DE3045199A1

DE3045199A1 - Solid-phase immunoassay method - using reagent plate with perforated wells fitting into wells in sample plate

Info

Publication number: DE3045199A1
Application number: DE19803045199
Authority: DE
Inventors: Jörg Dipl.-Phys. Dr. 2000 Hamburg Sossinka
Original assignee: Eppendorf Geraetebau Netheler and Hinz GmbH
Current assignee: Eppendorf SE
Priority date: 1980-12-01
Filing date: 1980-12-01
Publication date: 1982-07-01

Abstract

Solid-phase immunoassays for serum components are carried out using a reagent plate having a series of wells perforated at the bottom, and a sample plate having corresp. wells sized to receive the wells of the reagent plate. The process comprises (a) introducing immobilised antigen into the wells of the reagent plate, (b) introducing test and control serum samples into the wells of the sample plate, (c) inserting the reagent plate into the sample plate to allow reaction between the immobilised antigen and the serum components, (d) removing the reagent plate and immersing it in a buffer or stopping-reagent soln., (e) transferring the reagent plate to one or more flat dishes contg. wash soln. to remove unbound serum components, (f) placing the reagent plate in a flat dish contg. a soln. of a labelled reagent capable of reacting with the bound serum components, (g) rinsing the reagent plate, and (h) measuring the activity (fluorescence, enzyme activity or radioactivity) of the bound label. The process is esp. useful for allergy screening. The process eliminates laborious manual pipetting operations.

Description

Beschreibung description

Die bekannten Festphasen(Sandwich)-Verfahren zum Nachweis von in Pat ientense ren enthaltenen Antikörpern, Antigenen oder Allergene beruhen darauf, daß man das Patientenserum mit Substanzen zur Umsetzung bringt, die spezifische Bindungsaffinität für die nachzuweisenden Antikörper, Antigene oder Allergene besitzen und selbst an einen festen Träger gebunden sind. Als Trägermaterialien eignen sich polymere Materialien, z.B. Kohlenwasserstoffpolymerisate, wie Polystyrol, Polyethylen, Polypropylen, Polybutylen, ferner Polyester, Zellulose, Zellulosederivate u.ä. Die Träger können in Form von KUgeichen, Platte chen, Rohren, Streifen und dergleichen vorliegen. Nach erfolgter kinetischer oder endpunktmäßiger Reaktion zwischen der nachzuweisenden Serumkomponente und dem an den festen Träger gebundenen Agens werden die nicht gebundenen Serumkomponenten weggewaschen. Dann wird das Umsetzungsprodukt mit einem Reagenz zur Reaktion gebracht, das spezifische Bindungsaffinität für die gebundene Serumkomponente besitzt und durch eine fluoreszierende Substanz, ein Enzym oder ein Isotop o.ä. markiert ist.The known solid phase (sandwich) method for the detection of in Pat ientense ren contained antibodies, antigens or allergens are based on the fact that the patient's serum is made to react with substances, the specific binding affinity for the antibodies, antigens or allergens to be detected and themselves are bound to a solid support. Polymers are suitable as carrier materials Materials, e.g. hydrocarbon polymers such as polystyrene, polyethylene, polypropylene, Polybutylene, also polyester, cellulose, cellulose derivatives and the like. The porters can in the form of KUgeichen, plate surfaces, tubes, strips and the like. After the kinetic or endpoint reaction between the to be detected Serum component and the agent bound to the solid support become unbound Serum components washed away. Then the reaction product is mixed with a reagent reacted, the specific binding affinity for the bound serum component possesses and by a fluorescent substance, an enzyme or an isotope or the like. is marked.

Nach erfolgter Umsetzung wird mehrmals gewaschen und darauf die Fluoreszenz, die Enzymwirksamkeit bzw die Radioaktivität der an den festen Träger gebundenen Umsetzungsprodukte gemessen. Sie stellt ein Maß für die im Patientenserum enthaltenen gesuchten Antikörper, Antigene oder Allergene dar.After the reaction has taken place, it is washed several times and then the fluorescence, the enzyme activity or the radioactivity of those bound to the solid support Conversion products measured. It represents a measure of the im Patient serum antibodies, antigens or allergens contained.

