DE2421066A1

DE2421066A1 - Bifido bacterial preparations - additionally contg. Lactobacillus casei var. rhamnosus

Info

Publication number: DE2421066A1
Application number: DE2421066A
Authority: DE
Inventors: Geb Malyoth Eleonore Schuler; Rolf Dr Schuler
Original assignee: Solco Basel AG
Current assignee: ICN Switzerland AG
Priority date: 1974-05-02
Filing date: 1974-05-02
Publication date: 1976-03-25

Abstract

Preparations for substituting a disturbed intestinal flora or for maintaining a normal intestinal flora contain a mixture of several bifido bacteria species, and in addition contain Lactobacillus casei var. Rhamnosus. The preparations are of use in the treatment of various disorders of the intestinal flora, including intestinal disturbances after antibacterial therapy, colitis ulcerosa, chronic constipation and liver disorders. They are also useful in the establishment of a suitable intestinal flora in weanling infants. The inclusion of Lactobacillus casei var. rhamnosus in the preparations leads to improved colonisation of the intestine by the bacteria. This is because Lactobacillus casei var rhamnosus gives rise to intestinal pH conditions which are optimal for bifido bacteria colonisation.

Description

Bifidobakterien enthaltendes Präparat Die Erfindung betrifft ein Präparat zur Substitution einer gestörten Darmflora bzw. zur Aufrechterhaltung einer normalen Darmflora, enthaltend als Mischung mehrere Arten der Gattung Bifidobakterien, gemäß P 21 34 179.7. Preparation Containing Bifidobacteria The invention relates to a Preparation for the substitution of a disturbed intestinal flora or for the maintenance of a normal intestinal flora, containing as a mixture several species of the genus Bifidobacteria, according to P 21 34 179.7.

Wie in der Hauptanmeldung im einzelnen erläutert ist, lassen sich mit einem Präparat, das als Mischung mehrere Arten der Gattung Bifidobakterien enthält, anhaltende therapeutische Erfolge bei der Substitution einer gestörten Darmflora erzielen. As explained in detail in the main application, can with a preparation that contains several species of the genus Bifidobacteria as a mixture, sustained therapeutic success in the substitution of a disturbed intestinal flora achieve.

Der Erfindung liegt nun die Aufgabe zugrunde, das Präparat gemäß der Hauptanmeldung noch dahin weiterzuentwickeln, daß die Ansiedlung der zugeführten Bifidobakterien im Darm wesentlich begünstigt wird. The invention is now based on the object of the preparation according to of the main application to the point that the settlement of the supplied Bifidobacteria in the intestine is significantly favored.

Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß das Präparat außer den verschiedenen Arten von Bifidobakterien noch einen Zusatz von Lactobacillus casei var. According to the invention, this object is achieved in that the preparation in addition to the various types of bifidobacteria, there is also an addition of Lactobacillus casei var.

Rhamnosus enthält.Contains rhamnosus.

Es ist bekannt, daß verschiedene Lactobazillen bzw. It is known that various lactobacilli or

deren Stoffwechselprodukte die Darmflora im positiven oder negativen Sinn beeinflussen können. So ist beispielsweise Lactobacillus acidophilus ein regelmäßiger Bewohner des menschlichen Darmkanales, und es ist auch versucht worden, Darmstörungen durch die Zufuhr von Lb, acidophilus oder dessen Stoffwechselprodukten günstig zu beeinflussen.whose metabolic products affect the intestinal flora in a positive or negative way Can influence meaning. For example, Lactobacillus acidophilus is a regular one Resident of the human intestinal canal, and attempts have also been made to treat intestinal disorders through the intake of Lb, acidophilus or its metabolic products influence.

Nachweislich positive Ergebnisse sind Jedoch el diesen Versuchen nicht erzielt worden. Lb. bulgaricus, bekannt als Joghurtbakterium, übt bei vielen Personen nachteilige Wirkungen aus. Andere Lactobacillen sind im Darm überhaupt nicht lebensfähig.However, these attempts are not demonstrably positive has been achieved. Lb. bulgaricus, known as the yogurt bacterium, is a common practice on many people adverse effects. Other lactobacilli are not viable at all in the intestine.

