DE2347628A1

DE2347628A1 - IMMUNSUPPRESSIVE MEDICINAL PRODUCT AND METHOD FOR ITS MANUFACTURING

Info

Publication number: DE2347628A1
Application number: DE19732347628
Authority: DE
Inventors: Marc Dr Bonneau; Mireille Dr Latour
Original assignee: INST FRANCAIS D IMMUNOLOGIE
Current assignee: Institut Merieux SA
Priority date: 1972-09-22
Filing date: 1973-09-21
Publication date: 1974-04-04
Also published as: FR2201078A1; DE2347628C3; BE805141A; JPS577130B2; JPS4985221A; DE2347628B2; NL175625B; NL7313080A; LU68440A1; NL175625C; FR2201078B1

Description

Dr.Be/SDr Be/S

INSTITUT FRANCAIS D'IMMUNOLOGIE, 256, rue Marcel M6rieux, (69) Lyon 7^e /FrankreichINSTITUT FRANCAIS D'IMMUNOLOGY, 256, rue Marcel M6rieux, (69) Lyon 7 ^e / France

Immunsuppressives Arzneimittel und Verfahren zu seinerImmunosuppressive drug and method for its

HerstellungManufacturing

Die Erfindung "betrifft ein immunsuppressives biologisches Arzneimittel (Immundepressant) sowie ein Verfahren zu seiner Herstellung.The invention "relates to an immunosuppressive biological Medicinal product (immunodepressant) and a process for its production.

Das erfindungsgemäße Arzneimittel gestattet, eine wirksame Inhibierung (Depression) des immunologischen Systems zu erzielen, insbesondere die Inhibierung derjenigen Stoffe, die die zelluläre Immunität bewirken.The medicament according to the invention allows an effective inhibition (depression) of the immunological system achieve, especially the inhibition of those substances that cause cellular immunity.

Das Arzneimittel gemäß der Erfindung ist daher insbesondere zur Behandlung der Implantatabstoßung sowie zur Behandlung von immunologisch, auf . der Zellwirkung beruhenden Krankheiten (Autoaggressionskrankheiten) angezeigt.The medicament according to the invention is therefore in particular for the treatment of implant rejection as well as for treatment from immunological, to. diseases based on the effects of cells (autoaggression diseases).

Gegenstand der Erfindung ist ein immunsuppressives Arzneimittel, das dadurch gekennzeichnet ist, daß es immunsuppressive Globuline, insbesondere Gammagiobuline, enthält, die aus Piacentagewebe extrahiert worden sind, insbesondere aus menschlichem Placentagewebe.The invention relates to an immunosuppressive medicament which is characterized in that it is immunosuppressive Contains globulins, especially gammagiobulins, extracted from piacenta tissue, in particular from human placenta tissue.

Die erfindungsgemäß aus dem Placentagewebe extrahierten Gammaglobuline sind von gewöhnlichen Gammaglobulinen,The gamma globulins extracted from the placenta tissue according to the invention are of ordinary gamma globulins,

— 2 —- 2 -

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die man aus dem Blut oder dem Placentaserum erhält und die im allgemeinen als "Placenta-Gammaglobuline" bezeichnet werden und keinen merklichen immunsuppresiven Effekt aufweisen, verschieden. Vielmehr sind die Gammaglobuline des erfindungsgemäßen Arzneimittels unmittelbar an das Placentagewebe fixiert und können nicht durch übliche zur Gewinnung der "Placenta-Gammaglobuline" verwendete Methoden abgetrennt werden. Der Ausdruck "Extraktion" gemäß der Erfindung sagt daher, daß eine direkte Bindung zwischen dem Globulin und dem Gewebe gespalten wird.which are obtained from the blood or the placenta serum and which are generally called "placenta gamma globulins" and have no noticeable immunosuppressive effect, different. Rather are the gamma globulins of the medicament according to the invention are fixed directly to the placenta tissue and can not be separated by the usual methods used to obtain the "placenta gamma globulins". The term "extraction" according to the invention therefore means that there is a direct bond between the globulin and the tissue is split.

Die Gammaglobuline des erfindungsgemäßen Arzneimittels sind vorzugsweise solche, die aus dem Placentagewebe extrahiert worden sind, zweckmäßigerweise durch Auswaschen. Sie werden durch Behandlung des Gewebes mit einer Pufferlösung eines pH-Wertes im sauren Bereich erhalten.The gamma globulins of the medicament according to the invention are preferably those that have been extracted from the placenta tissue, expediently by washing out. They are made by treating the tissue with a buffer solution with a pH in the acidic range obtain.

Die Gammaglobuline des Arzneimittels gemäß der Erfindung stellen sich vorzugsweise als ein therapeutisches Serum zur Anwendung beim Menschen dar. νThe gamma globulins of the medicament according to the invention preferably present as a therapeutic serum for use in humans. ν

Diese Gammaglobuline zeigen u.a. die folgenden charakeristischen Eigenschaften:These gamma globulins show, among other things, the following characteristic properties:

Sie reagieren und fällen menschliche Antigammaglobuline mit einem Kaninchen- oder Schafserum aus. Sie zeigen eine Zytotoxizität null bzw. eine sehr schwache Zytotoxizität durch menschliche Lymphozyten in Gegenwart des Komplements. Andererseits zeigen sie Inhibierungseigenschaften des Immuno-Zellhaftungsvermögens, wie sich ggf. durch den Rosettentest zeigen läßt, der darin besteht, daß die Bildung von Rosetten beobachtet wird, d.h.They react and precipitate human antigammaglobulins with a rabbit or sheep serum. they show zero cytotoxicity or very weak cytotoxicity by human lymphocytes in the presence of the complement. On the other hand, they show inhibitory properties of immuno-cell adherence, such as can possibly be shown by the rosette test, which consists in observing the formation of rosettes, i.e.

409814/1122 - 3 -409814/1122 - 3 -

die Agglutination der roten Blutkörperchen des Schafes rings um die menschlichen Lymphozyten in Gegenwart des Komplements vom Meerschweinchen.the agglutination of sheep red blood cells around the human lymphocytes in the presence of the guinea pig complement.

Die Erfindung hat ebenfalls ein Verfahren zur Herstellung des Arzneimittels zum Gegenstand, das dadurch gekennzeichnet ist, daß ein zerteiltes oder zerriebenes PIacentagewebe ausgewaschen wird, daß danach die an das Gewebe fixierten Gammaglobuline extrahiert werden, und daß die extrahierten Gammaglobuline von den Gewebebestandteilen abgetrennt werden, wonach die Gammaglobuline in Arzneimitteldosierung konditioniert werden können.The invention also has a process for the production of the medicament as subject, which is characterized by is that a fragmented or crushed PIacentagewebbe washed out, that afterwards the to the Tissue-fixed gamma globulins are extracted, and that the extracted gamma globulins are extracted from the tissue constituents are separated, after which the gamma globulins can be conditioned in drug dosage.

Gemäß einer bevorzugten Arbeitsweise wird das zerkleinerte Placentagewebe vor der Extrektion mehreren aufeinanderfolgenden Wäschen unterworfen, wobei das Placentagewebe aus einem Gemisch von Placentas in ausreichender Zahl, daß es eine Ansammlung gewünschter spezifischer Gewebe darstellt, herstammt. Die Flüssigkeit der letzten Wäsche enthält keine wesentlichen Mengen Protein mehr.According to a preferred mode of operation, the comminuted placenta tissue is removed several times in succession before the extraction Subjected washes, the placenta tissue from a mixture of placentas in sufficient Figure that it represents a collection of desired specific tissues. The liquid of the last Laundry no longer contains significant amounts of protein.

Danach wird bei saurem pH-Wert eine Elution der Transplantat icnsrAntikörper, die am gewaschenen Placentagewebe fixiert sind, durchgeführt.Thereafter, at acidic pH, an elution of the transplant icnsr antibodies, which are on the washed placenta tissue are fixed.

