DE2055048A1

DE2055048A1 - Tlc recording process - for substances which selectively absorb iodin

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Publication number: DE2055048A1
Application number: DE19702055048
Authority: DE
Inventors: Paul-Gerhard Dr.med. 7809 Siegelau. GOIn 31-08 Munder
Original assignee: Max Planck Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV
Current assignee: Max Planck Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV
Priority date: 1970-11-09
Filing date: 1970-11-09
Publication date: 1972-05-18

Abstract

In a process for recording a thin-layer chromatogram contg. substances which selectively absorb iodine, the chromatogram is stained and the surface of the stained chromatogram is contacted with the adhesive layer of a piece of self-adhesive foil (e.g. PVC, acetate, cellulose) until sufficient iodine has migrated from the chromatogram into the adhesive layer, and the synthetic foil is then removed from the chromatogram and preserved.

Description

Verfahren und Material zur Dokumentation eines Dünnschicht-Chromatogramms. Process and material for the documentation of a thin-layer chromatogram.

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren und ein Material zur Dokumentation eines Dunnschicht-Chromatogramms, das Jod selektiv absorbierende Substanzen enthält. The present invention relates to a method and a material for the documentation of a thin-layer chromatogram that selectively absorbs iodine Contains substances.

Mit der Dünnschicht-Chromatographie lassen sich bekanntlich schnell kleinste Mengen von komplizierten Stoffgemischen, z.B. It is well known that thin-layer chromatography can be used quickly smallest amounts of complicated substance mixtures, e.g.

ätherischen Olen, Steroiden, aromatischen Kohlenwasserstoffen, Teeren, Fettfarbstoffen und dgl. adsorptionschromatographisch auftrennen. Die Dünnschicht-Chromatographie ist der Papier-Chromatographie hinsichtlich Laufzeit und Empfindlichkeit stark überlegen, außerdem ermöglicht sie auch die Anwendung von sehr agressiven Reagenzien. Andererseits hat die Dtinnschicht-Chromatographie, die mit gleichmäßigen, etwa 10 bis 15 /um dünnen Schichten aus Kieselgel, Aluminiumoxid, Cellulosepulver und dgl., welche auf einer Trägerplatte aus Glas angeordnet sind, durchgeführt wird, den Nachteil, daß die Aufbewahrung oder "Dokumentatint der erhaltenen Chromatogramme wegen der relativ großen Abmessungen und der Empfindlichkeit der Platten viel Raum und große Sorgfalt erfordert, während Papier-Ghromatogramme ohne weiteres in Akten und dgl. abgelegt werden können.essential oils, steroids, aromatic hydrocarbons, tars, Separate fatty dyes and the like by adsorption chromatography. Thin-layer chromatography is far superior to paper chromatography in terms of run time and sensitivity, it also enables the use of very aggressive reagents. on the other hand has the thin layer chromatography, which with uniform, about 10 to 15 / um thin layers of silica gel, aluminum oxide, cellulose powder and the like. Which are arranged on a support plate made of glass, the disadvantage that the storage or "documentation of the chromatograms obtained because of the relatively large dimensions and the sensitivity of the panels a lot of space and large Care is required, while paper chromatograms are easily stored in files and the like. can be filed.

Der vorliegenden Erfindung liegt dementsprechend die Aufgabe zugrunde, ein Verfahren und ein Material zur Dokumentation von Dünnschicht-Chromatogrammen anzugeben, die es ermöglichen, einen Großteil der in einem Dnnnschicht-Chromatogramrn enthaltenen Information einfach und raumsparend dokumentieren zu können. The present invention is accordingly based on the object a method and a material for the documentation of thin-layer chromatograms which make it possible to reproduce a large part of the data in a thin-layer chromatogram to be able to document the information contained in a simple and space-saving manner.

Gemäß der Erfindung wird diese Aufgabe dadurch gelöst, daß das zu dokumentierende Dünnschicht-Chromatogramm, das normalerweise in einer dünnen Adsorptionsschicht auf einer Trägerplatte enthalten ist, mit Jod oder einem anderen Mittel, das von den getrennten Substanzen selektiv absorbiert wird, angefärbt wird und daß die Oberfläche des angefärbten Chromatogrammes mit einer Kleberschicht eines Stückes einer selbstklebenden Kunststoffolie solange in Berührung gebracht wird, bis genügend Anfärbemittel, wie Jod oder dgl. aus dem Chromatogramm in die Kleberschicht übergegangen ist. According to the invention, this object is achieved in that the to documenting thin-layer chromatogram, usually in a thin adsorption layer on a carrier plate is contained with iodine or another Agent which is selectively absorbed by the separated substances is colored and that the surface of the colored chromatogram with an adhesive layer of a Piece of self-adhesive plastic film is brought into contact until there is enough coloring agent, such as iodine or the like. From the chromatogram into the adhesive layer has passed.

Bei Verwendung von Jod als Anfärbemittel wird vorzugsweise eine Kunststoffolie verwendet, deren Kleberschicht Stärke enthält oder mit Stärke überzogen ist. Besonders geeignet ist Kartoffelstärke. When using iodine as a coloring agent, a plastic film is preferred whose adhesive layer contains starch or is coated with starch. Particularly Potato starch is suitable.

Weitere Ausgestaltungen und Weiterbildungen der Erfindung sind in den Unteransprüchen gekennzeichnet. Further refinements and developments of the invention are shown in FIG characterized the subclaims.

Die Erfindung wird im folgenden anhand der Zeichnung näher erläutert, es zeigen: Fig. 1 schematische Querschnittsansichten einer DUnnschicht-Chromatogrammplatte während einer Reihe von Schritten bei der Durchführung eines Verfahrens gemäß einem Ausführungsbeispiel der Erfindung, Fig. 2 eine Draufsicht auf eine fertige, abheftbare nKopieft eines DUnnschicht-Chromatogrammes, die mit dem vorliegenden Verfahren hergestellt wurde und Fig. 5 eine Stirnansicht der Kopie gemäß Fig. 2. The invention is explained in more detail below with reference to the drawing, 1 shows schematic cross-sectional views of a thin-layer chromatogram plate during a series of steps in carrying out a method according to a Embodiment of the invention, FIG. 2 is a plan view of a finished, filable Copy of a thin-layer chromatogram produced with the present process and FIG. 5 is an end view of the copy according to FIG. 2.

Als Ausführungsbeispiel der Erfindung wird im folgenden die Dokumentation eines Dunnschicht-Chromatogra-nes von Phospholipiden alveolarer Makrophagen beschrieben. The documentation below is an exemplary embodiment of the invention of a thin-layer chromatography of phospholipids of alveolar macrophages.

Das vorliegende Verfahren kann auf DUnnschicht-Chromatogramme angewendet werden, die in bekannter Weise hergestellt wurden. The present method can be applied to thin-layer chromatograms which have been produced in a known manner.

Vorzugsweise wird jedoch die Adsorptionsschicht der zur Herstellung des DUnnschicht-Chromatogrammes verwendeten Platte dadurch abriebfester gemacht, daß man dem Silicagel der DUnnschicht-Chromatogrammplatte eine geringe Menge an C4rboxyfl1ethylcellulose (CMC) zusetzt. Vorzugsweise wird hierzu handelsübliche CMC in mehrfach destilliertem Wasser zu einer Vorratslösung, die 0,5 Gew. CMC enthält, gelöst. Diese Vorratslösung wird bei 4 °C aufbewahrt. Die Vorratslösung wird in einer solchen Menge, daß sich eine Konzentration von etwa 0,05 bis 0,5, vorzugsweise etwa 0,1 ffi ergibt, der Kieselgeldispersion zugesetzt. Die Mischung wird dann 10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt bevor die Platten mit der Mischung beschichtet werden.Preferably, however, the adsorption layer is used for production the plate used in the thin-layer chromatogram is made more abrasion-resistant, that the silica gel of the thin-layer chromatogram plate a small amount of C4rboxyfl1ethylcellulose (CMC) added. For this purpose, commercially available CMC in repeatedly distilled water to a stock solution containing 0.5 wt. CMC, solved. This stock solution is at 4 ° C kept. The stock solution is used in such an amount that a concentration of about 0.05 to 0.5, preferably results in about 0.1 ffi, added to the silica gel dispersion. The mixture is then stirred for 10 minutes at room temperature before the plates with the mixture be coated.

Das beschriebene Zusetzen des CMC zum Silicagel hat außerdem noch den Vorteil, daß man Adsorptionsschichten mit einer Dicke von bis zu 2 mm für die präparative Dünnschicht-Chromatographie herstellen kann. The described addition of the CMC to the silica gel also has the advantage that you have adsorption layers with a thickness of up to 2 mm for the can produce preparative thin-layer chromatography.