Demgegenüber erwies sich der erfindungsgemäß als Zusatz vorgesehene Lb. casei var. Rhamnosus überraschend als sehr geeignet zur Herbeiführung einer verbesserten Ansiedlung der Bifidobakterien. Dieser Keim ist nämlich mit Sicherheit völlig apathogen und übt auch keinen Einfluß auf die Darmflora in ihrer Gesamtheit aus. Er bleibt im Darm voll lebensfähig und stoffwechselaktiv, ist Jedoch nicht in der Lage, sich im Darmkanal dauerhaft anzusiedeln. In contrast, the one provided according to the invention as an additive turned out to be Lb. casei var. Rhamnosus surprisingly as very suitable for inducing a improved settlement of the bifidobacteria. This germ is for sure completely apathogenic and has no influence on the intestinal flora as a whole the end. It remains fully viable and metabolically active in the intestine, but it is not able to settle permanently in the intestinal canal.

Die Ursache für die durch den Lb. casei var. Rhamnosus verbesserte Ansiedlung der Bifidobakterien liegt in folgendem: Bifidobakterien benötigen zu ihrem optimalen Anwachsen in ihrer Umgebung einen pH-Wert von 5,6 bis 6,2, sind jedoch im Darm meist nicht in der Lage, sich diesen pH-Wert durch eigene Säuerungsaktivitäten zu schaffen. Sie können jedoch, wenn sie einmal bei diesem pH-Wert angesiedelt sind, ihren optimalen Säurewert aufrechterhalten. Lb. casei var. The cause of the improved by the Lb. casei var. Rhamnosus Settlement of the bifidobacteria lies in the following: Bifidobacteria need to their optimal growth in their environment is a pH of 5.6 to 6.2 However, the intestine is mostly unable to maintain this pH value through its own acidification activities to accomplish. However, once they have settled at this pH, they can maintain their optimal acidity. Lb. casei var.

Rhamnosus schafft nun - ohne seinerseits ein Ansiedlungsvermögen im Darm zu besitzen - einen für die Ansiedlung der Bifidobakterien optimalen pH-Wert.Rhamnosus now creates - without any ability to settle in the Having an intestine - an optimal pH value for the colonization of the bifidobacteria.

Der erfindungsgemäß vorgesehene Zusatz von Lb. casei var. The addition of Lb. casei var.

Rhamnosus liefert also für die erwünschte Ansiedlung der Bifidobakterien im Darm eine 'Schutæmantelflora".Rhamnosus therefore provides for the desired settlement of the bifidobacteria a 'Schutæmantle flora' in the intestine.

Der für die Erfindung ausgewählte Lb.-Stamm zeichnet sich durch folgende biochemische Eigenschaften aus: Lb. casei var. Rhamnosus Lev. Malt. Suc. Sal. Treh. Cell. Mann. Rham. Melb. The Lb. strain selected for the invention is characterized by the following biochemical properties from: Lb. casei var. Rhamnosus Lev. Paint. Suc. Sal. Treh. Cell. Man. Rham. Melb.

+ + + + + + + + Raff. Arab. Xyl. Inul.Melez Sorbose Dul. Sorbit Inositol - - - - + + + + Zur weiteren Erläuterung der Erfindung sei die Herstellung eines erfindungsgemäßen Präparates an einem Beispiel näher erläutert: Zur Herstellung des Präparates werden sieben verschiedene Stämme von Bifidobakterien verwendet. Die Stämme werden aus gesunden Versuchspersonen isoliert und über übliche Kulturverfahren reingezüchtet. Die Auswahl der zu verwendenden Stämme erfolgt in Anlehnung an das von Dehnert gegebene Schema. + + + + + + + + Raff. Arab. Xyl. Inul.Melez Sorbose Dul. Sorbitol inositol - - - - + + + + To further explain the invention, consider the production of a Preparation according to the invention explained in more detail using an example: For production Seven different strains of bifidobacteria are used in the preparation. The strains are isolated from healthy test subjects and using standard culture methods pure bred. The selection of the strains to be used is based on the Scheme given by Dehnert.

