DE1492135A1

DE1492135A1 - Process for the production of medicaments for the regeneration of the intestinal microflora

Info

Publication number: DE1492135A1
Application number: DE19641492135
Authority: DE
Inventors: Pierre Laboureur; Mauvernay Dr Roland-Yves
Original assignee: ANALYSES ET DE RECH S BIOLOG M; APPLIC BIOCHIMIQUES SOC ET
Current assignee: ANALYSES ET DE RECH S BIOLOG M; APPLIC BIOCHIMIQUES SOC ET
Priority date: 1963-10-15
Filing date: 1964-10-14
Publication date: 1969-06-12
Also published as: FR5373M; BE653690A; GB1040278A

Description

Verfahren zur Herstellung von Medikamenten für die Regenerierung der Darmmikroflora Bekanntlich spielt die Darmmikroflora eine wesentliohe Rolle bei der Aufrechterhaltung des biologischen Gleichgewichts des menschlichen Verdauungssystems (siehe insbesondere R. DUBOS, Action of Normal Digestive Flora on the Organism, Concours Med. 85:1363-6, 2. März 1963, und W. GLANZ, Influence of the Intestinal Flora on the Growth Rate of Mice, Ntr. Rev. 19:12, 4. Januar 1961). Nun geschieht es häufig, daß infolge physiologischer und Stoffwechselstörungen sowie bestimmter therapeutischer Behandlungen, insbesondere mit Antibiotika, diese Mikroflora eine qualitative und quantitative Veränderung erleidet.Process for the preparation of medicines for the regeneration of the Intestinal microflora It is well known that the intestinal microflora plays an essential role maintaining the biological balance of the human digestive system (see in particular R. DUBOS, Action of Normal Digestive Flora on the Organism, Concours Med. 85: 1363-6, March 2, 1963, and W. GLANZ, Influence of the Intestinal Flora on the Growth Rate of Mice, Ntr. Rev. 19:12, Jan. 4, 1961). Now happens it often that as a result of physiological and metabolic disorders as well as certain therapeutic treatments, particularly with antibiotics, this microflora one undergoes qualitative and quantitative change.

Die sich ergebenden Gleichgewichtsverschiebungen äußern sich unter anderem durch eine Störung der Verdauungsvorgänge, was darauf zurückzuführen ist, daß die von den Darm-Mikroorganismen angesonderten Enzyme eine wichtige Rolle bei der Umwandlung der Nahrungsmittel im Darm spielen; außerdem werden durch die gleichen Mikroorganismen eine bestimmte Anzahl von Stoffwechsel-Kofbktoren und Vitaminen synthetisiert, welche ebenfalls den menschlichen Stoffwechsel beeinflussen und für das physiologische Gleichgewicht nötig sind.The resulting equilibrium shifts are expressed under among other things by a disruption of the digestive processes, which can be attributed to that the enzymes secreted by the intestinal microorganisms play an important role the transformation the food playing in the intestines; also be by the same microorganisms a certain number of metabolic cofbctors and vitamins are synthesized, which also affect human metabolism and are necessary for physiological equilibrium.

Im UbX gen führen die nach bestimmten Krankheiten oder bestimmten Behandlungen auftretenden mikrobiologischen Gleichgewichtsverschiebungen zu einer übermäßigen Vermehrung bestimmter pathogener Hefepilze, wie z. B, Candida albicans, in solchem Umfang, daß sie tödlich wirken können.In the UbX gene they lead to certain diseases or certain Treatments occurring microbiological equilibrium shifts to a excessive reproduction of certain pathogenic yeasts such as B, Candida albicans, to such an extent that they can be fatal.

Es war deshalb notwendig, zur Wiederherstellung des gestörten Gleichgewichts der Darm-Mikroflora dem Organismus Mikroorganismen zuzuführen, die normalerweise Gast-Saprophyten des menschlichen Darmes sind, und zu diesem Zwecke wurden bereits verschiedene Lösungen vorgeschlagen.It was therefore necessary to restore the disturbed equilibrium the intestinal microflora to supply the organism with microorganisms that normally Guest saprophytes of the human intestine are, and have been used for this purpose various solutions proposed.

Allgemein wurde vorgeschlagen, die Darm-Mikroflora mittels Lactobazillen, Saprophyt-Hefepilzen und Sporenbazillen wiederherzustellen.In general, it has been suggested that the intestinal microflora using lactobacilli, Restore saprophyte yeasts and spore bacilli.

Diese vorgeschlagenen Lösungen waren niemals ganz zufriedenstellend. In der Tat wurden hierbei mehrere notwendige Bedingungen nicht gleichzeitig erfüllt.These proposed solutions have never been entirely satisfactory. In fact, several necessary conditions were not met at the same time.

Erstens sind die verschiedenen vorgeschlagenen Mikroorganismen zwar normalerweise in der normalen Darm-Mikroflora enthalten, aber jeder von ihnen oder selbst jede Gruppe von diesen Mikroorganismen stellt nur eines der Elemente der gesamten Mikroflora dar, und infolgedessen können diese Mikroorganismen allein nicht alle die Funktionen ausüben, die man von der Gesamt-Mikroflora erwarten muß.First are the various proposed microorganisms though normally contained in the normal intestinal microflora, but any of them or even each group of these microorganisms represents only one of the elements of the entire microflora, and as a result, these microorganisms cannot alone all perform the functions one would expect from the overall microflora.