Die mit der beschriebenen Mischung dick beschichteten Platten sollen langsam getrocknet werden (Trocknungsdauer vorzugsweise mindestens 24 Stunden). Die trocknen Platten zeichnen sich durch eine feste Oberfläche aus, von der sich kein Siliciumoxid löst, was insbesondere bei Verwendung von radioaktiv markierten Substanzen stören würde. The boards thickly coated with the mixture described should be dried slowly (drying time preferably at least 24 hours). The dry plates are characterized by a solid surface from which silicon oxide does not come off, which would be a problem especially when using radioactively labeled substances.

Nachdem das zu analysierende Materias einer Glasplatte 1 und der Adsorptionsschicht 2 bestehenden DUnnschicht-Chromatogrammplatte in üblicher Weise getrennt worden ist (Fig. la), wer-1 den die getrennten Substanzen 3 mit Jod angefärbt. Hierzu wird das Dünnschicht-Chromatogramm mit Joddampf oder einer Jodlösung behandelt. After the material to be analyzed is a glass plate 1 and the Adsorption layer 2 existing thin-layer chromatogram plate in the usual way has been separated (Fig. la), who-1 stained the separated substances 3 with iodine. For this purpose, the thin-layer chromatogram is treated with iodine vapor or an iodine solution.

Um eine unspezifische Anfärbung des Untergrundes der Silicagelschicht zu vermeiden wird diese Schicht vorzugsweise vor der Jodbehandlung 10 Sekunden aus einer Entfernung von 40 bis 50 cm mit doppelt destilliertem Wasser besprüht. Dieses Besprühen wird durchgeführt, nachdem das bei der Herstellung des Chromatogramms verwendete Lösungsmittel vollständig verdampft ist. About unspecific staining of the subsurface of the silica gel layer To avoid this, it is preferable to leave this layer off for 10 seconds before the iodine treatment sprayed with double distilled water from a distance of 40 to 50 cm. This Spraying is done after that in the preparation of the chromatogram solvent used has completely evaporated.

Die Färbung des Chromatogramms erfolgt vorzugsweise dadurch, daß es gleichmäßig mit einer 2,5-gewichtsprozentigen Lösung von Jod in Chloroform oder einer Mischung aus zwei Teilen Chloroform und einem Teil Methanol solange besprüht wird, bis alle Substanzen 5 sichtbar sind. Gewöhnlich bildet sich dabei vorübergehend auf manchen Teilen der Platte eine dünne Schicht aus Jodkristallen, die dadurch wieder entfernt werden kann, daß man die Platte unter einem Glassturz solange aufbewahrt bis die Jodschicht wieder verdampft ist. Das ist gewöhnlich innerhalb von 2 bis 5 Minuten der Fall und gleichzeitig wird dadurch die Färbung der Substanzen des Chromatogramms vergleichmäßigt. The chromatogram is preferably colored in that it evenly with a 2.5 percent by weight solution of iodine in chloroform or a mixture of two parts of chloroform and one part of methanol as long as sprayed until all substances 5 are visible. Usually it forms temporarily on some parts of the plate a thin layer of iodine crystals that can be removed again that the plate is kept under a glass cover for as long until the iodine layer has evaporated again. This is usually within 2 to 5 minutes the case and at the same time thereby the coloring of the Substances of the chromatogram equalized.

Anstelle des in Fig. 1b schematisch dargestellten Besprühen mit einer Jodlösung können auch andere Färbeverfahren verwendet werden, z.B. kann das Chromatogramm Joddampf ausgesetzt werden. Instead of the spraying shown schematically in Fig. 1b with a Iodine solution, other staining methods can also be used, e.g. the chromatogram Exposed to iodine vapor.

Man verdampft hierzu kristallines Jod in einem abgeschlossenen Raum, der die Platte enthält, bis die im Chromatogramm enthaltenen Substanzen genügend angefärbt sind. Anschließend bläst man einige Sekunden Luft oder Stickstoff über die Platte um unspezifisch absorbiertes Jod zu entfernen.To do this, crystalline iodine is evaporated in a closed room, which contains the plate until the substances contained in the chromatogram are sufficient are stained. Then you blow air or nitrogen over a few seconds the plate to remove non-specifically absorbed iodine.

