DE2941471A1 - Test agent for detection of dental caries bacteria - esp. Streptococcus mutans contg. a saccharide, e.g. sucrose, and a pH indicator in water or aq. alcohol at pH 6.5.7.0 - Google Patents
Test agent for detection of dental caries bacteria - esp. Streptococcus mutans contg. a saccharide, e.g. sucrose, and a pH indicator in water or aq. alcohol at pH 6.5.7.0Info
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Abstract
Description
Beschreibun Description
Die Erfindung betrifft ein diagnostisches Testmittel zur Bestimmung einer Zahnkaries-Aktivität. Die Erfindung betrifft insbesondere ein Mittel, das eine spezifische Menge eines Saccharids und einen spezifischen pH-Indikator enthält und das dazu geeignet ist, innerhalb einer kurzen Zeit einfach und eindeutig eine Zahnkaries-Aktivität festzustellen, indem die Farbveränderung des Mittels beobachtet wird.The invention relates to a diagnostic test means for determination a dental caries activity. The invention particularly relates to an agent that contains a specific amount of a saccharide and a specific pH indicator and that is capable of simply and unambiguously creating a Determine dental caries activity by observing the color change of the agent will.
Der Test für die Zahnkaries-Aktivität wird durchgeführt, um vorherzusagen oder festzustellen, ob sich eine Zahnkaries entwickelt oder ob eine Zahnkaries in der Zukunft anzunehmen ist. Der Test ist daher vom Standpunkt der Mundhygiene sehr wichtig.The test for dental caries activity is done to predict or determine whether dental caries is developing or whether dental caries is in the future is to be expected. The test is therefore very good from the standpoint of oral hygiene important.
Der Test für die Zahnkaries-Aktivität wird gewöhnlich durchgeführt, indem man irgendeinen Faktor überwacht, der an der Zahnkaries teilnimmt. Es ist bekannt, daß Zahnkaries hauptsächlich durch Mikroorganismen induziert wird, die dazu imstande sind, im Mund Säuren zu bilden. Aufgrund dieses Wissens sind schon verschiedene Methoden zum Testen einer Zahnkaries-Aktivität vorgeschlagen worden, beispielsweise durch Messung der Anzahl der Lactobacilli im Speichel und durch Kultivierung von Bakterien im Speichel in einem Medium, das einen pH-Indikator enthält und durch Beobachtung des Farbveränderungsgrads des Mediums bei Erniedrigung des pH-Werts (diese Methode ist als Snyder-Test bekannt).The test for dental caries activity is usually done when by monitoring any factor involved in dental caries. It is known that dental caries is mainly induced by microorganisms that are able to form acids in the mouth. Because of this knowledge are already various methods for testing dental caries activity have been proposed, for example by measuring the number of lactobacilli in saliva and by cultivation of bacteria in saliva in a medium that contains a pH indicator and by Observation of the degree of color change of the medium when the pH value is lowered (this method is known as the Snyder test).
In neuerer Zeit wurde eine Verbesserung des Snyder-Tests entwickelt, bei der die Zahnkaries-Aktivität in der Weise bestimmt wird, daß man selektiv Säuren mißt, die durch säureerzeugende Bakterien, insbesondere Streptococcus mutans, von denen man annimmt, daß sie hauptsächlich am Auftreten von Zahnkaries beteiligt sind, gebildet werden. Es ist auch schon vorgeschlagen worden, die Zahnkaries-Aktivität unter Verwendung einer Pufferlösung, die Diazoresorcin (Resazurin) als Indikator enthält, zu bestimmen (vgl. US-PS 3 332 743).Recently an improvement of the Snyder test has been developed, in which the dental caries activity is determined in such a way that one selectively acids measures that by acid producing bacteria, particularly Streptococcus mutans believed to be primarily responsible for the occurrence of dental caries are involved. It has also been suggested that the dental caries activity using a buffer solution containing diazoresorcinol (resazurin) as an indicator contains, to be determined (see US Pat. No. 3,332,743).
Diese bekannten Methoden erfordern ungünstigerweise eine hochtrainierte Technik zum Testen der Bakterien, ein spezifisches Reagens, um die Spezifizität gegenüber dem beim Verfahren verwendeten Mittel zu erhalten, oder eine spezifische Vorrichtung oder eine ziemlich lange Meßzeit (gewöhnlich 24 bis 72 h). Es ist daher ein verbessertes Verfahren zum Testen der Zahnkaries-Aktivität anzustreben, das einfacher und innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne durch Personen ohne spezielles Training durchgeführt werden kann.These known methods disadvantageously require a highly trained Technique for testing the bacteria, a specific reagent to determine the specificity versus the agent used in the process, or a specific one Device or a fairly long measurement time (usually 24 to 72 hours). It is therefore to seek an improved method for testing dental caries activity, the easier and within a very short period of time by people without special Training can be done.
Ausgedehnte Untersuchungen von Tests für die Zahnkaries-Aktivität, die auf die säureerzeugende Kapazität von Bakterien im Mund aufgebaut sind, haben ergeben, daß die Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität leicht innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne und durch Personen ohne spezielle Vorbildung durchgeführt werden kann, wenn man ein spezielles Mittel verwendet, das ein Saccharid als Kohlenstoffquelle zur Förderung der säure erzeugenden Kapazität der Bakterien im Mund und einen pH-Indikator mit einem Farbveränderungspunkt im pH-Bereich von 5 bis 7 enthält. Bei dieser Methode wird eine Probe von Zahnbelag gesammelt und in das Mittel hineinokuliert. Hierauf wird mit dem bloßen Auge die Farbveränderung des pH-Indikators, der in dem Mittel enthalten ist, beobachtet.Extensive studies of tests for dental caries activity, which are built on the acid producing capacity of bacteria in the mouth show that the determination of dental caries activity easily within a very can be carried out in a short period of time and by people without any special training can, if one uses a special agent that uses a saccharide as a carbon source to promote the acid producing capacity of the bacteria in the mouth and a pH indicator with a color change point in the pH range from 5 to 7. With this method a sample of dental plaque is collected and inoculated into the agent. On that becomes visible to the naked eye the change in color of the pH indicator that is in the agent is included, observed.