Die Extraktion der Gammaglobuline wird dadurch bewerkstelligt, daß das Gewebe mit einer Glycin-HGl-Pufferlösung, vorzugsweise bei einem pH-Wert zwischen 2 und 3, behandelt wird.The extraction of the gamma globulins is accomplished by treating the tissue with a glycine-HGl buffer solution, is preferably treated at a pH between 2 and 3.

Die Behandlung, die etwa 30 Minuten dauert, wird bei einer Temperatur bewirkt, die vorzugsweise zwischen 10 und 38° C oder z.B. bei 37° C liegt.The treatment, which lasts about 30 minutes, is effected at a temperature which is preferably between 10 and 38 ° C or e.g. at 37 ° C.

• - 4 -AQ98U/1122• - 4 -AQ98U / 1122

Die Extraktion der Immunoglobuline durch Elution kann mehrmals erneut hintereinander mit dem Placentagewebe vorgenommen werden.The extraction of the immunoglobulins by elution can repeated several times in a row with the placenta tissue.

Nach der Elution wird schnell die Abtrennung der im sauren Eluat enthaltenen G-ammaglobuline durch übliche physikalisch-chemische Verfahren vorgenommen, wie durch Ausfällung in Äthanol oder in Polyphosphorsäure. Danach wird der pH-Wert des Milieus, das die Immunoglobuline enthält, auf einen Wert eingestellt/ der im wesentlichen beim iTeutralpunkt liegt, und es wer dsl eine oder mehrere Dialysen durchgeführt. Der gegebenenfalls gebildete restliche iüederschlag wird durch Zentrifugieren abgetrennt. Gemäß einer vorteilhaften Arbeitsweise wird anschließend das Präparat aus den Immunoglobulinen durch Zugeben von Äthanol rekonzentriert, worauf ein oder mehrere aufeinanderfolgende Dialysen durchgeführt werden, um die Gammaglobuline zu reinigen.After the elution, the G-ammaglobulins contained in the acidic eluate are quickly separated off by conventional methods Physico-chemical processes carried out, such as by precipitation in ethanol or in polyphosphoric acid. Thereafter the pH of the medium containing the immunoglobulins is adjusted to a value that is substantially is at the neutral point, and there will be one or more Dialyses performed. Any remaining precipitate formed is separated off by centrifugation. According to an advantageous mode of operation, then the preparation from the immunoglobulins is re-concentrated by adding ethanol, whereupon one or more consecutive Dialyses are done to cleanse the gamma globulins.

Die Präparate, die aus unterschiedlichen Extraktionen herstammen, können entweder vereinigt werden und in das gleiche Arzneimittel einverleibt werden oder sie können getrennt zur Herstellung von verschiedenen Arzneimitteln verwendet werden.The preparations that come from different extractions can either be combined and transferred to the the same drugs can be incorporated or they can be used separately for the production of different drugs be used.

In dem folgenden Beispiel, das nicht als Beschränkung aufzufassen ist, wird im einzelnen eine Durchführungsform der Erfindung sowie die Eigenschaften des erhaltenen Arzneimittels erläutert.The following example, which is not to be taken as a limitation, details one embodiment of the invention as well as the properties of the drug obtained explained.

example

Das Ausgangsmaterial besteht aus einem Gemisch von 3 0 frischen Placentas, die nicht gefroren sind, welche beiThe starting material consists of a mixture of 30 fresh placentas, which are not frozen, which at