Zur Dokumentation, d.h. zur Anfertigung einer Kopie des so vorbereiteten Chromatogramms wird die Oberfläche der die angefärbten Substanzen 5' enthaltenden Silicagelschicht 2 mit der Kleberschicht 4 einer selbstklebenden (druckhaftenden) Klebefolie 5 in Berührung gebracht (Fig. lc). Hierzu eignen sich die meisten üblichen Selbstklebefolien, z.B. Acetat-, PVC- und Zellglasfolien mit den üblichen Kleberschichten, z.B. Kleberschicht auf Kautschukbasis mit gegebenenfalls üblichen Zusätzen z.B. For documentation, i.e. to make a copy of the prepared The chromatogram is the surface of the colored substances 5 'containing Silica gel layer 2 with the adhesive layer 4 of a self-adhesive (pressure-sensitive) Adhesive film 5 brought into contact (Fig. Lc). Most of the usual ones are suitable for this Self-adhesive films, e.g. acetate, PVC and cellulose films with the usual adhesive layers, e.g. rubber-based adhesive layer with optionally customary additives e.g.

B-Pininharz oder Terpenpolymerisat. Als gut geeignet hat sich z.B. Tesa-Film (Wz; Nr. 5530/31) bewährt.B-pinine resin or terpene polymer. E.g. Tesa film (watermark no. 5530/31) has proven its worth.

Die Kleberschicht absorbiert (wie in Fig. lc bei 3 angedeutet ist) einen Teil des Jods aus dem angefärbten Chromatogramm und man erhält dadurch eine genaue Kopie des Originals, das auch die Intensitäten des Originals sehr gut wiedergibt. The adhesive layer absorbs (as indicated in Fig. 1c at 3) part of the iodine from the colored chromatogram and you get a exact copy of the original, which also reproduces the intensities of the original very well.

Vorzugsweise wird für das oben beschriebene t'Kopierentt eine Klebefolie verwendet, deren Kleberschicht Stärke enthält oder noch besser mit Stärke überzogen ist. Durch die Stärke wird die Empfindlichkeit erhöht und ein unverwünschtes Haften der Kleberschicht an der Silicagelschicht des Chromatogramms verhindert. An adhesive film is preferably used for the above-described copying whose adhesive layer contains starch or, even better, coated with starch is. The strength increases the sensitivity and undesirable adhesion the adhesive layer on the silica gel layer of the chromatogram prevents.

Die Beschichtung der Klebefolie mit Stärke kann einfach dadurch erfolgen, daß man Stärke in einer flachen Schale ausbreitet und die Kleberschicht der Klebefolie auf die Stärkeschicht drückt. Die nicht haftende Stärke wird abgewischt. The coating of the adhesive film with starch can be done simply by that one spreads starch in a shallow dish and the adhesive layer of the adhesive film presses on the starch layer. The non-stick starch is wiped off.

Wie lange die Kleberschicht in Berührung mit dem Chromatogramm gehalten werden muß, um eine einwandfreie Kopie zu erzeugens hängt bis zu einem gewissen Grade davon ab, wieviel angefärbte Substanz im Chromatogramm enthalten ist. Im allgemeinen ist eine Andruckzeit von 5 Minuten vollständig ausreichend, Bei Verwendung einer Klebefolie mit Stärke wird die vom Chromatogramm abgenommene "Kopie" vorzugsweise mit Wasserdampf behandelt, z.B. indem man die Folie über ein Gefäß mit kochendem Wasser hält. Hierdurch wird die gelbe, nicht sehr stabile Farbe des Jods in die tiefblaue Farbe des Amyl-Jod-Komplexes verwandelt. Anschließend wird der Klebestreifen getrocknet, wobei er vorzugsweise unter Spannung gehalten wird, um ein Runzeln zu vermeiden. Der Streifen ist normalerweise in 10 Minuten trocken und seine Kleberschicht wird dann vorzugsweise mit einem zweiten Stück Klebfolie 6 abgedeckt. How long the adhesive layer kept in contact with the chromatogram must be in order to produce a flawless copy depends to a certain extent Depending on how much stained Substance contained in the chromatogram is. In general, a printing time of 5 minutes is completely sufficient, When using an adhesive film with starch, the one taken from the chromatogram is removed "Copy" is preferably treated with steam, for example by passing the film over a Holding vessel with boiling water. This makes the yellow, not very stable color of iodine is transformed into the deep blue color of the amyl-iodine complex. Afterward the adhesive strip is dried, preferably keeping it under tension to avoid wrinkling. The strip is usually in 10 minutes dry and its adhesive layer is then preferably covered with a second piece of adhesive film 6 covered.

Der zur Kopie verwendete Klebestreifen 5 oder vorzugsweise das zum Abdecken verwendete Stück Klebestreifen 6 kann einen Beschriftungs- und/oder Abheftteil 10 enthalten, wie es in Fig. The adhesive tape used for copying 5 or preferably the one for Covering the used piece of adhesive tape 6 can be a lettering and / or filing part 10 as shown in Fig.

2 und 5 dargestellt ist. Dieser Teil 10 besteht vorzugsweise aus Papier, das leicht beschriftet werden kann.2 and 5 is shown. This part 10 is preferably made of paper, that can be easily labeled.

Die gefärbten Banden der in Fig. 2 schematisch dargestellten Dünnschicht-Chromatogramm-Kopie können z.B. (von unten nach oben) Lysolecithin, Kephalin, Olsäure, Phosphatidsäure und Neutrallipiden entsprechen. The colored bands of the thin-layer chromatogram copy shown schematically in FIG can e.g. (from bottom to top) lysolecithin, cephalin, oleic acid, phosphatidic acid and neutral lipids.

Die in der beschriebenen Weise hergestellten Kopien zeigten auch nach zwei Jahren keine merkliche Veränderung. Das kopierte, ursprüngliche Chromatogramm wird durch das Kopieren nicht beeinträchtigt, Das beschriebene Verfahren stört auch andere Anfärbeverfahren nicht. The copies made in the manner described also showed no noticeable change after two years. The copied, original chromatogram is not affected by copying. The procedure described also interferes other staining methods do not.

Die Kopie ermöglicht zwar keine genauen quantitativen Messungen, sie stimmt jedoch so gut mit dem Original überein, daß selbst geringere Auswertefehler und kleine Abweichungen bei späteren Vergleichsversuchen ohne weiteres erkannt werden können. Although the copy does not allow accurate quantitative measurements, however, it agrees so well with the original that even minor evaluation errors and small deviations are easily recognized in later comparison tests can.

Claims

1. Procedure for the documentation of a thin-layer chromatogram, the iodine contains selectively absorbing substances, which are not possible i c h n e t that the chromatogram (Fig. La) is stained with iodine (Fig. Lb) and that the surface of the colored chromatogram with an adhesive layer of a Piece of self-adhesive plastic film is brought into contact until sufficient Iodine has passed from the chromatogram into the adhesive layer, and that then the Plastic film is removed from the chromatogram and stored.

2.) The method according to claim 1, d a d u r c h g e k e n n -z e i c It does not mean that the adhesive layer is stained with iodine before it is brought into contact with it Chromatogram is coated or impregnated with starch.

3.) The method according to claim 2, d a d u r c h ge k e n n -z e i c h n e t that the removed from the chromatogram film treated with steam and is then dried.

4.) The method of claim 1, 2 or 5, d a d u r c h g e -k e n I would like to point out that the adhesive side of the removed film (5) will eventually come with it another piece of film (6) is covered (Fig. Led).

5.) Method according to one of the preceding claims, d a -d u r It is noted that the chromatogram for staining after evaporation of the solvent used in the preparation of the Chromato gram with a preferably about 2.5 ß iodine containing iodine solution is sprayed.

6.) The method according to claim 5, d a d u r c h g e k e n n -z e i c n e t that the chromatogram before spraying with the iodine solution with pure water is sprayed.

7.) Method according to one of the preceding claims, d a -d u r c h e k e k e n n n n z e i c h n e t that for the production of the thin-layer chromatogram an absorbent layer treated with carboxymethyl cellulose is used.

8.) The method according to claim 7, d a d u r c h g e k e n n -z e i c h n e t that for the production of the absorption layer silica gel, which is about 0.05 to 0.3 wt. Carboxymethyl cellulose is used.

9.) material for performing the method according to claim 2, g e no indication of a preferably colorless, transparent plastic film, which has an adhesive layer, preferably based on rubber, which with a thin, sticky layer of starch powder is coated or impregnated.

10.) Material according to claim 9, g e k e n n z e i c h n e t d u r c h a piece of cover film (6), which is provided with a for filing and / or labeling Edge strip (10), preferably made of paper, is provided.

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