Die reingezüchteten Stämme werden dann über mehrere Passagen hinweg an rasches und üppiges Wachstum in Milch adaptiert und die so erhaltenen Kulturen auf ein gewünschtes Volumen gebracht (z.B. 50 oder 100 ml). Zur Herstellung einer größeren Kulturmenge wird sodann folgendermaßen verfahren: Magermilchpulver wird mit Leitungswasser aufgelöst und zwar so, daß eine "Milch" mit erhöhter Trockenmasse entsteht (also z.B. 1 kg Magermilchpulver mit Wasser anrühren und mit Wasser bis zu einem Endvolumen von 5 1 auffüllen). The pure-bred strains are then spread over several passages adapted to rapid and abundant growth in milk and the cultures thus obtained brought to a desired volume (e.g. 50 or 100 ml). To make a larger amount of culture is then proceeded as follows: Skimmed milk powder is dissolved with tap water in such a way that a "milk" with increased dry matter (e.g. mix 1 kg of skimmed milk powder with water and add up to fill up to a final volume of 5 l).

Zu dieser Lösung wird dann noch 1% Hefeextraktpulver.gegeben und die gesamte Lösung dann zur weitgehenden Abtötung unerwünschter Begleitkeime in strömendem Dampf erhitzt. Sofern im Hefeextrakt extrem hitzerestistente Keime enthalten sein sollten, wird der Hefeextrakt nicht als Pulver, sondern in Form einer hochkonzentrierten, vorher autoklavierten Lösung der Milch zugegeben.1% yeast extract powder is then added to this solution and the entire solution then largely killing unwanted accompanying germs in flowing Steam heated. Provided that the yeast extract contains extremely heat-resistant germs should, the yeast extract is not supplied as a powder, but in the form of a highly concentrated, previously autoclaved solution was added to the milk.

Das gesamte Nährstoffgemisch wird sodann auf 370 c bis 42°C gekühlt und entweder gleichzeitig oder in zeitlichen Abständen mit den verschiedenen Bifidokulturen beimpft. Die Impfmenge der einzelnen Kulturen ist hierbei so zu bemessen, daß nach Zugabe der letzten Kultur der gesamte Zusatz an Bifidokulturen etwa 10% bis 20% des Nährstoffgemisches ausmacht. Das so beimpfte Gemisch wird dann für mehrere Stunden bei 370C bis 420C bebrütet. The entire nutrient mixture is then cooled to 370 to 42 ° C and either simultaneously or at intervals with the various bifido cultures inoculates. The inoculation amount of the individual cultures is to be measured so that after Addition of the last culture the total addition of bifido cultures about 10% to 20% of the nutrient mix. The so inoculated mixture is then for several hours incubated at 370C to 420C.

In Abständen von etwa 1 Std. wird jeweils eine pH-Messung durchgeführt; sofern der pH-Wert unter einen Wert von 5,0 abgesunken ist, wird das Gemisch durch Zugabe von Calciumhydroxid wieder auf einen pH-Wert von 5,9 bis 6,0 angehoben. Nach Ablauf der fünften Bebrütungsstunde wird dem Gemisch, in dem sich mittlerweile die Bifidobakterien reichlich vermehrt haben, noch 5% bis 10% einer Reinkultur von Lactobacillus casei zugegeben. Die Bebrütung wird dann, wiederum unter pH-Korrektur, für weitere 2 bis 3 Stunden fortgesetzt. Anschließend wird die gesamte Kultur gekühlt und kann nun entweder frisch oder in schonend getrockneter Form verwendet werden.A pH measurement is carried out at intervals of about 1 hour; if the pH has dropped below a value of 5.0, the mixture will through Addition of calcium hydroxide is raised again to a pH value of 5.9 to 6.0. To The end of the fifth hour of incubation becomes the mixture in which the Bifidobacteria have multiplied abundantly, still 5% to 10% of a pure culture of Lactobacillus casei admitted. The incubation is then, again with pH correction, for further Continued for 2 to 3 hours. The entire culture is then cooled and can can now be used either fresh or in a gently dried form.