Die bislang zur Durchführung solcher Testverfahren angewandten Maßnahmen sind nicht nur außerordentlich umständlich und zeitraubend, sondern können auch zu fehlerhaften Meßergebnissen führen, die durch die zeitliche Verschiebung verursacht werden, mit denen die Patientenseren und die negativen sowie positiven Kontrollproben mit dem an den festen Träger gebundenen Agens zur Umsetzung gebracht, die einzelnen Umsetzungen gestoppt und die gewaschenen Umsetzungsprodukte mit dem markierten Agens zur Reaktion gebracht werden.The measures used to date to carry out such test procedures are not only extremely cumbersome and time-consuming, they can too lead to erroneous measurement results caused by the time shift with which the patient sera and the negative and positive control samples brought to implementation with the agent bound to the solid support, the individual Reactions stopped and the reaction products washed with the labeled agent be made to react.

Bei der Durchführung eines solchen Verfahrens, z.B.When carrying out such a method, e.g.

zum Nachweis von Allergenen, werden in einer aus Reagenzgläsern aufgebauten Matrix oder in einer Reaktionsplatte mit einer entsprechenden Anzahl von Vertiefungen oder bechern einzelne Spalten der Matrix mit gleichen Testkörpern besetzt, die gebunden an den festen Träger ein Agens mit Bindungsaffinität für eine bestimmte Serumkomponente besitzen. Die Matrix kann bis zu 67 Spalten für den Nachweis von verschiedenen Antikörpern, Antigenen oder Allergenen oder von verschiedenen Substanzen innerhalb einer bestimmten Substanzklasse, z.B. von bestimmten Pollen innerhalb der Klasse Gräser-Pollen aufweisen. In die Zeilen 1 bis 8 jeder Spalte werden Kontrollseren und in die weiteren Zeilen 50 bis 100/ uLiter Patientenserum einpipettiert.for the detection of allergens, are made up of test tubes in a Matrix or in a reaction plate with a corresponding number of wells or cup individual columns of the matrix occupied with the same test bodies, which are bound on the solid support an agent with binding affinity for a particular serum component own. The matrix can contain up to 67 columns for the detection of different antibodies, Antigens or allergens or of various substances within a given Substance class, e.g. of certain pollen within the grass pollen class. In lines 1 to 8 of each column become control sera and into the another lines of 50 to 100 / uL patient serum are pipetted in.

Nach erfolgter Umsetzung zwischen den Testkörpern und dem Patientenserum wird aus jedem einzelnen Reagenzglas bzw.After conversion between the test bodies and the patient serum is made from each individual test tube or

jeder einzelnen Vertiefung der Reaktionsplatte die Flüssigkeit abgesaugt und das Reaktionsprodukt durch mehrmaliges Einpipettieren und Absaugen von Waschpuffer gewaschen.the liquid is aspirated from each individual well of the reaction plate and the reaction product by repeatedly pipetting in and aspirating washing buffer washed.

Dann wird in jedes einzelne Reagenzglas brw. in jede einzelne Vertiefung das mit fluoreszierender Substanz, Enzymen oder Isotopen markierte Agens einpipettiert, und nach erfolgter Umsetzung werden die Flüssigkeiten einzeln a-bgesaugt und die Reaktionsprodukte durch Einpipettieren und Absaugen von Waschpuffer einzeln gewaschen. Bei Fluoreszenzmarkierung wird dann die Fluoreszenz der einzelnen Testkörper, bei Enzymmarkierung die Enzymwirksamkeit der einzelnen Testkörper und bei radioaktiver Markierung nach Überführung der einzelnen Testkörper in 7iililröirchen die Impulsrate bestimmt. Alle diese Voryänge erfolgen manuell. Bei Verwendung einer Reaktionsplatte ermöglicht die Verwendung einer geeigneten Vorrichtung allenfalls das gleichzeitige Einpipettieren von Flüssigkeit in mehrere, z.B. 5 Vertiefungen und das gleichzeitige Absaugen von Flüssigkeit aus diesen Vertiefungen. Aber auch dann ist das Testverfahren noch immer außerordentlich aufwendig und zeitraubend. Relative Zeitfehler von Probe zu Probe sind unvermeidlich.Then brw in each individual test tube. in every single recess the agent labeled with fluorescent substance, enzymes or isotopes is pipetted in, and after the implementation has taken place, the liquids are individually a-bsucked and the Wash the reaction products individually by pipetting in and suctioning off washing buffer. In the case of fluorescent marking, the fluorescence of the individual test bodies is then used Enzyme marking the enzyme effectiveness of the individual test bodies and radioactive Mark the pulse rate after transferring the individual test bodies in 7ililröirchen certainly. All of these steps are done manually. When using a reaction plate If necessary, the use of a suitable device enables the simultaneous Pipetting of liquid into several, e.g. 5 wells and the simultaneous Aspirate liquid from these wells. But even then the test procedure is still extraordinary complex and time consuming. Relative timing errors sample to sample are inevitable.

