DE2226338A1

DE2226338A1 - POLYENE MACROLIDE ANTIBIOTIC ACID ADDITION SALTS AND METHOD FOR THE PREPARATION OF THEIR ESTERS

Info

Publication number: DE2226338A1
Application number: DE2226338A
Authority: DE
Inventors: Witold Stefan Mechlinski; Carl Paul Schaffner
Original assignee: Rutgers Research and Educational Foundation
Current assignee: Rutgers Research and Educational Foundation
Priority date: 1971-06-07
Filing date: 1972-05-30
Publication date: 1973-01-04
Also published as: US3945993A; CH580642A5; AR193264A1; CA978519A; SE415020B; IE36381B1; GB1386325A; NO139174C; FR2140407B1; NO139174B; BE784207A; IE36381L; JPS5627519B1; FR2140407A1; NL7207700A

Description

30. Kai 197Γ:30. Quay 197Γ:

ΟφΙ.'/ng. A. GrünecktrΟφΙ. '/ Ng. A. Grünecktr

Dr.-lng. H. KinkeldeyDr.-lng. H. Kinkeldey Dr.-lng. W, StockmairDr.-lng. W, Stockmair

β Mönchen 22, MaximiHanttr. 43β Mönchen 22, MaximiHanttr. 43

RUTGERS EHSSARCH AND EDUCATIONAL ·RUTGERS EHSSARCH AND EDUCATIONAL

FOUNDATIONFOUNDATION

New Brunswick, New JerseyNew Brunswick, New Jersey

Polyen-?fakrolid-Antibiotilaims--Sfiureadditior;.'^:?^alrve und Verfahren zur Herstellungen von deren EsternPolyene -? Fakrolid-Antibi ot ilaims-- Sfiureadditior ;. ' ^: ? ^ alrve and process for the preparation of their esters

Die Erfindung betrifft Derivate, insbesondere Säureadditionssalze von Polyen-Makrolid-Antibiotika, und ist besonders auf die Herstellung neuer Verbindungen dieser"Klasse gerichtet, die bedeutende Vorteile oder Eigenschaften unter Entfaltung der antimikrobiellen/bioTögischen Wirksamkeit der zugrundeliegenden oder Stammsubstanzen aufweisen.The invention relates to derivatives, particularly acid addition salts of polyene macrolide antibiotics, and is particularly aimed at the production of new compounds of this "class, the significant advantages or properties with the development of the antimicrobial / bio-biological effectiveness of the underlying or have parent substances.

Die Polyen-Makrolid-Antibiotika sind eine anerkannte Verbindungsklaase, die in herkömmlicher V/eise durch Kultivieren verschiedener geeigneter Organismen und Extrahieren der Substanz auf der Kultur gewonnen werden. Sie sind in erster Linie als Mittel gegen Fungi anerkannt, obgleich sie im einen oder anderen Pa]JIe eindeutig brauchbare Wirksamkeit gegen andere Mikroorganismen entfalten können. Die Verbindungen zeichnen sich grundlegend und in einzigartiger V/eise durch einen grossen Lactpnring aus, der eine Kette von konjugierten Doppelbindungen, insbesondere mit 4-, 5, 6 oder 7 solchen Bindungen,The polyene macrolide antibiotics are a recognized class of compounds, those in a conventional manner by cultivating various suitable organisms and extracting the substance to be gained on the culture. They are primarily recognized as a remedy against fungi, although they are in one way or another Pa] JIe clearly useful effectiveness against others Microorganisms can develop. The connections are fundamentally and in a unique way characterized by a large Lactpnring, which is a chain of conjugated double bonds, in particular with 4, 5, 6 or 7 such bonds,

209881/0725209881/0725

umfasst, wobei die Verbindungen jeweils als Tetraene, Pentaene, Hexaene und Heptaene und zusammen als Polyene bezeichnet werden. So sind die Stararaantibiotika makrozyklische,/MaKrolide bekannte Laktone mit hohem Molekulargewicht (z.B. im Bereich von 700 - 1200), und da sie einen Aminozuckeranteil enthalten, können sie als ein Aminozuckerglykosid eines Makrolidkerns enthaltend beschrieben werden, der einen Ghromophor von 4 bis. 7 konjugierten Doppelbindungen aufweist.comprises, the compounds each as tetraenes, pentaenes, Hexenes and heptenes and collectively referred to as polyenes. So the Starara antibiotics are macrocyclical, / MaKrolide known lactones with a high molecular weight (e.g. in the range of 700 - 1200), and because they contain an amino sugar content, they can be described as containing an amino sugar glycoside of a macrolide nucleus which has a chromophore of 4 to. Has 7 conjugated double bonds.

Als Klasse ist die Molekülstruktur der Stammverbindungen sehr gut definiert, indem sie in allen Fällen in erster Linie aus einem raakrozyklischen Lactonkern besteht, der eine lange Kette von Kohlenstoffatomen (z.B. im Bereich von 20 bis 40) darstellt, die durch ein einziges Lactonsauerstoffatom zur Bildung des Makrolidrings geschlossen ist. Die Kohlenstoffatome sind direkt, aufeinanderfolgend jeweils miteinander durch Einfach- oder Doppelbindungen, überwiegend Einfachbindungen, aber in allen Fällen mit den oben genannten konjugierten Doppelbindungen zum Ring verbunden. Wie bereits" festgestellt, umfasst die Verbindung auch einen einzelnen Aminozucker, der als Substituent an den Ring gebunden ist und eine freie primäre Aminogruppe trägt. Auch liegen eine Reihe von -OH-Gruppen vor, die jeweils an eine Vielzahl von Kohlenstoffatomen des Rings (anderen als den doppelt gebundenen Atomen) gebunden sind und schliesslich liegt bei den Polyen-Makroliden, die die Erfindung betrifft, eine einzelne Carboxylgruppe vor, die auch als Substituent an den Ring gebunden ist. Normalerweise findet⁷man zusätzliche Substitution, die unter den speziellen Gliedern der Klasse variiert, von der man jedoch nicht annimmt, dass sie die grundlegend einzigartige Molekülstruktur oder die fundamentalen Eigenschaften dieser Verbindungen als Mittel gegen Fungi ändern. Zur zusätzlichen Substitution gehörenAs a class, the molecular structure of the parent compounds is very well defined, in that in all cases it primarily consists of a macrocyclic lactone nucleus, which is a long chain of carbon atoms (e.g. in the range from 20 to 40), which is created by a single lactone oxygen atom to form the Macrolide ring is closed. The carbon atoms are directly, consecutively, connected to one another by single or double bonds, predominantly single bonds, but in all cases with the above-mentioned conjugated double bonds to form the ring. As stated earlier, the compound also includes a single amino sugar attached to the ring as a substituent and bearing a free primary amino group are attached as the double-bonded atoms) and finally lies with the polyene macrolides, which relates to the invention, a single carboxyl group before, which is bound as a substituent on the ring. Normally takes ⁷ to additional substitution, the particular among the members of the Class varies, but is not believed to change the fundamentally unique molecular structure or properties of these compounds as antifungal agents

209881/0725209881/0725

Substituenten einer oder mehrerer Arten wie beispielsweise verschiedene Alkyle, Sauerstoff, Epoxy und in einer Reihe von Fällen Gruppen, die als Arylaminkomponenten bezeichnet werden können.Substituents of one or more kinds such as various alkyls, oxygen, epoxy, and in a number of cases groups called arylamine components can.

Die Strukturen sind nachfolgend näher definiert, einschliesslich einer Zahl speziell erläuterter Beispiele, aber es.ist klar, dass die gegen Fungi wirksamen Polyen-Stammantibiotika eine anerkannte Substanzklasse darstellen, die Makrolide sind, welche genau durch die oben definierte Zusammensetzung unterschieden sind, einschliesslich insbesondere der benannten Kette konjugierter Doppelbindungen, und sich so spezifisch von anderen chemischen Verbindungen, einschliesslich anderen makrozyklischen Lactonen, unterscheiden.The structures are further defined below, including a number of specifically illustrated examples, but it is it is clear that the polyene strain antibiotics effective against fungi represent a recognized class of substances that are macrolides, which are distinguished precisely by the composition defined above, including in particular the named chain conjugated double bonds, and so specific to other chemical compounds, including other macrocyclic ones Lactones.

Wie erkennbar werden wird, wurden die Glieder der Klasse, auf die sich die Erfindung richtet und welche sich durch eine freie Carboxylgruppe auszeichnen, aufgrund des Vorliegens einer solchen Gruppe und auch des freien Aminorestes in dem Aminozucker als Amphoter erkannt. Tatsächlich hat der amphotere Charakter dieser wasserunlöslichen Verbindungen dazu beigetragen, wie weiter unten erkennbar werden wird, Schwierigkeiten bei dem Versuch, sie in wasserlösliche Form zu überführen, zu überwinden·As will be seen, the members of the class to which the invention is directed and which is distinguished by a distinguish free carboxyl group, due to the presence of such a group and also the free amino radical in the Aminosugars recognized as amphoterics. In fact, the amphoteric nature of these water-insoluble compounds has helped as will be seen below, difficulties in attempting to convert them into water-soluble form, to overcome·

Beispiele dieser spezifischen Klasse gegen Fungi wirksamer amphoterer Antibiotika umfassen: Amphotericin A, Nystatin, Pimaricin und Rimocidin, alles Tetraene; Eurocidin, ein Pentaen; Cryptocidin und Mediocidin, Hexaene; und Amphotericin B, Candicidin, Candidin, Candimycin, Hamycin, Levorin und Trichomycin, die Heptaene darstellen.Examples of this specific class of amphoteric antibiotics effective against fungi include: amphotericin A, nystatin, Pimaricin and rimocidin, all tetraenes; Eurocidin, a pentaene; Cryptocidin and mediocidin, hexaene; and Amphotericin B, Candicidin, Candidin, Candimycin, Hamycin, Levorin and Trichomycin, which are heptaenes.

209881/0725209881/0725

Obgleich die Antibiotika dieser Klasse als stark wirksam erkannt wurden, hauptsächlich gegen Fungi, und eine Reihe solcher Antibiotika ausgiebig verwendet wurden und im Handel erhältlich sind, waren sie im allgemeineren ihrer Verwendbarkeit beschränkt durch das Fehlen wirksamer Wasserlöslichkeit oder gleichwertiger Dispergierbarkeit in Wasser. Gelegentlich wurden sogenannte Salze, wie beispielsweise Natriumsalze, durch Umsetzung von Alkali mit der Carboxylgruppe hergestellt, um eine Substanz zu ergeben, die eine gewisse Wasserlöslichkeit hat, solche Produkte jedoch haben Löslichkeit nur bei verhältnismässig hohem pH entwickelt und litten unter einer Verschlechterung ihrer Stabilität. Andererseits waren Bemühungen zur Herstellung sogenannter Säuresalse durch Säureaddition an die Aminogruppe entweder erfolglos oder von geringer oder gar keiner Verwendbarkeit, da die Eigenschaft der Wasserlöslichkeit dann nur bei unerwünscht niedrigen pH-Werten und mit beträchtlicher Unbeständigkeit entwickelt wird.Although the antibiotics of this class have been recognized as highly effective, primarily against fungi, and a number of such Antibiotics have been used extensively and are commercially available, they were in the more general of their usefulness limited by lack of effective water solubility or equivalent dispersibility in water. Occasionally so-called salts, such as sodium salts, were produced by reacting alkali with the carboxyl group, to give a substance that has some water solubility, but such products only have solubility at developed relatively high pH and suffered a deterioration in their stability. On the other hand, there were efforts for the production of so-called acid salts by acid addition to the amino group either unsuccessfully or to a lesser extent or no usability at all, since the property of water solubility then only occurs at undesirably low pH values and is developed with considerable volatility.

In der US-PS 3 244 590 wird eine Klasse von N-Acylderivaten von Heptaen-Antibiotika offenbart, die eine gewisse antimikrobielle Wirksamkeit behalten und in wasserlösliche Salze (durch alkalische Reaktion mit einer Carboxylgruppe) zu überführen sind, was zu einer gewissen Verwendbarkeit in Wasser führt. Es wurde jedoch gefunden, dass zumindest bei einer Reihe von Fällen die biologische Aktivität erheblich vermindert wird, und so blieb, während diese wasserlöslichen N-Acylderivate eine gewisse Brauchbarkeit besitzen, ein beträchtlicher Bedarf an Produkten, die mit erheblicher Wirksamkeit in wässrigen Medien brauchbar sind. U.S. Patent 3,244,590 discloses a class of N-acyl derivatives of heptaene antibiotics revealed that have a certain antimicrobial Maintain effectiveness and convert it into water-soluble salts (through an alkaline reaction with a carboxyl group) are, which leads to a certain usability in water. However, it has been found that at least for a number of Cases the biological activity is significantly reduced, and so remained while these water-soluble N-acyl derivatives possessing some utility, a considerable need for products which are useful with considerable effectiveness in aqueous media.

Ein weiteres Vorgehen zur Erlangung einer in V/asser dispergierbaren Zusammensetzung erfolgte durch Herstellung einesAnother approach to obtaining a water dispersible Composition was done by making one

209881/0725209881/0725

Komplexes aus Amphotericin B mit Desoxycholsäure, die als Detergens wirkt. Komplexe dieser Art bilden jedoch keine echten Lösungen; die Substanz scheint lediglich als Kolloid dispergiert zu sein, und dementsprechend ist der Anwendungsbereich beschränkt·Complex of amphotericin B with deoxycholic acid, used as a detergent works. Complexes of this kind, however, do not form real solutions; the substance appears to be merely dispersed as a colloid to be, and accordingly is the scope limited·

Im allgemeineren Sinne ist die Erfindung mit der Verbesserung der Polyen-Antibiotika nicht nur hinsichtlich der Erzielung wesentlicher Wasserlöslichkeit, sondern auch hinsichtlich anderer Anwendungsmöglichkeiten befasst. Obgleich die Grundverrbindungen in einer Reihe organischer Lösungsmittel· löslich sind, treten unter,gewissen Umständen von möglicher Bedeutung beispielsweise Schwierigkeiten auf, z.B. wenn- es erwünscht ist, das Antibiotikum in eine Lipidbase einzuarbeiten, z.B. eine Salbe oder Creme, die einen beträchtlichen Fettgehalt aufweist und praktisch nicht wässrig sein soll. Unter jedem dieser Aspekte, besonders aber im Hinblick auf die Schaffung wasserlöslicher Produkte ist es u.a. ein wichtiges Ziel der Erfindung, wie noch erkennbar werden wird, neue und ungewöhnlich wertvolle Derivate dieser Antibiotika zu schaffen·In a more general sense, the invention with the improvement of polyene antibiotics is not just in terms of achievement essential water solubility, but also with regard to other possible applications. Although the basic connections are soluble in a number of organic solvents are, under certain circumstances, of possible importance for example difficulties, e.g. when it is desired to incorporate the antibiotic into a lipid base, e.g. an ointment or cream that has a considerable fat content and is said to be practically non-aqueous. Under everyone of these aspects, but especially with regard to the creation of water-soluble products, it is, among other things, an important goal of Invention, as will become apparent, to create new and unusually valuable derivatives of these antibiotics

Die Erfindung beruht in erster Linie darauf, dass die genannten Polyenverbindungen, wie oben definiert, wirksam in einen Ester, insbesondere einen Methyl-, Äthyl- oder Propylester, durch Umsetzung unter geeigneten Bedingungen, die in bevorzugter Form neue Verfahrensmerkmale, wie unten ausgeführt, darstellen, überführt werden können, dass das sich ergebende Derivat, der genannte Ester, dann in ein anderes Derivat, das Säureadditionssalz, durch Umsetzung mit der freien Aminogruppe des Aminozuckers überführt werden kann und dass solche Produkte, ganz speziell die Säuresalzderivate, neue Verbindungen von aussergewöhnlichem Vorteil darstellen.The invention is based primarily on the aforementioned Polyene compounds, as defined above, effectively convert into an ester, in particular a methyl, ethyl or propyl ester, by implementation under suitable conditions, the new process features in preferred form, as detailed below, represent, can be converted that the resulting derivative, the said ester, then into another derivative, the Acid addition salt, by reaction with the free amino group of the amino sugar can be converted and that such products, especially the acid salt derivatives, new compounds of represent an exceptional advantage.

209881/0725209881/0725

Speziell die definierten Ester selbst zeichnen sich durch Erhaltung der aritimikrobiellen Aktivität aus, die vergleichbar ist mit der der Stamm- oder Grundverbindung, wie reichlich durch Untersuchungen gezeigt wurde. Soweit festgestellt werden konnte, scheint ein solcher Ester eines gegen Fungi wirkenden Polyen-Antibiotikums zuvor weder hergestellt noch, was noch wichtiger ist, die erhebliche biologische Wirksamkeit solcher Ester verrautet oder vorhergesagt¹ worden zu sein. Obgleich der Ester selbst, der im wesentlichen in Wasser un-Specifically, the defined esters themselves are characterized by the preservation of the aritimicrobial activity, which is comparable to that of the parent or base compound, as has been abundantly shown by studies. As far as it has been ascertained, it appears that such an antifungal polyene antibiotic ester has not been previously produced, and more importantly, the significant biological efficacy of such esters has not been known or predicted ¹ . Although the ester itself, which is essentially un-

■4■ 4

löslich bleibt, in der gleichen Weise wie die Stammverbindung von denkbarer Brauchbarkeit ist, liegt seine hauptsächliche Verwendbarkeit in der Bedeutung als Zwischenstufe oder Ausgangsmaterial zur Herstellung der beschriebenen Säuresalze, die hergestellt werden können, um z.B. praktische Wasserlöslichkeit bei pH-Werten bei oder nahe dem Neutralpunkt zu besitzen, d.h. also weit entfernt von im wesentlichen sauren oder alkalischen Bedingungen. Wie oben ausgeführt, waren Versuche, Löslichkeit durch Säurezusatz zu den Stammverbindungen zu erzielen, erfolglos und versprachen keinen Erfolg auf diesem Wege, da die beschränkte Wasserlöslichkeit, wenn überhaupt erzielt, im allgemeinen nur bei extrem niedrigen, d.h. sauren pH-Werten, und selbst dann mit erheblicher Unbeständigkeit des Polyens selbst, entwickelt werden konnte.remains soluble, in the same way as the parent compound is of conceivable utility, its primary utility is as an intermediate or starting material for the preparation of the acid salts described, which can be prepared, e.g. to have practical water solubility at pH values at or near the neutral point, i.e. far from essentially acidic or alkaline conditions. As stated above, attempts were Achieving solubility by adding acid to the parent compounds was unsuccessful and promised no success on this Ways because of the limited water solubility, if at all achieved, generally only at extremely low, i.e. acidic, pH values, and even then with considerable instability of the Polyens himself, could be developed.

So umfasst die Erfindung in einem besonderen, aber ungewöhnlich wichtigen Sinne eine neue Klasse von Verbindungen, die die wasserlöslichen Säureadditionssalze eines niederen Alkylesters, insbesondere des Methyl-, Äthyl- oder Propylesters, der definierten Polyenmakrolide darstellen* Es wurde gefunden, dass sich solche Verbindungen durch erhebliche antimikrobielle Wirksamkeit auszeichnen, die mit der Wirksamkeit der Stammsubstanz vergleichbar ist, sowie durch echte und bedeutende Wasserlöslichkeit, z.B. bei oder nahe dem Neutralpunkt. PoIg-Thus, in a particular but unusually important sense, the invention encompasses a new class of compounds which are water-soluble Acid addition salts of a lower alkyl ester, in particular the methyl, ethyl or propyl ester defined Polyene macrolides represent * It has been found that such compounds are significantly antimicrobial Distinguish effectiveness that is comparable to the effectiveness of the parent substance, as well as real and significant Water solubility, e.g. at or near the neutral point. PoIg-

209881/0725209881/0725

lieh sind die Produkte bei einer Vielzahl von Umständen brauchbar, wo die im wesentlichen wasserunlöslichen Antibiotikabasen, als gegen Fungi stark wirksame Substanzen bekannt, für ungeeignet befunden wurden, wie es z.B. unter Bedingungen, unter denen die Vermeidung oder Inhibierung des Auftretens oder Wachstums von Fungi und dgl. Organismen oder ein anderer Angriff unter Infektion durch sie ein wässriges Medium erfordert, und insbesondere, wo Bemühungen, das Mittel in ein nichtwässriges Medium einzubringen, unerwünschte Folgen hatten. the products are useful in a variety of circumstances, where the essentially water-insoluble antibiotic bases, known to be highly effective substances against fungi, are unsuitable were found, for example under conditions in which the avoidance or inhibition of the occurrence or Growth of fungi and similar organisms or another attack with infection by them requires an aqueous medium, and particularly where efforts to incorporate the agent in a non-aqueous medium have had undesirable consequences.

In einem allgemeineren Sinne lässt sich feststellen, dass die neuen Endprodukte, als die Säureadditionssalze der genannten Ester definiert, andere spezielle Verwendbarkeit besitzen, z. B. bei der Herstellung fettlöslicher Zusammensetzungen, zu unterscheiden von wasserlöslichen Verbindungen, die besonders zur Verwendung in entsprechenden Medien auf Lipidbasis geeignet sind. Dies ist von besonderem Vorteil für verschiedene Salben, Cremes oder dgl., die für lokale Anwendung bestimmt sind, und auch für andere Zwecke, z.B. für landwirtschaftliche Zwecke wie bei der Behandlung von pflanzlichen Pilzinfektionen, wo es wünschenswert sein kann, Mittel zu haben, die nicht leicht abgewaschen werden und eine verlängerte Wirksamkeit in äusserem Oberflächenkontakt besitzen.In a more general sense it can be stated that the new end products, as the acid addition salts of the named Esters defined, have other special utility, e.g. B. in the manufacture of fat-soluble compositions, too differ from water-soluble compounds, which are particularly suitable for use in corresponding lipid-based media are. This is of particular advantage for various ointments, creams or the like, which are intended for local application and also for other purposes, e.g. for agricultural purposes such as the treatment of herbal fungal infections, where it may be desirable to have funds that are not easily washed off and a prolonged one Have effectiveness in external surface contact.

Ein weiteres spezielles Merkmal der Erfindung·liegt in bestimmten neuen Arbeitsweisen zur Herstellung des Esters, insbesondere im Hinblick auf die Empfindlichkeit dieser Polyenmakrolide gegenüber vielen Reagentien. So sind gewöhnliche Veresterungsmethoden unter Verwendung von Chlorwasserstoffeäure oder Schwefelsäure und Alkohol in hohem Masse unerwünscht, weil die erforderliche Konzentration solcher Säuren dazu neigt', die Wirksamkeit gegen Funci zu zerstören. Es wurde nun gefun-Another special feature of the invention resides in certain new working methods for the preparation of the ester, in particular with regard to the sensitivity of these polyene macrolides against many reagents. Such are common esterification methods using hydrochloric acid or sulfuric acid and alcohol are highly undesirable because the required concentration of such acids tends to ' destroy the effectiveness against Funci. It has now been found

209881/0725209881/0725

den, dass unter zahlreichen anderen möglichen Reagentien zur Veresterung Verbindungen wie Diazomethan, Diazoäthan und Diazopropan hochwirksam und unerwartet selektiv für diese Antibiotika sind, d.h. bei der Vermeidung irgendwelcher gegenteiliger Nebenreaktionen.den that among numerous other possible reagents for Esterification compounds such as diazomethane, diazoethane and diazopropane are highly effective and unexpectedly selective for these antibiotics i.e. avoiding any adverse side reactions.

Ein sehr bedeutendes Verfahrensmerkmal liegt in dem ungewöhnlichen Vorteil des Einsatzes eines speziellen Lösungsmittels, nämlich Tetrahydrofuran, zur Veresterung des Antibiotikums mit Diazomethan oder einem anderen Reagens dieser Gruppe und zur Durchführung der vorhergehenden Herstellung eines solchen Reagens . Während Äthyläther, in welchem Diazomethan oder dgl. normalerweise hergestellt und verwendet werden, verhältnismässig unwirksam ist, weil die Stammpolyen-Antibiotika im wesentlichen darin unlöslich sind, ist Tetrahydrofuran für beide Stufen geeignet, insbesondere, weil es in der Lage ist, diese amphoteren Antibiotika, die zunächst in Dimethylsulfoxyd gelöst werden, für die gewünschte Esterreaktion genügend in Lösung zu halten, ohne auf ihre biologische Wirksamkeit beträchtlich einzuwirken. Tatsächlich scheint das Stammantibiotikum in verhältnismässig kurzer Reaktionszeit nach und nach in dem Tetrahydrofuran in Lösung'gebaa, worauf sich der Ester in Lösung bildet und sammelt, und das Ende der Reaktion ist leicht bestimmbar durch das Verschwinden ungelösten Antibiotikums. A very important procedural feature is the unusual Advantage of using a special solvent, namely tetrahydrofuran, to esterify the antibiotic with diazomethane or another reagent of this group and for carrying out the previous preparation of such Reagent. While ethyl ether, in which diazomethane or the like. Are normally produced and used, relatively Ineffective because the parent poly antibiotics are essentially insoluble in it, tetrahydrofuran is for both Stages suitable, in particular, because it is capable of these amphoteric antibiotics, which are initially in dimethyl sulfoxide be dissolved, to keep enough in solution for the desired ester reaction without affecting their biological effectiveness to act considerably. In fact, the parent antibiotic appears to be and in a relatively short reaction time after in the tetrahydrofuran in solution'gebaa, whereupon the Ester forms and accumulates in solution, and the end of the reaction can be easily determined by the disappearance of undissolved antibiotic.

Zur Herstellung des gewünschten Säureadditionssalzes wird der Polyenmakrolidester aus der obigen Lösung gewonnen und dann in Wasser bei geeignetem pH, z.B. nicht weit vom Neutralpunkt entfernt, mit einer in geeigneter Weise verdünnten Konzentration der gewählten Säure, z.B. Salzsäure, Schwefelsäure oder einer anderen Säure j wie unten erklärt, behandelt. Das obigeTo prepare the desired acid addition salt, the polyene macrolide ester is obtained from the above solution and then in water at a suitable pH, e.g. not far from the neutral point, with a suitably diluted concentration the chosen acid, e.g. hydrochloric acid, sulfuric acid or another acid j as explained below. The above

2098 81/07252098 81/0725

Verfahren wurde auf eine Reihe von Stamraverbindungen der genannten Klasse angewandt und die sich ergebenden Ester wurden in Säuresalze überführt, d.h. durch Additionsreaktion mit der freien Aminogruppe des Aminozuckers, wobei sich biologisch
wirksame Produkte mit verbesserten Eigenschaften und, wie
oben ausgeführt, stark erweiteter Verwendbarkeit ergaben.■ So wurden z.B. die Hydrochloride von Amphotericin B-Methylester, Candicidin-Methylester, Trichomycin-Methylester und _f
verschiedenen anderen in verhältnismässig hohem Reinheitsgrad hergestellt und zeigten gute Wasserlöslichkeit. Untersuchungen von Ester- und Salzprodukten haben deutlich gute antimikrobielle Wirksamkeit-von der Natur der Stammaterialien gezeigt. The method was applied to a number of Stamra compounds of the class mentioned and the resulting esters were converted to acid salts, ie by addition reaction with the free amino group of the amino sugar, whereby biologically
effective products with improved properties and how
As stated above, the usability of the amphotericin B methyl ester, Candicidin methyl ester, Trichomycin methyl ester and _f
various others produced in a relatively high degree of purity and showed good water solubility. Studies of ester and salt products have clearly shown good antimicrobial efficacy - from the nature of the parent materials.

Weitere Merkmale, Einzelheiten und Vorteile der Erfindung ergeben sich aus der folgenden Beschreibung von Ausführungsbeispielen sowie der Figuren. Darin zeigt:Further features, details and advantages of the invention emerge from the following description of exemplary embodiments as well as the figures. It shows:

Fig. 1, 2 und 3 jeweils Molekülstrukturformeln nach derzeitiger Kenntnis von drei Beispielen erfindungsgemässer Produkte, nämlich der Hydrochloride der Methylester von Amphotericin B, Nystatin und Pimaricin;Figs. 1, 2 and 3 each present molecular structural formulas Knowledge of three examples of products according to the invention, namely the hydrochlorides the methyl esters of amphotericin B, nystatin and pimaricin;

Fig. 4 ein UV-Spektrum von Amphotericin B-MethylesterFigure 4 is a UV spectrum of amphotericin B methyl ester

Fig. 5 eine graphische -Darstellung eines UV-Spektrums5 shows a graphic representation of a UV spectrum

von Amphotericin B-Methylester-Hydrochlorid
in wässriger Lösung und auch das UV-Spektrum für das Stamm-Amphotericin B, in Wasser dispergiert; of amphotericin B methyl ester hydrochloride
in aqueous solution and also the UV spectrum for the parent amphotericin B, dispersed in water;

209881/0725209881/0725

- ίο -- ίο -

Fig. 6 eine graphische Darstellung eines IR-Spek-Fig. 6 is a graphic representation of an IR spectrum

truras der Base Amphotericin B und ihres . Methylesters, in der gleichen Darstellung überlagert;truras of the base amphotericin B and theirs. Methyl ester, in the same representation superimposed;

Fig. 7 eine ähnliche Darstellung des IR-Spektruns7 shows a similar representation of the IR spectrum

des Amphotericins B-Äthylesters und zum Vergleich das Spektrum der Base Amphotericinof the amphotericin B ethyl ester and, for comparison, the spectrum of the base amphotericin

Fig. 8 bis 12 von Photgrafien von Dünnschichtchromato-Fig. 8 to 12 of photographs of thin layer chromatography

grammen kopierte Zeichnungen, die jeweils die verschiedenen chemischen Identitäten der Antibiotikabasen und ihrer Ester anzeigen, wobei die speziellen. Substanzen wie folgt sind: in Fig. 8 Amphotericin B und sein Methyl- und Äthylester; in Fig. 9 Nystatin . und Pimaricin, jeweils mit ihren Methylestern; Fig. 10 Mediocidin und sein Methylester; Fig.gram copied drawings, each showing the different chemical identities of the Show antibiotic bases and their esters, with the special. Substances as follows are: in Figure 8 amphotericin B and its methyl and ethyl esters; in Figure 9 nystatin . and pimaricin, each with their methyl esters; Fig. 10 mediocidin and its methyl ester; Fig.

11 Hamycin und sein Methylester; und in Fig.11 Hamycin and its methyl ester; and in Fig.

12 Trichomycin und sein Methylester·12 trichomycin and its methyl ester

Wie oben angegeben betrifft die Erfindung die genannten Ester der definierten Klasse von Polyenmakroliden und am wichtigsten die Saureadditionssalze solcher Ester, z.B. hergestellt aus Stammverbindungen wie beispielsweise Amphotericin B, Nystatin, Trichomycin, Mediocidin, Candicidin, Pimaricin, Candidin, Hamycin und vielen anderen.As indicated above, the invention relates to said esters of the defined class of polyene macrolides and most importantly the acid addition salts of such esters, e.g. prepared from parent compounds such as amphotericin B, nystatin, Trichomycin, Mediocidin, Candicidin, Pimaricin, Candidin, Hamycin and many others.

In allen Fällen ist das bevorzugte Verfahren zur Herstellung dieser Produkte im wesentlichen das gleiche das benötigte Reagens, z.B. Diazomethan zur Herstellung des Methylesters, wirdIn all cases, is the preferred method of manufacture of these products becomes essentially the same as the required reagent, e.g., diazomethane, to make the methyl ester

209881/0725209881/0725

- 11 -- 11 -

zunächst hergestellt, wobei es in Lösung in Tetrahydrofuran anfällt. Darauf wird das gewählte Polyenmakrolid, bevorzugt in anfänglicher Lösung in Dimethylsulfoxyd, mit der Diazomethanlösung und, wenn gewünscht, mit weiterem Tetrahydrofuran gemischt, worauf die Veresterung aufgelöst wird, und der letztlich erhaltene Methylester wird darauf ausgefällt und in geeigneter Weise gewonnen. Schliesslich wird der Methylester mit der gewählten Säure, z.B. Salzsäure,'behandelt, um das gewünschte wasserlösliche Säuresalz zu erhalten, das in geeigneter Weise gewonnen wird, z.B. durch Lyophilisierung, was zu einem Endprodukt hoher Reinheit führt, d.h. einer Reinheit,' die mit der des bevorzugt reinen Antibiotikums vergleichbar ist, das der Veresterung unterworfen wurde.initially produced, where it is obtained in solution in tetrahydrofuran. Then the chosen polyene macrolide is preferred in an initial solution in dimethyl sulfoxide, with the diazomethane solution and, if desired, mixed with further tetrahydrofuran, whereupon the esterification is dissolved and that ultimately methyl ester obtained is then precipitated and recovered in a suitable manner. Eventually it becomes the methyl ester treated with the chosen acid, e.g. hydrochloric acid, to obtain the desired to obtain water-soluble acid salt, which is obtained in a suitable manner, e.g. by lyophilization, what leads to an end product of high purity, i.e. a purity comparable to that of the preferably pure antibiotic is that has been subjected to esterification.

Das bevorzugte Vorgehen wird am besten im einzelnen durch ein Beispiel der obigen Stufenfolge erläutert. Wie verständlich werden wird, ist es sehr erwünscht, Substanzen wie beispielsweise Diazomethan, Diazoäthan und Diazopropan in frischem Zustand zur sofortigen 'Verwendung bei der Esterreaktion herzustellen. Sie sind verhältnismässig instabil und erfordern darüber hinaus Sorgfalt bei der Handhabung aufgrund der Toxizität; so sollte die Herstellung solcher Verbindungen mit den nötigen Sicherheitsvorrichtungen aufgrund der Unbeständigkeit und der Notwendigkeit zur Entfernung und Beseitigung von Dämpfen durchgeführt werden.The preferred procedure is best explained in detail by an example of the above sequence of stages. How understandable it is very desirable to use substances such as diazomethane, diazoethane and diazopropane in the fresh state for immediate use in the ester reaction. They are relatively unstable and require more In addition, care in handling due to toxicity; so should the making of such connections with the necessary safeguards due to inconsistency and the need to remove and dispose of Steaming can be carried out.

Das spezielle Beispiel, angeführt unter Bezug auf die Herstellung von Derivaten von Amphotericin B, ist wie folgt:The specific example given with reference to the preparation of derivatives of Amphotericin B is as follows:

Herstellung von Diazomethan; 2g Kaliumhydroxyd wurden in 1,5 ml Wasser in einem 100 ml-Destillationskolben gelost, der mit einem Tropftrichter und einem wirksamen Kühler ausgestattet Production of diazomethane; 2 g of potassium hydroxide was dissolved in 1.5 ml of water in a 100 ml distillation flask equipped with a dropping funnel and an efficient condenser

2098 81/072 52098 81/072 5

war· Die Lösung wurde rait 4- ml 95#igem Äthanol und 20 ml Tetrahydrofuran (z.B. von Handelsquälitat, frei von Peroxiden) verdünnt. Der Kühler wurde mit einem geeigneten Vorlageadapter und einem 100 ml-Kolben als Vorlage verbunden, alle mit geeigneter Einrichtung zur sicheren Gasableitung. Der Vorlagekolben wurde mit Eis gekühlt. Nach dem Erhitzen des Inhalts des Destillationskolbens zum schwachen Sieden wurde durch den Tropftrichter eine Lösung eingebracht, die 8,Jg p-Tolylsulfonylmethylnitrosamid (das eines der bekannten Vorläufer oder Ausgangsmaterialien für Diazomethan ist) in JO ml Tetrahydrofuran enthält, wobei die Zutropfrate so eingestellt wurde, dass sie der Destillationsgeschwindigkeit etwa gleich war. Das Diazomethan, das in gelöster Form in Tetrahydrofuran erzeugt wurde, destillierte mit letzterem ab und kondensierte als gelbe Flüssigkeit in der Vorlage, Nach dem Entleeren des Tropftrichters wurde eine weitere Menge (10 ml) Tetrahydrofuran in der gleichen Weise wie zuvor zur Entfernung des Restprodukts aus dem Reaktionsgemisch zugesetzt. Die Destillation wurde als abgeschlossen betrachtet, wenn das Destillat farblos wurde. Nachdem zuerst der Reaktionskolben in Eis gekühlt wurde, wurde die tiefgekühlte Vorlage entfernt und es wurde gefunden, dass sie etwa 1,0 bis 1,2gDiazomethan in etwa 40 ml Tetrahydrofuran enthielt. Es wurde bis zur Verwendung im Eis aufbewahrt· Aufgrund der Unbeständigkeit dieses Reagens sollte es tatsächlich gewöhnlich am selben Tage zur Veresterung eines Polyenmakrolids wie beispielsweise Amphotericin B verwendet werden·The solution was diluted with 4 ml of 95% ethanol and 20 ml of tetrahydrofuran (eg of commercial quality, free of peroxides). The cooler was connected to a suitable template adapter and a 100 ml flask as template, all with suitable equipment for safe gas discharge. The receiver flask was cooled with ice. After the contents of the distillation flask had been heated to a low boil, a solution was introduced through the dropping funnel containing 8 μg of p-tolylsulfonylmethylnitrosamide (which is one of the known precursors or starting materials for diazomethane) in 50 ml of tetrahydrofuran, the dropping rate being adjusted so that that it was about the same as the rate of distillation. The diazomethane, which was produced in dissolved form in tetrahydrofuran, distilled off with the latter and condensed as a yellow liquid in the receiver added to the reaction mixture. The distillation was considered complete when the distillate became colorless. After the reaction flask had first been cooled in ice, the frozen template was removed and it was found that it contained about 1.0 to 1.2 g of diazomethane in about 40 ml of tetrahydrofuran. It was kept in ice until use · Due to the instability of this reagent, it should in fact usually be used on the same day to esterify a polyene macrolide such as Amphotericin B ·

Production of amphotericin B methyl ester:

1,0 g Amphotericin B (Squibb; hochrein, Probe 972 mcg/mg) wurde in 10 ml Dimethylsulfoxid unter Verwendung einer Gewebemühle (tissue grinder) gelöst. Die Lösung wurde in einen 100-1.0 g of amphotericin B (Squibb; high purity, sample 972 mcg / mg) was dissolved in 10 ml of dimethyl sulfoxide using a tissue mill (tissue grinder) solved. The solution was poured into a 100

209881/0725209881/0725

ml-Erlenmeyer-Kolben mit Hilfe von 10 ml Tetrahydrofuran, das so zur Verdünnung verwendet wurde, überführt. Der Kolben-wurde mit einem Stabmagneten zum Rühren nach herkömmlicher magnetischer Aussenrührung versehen und_s bei 0 C in Eis gekühlt gehalten, während gerührt wurde. Während dieses Vorgehens wurde ein beträchtlicher Anteil des Amphotericins B ausgefällt, und eine solche Ausfällung erwies sich (in wiederholten Versuchen) als normal. Zu der gerührten und gekühlten Mischung (0 C) wurde langsam frisch (wie oben) hergestellteDiazomethanlosung in Tetrahydrofuran zugesetzt, wobei insgesamt 15 ml in etwa 10 Minuten verwendet wurden. Hierbei löste sich das Amphotericin B und die Veresterung erfolgte und lief zu Ende4 wenn gewünscht, kann der Abschluss der Reaktion durch Dünnschichtchromatographie, überprüft werden, die wie unten erklärt.durchgeführt wird.ml Erlenmeyer flask with the aid of 10 ml tetrahydrofuran, which was used for dilution, transferred. The piston is provided with a bar magnet for stirring according to conventional magnetic Aussenrührung _s and kept refrigerated at 0 C in ice while stirring. During this procedure a significant amount of the amphotericin B was precipitated and such precipitation was found (in repeated experiments) to be normal. To the stirred and cooled mixture (0 C) was slowly added freshly prepared (as above) diazomethane solution in tetrahydrofuran, a total of 15 ml being used in about 10 minutes. The amphotericin B dissolved and the esterification took place and proceeded to the end.4 If desired, the completion of the reaction can be checked by thin-layer chromatography, which is carried out as explained below.

Das Produkt wird bevorzugt umgehend isoliert, um Nebenreaktionen zu vermeiden. Hierzu wurde das Reaktionsgemisch mit 15 ml trockenem Methylalkohol verdünnt und langsam in 250 ml trockenen iVfchyläther, der mit einem Magnetrührer gerührt wurde, gegossen. Es wurde etwa. 5 Minuten weitergerührt, und der Niederschlag wurde dann durch Zentrifugieren entfernt. Die überstehende Flüssigkeit wurde verworfen (obwohl sie zur Gewinnung zusätzlichen Produkts, wenn gewünscht, behandelt werden kann), und der Niederschlag wurde mit 50 ml trockenem Äther gewaschen, worauf wieder zentrifugiert wurde. Diese Trennung wurde in vorteilhafter Weise noch zweimal wiederholt, und das Produkt wurde unter Vakuum getrocknet. Die Ausbeute betrug 85O bis 900 mg eines goldgelben Pulvers, das sich bei einer Bestimmung als der gewünschte Methylester von Amphotericin B erwies. The product is preferably isolated immediately in order to avoid side reactions. For this purpose, the reaction mixture with 15 ml diluted dry methyl alcohol and slowly dry in 250 ml iVfchyläther, which was stirred with a magnetic stirrer, poured. It was about. Stirred for 5 minutes, and the precipitate was then removed by centrifugation. The supernatant liquid was discarded (although it was for recovery additional product, if desired, can be treated), and the precipitate was washed with 50 ml of dry ether, after which it was centrifuged again. This separation was advantageously repeated twice more, and the product was dried under vacuum. The yield was 85O up to 900 mg of a golden yellow powder that is found in a determination proved to be the desired methyl ester of amphotericin B.

Herstellung von Amphotericin B-Methylester-Hydrochlorid: Eine bestimmte Menge, z.B. 1,6 g, Amphotericin B-Methylester Production of amphotericin B methyl ester hydrochloride: A certain amount, e.g. 1.6 g, amphotericin B methyl ester

209881/0725209881/0725

(hergestellt wie vorstehend beschrieben) wurde in 50 ^l eiskaltem Wasser unter Verwendung einer Gewebemühle suspendiert. Die Suspension wurde in einen 100 ml-Erlenmeyer-Kolben gebracht, der mit einem Stabmagneten zum Rühren versehen war, und wurde in einem Eisbad gerührt, um die Temperatur auf etwa 0° G zu senken. Unter Rühren wurde langsam aus einem Tropftrichter 0,1 η Salzsäure in Wasser in genügender Menge und Geschwindigkeit zugetropft, so dass der pH des Reaktionsgemisches zwischen 6 und 5 gehalten wurde· Es zeigte sich, dass der suspendierte Methylester langsam in Lösung ging. V/enn das Gemisch nicht mehr Säure aufnahm, d.h..wenn ein weiterer leichter Zusatz von Säure den augenscheinlichen Gehalt an ungelöstem Material nicht weiter verringert^ wurde der Vorgang als beendet betrachtet. An diesem Punkt hatte der pH vorzugsweise einei Wert von 6, und es wurde gefunden, dass etwa 15 ml verdünnte Säurelösung verwendet wurden. Es erwies sich als nicht ratsam, den pH irgendwann unter 5 fallenzulassen. Ein gewisser Anteil ungelöster Feststoffe verblieb, und er wurde durch Zentrifugieren entfernt und als Verunreinigung verworfen; tatsächlich wird auf diese Weise jedes nichtumgesetzte, den Methylester verunreinigende Amphotericin B entfernt, so dass das Verfahren eine weitere Reinigungsstufe liefert. Die das Salzprodukt enthaltende überstehende Lösung wurde auf etwa 150 ml mit Wasser verdünnt und lyophilisiert, d.h. bei geringem Druck unter Gefriertrocknungsbedingungen getrocknet. Die Ausbeute betrug 1,5g eines goldgelben Produktes, das aus dem gewünschten Säureadditionssalz, d.h. dem Hydrochlorid des Amphotericin B-Methylesters, bestand, wie in Fig. 1 wiedergegeben. (prepared as described above) was in 50 ^ l ice cold Suspended water using a tissue mill. The suspension was placed in a 100 ml Erlenmeyer flask, which was provided with a bar magnet for stirring and was stirred in an ice bath to bring the temperature to about 0 ° G lower. While stirring, 0.1 η hydrochloric acid in water was slowly added in sufficient quantity from a dropping funnel Added dropwise at a rate so that the pH of the reaction mixture was kept between 6 and 5 · It was found that the suspended methyl ester slowly went into solution. V / hen the mixture no longer absorbed acid, i.e. when another The slight addition of acid did not reduce the apparent content of undissolved material any further considered ended. At this point the pH was preferably 6 and about 15 ml dilute acid solution were used. It proved inadvisable to drop the pH below 5 at any time. Someone specific Fraction of undissolved solids remained and it was centrifuged removed and discarded as an impurity; in fact, any unreacted den Methyl ester contaminating amphotericin B is removed so that the process provides a further purification stage. The the The supernatant solution containing salt product was diluted to about 150 ml with water and lyophilized, i.e. at a low level Print dried under freeze drying conditions. The yield was 1.5 g of a golden yellow product from the desired acid addition salt, i.e. the amphotericin B methyl ester hydrochloride, as shown in FIG.

Die Eigenschaften von Amphotericin B-Methylester, z.B„ des Derivats, wie es vor der Bildung des Säuresalses hergestellt wurde, waren wie folgt:The properties of amphotericin B methyl ester, e.g. "the derivative, how it was made before the formation of the acid sals were as follows:

209881/0725209881/0725

Der Ester ist löslich in Methylalkohol, Äthylalkohol, Tetrahydrofuran, Dimethylformamid und Dimethylsulfoxid. Er ist wenig löslich in Äthylacetat und in Wasser undunlöslich in Petroläther und Äthyläther. Die Substanz hat keinen Schmelzpunkt und zersetzt sich fortwährend beim Erhitzen, wobei die Zersetzung oberhalb 175° C rasch wird. Sie zeigt die typische Lichtabsorption von Heptaenen, wie dies das UV-Spektrum in Fig. 4 zeigt, mit grösseren Absorptionsmaxima bei 364, 383 und 406 m/U. Dieses Spektrum wurde in herkömmlicher Weise angefertigt und aufgezeichnet, wobei Amphotericin B-Methylester genau wie in dem obigen Beispiel hergestellt in Methanollösung in einer Konzentration von 5 Mikrogramrn pro ml ver-" wendet wurde. Die spezifische Extinktion eines solchen Produktes (ohne weitere Reinigung), bestimmt in der üblichen Weise als eI , war 1480, und im Vergleich mit dem Wert von 1680 für die Base zeigte reines Amphotericin B, dass das Produkt, der Ester, zu 88 % rein war. Wie oben erklärt, kann eine beträchtliche weitere Reinigung erzielt' v/erden, indem z.B. das Säureadditionssalz hergestellt und gewonnen wird.The ester is soluble in methyl alcohol, ethyl alcohol, tetrahydrofuran, dimethylformamide and dimethyl sulfoxide. It is sparingly soluble in ethyl acetate and in water and insoluble in petroleum ether and ethyl ether. The substance has no melting point and continues to decompose when heated, with the decomposition becoming rapid above 175 ° C. It shows the typical light absorption of heptaenes, as the UV spectrum in FIG. 4 shows, with larger absorption maxima at 364, 383 and 406 m / rev. This spectrum was prepared and recorded in a conventional manner, using amphotericin B methyl ester prepared in methanol solution exactly as in the example above at a concentration of 5 micrograms per ml. The specific absorbance of such a product (without further purification), determined in the usual way as eI , was 1480, and when compared with the value of 1680 for the base, pure amphotericin B showed that the product, the ester, was 88 % pure. As explained above, considerable further purification can be achieved 'v / ground, for example, in that the acid addition salt is produced and obtained.

Das bei X in Fig. 6 gezeigte Infrarotabsorptionsspektrum des Methylesters, der als Produkt in dem obigen Beispiel erhalten wurde, zeigt beim Vergleich mit einem ähnlichen Spektrum reinen Amphotericins B in der selben Darstellung bei X wiedergegeben, deutlich die Überführung der Carboxylgruppe von Amphotericin B in eine Estergruppe. Die sehr charakteristische Bande für eine ionisierte Carboxylgruppe C00~, die in Amphotericin B als antisymmetrische Schwingungen bei 1540 cm , zu erkennen bei YY der Kurve Y in Fig. 6, zugegen ist, verschwindet vollständig in dem Spektrum des Amphotericin B-Methylesters, wie bei XX der Kurve X zu erkennen ist. Selbstverständlich wurden diese Infra-rotspektren in herkömmlicher Weise angefertigt, sind aber in Fig. 6 in willkürlicher vertikaler AnordnungThe infrared absorption spectrum, shown at X in Fig. 6, of the methyl ester obtained as the product in the above example when compared with a similar spectrum, pure amphotericin B is shown in the same representation at X, clearly shows the conversion of the carboxyl group of amphotericin B into an ester group. The very characteristic one Band for an ionized carboxyl group C00 ~ found in amphotericin B as antisymmetric oscillations at 1540 cm, too can be seen at YY of the curve Y in Fig. 6, is present, disappears completely in the spectrum of the amphotericin B methyl ester, as can be seen at XX of curve X. Of course, these infrared spectra were produced in the conventional way, but are in Fig. 6 in an arbitrary vertical arrangement

209881/0725209881/0725

wiedergegeben, so dass, obwohl das Aussehen jeweils wie dargestellt ist, der tatsächliche Prozentsatz der Durchlässigkeitswerte zur Vermeidung von Verwirrung v/eggelassen wurde. Es versteht sich auch, dass das Fehlen einer gewissen Feinstruktur in der Kurve (X) für den Ester dem leicht verunreinigten Zustand zuzuschreiben ist, ohne jedoch die Bedeutung für den Nachweis der Veresterung zu beeinträchtigen.reproduced so that although the appearance of each as shown is, the actual percentage of permeability values has been omitted to avoid confusion. It is also understood that the lack of a certain fine structure in curve (X) for the ester is ascribed to the slightly contaminated state, but without meaning for the detection of the esterification impairment.

Das Fehlen einer freien Carboxylgruppe in dem Veresterungsprodukt wurde auch durch quantitative Titration mit Natriumhydroxidlösung bei niedriger Temperatur bestätigt. Unter ähnlichen Bedingungen verbrauchte ein Mol Amphotericin B ein Mol Natriumhydroxid, während der Methylester nichts verbrauchte. Wie nachstehend erklärt trennt sich Amphotericin B-Methylester sehr gut von Amphotericin B mit Hilfe der Dünnschichtchromatographie an Silicagel; der Ester bewegt sich deutlich schneller als die Stammverbindung.The absence of a free carboxyl group in the esterification product was also confirmed by quantitative titration with sodium hydroxide solution confirmed at low temperature. Under similar conditions, one mole of amphotericin B consumed one mole Sodium hydroxide, while the methyl ester consumed nothing. As explained below, Amphotericin B-methyl ester separates very good of amphotericin B using thin layer chromatography on silica gel; the ester moves much faster as the root link.

Das Hydrochlorid als Endprodukt ist ein festes Produkt, das beträchtliche Wasserlöslichkeit zeigt, z.B. über 75 mg pro ml, im Gegensatz zur Stammverbindung, Amphotericin B, das sich zu nicht mehr als im"Umfang von Spuren von 0,0017 mg pro ml höchstens zu lösen scheint. Sowohl der Ester als auch sein Hydrochlorid entwickeln sehr erhebliche antimikrobielle Wirksamkeit, im wesentlichen, d.h. quantitativ, die gleiche wie das Stammantibiotikum. Die Aktivität wurde durch Standardtests in Vitro eines jeden Derivats und Base gegenüber repräsentativen Organismen wie beispielsweise Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans und Aspergillus niger nachgewiesen. Diese Ergebnisse sind zum Teil nachstehend in einer Tabelle zusammengefasst, zusammen mit einer Anzahl weiterer erfindungsgemässer Produkte, was die Brauchbarkeit der Substanz zeigt.The hydrochloride as an end product is a solid product that shows considerable water solubility, e.g. over 75 mg per ml, in contrast to the parent compound, amphotericin B, which is not found to be more than "trace amounts" of 0.0017 mg per ml seems to solve at most. Both the ester and its hydrochloride develop very significant antimicrobial effectiveness, essentially, i.e. quantitatively, the same as the parent antibiotic. The activity was determined by standard tests in vitro of each derivative and base against representative organisms such as Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans and Aspergillus niger detected. Some of these results are summarized in a table below, together with a number of other products according to the invention, which shows the usefulness of the substance.

209881 /0725209881/0725

Nach im wesentlichen zu dem im obigen speziellen Beispiel ausgeführten Vorgehen, so dass eine tatsächliche Beschreibung der Massnahmen nicht erneut gebracht werden muss und die Bezugnahme auf die Substanzen alleine die entsprechenden Beispiele darstellt, wurden die folgenden weiteren Derivate hergestellt und es zeigte sich, dass sie entsprechende Eigenschaften besitzen, wie sie nachfolgend in getrennten Tabellen aufgeführt sind: Nystatin-methylester und sein Hydrochlorid (Tetraen); Pimaricin-methylester und sein Hydrochlorid (Tetraen); Mediocidin-methylester und sein Hydrochlorid (Hexaen); Candicidinniethylester und sein Hydrochlorid (Heptaen); Trichomycinmethylester und sein Hydrochlorid (Heptaen); Candidin-methylester und sein Hydrochlorid (Heptaen); Hamycin-methylester und sein Hydrochlorid (Heptaein); und/weiter unten erwähnt Amphotericin B-äthylester und sein Hydrochlorid- (Heptaen).Essentially following on from that set out in the specific example above Procedure so that an actual description of the measures does not have to be repeated and the reference on the substances alone represents the corresponding examples, the following further derivatives were prepared and it was found that they have properties corresponding to those listed below in separate tables are: nystatin methyl ester and its hydrochloride (tetraene); Pimaricin methyl ester and its hydrochloride (tetraene); Mediocidin methyl ester and its hydrochloride (hexaene); Candicidin diethyl ester and its hydrochloride (heptaene); Trichomycin methyl ester and its hydrochloride (heptaene); Candidin methyl ester and its hydrochloride (heptaene); Hamycin methyl ester and its hydrochloride (heptaein); and / below mentioned amphotericin B-ethyl ester and its hydrochloride (heptaene).

Um die neuen Verbindungen und tatsächlich auch die molekulare Struktur der Staramantibiotika dieser Klasse, wie sie in der Literatur berichtet sind, weiter zu veranschaulichen, zeigen die Figuren 1, 2 und J die Strukturformeln für die Hydrochloride der jeweils aus Amphotericin B, Nystatin und Pimaricin hergestelltem Methylester. In jedem Fall ist zu erkennen, dass die Polyenmakrolidsubstanz sich durch den genannten Lactonring sowie dadurch auszeichnet, dass der Substituent -COOH der Stammsubstanz verestert worden ist, um diesen Teil in eine Estergruppe -COOCH, zu überführen. Bbenso ist die freie Arainogruppe -NH₂, die den Aminozucker, z.B. Mycosamin, der an die Stellung 19 in Fig. 1 gebunden ist, charakterisiert, nun in die Additionssalzform überführt, hier z.B. -NHo'HCl« Das Vorliegen von solchen Ester- und Säüresalzgruppen wird durch Betrachtung der anderen Verbindungen, die in den Fig. 2 bzw· 3 dargestellt sind, offenbar. Auch ist festzustellen, dass Amphotericin B (Fig. 1) ein Heptaen ist, während Nystatin undIn order to further illustrate the new compounds and indeed also the molecular structure of the staram antibiotics of this class as reported in the literature, FIGS. 1, 2 and J show the structural formulas for the hydrochlorides of those prepared from amphotericin B, nystatin and pimaricin, respectively Methyl ester. In each case it can be seen that the polyene macrolide substance is characterized by the lactone ring mentioned and by the fact that the -COOH substituent of the parent substance has been esterified in order to convert this part into an -COOCH ester group. Likewise, the free araino group -NH ₂ , which characterizes the amino sugar, for example mycosamine, which is bound to position 19 in FIG. 1, is now converted into the addition salt form, here, for example, -NHo'HCl " Acid salt groups will be apparent by considering the other compounds shown in Figures 2 and 3, respectively. It should also be noted that amphotericin B (Fig. 1) is a heptaene, while nystatin and

209881AO725209881AO725

ricin Tetraene sind (Fig. 2 und 3); ö-ie Grundformeln sind natürlich die ohne die beiden beschriebenen Veränderungen.ricin are tetraenes (Figures 2 and 3); ö-the basic formulas are natural those without the two changes described.

Die Reagentien zur Herstellung von Äthyl- und Propylestern, nämlich Diazoäthan und Diazopropan, werden gewöhnlich in einer zum Diazomethan identischen Weise hergestellt, z.B. in Lösung in Tetrahydrofuran unter Verwendung jeweils geeigneter Ausgängsverbindungen, wie sie für diese Mittel üblich sind. Demzufolge werden diese alternativen Ester der Starampolyenmakrolide in der gleichen V/eise wie die Methylester hergestellt, z.B. ausgehend von einer Lösung des Antibiotikums in die Methylsulfoxid'und dann durch Mischen einer solchen Lösung mit dem Hauptlösungsmittel Tetrahydrofuran, Einbringen des speziellen Reagens, d.h. Diazoäthan oder Diazopropan. Schliesslich wird der entstehende Äthyl- oder Propylester des Makrolids durch eine mit der für den Methylester identischen Verfahrensweise in da3 gewünschte Säures"alz überführt. Die verschiedenen Reaktionen sind in der Tat vollkommen analog und im Falle der abschliessenden Salzbildung tatsächlich identisch.The reagents for making ethyl and propyl esters, namely diazoethane and diazopropane, are usually used in prepared in a manner identical to diazomethane, e.g., in solution in tetrahydrofuran, using appropriate ones in each case Output connections, as they are usual for these funds. As a result, these alternative esters become the star amolyene macrolides prepared in the same way as the methyl esters, e.g. starting from a solution of the antibiotic in die Methylsulfoxid'und then by mixing such a solution with the main solvent tetrahydrofuran, introduction of the special reagent, i.e. diazoethane or diazopropane. In the end the resulting ethyl or propyl ester of the macrolide is made by a procedure identical to that for the methyl ester converted into the desired acid or salt. The various reactions are in fact completely analogous and in the case of the final salt formation actually identical.

Als spezielles Beispiel wurde Amphotericin B-Äthylester und das Hydrochlorid dieses Derivats in der beschriebenen Weise hergestellt, was zu Produkten führte, die Eigenschaften besitzen, welche denen des Methylesters und seines Salzes äu^serst ähnlich sind· Fig. 7 zeigt das IR-Absorptionsspektrum des Äthylesters (X') im Vergleich mit dem wiederholten Spektrum reinen Amphotericins B (Y¹), in der gleichen Weise wie der Methylester in Fig. 6. Diese zeigen wieder deutlich die Überführung der Carboxylgruppe in eine Estergruppe durch Verschwinden an der Stelle XX¹ der Bande bei YY¹ in der Grundkurve.As a specific example, amphotericin B ethyl ester and the hydrochloride of this derivative were prepared in the manner described, which led to products which have properties which are extremely similar to those of the methyl ester and its salt. FIG. 7 shows the IR absorption spectrum of the ethyl ester (X ') pure compared with the repeated spectrum of amphotericin B (Y ^1), in the same manner as the Methylester in Fig. 6. This again show clearly the conversion of the carboxyl group in a Estergruppe by disappearance at the location of XX ¹ Band at YY ¹ in the base curve.

In weiteren Beispielen für Methylester anderer Makrolide derIn further examples of methyl esters of other macrolides the

209881/0725209881/0725

genannten Klasse wurden IR-Spektren von Nystatin und Piraaricin, beides Tetraene, für die Stammsubstanz und den Methylester, ebenso für Mediocidin, einem Hexaen, in der Grund- und Methylesterform und schliesslich für Hamycin und Candicidin und ihre Methylester angefertigt. In allen Fällen ware.n die gleichen Unterschiede zwischen der Stammverbindung und dem Ester offenbar, wozu das Verschwinden der Banden gehört, die in federn Falle die Carboxylgruppe charakterisierten, was demzufolge die Tatsache der Herstellung des Esters belegte.named class were IR spectra of nystatin and piraaricin, both tetraene, for the parent substance and the methyl ester, as well as for mediocidin, a hexaene, in the basic and methyl ester form and finally made for Hamycin and Candicidin and their methyl esters. In all cases it would be the same Differences between the parent compound and the ester evidently, including the disappearance of the bands in spring case characterized the carboxyl group, which consequently proved the fact that the ester was produced.

Ein weiterer Nachweis für die Bildung der neuen Verbindungen,■ d.h. der Ester, wurde durch Dunnschichtchroffiatographxe (oft als T.L.C. abgekürzt), wie in den Fig. 8 bis 12 einschliesslich gezeigt, geliefert. Bekanntlich führt die chromatographische Entwicklung "nach dieser Methode zu einer Wanderung einer jeden Verbindung mit einer für ihre chemische Zusammensetzung charakteristischen Geschwindigkeit, so dass nach einer bestimmten Zeit der für die Verbindung repräsentative Fleck in einem Abstand von der Basislinie der beschichteten Platte auftritt, welcher von dem einer anderen, aber verschiedenen Verbindung von selbst sehr ähnlicher Zusammensetzung verschieden ist. In Fig. 8 sind das Stammamphotericin B und die Derivate, nämlich der Methylester und der Äthylester, jeweils in den Spalten 1, 2 und 3 dargestellt. In Fig. 9 ist Nystatin in Spalte 1 angezeigt, sein Methylester in Spalte 2, Pimaricin in Spalte 3 und sein Methylester in Spalte 4-. Die Spalten 1 und 2 der Fig. 10 zeigen jeweils Mediocidin und seinen Methylester; das Auftreten von drei Flecken am oberen Ende in jeder Spalte zeigt an, dass dieses Makrolid, wie es derzeit verfügbar ist, ein Komplex ist, d.h. er umfasst vermutlich drei sehr geringfügig verschiedene Verbindungen,.z.B. mit geringen Umterschieden in unbedeutenden Substituenten am Makro- ■ liaring. In Fig. 11 zeigen die Spalten 1 und 2 jeweils HamycinAnother evidence of the formation of the new compounds, ■ i.e., the ester, was determined by thin-film chromatography (often abbreviated as T.L.C.) as shown in Figures 8 through 12 inclusive shown, delivered. It is well known that the chromatographic development "according to this method leads to a migration of a each compound at a rate characteristic of its chemical composition, so that after a certain Time the stain representative of the compound occurs at a distance from the baseline of the coated panel, which differs from that of another but distinct compound of itself of very similar composition is. In Fig. 8 are the parent amphotericin B and the derivatives, namely the methyl ester and the ethyl ester, respectively in the Columns 1, 2 and 3 shown. In Figure 9, nystatin is indicated in column 1, its methyl ester in column 2, pimaricin in column 3 and its methyl ester in column 4-. The columns 1 and 2 of Fig. 10 show mediocidin and its methyl ester, respectively; the appearance of three spots at the top in each column indicates that this macrolide as it is currently available is a complex, i.e. it presumably comprises three very slightly different connections, e.g. with minor differences in insignificant substituents on the macro ■ liaring. In Fig. 11, columns 1 and 2 each show hamycin

209881/0725209881/0725

Z226338Z226338

und seinen Methylester, während in Fig. 12, in den Spalten 1 und 2 Trichomycin und Trichomycin-methylester dargestellt sind. In allen Fällen ist ein erheblicher Unterschied offensichtlich, der wieder die Bildung des Esters' aus der Stammsubstanz bestätigt.and its methyl ester, while in Fig. 12, in columns 1 and 2, trichomycin and trichomycin methyl ester are shown are. In all cases a considerable difference is evident, which again is the formation of the ester from the Parent substance confirmed.

