DE2138453B2 - Process for obtaining a medicinal extract against high blood pressure from the hyphae of the fungus Lentinus edodes - Google Patents
Process for obtaining a medicinal extract against high blood pressure from the hyphae of the fungus Lentinus edodesInfo
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Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Gewinnen eines arzneilichen Extraktes gegen hohen Blutdruck aus den Hyphen des Pilzes Lentinus edodes aus der Klasse der Basidiomyceten, den es vorwiegend in Ostasien gibt und dessen volkstümliche japanische Bezeichnung »Shiitake« lautet.The invention relates to a method for obtaining a medicinal extract against high blood pressure from the hyphae of the fungus Lentinus edodes from the class of the Basidiomycetes, which are predominantly found in East Asia and its popular Japanese name is "Shiitake".
Während die sogenannten eßbaren Pilze in den meisten westlichen Kulturen einfach als Nahrungsdelikatesse gepriesen werden, ist in den Ländern des Orients seit langem erkannt worden, daß einige Arten eßbarer Pilze auf den verschiedenen Gebieten körperlicher und geistiger Krankheiten und Störungen der Menschen Heilwirkungen haben.While the so-called edible mushrooms are simply considered a food delicacy in most western cultures are praised, it has long been recognized in the countries of the East that some species edible mushrooms in various fields of physical and mental illnesses and disorders of people have healing effects.
Die alten Chinesen insbesondere kannten schon den therapeutischen Wert der Shiitake gegen hohen Blutdruck, wie viele von ihnen hinterlassene Schriften beweisen. Der arzneiliche Extrakt wurde durch das jahrhundertealte Verfahren des Abkochens gewonnen, im Verlauf dessen die Fruchtkörper des Pilzes einen vorgeschriebenen Zeitraum lang gekocht werden. Der dadurch gewonnene flüssige Extrakt ist jedoch nicht so wirksam, wie er sein sollte. Darüber hinaus stehen die Fruchtkörper dieses eßbaren Pilzes nicht in großen Mengen zur Verfügung oder sind zumindest sehr teuer, so daß die Entziehung ihrer arzneilich nutzbaren Bestandteile gegenwärtig in keinem Industriezweig durchgeführt wird.The ancient Chinese in particular already knew the therapeutic value of shiitake against high Blood pressure, as evidenced by many of their writings. The medicinal extract was produced by the centuries-old process of decoction obtained, in the course of which the fruiting bodies of the mushroom cooked for a prescribed period of time. The resulting liquid extract is, however not as effective as it should be. In addition, the fruiting bodies of this edible mushroom are available not available in large quantities, or at least are very expensive, so that their withdrawal is medicinal usable ingredients is currently not being carried out in any branch of industry.
Es ist ein Verfahren zur Gewinnung eines Interferinduktors gegen Virusinfektionen bekannt (DE-OS 2025 810), bei der die Aufgabe in der Isolierung von doppelstrangiger RNS mit üblichen Methoden der Nueleinsäureisolierung besteht.It is a method of obtaining an interfering inductor against virus infections known (DE-OS 2025 810), in which the task in isolation consists of double-stranded RNA using conventional nucleic acid isolation methods.
Demgegenüber liegt der Erfindung die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren zum Gewinnen eines arzneilichen Extraktes gegen hohen Blutdruck aus den Hyphen des Pilzes Lentinus edodes. Shiitake, zu entwikkeln. bei dem die medizinisch wirksamen, im allgemeinen sehr empfindlichen Substanzen in einerIn contrast, the invention is based on the object of a method for obtaining a medicinal product Extract against high blood pressure from the hyphae of the fungus Lentinus edodes. Shiitake, to develop. in which the medically active, generally very sensitive substances in one
sehr milden Weise wirtschaftlich extrahiert werden können.very mild way can be extracted economically.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß die Hyphen des eßbaren Pilzes in einem vorbereiteten Nährboden gezüchtet werden, daß die Hyphen zusammen mit dem Nährboden zu dem Zeitpunkt, an dem die Hyphen zu reifen beginnen, fein pulverisiert werden, daß diese feinen Partikel mit Wasser behandelt werden, so daß eine Aufschwemmung zustande kommt, und daß diese Aufschwemmung erst bei einer Temperatur von 30° C bis 35° C eine Stunde lang und danach ein bis zwei Stunden lang bei einer Temperatur von 45° C bis 55° C erhitzt wird, und daß 1000 ml des gewonnenen flüssigen Extrakts 584 gThe object is achieved in that the hyphae of the edible mushroom in a prepared Agar are grown that the hyphae together with the agar at the time at at which the hyphae begin to mature, are finely pulverized, that these fine particles are treated with water be, so that a suspension comes about, and that this suspension only with a Temperature from 30 ° C to 35 ° C for one hour and then for one to two hours at one temperature is heated from 45 ° C to 55 ° C, and that 1000 ml of the liquid extract obtained 584 g
η Ammoniumsulfat zugeführt wird, wonach die so gewonnenen Präzipitate entnommen werden, in Wasser gelöst werden und die Lösung dyalisiert wird, um das restliche Ammoniumsulfat zu entfernen --nd um den Durchtritt von Stoffen mit einem Molekulargewichtη ammonium sulfate is fed, after which the so obtained Precipitates are removed, dissolved in water and the solution is dyalized to the to remove residual ammonium sulfate - and to prevent the passage of substances with a molecular weight
-1» von nicht mehr als 1000 zu ermöglichen.- 1 »of not more than 1000 to allow.
Es ist bekannt, daß die Zellmembranen der Shiitake-Hyphen vorwiegend aus /J-l-3 Giucane und Chitin bestehen und daß die Zellmembranen durch /J-1-3 Glucanase und Chitinase aufgelöst werden,It is known that the cell membranes of the Shiitake hyphae predominantly consist of / J-l-3 Giucane and Consist of chitin and that the cell membranes are dissolved by / J-1-3 glucanase and chitinase,
-1'· weiche Enzyme sind, die in den Hyphenzellen durch Stoffwechselvorgänge erzeugt werden. Bei weiteren Experimenten wurde gefunden, daß die Konzentration der therapeutisch wirksamen Substanzen einschließlich der obenerwähnten Enzyme in den Hy-- 1 '· are soft enzymes that are produced in the hyphae cells by metabolic processes. In further experiments it was found that the concentration of the therapeutically active substances including the above-mentioned enzymes in the hy-
«I phenzellen im Stadium der Transformation von ihren Sekundärhyphen in Fruchtkörper am meisten ausgeprägt ist. Obwohl die genauen Gründe dafür noch unbekannt sind, wird aus den vorhandenen Beweisen gefolgert, daß es daher kommen mag, daß die«I phenzellen in the stage of transformation of their Secondary hyphae is most pronounced in fruiting bodies. Although the exact reasons for this are still unknown are, it is inferred from the evidence that it may come about that the
r> Hyphenzellen im erwähnten Stadium meist metabo-Iisch aktiv sind.r> Hyphae cells in the mentioned stage mostly metabolic are active.
Daher werdei' lach der vorliegenden Erfindung die arzneilich nutzb...-en Substanzen aus den Hyphen und nicht aus den Fruchtkörpern des Pilzes Lentinus edo-Therefore, according to the present invention, the medicinally useful substances from the hyphae and not from the fruiting bodies of the mushroom Lentinus edo-
i" des extrahiert. Das erweist sich als besonders vorteilhaft, weil die nach dem erfindungsgemäßen Verfahren gewonnenen Auszüge therapeutisch wirksamer als die nach dem jahrhundertealten Verfahren sind und weil ersteres Verfahren bedeutend weniger kostspielig alsi "des extracted. This proves to be particularly advantageous, because the extracts obtained by the method according to the invention are therapeutically more effective than those according to the centuries-old process are and because the former process is significantly less expensive than
r. letzteres ist.r. the latter is.
Die für das Verfahren dieser Erfindung gewünschten Hyphen können in Nährböden mit Holzspänen, aufgehäuftem Sägemehl, Bagasse und Flüssigkeit gezüchtet werden. Es hat sich jedoch experimentell bein stätigt, daß die Hyphen, die in Böden mit den drei erstgenannten festen Stoffen gewachsen sind, sich besser für die Herstellung von Extrakten mit den gewünschten Wirkungen eignen. Die verschiedenartigen Nährböden, die bei der Durchführung des VerfahrensThe hyphae desired for the method of this invention can be grown in nutrient media with wood chips, heaped sawdust, bagasse and liquid are grown. However, it has been experimentally developed confirms that the hyphae, which have grown in soils with the three first-mentioned solid substances, separate better suited for the production of extracts with the desired effects. The different ones Culture media used in carrying out the procedure
■>■> dieser Erfindung benutzt werden, können im wesentlichen genauso vorbereitet werden wie früher. Um die besten Ergebnisse zu erzielen, sollte jedoch im Falle einer SägemehlkulUir das Verhältnis des Sägemehlgehalts zu dem der Reiskleie etwa 9 zu 1 sein im Vcr-■> ■> of this invention can be used essentially be prepared in the same way as before. However, to get the best results it should be in the event a sawdust coulUir the ratio of the sawdust content to which the rice bran is about 9 to 1 in comparison
Wi gleich zum 7-zu-3-Verhältnis der früheren Sägemehlkultur. Equal to the 7-to-3 ratio of the earlier sawdust culture.
Obwohl ein mit der Samenkultur des Pilzes geimpfter Nährboden unter den üblichen Bedingungen gehalten werden kann, haben die Experimente gezeigt, daß die daraus hervorgegangenen Hyphen im passenden Moment einem raschen Temperatur- und/oder Feuchtigkeitswechsel ausgesetzt werden sollten, um dadurch das Wachstum bzw. die Stoffwechselvor-Although a culture medium inoculated with the seed culture of the fungus was kept under the usual conditions can be, the experiments have shown that the resulting hyphae in the appropriate Moment should be exposed to rapid changes in temperature and / or humidity thereby the growth or the metabolic process
gange zu fördern und zu beschleunigen. Wünschenswerte Wechsel der Umgebung für die Hyphen werden später ausführlich anhand einiger Beispiele des Verfahrens nach der vorliegenden Erfindung beschrieben. to promote and accelerate progress. It will be desirable to change the environment for the hyphae later described in detail by means of some examples of the method according to the present invention.
Da, wie vorhergehend erwähnt, die Hyphen, während sie Fruchtkörper bilden, die höchste Konzentration an nutzbaren Substanzen enthalten, ist es wichtig oder zumindest äußerst wünschenswert, daß sie genau in diesem Moment behandelt werden. Solch ein entscheidender Moment kann durch einige deutliche Anzeichen ermittelt werden. Als erstes wird ein ausreichend gewachsene Hyphen enthaltender Nährboden kurz vor der Bildung von Fruchkörpern an den Rändern weiß werden. Als zweites wird man an dem Hyphengsflecht eine Schwellerscheinung bemerken, sobald die Hyphen in ihren Nährböden genügend gewachsen sind.Because, as previously mentioned, the hyphae, while forming fruiting bodies, have the highest concentration of usable substances, it is important, or at least extremely desirable, that they be accurate be treated at that moment. Such a defining moment can be highlighted by some distinct signs be determined. The first thing to do is to create a nutrient medium containing sufficient hyphae turn white at the edges just before fruit bodies form. The second thing to do is to work on the Hypheng braid notice a swelling phenomenon as soon as the hyphae have grown sufficiently in their culture medium.
