure.

In der Leitung zwischen dem Hochdruckbehälter 4 und der Trennsäule 2 ist ein Druckregelelement 10 angeordnet, das den tatsächlichen Druck des in die Trennsäule 2 eingeleiteten Eluenten regelt.In the line between the high pressure vessel 4 and the separation column 2, a pressure control element 10 is arranged, which the actual pressure of the in the Separating column 2 regulates introduced eluents.

Auf der Niederdruckseite der Trennsäule 2, d.h. also anschließend an den Auslaß 12, ist eine Dosiervorrichtung, die im ganzen mit 13 bezeichnet ist, angeschlossen, die es ermöglicht, das aus der Trennsäule kommende Eluat, bestehend aus den einzelnen Fraktionen der Probe 11 und dem Lösungsmittel, dosiert in gleichbleibenden Mengen austreten zu lassen. Hierzu weist die Dosiervorrichtung 13 einen abgeschlossenen Strömungskanal 17 auf, der unmittelbar an den Auslaß 12 der Trennsäule 2 angeschlossen ist. In den Strömungskanal 17 ist ein Detektor 14 mit einbezogen, den das aus dem Auslaß 12 austretende Eluat mit gleichförmiger Geschwindigkeit passiert. Im Detektor 14 werden die einzelnen Fraktionen meßtechnisch erfaßt und entsprechende Meßsignale erzeugt, die dann mit einem Registriergerät 15 aufgezeichnet und/oder gespeichert werden.On the low pressure side of the separation column 2, i.e. subsequently to the outlet 12, is a metering device, which is designated as a whole by 13, connected, which makes it possible to consist of the eluate coming from the separation column from the individual fractions of sample 11 and the solvent, dosed in constant amounts Allowing quantities to escape. For this purpose, the metering device 13 has a closed one Flow channel 17 which is connected directly to the outlet 12 of the separation column 2 is. In the flow channel 17, a detector 14 is included, which from the Eluate emerging from outlet 12 passes at a uniform rate. In the detector 14 the individual fractions are recorded by measurement technology and corresponding measurement signals generated, which are then recorded with a recording device 15 and / or stored will.

Um eine gleichförmige Durchtrittsgeschwindigkeit des Eluats durch den Detektor 14 zu ermöglichen, ist der Steuerkanal 17 durch einen zylindrischen Raum 19 abgeschlossen, dessen Volumen vergrößerbar ist, in dem ein Kolben 18 während des Trennvorgangs mit Hilfe eines stufenlos regelbaren Schrittmotorantriebes 20 in Fig. 1 na i unten bewegt wird. Geschieht diese Bewegung des Kolbens 18 mit einer konstanten Geschwindigkeit, so vergrößert-sich auch das Volumen des Raumes 19 und damit das Gesamtvolumen des Steuerkanals 17 pro Zeiteinheit um denselben Volumenanteil. Eine der Volumenvergrößerung entsprechende Menge des Eluats kann dadurch dosiert aus dem Auslaß 12 der Trennsäule 2 austreten und den Detektor passieren. Diese Austrittsmenge ist allein von der Volumensvergrößerung des Dosierelementes 16, welches den Druckkolben 18 und das Volumen des Raumes 19 umfaßt, bestimmt. Der Druck und daher auch Druckschwankungen innerhalb der Säule haben auf den Anteil der pro Zeiteinheit aus dem Auslaß 12 austretenden Menge keinen Einfluß und können somit auch nicht zu verfälschten Meßergebnissen führen, da die getrennten Fraktionen dann zwangsläufig mit konstanter Geschwindigkeit unter konstantem Druck und völlig pulsfrei den Detektor 14 passieren.To allow the eluate to pass through at a uniform rate To enable the detector 14, the control channel 17 is through a cylindrical Completed space 19, the volume of which can be increased, in which a piston 18 during the separation process with the help of a continuously variable stepper motor drive 20th in Fig. 1 na i is moved below. This movement of the piston 18 happens with a constant speed, the volume of space 19 and increases thus the total volume of the control channel 17 per unit of time by the same volume fraction. An amount of the eluate corresponding to the increase in volume can thereby be dosed emerge from the outlet 12 of the separation column 2 and pass the detector. This leakage amount is solely from the increase in volume of the metering element 16, which the pressure piston 18 and the volume of the space 19 is determined. The pressure and therefore pressure fluctuations within the column have to the proportion of the outlet 12 exiting per unit of time Quantity has no influence and therefore cannot lead to falsified measurement results lead, since the separated fractions then inevitably at a constant rate Pass the detector 14 under constant pressure and completely pulse-free.

