DE2704194A1

DE2704194A1 - METHOD FOR DETERMINATION OF PARACETAMOL IN BODY FLUIDS

Info

Publication number: DE2704194A1
Application number: DE19772704194
Authority: DE
Inventors: Stephen Edmund Kendal
Original assignee: Sterwin AG
Current assignee: Sterwin AG
Priority date: 1976-02-05
Filing date: 1977-02-02
Publication date: 1977-08-11
Also published as: FR2340550A1; NL7701133A; SE7701266L; FI770380A; BE851110A; NO770373L; GB1510071A; DK47577A; LU76701A1

Description

DR. J.-D. FRHR. von UEXKÜLLDR. J.-D. FRHR. by UEXKÜLL

"·* DR. ULRICH GRAF STOLBERG"· * DR. ULRICH GRAF STOLBERG

DIPL.-ING. JÜRGEN SUCHANTKEDIPL.-ING. JÜRGEN SUCHANTKE

Sterwin A.G. (Prio: 5. Februar 1976Sterwin A.G. (Priority: February 5, 1976

Zeughausgasse 9 ^{GB 4489}/⁷⁶ " ¹³⁷³⁸>Zeughausgasse 9 ^{GB ^4489/76} ^"13738>

Zug / Schweiz Hamburg, 1. Februar 1977 Zug / Switzerland Hamburg, February 1, 1977

Verfahren zur Bestimmung von Paracetamol in KörperflüssigkeitenMethod for the determination of paracetamol in body fluids

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von Paracetamol in Körperflüssigkeiten, insbesondere in Blut.The invention relates to a method for the determination of paracetamol in body fluids, especially blood.

4'-Hydroxyacetanxlid, das unter der Bezeichnung Paracetamol bekannt ist, wird verbreitet als analgetisches und antipyretisches Mittel angewandt. Bei normaler Anwendung ist Paracetamol ein sehr sicheres Arzneimittel. Wenn es in überdosen genommen wird, kann es jedoch wie viele andere Arzneimittel bedenklich sein. Bei Einnahme in großen Mengen, zum Beispiel wenn auf einmal mehr als 50 Tabletten genommen werden, kann es zu einer akuten hepatischen Nekrose führen.4'-Hydroxyacetanxlid, known under the name Paracetamol known, is widely used as an analgesic and antipyretic agent. With normal use is paracetamol a very safe medicine. However, like many other medicines, it can when taken in overdoses be questionable. If taken in large quantities, for example if more than 50 tablets are taken at one time it can lead to acute hepatic necrosis.

Akute hepatische Nekrose kann auf zahlreiche bekannte Weisen behandelt werden, die jedoch sehr bestimmte und unangenehme Wirkungen haben können. Es ist daher zwingend, daß die Behandlung von Patienten, die eine Uberdosis Paracetamol eingenommenAcute hepatic necrosis can be treated in a number of well-known ways, but they are very specific and uncomfortable Can have effects. It is therefore imperative that the treatment be given to patients who have taken an overdose of paracetamol

709832/0688709832/0688

haben, durch die Schwere ihres Zustandes gerechtfertigt ist, und es sind Maßnahmen erforderlich, die eine Abschätzung der Paracetamol-Uberdosis und damit eine Bewertung dieses Zustandes ermöglichen. Spezifische und eindeutige Methoden zur Bestimmung von Paracetamol, die vorzugsweise schnell und ziemlich direkt zu einem Ergebnis führen, sind daher erwünscht. Der Test sollte rasch durchführbar sein, damit, wenn eine Behandlung erforderlich ist, diese zur Erzielung bester Ergebnisse so schnell wie möglich nach der Einnahme des Paracetamols angewandt werden kann.have, justified by the severity of their condition, and measures are required to allow an assessment of the Paracetamol overdose and thus an assessment of this condition enable. Specific and unambiguous methods of determining acetaminophen, preferably quickly and fairly directly lead to a result are therefore desirable. The test should be quick to perform so that if treatment is required This is to be applied as soon as possible after taking the paracetamol for best results can.

Man hat festgestellt, daß bei der Einnahme von Überdosen an Paracetamol das Paracetamol im wesentlichen gleichmäßig zwischen den roten Blutzellen und dem Blutplasma verteilt ist. Die Menge des Paracetamols im Blutplasma stellt daher eine zuverlässige Indikation für den Grad der Paracetamol-Uberdosis dar und wird im allgemeinen als Anzeichen für eine wahrscheinliche nachfolgende Leberschädigung angenommen.It has been found that when overdoses of paracetamol are ingested, the paracetamol is essentially evenly distributed between the red blood cells and the blood plasma. The amount of paracetamol in the blood plasma is therefore a reliable indication of the degree of paracetamol overdose and is generally accepted as an indication of likely subsequent liver damage.

