DE4432485A1 - Rapid test for differentiation of erythrocytes features - Google Patents

Rapid test for differentiation of erythrocytes features

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DE4432485A1 DE19944432485 DE4432485A DE4432485A1 DE 4432485 A1 DE4432485 A1 DE 4432485A1 DE 19944432485 DE19944432485 DE 19944432485 DE 4432485 A DE4432485 A DE 4432485A DE 4432485 A1 DE4432485 A1 DE 4432485A1
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Abstract

The invention is concerned with a quick test for the differentiation of the features of erythrocytes in which antisera contained on paper inhibit the migration of erythrocytes by a solvent in different ways as well as the use of this test for the determination of blood groups and their compatibilities. In addition a bed-side test card is claimed on which this test is used as well as the manufacturing of such cards.

Description

Gegenstand der Erfindung ist ein Schnelltest zur Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen, vor allem geeignet zur Verwendung als Bedside-Test zur einfachen und schnellen Bestimmung von Blutgruppen oder deren Bestätigung aus Kapillarblut, der aber auch mit Erythrocytensuspensionen durchführbar ist, wenn die Zelldichte derjenigen von Vollblut entspricht, wobei die Testkarte gleichzeitig zur Dokumentation des Tests verwendbar ist. The invention is a rapid test for differentiation of erythrocyte characteristics, especially suitable for use as a bedside test for easy and quick determination of blood groups or their confirmation from capillary blood, is however feasible with Erythrocytensuspensionen, when the cell density is similar to that of whole blood, wherein the test card is also used for documentation of the test.

Bedsidetests sind als Bestätigungstests unmittelbar vor der Transfusion vorgeschrieben, da im allgemeinen der Spender bei der Transfusion nicht selbst zugegen ist, um Verwechslungen von Blutkonserven auszuschließen. Bedsidetests are prescribed as confirmatory tests immediately before transfusion, since it is not present, in general, the dispenser in the transfusion itself, to prevent any confusion of stored blood. Derartige Tests sind seit etwa 1908 beschrieben und wurden zuerst in Anwesenheit des Spenders durchgeführt. Such tests are described since about 1908 and were first performed in the presence of the donor. Seit 1955 wurde auf Kartons mit eingetrockneten Antiseren ein ABO/Rh Bedsidetest verwendet, es folgten Teste mit gebrauchsfertigen, flüssigen Antiseren, dann Dipsticks auf Elisa-Basis. Since 1955 was an ABO / Rh used on boxes of dried antisera bedside test, followed by tests with ready-made, liquid antisera, then dipsticks on Elisha basis.

Alle diese Tests benötigen mindestens 1-2 Minuten zur Austestung, ggf. noch 10 Minuten zur Vorbereitung und sind bis auf die Dipsticks nur durch schriftliches Protokoll dokumentierbar. All these tests require at least 1-2 minutes of debugging, possibly another 10 minutes to prepare and can be documented only by written protocol to the dipsticks.

Der erfindungsgemäße Test basiert auf der auf Runge und Schönbein zurückgehenden Methode der Kapillaranalyse bzw. Papierchromatographie. The assay of the invention is based on the returning to Runge and Schönbein method of Kapillaranalyse or paper chromatography. Die papierchromatographische Auftrennung von Proteinen ist eine gängige, jedoch aufwendige Methode. Paper-separation of proteins is a common but costly method. So ist zum Beispiel die Bestimmung von ABO-Gruppen-Antigenen in verwestem Blut mittels aufsteigender Papierchromatographie in Salzsäure/Methanol- Systemen beschrieben, wobei die Antigene nach anschließender Elution bestimmt werden (Kuchkinov, Aktual. Vopr. Sud.-Med. Ekspert. Veshchestv. Dokazatel′stv, 1982, 38-44 (Chemical Abstracts 101, 1984, 67 173)). For example, the determination of the ABO group antigens in decaying blood is described by ascending paper in hydrochloric acid / methanol systems wherein the antigens are determined by subsequent elution (Kuchkinov, Current. Vopr. Sud.-Med. Ekspert. Veshchestv. Dokazatel'stv, 1982, 38-44 (Chemical Abstracts 101, 1984, 67173)). Dieses umständliche Verfahren ist natürlich völlig ungeeignet für einen Bedside-Test, bei dem es auf Schnelligkeit, Genauigkeit und Dokumentierbarkeit ankommt. This cumbersome process is of course totally unsuitable for a bedside test, which depends on speed, accuracy, and better documentation.