Aufgabe der Erfindung ist ein vereinfachtes immunologisches Testverfahren, das das wiederholte manuelle Einpipettieren und Absaugen von Flüssigkeit in eine Vielzahl von Reagenzgläsern oder Bechern einer Reaktionsplatte überflüssig macht und den Start und Stopp aller Testansätze synchronisiert.The object of the invention is a simplified immunological test method, the repeated manual pipetting and aspiration of liquid into a A large number of test tubes or beakers makes a reaction plate superfluous and synchronized the start and stop of all test approaches.

Fs wurde gefunden, daß man diese Aufgabe dadurch lösen und <] 91sWichzeitig ( 1 c hz Fehler t i g F eh 1er cl iusschließen kann, die durch eine zeitliche Verschiebung der einzelnen Umsetzungen verursacht werden, wenn man als Matrix eine Tiefziehfolie oder eine erste bzw. Reaktionsplatte mit perforierten Vertiefungen oder Bechern verwendet, in die spaltenweise mit bestimmten Serumkomponenten reagierende Testkörper eingelegt werden, oder die diese bereits vorkonfektioniert enthalten, ferner eine zweite oder Probenplatte mit in gleichen Abständen angeordneten Vertiefungen entsprecwhender Abmessungen, in die zeilenweise das zu untersuchende Serum sowie Kontrollserum gefüllt wird. Setzt man die erste oder Reaktionsplatte mit den die Testplättchen enthaltenden perforierten Vertiefungen in die Probenplatte mit dem Serum ein, so dringt das Serum durch die Öffnungen in den Vertiefungen, und es tritt eine Umsetzung zwischen dem Serum bzw. den Kontrollen und den Testkörpern ein, und zwar in allen Vertiefungen zum gleichen Zeitpunkt. Um ein gleichmäßiges Benetzen der Testkörper sicherzustellen, können u.a. in den Vertiefungen der Reaktionsplatte haltende Vorrichtungen vorgesehen sein, die die Testkörper am perforierten Boden fixieren und somit ein Aufschwimmen verhindern. Außerdem ist eine Beschichtunp mit deierqniartigen Substanzen der Probenplattenvertiefungen bzw. der Reaktionsplattenvertiefungen oder beider Teile möglich, wodurch auch der Benetzungsvorgang synchronisierbar wird.It has been found that this problem can be solved in this way and at the same time (1 c hz error t i g F eh 1er cl iusclude that due to a time shift of the individual conversions are caused when the matrix is a deep-drawing film or a first or reaction plate with perforated wells or cups used, in the column-wise reacting with certain serum components test bodies be inserted, or which contain these already pre-assembled, also a second or sample plate with equally spaced wells accordingly Dimensions in which the serum to be examined and the control serum are filled in line by line will. Put the first or reaction plate with the one containing the test plates perforated wells in the sample plate with the serum, so the serum penetrates through the openings in the depressions and a reaction occurs between to the Serum or controls and test specimens in all wells at the same time. To ensure even wetting of the test bodies, For example, holding devices can be provided in the wells of the reaction plate be, which fix the test body on the perforated floor and thus a floating impede. In addition, the sample plate wells are coated with deierqni-like substances or the reaction plate wells or both parts possible, whereby the Wetting process can be synchronized.

