DE3026180C2 - Rifamycin SV salts of basic amino acids, processes for their preparation and drugs for intra-articular injection in the fight against rheumatoid arthritis - Google Patents
Rifamycin SV salts of basic amino acids, processes for their preparation and drugs for intra-articular injection in the fight against rheumatoid arthritisInfo
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Description
Rifamycin-SV, das die nachstehend wiedergegebene Formel besitzt, wird seit über 15 Jahren in der Human- und Veterinärmedizin als Arzneistoff zur Bekämpfung von durch gram-positive und gram-negative pathogene Keime, Mykobakterien, wie Mycobakterium tuberkulosis und Mycobakterium leprae hervorgerufene Erkrankungen verwendet.Rifamycin-SV, which has the formula shown below, has been used in human and veterinary medicine as a drug for combating gram-positive and gram-negative pathogens Germs, mycobacteria such as Mycobacterium tuberculosis and Mycobacterium leprae caused diseases used.
Rifamycin-SVRifamycin SV
CH3 CH 3
HOHO
H3CH 3 C
H3C-CO-OH 3 C-CO-O
H3COH 3 CO
CH3 CH 3
Sämtliche Erkrankungen, zu deren Bekämpfung Rifamycin-SV eingesetzt wird, sind infektiös bedingt. Es handelt sich unter anderem um Infektionen der Haut und der Weichteilgewebe, Infektionen nach chirurgischen Eingriffen, Infektionen des Ohres, der Nase und des Halses, bronchopulmonale und pleurale Infektionen, Infektionen der Leber und der Gallenwege, tuberkulöse Infektionen, sowie Infektionen, wie Gerstenkörner, paradentale Abszesse, Urethritis und Lepra.All diseases that Rifamycin-SV is used to combat are infectious. It These include infections of the skin and soft tissue, infections after surgical ones Surgery, infections of the ear, nose and throat, bronchopulmonary and pleural infections, infections the liver and biliary tract, tubercular infections, and infections such as barley grains, paradental Abscesses, urethritis and leprosy.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, einen Arzneistoff zur Bekämpfung von rheumatoider Arthritis zu finden, der intraartikulär injiziert werden kann. Die Lösung dieser Aufgabe betrifft somit den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand.The invention is based on the object of providing a medicinal substance for combating rheumatoid arthritis find that can be injected intra-articularly. The solution to this problem relates to the one in the claims featured item.
Bei der primär chronischen Polyarthritis, der sogenannten rheumatoiden Arthritis der angelsächsischen Autoren, handelt es sich wahrscheinlich um eine Autoimmunerkrankung bei vererbter Disposition; vgl. Sven Moe:;chlin, Therapie-Fibel der inneren Medizin für Klinik und Praxis, 5. Aufl., 1976, S. 398, Georg Thieme Verlag, Stuttgart. Der Ausdruck »rheumatoide Arthritis« umfaßt auch analoge parthologische Veränderungen.In primary chronic polyarthritis, the so-called rheumatoid arthritis of the Anglo-Saxon Authors, it is probably an autoimmune disease with an inherited disposition; see Sven Moe:; chlin, therapy primer for internal medicine for clinics and practices, 5th edition, 1976, p. 398, Georg Thieme Verlag, Stuttgart. The term "rheumatoid arthritis" also includes analogous parthological changes.
Rifamycin-SV hat als Antibiotikum, bei der Bekämpfung von Infektionen eine geringere Bedeutung als Rifampicin. Die Ätiologie der rheumatoiden Arthritis ist noch nicht geklärt. Jedenfalls ist sie völlig verschieden von den durch pathogene Keime verursachten Krankheiten, wie Tuberkulose oder Knochentuberkulose, bei denen die Rifamycine, insbesondere Rifamypicin, bis jetzt eingesetzt werden.As an antibiotic, rifamycin-SV is less important than rifampicin in fighting infections. The etiology of rheumatoid arthritis is not yet clear. In any case, it is completely different from diseases caused by pathogenic germs, such as tuberculosis or bone tuberculosis, in which the rifamycins, especially rifamypicin, have been used up to now.
In A. M. Walter und L. Heilmeyer, Antibiotika-Fibel, 4. Auflage, 1975, Seite 560, Gelenkentzündungen, ist unter der Nr. 156 eine Arbeit von Popescu u. Mitarb, zitiert, welche die Behandlung von Knochentuberkulose und ähnlichen entzündlichen Syndromen betrifft, die typisch mit Antibiotika behandelt werden. Sie betrifft nicht die Behandlung von rheumatoider Arthritis.In A. M. Walter and L. Heilmeyer, Antibiotika-Fibel, 4th edition, 1975, page 560, joint inflammation is a work by Popescu et al., cited under No. 156, which deals with the treatment of bone tuberculosis and similar inflammatory syndromes typically treated with antibiotics. She concerns not treating rheumatoid arthritis.