Zur weiteren Erläuterung des mit der Erfindung erzielten technischen Fortschritts seien im folgenden einige klinische Ergebnisse beschrieben. Nach dem oben beschriebenen Verfahren gewonnene und durch Lyophilisation getrocknete Kulturen wurden an Patienten mit folgenden Syndromen verabfolgt: 1. Darmstörungen nach antibiotischer Therapie Es ist bekannt, daß im Verlauf einer antibiotischen Therapie, insbesondere, wenn diese über einen längeren Zeitraum durchgeführt wird, durch die Schädigung der Darmflora sehr ernsthafte Darmstörungen auftreten. Es wurden in einem klinischen Versuch 20 Patienten, die unter solchen Darmstörungen litten, mit dem Präparat behandelt und mit einer Kontrollgruppe verglichen, die zwar auch Antibiotica erhalten hatte, bei der sich aber die anschließenden Maßnahmen zur Behebung der Darmstörungen auf bisher übliche klinische Verfahren beschränkten. Eine Normalisierung der Darmfunktion trat bei den meisten Versuchspersonen bereits nach 3 Tagen ein, bei allen Versuchspersonen aber wesentlich früher als dies in der Kontrollgruppe zu beobachten war. To further explain the technical achieved with the invention Some clinical results are described below. After this obtained method described above and by lyophilization Dried cultures were given to patients with the following syndromes: 1. Intestinal disorders after antibiotic therapy It is known that in the course of a antibiotic therapy, especially if carried out over a long period of time will cause very serious intestinal disorders due to the damage to the intestinal flora. In a clinical trial, 20 patients suffered from such intestinal disorders suffered, treated with the preparation and compared with a control group who had also received antibiotics, but the subsequent measures to remedy the intestinal disorders were limited to clinical procedures that have been used up to now. A normalization of the bowel function has already occurred in most of the test subjects after 3 days, but much earlier in all test subjects than in the control group was observed.

In einer zweiten Versuchsreihe wurde bei mehreren Patienten während der Antibiotica-Therapie versucht, das Auftreten von Darmstörungen dadurch zu verhindern, daß die Versuchspersonen Jeweils in den Intervallen zwischen den Antibioticagaben Gaben des Bifidogemisches erhielten. A second series of experiments was carried out in several patients during antibiotic therapy tries to prevent the occurrence of intestinal disorders by that the test subjects in each case in the intervals between the antibiotic administration Received doses of the bifido mixture.

Bei allen Patienten konnte durch diese Maßnahme das Auftreten von Darmstörungen verhindert werden.As a result of this measure, the occurrence of Intestinal disorders are prevented.

2. Colitis ulcerosa Zwei Patienten mit ulcerierender Colitis, die seit mehreren Jahren bestand und sich als resistent erwiesen hatte, erhielten für die Dauer von 6 Wochen hohe Dosen (100 g Lyophilisat täglich) des Bifido-Bakteriengemisches.2. Ulcerative colitis Two patients with ulcerative colitis who had existed for several years and had proven resistant, were given for the duration of 6 weeks high doses (100 g lyophilisate daily) of the bifido bacterial mixture.

Beide Patienten zeigten erhebliche Besserung, die auch nach Absetzen des Präparates anhielt.Both patients showed significant improvement, even after discontinuation of the preparation stopped.

3. Chronische Obstipation Eine größere Anzahl von Versuchspersonen, die an chronischer Obstipation litten, erhielten über einen längeren Zeitraum hinweg täglich 1 g Bifidusmischkultur.3. Chronic constipation A larger number of test persons who suffered from chronic constipation received over a longer period of time 1 g bifidus mixed culture daily.