Aufgabe der Erfindung ist es, ein neues Testmittel zur Verfügung zu stellen, das zur einfachen Bestimmung der Zahnkaries -Aktivität geeignet ist. Weiterhin soll durch die ißrfiridung ein verbessertes Verfahren zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne zur Verfügung gestellt werden.The object of the invention is to provide a new test means for easy determination of dental caries -Activity suitable is. Furthermore, an improved process for Determination of dental caries activity is available within a very short period of time be asked.
Das erfindungsgemäße Testmittel für die Zahnkaries-Aktivität enthält eine spezielle Menge eines Saccharids und eine spezielle Menge eines speziellen pH-Indikators und es hat einen pH-Wert von 6,5 bis 7,0.The test agent according to the invention for dental caries activity contains a specific amount of a saccharide and a specific amount of a specific one pH indicator and it has a pH of 6.5 to 7.0.
Da die durch Bakterien im Mund erzeugten Säuren schwache Säuren sind und ihre Menge daher sehr gering ist, sollten die pH-Indikatoren, die bei einem Test für Zahnkaries-Aktivität verwendet werden, ihre Farbe innerhalb eines pH-Bereichs von 3,0 bis 7,0 veränderte. Von den Erfindern wurden experimentell die folgenden Tatsachen festgestellt: (1) Die Veränderung der Farbe des pH-Indikators ist verschieden, wenn der pH-Wert experimentell durch Zugabe einer Säure (z.B. Milchsäure, die die Hauptsäure unter den Säuren ist, die durch Bakterien im Mund erzeugt werden) zu dem Mittel erniedrigt wird und wenn der pH-Wert mit Säuren, die exakt durch Bakterien im Mund erzeugt werden, erniedrigt wird.Because the acids produced by bacteria in the mouth are weak acids and their amount is therefore very small, the pH indicators that should be used should be one Test used for dental caries activity, their color within a pH range changed from 3.0 to 7.0. The inventors made the following experiments Facts Established: (1) The change in the color of the pH indicator is different, if the pH value is experimentally adjusted by adding an acid (e.g. lactic acid, which is the Main acid is among the acids produced by bacteria in the mouth) too the remedy is lowered and when the pH value with acids, exactly by bacteria generated in the mouth is lowered.
(2) Eine Kohlenstoffquelle ist wesentlich, um die säureerzeugende Kapazität der Bakterien im Mund zu fördern.(2) A carbon source is essential to the acid generating Capacity to promote bacteria in the mouth.
(3) Kein weiteres Nährmittel ist für den Test erforderlich. Es ist vielmehr so, daß - wenn ein anderes Nährmittel, z.B. Hefeextrakt, zu dem Mittel gegeben wird - die Bestimmung der Farbveränderung des pH-Indikators wegen der Verfärbung des anderen Nährmittels gehemmt wird.(3) No additional nutrient is required for the test. It is rather so that - if another nutrient, e.g. yeast extract, is added to the agent is given - the determination of the change in color of the pH indicator due to the discoloration of the other nutrient is inhibited.
(4) Einige spezifische pH-Indikatoren, z.B. Resazurin, Lakmoid bzw. Resorcinblau, Methylrot und Alizarin, die einen Farbveränderungspunkt bei einem pH-Bereich von 5 bis 7 haben, sind gegenüber den Säuren, die durch Bakterien im Mund gebildet werden, sehr empfindlich und sie können ihre Farbe innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne scharf verändern.(4) Some specific pH indicators, e.g. Resazurin, Lakmoid resp. Resorcinol blue, methyl red and alizarin, which have a color change point in one pH range of 5 to 7 are against the acids produced by bacteria in the Mouths are made very delicate and they can change their color within one change sharply in a very short period of time.
(5) Wenn der pH-Indikator mit einem Farbveränderungspunkt im pH-Bereich von 5 bis 7 zuerst in einer wäßrigen alkalischen Lösung aufgelöst wird und die wäßrige Lösung auf einen pH-Wert von 6,7 bis 7,0 mit einer schwachen Säure eingestellt wird und wenn anschließend Bakterien im Mund in diese inokuliert werden, dann wird die Farbveränderung des Indikators schärfer.(5) When the pH indicator with a color change point in the pH range from 5 to 7 is first dissolved in an aqueous alkaline solution and the aqueous Solution is adjusted to pH 6.7 to 7.0 with a weak acid and if bacteria in the mouth are subsequently inoculated into it, then the Color change of the indicator sharper.
(6) Das Testmittel kann stabil gehalten werden, indem man den pH-Wert mit spezifischen Säuren, wie Essigsäure, Milchsäure und Weinsäure, einstellt.(6) The test agent can be kept stable by adjusting the pH with specific acids such as acetic acid, lactic acid and tartaric acid.
(7) Es wird bevorzugt, ein antiseptisches Mittel in das Mittel einzuarbeiten.(7) It is preferred to incorporate an antiseptic agent into the agent.