Zweitens bekämpfen diese Mikroorganismen oder Gruppen von Mikroorganismen nicht pathogene Hefepilze des oben erwähnten Typs Candida und sind infolgedessen unfähig, sich einer übermäßigen Vermehrung dieser Hefepilze mit ihren unheilvollen Polgen zu widersetzen.Second, they fight microorganisms or groups of microorganisms non-pathogenic yeasts of the Candida type mentioned above and are consequently unable to face an excessive Propagation of these yeasts with to oppose their sinister poles.

Drittens wurden diese Mikroorganismen bisher nicht unter jenen Vertretern der Darm-Mikroflora ausgewählt, welche die größtmögliche Menge an Enzymen absondern können.Third, these microorganisms have not yet been among those representatives the intestinal microflora that secrete the greatest possible amount of enzymes can.

Schließlich waren diese Mikroorganismen nicht immer genügend beständig gegenüber den üblichen Antibiotika, insbesondere gegenüber den üblichen Antibiotika, insbesondere gegenüber den Tetracyclinen, so daß unter diesen Bedingungen und da die Wiederherstellung der Darmflora häufig während oder nach der Antibiotika-Behandlung vorgenommen werden muß, die Rolle dieser Mirkoorganismen nur eine vorübergehende und illusorische sein konnte, da sie rasoh unter dem Einfluß dieser Antibiotika verschwanden.After all, these microorganisms were not always sufficiently stable to the usual antibiotics, especially to the usual antibiotics, especially to the tetracyclines, so that under these conditions and there the restoration of the intestinal flora often during or after antibiotic treatment must be made, the role of these microorganisms is only a temporary one and could be illusory as they rasoh under the influence of these antibiotics disappeared.

Im Gegensatz hierzu bietet die vorliegende Erfindung zum ersten Male eine vollkommen zufriedenstellende Lösung dieses Regenerierungsproblems dank neuer bakterieller Zusammensetzungen, welche die folgenden Eigenschaften aufweisen.In contrast, the present invention offers for the first time a completely satisfactory solution to this regeneration problem thanks to new ones bacterial compositions which have the following properties.

1) Diese Kombinationen bestehen aus Mikro-Organismen, welche zu den wichtigsten und repräsentativsten Gruppen der normalen Darm-Mikroflora gehören und auf physiologische Weise die Wiederherstellung des Gleichgewiohts dieser Mikroflora erlauben, wenn dieses aus therapeutischen Gründen (Behandlung mit Antibiotika, mit Sulfamiden oder anderen Medikamenten) oder pathologischen Gründen gestört ist. Die hier ausgewählten Mikroorganismen stammen aus Stämmen der normalen Darm-Mikroflora, eo daß sie sich nach der Verabreichung im Darm halten können,da sie den darin herrschenden Bedingungen angepaßt sind; sie können dann die übliche Rolle dieser Mikroflora spielen.1) These combinations consist of micro-organisms that belong to the most important and representative groups of normal intestinal microflora include and the restoration of the equilibrium of these microflora in a physiological way allow if this is for therapeutic reasons (treatment with antibiotics, with Sulfamides or other drugs) or for pathological reasons. the The microorganisms selected here come from strains of the normal intestinal microflora, eo that they can remain in the intestine after administration, since they are the prevailing therein Conditions are adapted; they can then play the usual role of this microflora.

2) Diese Mikroorganismen werden weiterhin aus solchen ausgewählte, welche pathogene Hefepilze bekämpfen: sie verhindern unter natürlichen Bedingungen durch ihren besonderen Stoffwechsel jede übermäßige Vermehrung pathogener Hefepilze und insbesondere solcher des Typs Candida.2) These microorganisms will continue to be selected from those which fight pathogenic yeasts: they prevent under natural conditions due to their special metabolism, any excessive proliferation of pathogenic yeasts and especially those of the Candida type.

3) Diese Mikroorganismen werden außerdem unter jenen ausgewählt, welche beständig gegenüber Antibiotika sind, insbesondere, jedoch nicht ausschließlich, gegenüber Penicillin: und seinen Derivaten, gegen Tetracyclinen, Erythromycin, Spiramycin, Oleamdomycin, Streptomycin, Chloramphenicol, Aureomycin, Terramycin und Analogen.3) These microorganisms are also selected from among those which resistant to antibiotics, particularly, but not exclusively, against penicillin: and its derivatives, against tetracyclines, erythromycin, spiramycin, Oleamdomycin, streptomycin, chloramphenicol, aureomycin, terramycin and analogs.

Diese drei Eigenschaften sind für die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen wesentlich, und wünschenswerterweise besitzen diese Zusammensetzungen auch noch die eine oder andere der beiden folgenden Eigenschaften und vorzugsweise beide: 4) Diese Mikroorganismen werden ebenfalls unter solchen, ausgewählt, welche die Eigenschaften haben, die hauptsächlichsten den Verdauungsvorgang beeinflussenden Enzyme abzusondern, insbesondere Amylasen, Proteasen und möglichst auch Lipase.These three properties are common to the compositions of the present invention essential, and desirably, these compositions also have one or the other of the following two properties, and preferably both: 4) These microorganisms are also selected from those which the Have properties that mainly affect the digestive process To secrete enzymes, in particular amylases, proteases and, if possible, lipase.

5) Schließlich werden diese Mikroorganismen unter solchen auagewählt, welche imstande sind, sich in Gegenwart von Gallensalzen zu vermehren und unter diesen Bedingungen einen normalen Stoffwechsel haben, insbesondere hinsichtlich der Absonderung von Enzymen. Diese'zusätzliche Eigenschaft wurde bisher nie erwogen, obwohl sie sehr wichtig ist, denn unter normalen Bedingungen sind neben den Mih8Eorganismen im Darm auch Gallensekrete vorhanden, und in bestimmten Fällen werden sogar Gallensalze in der Therapeutik eingeführt, sodaß es wichtig ist, daß diese Produkte nicht nachteilig auf die Mikroorganismen einwirken, welche die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen darstellen.5) Finally, these microorganisms are chosen from among those which are able to multiply in the presence of bile salts and under have a normal metabolism, especially regarding these conditions the secretion of enzymes. This' additional property has never been considered although it is very important, because under normal conditions there are next to the Mih8Eorganisms Bile secretions are also present in the intestine, and in certain cases bile salts are even formed introduced in therapeutics so it is important that these products not be detrimental act on the microorganisms which the compositions according to the invention represent.

Die erfindungsgemäße Verwendung dieser Zusammensetzungen, welche genau auf die von ihnen verlangte Rolle abgestimmt sind, war möglich dank der Entdeckung, daß deren Bestandteile auf den verschiedenen, oben aufgezählten Gebieten die entsprechenden bisher unbekannten Eigenschaften besitzen. Studiert man in der Literatur (z. B."Principles of Bacteriology and Immunity" von Topley und Wilson; "Traité de Systémétique Bactérinne" von A.R. Prévot; manual of Determinative Bacteriology" von Bergey usw.) die von diesen Bestandteilen bekannten Eigenschaften, so findet man, daß von keinem der verschiedenen Mikroorganismen bekannt war, daß er pathogene Hefepilze des Verdauungstraktes bekämpf@e, Verdauungsenzyme in bedeutenden Mengen absondere oder beständig gegenüber Antibiotika sei.The use according to the invention of these compositions, which exactly attuned to the role they required was made possible thanks to the discovery that their components in the various fields listed above are the corresponding have previously unknown properties. If one studies in the literature (e.g. "Principles of Bacteriology and Immunity " from Topley and Wilson; "Traité de Systémétique Bactérinne "by A.R. Prévot; manual of Determinative Bacteriology" von Bergey etc.) finds the properties known from these constituents one that none of the various microorganisms was known to be pathogenic Combat yeasts of the digestive tract, digestive enzymes in significant quantities special or resistant to antibiotics.

Es wurde nun gefunden, daß die sämtlichen oben aufgezählten Bedingungen durch die Rombination von drei Arten von Mikroorganismen erfüllt werden, nämlich einem Stamm von Lactobacillus brevis, einem Stamm von Aerobaoter aerogenes und einem Stamm von bAcillu%subtilis.It has now been found that all of the above-enumerated conditions be met by the combination of three types of microorganisms, viz one strain of Lactobacillus brevis, one strain of Aerobaoter aerogenes, and one Strain of bAcillu% subtilis.

Die Erfindung betrifft daher neue Yodikamentzusammeneetsungen für die Wiederherstellung der Darm-Mikroflora in solchen Fällen, in denen deren Gleichgewicht aus pathologischen od.r therapeutischen Gründen gestört ist, und zwar Zusammensetzungen aus Bakterienstämmen, welche im wesentlichen die ersten drei oben genannten Eigenschaften besitzen, nämlich Zugehörigkeit zur Saprophyte-Mikroflora des normalen menschlichen Darms, Intagonismus gegenüber pathogenen Hefepilze und Beständigkeit gegenüber Antibiotika, und die vorzugsweise auch die beiden anderen Eigenschaften besitzen,nämlioh die Fähigkeit, Enzyme abzusondern und das Vermögen, sich in Gegenwart von Gallenprodukten zu vermehren.The invention therefore relates to new yodikament compositions for the restoration of the intestinal microflora in those cases where their balance is disturbed for pathological or therapeutic reasons, namely compositions from bacterial strains which essentially have the first three properties mentioned above possess, namely belonging to the saprophyte microflora of normal human Gut, intagonism to pathogenic yeasts and resistance to antibiotics, and which preferably also have the other two properties, namely the Ability to secrete enzymes and the ability to stand in the presence of bile products to multiply.

Obwohl die Anzahl der Bestandteile dieser Zu.ammeneetzungen beliebig eein kann, vorausgesetzt, daß eie den obengenannten Eigenschaften entsprechen, welche diese Zusammensetzungen kennzeichnen, enthalten diese Zusammensetzungen nach einer bevorzugten Durchführungsform drei Bestandteile, nämlich einen Stamm von Lactobacillus brevis, einen Stamm von Aerobacter aerogenes, einen Stamm von Bacillus subtilis.Although the number of components in these compositions is arbitrary A can, provided that they correspond to the above properties, which These compositions characterize, contain these compositions after a preferred embodiment three components, namely a strain of Lactobacillus brevis, a strain of Aerobacter aerogenes, a strain of Bacillus subtilis.

Solche Stämme sind zahlreich, aber eie lassen sich leicht durch ihre Morphologie und ihre biochemischen Eigenschaften identifizieren.Such tribes are numerous, but they can be easily identified by their Morphology and its biochemical properties identify.