Die rheumatoide Arthritis wird in der Regel mit Antiphlogistika bekämpft; vgl. Sven Moeschlin a.a.O., Seite 399 IT., und Harrison's Principles of Internal Medicine, 9. Aufl., S. 1872 bis 1878.Rheumatoid arthritis is usually fought with anti-inflammatory drugs; see Sven Moeschlin, op. cit., 399 IT., And Harrison's Principles of Internal Medicine, 9th ed., Pp. 1872-1878.
In der Arbeit von Popescu u. Mitarb, werden keine Informationen über die Rezeptur gegeben, in der Rilampicin verabfolgt wird. Es ist zu berücksichtigen, daß Injektionspräparate von Rifampicin nie in den Handel gebracht wurden.In the work of Popescu et al., No information is given about the recipe in which rilampicin is used is administered. It should be borne in mind that rifampicin injection preparations are never on the market were brought.
Aus K. Florey, Analytical Profiles of Drug Substances, Bd. 5, Tabelle VIII, S. 489 geht hervor, daß die Löslichkeit von Rifampicin bei physiologischem pH-Wert sehr niedrig ist: 2,5 bis 2,8 mg/ml; 9,9 mg/ml in Phosphatpuffer pH 7,4. Deshalb ist schwer verständlich, wie Popescu u. Mitarb, in der Lage waren, 900 mg RMP in ein Gelenk zu injizieren. Dies würde unter günstigsten Löslichkeitsbedingungen einem Volumen von etwa 100 ml (!) entsprechen. Ein derartiges Volumen zu injizieren, erscheint absurd, insbesondere zur Bekämpfung derFrom K. Florey, Analytical Profiles of Drug Substances, Vol. 5, Table VIII, p. 489 it can be seen that the solubility of rifampicin is very low at physiological pH: 2.5 to 2.8 mg / ml; 9.9 mg / ml in phosphate buffer pH 7.4. Therefore, it is difficult to understand how Popescu et al were able to put 900 mg RMP in one joint to inject. Under the most favorable solubility conditions, this would give a volume of about 100 ml (!) correspond. Injecting such a volume seems absurd, especially for combating
rheumatoiden Arthritis.rheumatoid arthritis.
Es wurde festgestellt, daß bei der Injektion von Rifamycin-Salzen der genannten basischen Aminosäuren in die Gelenke von Patienten, die an rheumatoider Arthritis leiden, ein rasches Verschwinden der pathologischen Symptomatik sowie eine vollständige Heilung der Patienten erreicht werden kann.It was found that when rifamycin salts of the above-mentioned basic amino acids are injected into the joints of patients suffering from rheumatoid arthritis, a rapid disappearance of the pathological Symptoms as well as a complete healing of the patient can be achieved.
Die Rifamycin-SV Salze der genannten basischen Aminosäuren gestatten die Verwendung wesentlich konzentrierterer Lösungen. Diese Salze ergeben selbst in den hohen Konzentrationen nur eine sehr geringe Diffusion in nicht-interessierende Gewebe und Körperflüssigkeiten; vgl. nachstehend Tabelle I. Diese Tatsache ist von erheblicher Bedeutung, denn eine antibiotische Wirkung ist bei der rheumatoiden Arthritis unerwünscht.The rifamycin-SV salts of the basic amino acids mentioned allow the use of much more concentrated ones Solutions. Even in the high concentrations, these salts result in very little diffusion in tissues and body fluids of no interest; see Table I below. This fact is of of considerable importance, because an antibiotic effect is undesirable in rheumatoid arthritis.
Die im Handel erhältlichen Lösungen von Rifamycin-SV enthalten außer dem Antibiotikum in Form des Natriumsalzes auch eine bestimmte Menge des Natriumsalzes der Ascorbinsäure, um eine Umwandlung von Rifamycin-SV in Rifamycin-S zu vermeiden. Ferner enthalten derartige Lösungen noch Polyvinylpyrrolidon zur Erhöhung der lokalen Verträglichkeit bei der Injektion.The commercially available solutions from Rifamycin-SV also contain the antibiotic in the form of Sodium salt also contains a certain amount of the sodium salt of ascorbic acid in order to achieve a conversion of Avoid Rifamycin-SV in Rifamycin-S. Such solutions also contain polyvinylpyrrolidone Increase in local tolerance during injection.