- 5 40981 A/1122- 5 40981 A / 1122

BAD ORIGINALBATH ORIGINAL

? 3 Λ 7 R ? 8? 3 Λ 7 R? 8th

+4° G in einer PBS-Pufferlösung konserviert worden sind, welche aus folgenden Bestandteilen besteht: 8 g Natriumchlorid, 0,2 g Kaliumchlorid, 1,44 g ITa₂IIPO₄ (2H₂O), 0,2 g KH₂PO,, aufgefüllt mit destilliertem Wasser auf 1 1. Dieses Material wird zerkleinert, wodurch 8,8 kg Gewebematerial und 6 1 Placenta-Blutflüssigkeit gewonnen werden. Anschließend wird mit der PBS-Pufferlösung in einer Menge von 4 1 Pufferlösung je kg Placentagev/ebe derart gewaschen, daß nach "dem Waschen die Gewichtsmehge des Gewebematerials, das gewonnen wird, 7,8 kg beträgt.+ 4 ° G have been preserved in a PBS buffer solution, which consists of the following components: 8 g sodium chloride, 0.2 g potassium chloride, 1.44 g ITa ₂ IIPO ₄ (2H ₂ O), 0.2 g KH ₂ PO ,, made up to 1 1. with distilled water. This material is crushed, whereby 8.8 kg of tissue material and 6 l of placenta blood fluid are obtained. It is then washed with the PBS buffer solution in an amount of 4 liters of buffer solution per kg of placenta volume in such a way that after the washing, the weight of the tissue material that is obtained is 7.8 kg.

Es werden 5 aufeinanderfolgende Waschen durchgeführt. Bei der letzten Wäsche enthält die Waschflüssigkeit praktisch keine Proteine mehr. Nach dem letzten Waschen ist das Gewicht der gewonnenen Gewebeinasse auf 5 kg reduziert.5 consecutive washes are carried out. In the last wash, the washing liquid contains practically no more proteins. After the last wash, the weight of the tissue mass obtained is reduced to 5 kg.

Ss wird nun eine erste Extraktion bei einem pH-Wert "2,2 mit den 5 kg gewaschenes Gemisch des Gewebes mit 20 1 Glycin-HCl-Pufferlösung unter mäßigem Rühren 30 Minuten bei 37° C durchgeführt. Die Glycin-HCl-Pufferlösung, die verwendet wurde, bestand je Liter aus einem Gemisch < von zwei Lösungen in den folgenden Mengenverhältnissen; 420 ml einer jjösung von 0,1 m-HCl, verdünnt auf die Dichte 1,120 sowie 580 ml einer Salzlösung aus 4,3 g Glycocoll 3,39 g Natriumchlorid, aufgefüllt mit destilliertem Wasser auf 58Ό ml.Ss is now a first extraction at a pH "2.2 with the 5 kg washed mixture of the tissue with 20 1 glycine-HCl buffer solution with moderate stirring for 30 minutes carried out at 37 ° C. The glycine-HCl buffer solution, which was used consisted of a mixture of two solutions per liter in the following proportions; 420 ml of a 0.1 m HCl solution, diluted to the density 1.120 and 580 ml of a salt solution from 4.3 g Glycocoll 3.39 g sodium chloride, made up with distilled water to 58Ό ml.

Anschließend wird zentrifugiert, wobei 20 1 einer ersten überstehenden Flüssigkeit und 4,8 kg Gewebematerial gewonnen v/erden.It is then centrifuged, 20 l of a first supernatant liquid and 4.8 kg of tissue material being obtained v / earth.

Der pH-Wert der ersten überstehenden Flüssigkeit wird durch eine Tris-HCl-Pufferlösung vom pH-Wert 10, die ausThe pH of the first supernatant liquid is determined by a Tris-HCl buffer solution of pH 10, which is made up

- 6 - U 0 9 8 U / 1 1 2 2- 6 - U 0 9 8 U / 1 1 2 2

ÖAOÖAO

Ι 1 folgender Lösung bestand, erhöht: 12,1 g (0,1 m) Trishydroxymethylaminomethan, destilliertes Wasser auf 1 1 sowie HCl bis zum. pH-Wert 10.Ι 1 of the following solution passed, increased: 12.1 g (0.1 m) Trishydroxymethylaminomethane, distilled water 1 1 and HCl up to. pH 10.

Der gebildete Niederschlag wird abgetrennt, und es wird eine Lösung von etwa 29 1 erhalten, welcher Äthanol bis zu einer Konzentration von 40 ^cfj zugefügt v/ird. Danach v/erden 210 g eines Niederschlags erhalten, der isoliert wird und zuerst einer Dialyse gegen Wasser und danach gegen PBS-Iufferlösung unterworfen wird. Schließlich wird erneut eine dialyse gegen V/asser durchgeführt, v/o nach 0,200 1 einer Lösung von 7, 32 g der Ga.amaglobuline je liter erhalten v/erden.The precipitate formed is separated off, and there is obtained a solution of about 29 1, which ethanol up to a concentration of 40 ^c fj added v / ill. 210 g of a precipitate are then obtained, which is isolated and subjected first to dialysis against water and then against PBS buffer solution. Finally, dialysis against water is carried out again, v / o after 0.200 1 of a solution of 7.32 g of the Ga.amaglobulins per liter is obtained.