Die obigen Tatsachen wurden durch die folgenden Versuche ermittelt: 1. Versuch 1: Zu wäßrigen Lösungen von verschiedenen Indikatoren wurde Ililchsäure gegeben, um den pH-Wert zu erniedrigen. Die Farbveränderung des Indikators wurde beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle I zusammengestellt. Tabelle I Indikatoren pH-Wert Art Konzen- 7,0 6,5 6,0 5,5 5,0 4,5 4,0 3,5 3,0 tration (Gew.-%) Resazurin 0,02 blau violett violett rötlich- rötlich- karmin- karmin- rot rot violett violett rot rot Resazurin 0,002 violett rötlich- rötlich- karmin- karmin- dunkel- rot rot rot violett violett rot rot rot Methylrot 0,02 gelb gelb hellgelb hellgelb orange rot rot rot rot Alizarin 0,002 rot rot rot orange hellgelb gelb gelb gelb gelb Lakmoid 0,02 blau blau violett rötlich- karmin- karmin- rot rötlich- schwächviolett rot rot orange rötlichorange Lakmoid 0,002 blau violett rötlich- karmin- karmin- schwach rosa schwach schwach violett rot rot rot rosa rosa BCG*1 0,002 blau blau bläu- bläu- grün grün gelb- gelb- gelb lich- lich- grün grün grün grün BPB*2 0,02 blau blau bläu blau blau violett violett rötlich- rötbraun lich braun Fußnoten: *1) Bromkresolgrün *2) Bromphenolblau 2. Versuch 2: Verschiedene Indikatoren wurden jeweils in einer wäßrigen 0,1N-Natriumhydroxidlösung aufgelöst und zu der Mischung wurden 10 Gew.-5' Saccharose gegeben. Die Lösung wurde mit Milchsäure auf einen festen pH-Wert eingestellt. Zu der so erhaltenen wäßrigen 0,002 gew.-%igen Lösung des Indikators (2 ml) wurde eine Suspension von Streptococcus mutans (OMZ 176) (Anzahl der Bakterienzellen: 2 x 109 bis 4 x 109, 0,4 ml) gegeben und das Gemisch wurde bei 57°C inkubiert.The above facts were found through the following experiments: 1. Experiment 1: Illactic acid was added to aqueous solutions of various indicators given to lower the pH. The indicator was changing color observed. The results are shown in Table I. Tabel I indicators pH value type concentration 7.0 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 tration (% by weight) Resazurin 0.02 blue violet violet reddish reddish carmine carmine red red violet violet red red Resazurin 0.002 violet reddish- reddish- carmine- carmine- dark- red red red violet violet red red red methyl red 0.02 yellow yellow light yellow light yellow orange red red red red alizarin 0.002 red red red orange light yellow yellow yellow yellow yellow lakmoid 0.02 blue blue violet reddish carmine carmine red reddish weak violet red red orange reddish orange lakmoid 0.002 blue violet reddish carmine carmine weak pink weak weak purple red red red pink pink BCG * 1 0.002 blue blue blue-blue-green green yellow- yellow- yellowish- green green green green BPB * 2 0.02 blue blue blue blue blue violet violet reddish-reddish brown Lich brown Footnotes: * 1) Bromocresol Green * 2) Bromophenol Blue 2. Experiment 2: Various Indicators were each dissolved in an aqueous 0.1N sodium hydroxide solution and to the mixture was added 10% by weight of sucrose. The solution was made with lactic acid adjusted to a fixed pH. To the aqueous 0.002% strength by weight obtained in this way Solution of the indicator (2 ml) was a suspension of Streptococcus mutans (OMZ 176) (number of bacterial cells: 2 x 109 to 4 x 109, 0.4 ml) and the mixture was incubated at 57 ° C.
Die Veränderung des pH-Werts und die Veränderung der Farbe wurden im Verlauf der Zeit beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle II zusammengestellt.The change in pH and the change in color were made observed over time. The results are shown in Table II.
Tabelle II Indikator Inkubationszeit bei 37°C vor der Inokulierung 0 min 15 min 30 min 1 h 24 g der Bakterien pH Farbe pH Farbe pH Farbe pH Farbe pH Farbe pH Farbe Resazurin 6,8 blau 6,7 blau 5,9 rötlich- 5,2 rosa 4,8 hellrosa 4,5 farblos violett Lakmoid 6,8 blau 6,8 blau 6,3 bläu- 5,2 schwach 5,0 schwach 4,7 farblos lich- rot rosa violett Methylrot 6,8 gelb 6,6 gelb 5,6 hell- 4,7 rosa 4,5 schwach 4,3 schwach gelb rosa rosa Alizarin 6,8 rot 6,7 rot 5,9 schwach 5,5 gelb 5,0 gelb 4,8 schwach rosa gelb BCG 6,8 blau 6,8 blau 6,3 blau 6,0 blau 5,7 blau 5,5 bläulichgrün BPB 6,8 blau 6,8 blau 6,3 blau 6,1 blau 5,8 blau 5,1 bläulichviolett Resazurin* 6,8 blau 6,7 blau 6,4 violett 6,0 rötlich- 5,4 rot 4,8 schwach violett rosa Fußnote: *) kein Zusatz von Saccharose Aus den Ergebnissen der Tabelle I und der Tabelle II wird ersichtlich, daß - wenn der pH-Wert der Testlösung mit Ililchsäure erniedrigt wurde - alle Indikatoren eine scharfe Farbveränderung zeigten. Es wird weiterhin ersichtlich, daß, als Streptococcus mutans inokuliert wurde, die speziellen pH-Indikatoren mit einem Farbveränderungspunkt im pH-Bereich von 5 bis 7, z.B. Resazurin, Lakmoid, Methylrot und Alizarin, insbesondere Resazurin und Lakmoid, scharf auf die Säuren ansprechen konnten, die durch die Bakterien erzeugt wurden, und ihre Farbe klar innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne verändern konnten. Wenn keine Saccharose zugesetzt wurde, dann war die Farbveränderung verzögert. Es ist daher wesentlich, ein Saccharid zuzusetzen. Wenn der Indikator zuerst aufgelöst wurde und danach der pH-Wert mit einer Säure eingestellt wurde, dann erschien die Farbveränderung schärfer.Table II Indicator incubation time at 37 ° C prior to inoculation 0 min 15 min 30 min 1 h 24 g of the bacteria pH color pH color pH color pH color pH Color pH Color Resazurin 6.8 blue 6.7 blue 5.9 reddish-5.2 pink 4.8 light pink 4.5 colorless violet Lakmoid 6.8 blue 6.8 blue 6.3 bluish 5.2 weak 5.0 weak 4.7 colorless - red pink violet methyl red 6.8 yellow 6.6 yellow 5.6 light - 4.7 pink 4.5 weak 4.3 weak yellow pink pink alizarin 6.8 red 6.7 red 5.9 weak 5.5 yellow 5.0 yellow 4.8 weak pink yellow BCG 6.8 blue 6.8 blue 6.3 blue 6.0 blue 5.7 blue 5.5 bluish green BPB 6.8 blue 6.8 blue 6.3 blue 6.1 blue 5.8 blue 5.1 bluish purple Resazurin * 6.8 blue 6.7 blue 6.4 purple 6.0 reddish - 5.4 red 4.8 weak purple pink footnote: *) no addition of sucrose From the results Table I and Table II it can be seen that - if the pH of the test solution was lowered with ilactic acid - all indicators a sharp change in color showed. It can also be seen that inoculated as Streptococcus mutans the special pH indicators with a color change point in the pH range from 5 to 7, e.g. resazurin, lakmoid, methyl red and alizarin, especially resazurin and Lakmoid, could respond sharply to the acids generated by the bacteria and could change their color clearly in a very short period of time. If no sucrose was added, the color change was delayed. It it is therefore essential to add a saccharide. When the indicator first resolved and then the pH was adjusted with an acid, then the Color change sharper.