Alle Patienten zeigten eine Normalisierung der Darmfunktion nach kürzerer oder längerer Zeit, wobei diese Zeitspanne deutliche Abhängigkeit von der Schwere des Falles zeigte. In keinem Fall betrug die Therapiedauer mehr als 6 Wochen.All patients showed a normalization of bowel function after a shorter period or longer time, this period of time clearly depending on the severity of the case showed. In no case did the therapy last longer than 6 weeks.

4. Lebererkrankungen Es ist bekannt, daß bei der Behandlung von Lebererkrankungen die zahlenmäßige Reduktion des gramnegativen Anteils der seroben Darmflora von erheblicher Bedeutung ist.4. Liver Diseases It is known to be useful in treating liver disease the numerical reduction of the gram-negative portion of the serobic intestinal flora is considerable Meaning is.

Man verwendet aus diesem Grunde in der Behandlung verschiedener Lebererkrankungen seit längerer Zeit Antibiotica, die vorwiegend gegen diesen Anteil der Darmflora wirksam sind. Da diese Antibiotica selbst Jedoch eine gewisse toxische Wirkung aufweisen, ist der Therapiedauer eine relativ enge Grenze gesetzt. Es hat nun gezeigt werden können, daß es auch mit Hilfe des beschriebenen Bifido-Mischpräparates möglich ist, den gramnegativen aaeroben Anteil der Darmflora noch wirkungsvoller zurückzudrängen, als dies mit Antibiotica möglich war.For this reason it is used in the treatment of various liver diseases for a long time antibiotics, which are mainly used against this part of the intestinal flora are effective. However, since these antibiotics themselves have a certain toxic effect, there is a relatively narrow limit to the duration of therapy. It has now to be shown can that it is also possible with the help of the bifido mixed preparation described, to suppress the gram-negative aerobic part of the intestinal flora even more effectively, than was possible with antibiotics.

5. Säuglingsernährung Man hat ferner, seit man die Bedeutung der Bifidusflora für den Säugling erkannt hat, immer wieder versucht, durch künstlicheErnährungim Säuglingsdarm eine Flore entstehen zu lassen, die derjenigen Flora gleicht, die sich beim Brustkind ausbildet. Hierbei hat sich gezeigt, daß es zwar möglich ist, eine Bifidusflora aufzubauen, daß es sich aber hierbei niemals um jene Fifidusstämme handelt, die für das Brustkind spezifisch sind. Wenn man nun unter Heranziehung des oben beschriebenen Herstellungsverfahrens an Stelle von "ErachsenenstEmmen" sog. Brustkindstämme verwendet, si läßt sich ebenfalls eine Bifido-Mischkultur herstellen, die zweckmäßigerweise in getrockneter Form einer künstlichen Säuglingsernährung zugesetztauch beim künstlich ernährten Säugling eine der Brustkindflora identische Bifidusflore entstehen läßt.5. Infant nutrition One has also, since one, the importance of the bifidus flora recognized for the infant, tried again and again by artificial feeding To let the infant intestine develop a pile that resembles the flora that develops in the breast infant. It has been shown that it it is possible to build up a bifidus flora, but that is never the case are those fifidus strains that are specific for the breast infant. If you now using the manufacturing process described above instead of "adult stems" so-called breast strains are used, a bifido mixed culture can also be produced, which is expediently in the dried form of artificial infant nutrition also in the artificially nourished infant one of the flora of the infant is identical Bifidus floras arise.

Claims

Preparation for substituting or maintaining a disturbed intestinal flora a normal intestinal flora, containing as a mixture several species of the genus Bifidobacteria, according to P 21 34 179.7, g e k e n n -z e i c h n e t d u r c h an addition of Lactobacillus casei var. Rhamnosus.

2. A method for producing a preparation according to claim 1, characterized in that characterized in that a preferably using skimmed milk powder and yeast extract produced milk-nutrient mixture with one of seven different strains of Bifidobacteria produced bifidoculture and then inoculated for several hours at a Temperature between 37 and 42 0C while maintaining a pH value between 5.0 and 6.0 is incubated, with about 5 to 10% of a pure culture after about five hours of Lactobacillus casei var. Rhamnosus are added and the incubation is then carried out continued for another two to three hours.