Sämtliche wäßrigen Lösungen des Rifamycin-SV Natriumsalzes, die bislang für alle bekannten therapeutischen Anwendungszwecke eingesetzt wurden, waren für eine Injektion in die Gelenke ungeeignet. Die bekannten Lösungen erforderten die Gegenwart von Polyvinylpyrrolidon, nicht nur um eine ausreichende Konzentration des Salzes in der Injektionslösung zu erhalten, weil das Salz in Wasser schwer löslich ist, sondern auch um die Bioverfügbarkeit des Antibiotikums zu erhöhen. Diese Eigenschaften, die für einen Arzneistoff gewöhnlich als unerwünscht angesehen werden, stellen einen ausgeprägten Nachteil für den erfindungsgemäßen Anwendungszweck dar. Es wurde nämlich festgestellt, daß bei höherer Verweilzeit des Rifamycin-SV im Gelenk die Krankheitssymptone rascher verschwinden.All aqueous solutions of the rifamycin-SV sodium salt, which are previously known for all therapeutic Applications were unsuitable for injection into the joints. The known Solutions required the presence of polyvinylpyrrolidone, not just a sufficient concentration of the salt in the injection solution because the salt is sparingly soluble in water, but also around increase the bioavailability of the antibiotic. These properties that are common for a medicinal substance are regarded as undesirable, represent a pronounced disadvantage for the purpose according to the invention It was found that the longer the rifamycin-SV remains in the joint Symptoms of illness disappear more quickly.
Wäßrige Lösungen von Rifamycin-SV Salzen mit den basischen Aminosäuren Arginin, Lysin, Histidin und Asparagin, sind besonders geeignet für die Bekämpfung von rheumatoider Arthritis. Diese Salze sind wesentlich besser löslich in Wasser als das Natriumsalz. Sie sind gekennzeichnet durch eine unbefriedigende Bioverfügbarkeit, und sie verbleiben deshalb eine ausreichend lange Zeit im erkrankten Gelenk, um die gewünschte therapeutische Wirkung zu erzielen.Aqueous solutions of rifamycin-SV salts with the basic amino acids arginine, lysine, histidine and Asparagine, are particularly useful for fighting rheumatoid arthritis. These salts are essential more soluble in water than the sodium salt. They are characterized by unsatisfactory bioavailability, and they therefore remain in the diseased joint for a long enough time to achieve the desired therapeutic To make an impact.
Rifamycin-SV Salze mit Histidin, Lysin und Arginin sind bevorzugt. Sie weisen in Form einer 20gewichtsprozentigen wäßrigen Lösung einen pH-Wert von 6,4 bis 6,7 auf, was sowohl im Hinblick auf die Haltbarkeit des Antibiotikums als auch für die Injektion in die Gelenke optimal ist. Derartige Lösungen mit einem pH-Wert von etwa 6,5 bis 7 sind wesentlich stabiler ais eine Lösung des Natriumsaizes des Rifamycin-SV. Nach dem Gefriertrocknen der Lösungen der Salze der basischen Aminosäuren mit Rifamycin-SV, das ohne spezielle Vorsichtsmaßnahmen durchgeführt werden kann, sind die getrockneten Salze lange haltbar und können nach Zugabe einer entsprechenden Menge destilliertem und pyrogenfreiem Wasser unmittelbar als Injektionspräparate eingesetzt werden.Rifamycin-SV salts with histidine, lysine and arginine are preferred. They exhibit in the form of a 20 percent by weight aqueous solution has a pH of 6.4 to 6.7, which is both in terms of the shelf life of the Antibiotic as well as for injection into the joints is optimal. Such solutions with a pH of about 6.5 to 7 are much more stable than a solution of the sodium salt of rifamycin-SV. After freeze drying of solutions of salts of basic amino acids with rifamycin-SV, which without special precautions can be carried out, the dried salts have a long shelf life and can be used after addition an appropriate amount of distilled and pyrogen-free water used directly as injection preparations will.
Das Argininsalz des Rifamycin-SV ist für die Bekämpfung der rheumatoiden Arthritis besonders geeignet, weil es optimale Eigenschaften hinsichtlich seiner Löslichkeit in Wasser aufweist. Eine lOprozentige wäßrige Lösung hat einen pH-Wert von 6,7. Seine lokale Verträglichkeit - bestimmt durch eine 60 mg Injektion einmal täglich während 3 aufeinanderfolgender Tage in dem Lumbaisack eines Kaninchens - ist definitiv besser als die der üblichen Lösung von Rifamycin-SV.The arginine salt of rifamycin-SV is particularly suitable for combating rheumatoid arthritis, because it has optimal properties in terms of its solubility in water. A 10 percent aqueous Solution has a pH of 6.7. Its local tolerance - determined by a 60 mg injection once daily for 3 consecutive days in a rabbit's lumbar sac - is definitely better than that the usual solution of Rifamycin-SV.