In gleicher Weise wird die Umsetzung in den Vertiefungen der Reaktionsplatte zum gleichen Zeitpunkt unterbrochen, wenn man die in die Probenplatte eingesetzte Reaktionsplatte wieder herausnimmt und in eine mit Puffer oder Stoppreagenz gefüllte flache Schale und anschließend zum Waschen aufeinanderfolgend in zwei oder mehrere flache Schalen mit Waschflüssigkeit einsetzt. Die Schalen mit der Pufferlösung bzw. dem Stoppreagenz und der Waschflüssigkeit sind zweckmäßig mit einem Zu- und Ablauf versehen, damit ihr Inhalt nach jeder Passage rasch gewechselt werden kann.In the same way, the reaction in the wells of the reaction plate interrupted at the same time as the one inserted into the sample plate Remove the reaction plate again and place it in one filled with buffer or stop reagent shallow bowl and then for washing successively in two or more inserts shallow bowls with washing liquid. The dishes with the buffer solution or the stop reagent and the washing liquid are expedient with an inlet and outlet provided so that their content can be changed quickly after each passage.

Zum Nachweis der an den Testkörper gebundenen Serumkomponenten verwendet man vorteilhaft eine dritte oder Markierungsplatte mit in gleicher Weise angeordneten Vertiefungen entsprechender Abmessungen, die durch Kanäle miteinander verbunden sind. Die Vertiefungen enthalten eine ausreichende Menge Lösung von markiertem Reagenz für die gebundenen Serumkomponenten, so daß beim Einsetzen der Reaktionsplatte in die Markierungsplatte das Reagenz durch die Perforjerungen in die Vertiefungen der Rcaktionsplatte tritt und die gewiinschte Umsetzung mit der an die Testkörper gebundenen Komponente eintritt. Es ist auch möglich, die Reaktionsplatte einfach in eine flache Schale mit einer Lösung des markierten Reagenzes zu setzen, wofür dann aber mehr Reagenz benötigt wird, als in einer mit entsprechenden Aussparungen versehenen Platte. Auch diese Reaktion erfolgt bei allen Proben gleichzeitig. Anschließend wird wie oben durch Einsetzen in Pufferlösungen bzw. Stoppreagenz und Waschflüssigkeit gespült. Bei radioaktiver Markierung werden die einzelnen Testkörper zur Messung in Szintillationsgläser übergeführt.Used to detect the serum components bound to the test body one advantageous a third or marking plate with arranged in the same way Wells of corresponding dimensions, which are connected by channels tied together are. The wells contain a sufficient amount of labeled reagent solution for the bound serum components, so that when the reaction plate is inserted into the marker plate the reagent through the perforations into the wells of the Reaction plate occurs and the desired implementation with the bound to the test body Component occurs. It is also possible to simply place the reaction plate in a flat one Dish with a solution of the labeled reagent, but what more then Reagent is required than in a plate provided with appropriate recesses. This reaction also takes place simultaneously for all samples. Then how rinsed at the top by inserting it into buffer solutions or stop reagent and washing liquid. In the case of radioactive labeling, the individual test bodies are placed in scintillation glasses for measurement convicted.