Es sind verschiedene Methoden zur Bestimmung von Paracetamol im Plasma bekannt, einschließlich der Gas-Flüssigkeit Chromatographie. Diese Methoden sind jedoch kompliziert, zeitraubend und unnötig empfindlich für die Ermittlung, ob eine Behandlung auf eine Paracetamol-Uberdosis notwendig ist. Diese Methoden erfordern zu ihrer Durchführung auch ein hohes Maß an Erfahrung. Various methods are known for the determination of paracetamol in plasma, including gas-liquid chromatography. However, these methods are complicated, time consuming, and unnecessarily sensitive in determining whether treatment for paracetamol overdose is necessary. These methods also require a high level of experience to perform.

709832/0688709832/0688

Es können auch verschiedene Absorptionstechniken angewandt werden, die hierfür erforderliche Vorrichtung steht in Kliniken jedoch gewöhnlich nicht generell zur Verfügung. In der Vergangenheit angewandte kolorimetrische Testmethoden neigen dazu, daß sie durch andere Arzneimittel beeinträchtigt werden, insbesondere durch Barbiturate, die bei Patienten mit eriner Uberdosis Paracetamol sehr leicht vorhanden sein können.Various absorption techniques can also be used; the equipment required for this is available in clinics but usually not generally available. Colorimetric test methods used in the past tend to be to be affected by other drugs, especially barbiturates, which are used in patients with eriner Paracetamol overdose can very easily be present.

Die Erfindung betrifft eine Methode zur Bestimmung von Paracetamol in Blut, bei der die zu untersuchende Blutprobe vom Protein befreit und die vom Protein befreite Flüssigkeit abgetrennt, mit einem Überschuß an salpetriger Säure umgesetzt und durch Zugabe eines geeigneten Alkalis alkalisch gemacht wird, so daß das in der ursprünglichen Blutprobe enthaltene Paracetamol zu einer gelben Färbung der behandelten Probe führt, worauf man die Intensität der gelben Farbe der behandelten Probe mit einem Standard vergleicht, um die Konzentration des Paracetamols in der ursprünglichen Blutprobe zu ermitteln.The invention relates to a method for the determination of paracetamol in blood, in which the blood sample to be examined is freed from the protein and the liquid freed from the protein is separated, reacted with an excess of nitrous acid and made alkaline by adding a suitable alkali so that the paracetamol contained in the original blood sample causes a yellow coloration of the treated sample leads, whereupon the intensity of the yellow color of the treated sample is compared with a standard to determine the concentration the paracetamol in the original blood sample.

Verfahren zur Abtrennung des Proteins aus Blut sind hinreichend bekannt und umfassen im allgemeinen die Zugabe eines Fällungsmittels zum Blut, das mit dem Protein reagiert und es ausfällt, so daß eine vom Protein befreite Flüssigkeitsschicht zurückbleibt. Als Fällungsmittel wird sehr häufig die Trichloressig-Methods for separating the protein from blood are well known and generally involve adding to the blood a precipitant which reacts with the protein and precipitates it, so that a layer of liquid freed from the protein remains. The trichloroacetic acid is very often used as a precipitant

709832/0688709832/0688

säure angewandt, und sie wird auch vorzugsweise für die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode eingesetzt. Ein anderes verbreitet angewandtes Fällungsmittel ist Perchlorsäure, die ebenfalls zur Anwendung kommen kann. Die Menge des erforderlichen Fällungsmittels hängt selbstverständlich von der Menge der Blutprobe und der verwendeten besonderen Verbindung ab, man nimmt jedoch an, daß der Fachmann in der Lage ist, bei der erfindungsgemäßen Testmethode die geeignete Menge Fällungsmittel für die Abtrennung des Proteins aus den Blutproben zu ermitteln. Beispielsweise bewirken 3 ml 20 %ige G/V-Trichloressigsäure die Fällung des Proteins in einer 2 ml-Probe menschlichen Bluts.acid applied, and it is also preferred for the invention Determination method used. Another commonly used precipitant is perchloric acid, which can also be used. The amount of precipitant required depends of course on the amount the blood sample and the particular compound used, but it is believed that one skilled in the art will be able to the test method according to the invention to the appropriate amount of precipitant for the separation of the protein from the blood samples determine. For example, 3 ml of 20% w / v trichloroacetic acid is effective the precipitation of the protein in a 2 ml sample of human blood.