Um zu verhindern, daß sich auf der Niederdruckseite im Strömungskanal 17 ein zu hoher Druck aufbaut, der den Detektor 14 zerstören könnte, kontrolliert ein Druckmesser 21 permanent einen im Strömungskanal 17 geregelten vorwählbaren Soll-Wert. Wird dieser Soll-Wert überschritten, so verengt sich automatisch das auf der Hochdruckseite angeordnete, ansteuerbare Hochdrucknadelventil 10. Wird der Soll-Wert unterschritten, so erweitert sich das Nadelventil. Das Regelverhalten ist also so gewählt, daß dann, wenn sich der strömungsmechanische Widerstand R5 der Trennsäule 2 ändert, durch Änderung der Einstellung des Nadelventils 10 dessen strömungsmechanischer Widerstand Rv gegenläufig beeinflußt wird. Es gilt dann: R5 + Rv = konst. Der konstante Gesamtströmungswiderstand verursacht bei konstantem Arbeitsdruck, der an der Gasflasche 6 eingestellt wird, einen konstanten Fluß durch die Säule.To prevent it from being on the low pressure side in the flow channel 17 too high a pressure builds up, which could destroy the detector 14, controlled a pressure gauge 21 permanently preselectable one regulated in the flow channel 17 Target value. If this target value is exceeded, it automatically narrows on the high pressure side arranged, controllable high pressure needle valve 10. If the The needle valve expands. The control behavior is therefore chosen so that when the fluidic resistance R5 the separation column 2 changes by changing the setting of the needle valve 10 of the fluid mechanical resistance Rv is influenced in the opposite direction. The following then applies: R5 + Rv = const. The constant total flow resistance causes a constant Working pressure, which is set on the gas bottle 6, a constant flow through the pillar.

In Fig. 2 ist zur Verdeutlichung der Erfindung ein Trennvorgang, wie er mit einem erfindungsgemäßen Flüssigkeitschromatographen durchgeführt werden kann, zu verschiedenen Zeitpunkten mit einem erhaltenen Meßdiagramm prinzipiell dargestellt. Durch den Trennvorgang werden in bekannter Weise innerhalb der Trennsäule 2 die einzelnen Fraktionen einer Probe voneinander räumlich getrennt. In der Fig. 2 sind die einzelnen, unterschiedlichen Fraktionen der Probe mit 22 bis 25 bezeichnet und befinden sich zu einem Zeitpunkt t0 in verschiedenen Schichten übereinander in der Trennsäule 2. Solange der Kolben 18 die in Fig. 2a dargestellte Position innehat, wird der Auslaß 12 der Trennsäule 2 "zugehalten", so daß kein Eluat aus der Trennsäule 2 austreten und den Detektor 14 passieren kann. Wird nun der Kolben 18 mit einer konstanten Geschwindigkeit Vkonst (in den Fig. 2a bis 2c nach unten) bewegt, entsteht eine Volumenvergrößerung des Strömungskanals 17, so daß nun entsprechend dieser Volumensvergrößerung die einzelnen Fraktionen in der Reihenfolge 25, 24, 23, 22 am Detektor 14 vorbeigeführt und meßtechnisch erfaßt werden. Zum in Fig. 2b dargestellten Zeitpunkt t1 passiert die erste Fraktion, die mit 25 bezeichnet ist, den Detektor 14, so daß ein Meßsignalerhalten wird, das sich am Registriergerät durch den entstandenen Peak (vgl. Fig. 3) festhalten läßt. Auf diese Weise werden nacheinander die einzelnen Fraktionen jeweils mit konstanter Geschwindigkeit, da die Bewegung des Kolbens 18 mit konstanter Geschwindigkeit durchgeführt wird, am Detektor entlang geführt, wobei jedesmal dann, wenn eine Fraktion den Detektor passiert, ein weiterer Peak entsteht, der je nach Konzentration der Fraktion unterschiedlich hoch wird. Am Ende des Trennvorgangs zum Zeitpunkt t2 haben alle Fraktionen den Detektor 14 mit konstanter Geschwindigkeit passiert, so daß die Auswertung des in Fig. 3 gezeigten Meßdiagramms fehlerfrei möglich ist. Hierzu werden die Integrale der einzelnen Peaks bestimmt, die ein Maß für die Substanzmenge sind.In Fig. 2 is to illustrate the invention, a separation process, such as it can be carried out with a liquid chromatograph according to the invention, at different times with one obtained measuring diagram in principle shown. The separation process is carried out in a known manner within the separation column 2 the individual fractions of a sample spatially separated from one another. In Fig. 2, the individual, different fractions of the sample are designated by 22 to 25 and are at a point in time t0 in different layers one above the other in the separation column 2. As long as the piston 18 is in the position shown in FIG. 2a holds, the outlet 12 of the separation column 2 is "closed" so that no eluate from the separation column 2 and can pass the detector 14. Now becomes the piston 18 at a constant speed Vkonst (downwards in Figs. 2a to 2c) moves, there is an increase in volume of the flow channel 17, so that now accordingly this volume increase the individual fractions in the order 25, 24, 23, 22 are moved past the detector 14 and detected by measurement. For in Fig. The time t1 shown in FIG. 2b passes the first fraction, denoted by 25 is, the detector 14, so that a measurement signal is obtained, which is on the recorder can be held by the resulting peak (see. Fig. 3). Be that way one after the other the individual fractions, each at a constant speed, there the movement of the piston 18 is carried out at a constant speed, on Along the detector, each time a fraction passes the detector, Another peak arises, which differs depending on the concentration of the fraction gets high. At the end of the separation process at time t2, all fractions have the Detector 14 happens at constant speed, so that the evaluation of the in Fig. 3 shown measurement diagram is possible without errors. For this purpose the integrals of the individual peaks, which are a measure of the amount of substance.