Der Effekt der Konzentration auf den pH-Indikator wurde gleichfalls getestet. Als Ergebnis wurde festgestellt, daß - wenn der Indikator in einer zu kleinen Menge verwendet wurde - die Farbveränderung undeutlich war und daß andererseits - wenn die Menge des Indikators zu groß war - eine zu große Zeitspanne für die Farbveränderung notwendig war, und daß der Farbton dunkel wurde und daher die Farbveränderung undeutlich war. Der pH-Indikator wird daher vorzugsweise in einer Konzentration von 0,0001 bis 0,05 Gew.-¢ú, mehr bevorzugt von 0,001 bis 0,01 Gew.-5', verwendet.The effect of concentration on the pH indicator was also observed tested. As a result, it was found that - when the indicator is in a too small amount was used - the color change was indistinct and that on the other hand - if the amount of the indicator was too large - too long a time for the color change was necessary and that the hue became dark and hence the color change indistinct was. The pH indicator is therefore preferably at a concentration of 0.0001 to 0.05% by weight, more preferably from 0.001 to 0.01% by weight, used.
3. Versuch 3: Die gleiche Suspension (0,2 ml) von Streptococcus mutans wie im obigen Versuch 2 wurde in eine 0,002%ige wäßrige Lösung von Resazurin (1 ml), die 10 Gew.-fJ der verschiedenen Saccharide gemäß Tabelle III enthielt, inokuliert. Das Gemisch wurde bei 370 c inkubiert und die Farbveränderung im Verlauf der Zeit wurde gemessen. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle III zusammengestellt.3. Experiment 3: The same suspension (0.2 ml) of Streptococcus mutans as in Experiment 2 above, was in a 0.002% aqueous solution from Resazurin (1 ml), the 10% by weight of the various saccharides according to Table III contained, inoculated. The mixture was incubated at 370 c and the color change measured over time. The results obtained are shown in Table III compiled.
Tabelle III Saccharide Inkubationszeit bei 370C O min 15 min 30 min Saccharose blau rot schwach rosa (transparent) Glucose blau rot dunkelrosa Fructose blau rötlich- dunkelrosa violett Stärke blau rötlich- dunkelrosa violett Aus den obigen Ergebnissen wird ersichtlich, daß bei Verwendung von Saccharose die Farbe des Indikators sich am schnellsten veränderte und daß die Geschwindigkeit der Farbveränderung sich in der Reihenfolge Glucose, Fructose und Stärke verminderte. Bei Verwendung von Saccharose war die Farbveränderung am klarsten. Table III Saccharides Incubation Time at 370C 0 min 15 min 30 min Sucrose blue red pale pink (transparent) glucose blue red dark pink fructose blue reddish-dark pink violet Strength blue reddish-dark pink violet From the From the above results, it can be seen that when sucrose is used, the color of the indicator changed the fastest and that the rate of color change decreased in the order of glucose, fructose and starch. Using the color change was clearest from sucrose.
Es wurde weiterhin der Effekt der Konzentration der Saccharide getestet. Als Ergebnis wurde festgestellt, daß - wenn die Saccharide in einer zu kleinen Menge verwendet wurden -die Menge der Säuren, die durch die Bakterien erzeugt worden war, zu gering war und daß sich daher die Farbe nicht innerhalb einer kurzen Zeitspanne veränderte. Wenn andererseits die Menge der Saccharide zu groß war, dann war die Geschwindigkeit der Farbveränderung zu niedrig. Demgemäß werden die Saccharide vorzugsweise in einer Menge von 2,5 bis 40 Gew.-5', mehr bevorzugt 5 bis 20 Gew. -5', verwendet.The effect of the concentration of the saccharides was also tested. As a result, it was found that if the saccharides are in too small an amount - the amount of acids produced by the bacteria was too little and therefore the color did not change in a short period of time changed. On the other hand, if the amount of saccharides was too great, then that was Color change speed too slow. Accordingly will the saccharides preferably in an amount of 2.5 to 40% by weight, more preferably 5 to 20 wt. -5 'is used.
4. Versuch 4: Eine wäßrige Lösung, enthaltend 10 Gew.-% Saccharose und 0,003 Gew.-% Resazurin (ohne Gehalt eines antiseptischen Mittels), wurde mit verschiedenen organischen Säuren auf einen pH-Wert von 6,8 bis 7,0 eingestellt. Jedes Mittel (1 ml) wurde in ein kleines Reagenzglas gegeben und das Reagenzglas wurde mit einem Siliconstöpsel verschlossen und bei 370C oder 550C gehalten. Mit dem bloßen Auge wurde die Farbveränderung des Mittels im Verlauf der Zeit beobachtet. Die Ergebnisse sind in den Tabellen IV und V zusammengestellt. Die Bewertungskriterien sind wie folgt: -: keine Farbveränderung +: geringe Veränderung der Farbe +: etwas Veränderung der Farbe ++: klare Veränderung der Farbe signifikante Veränderung der Farbe Tabelle IV Ver- organische Säuren Haltezeit bei 370C (Tage) such 3 10 20 30 60 90 150 Nr.4. Experiment 4: An aqueous solution containing 10% by weight of sucrose and 0.003% by weight of resazurin (not containing an antiseptic agent) was used with various organic acids adjusted to a pH value of 6.8 to 7.0. Each agent (1 ml) was placed in a small test tube and the test tube was sealed with a silicone stopper and held at 370C or 550C. With the color change of the agent with the lapse of time was observed to the naked eye. The results are summarized in Tables IV and V. The evaluation criteria are as follows: -: no color change +: little change in color +: slightly Change in color ++: clear change in color, significant change in Color Table IV Organic acids Hold time at 370C (days) such as 3 10 20 30 60 90 150 No.