Nach der Ausfällung des Proteins wird die vom Protein befreite Flüssigkeitsschicht abgetrennt. Dies kann in herkömmlicher Weise geschehen, zum Beispiel durch Zentrifugieren, Abdekantieren oder Filtrieren. Man hat festgestellt, daß durch Filtration eine für die erfindungsgemäßen Zwecke absolut annehmbare Trennung der vom Protein befreiten Flüssigkeit erreicht wird. Da diese Technik nur eine einfache Vorrichtung erfordert, wird sie bevorzugt.After the protein has been precipitated, the liquid layer freed from the protein is separated off. This can be done in conventional Wise done, for example by centrifugation, decanting or filtering. It has been found that by filtration one that is perfectly acceptable for the purposes of the present invention Separation of the protein-freed liquid is achieved. Since this technique only requires a simple device, she is preferred.

Die vom Protein befreite Flüssigkeit (Plasma) wird zur Nitrosierung jeglichen Paracetamols mit einem Überschuß an salpetriger Säure behandelt. Der Ausdruck "Überschuß an salpetriger Säure"The liquid (plasma) freed from the protein turns into nitrosation treated any paracetamol with an excess of nitrous acid. The term "excess nitrous acid"

709832/0688709832/0688

bedeutet, daß mehr salpetrige Säure angewandt wird, als sie stöchiometrisch erforderlich ist, um die maximal in der Probe vorkommende Menge Paracetamol zu nitrosieren. Dabei wurde festgestellt, daß ein Überschuß an salpetriger Säure die Bestimmung nicht beeinträchtigt und es so möglich ist, zur Gewährleistung einer vollständigen Nitrosierung des Paracetamols ziemlich große Mengen an salpetriger Säure einzusetzen.means that more nitrous acid is used than is stoichiometrically required to achieve the maximum in the sample nitrosate the amount of paracetamol that occurs. It was found that an excess of nitrous acid the Determination is not impaired and it is thus possible to ensure complete nitrosation of the paracetamol to use fairly large amounts of nitrous acid.

Salpetrige Säure selbst ist sehr unbeständig und wird daher vorzugsweise durch Umsetzung einer Säure mit einem Nitrit in situ hergestellt. Obgleich eine Vielzahl von Säuren und Nitriten angewandt werden kann, vorausgesetzt, diese beeinträchtigen nicht die Bestimmungsmethode, werden vorzugsweise Alkalimetallnitrite, wie Natriumnitrit und Säuren, wie verdünnte Chlorwasserstoffsäure in Mengen verwendet, die zu der gewünschten Menge salpetriger Säure führen. Wenn jedoch zur Fällung des Proteins eine Säure angewandt wird, ist die Flüssigkeitsschicht normalerweise ausreichend sauer, um die salpetrige Säure aus einem Nitrit freizusetzen. In diesem Fall muß keine weitere Säure zugesetzt werden. Gemäß einer besonders bevorzugten Ausführungsform, bei der Trichloressigsäure zur Fällung des Proteins verwendet wird, muß der vom Protein befreiten Flüssigkeitsschicht zur Bildung des gewünschten Überschusses an salpetriger Säure nur eine geeignete Menge Natriumnitrit zugefügt werden.Nitrous acid itself is very unstable and is therefore preferably produced in situ by reacting an acid with a nitrite. Although a variety of acids and nitrites can be used provided they do not interfere with the method of determination, it is preferred to use alkali metal nitrites such as sodium nitrite and acids such as dilute hydrochloric acid in amounts which result in the desired amount of nitrous acid. However, when an acid is used to precipitate the protein, the liquid layer is usually sufficiently acidic to release the nitrous acid from a nitrite. In this case no further acid has to be added. According to a particularly preferred embodiment in which trichloroacetic acid is used to precipitate the protein, only a suitable amount of sodium nitrite has to be added to the liquid layer from which the protein has been removed in order to form the desired excess of nitrous acid.

709832/0638709832/0638

27Q419*27Q419 *

JOJO

Obgleich überschüssige salpetrige Säure die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode in keiner Weise beeinträchtigt, kann es in einigen Fällen erwünscht sein, nach der vollständigen Nitrosierung des Paracetamols den Überschuß an salpetriger Säure zu entfernen. Hierfür kann der Probe Sulfaminsäure zugesetzt werden, die mit der überschüssigen salpetrigen Säure reagiert und sie so entfernt (Sulfaminsäure = NH„SO^H).Although excess nitrous acid is the invention Determination method is not affected in any way, it may be desirable in some cases after the complete Nitrosation of the paracetamol to remove the excess nitrous acid. For this purpose, sulfamic acid can be added to the sample which reacts with the excess nitrous acid and thus removes it (sulfamic acid = NH "SO ^ H).