Während bei den bekannten Nachweisverfahren für einen einzigen Standard und eine einzige Probe eine Reihe von Pipettier- und Absaugvorgängen erforderlich ist, muß bei Anwendung der erfindungsgemäßen Technik die erste oder Reaktionsplatte zur Auswertung einer Vielzahl von in übersichtlicher Weise angeordneten Proben lediglich in die Probenplatte mit dem Serum und den Kontrollen und nach zwischengeschaltetem Waschvorgang in die Schale oder Markierungsplatte mit dem markierten Reagenz eingesetzt werden, worauf nach nochmaligem Waschen durch Bestimmung der Fluoreszenz, der Enzymwirksamkeit oder der Impu] srate der est körper die einzelnen Proben ausyewertet werden. Mit Ausnahme der Eindosierung der Seren und Kontrollen in die Probenplatte entfällt das mühsame Einpipettieren in die einzelnen Reagenzgläser bzw. die Vertiefungen einer Platte und das Absaugen von Flüssigkeit aus den Vertiefungen, was um so mehr ins Gewicht fäit, als immunologische Tests hohe Probenzahlen erfordern, allein schon bis die nachzuweisende Serumkomponente, z.B.While with the known detection methods for a single standard and a single sample requires a series of pipetting and aspiration operations must be the first or reaction plate when using the technique of the invention for evaluating a large number of samples arranged in a clear manner into the sample plate with the serum and controls and after the intermediate Washing process inserted into the dish or marking plate with the marked reagent will, whereupon after washing again by determining the fluorescence, the enzyme activity or the impulse rate of the est bodies, the individual samples can be evaluated. With There is no exception to the metering of the sera and controls into the sample plate laborious pipetting into the individual test tubes or wells a plate and the suction of liquid from the wells, what more so important, as immunological tests require large numbers of samples, if only until the serum component to be detected, e.g.

ein Allergen eingegrenzt ist. Je Patient und nachzuweisender Serumkomponente werden üblicherweise 5 bis 30 und dazu etwa 10 Standardproben durchgeführt. In den Finzelstufen des vorliegenden Verfahrens eventuell gemachte Zeitfehler treten bei allen untersuchten Proben auf, eliminieren sich also beim Vergleich der Proben.an allergen is constrained. Per patient and serum component to be detected 5 to 30 and about 10 standard samples are usually carried out. In the Any time errors that may have been made occur in the finz stages of the present method on all examined samples, so they are eliminated when comparing the samples.

In der ersten oder Reaktionsplatte können die konischen oder zylindrischen Vertiefungen zur Erleichterung eines schnellen Eindringens der Seren und der Kontrollen und darauf der Puffer- und Waschlösungen sowie der Lösung des markierten Reagenzes nicht nur am Boden ondern auch irn unteren Teil ihrer Wandung perforiert sein. Die Perforjerungen im Boden und gegebenenfalls der Wandung müssen ausreichend groß sein, damit serumähnliche Flüssigkeiten leicht durch sie hindurchtreten und die Testkörper rasch befeuchten.In the first or reaction plate, the conical or cylindrical Wells to facilitate rapid penetration of sera and controls and then the buffer and washing solutions and the solution of the labeled reagent not only on the floor but also in the lower part of their walls. the Perforations in the floor and, if necessary, the wall must be sufficiently large so that serum-like liquids easily pass through them and the test bodies moisten quickly.

Die Vertiefungen bzw. Unterbecher für das Serum in der Probenplatte weisen zweckmäßig eine abgestufte Wandung auf, die sich nach oben erweitert, damit in keinem Fall Serum aus einem Unterbecher in einen angrenzenden Unterbecher überfließt und somit zu einem falschen Ergebnis führt, falls die Perforierungen in den Vertiefungen der Reaktionsplatte verstopft sind oder aus fabrikationstechnischen Gründen ganz fehlen. Selbstverständlich müssen die Testkörper vom Serum vollständig benetzt werden, d.h. es diirfen keine trockenen oder a bqedeckten Stellen vorhanden ein, da sie das Meßergebnis verfälschen würden.The wells or sub-beakers for the serum in the sample plate expediently have a stepped wall that widens upwards so that In no case does serum overflow from a sub-beaker into an adjacent sub-beaker and thus leads to a wrong result if the perforations are in the depressions the reaction plate are clogged or completely for manufacturing reasons miss. Of course, the test bodies must be completely wetted by the serum, i.e. no dry or covered areas are allowed, as they would falsify the measurement result.