Rifamycin-SV Salze mit den genannten basischen Aminosäuren enthaltende Trockenpräparate werden erfindungsgemäß dadurch hergestellt, daß man das Rifamycin-SV und die basische Aminosäure in stöchiometrisehen Mengen in Wasser löst, die erhaltene Lösung filtriert und danach das Salz mit einem wassermischbaren, das Ril'amycin-Salz nichtlösenden Lösungsmittel, wie Isopropanol, ausfällt oder aus der Lösung das Wasser abtrennt, beispielsweise durch Gefriertrocknen.Dry preparations containing rifamycin-SV salts with said basic amino acids are according to the invention produced by seeing the rifamycin SV and the basic amino acid in stoichiometry Dissolve amounts in water, filter the resulting solution and then mix the salt with a water-miscible, the ril'amycin salt non-solvent, such as isopropanol, precipitates or the water out of solution separates, for example by freeze-drying.
Das Beispiel erläutert die Erfindung.The example illustrates the invention.
45 Beispiel 45 example
12,5 g (71,8 mMol) L-Arginin und 50 g (71,8 mMol) Rifamycin-SV werden in 200 ml Wasser für Injektionszweckc unter vermindertem Druck gelöst. Die erhaltene Lösung wird unter vermindertem Druck und steril filtriert, danach in eine Gefriertrocknungsvorrichtung verbracht und auf -35°C abgekühlt. Die erhaltene Lösung wird sodann 3 Stunden bei -35°C unter vermindertem Druck aufbewahrt. Die erste Trocknungsphase, d. h. das Erwärmen der Heizplatte auf O0C, wird begonnen, wenn der Druck einen Wert von 0,1 Torr erreicht hat. Diese Phase dauert 24 Stunden. Bei der zweiten Trocknungsphase wird die Heizplatte auf Raumtemperatur eingestellt. Diese Trocknungsphase dauert 3 Stunden. Das Produkt weist einen Feuchtigkeitsgehalt von etwa 1 % auf. Die Salze des L-Lysins und L-Histidins werden nach dem gleichen Schema aus 1,050 g L-Lysin bzw. 1,113 g L-Histidin hergestellt.12.5 g (71.8 mmol) of L-arginine and 50 g (71.8 mmol) of rifamycin-SV are dissolved in 200 ml of water for injection purposes under reduced pressure. The solution obtained is filtered under reduced pressure and sterile, then placed in a freeze-drying device and cooled to -35 ° C. The solution obtained is then stored for 3 hours at -35 ° C. under reduced pressure. The first drying phase, ie the heating of the heating plate to 0 ° C., is started when the pressure has reached a value of 0.1 Torr. This phase lasts 24 hours. During the second drying phase, the heating plate is set to room temperature. This drying phase lasts 3 hours. The product has a moisture content of about 1%. The salts of L-lysine and L-histidine are prepared according to the same scheme from 1.050 g of L-lysine and 1.113 g of L-histidine, respectively.
Bei der Dünnschichtchromatographie der Salze an Merck Kieselgelplatten 60 F254 mit den Abmessungen 10 x 10 cm und mit einem 3 : 1 Gemisch aus Chloroform und Methanol als Laufmittel werden folgende Rr Werte erhalten:Thin-layer chromatography of the salts on Merck silica gel plates 60 F 254 with the dimensions 10 x 10 cm and with a 3: 1 mixture of chloroform and methanol as the mobile phase gives the following R r values:
Rifamycin-SV Salz mit Arginin Rr = 0,54Rifamycin-SV salt with arginine R r = 0.54
Rifamycin-SV Salz mit Histidin Rr = 0,46Rifamycin-SV salt with histidine R r = 0.46
Ril'amycin-Salz mit Lysin Rr = 0,48Ril'amycin salt with lysine R r = 0.48
Die Klementaranalysen der Salze ergaben folgende Werte:The clarification analyzes of the salts showed the following values:
(a) L-Argininsalz C43H6IN5Oi4 (Mgew.. 871,96); bcr.: C 59,23 H 7,05 N 8,03(a) L-arginine salt C 43 H 6 IN 5 Oi 4 (wt. 871.96); bcr .: C 59.23 H 7.05 N 8.03
eel.: C 58.85 H 6.93 N 7.85eel .: C 58.85 H 6.93 N 7.85
(b) L-Histidinsalz
C43H56N4O14(MgW. 852,91);(b) L-histidine salt
C 43 H 56 N 4 O 14 (MgW. 852.91);