Nach der Nitrosierung und einer eventuellen Entfernung der überschüssigen salpetrigen Säure wird die vom Protein befreite Flüssigkeit mit einem geeigneten Alkali alkalisch gemacht und vorzugsweise auf einen pH-Wert von über 10 eingestellt. Der Ausdruck "geeignetes Alkali" schließt Alkalien aus, die die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode beeinträchtigen, und es so schwierig oder unmöglich machen, die Menge des in der ursprünglichen Blutprobe enthaltenen Paracetamols zuverlässig zu schätzen. Zum Beispiel sollte das Alkali selbst die behandelte Lösung nicht wesentlich färben, da sonst die durch das Paracetamol verursachte Färbung der Lösung verdunkelt würde. Gewöhnlich ist es am zweckmäßigsten, zur Einstellung des pH-Wertes der Probe eine Alkalimetallbase, wie Natriumhydroxid, zu verwenden.After nitrosation and a possible removal of the excess nitrous acid, the protein is freed Liquid made alkaline with a suitable alkali and preferably adjusted to a pH above 10. Of the The expression "suitable alkali" excludes alkalis which impair the method of determination according to the invention, and it as difficult or impossible to make reliably the amount of acetaminophen in the original blood sample appreciate. For example, the alkali itself should not significantly color the treated solution, otherwise the Paracetamol caused the solution to darken. It is usually most convenient to set the pH of the sample, use an alkali metal base such as sodium hydroxide.

Die behandelte Probe hat, wenn in der ursprünglichen Blutprobe Paracetamol vorhanden war, eine gelbe Farbe, und die IntensitätThe treated sample, if paracetamol was present in the original blood sample, has a yellow color and intensity

709832/0688709832/0688

der gelben Farbe stellt ein Maß für die Paracetamolkonzentration in der ursprünglichen Probe dar. Je dunkler die Gelbfärbung, desto höher die Paracetamolkonzentration. Die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode ermöglicht somit die rasche visuelle Feststellung des Paracetamolgehaltes des Bluts. Die Intensität der gelben Farbe wird durch Vergleich mit einem Standard ermittelt. Man könnte die Intensität auch mit einem Spektrophotometer durch Vergleich der gemessenen Lichtintensität mit einer Standardtabelle oder grafischen Darstellung, die die Veränderung der Farbintensität mit der Paracetamolkonzentration für die verwendeten Mengen Reaktionsteilnehmer wiedergibt, genau messen. Es wurde jedoch gefunden, daß der visuelle Vergleich der Farbe oder des Intensitätsgrades der Farbe der behandelten Probe mit einem Standard, der die Farbintensität für verschiedene Paracetamolkonzentrationen unter Verwendung spezifischer Mengen der Reaktionsteilnehmer wiedergibt, eine ausreichend genaue Messung der Paracetamolkonzentration in der ursprünglichen Blutprobe ermöglicht. Zum Beispiel kann der Standard aus einem chromatografischen Diapositiv einer Bezugsprobe oder einer Reihe von Diapositiven bestehen, die die Farben von Proben mit bekannten Paracetamolgehalten wiedergeben. Obgleich eine solche Methode nur die Bestimmung des Bereiches der Paracetamolkonzentration ermöglicht, in den der Paracetamolgehalt der Probe fällt, hat diese sich als ausreichend genau und zuverlässig für die Ermittlung erwiesen,the yellow color is a measure of the paracetamol concentration in the original sample. The darker the yellow color, the higher the paracetamol concentration. The determination method according to the invention thus enables the rapid visual determination of the paracetamol content of the blood. The intensity of the yellow color is determined by comparison with a standard. One could also accurately measure the intensity with a spectrophotometer by comparing the measured light intensity with a standard table or graph showing the change in color intensity with paracetamol concentration for the quantities of reactants used. It has been found, however, that visual comparison of the color or degree of intensity of the color of the treated sample with a standard representing the intensity of color for various concentrations of paracetamol using specific amounts of the reactants enables a sufficiently accurate measurement of the concentration of acetaminophen in the original blood sample. For example, the standard can consist of a chromatographic slide of a reference sample or a series of slides that reproduce the colors of samples with known paracetamol levels. Although such a method only enables the determination of the range of the paracetamol concentration in which the paracetamol content of the sample falls, it has proven to be sufficiently accurate and reliable to determine

709832/0688709832/0688

ob eine Behandlung eines Patienten mit einer Überdosis erforderlich ist.whether treatment of a patient with an overdose is required is.

Die Erfindung stellt somit eine sehr rasche direkte Bestimmungsmethode zur Verfügung, die die Ermittlung des Paracetamolgehaltes von Blutproben ohne komplizierte Apparaturen oder Analysentechniken ermöglicht. Die erfindungsgemäße Methode ermöglicht die Bestimmung des Paracetamolgehaltes typischerweise in etwa 5 Minuten. Darüber hinaus sind die erhaltenen gefärbten Lösungen einige Zeit, gewöhnlich bis zu zwei Stunden, beständig. Die Erfindung ermöglicht auch die rasche Unterteilung einer Vielzahl von Blutproben in Gruppen auf der Basis ihrer Paracetamolgehalte. The invention thus provides a very rapid direct method of determination available that enable the determination of the paracetamol content of blood samples without complicated apparatus or analysis techniques enables. The method according to the invention typically enables the paracetamol content to be determined approximately 5 minutes. In addition, the resulting colored solutions are stable for some time, usually up to two hours. the The invention also enables a variety of blood samples to be quickly divided into groups based on their paracetamol levels.

Als zweiten Aspekt stellt die Erfindung somit ein Verfahren zur Verfügung, das die Trennung einer Vielzahl von Blutproben in zwei oder mehr Gruppen ermöglicht, von denen jede Gruppe in einen bestimmten Bereich einer Paracetamolkonzentration fällt und alle Blutproben in gleicher Weise behandelt wurden. Die Behandlung besteht aus der Fällung des Proteins aus der Blutprobe, der Abtrennung der vom Protein befreiten Flüssigkeitsschicht, der Umsetzung der Flüssigkeit mit einem Überschuß an salpetriger Säure und der Zugabe eines geeigneten Alkalis, so daß in der ursprünglichen Blutprobe vorhandenes Paracetamol zu einer gelben Färbung führt. Die IntensitätAs a second aspect, the invention thus provides a method which allows the separation of a large number of blood samples in two or more groups, each group in a certain range of a paracetamol concentration falls and all blood samples have been treated in the same way. The treatment consists of the precipitation of the protein from the Blood sample, the separation of the layer of fluid freed from the protein, the reaction of the fluid with an excess of nitrous acid and the addition of a suitable alkali so that it is present in the original blood sample Paracetamol turns yellow. The intensity

709832/0688709832/0688

der gelben Farbe der behandelten Probe wird durch Vergleich mit einem Standard geschätzt, um die Konzentration des Paracetamols in der entsprechenden ursprünglichen Blutprobe festzustellen. Die behandelten Proben werden auf der Basis der ermittelten Farbintensität entsprechenden Gruppen zugeteilt.the yellow color of the treated sample is estimated by comparison with a standard to determine the concentration of paracetamol in the corresponding original blood sample. The treated samples are based on the The determined color intensity is assigned to the appropriate groups.

Die Behandlung der Proben und die Schätzung der behandelten Proben erfolgt vorzugsweise in der vorstehend beschriebenen Weise.The treatment of the samples and the estimation of the treated samples are preferably carried out in the manner described above Way.

Wenn die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode zuverlässig sein soll, ist es wesentlich, das die zur Gelbfärbung führende Reaktion hinsichtlich des Paracetamols spezifisch ist, da die Gegenwart anderer Arzneimittel oder von StoffWechselprodukten, die in ähnlicher Weise reagieren, zu irrigen Schlüssen und möglicherweise unnötigen Behandlungen führen. Die nachstehend in der Tabelle 1 angegebenen Verbindungen wurden bei Konzentrationen von 50 bis 500,ug/ml (je nach ihrer Löslichkeit in Wasser) untersucht. Sie beeinträchtigten die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode nicht. Diese Arzneimittel wurden im Hinblick auf den Gesichtspunkt ausgewählt, daß sie wahrscheinlich am häufigsten im Blut von Patienten mit einer Überdosis anzutreffen sind, und sie wurden bei Konzentrationen untersucht, die den bei der Einnahme großer Mengen auftretenden entsprechen.If the determination method according to the invention can be reliable it is essential that the reaction leading to the yellowing is specific with respect to the paracetamol, since the The presence of other drugs or metabolic products that react in a similar way leads to erroneous conclusions and may result in unnecessary treatments. The compounds listed in Table 1 below were used at concentrations from 50 to 500 µg / ml (depending on their solubility in water). They impaired the invention Determination method not. These drugs have been selected from the point of view of their likely are most common in the blood of overdose patients and have been studied at concentrations which correspond to those that occur when large amounts are taken.

709832/0688709832/0688

AcetanilidAcetanilide

AmitryptilinAmitriptyline

Amphetaminamphetamine

CaffeinCaffeine

ChlordiazepoxidChlordiazepoxide

Chlorine ζ anonChlorine ζ anon

Chlorpromaz inChlorpromaz in

ChlorpropamidChlorpropamide

Kokaincocaine

DextropropoxyphenDextropropoxyphene

DiazepamDiazepam

Table 1

DiphenhydraminDiphenhydramine

DiphenylhydantoinDiphenylhydantoin

DihydrocodeinDihydrocodeine

ImipraminImipramine

IndomethacinIndomethacin

LorazepamLorazepam

MeprobamatMeprobamate

MethadonMethadone

MethaqualonMethaqualone

MorphinMorphine

Nitrazepam OxypertinNitrazepam oxypertine

Pentazocin Phenobarbiton Phenacetin Promethiazin Phenylbutazon"Pentazocin Phenobarbitone Phenacetin Promethiazine Phenylbutazone "

Salicylat* StrychninSalicylate * strychnine

Theophyllin TolbutamidTheophylline tolbutamide

>700 jng/ml Salicylat führt zu einer leichten Färbung> 700 jng / ml salicylate leads to a slight coloration

ΓοΓο

Die zwei Hauptstoffwechselprodukte des Paracetamols wurden ebenfalls untersucht. Es wurde gefunden, daß sie die erfindungs gemäße Bestimmungsmethode nicht beeinträchtigen. Diese Methode besitzt daher die notwendige Spezifität.The two main metabolites of acetaminophen were also examined. It has been found that they do not affect the determination method according to the invention. This method therefore has the necessary specificity.

Bei der Feststellung, ob eine Behandlung auf eine Paracetalmol-Überdosis erforderlich ist, muß auch auf die Zeit zwischen der Einnahme der Uberdosis und der Bestimmung des Paracetamolspiegels im Blut geachtet werden. Der Paracetamolgehalt im Blut verringert sich mit der Zeit, wie oben angegeben, und damit wird der Paracetamolspiegel, oberhalb dessen eine Behandlung notwendig oder erwünscht ist, mit der Zeit, gemessen vom Zeitpunkt der Einnahme des Paracetamols, geringer. Dies istIn determining whether treatment for a paracetalmol overdose is necessary, consideration should also be given to the time between ingestion of the overdose and the determination of the level of paracetamol in the blood. The paracetamol level in the blood decreases over time, as indicated above, and thus the paracetamol level above which treatment is necessary or desired decreases over time, measured from the time the paracetamol was taken. This is

709832/0688709832/0688

in der Tabelle 2 dargestellt, in der die kritische Paracetamolkonzentration des Blutes als Funktion der Zeit nach der Einnahme angegeben ist, oberhalb der eine Behandlung empfohlen wird. Andere Faktoren, wie das Alter und der körperliche Zustand des Patienten können die Entscheidung, ob eine Behandlung erwünscht ist, ebenfalls beeinflussen. shown in Table 2, in which the critical paracetamol concentration of blood as a function of time after ingestion, above which treatment is recommended. Other factors, such as the patient's age and physical condition, can also influence the decision whether or not treatment is desired.

Table 2

Zeit nach der kritischer Paracetamol-Time after the critical paracetamol

Einnahme, Stunden gehalt des Blutes, ,ug/ml Ingestion, hours of blood, .ug / ml

0 300 - 3600 300-360

2 240 - 3002 240-300

4 180 - 2204 180-220

6 130-1606 130-160

8 1OO - 1208 100-120

10 80 - 10010 80-100

Weitere Angaben zu der Veränderung des kritischen Paracetamolgehaltes mit der Zeit finden sich zum Beispiel in dem Aufsatz von L.F. Prescott und Mitarbeiter, The Lancet, 6. April 1974, Seite 588 bis 592.Further information on the change in the critical paracetamol content over time, for example, in the essay by L.F. Prescott and coworkers, The Lancet, April 6, 1974 Pages 588 to 592.

Das folgende Beispiel und die Testergebnisse erläutern die Erfindung.The following example and test results illustrate the invention.