Die 4,8 kg Gewebematerial, die vorher ausgefällt worden sind, werden einer zweiten Extraktion beim pH-Wert 2,2 mit einer Glycin-HGl-Pufferlösung über 30 Hinuten bei 37° G unterworfen, in der gleichen Weise-wie oben beschrieben. Die zweite überstehende Flüssigkeit mit einem Volumen von 20 1 wird durch Zentrifugieren gewonnen und der pH-Wert der .Lösung auf den wert 7 durch Hinzufügen von Tris-HCl-Pufferlösung erhöht. Ss wird Äthanol bis zu einer Konzentration von 40 -.*.. zugefügt, und der erhaltene Niederschlag v/ird zweimal hintereinander dialysiert, einmal ,jegen Wasser und das zweite ..al gegen I⁵BS-Pufferlösung. I-iS werden 20 ml Lösung erhalten, die 5*85 g Gammaglobuline je Liter enthalten.The 4.8 kg of tissue material which have previously been precipitated are subjected to a second extraction at pH 2.2 with a glycine-HGl buffer solution over 30 minutes at 37 ° G, in the same way as described above. The second supernatant liquid with a volume of 20 1 is obtained by centrifugation and the pH of the solution is increased to 7 by adding Tris-HCl buffer solution. Ss is ethanol up to a concentration of 40 -. * .. added and the precipitate obtained v / ith dialyzed twice, once, and the second water Jegen ..al against I ⁵ BS-buffer solution. I-iS 20 ml of solution are obtained which contain 5 * 85 g of gamma globulins per liter.

Die in dieser Lösung enthaltenen Gamniaglobuline werden durch Ausfällen und Konditionieren mit einem gewöhnlichen tnerapeutiscnen Serum abgetrennt.The gamnia globulins contained in this solution will be separated by precipitation and conditioning with an ordinary therapeutic serum.

- 7 -Λ09 814/1 122 _{BAD OR1ÖINAL} - 7 -Λ09 814/1 122 _{BAD OR1ÖINAL}

Eine elektrophoretische Analyse auf Immunstoffe der durch Extraktion erhaltenen Gammaglobuline ergab in erster Linie die Gegenwart von Gammaglobulinen vom Typ G sowie solcher Gammaglobuline der Typen A und M.An electrophoretic analysis for immune substances of the gamma globulins obtained by extraction showed in primarily the presence of gamma globulins of type G and such gamma globulins of types A and M.

Es wird sichergestellt, daß die in dieser Weise erhaltenen Gammaglobuline keine lymphozytotoxische Wirkung in Gegenwart eines Überschusses vonKaninchen-Komplement aufweisen. Wenn eine zytotoxische Aktivität ausgelöst wird, kann das Produkt gegebenenfalls einem enzymatischen Abbau durch Pepsin oder Papain unterworfen werden, um Fragmente der Immunglobuline Fab~ und Fab'₂ zu erhalten, die nicht cytotoxisch sind und immunsuppressive Stoffe darstellen.It is ensured that the gamma globulins obtained in this way do not have a lymphocytotoxic effect in the presence of an excess of rabbit complement. If a cytotoxic activity is triggered, the product of immunoglobulins ~ Fab and Fab _'2 may optionally be subjected to enzymatic degradation by pepsin or papain in order to obtain fragments which are not cytotoxic and represent immunosuppressive agents.