In der beigefügten Abbildung zeigt die Fig. 1 die Reaktionsplatte mit den Vertiefungen oder Bechern 1, die in ihrem Boden und gegebenenfalls auch im unteren Teil ihrer Wandung perforiert sind und das feste Testmaterial in Form von Kügelchen, Plättchen, Rohren, Streifen oder dergleichen aufnehmen oder bereits enthalten. Zum Abtrennen einzelner Streifen können Sollbruchstellen vorgesehen rein, wie bei 2 ge/eigt ist. Sollbruchstellen können auch vorgesehen sein, um die Becher zu vereinzeln, wie bei 3 angegeben ist.In the attached figure, Fig. 1 shows the reaction plate with the wells or cups 1, which are in their bottom and possibly also are perforated in the lower part of their wall and the solid test material in shape from spheres, plates, tubes, strips or the like or already contain. To cut off individual strips, predetermined breaking points can be provided, as with 2 is ge / igt. Predetermined breaking points can also be provided around the cup to be separated as indicated at 3.

Die Fig. 2 zeigt die Probenplatte mit einer entsprechenden Anzahl von Vertiefungen 4 für die Aufnahme der Seren, die sich zweckmäßig stufenförmig nach oben erweitern, wie bei 5 gezeigt ist. Wenn anstelle einer flachen Schale für die Lösung des Markierungsreagenzes eine Markierungsplatte verwendet wird, kann diese die in Fig. 3 gezeigte Form haben, bei der die Vertiefungen 6 durch Kanäle 7 miteinander verbunden sind, oder die gleiche Form haben wie die Reaktionsplatte. Die zuletzt genannte Ausführungsform würde den sparsamsten Verbrauch von Markierungssubstanz gewährleisten. Fig. 4 zeigt in Finzeldarstellung und vergrößert einen Recher 1 der Reaktionsplatte, der in einen Becher 4 der Probenplatte eingesetzt ist und eine elastische Halterung 8 aufweist, die ein Aufschwimmen des Testkörpers verhindert. Sie ist in der vergrößerten Darstellung im oberen Teil des Bechers 1 angebracht, um die Perforierungen im Boden dieses Bechers besser zu veranschaulichen. Bei der praktischen Anwendung muß die Halterung 8 jedoch im unteren Drittel des Bechers 1 angeordnet sein, um ein Aufschwimmen des Testkörpers wirksam zu verhindern.Fig. 2 shows the sample plate with a corresponding number of wells 4 for receiving the sera, which are expediently stepped expand upwards, like shown at 5. If instead of a flat dish for the solution of the marking reagent a marking plate is used is, this can have the shape shown in Fig. 3, in which the recesses 6 through Channels 7 are interconnected, or have the same shape as the reaction plate. The last-mentioned embodiment would be the most economical consumption of marking substance guarantee. Fig. 4 shows in Finzeldarstellung and enlarged a search 1 of the Reaction plate, which is inserted into a beaker 4 of the sample plate and a Has elastic holder 8, which prevents floating of the test body. It is attached in the enlarged view in the upper part of the cup 1, to better illustrate the perforations in the bottom of this mug. In the In practice, however, the holder 8 must be in the lower third of the cup 1 to be arranged to effectively prevent the test body from floating.

Die Reaktionsplatte oder Becherfolie ist gewöhnlich für den einmaligen Gebrauch bestimmt, während die Proben-und die gegebenenfalls verwendete Markierungsplatte sowohl für einmaligen als auch für den Dauergebrauch hergestellt sein können. Die Spülschalen sind selbstverständlich Dauergeräte. Sofern die Reaktions-, die Probensowie die Markierungsplatte nur für den einmaligen Gebrauch bestimmt und daher aus verhältnismäßig dünnem Kunststoffmaterial hergestellt sind, ist es zweckmäßig, ie durch eine geeignete Lochplatte zu unterstützen.The reaction plate or beaker slide is usually for the one-time use Use determined while the sample and any marking plate used can be manufactured for both single and long-term use. the Sink bowls are of course permanent devices. If the reaction, the samples and the marking plate for single use only certainly and therefore made of relatively thin plastic material, it is expedient, ie to be supported by a suitable perforated plate.

Gemäß einer Ausführungsform der Erfindung ist es auch möglich, keine ganze Reaktionsplatte, sondern nur einen Streifen mit perforierten Vertiefungen oder Bechern zu verwenden, in welche die Testkörper eingelegt werden oder in denen sie bereits vorkonfektioniert enthalten sind. Im letzteren Fall müssen die Testkörper nicht gehandhabt werden und die Inhalte der Spalten können frei gewählt werden. Die Streifen können dabei so ausgebildet sein, daß sie spaltenweise in einem Matrix bildenden Handgriff oder einer Haltevorrichtung einsetzbar sind.According to one embodiment of the invention, it is also possible not to whole reaction plate, but only one strip with perforated wells or to use cups in which the test bodies are placed or in which they are already pre-assembled. In the latter case, the test body must cannot be handled and the contents of the columns can be freely selected. The strips can be designed so that they are column-wise in a matrix forming handle or a holding device can be used.

Die weiteren Vorgänge, d.h. die Umsetzung mit der zu ermittelnden Serumkomponente, die Spül- und Waschbehandlungen sowie die Umsetzung der gebundenen Serumkompomente mit markiertem Reagenz sind die gleichen wie sie oben für die gesamte Matrix oder Platte beschrieben wurden.The further processes, i.e. the implementation with the to be determined Serum component, the rinsing and washing treatments as well as the implementation of the bound Serum components with labeled reagent are the same as above for the whole Matrix or plate.

Beim Radio-Immun-Test (RIA) werden für die Isotopenbestimmung, z .B von 125J die Becher mit den Testkörpern einzeln in Szintillationsröhrchen gegeben, was über Sollbruchstellen in der Platte und im Streifen erfolgen kann.In the radio-immune test (RIA), isotope determination, e .g 125J put the beakers with the test bodies individually into scintillation tubes, which can be done via predetermined breaking points in the plate and in the strip.

Beim Enzym-Immun-Test (EIA) läßt sich eine weitere Verbesserung dadurch erreichen, daß die Vertiefungen bzw.The enzyme immune test (EIA) can be used to improve this further achieve that the depressions or

Becher im Streifen einen Außendurchmesser aufweisen, der geringer ist als die lichte Weite von K- oder E-Küvetten, die streifenweise im Handel angeboten werden. Fig die quantitative Bestimmung des gebundenen Enzyms in einem autotischen Meßvorgang wird jeweils ein r3echerstreifen in eine darunter befindliche Kette von mit Meßmedium beschickten K- oder E-Küvetten gesenkt, vibrierend darin bewegt und nach gewünschter Zeit wieder angehoben. Die gebildete Menge Enzymreaktionsprodukt ist der Menge an gebundenem Enzym sowie der Inkubationszeit und -temperatur proportional, vgl. hierzu "Enzyme-Immunoassay", A.H.W.M. Schuurs und B.K. van Weemen, Clinica Acta 81, 1-4 (1977).Cups in the strip have an outside diameter that is smaller is available as the inside width of K or E cuvettes, which are sold in strips will. Fig the quantitative determination of the bound enzyme in an autotic The measuring process is always a r3echerstreak in an underlying chain of K or E cuvettes charged with measuring medium are lowered, moved in them and vibrate raised again after the desired time. The amount of enzyme reaction product formed is proportional to the amount of bound enzyme and the incubation time and temperature, see "Enzyme-Immunoassay", A.H.W.M. Schuurs and B.K. van Weemen, Clinica Acta 81: 1-4 (1977).

Für die Fluoreszenzmarkierung werden zweckmäßig Testkörper verwendet, die sich in organischen Lösungsmitteln, Laugen oder Säuren lösen, worauf die Fluoreszenz der erhaltenen Lösungen gemessen wird. Durch geeignete Wahl des Lösungsmittels läßt sich die Fluoreszenzausbeute noch erhöhen.Test bodies are expediently used for fluorescent labeling, which dissolve in organic solvents, alkalis or acids, whereupon the fluorescence of the solutions obtained is measured. Can by suitable choice of solvent the fluorescence yield will increase.

Auch diese Bestimmung ist in Streifen von z.B. 10 Bechern automatisierbar.This determination can also be automated in strips of e.g. 10 beakers.