1 Milchsäure - - +- + ++ +++ +++ 2 Oxalsäure - +- +- + ++ +++ +++ 3 Zitronensäure - # # + ++ +++ +++ 4 Weinsäure - - # + ++ +++ +++ 5 Essigsäure - - - +- + ++ +++ Tabelle V Ver- organische Säuren Haltezeit bei 550C (Tage) such 3 10 20 30 60 90 150 Nr. 1 Lactic acid - - + - + ++ +++ +++ 2 Oxalic acid - + - + - + ++ +++ +++ 3 Citric acid - # # + ++ +++ +++ 4 Tartaric acid - - # + ++ +++ +++ 5 Acetic acid - - - + - + ++ +++ Table V Ver organic acids hold time at 550C (days) search 3 10 20 30 60 90 150 No.
6 Milchsäure - + + ++ +++ +++ +++ 7 Oxalsäure - + + ++ +++ +++ +++ 8 Zitronensäure - + + ++ +++ +++ +++ 9 Weinsäure - + + ++ +++ +++ +++ 10 Essigsäure - - + + ++ +++ +++ Aus den obigen Ergebnissen wird ersichtlich, daß die Geschwindigkeit der Farbveränderung während des Haltens gemäß der Art der organischen Säuren, die zur Einstellung des pH-Werts des Mittels verwendet werden, variiert. Bei Verwendung von Essigsäure, Weinsäure oder Milchsäure, insbesondere von Essigsäure, konnte die Farbveränderung über eine lange Zeitspanne inhibiert werden. Nach dem obigen Test wurden die Mittel dem Bakterientest unterworfen. Als Ergebnis wurde in den Mitteln, die bei 370C gehalten worden waren, ein Bakterienwachstum festgestellt, was bedeutet, daß die Farbveränderung nicht nur durch die Halt-temperatur, sondern auch durch das Wachstum von Bakterien beeinflußt wird. 6 Lactic acid - + + ++ +++ +++ +++ 7 Oxalic acid - + + ++ +++ +++ +++ 8 Citric acid - + + ++ +++ +++ +++ 9 Tartaric acid - + + ++ +++ +++ +++ 10 Acetic acid - - + + ++ +++ +++ From the above results it can be seen that the speed the change in color during holding according to the kind of organic acids that used to adjust the pH of the agent varies. Using of acetic acid, tartaric acid or lactic acid, especially acetic acid, could die Color change can be inhibited over a long period of time. After the above test the agents were subjected to the bacterial test. As a result, in the means, that had been kept at 370C, bacterial growth was observed, which means that the color change is not only due to the hold temperature, but also due to the growth of bacteria is influenced.
5. Versuch 5: Verschiedene antiseptische Mittel wurden zu den gleichen Mittelt wie im Beispiel 4 verwendet, zugegeben, wobei der pH-Wert mit Essigsäure oder Milchsäure eingestellt wurde.5. Experiment 5: Different antiseptics became the same Averages as used in Example 4, added, the pH being adjusted with acetic acid or lactic acid has been set.
Die Mittel wurden bei 370C gehalten und die Farbveränderung wurde entsprechend bestimmt. Die erhaltenen Ergebnisse sind in Tabelle VI zusammengestellt.The means were held at 37 ° C and the color change was determined accordingly. The results obtained are shown in Table VI.
Tabelle VI Ver- organische antiseptisches Haltezeit bei 370C (Tage) such Säuren Mittel 3 10 20 30 60 90 150 Nr. Table VI Verorganic Antiseptic Hold Time at 370C (days) such acids medium 3 10 20 30 60 90 150 No.
11 Milchsäure Natriumbenzoat - - - + + ++ +++ 12 Essigsäure (0,5 Gew.-5') + - - -+ + ++ +++ 13 Milchsäure Methyl-p-hydro- - - - - + + +++ 14 Essigsäure xybenzoat (0,05 - - - - +- + + Gew.-%) 15 Milchsäure 1,4-Dithio- + + ++ +++ +++ +++ +++ 16 Essigsäure threit (0,02 + + ++ +++ +++ +++ +++ Gew.-5') 17 Milchsäure Kaliumtellu- - - - - # + ++ 18 Essigsäure rit (0,05 - - - - - # + Gew.-%) 19 Milchsäure Natriumazid - - - - + + ++ 20 Essigsäure (0,05 Gew.-%) - - - - - - # Aus den obigen Ergebnissen wird ersichtlich, daß die Mittel über lange Zeiträume stabil gehalten werden können, indem man antiseptische Mittel, insbesondere Kaliumtellurit und Natriumtrinitrid, einarbeitet. 11 Lactic acid sodium benzoate - - - + + ++ +++ 12 Acetic acid (0.5 Weight -5 ') + - - - + + ++ +++ 13 lactic acid methyl-p-hydro- - - - - + + +++ 14 acetic acid xybenzoate (0.05 - - - - + - + +% by weight) 15 lactic acid 1,4-dithio- + + ++ +++ +++ +++ +++ 16 acetic acid threitol (0.02 + + ++ +++ +++ +++ +++ wt. -5 ') 17 lactic acid Potassium tellu- - - - - # + ++ 18 acetic acid rit (0.05 - - - - - # +% by weight) 19 lactic acid Sodium Azide - - - - + + ++ 20 Acetic Acid (0.05 wt%) - - - - - - # From the above It can be seen from the results that the agents were kept stable over long periods of time by using antiseptics, especially potassium tellurite and sodium trinitride, incorporated.