Aus einer Analyse des aus Shiitake-Hyphen durch das oben beschriebene Verfahren der Erfindung gewonnenen Extraktes haben sich folgende Bestandteile ergeben: 40 Enzyme einschließlich ß-1-3 Glucanase und Chitinase, 18 Aminosäuren, Vitamine B2 und B12, Ergosterin, Polysaccharide und Polypeptide."Es ist jedoch ziemlich wahrscheinlich, daß die Extrakte andere noch unbekannte nutzbare Substanzen enthalten.An analysis of the extract obtained from shiitake hyphae using the method of the invention described above resulted in the following components: 40 enzymes including β- 1-3 glucanase and chitinase, 18 amino acids, vitamins B 2 and B 12 , ergosterol, polysaccharides and polypeptides . "However, it is quite likely that the extracts contain other as yet unknown useful substances.
Nachstehend sind einige klinische Ergebnisse der Verwendung des aus Shiitake-Hyphen gewonnenen Extraktes gemäß der Lehre der vorliegenden Erfindung beschrieben, wobei die Beispiele 2 bis 5 dem Bericht »Reports on resultes of test use of liquid extract from Lintinuö Edodes Hyphae (marketed under the trade name >Johgen<)« By Manr; Sha, Internal Department, Aoyama Hospital, 7-24, 3-chome. Aoyama, Morioka City entnommer sind:Some clinical results of the use of the extract obtained from Shiitake hyphae according to the teaching of the present invention are described below, examples 2 to 5 of the report "Reports on results of test use of liquid extract from Lintinuö Edodes Hyphae (marketed under the trade name > Johgen <) «By Manr ; Sha, Internal Department, Aoyama Hospital, 7-24, 3-chome. Aoyama, Morioka City includes:
1. Eine 42jährige Frau, die jahrelang unter hohem Blutdruck von maximal 210 mmHg und minimal 160 mmHg gelitten hatte, nahm dreimal täglich vor dem Essen 100 ml dieses Extraktes ein. Innerhalb von vier Tagen sank der Blutdruck auf maximal 160 mmHg und minimal 100 mmHg und stabilisierte sich danach in diesem Bereich.1. A 42 year old woman who has been under high blood pressure of 210 mmHg maximum and minimum for years 160 mmHg, took 100 ml of this extract three times a day before meals. Within after four days the blood pressure fell to a maximum of 160 mmHg and a minimum of 100 mmHg and then stabilized in this range.
2. Ein 58jähriger Mann, der unter anderem unter hohem Blutdruck gelitten hatte, nahm einmal täglich 500 ml dieses Extraktes ein. Nach einer Woche stabilisierte sich der Blutdruck etwa bei 160/90 mmHg.2. A 58-year-old man who had suffered from high blood pressure, among other things, took once 500 ml of this extract daily. After a week the blood pressure stabilized at about 160/90 mmHg.
3. Eine 63jährige Frau, die unter anderem unter hohem Blutdruck von 180/100 mmHg gelitten hatte, nahm 60 Tage lang einmal täglich eine bestimmte Menge dieses Extraktes ein. Innerhalb einer Woche stabilisierte sich der Blutdruck bei 150/96 mmHg.3. A 63 year old woman who suffered from high blood pressure of 180/100 mmHg, among other things took a certain amount of this extract once a day for 60 days. Within one week the blood pressure stabilized at 150/96 mmHg.
4. Eine 65jährige Frau, die unter anderem unter hohem Blutdruck von 200/100 mmHg gelitten hatte, nahm 40 Tage lang einmal täglich eine bestimmte Menge dieses Extraktes ein. Nach einer Woche sank der Blutdruck auf 160/100 mmHg.4. A 65 year old woman who suffered from high blood pressure of 200/100 mmHg, among other things took a certain amount of this extract once a day for 40 days. After a Week the blood pressure dropped to 160/100 mmHg.
5. Ein 62jähriger Mann, der unter anderem unter hohem Blutdruck von 170/90 mmHg gelitten hatte, nahm 50 Tage lang einmal täglich eine bestimmte Menge dieses Extraktes ein. Nach einer Woche stabilisierte sich der Blutdruck bei etwa 160/90 mmHg.5. A 62 year old man who, among other things, suffered from high blood pressure of 170/90 mmHg took a certain amount of this extract once a day for 50 days. After a Week the blood pressure stabilized at about 160/90 mmHg.