ber.: C 60,55 H 6,62 N 6,57
gef.: C 59,88 H 6,45 N 6,48calc .: C 60.55 H 6.62 N 6.57
Found: C 59.88 H 6.45 N 6.48
(c) L-Lysinsalz
C43H61N3O14(MgW. 843,94);(c) L-lysine salt
C 43 H 61 N 3 O 14 (MgW. 843.94);
ber.: C 61,19 H 7,28 N 4,98
gef.: C 60,80 H 7,41 N 4,71Calcd .: C 61.19 H 7.28 N 4.98
Found: C 60.80 H 7.41 N 4.71
Die Löslichkeit des Histidin- und Lysinsalzes von Rifamycin-SV ist in Wasser und Methanol hoch, in Äthanol und Aceton gut, während die Salze in Isopropanol, Diäthyläther, Benzol und Äthylacetat praktisch unlöslich sind. Das Argininsalz ist in Wasser, Methanol und Aceton sehr gut löslich, in Chloroform und Äthylacetat praktisch unlöslich.The solubility of the histidine and lysine salt of Rifamycin-SV is high in water and methanol, in ethanol and acetone well, while the salts are practically insoluble in isopropanol, diethyl ether, benzene and ethyl acetate are. The arginine salt is very soluble in water, methanol and acetone, practical in chloroform and ethyl acetate insoluble.
Die geringe Bioverfügbarkeit der Salze der Erfindung wurde bereits erwähnt. Diese Salze gestatten es nach Injektion in das Gelenk, hohe Konzentrationen an Rifamycin in der Synovialflüssigkeit während eine, Zeitraums von 24 bis 48 Stunden nach der Injektion aufrechtzuerhalten. Bei herkömmlicher Applikation erreicht Rifamycin-SV seine maximale Serumkonzentration nach 30 Minuten, und es ist noch 24 Stunden nach der Injektion in geringen Mengen nachweisbar. Die Rifamycin-SV-Spiegel in den biologischen Flüssigkeiten von behandelten Patienten wurden durch Hochdruck-Flüssigkeitschromatographie bestimmt. Diese Methode ist zuverlässiger und besser reproduzierbar als die Methode der Bestimmung durch UV-Absorption oder auf mikrobiologischem Weg.The low bioavailability of the salts of the invention has already been mentioned. These salts allow it Injection into the joint, high concentrations of rifamycin in the synovial fluid during a, period of time sustained for 24 to 48 hours after injection. Achieved with conventional application Rifamycin-SV reached its maximum serum concentration after 30 minutes and it is still 24 hours after the injection detectable in small amounts. The Rifamycin SV Levels in the Biological Fluids of Treated Patients were identified by high pressure liquid chromatography. This method is more reliable and more reproducible than the method of determination by UV absorption or on a microbiological basis Path.
Proben der Synovialflüssigkeit werden nach Ausfällung der Proteine mit Acetonitril unmittelbar in den Chromatograph injiziert. Serumproben wurden vorher mit Äthylacetat im sauren pH-Bereich extrahiert. In der Synovialflüssigkeit ist lediglich Rifamycin-SV vorhanden, während das Serum auch Rifamycin-S enthält.Samples of the synovial fluid are immediately put into the chromatograph after the proteins have been precipitated with acetonitrile injected. Serum samples were previously extracted with ethyl acetate in the acidic pH range. In the synovial fluid only rifamycin-SV is present, while the serum also contains rifamycin-S.
Für die Chromatographie wird ein Hewlett Packard-Chrimatograpii, Modell 104 B, mit einem Wellenlängendetektor (254 nm) und einer Rp 18 Säule (10 mc) mit einer Länge von 25 cm und einem Durchmesser von 4 cm verwendet.A Hewlett Packard Chrimatograpii, model 104 B, with a wavelength detector is used for the chromatography (254 nm) and a Rp 18 column (10 mc) with a length of 25 cm and a diameter of 4 cm used.
Es wird folgendes Eluierungsmittel verwendet:
30 The following eluent is used:
30th
(A) ein 80 : 20 Gemisch eines 0,01 m Phosphatpuffers vom pH-Wert 7 und Acetonitril,(A) an 80:20 mixture of a 0.01 M phosphate buffer with a pH of 7 and acetonitrile,
(B) Acetonitril.(B) acetonitrile.