709832/0686709832/0686

example

Die erfindungsgemäße Bestiiumungsmethode wurde unter Anwendung des folgenden Systems durchgeführt:The method of determination according to the invention was used of the following system:

20 ml Injektionsspritze;20 ml injection syringe;

flexible Injektionsnadeln;flexible hypodermic needles;

Trichloressigsäure, 20 %ig G/V;Trichloroacetic acid, 20% w / v;

Filtriertrichter;Filter funnel;

Filterpapier;Filter paper;

Natriumnitrit;Sodium nitrite;

Natriumhydroxidkügelchen, 50 mg NaOH/Kügelchen;Sodium hydroxide beads, 50 mg NaOH / bead;

Farbvergleichsstandard undColor comparison standard and

Behälter.Container.

In die mit einer flexiblen Nadel ausgestattete Injektionsspritze wurde eine 2 ml Blutprobe aufgezogen. Dann wurde mit senkrecht nach oben gerichteter Nadel die gleiche Menge Luft (2 ml) in die Spritze gezogen. Überschüssiges Blut wurde von der Nadel abgewischt, dann wurden 3 ml 20 %ige G/V Trichloressigsäure in die Spritze aufgezogen. Mit senkrecht nach oben gerichteter Nadel wurde der Kolben der Spritze vollständig zurückgezogen, dann wurde die Nadel doppelt gebogen, um ein Ausfließen zu verhindern, und die Spritze wurde leicht geschüttelt. A 2 ml blood sample was drawn into the injection syringe equipped with a flexible needle. Then was with With the needle pointing vertically upwards, the same amount of air (2 ml) is drawn into the syringe. Excess blood was from wiped off the needle, then 3 ml of 20% w / v trichloroacetic acid was drawn into the syringe. With straight up With the needle pointed, the plunger of the syringe was fully withdrawn, then the needle was bent double to make a Prevent leakage and shake the syringe gently.

Der Filtriertrichter wurde mit einem frischen Filterpapier versehen, und der Inhalt der Spritze wurde filtriert. Es wurden etwa 2 bis 4 ml Filtrat (vom Protein befreites Blut oder Plasma)The filter funnel was fitted with a fresh filter paper, and the contents of the syringe were filtered. Approximately 2 to 4 ml of filtrate (blood or plasma from which the protein has been removed)

709832/0688709832/0688

in einem Behälter gesammelt, der etwa 150 mg Natriumnitrit enthielt. Der Behälter wurde gerührt, um jeglichen gebildeten Feststoff zu lösen und zwei Minuten stehengelassen. Die gebildete Lösung wurde dann durch Zugabe eines Natriumhydroxidkügelchens alkalisch gemacht. Dann wurde der Behälter erneut geschüttelt, bis sich das Kügelchen gelöst hatte.collected in a container containing about 150 mg of sodium nitrite contained. The container was stirred to dissolve any solid formed and allowed to stand for two minutes. The educated Solution was then made by adding a sodium hydroxide bead made alkaline. The container was then shaken again until the bead dissolved.

Die behandelte Probe wurde darauf visuell mit einem Farbstandard verglichen, um die Menge des Paracetamols in der ursprünglichen Blutprobe zu ermitteln.The treated sample was then visually compared with a color standard to determine the amount of paracetamol in the to determine the original blood sample.

Test results

Das oben beschriebene System wurde in genau der gleichen Weise von verschiedenen Personen angewandt, um den Paracetamolgehalt einer Reihe von Blutproben zu bestimmen. Ferner wurde eine routinemäßige spektrophotometrische Analyse auf Paracetamol durchgeführt. Die Ergebnisse der verschiedenen Analysen sind in der Tabelle 3 zusammengestellt (ein Strich zeigt an, daß die entsprechende Probe nicht analysiert wurde).The system described above was used in exactly the same way by different people to determine the paracetamol level a series of blood samples to be determined. Routine spectrophotometric analysis for paracetamol was also performed carried out. The results of the various analyzes are summarized in Table 3 (a line indicates that the corresponding sample was not analyzed).

709832/0688709832/0688

yf*yf *

spektrophoto-
metrischespectrophoto-
metric visuevisue Probesample Analyse,
,ug/mlAnalysis,
, µg / ml Person 1Person 1 11 /
50/
50 00 22 00 00 33 305305 2OO2OO 44th 7O7O 5050 55 00 00 66th 0-500-50 0-500-50 77th 0-500-50 0-500-50 88th O-5OO-50 0-500-50 99 220220 100100 1O1O 160160 -- 1111 6666 5050 1212th O-5OO-50 0-500-50 1313th 255255 300300 1414th 0-500-50 0-500-50

Table 3

visuelle Analyse, ,ug/mlvisual analysis,, µg / ml

Person 2 Person 3Person 2 Person 3

5050 O-5OO-50 O-5OO-50 O-5OO-50 100-2OO100-2OO 200200 1OO1OO 1OO1OO 50-10050-100 1OO1OO 0-500-50 O-5OO-50 200-3OO200-3OO 2OO2OO 0-500-50 O-5OO-50

Im visuellen Vergleich wurden für den Farbstandard die Farbwerte für Paracetamolgehalte von 0, 50, 100, 2OO und 3OO .ug/ml verwendet.In a visual comparison, the color values for paracetamol contents of 0, 50, 100, 2OO and 3OO g / ml were used for the color standard.