Nach anderen Durchführungsformen der vorliegenden Erfindung können diese Keipie ganz oder teilweise durch andere Mikroorganismen mit ähnlichen Eigenschaften ersetzt werden, wie sie s. B. in der folgenden Tabelle aufgeführt sind: Bacillus subtilis Aerobacter aerogenes Lactobacillus brevis Baoillus mesentericus Escherichia coli Lactobaccilus bifidur Bacillus pumilus EsoheZichia inter- Lactobacillus medium aoidophilue Bacillus megatherium Pseudomonas fluorescens migula Die drei ausgewählten Stämme sind in der normalen Darm-Mikroflora vorweggenommen und zur Vermehrung in Gegenwart von Gallenprodukten befähigt. Der Lactobacillus gewährleistet hauptsächlich die Beständigkeit gegenüber Antibiotika (obwohl auch die beiden anderen Stämme, vor allem Aorobacter, ebenfalls beständig sind, wenn auch in geringerem Umfang; der Bacillus gewährleistet die Erzeugung von Enzymen (obwohl auch die beiden anderen, wenn auch in geringerem Umfang Enzyme erzeugen) und der Aerobacter gewährlei$stet die Bekämpfung von pathogenen Hefepilzen (obwohl auch die beiden anderen Stämme und insbesondere der Lactobaoillus Hefepilze, wenn auch in geringerem Umfange bekämpfen).According to other embodiments of the present invention, this Keipie wholly or partially by other microorganisms with similar properties be replaced, as listed, for example, in the following table: Bacillus subtilis Aerobacter aerogenes Lactobacillus brevis Baoillus mesentericus Escherichia coli Lactobaccilus bifidur Bacillus pumilus EsoheZichia inter- Lactobacillus medium aoidophilue Bacillus megatherium Pseudomonas fluorescens migula The three selected Strains are anticipated in the normal intestinal microflora and used to reproduce in Enables presence of bile products. The Lactobacillus mainly ensures resistance to antibiotics (although the other two strains, especially Aorobacter, are also persistent, albeit to a lesser extent; the Bacillus ensures the production of enzymes (although the other two, even if to a lesser extent produce enzymes) and the Aerobacter guarantees the fight against pathogenic yeasts (although so do the other two strains and especially the Lactobaoillus yeast fungi, albeit to a lesser extent).

Es sei darauf hingewiesen, daß bestimmte Stämme anfangs keine ausreichende Beständigkeit gegenüber bestimmten Antibiotika aufweisen, und daß daher die Erfindung ein Anpassungsverfahren dieser Stämme an die Antibiotika vorsieht. Dieses Verfahren wird anschlie@end beschrieben: In ein Glas, welches das Kulturmedium enthält, führt man eine schwache Dosis des vorgesehenen Antibiotikums ein und impft mit dem anzupassenden Stamm. Sobald dieser die logarithmische Wachstumsphase erreicht hat, setzt man die Kultur in ein zweites Glas um, welches das gleich. Antibiotikum sowie eine ebenfalls schwache Dosis eines zweiten Antibiotikums enthält.It should be noted that certain strains are initially insufficient Have resistance to certain antibiotics, and that therefore the invention a procedure for adapting these strains to the antibiotics. This method is then described: Leads into a glass containing the culture medium one injects a weak dose of the intended antibiotic and inoculates with the one to be adjusted Tribe. As soon as this has reached the logarithmic growth phase, the Culture in a second glass, which is the same. Antibiotic as well as one as well Contains a weak dose of a second antibiotic.

Es folgt eine Reihe von Umsetzungen, welche auf die gleiche Weise durchgeführt werden, wobei man jedes Mal ein anderes Antibiotikum zusetzt. Es werden dabei die folgenden Antibiotika verwendet: Penicillin 2 Einheiten (u.o.) und 20 Einheiten (u.o.) Streptomycin 20 mcg und 100 mcg Chloramphenicol 30 mcg und 100 mcg Erytromycin 6 mcg und 100 mcg Tetracyclin 5 mcg und 100 mcg Nachdem die fünf Antibiotika in den oben genannten schwachen Dosen verwendet worden sind, ersetzt man sie progressiv durch die oben genannten starken Dosen, wobei man diese stets zusammenhält. Die letzten Umsetzungen werden in Gegenwart von drei starken Dosen eines jeden der 5 Antibiotika gleichzeitig durchgeführt. Die Stämme werden dann auf Gelose geimpft und auf ihre erworbene Beständigkeit untersucht.This is followed by a series of implementations, which are carried out in the same way carried out, each time adding a different antibiotic. It will used the following antibiotics: penicillin 2 units (below) and 20 Units (below) streptomycin 20 mcg and 100 mcg chloramphenicol 30 mcg and 100 mcg erytromycin 6 mcg and 100 mcg tetracycline 5 mcg and 100 mcg after the five Antibiotics used in the weak doses mentioned above have been substituted you progressively through the strong doses mentioned above, always keeping these holds together. The final conversions are in the presence of three strong doses of each of the 5 antibiotics performed at the same time. The tribes will then inoculated for gelose and examined for their acquired resistance.

Nachdem die Beständigkeit der drei ausgewählten Stämme und des erfindungsgemäßen Produktes gegenüber Antibiotika ermittelt war, wurde eine Messung der Anti-Bio-Beständigkeit, wie sie auf dem zweiten Internationalen Treffen über Immunologische Normung (Rom, 1956) definiert wurde durchgeführt.After the resistance of the three selected strains and the invention Product against antibiotics was determined, a measurement of the anti-bio-resistance, as presented at the second International Meeting on Immunological Standardization (Rome, 1956) was carried out.