Der Gradient verschiebt sich von 10% (B) auf 70% (B) innerhalb 15 Minuten. Die Strömung beträgt 1,6 ml/min. Die Temperatur des Ofens beträgt 35°C. Das Eluierungsmittel (A) ist 600C und das Eluierungsmittel (B) 4O0C heiß.The gradient shifts from 10% (B) to 70% (B) within 15 minutes. The flow is 1.6 ml / min. The temperature of the oven is 35 ° C. The eluent (A) is 60 0 C and the eluent (B) 4O 0 C hot.
Herstellung der EichkurveProduction of the calibration curve
Rifamycin-SV und seine oxidierte Form, d.h. Rifamycin-S, werden als Standard verwendet.Rifamycin-SV and its oxidized form, i.e. rifamycin-S, are used as a standard.
Zur Herstellung der Eichkurve in der Synovialflüssigkeit werden jeweils 500 mg der Verbindungen in 1 Liter eines 1 : 1 Gemisches aus Wasser und Methanol gelöst.To produce the calibration curve in the synovial fluid, 500 mg of each compound is added to 1 liter a 1: 1 mixture of water and methanol dissolved.
Die beiden Absorptionslinien werden dadurch hergestellt, daß 5 mcl, 10 mcl und 15 mcl der Lösungen in den Chromatograph injiziert werden. Im Falle von Sertim-Eichkurven werden diese Lösungen lOfach verdünnt. Sodann werden die vorstehend erwähnten Maßnahmen wiederholt.The two absorption lines are established by adding 5 mcl, 10 mcl and 15 mcl of the solutions to the Chromatograph injected. In the case of Sertim calibration curves, these solutions are diluted tenfold. The above-mentioned measures are then repeated.
Bestimmung von Rifamycin-SV in der SynovialflüssigkeitDetermination of rifamycin SV in synovial fluid
Die Bestimmung wird an der von Proteinen befreiten Synovialflüssigkeit durchgeführt. 200 mcl der Probe werden in ein Zentrifugenröhrchen gegeben und mit 2 ml Acetonitril versetzt. Die erhaltene Lösung wird gerührt. Sodann wird der Überstand dekantiert. 20 mcl des Überstandes werden sodann in den Chromatograph injiziert. Die Proben werden sofort analysiert, um eine Oxidation von Rifamycin-SV zu Rifamycin-S zu vermeiden.The determination is carried out on the synovial fluid freed from proteins. 200 mcl of the sample will be placed in a centrifuge tube and treated with 2 ml of acetonitrile. The resulting solution is stirred. The supernatant is then decanted. 20 ml of the supernatant are then injected into the chromatograph. The samples are analyzed immediately to avoid oxidation of rifamycin-SV to rifamycin-S.
Bestimmung von Rifamycin-SV und S im SerumDetermination of rifamycin-SV and S in serum
2 ml Serum werden mit dem gleichen Volumen einer Pufferlösung vom pH-Wert 1,71 versetzt. Diese Lösung wird durch Vermischen von 200 ml 1 η Essigsäure, 200 ml 1 η Natronlauge und 220 ml 1 η Salzsäure und anschließendes Auffüllen mit Wasser auf 1 Liter hergestellt. Die erhaltene Lösung wird zweimal mil jeweils 10 ml Äthylacetat extrahiert. Die organische Phase wird zur Trockne eingedampft, der Rückstand mit 500 mcl Acetonitril versetzt. Zur Analyse werden 20 mcl der Lösung in den Chromatograph injiziert.The same volume of a buffer solution with a pH of 1.71 is added to 2 ml of serum. This solution is prepared by mixing 200 ml 1 η acetic acid, 200 ml 1 η sodium hydroxide solution and 220 ml 1 η hydrochloric acid and then making up to 1 liter with water. The resulting solution is extracted twice mil in each case 10 ml of ethyl acetate. The organic phase is evaporated to dryness, the residue is treated with 500 ml of acetonitrile. For analysis, 20 mcl of the solution are injected into the chromatograph.
In Tabelle I sind die Rifamycin-SV und S-Spiegel im Serum und die Rifamycin-SV-Spiegel in der Synovialflüssigkeit von Patienten wiedergegeben, denen 500 mg des L-Argininsalzes von Rifamycin-SV ins Gelenk injiziert wurden. Die Werte sind in mcg/ml angegeben. Die Bestimmung erfolgte durch HPLC. Sowohl Rifamycin-SVals auch Rifamycin-S dienten als Standard.In Table I are the rifamycin SV and S levels in serum and the rifamycin SV levels in synovial fluid reported by patients who injected 500 mg of the L-arginine salt of rifamycin-SV into the joint became. The values are given in mcg / ml. The determination was made by HPLC. Both rifamycin SV and Rifamycin-S also served as a standard.
±0.21.54
± 0.2
±0.420.95
± 0.42
±0.160.93
± 0.16
±0.090.583
± 0.09
±0.380.527
± 0.38
±0.210.318
± 0.21
±0.120.221
± 0.12
±0.250.250
± 0.25
±5102890
± 510
±3801360
± 380
±250860
± 250
±170373
± 170
flüssigkeits-
SpiegelSynovial
liquid-
mirrors
±5504930
± 550
5'5 '
0.80.49
0.8
0.10.067
0.1
7.16 ±2.16.7 ± 0.2
7.16 ± 2.1
3.851.53
3.85
0.75:0.439
0.75:
0.1730.140
0.173
Argini n-SalzSodium salt
Argini n salt
1.7? ± 10.485 ± 0.18
1.7? ± 1
tO.3± 0.18
tO.3
In Tabelle II sind die Werte für das Rifamycin-SVNätriürnsaiz und das Rifamycin-SV Salz mit Arginin bei der Behandlung von rheumatoider Arthritis zusammengefaßt. Die Werte stellen die Mittelwerte von 8 Versuchen dar. Sie sind ausgedrückt in mg/ml. Es sind die Rifamycin-SV-Spiegel in der Synovialflüssigkeit von Patienten angegeben, denen das Natriumsalz bzw. das Argininsalz entsprechend 500 mg Rifamycin-SV in die Gelenke injiziert worden sind. Aus den Weiten ist die erhebliche Überlegenheit des Argininsalzes ersichtlich.In Table II the values for the rifamycin-SVNätriürnsaiz and the rifamycin-SV salt with arginine at the Treatment of rheumatoid arthritis summarized. The values represent the mean values of 8 experiments They are expressed in mg / ml. It is the rifamycin SV levels in the synovial fluid of patients indicated, which the sodium salt or the arginine salt injected into the joints corresponding to 500 mg rifamycin-SV have been. The considerable superiority of the arginine salt can be seen from the expanses.
Beim monoarthritischen Meerschweinchen ()>-Globulin-Arthritis) sind die Rifamycin-SV Argininsalzspiegel lOmal höher als im Falle des Rifamycin-SV Natriumsalzes bei der Injektion dieser Salze in die Gelenke. Dieser Befund steht etwa in Übereinstimmung mit den vorstehend mitgeteilten Werten beim Menschen.In monoarthritic guinea pigs ()> - globulin arthritis) the rifamycin SV is arginine salt levels Ten times higher than in the case of the rifamycin-SV sodium salt when these salts were injected into the joints. This Findings are roughly in line with the values reported above for humans.
Klinische ErgebnisseClinical results
Die Wirkungen von Injektionen von Rifamycin-SV-Lösungen in die Gelenke bei rheumatoider Synovitis wurden in klinischen Versuchen (Doppelblindversuch) bestimmt.The effects of injections of rifamycin SV solutions into the joints in rheumatoid synovitis have been reported determined in clinical trials (double-blind trial).
Bei dem klinischen Versuch 75 Patienten, die persistierende Ergüsse in einem oder beiden Knien aufwiesen, wurden 500 mg Rifamycin-SV in Form des L-Argininsalzes jeden 7. Tag in die Gelenke injiziert.In the clinical trial, 75 patients with persistent effusions in one or both knees 500 mg rifamycin-SV in the form of the L-arginine salt were injected into the joints every 7th day.
Bei 72 Patienten wurde ein vollständiges Verschwinden der Ergüsse und damit eine deutliche klinische Besserung beobachtet. 28 Patienten wurden während 1 bis 6 Monaten, 10 Patienten während 7 bis 12 Monaten, 16 Patienten während 1 bis 2 Jahren und 15 Patienten während 2 bis 5 Jahren beobachtet. Nur bei 3 Patienten trat 1 bis 6 Monate nach Beginn der Behandlung ein Rezidiv auf. 12 der 72 Patienten erforderten 1 bis 3 Injektionen, 33 Patienten erforderten 4 bis 6 Injektionen und 27 Patienten 7 bis 12 Injektionen, um ein Verschwinden der Ergüsse zu bewirken. Nur ein Patient sprach auf 12 Injektionen nicht an. Die Zahl der Injektionen stand in genauer Beziehung zur Aktivität der lokalen Synovitis (P < 0,05). Es zeigte sich, daß der allmähliche Rückgang der Ergüsse im Zusammenhang stand mit Veränderungen der Anomalien der Synovialflüssigkeit, d. h. einer signifikanten Abnahme der Leukozyten (P <0,001) und einer Zunahme der C3- und C^Komplementfraktionen (P < 0,005).In 72 patients a complete disappearance of the effusions and thus a clear clinical improvement was observed. 28 patients were followed for 1 to 6 months, 10 patients for 7 to 12 months, 16 patients for 1 to 2 years, and 15 patients for 2 to 5 years. Relapse occurred 1 to 6 months after starting treatment in only 3 patients. Twelve of the 72 patients required 1 to 3 injections, 33 patients required 4 to 6 injections and 27 patients 7 to 12 injections to make the effusions disappear. Only one patient did not respond to 12 injections. The number of injections was closely related to the activity of the local synovitis (P <0.05). The gradual decrease in effusions was found to be related to changes in synovial fluid abnormalities, that is, a significant decrease in leukocytes (P <0.001) and an increase in the C 3 and C 1 complement fractions (P <0.005).
Rifamycin-SV erzeugte bei der Mehrheii der Patienten anfängliche lokale Schmerzen und eine lokale verlängerte Schmerzreaktion bei 28 von 72 Patienten. Bei 2 der 75 Patienten mußte die Behandlung wegen der vorstehend erwähnten Nebenwirkungen abgebrochen werden.Rifamycin-SV produced initial local pain and local prolonged pain in the majority of patients Pain response in 28 of 72 patients. 2 of the 75 patients had treatment because of the above mentioned side effects are canceled.
Injektionen des Rifamycin-SV Salzes mit L-Arginin in andere Gelenke als das Kniegelenk, wie Handwurzelgelenk, die Gelenke der Mittelhand und der Finger und des oberen Sprunggelenks bei insgesamt etwa 300 Gelenken zeigt die starke antiphlogistische Wirkung des Arzneistoffs. Die Behandlung führt zu einer ausgeprägten Verminderung und sehr häufig zu einem vollständigen Aufhören der Steifigkeit am Morgen und einer erhöhten Greiffestigkeit zwischen 60 und 100% zusammen mit einer Gesamtverbesserung der Funktion der Gelenke. Während der Behandlung der rheumatoiden Arthritis und anderer Formen durch intraartikuläre Injektionen von Rifamycin-SV konnte zusätzlich die hemmende Wirkung von Rifamycin-SV bei Kulturen von synovialen Membranfragmenten gezeigt werden, die durch Biopsie mit einer Nadel entnommen wurden. Diese Biopsien erfolgten zur Diagnose bei Patienten, bei denen Verdacht auf rheumatoide Arthritis bestand.Injections of the rifamycin-SV salt with L-arginine into joints other than the knee joint, such as the wrist joint, the joints of the metacarpal and fingers and the upper ankle joint in a total of about 300 joints shows the potent anti-inflammatory effect of the drug. The treatment leads to a pronounced Reduction and, very often, a complete cessation of stiffness in the morning and an increase Grip strength between 60 and 100% together with an overall improvement in the function of the joints. During the treatment of rheumatoid arthritis and other forms by intra-articular injections of rifamycin-SV could additionally reduce the inhibitory effect of rifamycin-SV in cultures of synovial Membrane fragments are shown taken by biopsy with a needle. These biopsies were used for diagnosis in patients suspected of having rheumatoid arthritis.
Bei unmittelbar in das Gelenk injiziertem Rifamycin-SV konnte darüber hinaus nur eine sehr geringe Diffusion beobachtet werden. Dies erklärt seine hemmende Wirkung auf chemische Mediatoren der Entzündung und Lymphokinese.In addition, when rifamycin-SV was injected directly into the joint, only very little diffusion was possible to be observed. This explains its inhibitory effects on chemical mediators of inflammation and Lymphokinesis.
Zur Erzielung der vorstehend erläuterten Ergebnisse muß Rifamycin-SV in Form eines Salzes der genannten Aminosäure unmittelbar in den Gelenkspalt injiziert werden, um hohe Rifamycin-SV-Konzentrationen zu erreichen, die bei einer systemischen Anwendung des Arzneistoffes nicht erhalten werden können.To achieve the results explained above, rifamycin-SV must be in the form of a salt of the above Amino acid injected directly into the joint space to achieve high rifamycin SV concentrations which cannot be obtained with systemic use of the drug.
Rifamycin-SV verbleibt im behandelten Gelenk über eine lange Zeit, so daß eine Dosierung von 200 bis 1000 mg einmal wöchentlich angewendet werden kann, wie dies durch die vorstehend erwähnten kinetischen Untersuchungen an Synovialflüssigkeit gezeigt werden konnte.Rifamycin-SV remains in the treated joint for a long time, so a dosage of 200 to 1000 mg once a week can be applied as indicated by the kinetic mentioned above Studies on synovial fluid could be shown.
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