Die obige Tabelle zeigt, daß die erfindungsgemäße Bestimmungsmethode zu Ergebnissen führt, die mit denen von standardspektrophotometrischen Methoden vergleichbar und ausreichend genau sind, um festzustellen, ob eine Behandlung erforderlich ist. Diese Ergebniss werden rascher und unter Verwendung einer verhältnismäßig einfachen Vorrichtung erhalten.The above table shows that the determination method according to the invention leads to results which are comparable with those of standard spectrophotometric methods and which are sufficiently accurate to determine whether treatment is necessary. This result can be obtained more quickly and using a relatively simple apparatus.

709832/0688709832/0688

270Λ194270Λ194

Die erf indungsgemäße Be st iminung sme thode eignet sich auch zur Ermittlung des Paracetamolgehaltes in anderen Flüssigkeiten. Sie kann zum Beispiel auf andere menschliche Körperflüssigkeiten, wie Speichel,oder auf Körperflüssigkeiten von Tieren angewandt werden.The method according to the invention is also suitable for Determination of the paracetamol content in other liquids. For example, it can affect other human body fluids, such as saliva, or on animal body fluids can be applied.

709832/0688709832/0688

Claims

Method for the determination of paracetamol in blood, characterized in that the blood sample to be examined is from Protein freed and the formed protein-freed liquid layer separated, then with an excess reacted in nitrous acid and made alkaline by adding a suitable alkali so that the paracetamol contained in the original blood sample leads to a yellow coloration of the treated sample, and the intensity of the yellow color of the treated sample is compared with a standard and so is the concentration the paracetamol in the original blood sample is determined.

2. The method according to claim 1, characterized in that the protein from the blood sample by adding trichloroacetic acid falls.

3. The method according to claim 2, characterized in that the protein from a 2 ml sample of human blood by adding 3 ml of 20% w / v trichloroacetic acid fails.

709832/0688 original iNSfto,£0709832/0688 original iNSfto, £ 0

4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that the protein freed from the liquid layer filtered off.

5. The method according to claim 1 to 4, characterized in that the excess nitrous acid is produced by adding an acid to a nitrite in situ .

6. The method according to claim 5, characterized in that one produces the nitrous acid in situ from an alkali metal nitrite and an acid.

7. The method according to claim 5 and 6, characterized in that there is used as the alkali metal nitrite sodium nitrite.

8. The method according to claim 5 to 7, characterized in that dilute hydrochloric acid is used for release the nitrous acid used from the nitrite.

9. The method according to claim 2 and 7, characterized in that there is used to precipitate the protein, the trichloroacetic acid in an amount sufficient so that is formed upon the addition of sodium nitrite to the liquid freed from protein layer in situ nitrous acid.

709832/0688709832/0688

10. The method according to claim 1 to 9, characterized in that after the complete nitrosation of the paracetamol the excess nitrous acid is removed by adding sulfamic acid.

11. The method according to claim 1 to 10, characterized in that after the nitrosation and the optionally carried out Remove excess nitrous acid from the protein by adding a suitable liquid Brings alkali to a pH value above 10.

12. The method according to claim 11, characterized in that the alkali consists of an alkali metal base.

13. The method according to claim 12, characterized in that the alkali metal base consists of sodium hydroxide.

14. The method according to claim 1 to 13, characterized in that that one uses as standard slides which show the colors of samples with known paracetamol contents.

15. The method of claim 1 for separating a plurality of blood samples in two or more groups, assigned to certain concentration ranges of paracetamol are, characterized in that from the blood samples

709832/0688709832/0688

removes the protein, the layer of liquid freed from the protein separated, the liquid treated with excess nitrous acid and then by adding a makes a suitable alkali alkaline, so that the paracetamol present in the original blood sample becomes a Yellowing of the treated sample results in the intensity compares the yellow color of each treated sample with a standard and thus the concentration of paracetamol in the corresponding original blood sample determined, and then the treated samples based on the determined Assigns color intensity to the appropriate groups.

sch: kö

709832/0688709832/0688