6. Versuch 6: In Mittel, die 10 Gew. - Saccharose, 0,003 Gew.-% Resazurin und verschiedene Mengen von Kaliumtellurit (pH 6,8, mit Essigsäure eingestellt) enthielten, wurde eine feste Menge einer Suspension von Streptococcus mutans (GS-5) inokuliert und das Gemisch wurde bei 370C inkubiert. Die Veränderung des pH-Werts und der Farbe des Mittels wurde beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle VII zusammengestellt.6. Experiment 6: In means, the 10 wt. - Sucrose, 0.003 wt .-% Resazurin and various amounts of potassium tellurite (pH 6.8, adjusted with acetic acid) contained, a fixed amount of a suspension of Streptococcus mutans (GS-5) inoculated and the mixture was incubated at 37 ° C. The change in pH and the color of the agent was observed. The results are shown in Table VII.
Tabelle VII Gehalt an Ka- Haltezeit bei 370C (min) liumtellurit 0 15 30 60 (Gew. -5') pH Farbe pH Farbe pH Farbe pH Farbe keiner (Vergleich) 6,8 blau 6,0 rötlich- 5,3 rosa 5,0 schwach violett rosa 0,1 6,8 blau 6,7 violett 6,6 violett 6,5 rötlichviolett 0,075 6,8 blau 6,3 violett 5,8 rot 5,4 rosa 0,05 6,8 blau 6,2 violett 5,6 rot 5,3 rosa 0,025 6,8 blau 6,1 rötlich- 5,4 rosa 5,2 schwach violett rosa 0,01 6,8 blau 6,0 rötlich- 5,4 rosa 5,2 schwach violett rosa Aus den obigen Ergebnissen wird ersichtlich, daß die Zugabe von antiseptischen Mitteln keinen unerwünschten Effekt auf die Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität ergibt, da diese Mittel die Farbveränderung des Mittels in einer Menge von 0,1 bis 0,01 Gew.-5', insbesondere 0,075 Gew.-5' oder weniger, nicht beeinflussen. Table VII Content of Ka holding time at 370C (min) lium tellurite 0 15 30 60 (wt. -5 ') pH color pH color pH color pH color none (comparison) 6.8 blue 6.0 reddish - 5.3 pink 5.0 weak violet pink 0.1 6.8 blue 6.7 violet 6.6 violet 6.5 reddish purple 0.075 6.8 blue 6.3 purple 5.8 red 5.4 pink 0.05 6.8 blue 6.2 violet 5.6 red 5.3 pink 0.025 6.8 blue 6.1 reddish - 5.4 pink 5.2 weak violet pink 0.01 6.8 blue 6.0 reddish-5.4 pink 5.2 weak purple pink From the above It can be seen from the results that the addition of antiseptic agents is not undesirable Effect on the determination of the dental caries activity results, since this means the color change of the agent in an amount of 0.1 to 0.01 wt. 5 ', in particular 0.075 wt. 5' or less, do not affect.
Die erfindungsgemäßen Mittel enthalten daher 2,5 bis 40 Gew.-5' eines Saccharids und 0,0001 bis 0,05 Gew.-°,6 eines pH-Indikators mit einem Farbveränderungspunkt im pH-Bereich von 5 bis 7, wobei das Mittel einen pH-Wert von 6,5 bis 7,0 hat, der mit einem Alkali oder einer Säure eingestellt worden ist.The agents according to the invention therefore contain 2.5 to 40% by weight of one Saccharide and 0.0001 to 0.05% by weight, 6 of a pH indicator with a color change point in the pH range from 5 to 7, the agent having a pH of 6.5 to 7.0, the has been adjusted with an alkali or an acid.
Das erfindungsgemäße Mittel wird in der Weise hergestellt, daß man die feste Menge des Saccharids und des pH-Indikators in Wasser oder einem wäßrigen Alkohol (z.B. Äthanol) mit einer Konzentration von Alkohol, die auf die Bakterien im Mund keinen unerwünschten Effekt ausübt, z.B. etwa 1 Gew. - oder weniger, vorzugsweise in Wasser oder einer 0,1- bis 1 gew.-5'igen wäßrigen Äthanollösung auflöst und danach den pH-Wert einstellt. Bei einer bevorzugten Ausführungsform wird der pH-Indikator in einer wäßrigen Lösung oder einer wäßrigen Alkohollösung einer Alkaliverbindung aufgelöst und in dem erhaltenen Gemisch wird das Saccharid aufgelöst. Danach wird die Lösung zu dem gewünschen pH-Wert mit einer Säure eingestellt.The agent according to the invention is prepared in such a way that the fixed amount of the saccharide and the pH indicator in water or an aqueous one Alcohol (e.g. ethanol) with a concentration of alcohol that affects the bacteria in the Mouth has no undesirable effect, e.g., about 1 wt. Or less, preferably dissolves in water or a 0.1 to 1 wt. 5% aqueous ethanol solution and then adjusts the pH value. In a preferred embodiment, the pH indicator in an aqueous solution or an aqueous alcohol solution of an alkali compound dissolved and in the obtained mixture the saccharide is dissolved. After that, will the solution adjusted to the desired pH value with an acid.
Für die Erfindung geeignete Saccharide sind z.B. Saccharose, Clucose und Fructose, unter denen Saccharose am meisten bevorzugt wird. Die Saccharide werden in einer Menge von 2,5 bis 40 Gew.-, vorzugsweise 5 bis 20 Gew.-%, verwendet.Saccharides suitable for the invention are, for example, sucrose, clucose and fructose, among which sucrose is most preferred. The saccharides will be used in an amount of 2.5 to 40% by weight, preferably 5 to 20% by weight.
Geeignete pH-Indikatoren sind z.B. Resazurin, Lakmoid bzw.Suitable pH indicators are e.g. Resazurin, Lakmoid or
Resorcinblau, Methylrot und Alizarin, von denen Resazurin und Lakmoid, insbesondere Resazurin, bevorzugt werden. Die pH-Indikatoren werden in einer Menge von 0,0001 bis 0,05 Gew. -%, vorzugsweise 0,001 bis 0,01 Gew. -%, mehr bevorzugt 0,001 bis 0,005 Gew.-%, verwendet.Resorcinol blue, methyl red and alizarin, of which resazurin and lakmoid, particularly resazurin, are preferred. The pH indicators are in a lot from 0.0001 to 0.05% by weight, preferably 0.001 to 0.01% by weight, more preferred 0.001 to 0.005 wt% is used.