Das bei diesen Untersuchungen angewandte T.L.G.-Verfahren war im wesentlichen herkömmlicher Art, wobei eine dünne Schicht aus Silicagel mit geeignetem Binder auf einer Glanplatte verwendet wurde. Das zum Transport der gewählten Vorbindungen über die Schicht aus dem Silicageladsorbens verwendete Lösungsmittel wurde unter Systemen ausgewählt, von denen man aus Erfahrung wusste, dass sie für .Polyen-rAntibiotika geeignet sind· In jedem Falle wurde das gewählte Lösungsmittelsystem anfangs als ein Gemisch hergestellt und nach dem Schütteln wurde das Gemisch in zwei Phasen aufgetrennt, von welchen die untere eingesetzt wurde. Im Falle der Figur 8 wurde ein alkalisches Lösungsmittelsystem verwendet, das aus Chloroform, Methanol und Boratpuffer zur Einstellung eines pH von 8,3 erhalten worden war. Zur Bestätigung wurde ein .saures System aus Chloroform, Methanol und Natriumacetatpuffer mit pH 5»0 unabhängig eingesetzt, mit identischen Ergebnissen. Für die Überprüfung entsprechend Fig. 9 war das Lösungsmittelsystem Chloroform, Äthanol undThe T.L.G. procedure used in these investigations was essentially conventional, with a thin layer of silica gel with a suitable binder on a smooth plate was used. That used to transport the selected prebinds across the layer of silica gel adsorbent Solvent was chosen from among systems known from experience to be useful for polyene antibiotics are suitable · In each case the chosen solvent system was initially prepared as a mixture and after shaking, the mixture was separated into two phases, of which the lower phase was used. In the event of 8, an alkaline solvent system was used, consisting of chloroform, methanol and borate buffer Adjustment to pH 8.3 had been obtained. An acidic system of chloroform, methanol and Sodium acetate buffer with pH 5 »0 used independently, with identical results. For the check according to FIG. 9, the solvent system was chloroform, ethanol and

10 # Essigsäure; für Fig. 10 wurde das Chloroform-Methanol-Boratpuffer-System wiederum eingesetzt, während für die Fig.10 # acetic acid; for Fig. 10 the chloroform-methanol-borate buffer system again used, while for Fig.

11 und 12 ein Chloroform-Äthanol-Essigsäure-System verwendet wurde. In jedem Falle wurde ein Fleck einer jeden überprüften Verbindung zuerst nahe der unteren Plattenkante, z.B. aus einer Lösung in Dimethylsulfoxid, aufgebracht und nach dem Trocknen und Eintauchen der unteren Kante in die gewählte LösungsmittelphasG wurde für eine bestimmte Zeitspanne entwickelt, wobei die in den Figuren gezeigten und vorstehend11 and 12 a chloroform-ethanol-acetic acid system was used. In each case, one spot was checked for each Connection first near the lower edge of the panel, e.g. from a solution in dimethyl sulfoxide, applied and after Drying and immersing the lower edge in the selected solvent phaseG was developed for a certain period of time, with those shown in the figures and above

209881/0725209881/0725

beschriebenen Ergebnisse erzielt wurden und die geeignet vorgerückten Stellen der verschiedenen Verbindungen leicht auf herkömmliche Weise erkannt wurden.results described have been achieved and the appropriately advanced Positions of the various connections were easily recognized in the conventional manner.

Was nun den Veresterungsvorgang betrifft, so ist klar, dass die Grundreaktion mit Diazomethan zur Herstellung des Methylesters einer Carbonsäure sehr üblich ist,- und ebenso verschiedene Vorläufer zur Herstellung von Diazomethan (CHpITo) einschliesslich des oben genannten speziellen Ausgangsmaterials· Obgleich die vorangegangenen Massnahmen wie zur Herstellung des Reagens eine herkömmliche Äther-Alkohol-Lösung verwandten, haben die hierin beschriebenen neuen Massnahmen, sov/ohl zur Herstellung des Reagens als auch zu seiner Verwendung bei der Veresterung unter Verwendung von Tetrahydrofuran als Lösungsmittel bedeutende Vorteile, ohne die gewünschten Reaktionen in irgendeiner Stufe zu beeinträchtigen. Obgleich die Löslichkeit der Ausgangsmakrolidantibiotika in diesem Lösungsmittel verhältnismässig begrenzt ist, reicht sie aus und sie ist tatsächlich sehr geeignet zur fortlaufenden Veresterungsreaktion, die den Ester ergibt, der in dem Masse, wie er sich bildet, vollständig in Lösung geht.As for the esterification process, it is clear that the basic reaction with diazomethane to produce the methyl ester of a carboxylic acid is very common, - and also including various precursors for the production of diazomethane (CHpITo) of the special starting material mentioned above · Although the previous measures as for the production of the reagent used a conventional ether-alcohol solution, have the new measures described herein, so / ohl for Preparation of the reagent as well as its use in esterification using tetrahydrofuran as solvent significant benefits without compromising the desired reactions at any stage. Although the solubility of the starting macrolide antibiotics in this solvent proportionally is limited, it is sufficient and it is actually very suitable for the continuous esterification reaction, which gives the ester which, as it forms, goes completely into solution.

Wie ebenfalls vorstehend erklärt, werden Diazoäthan und Diazopropan in ähnlicher Weise hergestellt und können die Veresterung bewirken, d.h. nach grundlegend bekannten Reaktionsweisen. Für dieses Vorgehen wird wieder Tetrahydrofuran als Lösungsmittel in beiden Stufen verwendet,· mit der gleichen Wirksamkeit und den gleichen Vorteilen wie im Falle von Diazo-, methan. Natürlich werden geeignete Ausgangsreagentien für die Herstellung von Diazoäthan und Diazopropan,, wie in der Literatur ausgeführt, verwendet; so ist im Falle von Diazoäthan das Ausgangsmaterial üblicherweise N-Äthyl-N-nitroso-N-nitrogaanidin. As also explained above, there are diazoethane and diazopropane prepared in a similar way and can bring about the esterification, i.e. according to fundamentally known reaction modes. For this procedure, tetrahydrofuran is again used as the solvent in both stages, with the same Effectiveness and the same benefits as in the case of diazo, methane. Of course, suitable starting reagents for the Production of diazoethane and diazopropane, as in the literature executed, used; so in the case of diazoethane the starting material is usually N-ethyl-N-nitroso-N-nitrogaanidine.

209881/0725209881/0725

Nachfolgend sind in einer Liste Folyenmakrolidantibiotika aufgeführt, die alle eine Grundwirksamkeit gegen Fungi besitzen und zur Veranschaulichung der Überführung in die hier beschriebene neue Derivatform geeignet sind, einschliesslich der Ester und der wichtigen Säureadditionssalze der letzteren. Dies ist tatsächlich in jedem Falle durch Herstellung des Methylesters und Nachweis der Herstellung einer solchen Verbindung durch eine oder mehrere der Nachweioarten wie Dünnschichtchromatographie oder IR-Spektrum gezeigt worden. In jedem Falle kann, was durch Versuche bei einer beträchtlichen Anzahl von Fällen bestätigt wurde, der hergestellte Ester in das Säureadditionssalz (wie etwa das Hydrochlorid oder ein anderes hierin erläutertes Salz) überführt werden, so dass die beschriebenen Ester aller Glieder dieser Tabelle amphoterer Verbindungen als erfindungsgemässe Beispiele angesehen werden können.Below is a list of foliar macrolide antibiotics: all of which have a basic effectiveness against fungi and to illustrate the transition to the one described here new derivative form are suitable, including the esters and the important acid addition salts of the latter. Indeed, this is in each case by producing the methyl ester and demonstrating the production of such Connection has been shown by one or more of the detection modes such as thin layer chromatography or IR spectrum. In any event, as has been confirmed by experiments in a considerable number of cases, the ester produced can in the acid addition salt (such as the hydrochloride or another salt discussed herein) so that the described esters of all members of this table of amphoteric compounds are regarded as examples according to the invention can be.

Table I.

NystatinNystatin

PimaricinPimaricin

RimocidinRimocidin

Antibioticum PA-166Antibiotic PA-166

Amphotericin AAmphotericin A

OhrominOhromin

EurocidinEurocidin

MediocidinMediocidin

CryptocidinCryptocidin

Amphotericin BAmphotericin B

Levorin (Antibioticum 26/1)Levorin (antibiotic 26/1)

AsconinAsconine

TetraenTetraene

PentaenPentaes

HexaenHexes

HeptaenHeptaene

209881/0725209881/0725

Candicidin HeptaenCandicidin Heptaene

Candidin HeptaenCandidin Heptaene

Candimycin HeptaenCandimycin Heptaen

Hamycin HeptaenHamycin heptaen

Trichomycin HeptaenTrichomycin Heptaene

Aureofungin " HeptaenAureofungin "Heptaen

Ayfactin A & B HeptaenAyfactin A & B heptaene

Heptaraycin ■ HeptaenHeptaraycin ■ heptaene

Weitere amphotere Polyenmakrolide, auf die die Erfindung anwendbar ist, sind die folgenden:Further amphoteric polyene macrolides to which the invention can be applied are the following:

TabelleTabel IIII NameSurname Ϊ2ΕΪ2Ε ProtocidinProtocidin TetraenTetraene Luc e ns oicy c inLuc e ns oicy c in (Etruscomycin)(Etruscomycin) TetraenTetraene TetrinTetrin -- TetraenTetraene AntibioticumAntibiotic ΡΔ-153ΡΔ-153 PentaenPentaes AntibioticumAntibiotic 2814-P2814-P PentaenPentaes Endomycin BEndomycin B HexaenHexes AntibioticumAntibiotic PA-150PA-150 HeptaenHeptaene AntibioticumAntibiotic F-17-0F-17-0 HeptaenHeptaene MycoheptinMycoheptin HeptaenHeptaene

In allen Fällen besitzen die Makrolidverbindungen, aus denen die erfindungsgemassen Derivate erhältlich sind, eine wohldefinierte allgemeine Molekularstruktur, die beispielsweise gut veranschaulicht wird durch die Formeln der Derivate in den Fig· 1, 2 und 3· Die grundlegende Charakterisierung des Moleküls ist die eines makrosyklischen Lactonkerns, der eine lange Kette von Kohlenstoffatomen darstellt, welche durch ein einzelnes Lactonsauerstoffatom unter Bildung des Makro-In all cases, the macrolide compounds from which the inventive derivatives are obtainable possess a well-defined general molecular structure, which is, for example, well-illustrated by the formulas of the derivatives in FIGS · 1, 2 and 3 · The basic characterization of the molecule which is a makrosyklischen Lactonkerns , which is a long chain of carbon atoms, which is replaced by a single lactone oxygen atom to form the macro-

209881/0725209881/0725

lidrings geschlossen ist. Ein weiteres Merkmal eines Lactone ist ebenfalls vorhanden, nämlich ein Carbonylsauerctoffatom, welches an ein Kohlenstoffatom des Ringes gebunden ist, das unmittelbar neben dem Lactonsauerstoff sitzt. Die Ringkohlenstoffatome sind direkt und aufeinanderfolgend über den Ring durch Einfach- oder Doppelbindungen verbunden, aber ein entscheidendes Merkmal der Verbindung ist der Einbau einer nichtunterbrochenen Reihe von vier bis sieben konjugierten Doppelbindungen in dem Ring, wodurch eine nichtunterbrochene Reihe von jeweils acht bis vierzehn Kohlenstoffatomen verbunden sind, die jeweils eine Doppelbindung aufweisen.lid rings is closed. Another feature of a lactone is also present, namely a carbonyl oxygen atom, which is bonded to a carbon atom of the ring, which sits immediately next to the lactone oxygen. The ring carbon atoms are connected directly and consecutively across the ring by single or double bonds, but a crucial one The feature of the connection is the incorporation of an uninterrupted series of four to seven conjugated double bonds in the ring, connecting an uninterrupted series of eight to fourteen carbon atoms each, each having a double bond.

Die übrigen Kohlenstoff-Kohlenstoff-Bindungen im Ring sind ganz überwiegend gesättigte Einfachbindungen (ebenso wie die in der konjugierten Reihe liegenden Zwischenbindungen), obgleich im Falle einiger Verbindungen weitere ungesättigte Bindungen, z.B. Doppelbindungen auftreten können. Z.B. liegen im Falle von Nystatin, Fig. 2, zwei weitere Doppelbindungen im Abstand von der kennzeichnenden Polyenreihe vor, während im Amphotericin B, Fig. 1,alle übrigen Bindungen Einfachbindungen sind. Die Gesamtzahl der Kohlenstoffatome ist stets mehr als die doppelte Zahl derselben in der konjugierten Reihe und im allgemeinen eine Zahl im Bereich von 25 bis 40, z.B. 37 für Amphotericin B, 37 für Nystatin und 25 für Pimaricin.The remaining carbon-carbon bonds in the ring are predominantly saturated single bonds (just like the intermediate bonds lying in the conjugated series), although in the case of some compounds further unsaturated ones Bonds, e.g. double bonds, can occur. For example, in the case of nystatin, Fig. 2, there are two further double bonds at a distance from the characteristic polyene series in front of, while in amphotericin B, Fig. 1, all other bonds are single bonds are. The total number of carbon atoms is always more than twice the number of these in the conjugated series and generally a number in the range from 25 to 40, e.g. 37 for amphotericin B, 37 for nystatin and 25 for pimaricin.

In jedem Falle der hier behandelten Polyene liegen zwei wichtige Substituenten vor, jeweils eine Carboxylgruppe (-COOH) und eine Aminozuckergruppe, wie aus den in den Fig. 1, 2 und 3 gegebenen Formeln hervorgeht. Während in aller Regel die Aminozuckergruppe, die in allen Fällen durch eine freie primäre Aminogruppe (-NHo) gekennzeichnet ist, Mycosamin ist, sind in einigen Verbindungen andere Aminozucker festgestelltIn each case of the polyenes treated here, there are two important substituents, each a carboxyl group (-COOH) and an amino sugar group as shown in FIGS. 1, 2 and 3 given formulas. While as a rule the amino sugar group, which in all cases by a free primary Amino group (-NHo) is marked, mycosamine is, other amino sugars are found in some compounds

20 9 881/072520 9 881/0725

worden, ohne Unterschied in der Wirkung, soweit grundlegende Merkmale betroffen sind, und insbesondere soweit die Erfindung betroffen ist, die einfach eine Aminozuckergruppe fordert, welche die genannte freie Aminogruppe mit entsprechend starker Basizität besitzt. Einige Polyeninakrolide mit gegen
Fungi wirkenden Eigenschaften, wie beispielsweise Filipin,
Fungimycin und Perimycin, besitzen keine Carboxylgruppe, und sie gehören daher nicht zu der Klasse, auf die sich dB Erfindung bezieht.without any difference in effect, as far as basic features are concerned, and in particular as far as the invention is concerned, which simply requires an amino sugar group which has said free amino group with a correspondingly strong basicity. Some polyenine acrolides with against
Fungi-active properties, such as Filipin,
Fungimycin and perimycin do not have a carboxyl group and therefore do not belong to the class to which the invention relates.

Wie-deutlich werden wird, ist der Ring verschieden durch andere Substitution gekennzeichnet, die natürlich zu Unterschieden unter den verschiedenen Polyenmakrolidantibiotika führt, aber eine solche Variation in den Substituenten ändert nicht die wesentlichen Merkmale der Verbindungen, auch nicht
ihre Eignung zur Überführung in die hier beschriebenen neuen Derivate. Beispielsweise sind alle Verbindungen durch Hydroxyl-(-OH)-Substituenten an verschiedenen Positionen am Ring gekennzeichnet, z.B. üblicherweise 5 oder mehr, wie aus den
Figuren hervorgeht. Zuweilen ist eine weitere Aminogruppe zugegen, die sich speziell als ein Arylamin klassifizieren lässt, wie in der Zusammensetzung des Trichomycin angegeben; insbesondere ist das Arylamin im Falle des Trichomycins eine p-Aminophenylgruppe, nämlich p-Aminoacetophenon. In anderen Verbindungen treten andere aromatische Aminogruppen auf; a.B. in Hamycin p-Aminophenylketon obgleich es denkbar ist, dass die erfindungsgemässe Säuresalzbildung bis zur Arainogruppe eines solchen aromatischen Substituenten weiterlaufen kann, ist dem keine Bedeutung beizumessen; die Säuresalzbildung betrifft in erster Linie das stärkeifbasische Amin im Aminozucker.As will become clear, the ring is variously characterized by other substitution, which of course leads to differences among the various polyene macrolide antibiotics, but such variation in the substituents does not change the essential characteristics of the compounds, either
their suitability for conversion into the new derivatives described here. For example, all compounds are characterized by hydroxyl (- OH) substituents at different positions on the ring, for example usually 5 or more, as from the
Figures emerges. Sometimes another amino group is present which can be specifically classified as an arylamine, as indicated in the composition of the trichomycin; in particular, in the case of trichomycin, the arylamine is a p-aminophenyl group, namely p-aminoacetophenone. Other aromatic amino groups appear in other compounds; aB in Hamycin p-aminophenyl ketone, although it is conceivable that the acid salt formation according to the invention can continue up to the araino group of such an aromatic substituent, this is of no importance; acid salt formation primarily affects the starch base amine in amino sugar.

Eine weitere Substitution am Makrolidring wird für erheblichAnother substitution on the macrolide ring is considered significant

209881 /0725209881/0725

weniger folgenreich gehalten, insbesondere für die Reaktionen und hieran beteiligten Produkte, und besteht im wesentlichen aus einer oder mehreren Gruppen v/ie Niederalkyl-, hydroxilierten Niederalkyl-, Sauer.stoff- und Epoxydgruppen, wobei unter Niederalkyl Alkylgruppen mit bis zu 7 Kohlenstoffatomen zu verstehen sind. In aller Regel sind die Alkylsubstituenten einfach Methylgruppen, gewöhnlich zumindest mehrere wie im Falle der Fig. 1 und 2.held less momentous, especially for the reactions and products involved, and essentially consists from one or more groups v / ie lower alkyl, hydroxylated Lower alkyl, Sauer.stoff- and epoxy groups, with Lower alkyl alkyl groups with up to 7 carbon atoms are to be understood. As a rule, the substituents are alkyl simply methyl groups, usually at least several as im Case of Figs. 1 and 2.

Wie in den Figuren zu erkennen ist, können Säuerstoffsubstituenten einfach sein, wie etwa im Falle eines Ketonsauerstoffs, oder sie können durch Bindung von zwei nichtaufeinanderfolgenden Kohlenstoffatomen überbrückend vorliegen, so etwa im Falle von Amphotericin B und Nystatin unter Bildung einer geschlossenen sechsgliedrigen Konfiguration, die als Hemiketal anzusprechen ist· In anderen Fällen kann eine ähnliche Überbrückung durch Alkyl- oder hydroxylierte Alkylsubstituenten vorliegen. Wie schon bemerkt, kann in einigen Verbindungen eine Epoxydgruppe auftreten, z.B. in Pimaricin (Fig. 3)» als ein Substituent am Ring. Es können Doppel- oder Vielfach-äibstituentengruppen der gegebenen Arten, wie üblicherweise im Falle von -OH und Methyl (-CEU)-Gruppen vorliegen und sogar für komplexere Gruppen, wie mit dem Vorliegen einer zweiten Carboxylgruppe (die dann auch in identischer V/eise verestert würde), aber in allen Fällen ergibt, sich kein Unterschied in der Grundnatur der Stamraverbindung als Glied der genannten Polyenmakrolidklasse und keine Auswirkung auf die Anwendbarkeit der Erfindung. As can be seen in the figures, oxygen substituents can be simple, as in the case of a ketone oxygen, or they can be made by binding two non-consecutive Bridging carbon atoms are present, for example in the case of amphotericin B and nystatin with the formation of a closed one six-membered configuration that can be addressed as a hemiketal is · In other cases there may be a similar bridging by alkyl or hydroxylated alkyl substituents. As noted, an epoxy group may appear in some compounds, e.g., pimaricin (Fig. 3) as a substituent on the ring. There can be double or multiple substituent groups of the given types, as are usually present in the case of -OH and methyl (-CEU) groups, and even for more complex ones Groups, as with the presence of a second carboxyl group (which would then also be esterified in an identical manner), but in all cases there is no difference in the basic nature the stamra compound as a member of the polyene macrolide class mentioned and no effect on the applicability of the invention.

Im allgemeinen sind natürlich die anderweitig nicht besetzten Bindungen der Kohlenstoffatome des Rings von Protonen, d.h. Wasserstoffatomen besetzt. Grösstenteils sind diese von den Strukturabbildungen weggelassen worden (Fig. 1 bis 3)t da esIn general, of course, the otherwise unoccupied bonds of the carbon atoms of the ring are protons, i. Hydrogen atoms occupied. For the most part these are from the Structure diagrams have been omitted (Figs. 1 to 3) because there is

209881/0725209881/0725

offensichtlich ist, wohin sie gehören, d.h. zu nichtbesetzten Bindungen an manchen Stellen und an den Ringkohlenctoffen, wo nichtbesetzte Bindungen augenscheinlich werden. Aus Gründen der Einfachheit wurden in üblicher Weise die Bezeichnungen der Ringkohlenstoffe weggelassen, z.B. bei den Positionen 1 bis 37 und im Zuckerring in Fig. 1. Die letztere Figur wurde zur Verarischaulxchung der dreidimensionalen Eigenschaften gezeichnet, aber die Fig. 2 und 3 stellen wohl in einfacher ebener Darstellung vollständig genug die Formeln nach derzeitiger Auffassung dar.it is obvious where they belong, i.e. to unoccupied Bindings in some places and on the ring carbon fabrics, where unoccupied bonds become apparent. For the sake of simplicity, the designations of the ring carbons are omitted, e.g. at positions 1 to 37 and in the sugar ring in Fig. 1. The latter figure has been drawn to visualize the three-dimensional properties, but FIGS. 2 and 3 represent the formulas according to the current one, probably in a simple flat representation, completely enough Opinion.

Obwohl aus Bequemlichkeitsgründen und zur Veranschaulichung die wasserlöslichen Salze hauptsächlich als Hydrochloride untersucht wurden, kann jede einer Vielzahl anderer Säuren zur Herstellung der Additionssalze eingesetzt werden, mit gleichermassen brauchbarer V/irkung, wobei der Mechanismus der Bildung eines Additionssalzes mit einem geeignet alkalischen Amin wohl bekannt ist. So sind nachfolgend einige Säuren aufgeführt, die als· besonders.geeignet für diesen Zweck angesehen werden, d.h. als Beispiele unter vielen, die als geeignet für wasserlösliche Salze anerkannt werden: anorganische Säuren: Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure, Borsäure, Jodwasserstoffsäure, Flussäure, Phosphorwolframsäure. Organische Säuren: Ameisen-, Essig-, Thioessig-, Acryl-, Propion-, Isobubfcer-, η-Bitter-, Brenztrauben-, Äthylmethylessig-, Chloressig-, Dichloressig-, Methoxyessig-, Alphabrompropion-, Bromessig-, Milch-, Äpfel-, Zitronen-, Malon-· und Glutaconsäure.Though for convenience and illustrative purposes The water-soluble salts have been studied primarily as hydrochlorides, any of a variety of other acids can be used Production of the addition salts are used with the same useful effect, the mechanism being the formation of an addition salt with a suitably alkaline amine is well known. Some acids are listed below that are considered to be particularly suitable for this purpose i.e. as examples among many that are recognized as being suitable for water-soluble salts: inorganic acids: Hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, boric acid, hydriodic acid, hydrofluoric acid, phosphotungstic acid. Organic acids: formic, vinegar, thioacetic, acrylic, propionic, isobustic, η-bitter, pyruvic, ethylmethyl acetic, Chloroacetic, dichloroacetic, methoxyacetic, alphabromopropion, Bromo vinegar, milk, apple, lemon, malon and glutaconic acid.

Wie auch ausgeführt, wird ein gewisser Vorteil mit unlöslichen Säuresalzen verwirklicht, insbesondere, wo eine lipidlösliche Verbindung erwünscht ist. Beispiele für Säuren, die zur Bildung solcher Säuresalze unter anderem poeignet sind, ■As also stated, there is some benefit with insoluble Acid salts are realized especially where a lipid soluble compound is desired. Examples of acids that for the formation of such acid salts, among other things, are poeignet, ■

209881/0725209881/0725

sind die folgenden: n-Capron, n-Heptan-Cn^heptoic), n-Capryl-, Caprin-, Undecan-, Undecylen-, Öl-, Laurin-, Pimelin-, Handel-, Salicyl-, Stearin-, Palmitin-, Linol- und Linolensäure. Besondere Brauchbarkeit kann bei einigen dieser Säuresalze erzielt werden, beispielsweise wo Undecylensäure eingesetzt wird, im Hinblick auf die herkömmlichen, stark wirksamen Eigenschaften gegen Fungi dieser Säure und ihrer Salze.are the following: n-Capron, n-Heptane-Cn ^ heptoic), n-Capryl-, Capric, undecanoic, undecylenic, oleic, lauric, pimelic, commercial, salicylic, stearic, palmitic, linoleic and linolenic acids. Special Usefulness can be achieved with some of these acid salts, for example where undecylenic acid is used, in view of the conventional, highly effective anti-fungi properties of this acid and its salts.

Die bemerkenswert hohe Wasserlöslichkeit der löslichen Säuresalzderivate gemäss der Erfindung wurde durch Untersuchungen repräsentativer Verbindungen im Vergleich mit den Stammsubstanzen festgestellt. Während die Löslichkeiten der Säuresalze der Ester leicht nach der sogenannten Trockengewichtsmethode bestimmbar waren (und so für die Tabelle weiter unten gemessen wurden), sind die wirklichen Löslichkeiten der Stammpolyenantibiotika zu gering, d.h. kleiner als 0,1 mg pro ml, um sie nach einer solchen Methode genau messen zu können. So wurde eine empfindlichere Analysenmethode angewandt, wobei die gesättigte wässrige Lösungmit einem organischen Lösungsmittel (Dimethylsulfoxid) zehnfach verdünnt wurde, das dann erhältliche UV-Spektrum der überwiegend organischen Lösung gemessen und schliesslich die Wasserlöslichkeit aus der bekannten Verdünnung aus dem bekannten (oder getrennt bestimmten) Wert des Extinktionskoeffizienten für die Substanz errechnet wurde. Die Loslichkeitsbestimmungen waren wie folgt:The remarkably high water solubility of the soluble acid salt derivatives according to the invention was carried out by investigations of representative compounds in comparison with the parent substances established. While the solubilities of the acid salts of the esters slightly according to the so-called dry weight method determinable (and so measured for the table below) are the real solubilities of the parent polyene antibiotics too low, i.e. less than 0.1 mg per ml, to be able to measure it precisely using such a method. So became a more sensitive analytical method was applied, the saturated aqueous solution was diluted ten times with an organic solvent (dimethyl sulfoxide), which was then available UV spectrum of the predominantly organic solution measured and finally the water solubility from the known Dilution was calculated from the known (or separately determined) value of the extinction coefficient for the substance. The solubility determinations were as follows:

Table III

Antibiotika und Derivate Löslichkeit in Wasser _i mg/ml Antibiotics and derivatives solubility in water _i mg / ml

Amphotericin B 0,0017Amphotericin B 0.0017

Amphotericin B-methylester-Amphotericin B methyl ester

Hydroohlorid ' > 75iOHydrochloride '> 75 OK

209881/0725209881/0725

Amphotericin B-äthylester-Amphotericin B ethyl ester

Hydrochlorid > 75,0Hydrochloride > 75.0

Candidin 0,116Candidine 0.116

Candidin-methylester-Hydrochlorid > 50,0 Nystatin 0,039Candidin methyl ester hydrochloride> 50.0 nystatin 0.039

Nystatin-raethylester-Hydrochlorid > 80,0 Pimaricin · 0,052Nystatin methyl ester hydrochloride> 80.0 Pimaricin · 0.052

Pimaricin-methylester-Hydrochlorid Ϊ80,0 Mediocidin 0,072Pimaricin-methylester hydrochloride Ϊ 80.0 Mediocidin 0.072

Mediocidin-methylester-Hydrochlorid > 50,0Mediocidin methyl ester hydrochloride> 50.0

Candicidin 0,032Candicidin 0.032

Candicidin-methylester-Hydrochlorid > 20,0Candicidin methyl ester hydrochloride > 20.0

Trichomycin 0,046Trichomycin 0.046

Trichomycin-methylester-Hydrochlorid > 20,0 Hamycin .. 0,032Trichomycin methyl ester hydrochloride > 20.0 hamycin. 0.032

Hamycin-methylester-Hydrochlorid > 20,0Hamycin methyl ester hydrochloride > 20.0

Obgleich für die obigen Untersuchungen Hydrochloride verwen- ' det wurden, ist klar, dass in dieser und anderer Hinsicht vergleichbare Eigenschaften mit Additionssalzen aus vielen anderen Säuren, wie sie zuvor erwähnt wurden, z.B. Sulfaten, Acetaten, Phosphaten, Nitraten und dgl. erhältlich sind.Although hydrochlorides were used for the above investigations, it is clear that they are comparable in this and other respects Properties with addition salts from many other acids, as mentioned before, e.g. sulfates, Acetates, phosphates, nitrates and the like. Are available.

Die tatsächliche Löslichkeit der erfindungsgemässen Derivate wird weiter durch Fig. 5 veranschaulicht, worin Kurve A das UV-Spektrum für Amphotericin B-methylester-Hydrochlorid in Wasser, 7 Mikrogramm pro ml,und Kurve B ein gleiches Spektrum für die gleiche Konzentration den Stammamphotericins B in V/an-The actual solubility of the derivatives according to the invention is further illustrated by FIG. 5, in which curve A denotes UV spectrum for amphotericin B methyl ester hydrochloride in Water, 7 micrograms per ml, and curve B an equal spectrum for the same concentration the parent amphotericins B in V / an-

209881/0725209881/0725

ser darstellt. Kurve A, die die gleichen charakteristischen Absorptionspeaks wie die Lösung des Stammantibiotikums und des Methylesters in seiner Nichtsalzform (Fig. 4) im organischen Lösungsmittel aufweißt, ist ein echtes Spektrum und zeigt deshalb eine echte Lösung in Wasser, während Kurve B, der diese charakteristische Gestalt fehlt, zeigt, dass die Stammsubstanz sich nicht gelöst hat und daher lediglich eine Dispersion war. Es war zuvor schon von anderen festgestellt worden, dass die offenbar lösungsähnliche Dispersion lyophilisierten Amphotericin-B-Natriumdesoxycholats im V/asser nur eine Spektralkurve liefert, die im wesentlichen der Kurve B gleicht, und dies ist tatsächlich nur eine Dispersion und keineswegs eine echte Lösung.ser represents. Curve A having the same characteristic Absorption peaks such as the solution of the parent antibiotic and the methyl ester in its non-salt form (Fig. 4) in the organic Solvent is a real spectrum and therefore shows a true solution in water, while curve B, which lacks this characteristic shape, shows that the Parent substance did not dissolve and was therefore only a dispersion. It was previously stated by others that the apparently solution-like dispersion of lyophilized amphotericin-B sodium deoxycholate in the water only provides a spectral curve substantially similar to curve B, and this is actually just a dispersion and by no means a real solution.

Wie schon bemerkt, haben eine grosse Zahl von Versuchen gezeigt, dass die antimikrobiä.le Wirksamkeit der erfindungsgemässen Derivate sowohl in der Veresterungszwischenstufe der Ester als auch in der endgültigen wasserlöslichen Salzform im wesentlichen die gleiche ist wie die der Stammantibiotika. So sind z.B. in der folgenden Tabelle einige der in Vitro-Messungen wiedergegeben, die von der gegen Fungi wirksamen Stärke einer Zahl der Basen und der Derivate unter Anwendung von Standardmethoden und Kulturtechniken mit Saccharomyces cerevisiae gemacht wurden, einem Organismus, der im allgemeinen der Kategorie der Fungi zugeordnet wird und gewöhnlich für einen repräsentativen 'Aktivitätstest verwendet wird. In der Tabelle bedeuten die Zahlenwerte minimal inhibierende Konzentration,und so ist, je kleiner der Wert ist, die Wirksamkeit zur Wachstumshemmung des Organismus um so grosser.As already noted, a large number of experiments have shown that the antimicrobial effectiveness of the inventive Derivatives both in the esterification intermediate stage of the esters and in the final water-soluble salt form is essentially the same as that of the parent antibiotics. For example, in the following table are some of the in vitro measurements reproduced that of the anti-fungi strength of a number of bases and derivatives using by standard methods and culture techniques made with Saccharomyces cerevisiae, an organism that generally assigned to the category of fungi and is usually used for a representative 'activity test. In In the table, the numerical values mean the minimum inhibitory concentration, and so the smaller the value, the effectiveness the greater the inhibition of growth of the organism.

209881/0725209881/0725

links

Nystatin Nystatin-methylesterNystatin Nystatin methyl ester

Amphotericin B Amphotericin B-methylester-Hydrochlorid Amphotericin B Amphotericin B methyl ester hydrochloride

Pimaricin Pimaricin-methyleste rPimaricin pimaricin methyl esters r

Mediocidin Mediocidin-methylesterMediocidin Mediocidin methyl ester

Candicidin Candicidin-methylester-Hydrochlorid Candicidin Candicidin methyl ester hydrochloride

Trichomycin Trichomycin-methylester-Hydrochlorid Trichomycin Trichomycin methyl ester hydrochloride

Candimycin Candimycin-methylesterCandimycin Candimycin methyl ester

minimal inhibierende Konzentration/Ug/ml Saccharomyces cerevisiae minimal inhibiting concentration / Ug / ml Saccharomyces cerevisiae

3,00 4,003.00 4.00

0,250.25

3,50 4,003.50 4.00

0,035 0,0300.035 0.030

0,0200.020

0,025 0,0300.025 0.030

0,0300.030

0,025 0,0250.025 0.025

Im Falle des Amphotericin B. wurde diese Versuchsreihe auf andere Mikroorganismen ausgedehnt: die minimal inhibierenden Konzentrationen in Mikrogramm pro ml für Amphotericin B und sein Methylester-Hydrochlorid waren 0,5 bzw. 0,5 gegenüber Candida albicans, 0,5 bzw. 0,5 gegenüber Mucor rouxii, und 0,20 bzw· 0,25 E" gegenüber Aspergillus niger.In the case of amphotericin B. this series of tests was carried out on other microorganisms extended: the minimally inhibiting concentrations in micrograms per ml for amphotericin B and its methyl ester hydrochloride were 0.5 and 0.5 against Candida albicans, 0.5 and 0.5 against Mucor rouxii, and 0.20 or 0.25 U "against Aspergillus niger.

209881/07 25209881/07 25

Die Brauchbarkeit der neuen Verbindungen ist im wesentlichen erklärt worden oder sollte aus dem Voi'gcsagten zu entnehmen sein, insbesondere dahingehend, dass sie die gleiche biologische Aktivität wie die Grund- oder Stannylverbindungen besitzen und so im allgemeinen für die gleichen Zwecke verwendbar sind, Neue Verwendbarkeit von wesentlicher Bedeutung int offensichtlich, wie festgestellt, aufgrund der besonderen Löslichkeitseigenschaften. Beispielsweise war die Verwendung der Stammantibiotika zur Vermeidung oder zum Bekämpfen von Pilzinfektion oder -schaden oft erfolglos aufgrund der fehlenden Wasserloslichkeit, z.B. im Hinblick auf unbelebte Gegenstände oder auf belebte Körper, gleich ob Pflanzen (die Sprays auf Wasserbasis brauchen) oder Körper tierischer Art (wo die Polyene bei innerer Anwendung aufgrund der Wasserunlöslichkeit schlecht bewirkt haben); so bestand ein Bedarf an wasserlöslichen Mitteln, der durch die Erfindung befriedigt wird. Die wasserlöslichen Derivate besitzen wichtige weitere Verwendungsmöglichkeiten, z.B. zur Verhinderung oder Zerstörung von Pilzinfektionen in Gewebekulturen, wa sie in der gleichen Weise und zur Kultivierung der gleichen Vielfalt lebender Gewebematerialien, insbesondere unter Einschluss tierischer Gewebe, wie in der oben genannten US-PS 3 244- 590 aufgeführt, mit überragender Wirksamkeit eingesetzt werden können.The usefulness of the new compounds has essentially been explained or should be inferred from what has been said especially in that they have the same biological activity as the basic or stannyl compounds and so can generally be used for the same purposes, New usability of essential int obviously, as stated, due to the special solubility properties. For example, the use of the stem antibiotics was to prevent or control fungal infection or damage often unsuccessful due to the lack of water solubility, e.g. with regard to inanimate objects or on animate bodies, whether plants (which need water-based sprays) or animals (where the When used internally, polyenes were poorly effective due to their insolubility in water); so there was a need for water soluble ones Means which is satisfied by the invention. The water-soluble derivatives have important other uses, e.g. to prevent or destroy fungal infections in tissue cultures, wa them in the same Manner and for the cultivation of the same variety of living tissue materials, especially including animal tissues, as listed in the above-mentioned US Pat. No. 3,244-590, can be used with outstanding effectiveness.

209881/0725209881/0725

Claims

f. Acid addition salt of a polyene macrolide antibiotic (. / compound consisting of a macrocyclic lactone core, which represents a long chain of carbon atoms closed by the lactone oxygen atom where all carbon atoms of the chain are with each other linked by single or double bonds, the majority of carbon-carbon bonds are single bonds are, the chain is a number of 4 to 7 conjugated Double bonds and as.Substituenten dne ester group -COOR, where R is methyl, ethyl or propyl, a primary amino sugar, a plurality of -OH groups and one or more of the substituents IT-lower alkyl, hydroxylated Includes lower alkyl, oxygen, epoxy and arylamine.

2. A compound according to claim 1, wherein R is methyl.

3. Compound according to claim 1 or 2, wherein the parent polyene macrolide antibiotic Amphotericin B is.

4 ·· Compound according to claim 1 or 2, wherein the parent polyene macrolide antibiotic Oandicidin is.

5. A compound according to claim 1 or 2, wherein the stamrapolyene macrolide antibiotic is triehomycin.

6. A compound according to claim Λ or 2, wherein the parent polyene macrolide antibiotic is mediocidin.

7. Compound according to claim 1 or 2, wherein the parent poly-

209881/0725209881/0725

macrolide antibiotic is piraaricin.

8 · Water-soluble acid addition salt of the compounds according to one of claims 1 to 7

9. Amphotericin B methyl ester hydrochloride.

10. Gandicidin methyl ester hydrochloride.

11. Trichomycin methyl ester hydrochloride.

12. Mediocidin methyl ester hydrochloride.

13 Pimaricin methyl ester hydrochloride.

14. Process for the preparation of an ester of an amphoteric Polyene macrolide antibiotic compound comprising a macrocyclic lactone ring having a carboxyl group substituent and carries a primary amino sugar as a substituent - and which conjugated a number of 4 to 7 into the ring Has double bonds, characterized by reacting the compound with diazomethane, or diazoethane Diazopropane for esterification of the carboxyl group.

15 · The method according to claim 14, characterized in that the reaction is carried out in tetrahydrofuran as the solvent will.

16. The method according to claim 13 or 14, characterized in that that in a further step the ester is obtained and with an acid to produce an acid addition salt is implemented.

209881/0725209881/0725

17. The method according to claim 16, characterized in that hydrochloric acid is used as the acid.

18. The method according to any one of claims 14 to 17 »characterized in that that as antibiotic compound -Amphotericin B, Mediocidin, Candicidin ,. Pimaricin or trichomycin is used.

209881/0725209881/0725