Da der auf dem Treffen in Rom geforderte Minimal-Wert, bei dem ein Stamm als antibiobeständig angesehen werden kann, aus der Literatur bekannt ist, seien anschließend zum Vergleich die Beständigkeitswerte der erfindungsgemäßen Zusammensetzung in Gegenwart verschiedener Konzentrationen der häufigsten Antibiotika angegeben Penicillin 5 E/Ml : Wachstum bis zu 100% 10 E/ml : " " " " Chloramphenicol 50 E/ml : 90% 100 E/ml : " " " 75% Streptomycin 500 E/ml : s""n fl 90% 1000 E/ml " " " " 70% Neomycin 500 E/ml s Wachstum bis zu 90% 1000 E/ml : " " " 75% Tetracyclin 50 E/ml : " " " 90% 100 E/ml : " " " 70% Terramycin 50 E/ml @ " " " 100% 100 E/ml z tl lt " 85% Erythromycin 10 E/ml : " " " 100% 20 E/ml @ " " " 100% 50 E/ml : " " " 100% 100 E/ml @ " " " 100% Aureomycin 50 E/ml : lt " " 95% 100 E/ml : " " " 75% Ebenso war es möglich, den Antagonismus der Mikroorganismen gegenüber pathogenen Hefepilzen zu verbessern, wie z.B. in dem typischen Fall von Candida albicansO Zu diesem Zweck wird das folgende Verfahren angewandt: Man präpariert eine Reihe von Gläsern, von welchen jedes 10 ccm eines Kulturmediums enthält, welches so beschaffen ist, daß ein normales Wachstum von pathogenem Hefepilz und den untersuchten Mikroorganismen gewährleistet ist.Since the minimum value required at the meeting in Rome, at which a Strain can be regarded as resistant to antibiotics, it is known from the literature that then let us compare the resistance values of the composition according to the invention indicated in the presence of various concentrations of the most common antibiotics Penicillin 5 U / Ml: growth up to 100% 10 U / ml: "" "" Chloramphenicol 50 U / ml : 90% 100 U / ml: "" "75% streptomycin 500 U / ml: s" "n fl 90% 1000 U / ml" "" " 70% Neomycin 500 U / ml s growth up to 90% 1000 U / ml: "" "75% Tetracycline 50 U / ml: "" "90% 100 U / ml:" "" 70% Terramycin 50 U / ml @ "" " 100% 100 U / ml z tl lt "85% Erythromycin 10 U / ml:" "" 100% 20 U / ml @ "" "100% 50 U / ml: "" "100% 100 U / ml @" "" 100% aureomycin 50 U / ml: lt "" 95% 100 U / ml : "" "75% Likewise, it was possible to oppose the antagonism of the microorganisms to improve pathogenic yeasts, such as in the typical case of Candida albicansO To this end, the following procedure is used: One dissects a series of glasses, each of which contains 10 cc of a culture medium which is such that a normal growth of pathogenic yeast and the investigated Microorganisms is guaranteed.

Z.B. verwendet man einen Nährboden nach Reading, welcher folgendermassen modifiziert wird: Rohrzu@ker 10 g Fleischextrakt 5 g Bauchspeicheldrüsen-Pepton 10 g Hefepilzextrakt 3 g NatriumacetatPH 6,8 1 g In ein Glas mit diesem Medium wird gleichzeitig der pathogene Hefepilz und einer der gewählten Keime eingeimpft. Die Impfung wird so berechnet, daß die Anzahl der Hefepilze und der Bakterien von Anfang an offenbar gleich sind. Das ganze wird gerührt und in einen Trockenschrank von 37° gestellt.E.g. one uses a nutrient medium according to Reading, which is as follows Modified: Rohrzu @ker 10 g meat extract 5 g pancreas peptone 10 g yeast extract 3 g sodium acetate PH 6.8 1 g in a glass with this medium is at the same time the pathogenic yeast and one of the selected germs are inoculated. the Vaccination is calculated based on the number of yeasts and bacteria from the start at are apparently the same. The whole thing is stirred and placed in a drying cabinet 37 °.

Nach 24 Stunden Inkubationszeit wird die auf diese Weise erhaltene Kultur in einer Menge von 5 Tropfen mit einer Pasteuer-Pipette in ein anderes Glas mit sterilem Medium überführt. Das ganze wird gerührt und in einen Trockenschrank von 370 gestellt.After 24 hours of incubation, the obtained in this way is obtained Culture in the amount of 5 drops with a Pasteuer pipette in another glass transferred with sterile medium. The whole thing is stirred and put in a drying cabinet from 370 posed.

24 Stunden später wird dieser Vorgang unter den gleichen Bedingungen wiederholt und - falls notwendig-auch an den folgenden Tagen. Vor jedem Umsetzen wird eine mikroskopische Untersuchung der Kultur durchgeführt. Wenn die Hefepilze in der untersuchten Kultur fast vollständig verschwunden sind, geht man folgendermaßen vor: a) Wie in den vorhergehenden Verfahren impft man ein Glas mit eterilem Medium mit 5 Tropfen der nach 24 Stunden erhaltenen Kultur; b) man führt jedoch ebenfalls in das gleiche Glas eine äquivalente Menge des pathogenen Hefepilzes ein, um von neuem die Anfangsbedingungen des Versuches zu reproduzieren.24 hours later this process takes place under the same conditions repeatedly and - if necessary - also on the following days. Before every move a microscopic examination of the culture is carried out. When the yeast have almost completely disappeared in the examined culture, one proceeds as follows before: a) As in the previous procedure, a jar is inoculated with eterile medium with 5 drops of the culture obtained after 24 hours; b) one also leads in the same jar an equivalent amount of the pathogenic yeast fungus to remove from again to reproduce the initial conditions of the experiment.

Alle 24 Stunden beginnt man erneut die gleiche Reihe von Umsetzungen und mikroskopischen Kontrollen wie beim ersten Mal. Dieser Verfahrenskreislauf wird nach jeder Eliminterung der pathogenen Hefepilze (die sich von Mal zu Mal schneller vollzieht) wiederholt, bis man 24 Stunden nach dem gleichzeitigen Impfen mit den beiden Mikroorganismen das vollständige Verschwinden der Hefepilse erreicht.The same series of conversions is started again every 24 hours and microscopic controls like the first time. This procedural cycle is after each elimination of the pathogenic yeast fungi (which change faster from time to time takes place) repeatedly until 24 hours after the simultaneous inoculation with the both microorganisms achieved the complete disappearance of the yeast mushrooms.

Sobald man glaubt, daß die Anpassung des Mikrobenstammes ausreicht, unternimmt man eine Reihe von Versuchen, welche dazu dienen, sämtliche Zellen des pathogenen Hefepilses, welche eventuell noch überleben könnten, su eliminieren. Hierbei geht man folgendermaßen vor: a) Durchgang des Bakteriens tammes durch eine Reihe von ausgewählten Medien, welche kein Wachstum von Hefepilzn gestatten. b) Kulturen durch aufeinanderfolgende Verdünnungen in einen Gelose-Medium in Petrischalen zur Erzielung von isolierten Bakterien Kolonien. c) Aus diesen isolierten Kolonien zuckende Kulturen auf einem Gelose-Medium. d) gründliche Prüfung der auf diese Weise erzielten Kulturen zur Bestätigung der vollständigen Eliminierung jeglicher Zellen von pathogenem Hefepilz.As soon as it is believed that the adaptation of the microbial strain is sufficient, one undertakes a series of experiments which serve to test all cells of the Eliminate pathogenic yeast pils, which might still survive, see below. This is done as follows: a) Passage of the bacterial strain through a Series of selected media that do not allow yeast to grow. b) Cultures by successive dilutions in gelose medium in Petri dishes to obtain isolated bacterial colonies. c) From these isolated colonies twitching cultures on gelose medium. d) thorough examination cultures obtained in this way to confirm complete elimination any pathogenic yeast cells.

24 Stunden nach dem Einimpfen der untersuchten Keime in eine Kultur von Candida Albicans wurden die folgenden Ergebnisse, ausgedrückt in % eliminierte Candida, erzielt: Stämme B. subtilis L. Brevis A aerogenes erfindungsgemäße Zusammensetzung % 30-50 30-60 70-100 90-100 Schließlich wurden die erfindungsgemäßen Stoffzusammensetzung und ihre einzelnen Bestandteile auf die folgenden drei Eigenschaften untersucht: 1) Toleranz gegenüber Gallensalzen und Galle und Beständigkeit gegenüber den Säften der Bauchspeicheldiese und des Magens.24 hours after inoculating the examined germs into a culture of Candida Albicans, the following results expressed in% eliminated Candida, obtained: strains B. subtilis L. Brevis A aerogenes composition according to the invention % 30-50 30-60 70-100 90-100 Finally, the composition of matter according to the invention and their individual components examined for the following three properties: 1) Tolerance to bile salts and bile and resistance to the juices the pancreas and the stomach.

2) Erzeugung von Ensymen 3) Beständigkeit gegenüber Sulfamiden. 2) Generation of enzymes 3) Resistance to sulfamides.

Es wurden die folgenden Verfahren angewandt: 1) Toleranz gegenüber Gallensalsen: Man verwendet nährboden, welche Gallensalze enthalten, in Petrisohalen für Gelose-Medien und in Reagensgläsern £Ir flüssige Medien. Daneben werden Vergleichs-Gläser mit flüssigem Medium nach Reading vorbereitet, und diese Gläser werden mit 10 Tropfen der nach 24 Stundenentstandenen Kultur von jedem Mikroorganismus oder der Zusammensetsung geimpft. Das gleiche Verfahren wird sur Ermittlung der Beständigkeit gegenüber den Säften der Bauchspeicheldrüse und der Magensek@ste angewandt.The following procedures were used: 1) Tolerance to Bile salsen: Culture media containing bile salts are used in Petrisohalen for gel media and liquids in test tubes £ Ir. There are also comparison glasses prepared with liquid medium according to Reading, and these glasses come with 10 drops the culture of each microorganism or composition formed after 24 hours vaccinated. The same procedure is used to determine the resistance to the Pancreatic and gastric juices applied.

2) Erzeugung von Enzymen Nach Literatur-Angaben werden Kulturen in flüssigen Medien hergestellt, um quantitative Aussagen über das enzymatische Vermögen der Mikroorganismen und der erfindungsgemäßen Zusammensetzung, insbesondere im Hinblick auf Protease und Amylase zu ermöglichen.2) Generation of enzymes According to the literature, cultures are in liquid media produced in order to make quantitative statements about the enzymatic capacity the microorganisms and the composition according to the invention, in particular with regard to to enable protease and amylase.

3) Beständigkeit gegenüber Sulfamiden In einem modifizierten Medium nach Reading stellt man jeweils um die Hälfte verdünnte Dosen her, ausgehend von 150 mg Carbäthoxysulfaäthylthiodiazol, 100 mg Sulfaguanidin. Man beobachtet dann den Einfluß dieser Sulfamide auf das Wachstum der erfindungsgemäßen Zusammensetzung einerseits und ihrer einzelnen Bestandteile andererseits.3) Resistance to sulfamides in a modified medium According to Reading, doses that are diluted by half are prepared, starting from 150 mg carbethoxysulfaethylthiodiazole, 100 mg sulfaguanidine. One then observes the influence of these sulfamides on the growth of the composition according to the invention on the one hand and its individual components on the other.

Es wurden die folgenden Ergebnisse erhalten: 1) Toleranz gegenüber Gallensalzen: Das Wachstum der erfindungsgemäßen Zusammensetzung iit sowohl in den Gelose-Medien, wie auch in den flssigen Medien befriedigend. Das Wachstum der einzelnen Bestandteile ist ebenfalls befriedigend.The following results were obtained: 1) Tolerance to Bile salts: The growth of the composition according to the invention iit both in the Loose media, as well as liquid media, are satisfactory. The growth of each Ingredients is also satisfactory.

Selbst in Gegenwart von Magen- und Bauchspeicheldrüsensekreten ist es befriedigend, während das Wachstum von B. subtilis durch diese Sekrete leicht behindert und das Wachstum von L. Brevis verzögert wird.Even in the presence of gastric and pancreatic secretions it is it is satisfactory, while the growth of B. subtilis through these secretions is easy and the growth of L. Brevis is delayed.

2) Erzeugung von Enzymen: Die folgende Tabelle zeigt die innerhalb von 4 Tagen (Protease) und innerhalb von 7 Tagen (Amylase) erzielte Produktion von Enzymen in Einheiten / comr Stamm Protease Amylase A. aerogenes 15 4,2 L. brevis 20 0,6 B. subtilis 80 7 Erfindungsgemäße Zusammensetzung 80 7 3) Beständigkeit gegenüber Sulfamident Sowohl bei der erfindungsgemäßen Zusammensetzung wie auch bei den einzeln verwendeten drei Keimen wird das Wachstum durch die Anwesenheit starker Konzentrationen von Sulfamiden, (nämlich 15, 10 und 10 mg der drei oben aufgeführten Sulfamide), praktisch nicht beeinflußt.2) Production of enzymes: The following table shows the production of enzymes achieved within 4 days (protease) and within 7 days (amylase) in units / comr strain protease amylase A. aerogenes 15 4.2 L. brevis 20 0, 6 B. subtilis 80 7 Composition according to the invention 80 7 3) Resistance to sulfamides Both with the composition according to the invention as well as with the three germs used individually, growth is caused by the presence of strong concentrations of sulfamides, (namely 15, 10 and 10 mg of the three sulfamides listed above), practically unaffected.

Selbstverständlich müssen die jeweiligen Mengen der drei Mikroorganismen in den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen ausgeglichen sein, um eine unzeitgemäße Entwicklung des einen auf Kosten des anderen zu vermeiden. Mit anderen Worten: Die-Zussmmensetzungen müssen. mehr von dem Mikroorganismus mit der geringsten Vermehrungsgeschwindigkeit und weniger von solchen mit einer höheren Geschwindigkeit enthalten.Of course, the respective amounts of the three microorganisms in the compositions according to the invention be balanced to an untimely Avoid developing one at the expense of the other. In other words: the compositions have to. more of the microorganism with the slowest growth rate and less of those with a higher rate included.

Als Beispiel seien die folgenden Kombinationen angegebent Lactobacillus brevis Bacillus subtilis Aerobacter aerogenes 0, 50 0,25 0,25 0,60 0,20 0,20 0,60 0,30 0,10 Die Erfindung bietet zum ersten Mal eine praktische und wir-. same Lösung des Problems der Regenerierung und Wiederherstellung des Gleichgewichts der Darm-Mikroflora und infolgedessen des physiologischen Gleichgewichts des Individiums verfügt, wenn diese Mikroflora gestört oder verändert wurde.As an example, the following combinations are given Lactobacillus brevis Bacillus subtilis Aerobacter aerogenes 0. 50 0.25 0.25 0.60 0.20 0.20 0.60 0.30 0.10 The invention offers for the first time a practical and we-. same solution the problem of regeneration and restoration of the balance of the intestinal microflora and consequently the physiological equilibrium of the individual disposes when this microflora has been disturbed or changed.

Die erfindungsgemäßen Präparate lassen sich in den verschiedensten Formen verabreichen. Zweckmäßigerweise sollten sie in die Form von lyophilisierten und gegebenenfalls aromatisierten Pulvern gebracht werden, die als Kapseln, Tabletten oder Suppositorien verabreicht werden, in einer Dosis von 100 bis 400 mg der Zusammensetzung in 24 Stunden.The preparations according to the invention can be used in the most varied Administer forms. Conveniently, they should be in the form of lyophilized and optionally flavored powders are brought in as capsules, tablets or suppositories are administered at a dose of 100 to 400 mg of the composition in 24 hours.

Anschließend folgt eine Zusammenfassung der klinischen Ergebnisse, die bei der Verwendung einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung erzielt wurden, welche aus gleichen Teilen der drei hauptsächlichsten Keime der physiologischen Flora bestand, nämlich: - einem Coliform (Aerobacter aerogenes) - einem Subtilis (b. subtilis) Dosis 50mg - einem Lactobazillus (b. brevis buchneri) Der Versuch wurde an 92 Patienten durchgeführt, wodurch sich statistisch verwertbare Schlüsse ziehen ließen. Es wurden Indikationen zweier Arten untersucht nämlich Heilungs und Verhdtungs-Indikationen; in äbereinstimmung mit der Klassifizierung von Cattan 1) Heilungs-Indikationent a) Diarrhöe , akut - saisonbedingt - infektiös - durch Lebensmittelvergiftung - durch Antibiotherapie b) Dia,rrhöe, chronisch - mit Ursprung im Zwölffingerdarm (Lamblias) - mit neurogenem Ursprung - auf Grund einer Kolik (Rectocolit hämorrh.) Colitis Colitis post-amöbial Sigmoiditie Krebs - senilen Ursprungs c) Dyspepsie, Gastralgie, Erbrechen d) Verstopfung 2) Verhütungs-Indikationen: Mit der erfindungsgemäßen Zusammensetzung wurde eine Behandlung im Zusammenhang mit einer massiven Antibiotherapie durchgeführt, welche aus verschiedenen Gründen verschrieben wurde.This is followed by a summary of the clinical results that were achieved using a composition according to the invention which consisted of equal parts of the three main germs of the physiological flora, namely: - a Coliform (Aerobacter aerogenes) - a subtilis (b. subtilis) dose 50mg - a lactobacillus (b. brevis buchneri) The experiment was carried out on 92 patients, from which statistically useful conclusions could be drawn. Indications of two types have been investigated, namely healing and hardening indications; in accordance with the classification of Cattan 1) healing indications a) diarrhea, acute - seasonal - infectious - through food poisoning - through antibiotherapy b) diarrhea, chronic - with origin in the duodenum (lamblias) - with neurogenic origin - due to a Colic (Rectocolit haemorrh.) Colitis Colitis post-amebial Sigmoiditie Cancer - senile origin c) Dyspepsia, gastralgia, vomiting d) Constipation 2) Contraceptive indications: With the composition according to the invention, a treatment was carried out in connection with a massive antibiotherapy, which consists of various Reasons was prescribed.

Die angewandte Dosierung betrug im Durchschnitt 2 2"Gelules" von 50 mg/24 Std.The dosage used averaged 2 2 gelules out of 50 mg / 24 hours

Die Ergebnisse wurden bewertet mit: - Ausgezeichnet, d. h. jenen überlegen, welche man gewöhnlich bei den üblichen Medikamenten der gleichen Art beobachtete, welche jedoch nur einen einzigen Keim enthalten, wie z.B. ein Coliform, einen Subtilis oder einen Lactobacillus.The results were rated as: - Excellent, i. H. superior to those commonly observed with common drugs of the same kind, but which only contain a single germ, such as a coliform, a subtilis or a lactobacillus.

- Gut, wenn sich die Ergebnisse etwa mit jenen vergleichen lassen, welche mit den klassischen Therapeutika erzielt wurden.- It is good if the results can be compared with those, for example which were achieved with the classic therapeutics.

- Mittelmäßig, wenn es sich nur um Teilerfolge handelt, oder wenn der Kranke nach der Einstellung der therapeutischen Behandlung einen Rückfall erleidet.- Mediocre, if only partial successes are involved, or if the patient relapses after cessation of therapeutic treatment.

- Bestreitbar, wenn es schwierig ist, eine Wirkung des Produktes zu erkennen, obwohl die Wirkung wahrscheinlich ist.- Disputable when it is difficult to get an effect of the product recognize although the effect is likely.

- Null.- zero.

Bei der Anwendung dieser Bewertungsskala lassen sich die erzielten Ergebnisse wie folgt zusammenfassen: 1) Heilung: - Ausgezeichnet 35,2% - Gut 35,2 % - Mittel 18,5 % - Bestreitbar 9,3% - Null 1,8 % 2) Verhütung: - Gut 97,4 % - Bestreitbar 2,6 s Gegenüber jenen Ergebenissen, welche der Fachmann bei den üblichen Therapeutika gewohnt ist, erscheinen diese Ergebnisse sehr bemerkenswert.When using this rating scale, the Summarize the results as follows: 1) Healing: - Excellent 35.2% - good 35.2% - medium 18.5% - arguable 9.3% - zero 1.8% 2) Contraception: - Good 97.4% - Disputable 2.6 s Compared to the results obtained by the expert is used to the usual therapeutics, these results appear very remarkable.

Claims

P a t e n t a n S »r U c h e 1. Process for the manufacture of medicaments for the regeneration of the intestinal microflora, characterized in that one Lacobacillus Brevis strain, a strain of Aerobaoter Aerogenes and a strain from Bacillus Subtilis @ üchtet, lyophilized, optionally flavored and in known way to tablets, capsules, suppositories and similar forms of use processed.

2. The method according to claim 1, characterized in that the three bacterial strains processed in the following proportions: Lacobacillus Brevis Bacillus Subtilis Aerobaotor aerogenes 0.50 0.25 0.25 0.60 0.20 0.20 0.60 0.30 0.10 3. Modification of the method according to claim 1, characterized in that that the respective bacterial strain can be replaced by a similar strain of the following Type replaced: Lacobacillus Brevis Bacillus Subtilis Aerobaoter Aerogenes Lactobacillus Bifidus Bacillus Mesentericus Escherichia Coli Lactobacillus Acidophilus Bacillus Pumilus Escherichia Intermedium Bacillus Megatherium Pseudomonas Fluores c ens Migula 4. The method according to claim 1 to 3, characterized in that the bacterial strains by gradually adapting it makes it more resistant to antibiotics and their antagonistic Effect against pathological yeasts increased.

For: 1Xociete d'Etudes et d'Applications Biochimiques, 2. Laboratoire d'Analyses et de Recherches Biologiques Mauvernay Center Europeen de Recherches Mauvernay