Diese Beispiele zeigen, daß dem Fachmann mit dem nach dem erfindungsgemäßen Verfahren hergestellten Extrakt ein Mittel gegen den Bluthochdruck zur Verfugung steht, das zusammen mit den bekannten Mitteln hilft, diese weitverbreitete Krankheit wirksam zu bekämpfen.These examples show that the person skilled in the art with the prepared by the process according to the invention A remedy for high blood pressure is available along with the well known extract extract Means helps fight this widespread disease effectively.
Die vorliegende Erfindung wird nachstehend noch näher anhand folgender Beispiele beschrieben.
jThe present invention will hereinafter be described in more detail by way of the following examples.
j
1 kg Nährboden, der Bagasse und destilliertes Wasser miit einem pH-Wert von etwa 5,0 in solch einem Verhältnis enthält, daß sein Feuchtigkeitsgehalt1 kg of nutrient medium, the bagasse and distilled water with a pH value of about 5.0 in such a Ratio that contains its moisture content
ίο etwa 60% bis 65% beträgt, wurde in ein geeignetes Gefäß gefüllt und bei 121° C 20 Minuten lang zum Zwecke der Sterilisation unter Dampf erhitzt. Der sterilisierte Nährboden wurde mit einer Shiitake-Samenkultur geimpft und stand 60 Tage lang in einemίο is around 60% to 65%, has been turned into a suitable one The vessel is filled and heated under steam at 121 ° C for 20 minutes for the purpose of sterilization. Of the sterilized medium was made with a shiitake seed culture vaccinated and stood in one for 60 days
Ii Raum mit Klimaanlage bei einer im wesentlichen konstanten Temperatur von etwa 25 ° G. Wegen des gewünschten Temperaturwechsels wurde der Nährboden dann in einen Raum mit etwa 4° C bis 8° C gestellt. Nach 72 Stunden in dem niedrigtemperiertenII room with air conditioning at an essentially constant temperature of about 25 ° G. Because of the desired temperature change, the nutrient medium then placed in a room around 4 ° C to 8 ° C. After 72 hours in the low-temperature one
-•ο Raum wurde der Nährboden 24 Stunden lang zusammen mit seinem Gefäß in Wasser von etwa 5° C getaucht. Da man bei den jetzt die ganze Oberfläche des Nährbodens bedeckenden Shiitake-Hyphen die obenerwähnte Schwellerscheinung beobachten- • ο space was put together for 24 hours with his vessel immersed in water at about 5 ° C. Since you now have the whole surface of the shiitake hyphae covering the nutrient medium, observe the above-mentioned swelling phenomenon
r> konnte, wurden die Hyphen zusammen mit einem Teil des Nährbodens fein pulverisiert. 300 g der daraus entstandenen Partikel wurden dann etwa 1000 ml destilliertem und sterilisiertem Wasser mit einem pH-Wert von etwa 5,0 zugeführt. Die dadurch erhaltener> could, the hyphae were along with part of the nutrient medium finely powdered. 300 g of the resulting particles were then distilled about 1000 ml and sterilized water with a pH of about 5.0. The thereby obtained
«ι Aufschwemmung wurde in einem fest verschlossenen Gefäß zunächst eint Stunde lang bei etwa 30° C und dann zwei Stunden lang bei etwa 50° C erhitzt. Danach wurde die Aufschwemmung unter Druck durch ein Tuch gefiltert und dann mit Hilfe eines Mem-The suspension was initially carried out in a tightly closed vessel at about 30 ° C. for one hour then heated for two hours at about 50 ° C. Thereafter the suspension was filtered through a cloth under pressure and then with the help of a mem-
Γι branfilters mit einer Porengröße von etwa 0,45 μ durch Dialyse getrennt, um etwa 600 ml flüssigen Extrakt zu gewinnen, der die nutzbaren Substanzen enthielt.Γι branfilters with a pore size of about 0.45 μ separated by dialysis to obtain about 600 ml of liquid extract containing the usable substances contained.
.„, Beispiel II. ", Example II
Das Verfahren bei Beispiel I wurde genau wiederholt; der beschriebene Nährboden wurde lediglich durch einen Boden ersetzt, der Sägemehl eines großblättrigen Baumes und Reiskleie im Verhältnis von ii etwa 9 zu 1 enthielt und dessen Feuchtigkeitsgehalt durch die Zufuhr von destilliertem Wasser mit einem pH-Wert von etwa 5,0 auf etwa 60% bis 65 % reguliert wurde. Auch daraus wurden etwa 620 ml flüssiger Extrakt gewonnen.The procedure in Example I was repeated exactly; the nutrient medium described was only replaced by a soil, the sawdust of a large-leaved tree and rice bran in the ratio of ii contained about 9 to 1 and its moisture content regulated by the addition of distilled water with a pH of about 5.0 to about 60% to 65% became. About 620 ml of liquid extract were also obtained from this.
Eine Shiitake-Samenkultur wurde in das Holz der Japanischen Eiche (Quercus glandulifera) geimpft und unter den üblichen Bedingungen gezüchtet. EtwaA shiitake seed culture was inoculated into the wood of the Japanese oak (Quercus glandulifera) and grown under the usual conditions. Approximately
Vi in dem Moment, als die vermehrten Hyphen zu reifen begannen, wurden sie mit dem Holz pulverisiert. E£inem Kilogramm der daraus gewonnenen Partikel wurden 1000 ml destilliertes und sterilisiertes Wasser mit einem pH-Wert von etwa 5,0 zugeführt. DanachVi at the moment when the augmented hyphae mature started, they were pulverized with the wood. A £ inem Kilograms of the particles obtained from it became 1000 ml of distilled and sterilized water supplied at a pH of about 5.0. Thereafter
mi wurde die Aufschwemmung im wesentlichen wie in Beispiel I beschrieben behandelt, und es wurden etwa 700 ml flüssiger Extrakt gewonnen.mi, the suspension was essentially as in Example I and approximately 700 ml of liquid extract were obtained.
hi 1000 ml des erfindungsgemäß gewonnenen flüssigen Extraktes der Shiitake wurden mit etwa 584 g Ammoniumsulfat gemischt. Die Lösung stand 24 Stunden lang bei Zimmertemperatur; dadurch wurdehi 1000 ml of the liquid obtained according to the invention Shiitake extract was mixed with about 584 g of ammonium sulfate. The solution stood on 24 For hours at room temperature; thereby became
5 65 6
Niederschlag der nutzbaren Substanzen verur- tes und sterilisiertes Wasser mit einem pH-Weri von , die in dem flüssigen Extrakt enthalten waren. etwa 5,ügegeben. Diese Lösung wurde mit Hilfe einer durch Filtrierung angesammelten Präzipitaie halbdurchlässigen Membran durch Dialyse getrenni, en dann nach jeweiligem Filtern dreimal mit ei- um dann etwa 35 m! ammoniumsulfatfreie, die nutzist gesättigten Lösung Ammoniumsulfat ausge- > baren Substanzen enthaltende Lösung zu erhalten. ien. 10 g der so behandelten Präzipitate (in Danach wurde diese Probe den obengenannten Patern Zustand) wurden in etwa 100 ml destillier- tienten gegeben.The usable substances precipitate and sterilized water with a pH value of contained in the liquid extract. about 5, given. This solution was made with the help of a by filtering accumulated precipitates semipermeable membrane separated by dialysis, After each filtering, three times with one, then around 35 m! ammonium sulfate free that is useful saturated solution containing ammonium sulphate. ien. 10 g of the precipitates treated in this way (in this way, this sample was then used in the above-mentioned Patern Condition) were added to about 100 ml of distilled water.
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