Die Gammaglobuline des Arzneimittels gemäß der Erfindung inhibieren die gemischte Lymphozytenreaktion, d.h. die Transformation einer Kultur von menschlichen Lymphozyten, die von zwei histologisch unverträglichen Organismen herstammt. Die gemischte Lymphozytenreaktion wird als in vitro-Äquivalent der Zellreaktion angesehen, die durch Einführen eines Transplantats, das mit einem Organismus unverträglich ist, eingeleitet wird.The gamma globulins of the drug according to the invention inhibit the mixed lymphocyte reaction, i.e. the Transformation of a culture of human lymphocytes from two histologically incompatible organisms comes from. The mixed lymphocyte response is considered to be the in vitro equivalent of the cell response produced by Introducing a transplant that is incompatible with an organism.

Der Inhibierungstiter des Gammaglobulin-Präparats wird durch Lymphoblasten-Transformation in Mischkultur einer Mischung von Lymphozyten, die von zwei verschiedenen Spenderorganismen stammen, gemessen.The inhibition titer of the gamma globulin preparation becomes by lymphoblast transformation in mixed culture of a Mixture of lymphocytes from two different donor organisms measured.

Die Messung erfolgt durch Impulszählung in einer Szintillationsflüssigkeit, in welcher durch 16-stündiges Aussetzen in Gegenwart von 1 μ,ο von 3 H-Methyl-The measurement is carried out by pulse counting in a scintillation liquid, in which by exposure for 16 hours in the presence of 1 μ, ο of 3 H-methyl-

- 8 9-8 U/1122- 8 9-8 U / 1122

thymidin (spezifische Aktivität 1.00 /^c/mMol) radioaktiv gemachte Zellkerne einer Zellkultur vorliegen. Der Inhibierungstiter von 50 fo beträgt 1/100 bei dem Präparat, das gemäß dem Beispiel hergestellt wurde (entsprechend 0,05 mg/ml).thymidine (specific activity 1.00 / ^ c / mmol) radioactively made cell nuclei of a cell culture. The inhibition titer of 50 fo is 1/100 in the case of the preparation which was prepared according to the example (corresponding to 0.05 mg / ml).

Die Gammaglobuline gemäß der Erfindung zeigen gleichfalls die Transformation und die Proliferation von menschlichen Lymphozyten, die in Gegenwart eines Antigens kultiviert worden sind, wie z.B. von Tuberkulin oder verschiedenen anderen Antigenen.The gamma globulins according to the invention also show the transformation and proliferation of human lymphocytes that are in the presence of an antigen such as tuberculin or various other antigens.

Die Gammaglobuline gemäß der Erfindung inhibieren gleichfalls in höheren Konzentrationen, wie sie in den beschriebenen Versuchen verwendet wurden, die Transformation und die Proliferation von menschlichen Lymphozyten, die durch Mitogene induziert worden sind, wie z.B. vom Phytohämagglutinin.The gamma globulins according to the invention also inhibit in higher concentrations, as in the experiments described were used, the transformation and the proliferation of human lymphocytes, induced by mitogens such as phytohemagglutinin.

Das erfindungsgemäße Arzneimittel ist besonders für die vorbeugende Behandlung der Transplantatabstoßung beim Menschen sowie für die Behandlung von Autoaggressionskrankheiten geeignet und angepaßt.The medicament according to the invention is particularly suitable for preventive treatment of transplant rejection in humans as well as for the treatment of autoaggressive diseases suitable and adapted.

Gemäß einer bevorzugten Ausführungsform der ErfindungAccording to a preferred embodiment of the invention

u. a.i.a.

kann das Arzneimittel/mit anderen Immuninhibitoren zusammen angewendet werden, wie mit Antilymphozytenserum, das durch Immunisation eines Tieres mit Hilfe von Lymphozyten menschlichen Ursprungs oder von Affen hergestellt worden ist,oder mit chemischen Immuninhibitoren.the drug / can be used together with other immune inhibitors, such as anti-lymphocyte serum, produced by immunizing an animal with the help of lymphocytes of human origin or monkeys or with chemical immune inhibitors.