Bekannterweise ist zudem die papierchromatographische Bestimmung von Blutgruppen nicht möglich, da Chromatographiepapiere keine Differenzierung zwischen agglutinierten und nicht agglutinierten Blutproben erlauben. Paper-known, the determination of blood groups is not possible also because Chromatography do not allow differentiation between agglutinated and non-agglutinated blood samples.

Aufgabe der Erfindung ist daher die Bereitstellung eines schnellen, einfach zu handhabenden, sicheren und dokumentierbaren Tests zur Blutgruppenbestätigung. The object of the invention to provide a fast, easy-to-use, secure, documentable tests for blood grouping confirmation.

Überraschenderweise wurde nun gefunden, daß eine kapillaranalytische Blutgruppenbestätigung mittels Papier und einem Laufmittel durchführbar ist, wobei Erythrozyten durch das Laufmittel transportiert werden und durch deren unterschiedliche Migration eine dauerhafte Dokumentation zur Verfügung steht. Surprisingly, it has now been found that a kapillaranalytische blood group confirmation is carried out by means of paper and a solvent system, wherein erythrocytes are transported through the eluent and is a permanent documentation available through their different migration. Bei Zusatz von passenden Antiseren wird dieser Transport der Erythrozyten durch deren Agglutination blockiert, da die Agglutinate immobil sind. With the addition of appropriate antisera this transport of erythrocytes is blocked by their agglutination, since the agglutinates are immobile. Chromatographiepapiere erlauben keine Differenzierung zwischen agglutinierten und nicht agglutinierten Bluten, obwohl für diese Papiere die Papierherstellung auf Konstanz und Reproduzierbarkeit optimiert wurde. Chromatography do not allow differentiation between agglutinated and non-agglutinated bleeding, although the paper-making to stability and reproducibility has been optimized for these securities.

Gegenstand der Erfindung ist daher ein Schnelltest zur Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen auf Papier, auf welchem die entsprechenden Antiseren aufgetragen werden, und die Differenzierung durch die unterschiedliche Migration der Erythrozyten durch ein Laufmittel optisch und dauerhaft möglich ist. The invention therefore provides a rapid test for differentiation of erythrocyte features on paper, on which the corresponding antisera are applied, and differentiation due to the different migration of the erythrocytes by a running means is optically and permanently possible.

Ein weiterer Gegenstand der Erfindung ist daher die Verwendung des erfindungsgemäßen Tests zur raschen Bestimmung von Blutgruppen, deren Unterscheidung und/oder der Bestimmung von Blutgruppenunverträglichkeiten. Another object of the invention is the use of the test according to the invention for the rapid determination of blood groups whose distinction and / or the determination of blood group incompatibilities.

Ein weiterer Erfindungsgegenstand ist eine sogenannte Bedside-Testkarte zur raschen und sicheren Überprüfung von Spender- und Empfängerblut direkt vor der Übertragung und deren Dokumentation, sowie die Herstellung dieser Karten. Another subject of the invention is a so-called bedside test card for quick and safe testing of donor and recipient blood directly before the transfer and documentation, as well as the production of these cards.

Geeignete Papiersorten für den erfindungsgemäßen Test sind ungeleimte Papiere, bevorzugt Filtrierpapier (wie z. B. Laborfiltrierpapier oder Kaffeefilter), Fließpapier (wie z. B. Küchenkrepp, Löschpapier, Trockentücher aus Papier oder Aufsaugpapier, beispielsweise für Labortische) oder Hygienepapier (wie z. B. