DE3002657A1

DE3002657A1 - Prepn. of purer calcium leucovorin - by treating anhydro-leucovorin with amine base in aq. solvent

Info

Publication number: DE3002657A1
Application number: DE19803002657
Authority: DE
Inventors: Roy Archibald Durham N.C. Swaringen; James Chester Wisowaty; David Arthur Chapel Hill N.C. Yeowell
Original assignee: Wellcome Foundation Ltd
Current assignee: Wellcome Foundation Ltd
Priority date: 1980-01-25
Filing date: 1980-01-25
Publication date: 1981-07-30

Abstract

Calcium leucovorin (I) is prepd. by mixing anhydroleucovorin (II), an amine base and an aq. solvent. Then the mixt. is heated at pH 5-7 and an equimolar amt. of water-soluble Ca salt (III) (based on (II)) and isolating the (I). Because an amine is used for ring opening of (II), the (I) has lower impurity levels than when inorganic base is used. The (I) prod. meets U.S. Pharmacopeia specifications after being washed with water, and chromatographic purification etc. is not necessary. (I) is useful in dimininishing the toxicity and effects of overdoses of folic acid antagonists and for treating megaloblastic anaemias due to sprue, nutritional deficiency, pregnancy, infancy etc. and esp. for neutralising the toxic effects of methotrexate.

Description

Verfahren zur Herstellung von Calcium-leucovorinProcess for the preparation of calcium leucovorin

Beschreibung Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Calcium-leucovorin aus Anhydro-leucovorin Calcium-leucovorin ist ein Mittelt das zur Verminderung der Toxizität und zur Bekämpfung des Effekts von versehentlich verabreichten Uberdosierungen von FolsAure-Antagonisten und für die Behandlung von megaloblastischen Anämien, die durch Sprue, Ernährungsmängel, Schwangerschaft oder Kindheit verursacht sein können, verwendet werden kann (Physicians Desk Reference, 31. Auflage (1977), 904-905). Calcium-leucovorin ist ein starkes Mittel zur Neutralisation der sofortigen toxischen Effekte von Methotrexate und wird daher als "Rettungsmittel" verwendet, um die peripheren toxischen Effekte von Methotrexate (oder anderen Folsäure-Antagonisten) zu bekämpfen, die sich durch die Anwendung dieser Wirkstoffe in der anti-neoplastischen Therapie ergeben können. Description The invention relates to a method of manufacture from calcium-leucovorin from anhydro-leucovorin Calcium-leucovorin is a means that to reduce toxicity and to combat the effect of accidental administered overdoses of FolsAure antagonists and for the treatment of megaloblastic anemia caused by sprue, nutritional deficiencies, or pregnancy Childhood can be used (Physicians Desk Reference, 31st edition (1977), 904-905). Calcium leucovorin is a powerful neutralizing agent of the immediate toxic effects of Methotrexate and is therefore used as a "rescue aid" used to reduce the peripheral toxic effects of methotrexate (or other folic acid antagonists) To combat that, through the application of these active ingredients in the anti-neoplastic Therapy can result.

Calcium-leucovorin ist ein extrem kostspieliges Material, was insbesondere darauf zurückzuführen ist, daß die bislang zur Verfügung stehenden Synthesemethoden ein Endprodukt ergeben, das aufwenidgen Reinigungsmaßnahmen unterworfen werden muß damit es die Anforderungen der Pharmacopoe der Vereinigten Staaten (USP = United Sta- tes Pharmacopeia) erfüllt. Praktisch unvermeidbar ist bei der herkömmlichen Reinigung eine Säulenchror'iatogrphie, die aus einer Vielzahl von Gründen eine sehr kostspielige Stufe bei der Herstellung von Calcium-leucovorin darstellt. Beispielsweise ist die Säulenchromatographie zeitraubend, labor- und ausrüstungs-intensiv und macht außergewöhnlich große Lösungsmittelvolumina zur die Elution erforderlich.Calcium leucovorin is an extremely costly material in particular is due to the fact that the synthesis methods available so far result in an end product that must be subjected to extensive cleaning measures so that it meets the requirements of the United States Pharmacopoeia (USP = United Sta- tes Pharmacopeia). Is practically unavoidable with the conventional purification a column chromatography consisting of a large number of Establish a very costly stage in the manufacture of calcium leucovorin represents. For example, column chromatography is time consuming, laboratory and equipment-intensive and makes exceptionally large volumes of solvent the Elution required.

Es wurde nun überraschenderweise gefunden, daß, wenn man eine Aminbase dazu verwendet, die Ringöffnung von Anhyo dro-leucovorin unter Bildung von Leucovoxin zu bewirken, das daraus gebildete Calcium-leucovorin wesentlich serin gere Mengen an Verunreinigungen enthält als bei der Ver wendung einer anorganischen Base. Uberraschenderweise ist in den meisten Fällen das unter Verwendung einer Aminbase in der Ringöffnungsstufe hergestellte Calciumleucovorin nach dem einfachen Filtern, Waschen und Trocknen des Produkts ausreichend rein, um USP-Anforderungen zu erfüllen, so daß es nicht erforderlich ist0 eine Säulenchromatographie durchzuführen.It has now been found, surprisingly, that if you use an amine base used to ring opening of Anhyo dro-leucovorin with the formation of leucovoxin to cause the calcium leucovorin formed therefrom to be significantly lower in amounts contains more impurities than when using an inorganic base. Surprisingly is in most cases that using an amine base in the ring opening stage produced calcium leucovorin after simply filtering, washing and drying of the product sufficiently pure to meet USP requirements that it is not it is necessary to perform column chromatography.

Gegenstand der Erfindung ist daher das Verfahren gemäß Hauptanspruch.The subject of the invention is therefore the method according to the main claim.

Die Unteransprüche 2 bis 5 betreffen besonders bevor zu te Ausführungsformen dieses erfindungsgemäßen Verfahrens.The subclaims 2 to 5 relate particularly before to te embodiments this method according to the invention.

Gegenstand der Erfindung ist weiterhin ein Verfahren zur Herstellung von Leucovorin, das ebenfalls auf dieserAnwendung einer Aminbase beruht, gemäß Anspruch 6 und die bevorzugten Ausführungsformen dieses Verfahrens gemäß den Ansprüchen 7 bis 8 und die bei diesen Ver fahrensweisen erhaltenen Produkte Erfindungsgemäß geeignete Aminbasen sind Amine, die nicht zu merklichen Mengen von verunreinigenden anorganischen Salzen in dem isolierten Calcium-leucovorin führen und die gleichzeitig zu einer wesentlich geringeren Verunreinigung mit organischen Materialien Anlaß geben.The invention also relates to a method for production of leucovorin, which is also based on this use of an amine base, according to claim 6 and the preferred embodiments of this method according to claims 7 to 8 and the products obtained in these procedures which are suitable according to the invention Amine bases are amines that do not contain significant amounts of contaminating inorganic Salts in the isolated calcium leucovorin lead and at the same time to a give rise to significantly lower contamination with organic materials.

Erfindungsgemäß bevorzugte Aminbasen sind Methylamin, Xthylamin, Triäthylamin, Morpholin, Tetraäthylarnmoniumhydroxid und N,N-Diäthyläthanolamin. Andere Basen, die ebenfalls geeignet, jedoch weniger bevorzugt sind, schließen Ammoniak, Anilin, p-C£':loranilin, Trimethylamin, m-Butylamin, Cyclohexylamin, Diäthanolamin, Triäthanolamin, Diäthylamin, Dimethylamin N ,N -Dimethylanilin, Piperidin, Piperazin, N-Methylpiperazin N,NO-Dimethylpiperazin, Pyridin, Imidazol, Benzylamin, Athylendiamin, o-, m- und p-Toluidin, 0-, m- und p-Anisidin ein. Es versteht sich jedoch, daß der Fachmann ohne weiteres dazu in der Lage ist, andere Aminbasen auszu- wählen, die für das erfindungsgemäße Verfahren ebenfalls geeignet sind.Amine bases preferred according to the invention are methylamine, ethylamine, triethylamine, Morpholine, tetraethylammonium hydroxide and N, N-diethylethanolamine. Other bases, which are also suitable, but less preferred, include ammonia, aniline, p-C £ ': loraniline, trimethylamine, m-butylamine, cyclohexylamine, diethanolamine, triethanolamine, Diethylamine, dimethylamine N, N -dimethylaniline, piperidine, piperazine, N-methylpiperazine N, NO-dimethylpiperazine, pyridine, imidazole, benzylamine, ethylenediamine, o-, m- and p-toluidine, 0-, m- and p-anisidines. It is understood, however, that those skilled in the art is easily able to use other amine bases. Select, which are also suitable for the process according to the invention.

Wenn man bei dem erfindungsgemäßen Verfahren Ammoniak verwendet, kann es erwünscht sein, in einem Druckgefäß zu arbeiten, um Aamoniakverluste durch Verdampfen zu vermeiden. In der Tat kann es erwünscht sein, auch bei Anwendung anderer flüchtiger organischer Amine in einem Druckgefäß zu arbeiten, wie es dem Fachmann geläufig ist Die erfindungsgemäße Reaktion besteht darin, 5,1o-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure (Anhydroleucovorin), mit einer Aminbase und Wasser zu vermischen und die Mischung während einer Zeitdauer von etwa 5 bis 7 Stunden auf eine Temperatur von etwa So0C bis zur Rückflußtemperatur zu erhitzen, um Leucovorin zu bilden. Der pH-Wert der Mischung wird auf einen Wert von 5 bis 7 eingestellt und bei diesem Wert gehalten, wozu man erforderlichenfalls geeignete Mengen der erfindungsgemäß geeigneten Aminbase zugibt oder abführt. Man kann das Anhydro-leucovorin in Form eines inneren Salzes (Zwitterion) oder in Form eines Salzes mit einem geeigneten Anion, vorzugsweise dem Chloridanion und normalerweise in Form eines Hydrats, einsetzen.If ammonia is used in the process according to the invention, can it may be desirable to work in a pressure vessel to avoid loss of ammonia by evaporation to avoid. In fact, it may be desirable to use other volatile applications as well organic amines to work in a pressure vessel, as is familiar to the person skilled in the art The reaction according to the invention consists in 5,1o-methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid (Anhydroleucovorin), with an amine base and water to mix and the mixture over a period of about 5 to 7 hours to a temperature of about So0C heat to reflux temperature to form leucovorin. The pH of the Mixture is set to a value from 5 to 7 and held at this value, including, if necessary, suitable amounts of the amine base suitable according to the invention admits or removes. One can get the anhydro-leucovorin in the form of an inner salt (Zwitterion) or in the form of a salt with a suitable anion, preferably the chloride anion and usually in the form of a hydrate.

Nachdem die Ringöffnung vollständig abgelaufen ist, wird die Reaktionsmischung im allgemeinen abgekühlt und filtriert. Dann gibt man eine geringfügig größere als äquimolare Menge (bezogen auf Anhydro-leucovorin) eines wasserlöslichen Calciumsalzes, beispielsweise Calciumchlorid, Calciumbromid, Calciumjodid, Calciumnitrat oder Calciumacetat, entweder in Form einer wäßrigen Lösung oder in Form eines Feststoffs zu dem Filtrat und fällt das Calcium-leucovorin durch Zugabe eines wasserlöslichen organischen Lösungsmittels, wie eines nledrigmolekularen Alkanols, wie Methanol, äthanol oder Isopropylalkohol, oder Aceton, aus.After the ring opening is complete, the reaction mixture will generally cooled and filtered. Then you give a little greater than equimolar amount (based on anhydro-leucovorin) of a water-soluble Calcium salt, for example calcium chloride, calcium bromide, calcium iodide, calcium nitrate or calcium acetate, either in the form of an aqueous solution or in the form of a solid to the filtrate and falls the calcium leucovorin by adding a water-soluble organic solvent, such as a low molecular weight alkanol, such as methanol, ethanol or isopropyl alcohol, or acetone.

Man trennt das Calcium-leucovorin-durch Filtration ab, wäscht es mit einem geeigneten Lösungsmittel, wie wäßrigem äthanol, Äthanol,-Acetonp Äther, Äthylacetat oder dergleichen und trocknet das Material Im allgemeinen ist eine Säulenchromatographie nicht erforderlich, da das in dieser Weise erhaltene Produkt die USP-Anforderungen erfüllt oder übertnfft Wenngleich die Anwesenheit geringer Mengen anorganischer Basen in der Reaktionsmischung toleriert werden kann, führt die Anwesenheit wesentlicher Mengen solcher anorganischer Basen offensichtlich zu nachteiligen Effekten.The calcium leucovorin is separated off by filtration and washed with it a suitable solvent such as aqueous ethanol, ethanol, -Acetonp ether, ethyl acetate or the like and dry the material. In general, column chromatography is used not required as the product obtained in this way meets the USP requirements meets or exceeds Although the presence of small amounts of inorganic Bases in the reaction mixture can be tolerated, the presence of essential leads Amounts of such inorganic bases appear to have detrimental effects.

Vorzugsweise ist die Reaktionsmischung im wesentlichen frei von anorganischen Basen.Preferably the reaction mixture is essentially free of inorganic ones Bases.

Das erfindungsgemäße Verfahren liefert Calcium-leRcovorinD das wesentlich leichter von Salzen und anderen Verunrei nigungen in dem Reaktionsprodukt abgetrennt werden kann als es bei dem mit Hilfe herkömmlicher Verfahrensweisen erhaltenen Material der Fall ist.The method of the invention provides calcium leRcovorinD the much easier of salts and other impurities in the reaction product can be separated than that obtained by conventional procedures Material is the case.

Die folgenden Beispiele dienen der weiteren Erläuterung der Erfindung.The following examples serve to further illustrate the invention.

Beispiel 1 Man gibt 10 g 5,10-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydro£olsEurew chlorid-hydrochlorid-dihydrat in einer Portion zu einer Mischung aus 6,5 ml 4o %-igem Methylamin und 90 ml Wasser, die bei 6o0C gehalten wird. Dann erhitzt man die Mischung zur Rückflußtemperatur und stellt den pH-Wert durch Abdestillieren überschüssiger Base auf 6oo ein.Example 1 10 g of 5,10-methenyl-5,6,7,8-tetrahydro-olsEurew are added chloride hydrochloride dihydrate in one portion to a mixture of 6.5 ml 4o% Methylamine and 90 ml of water, which is kept at 60 ° C. Then the mixture is heated to reflux temperature and adjusts the pH by distilling off excess Base on 600 a.

Während der nächsten 4 Stunden des Siedens am Rückfluß hält man den pH-Wert durch Zugabe von 40 %-igem Methylamin zwischen 5,9 und 6,1. Man kühlt die Mischung auf Raumtemperatur, schlämmt sie mit 1o g synthetischem Magnesiumsilikat auf und filtriert. Man lagert das Filtrat während 16 Stunden bei -50C, bringt es auf Raumtemperatur und gibt 2,25 g Calciumchlorid zu. Man fällt das Produkt durch Zugabe von 30 ml Äthanol aus und filtriert es ab. Man wäscht den Filterkuchen mit 50 %-igem wäßrigem äthanol und mit Äther und trocknet unter vermindertem Druck. Ausbeute = 5,9 g (55 % der Theorie).The reflux is maintained for the next 4 hours pH value between 5.9 and 6.1 by adding 40% methylamine. One cools them Mix it to room temperature, slurry it with 10 g of synthetic magnesium silicate up and filtered. The filtrate is stored at -50 ° C. for 16 hours and then brought to room temperature and adds 2.25 g of calcium chloride. You fail the product Add 30 ml of ethanol and filter it off. The filter cake is washed with it 50% aqueous ethanol and with ether and dried under reduced pressure. Yield = 5.9 g (55% of theory).

Die durch Hochdruckflüssigkeitschromatographie ermittelte Reinheit beträgt 93,1 %.The purity determined by high pressure liquid chromatography is 93.1%.

Dünnschichtchromatographische quantitative Bestimmung des Calcium-leucovorins gemäß USP (Vol. XIX) 96 und lol %.Thin-layer chromatographic quantitative determination of calcium leucovorin according to USP (Vol. XIX) 96 and lol%.

B e l s p i e l 2 Man gibt 20 g 5,1o-Methenyl-5g6R728-tetrahydrofolsäurechlorid-hydrochlorid-dihydrat in einer Portion zu einer bei 650C gehaltenen, gerührten Mischung aus 20 ml Triäthylamin und loo ml Wasser. Man erhitzt die Mischung zum Sieden am Rückfluß und stellt den pH-Wert durch Abdestillieren der überschüssigen Base auf 6,0 ein. Während einer 5-stündigen Rückflußdauer hält man den pH-Wert durch Zugabe von Triäthylamin zwischen 5,6 und 6,1.B e l s p i e l 2 20 g of 5,1o-methenyl-5g6R728-tetrahydrofolic acid chloride hydrochloride dihydrate are added in one portion to a stirred mixture of 20 ml of triethylamine kept at 650C and 100 ml of water. The mixture is heated to reflux and the pH by distilling off the excess base to 6.0. During one For a reflux period of 5 hours, the pH is kept between by adding triethylamine 5.6 and 6.1.

Man rührt die Mischung während 16 Stunden bei Raumbemperatur, schlämmt sie dann während 30 Minuten mit 15 g synthetischem Magnesiumsilikat auf und filtriert. Man versetzt das Filtrat mit 4 g Calciumchlorid' kühlt die Mischung in einem Eisbad und gibt 40 ml Äthanol zu. Man filtriert den Niederschlag ab, wäscht ihn mit 40 ml 50 %-igem wäßrigem Äthanol, 30 ml Äthanol, 30 ml Äther und trocknet unter vermindertem Druck.The mixture is stirred for 16 hours at room temperature, slurried it then for 30 minutes with 15 g of synthetic magnesium silicate and filtered. The filtrate is mixed with 4 g of calcium chloride and the mixture is cooled in an ice bath and add 40 ml of ethanol. The precipitate is filtered off and washed with 40% ml of 50% aqueous ethanol, 30 ml of ethanol, 30 ml of ether and dried under reduced Pressure.

Ausbeute: 12,1 g (57 % der Theorie) Hochdruckflüssigkeitschromatographische Analyse: 94,5 % Quantitative dUnnschichtchromatographische Besthmxng des C ciumleucovorins gemäß USP (Vol. XIX): 96,4 und 98,3 % Beispiel 3 Man suspendiert 4 g 5,1o-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäure-chlorid-hydrochlorid-hydrat in 35 ml Wasser und stellt den pH-Wert der Lösung durch Zugabe geeigneter Mengen Morpholins auf 6,5 ein. Dann erhitzt man die Mischung während 6 Stunden zum Sieden am Rückfluß, kühlt, schlämmt sie während 20 Minuten mit synthetischem Magnesiumsilikat an und filtriert. Man stellt das Filtrat mit Morpholin auf einen pH-Wert von 8,s ein und gibt 0,9 g Calciumchlorid in 4 ml Wasser zu. Man verdünnt die erhaltene Lösung mit Äthanol bis sie trüb wird und kühlt sie während 1 Stunde auf -50C. Man filtriert den Feststoff ab, wäscht ihn mit 15 ml Äthanol und 2o ml Äther und trocknet ihn unter vermindertem Druck.Yield: 12.1 g (57% of theory) High pressure liquid chromatographic Analysis: 94.5% quantitative thin-layer chromatographic determination of the C ciumleucovorin according to USP (Vol. XIX): 96.4 and 98.3% Example 3 4 g of 5,1o-methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid chloride hydrochloride hydrate are suspended in 35 ml of water and adjust the pH of the solution by adding suitable amounts Morpholine to 6.5. The mixture is then heated to the boil for 6 hours reflux, cool, slurried with synthetic magnesium silicate for 20 minutes on and filtered. The filtrate is adjusted to a pH of 8 with morpholine, see below and add 0.9 g of calcium chloride in 4 ml of water. The obtained is diluted Solution with ethanol until it becomes cloudy and cool it to -50C for 1 hour. Man the solid is filtered off, washed with 15 ml of ethanol and 2o ml of ether and dried him under reduced pressure.

Ausbeute: 2,43 g (55 % der Theorie) Hochdruckflüssigkeitschromatographische Analyse: 83 %.Yield: 2.43 g (55% of theory) by high pressure liquid chromatography Analysis: 83%.

Durch weiteres Verdünnen der ursprünglichen Mutterlauge mit Äthanol erhält man eine zweite Charge des festen Produkts.By further diluting the original mother liquor with ethanol a second batch of the solid product is obtained.

Ausbeute: o,87 g (20 % der Theorie) Hochdruckflüssigkeitschromatographische Analyse: 83 80 Bei spiel 4 Man gibt 1o g 5,10-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäurechlorid-hydrochlorid-dihydrat in einer Portion zu einer Mischung aus 20 ml 20 %-igem Tetraäthylammoniumnydroxid und loo ml Wasser, die bei So0C gehalten wird. Dann gibt man etwa 30 ml weiterer Base zu, um den pH-Wert auf 6 einzustellen. Man hält die Mischung während 4 Stunden am Rückfluß, wobei man den pH-Wert durch Zugabe von Tetraäthylammoniumhydroxid zwischen 5,5 und 6,o hält. Man stellt den pH-Wert auf 6,35 ein und setzt das Sieden am Rückfluß während weiterer 16 Stunden fort. Man kühlt die Mischung und rührt sie während 24 Stunden bei Raumtemperatur. Dann gibt man 15 g synthetisches Magnesiumsilikat zu, schlämmt während 30 Minuten auf und filtriert ab.Yield: 0.87 g (20% of theory) by high pressure liquid chromatography Analysis: 83 80 Example 4 10 g of 5,10-methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid chloride hydrochloride dihydrate are added in one portion to a mixture of 20 ml of 20% tetraethylammonium hydroxide and 100 ml of water, which is kept at So0C. Then add about 30 ml more Base to adjust the pH to 6. The mixture is kept for 4 hours at reflux, the pH by adding tetraethylammonium hydroxide between 5.5 and 6, o holds. The pH is adjusted to 6.35 and reflux is set continued for a further 16 hours. The mixture is cooled and stirred for 24 hours Hours at room temperature. Then add 15 g of synthetic magnesium silicate, slurried for 30 minutes and filtered off.

Man verdünnt die Lösung mit Wasser auf 150 ml, stellt den pH-Wert mit Tetraäthylammoniunhydroxid auf 8,7 ein und gibt 50 ml SD3A zu. Dann gibt man tropfenweise 2 g Calciumchlorid in der minimalen Menge Wasser zu der Lösung, filtriert den erhaltenen Niederschlag bei 5 0C ab, wäscht ihn mit 50 ml 50 %igem SD3A und schlärtint ihn während 1 Stunde in 200 ml einer 0,1 %-igen Lösung von Tetraäthylammoniumhydroxid in SD3A auf. Man filtriert den Feststoff ab, wäscht ihn mit Aceton und trocknet ihn unter vermindertem Druck.The solution is diluted to 150 ml with water and the pH is adjusted with tetraethylammonium hydroxide to 8.7 and add 50 ml of SD3A. Then you give dropwise 2 g of calcium chloride in the minimum amount of water to the solution, filtered the resulting precipitate at 5 0C, washes it with 50 ml of 50% SD3A and Schlärtint him for 1 hour in 200 ml of a 0.1% solution of tetraethylammonium hydroxide in SD3A. The solid is filtered off, washed with acetone and dried him under reduced pressure.

Ausbeute: 4 g (38 % der Theorie) Hochdruckflüssigkeitschromatographische Analyse: 94,4 %.Yield: 4 g (38% of theory) by high pressure liquid chromatography Analysis: 94.4%.

Beispiel 5 Man gibt 20 g 5,lo-Methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolsäurechlorid-hydrochlorid-dihydrat in einer Portion zu 100 ml bei 60°C gehaltenem Wasser und stellt dann den pH-Wert durch Zugabe von 14,9 g N,N-Diäthyläthanolamin auf 6 ein.Example 5 20 g of 5, lo-methenyl-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid chloride hydrochloride dihydrate are added in one portion of 100 ml of water kept at 60 ° C and then adjusts the pH by adding 14.9 g of N, N-diethylethanolamine to 6 a.

Man erhitzt die Mischung während 5 Stunden zum Sieden am Rückfluß, wobei man den pH-Wert durch Zugabe von ,N-Diäthyläthanolamin zwischen 5,7 und 6,2 hellt. Man kühlt die Mischung, gibt 15 g synthetisches Magnesiumsilikat zu, schlämmt auf, filtriert über ein Filterhilfsmittel (Celite) und verdünnt mit 40 ml SD3Å. Man hält das Filtrat während 16 Stunden bei -50C, gibt 4,o g wäßriges Calciumchlorid tropfenweise zu dem kalten Filtrat, f triert den Niederschlag ab, wäscht ihn mit 100 ml SD3A und mit 100 ml Xthylacetat und trocknet ihn unter vermindertem Druck.The mixture is heated to reflux for 5 hours, the pH being adjusted by adding N-diethylethanolamine between 5.7 and 6.2 brightens. The mixture is cooled, 15 g of synthetic magnesium silicate are added, and the mixture is slurried on, filtered through a filter aid (Celite) and diluted with 40 ml SD3Å. The filtrate is kept at -50 ° C. for 16 hours, and 4.0 g of aqueous calcium chloride are added drop by drop to the cold filtrate, filter off the precipitate and wash it with it 100 ml of SD3A and 100 ml of ethyl acetate and dry it under reduced pressure.

Ausbeute: 13 g (61 % der Theorie) Quantitative dünnschichtchromatographische Bestimmung des Calcium-leucovorins gemäß USP (Vol. XIX): 91 %.Yield: 13 g (61% of theory) quantitative thin-layer chromatography Determination of calcium leucovorin according to USP (Vol. XIX): 91%.

Claims

Claims 1,. Process for the preparation of calcium leucovorin made of anhydro-leucovorin, thereby g e k e n n n z e i c h -n e t, that one opens the ring of anhydro-leucovorin uses an amine base

2. The method according to claim 1, characterized it is not indicated that anhydro-leucovorin can be mixed with an aqueous solvent and a sufficient amount of amine base to adjust pH 5 to 7 mixed, the mixture if necessary with the addition of further amine base to Maintaining the pH in the range of 5 to 7, the mixture is heated with an amount substantially equimolar with respect to the anhydro-leucovorin water-soluble calcium salt added and calcium aleucovorin isolated from the mixture

3. The method according to claims 1 or 2, thereby g e k e n n z e i c h n e t that the amine base used is ammonia, methylamine, dimethylamine, triethylamine, morpholine, Trimethylamine, tetraethylammonium hydroxide, N, N-diethylethanolamine, aniline, p-chloroaniline, n-butylamine, cyclohexylamine, diethanolamine, triethanolamine, diethylamine, piperidine, N, N = dimethylaniline, piperazine, N-methylpiperazine, N, N -dimethylpiperazine, pyridine, Imidadazole, Benzylamine, ethylenediamine, o toluidine, m-toluidine, p-toluidine, o-anisidine, m-anisidine and / or p-anisidine are used.

4. The method according to claims 1 or 2, characterized g e k e n n z e i c h n e t that the amine base methylamine, triethylamine, morpholine, tetraethylammonium hydroxide, N, N-diethylethanolamine and / or ethylamine are used.

5. The method according to claims 1 or 2, thereby g e k e n n z e i c h n e t that the amine base methylamine, triethylamine and / or N, N-diethylethanolamine used.

6. A method for the production of Leucovorin, thereby g e k e n n z E i c h n e t that one anhydro-leucovorin, an aqueous solvent and a Amine base in an amount sufficient to adjust the pH to 5 to 7 mixed and the mixture, if necessary with the addition of further amine base for Maintaining the pH in the range of 5 to 7 heated.

7. The method according to claim 6, characterized in that g e k e n n -z e i c h n e t that the amine base according to claim 3 is used.

8. The method according to claim 6, characterized in that g e k e n n -z e i c h n e t e that the amine base according to claim 4 is used.

9. Keeping according to claim 6, characterized in that g e k e n n -z e i c h n e t e that the amine base according to claim 5 is used

10. Calcium leucovorin, available according to the method of claims 1 to 5.

11. Leukovorin, obtainable by the process of Claims 6 to 9.