Die Relation der Peakflächen gegeneinander ergibt dann die gewünschte Information über die mengenmäßige Zusammensetzung der Einzelkomponente in der Probe, die dann nicht durch unterschiedliche Passiergeschwindigkeiten im Detektor verfälscht sind.The relation of the peak areas to one another then gives the desired one Information on the quantitative composition of the individual components in the sample, then not through different Passing speeds are falsified in the detector.

In der Praxis wird als Dosierelement 16 bevorzugt eine Glaskolbenpumpe verwendet, die das dann zugeführte Eluat stetig nach außen fördert, so daß eine kontinuierliche Arbeitsweise möglich ist.In practice, a glass piston pump is preferred as the metering element 16 used, which then continuously promotes the eluate to the outside, so that a continuous operation is possible.

L e e r s e i t eL e r s e i t e

Claims

Claims liquid chromatograph with one with a substance mixture (Sample) loadable separation column, into which a solvent from a high pressure side (Eluent) is added to separate the individual fractions of the sample with a Downstream of the separation column, the detector is arranged on the low-pressure side for the measurement of the individual fractions of the eluate (sample + eluent), with a registration device for registering the measurement signals received at the detector and with a metering device influencing the flow of the eluate, thereby characterized in that as a metering device one of the outlet (12) of the separation column (2) a constant volume per unit of time withdrawing device (13) is provided, which is arranged on the detector side (low pressure side) of the separation column (2).

2. Liquid chromatograph according to claim 1, characterized in that that the metering device (13) is connected to the outlet (12) of the separation column (2), closed flow channel and metering elements (16) for controlled enlargement of the flow channel volume.

3. Liquid chromatograph according to claim 1 or 2, characterized. that the detector (14) between the outlet (12) of the separation column (2) and the metering elements (16) is arranged in the flow channel (17).

4. Liquid chromatograph according to one of claims 1 to 3, characterized characterized in that the metering elements (16) have a counterforce to the pressure comprise in the separation column (2) acted upon piston (18), which in one the end the cylindrical space (19) forming the flow channel (17) is arranged so as to be axially displaceable is and that the piston during the separation process in the sense of an increase in the Space (19) is moved axially at a certain speed (Vkonst.).

5. Liquid chromatograph according to claim 4, characterized in that that a glass piston pump (16) is provided as the metering element.

6. Liquid chromatograph according to claim 5, characterized in that that the glass piston pump (16) with an infinitely variable stepper motor drive (20) is provided.

7. Liquid chromatograph according to one of the preceding claims, characterized in that the pressure in the flow channel (17) of the metering device (13) is regulated to a constant value, the regulating element before or after the column can be arranged.

8. Liquid chromatograph according to claim 7, characterized in that that in the flow channel (17) between the column and the metering device (13) a pressure gauge (21) is arranged, which detects the actual value of the pressure and which is transmitted to a pressure control element (10) is connected.

9. Liquid chromatograph according to claim 7 and 8, characterized in that that the pressure control element (10) in front of the column (2) on the high pressure side (3) or is arranged after the column on the low pressure side.

10. Liquid chromatograph according to one of the preceding claims, characterized in that for generating the high pressure on the high pressure side a closed high-pressure vessel (4) is provided, into which a with the eluent (9) filled inner bag (5) is inserted, which is generated with a in the container (4) High pressure is applied.