Da in der Praxis von dem den Auftrag gebenden Arzt nicht immer alle Tests angefordert werden können nicht benö@@gte Becher aus einer Reaktionsplatte herausgebrochen oder durch Füllkörper verstopft werden. Andererseits ermöglicht das erfindunsgemäße Verfahren eine so weitgehende Ersparnis manueller Arbeit, daß es bei immer noch geringerem Aufwand als die bekannten Verfahren ein breiteres Screening gemäß J. Ring in Deutsche medizinische Wochenschrift 103, 365-368 (1978), insbesondere Seite 368 erlaubt. Zum Beispiel kann bei Verwendung einer Reaktionsplatte, die vorkonfektioniert Testkörper mit Allergengemischen aufweist, in einem ersten Schritt eine Allergie auslösende Stoffklasse und in einem zweiten Schritt mit reinen Allergenen die Allergie auslösende Substanz innerhalb dieser Stoffk0assen (z.B. Hausstaub-Quellen, Gräser-Pollen, Tier-Epithelien, Schimmelarten, Nahrungsmittel o.ä.) festgestellt werden.In practice, not all of them are always provided by the commissioning doctor Tests that can be requested cannot be required Mug from one The reaction plate can be broken out or clogged with packing material. on the other hand the method according to the invention enables such a substantial saving of manual work Work that there is still less effort than the known method broader screening according to J. Ring in German medical Wochenschrift 103, 365-368 (1978), especially page 368, allowed. For example, when using a reaction plate, which has pre-assembled test bodies with allergen mixtures, in a first Step an allergy-causing class of substances and, in a second step, pure ones Allergens the substance that triggers the allergy within this class of substances (e.g. Sources of house dust, grass pollen, animal epithelia, mold species, foodstuffs or similar).

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Claims

Improved Solid Phase Immunological Method and Apparatus Improved immunological for carrying out this process Solid phase method for the detection of serum components using the known Binding affinities between antibodies and antigens, characterized in that that one has a reaction plate that has a multitude of perforated in its bottom Has wells in the solid test material that has bound an agent with specific Has binding affinity for the detectable serum component, is inserted or is inserted into a second plate with equally spaced Uses recesses of appropriate dimensions, in the patient serum and control serum is introduced, the binding reaction between the test material and the serum by removing the reaction plate from the sample plate and inserting it interrupted in a buffer solution or a stop reagent, by inserting the lieakl. iorls plate in one or more consecutive shallow dishes with washing solutions washes away unbound serum components, the serum component bound to the test material by placing the reaction plate in a shallow dish with a solution of labeled Reagent for the bound serum component reacts with this, excess removed labeled reagent by placing the reaction plate in rinsing solutions and then, depending on the labeling reagent used, the fluorescence, the enzyme action or the radioactivity of the binding products bound to the test material in known Way measures.

2. The method according to claim 1, characterized in that one for Perform an enzyme immune test using a strip instead of the whole reaction plate of the plate used, the beakers of this strip after the binding reaction has ended and labeling the bound serum component directly in a chain of cuvettes immersed with measuring medium and after the desired time the amount of product formed in the cuvettes.

3. Apparatus for performing the method according to claim 1 and 2, characterized by a reaction plate with a multitude of in its bottom perforated wells (1) for receiving solid test material and a sample plate with equally spaced recesses (4) of corresponding dimensions for receiving patient serum and control serum and for inserting the reaction plate into the sample plate.

4. Apparatus according to claim 3, characterized in that the reaction plate Has predetermined breaking points (2) for breaking out individual strips from the plate.

5. Apparatus according to claim 3 and 4, characterized in that the strips have predetermined breaking points (3) for separating the depressions.

6. Device according to claim 3 to 5, characterized by clckenn / t! Ir: rtnet, that the depressions (1) have l-1alterungen (8) that a floating of the solid Prevent test material.

7. Apparatus according to claim 3 to 6, characterized in that the wells in the reaction plate are also perforated in the lower part of their wall are.

8. Apparatus according to claim 3, characterized in that the the serum-receiving wells (4) in the sample plate step upwards expand.

9. Apparatus according to claim 3, characterized in that it also a marking plate with spaced equidistant from those in the reaction plate and optionally interconnected depressions (6) for receiving a solution of labeled reagent and for inserting the reaction plate into the labeling plate having.