Beispiele für Alkaliverbindungen, die zur Einstellung des pH-Werts des Mittels verwendet werden können, sind Alkalimetallhydroxide (z.B. Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid und Lithiumhydroxid), Erdalkalimetallhydroxide (z.B. Magnesiumhydroxid und Bariumhydroxid), Alkalimetallcarbonate oder -bicarbonate (z.B. Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat und Natriumbicarbonat), unter denen Natriumhydroxid am geeignetsten ist. Beispiele für Säuren zur Regulierung des pH-Werts sind Milchsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Malonsäure, Oxalsäure, Essigsäure, Ameisensäure und dergleichen, wobei Milchsäure, Weinsäure und Essigsäure am geeignetsten sind.Examples of alkali compounds used to adjust the pH of the agent are alkali metal hydroxides (e.g. sodium hydroxide, Potassium hydroxide and lithium hydroxide), alkaline earth metal hydroxides (e.g. magnesium hydroxide and barium hydroxide), alkali metal carbonates or bicarbonates (e.g. sodium carbonate, Potassium carbonate and sodium bicarbonate), of which sodium hydroxide is the most suitable is. Examples of acids for regulating the pH are lactic acid, tartaric acid, Citric acid, malonic acid, Oxalic acid, acetic acid, formic acid and the like, with lactic acid, tartaric acid and acetic acid being most suitable.
Das Mittel wird mit diesen Alkaliverbindungen und Säuren auf einen pH-Bereich von 6,5 bis 7,0, vorzugsweise 6,7 bis 7,0, eingestellt.The agent works with these alkali compounds and acids pH range from 6.5 to 7.0, preferably 6.7 to 7.0, adjusted.
In das erfindungsgemäße Mittel kann gegebenenfalls ein antiseptisches Mittel, z.B. Natriumazid oder ein Tellurit, eingearbeitet werden, das das Bakterienwachstum im Mund nicht nachteilig beeinflußt. Geeignete Beispiele für Tellurite sind Kaliumtellurit, Natriumte llurit, Magnesiumtellurit und Calciumtellurit, von denen Kaliumtellurit am geeignetsten ist. Das antiseptische Mittel wird in einer Menge von 0,01 bis 0,1 Gew.-5', vorzugsweise 0,025 bis 0,075 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Mittels, verwendet.In the agent according to the invention can optionally an antiseptic Agents, e.g. sodium azide or a tellurite, can be incorporated to stimulate bacterial growth not adversely affected in the mouth. Suitable examples of tellurites are potassium tellurite, Sodium tellurite, magnesium tellurite and calcium tellurite, of which potassium tellurite is most suitable. The antiseptic agent is used in an amount from 0.01 to 0.1 5 'by weight, preferably 0.025 to 0.075% by weight, based on the weight of the agent, used.
Der Test zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität unter Verwendung des erfindungsgemäßen Mittels wird in der Weise durchgeführt, daß man eine Probe von Zahnbelag von dem zu testenden Patienten sammelt, den Zahnbelag in das Mittel einarbeitet und die Farbveränderung des Mittels nach Inkubation des Mittels über eine feste Zeitspanne (z.B. 30 min) beobachtet. Die Veränderung der Farbe variiert entsprechend der Säuremenge, die durch die Bakterien erzeugt wird. Die Farbe verändert sich in der Reihenfolge blau rötlich-violettR unkelrosa i farblos im Falle von Resazurin, blau > violett . ) rot i rosa im Falle von Lakmoid, gelb ; hellgelb > + dunkelrosa 9 rosa im Falle von Methylrot und rot " schwach rosa " hellgelb gelb im Falle von Alizarin. Da der Test innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne (z.B. 30 min) durchgeführt werden kann, wird der Test durch die Inkubationstemperatur nicht wesentlich beeinflußt und er kann bei einer Temperatur von Raumtemperatur (etwa 250C) bis 37°C durchgeführt werden.The test for determining the dental caries activity using the agent according to the invention is carried out in such a way that a sample of plaque collects from the patient to be tested, the plaque into the agent incorporated and the color change of the agent after incubation of the agent over observed for a fixed period of time (e.g. 30 min). The change in color varies according to the amount of acid produced by the bacteria. The color changes in the order blue reddish violet R solid pink i colorless in the case of Resazurin, blue> purple. ) red i pink in the case of lakmoid, yellow; light yellow> + dark pink 9 pink in the case of methyl red and red "pale pink" light yellow yellow in the case of Alizarin. Because the test was carried out within a very short period of time (e.g. 30 min) will can, the test is not due to the incubation temperature significantly influenced and it can at a temperature of room temperature (approx 250C) up to 37 ° C.
Die erfindungsgemäßen Mittel haben weiterhin eine Selektivität gegenüber Streptococcus mutans, was sich aus folgendem Versuch ergibt.The agents according to the invention also have a selectivity towards Streptococcus mutans, which results from the following experiment.
Zu einer 0,002 gew.-4digen wäßrigen Lösung von Resazurin (pH 6,7, 1 ml), die 10 Gew.-5' Saccharose enthielt, wurde eine Suspension von verschiedenen Bakterien (0,2 ml) gegeben und das Gemisch wurde bei 370C inkubiert. Die Veränderung der Farbe des Mittels wurde beobachtet. Die Ergebnisse sind in Tabelle VIII zusammengestellt.To a 0.002% by weight aqueous solution of resazurin (pH 6.7, 1 ml), which contained 10% by weight of sucrose, became a suspension of various Bacteria (0.2 ml) were added and the mixture was incubated at 37 ° C. The change the color of the agent was observed. The results are shown in Table VIII.