Die immunsuppressive Dosis der Placenta-Gammaglobuline gemäß der Erfindung, die bei einem erwachsenen MenschenThe immunosuppressive dose of placenta gamma globulins according to the invention applied to an adult human

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anwendbar ist, kann, um ein einfaches Beispiel zu geben, in der Größenordnung von 500 mg je Tag und während mehrerer Tage, betragen.is applicable, can, to give a simple example, on the order of 500 mg per day and during several days.

In der Praxis hängt diese Dosis von den zu behandelnden Beschwerden ab wie auch von der therapeutischen Nutzbarmachung damit zusammenhängender immunsuppressiver Arzneimittel, wie dem Antilymphozytenserum oder den chemischen Immuninhibitoren.In practice, this dose depends on the person being treated Complaints from as well as from the therapeutic utilization related to it immunosuppressive drugs such as antilymphocyte serum or the chemical immune inhibitors.

Das Produkt kann durch intraarterielle Perfusion der transplantierten Organismen im Augenblick der Übertragung und für Operationsfolgen angewendet werden, kann aber auch auf parenteralem Weg verabreicht werden.The product can be obtained by intra-arterial perfusion of the transplanted organisms at the moment of Transfer and used for surgical sequelae, but can also be administered parenterally will.

Die Erfindung wurde gemäß einer bestimmten Ausführungsform erläutert, wobei jedoch dies keine Beschränkung bedeutet. Sie kann vielmehr in verschiedenen Modifikationen der Anwendungsformen oder der Stoffe durchgeführt werden, ohne vom Erfindungsgedanken abzuweichen.The invention has been illustrated in accordance with a particular embodiment, but none Restriction means. Rather, it can be used in various modifications of the application forms or the substances are carried out without deviating from the concept of the invention.

- Patentansprüche -- patent claims -

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Claims

7347628 - ίο - claims

1. Immunosuppressive drug, characterized in that that it contains immunosuppressive human gamma globulins, extracted from placenta tissue.

2. Medicament according to claim 1, characterized in that that the gamma globulins have been extracted by elution from human placenta tissue.

3. Medicament according to one of claims 1 or 2, characterized in that the gamma globulins with an animal serum react with human antigammaglobulins, have a lymphocytotoxicity of practically 0, the lymphoblast transformation of human lymphocytes, which has been stimulated by phytohemagglutinin and various antigens, inhibit and the Lymphoblast transformation of human lymphocytes, which are histologically incompatible, inhibit in mixed culture.

4. Medicament according to one of claims 1 to 3 »characterized in that the gamraaglobulins by elution a mixture of human placenta finely divided by treatment with a G-lycin-HCl buffer have been extracted.

5. Medicament according to one of claims 1 to 4 »characterized in that the gamma globulins in a therapeutic Serum that is suitable for humans are included.

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6. Medicament according to one of claims 1 to 5, characterized characterized in that it is in a dosage form for "human treatment" comprising about Contains 500 mg of protein.

7. Medicament according to one of claims 1 to 6, characterized in that it is also at least contains another immunosuppressive agent.

8. Medicament according to claim 7, characterized in that it contains a human antilymphocyte serum.

9. A method for producing the medicament according to any one of claims 1 to 8, characterized in that that finely divided or crushed placenta tissues are washed, that afterwards those attached to the tissue Gamma globulins are extracted and that the extracted gamma globulins from tissue components be separated.

10. The method according to claim 9 »characterized in that the extraction using an acidic buffer solution is carried out from pH 2 to 3.5.

11. The method according to claim 10, characterized in that the extraction time is about 30 minutes.

12. The method according to any one of claims 9 to 11, characterized characterized in that the extraction is carried out at a temperature of the order of 37 ° C.

13. The method according to any one of claims 9 to 12, characterized that after the extraction the gamma globulins

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be separated from the tissue components by centrifugation.

14. The method according to claim 13, characterized in that following the centrifugation, the pH the supernatant liquid is increased to a substantially neutral pH value that ethanol is added and that at least one dialysis is carried out to concentrate the gamma globulins.

15. The method according to any one of claims 9 to 14, characterized characterized in that the washing of the placenta tissue is carried out with the aid of a PBS buffer solution.

16. The method according to any one of claims 9 to 15, characterized characterized in that several successive washes are carried out.

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