Tabelle VIII Bakterien Inkubationszeit bei 370C (min) 5 10 30 Streptococcus rötlich- rot schwach mutans violett rosa Streptococcus violett rötlich- rötlichsanguis violett violett Streptococcus violett violett rötlichmitis violett Streptococcus violett rötlich- rot salivarius violett Lactobacillus violett violett rötlichcasei violett Aus den obigen Ergebnissen wird ersichtlich, daß bei Inokulierung von Streptococcus mutans die Farbe des Mittels sich innerhalb einer sehr kurzen Zeitspanne veränderte, daß aber im Falle von anderen Bakterien die Farbveränderung verzögert war. Somit hat das erfindungsgemäße Mittel eine Selektivität gegenUber Streptococcus mutans. Table VIII Bacteria Incubation Time at 370C (min) 5 10 30 Streptococcus reddish-red weak mutans violet-pink Streptococcus violet reddish-reddish sanguis violet violet Streptococcus violet violet reddish mitis violet Streptococcus violet reddish-red salivarius violet Lactobacillus violet violet reddishcasei purple From the above results, it can be seen that when Streptococcus mutans the color of the remedy changed within a very short period of time, but that in the case of other bacteria the color change delayed was. The agent according to the invention thus has a selectivity for Streptococcus mutans.
Die Herstellung des erfindungsgemäßen Mittels ist in den folgenden Beispielen erläutert.The preparation of the agent according to the invention is as follows Examples explained.
Beispiel 1 Komponenten Gew. -5' Saccharose 10 Resazurin 0,002 wäßrige 0,1N-Natriumhydroxidlösung 5 destilliertes Wasser etwa 80 0,1N-Milchsäure auf einen pH-Wert von 6,7 bis 7,0 eingestellt Gemäß dem obigen Ansatz wird Resazurin in wäßriger 0,1N-Natriumhydroxidlösung aufgelöst und hierzu wird destilliertes Wasser gegeben. Die Saccharose wird in der Lösung aufgelöst und danach wird das Mittel auf einen pH-Wert von 6,7 bis 7,0 eingestellt, wodurch ein Testmittel fllr die Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität erhalten wird.Example 1 Components wt. -5 'sucrose 10 resazurin 0.002 aqueous 0.1N sodium hydroxide solution 5 distilled water about 80 0.1N lactic acid to one pH adjusted from 6.7 to 7.0 According to the above approach, resazurin is aqueous Dissolved 0.1N sodium hydroxide solution and distilled water is added to this. The sucrose is dissolved in the solution and afterwards the agent is applied to one pH adjusted from 6.7 to 7.0, creating a test agent for the determination the dental caries activity is maintained.
Beisiel 2 Unter Verwendung des gleichen Ansatzes wie im Beispiel 1, ausgenommen, daß jedoch 0,002 Gew. -5' Lakmoid anstelle von Resazurin verwendet wurden, wird in ähnlicher Weise ein Testmittel zur Bestimmung der Zahnkaries -Aktivität hergestellt.Example 2 Using the same approach as in Example 1, except that, however, 0.002 wt. -5 'Lakmoid is used in place of resazurin similarly becomes a test agent for determining dental caries activity manufactured.
BeisPiel 3 Unter Verwendung des gleichen Ansatzes wie im Beispiel 1, ausgenommen, daß 0,02 Gew.-Sa Methylrot anstelle von Resazurin verwendet werden, wird in ähnlicher Weise ein Testmittel zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität hergestellt.EXAMPLE 3 Using the same approach as in the example 1, except that 0.02% by weight of methyl red is used instead of resazurin, a test agent for determining the activity of dental caries is prepared in a similar manner.
Beispiel 4 Unter Verwendung des gleichen Ansatzes wie im Beispiel 1, jedoch mit der Ausnahme, daß 0,02 Gew.- Alizarin anstelle von Resazurin verwendet werden, wird in ähnlicher Weise ein Testmittel zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität hergestellt.Example 4 Using the same approach as in the example 1, but with the exception that 0.02 wt. Alizarin is used in place of resazurin similarly becomes a test agent for determining dental caries activity manufactured.
Beispiel 5 Komponenten Gew. -5' Saccharose 10 Resazurin 0,003 wäßrige O,1N-Natriumhydroxidlösung 5 antiseptisches Mittel (Natriumazid) 0,05 destilliertes Wasser etwa 80 0,1N-Milchsäure auf einen pH-Wert von 6,7 bis 7,0 eingestellt.Example 5 components by weight -5 'sucrose 10 resazurin 0.003 aqueous 0.1N sodium hydroxide solution 5 antiseptic (sodium azide) 0.05 distilled Water about 80 0.1N lactic acid adjusted to a pH of 6.7 to 7.0.
Gemäß dem obigen Ansatz wird ein Testmittel zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität in der gleichen Weise, wie im Beispiel 1 beschrieben, hergestellt.According to the above approach, a test agent for determining dental caries activity in the same manner as described in Example 1 prepared.
Beispiel 6 Komponenten Gew.-5: Saccharose 10 Re sazurin 0,003 wäßrige 0,1N-Natriumhydroxydlösung 5 antiseptisches Mittel (Kaliumtellurit) 0,05 destilliertes Wasser insgesamt 100 0,1N-Essigsäure auf einen pH-Wert von 6,8 bis 7,0 eingestellt Gemäß dem obigen Ansatz wird Resazurin in der wäßrigen 0,1N-Natriumhydroxidlösung aufgelöst und hierzu wird destilliertes Wasser gegeben. In der Lösung wird Saccharose und Kaliumtellurit aufgelöst und das Gemisch wird auf einen pH-Wert von 6,8 bis 7,0 eingestellt, wodurch ein Testmittel zur Bestimmung der Zahnkaries-Aktivität erhalten wird.Example 6 Components by weight 5: sucrose 10 Re sazurin 0.003 aqueous 0.1N sodium hydroxide solution 5 antiseptic (potassium tellurite) 0.05 distilled Water a total of 100 0.1N acetic acid adjusted to a pH of 6.8 to 7.0 According to the above approach, resazurin is in the 0.1N aqueous sodium hydroxide solution dissolved and distilled water is added to this. In the solution there is sucrose and potassium tellurite are dissolved and the mixture is adjusted to a pH of 6.8 to 7.0 adjusted, making a test agent for determining the dental caries activity is obtained.
Ende der Beschreibung.End of description.
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8127 | New person/name/address of the applicant |
Owner name: SUNSTAR K.K., TAKATSUKI, JP |
|
8110 | Request for examination paragraph 44 | ||
D2 | Grant after examination | ||
8364 | No opposition during term of opposition | ||
8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |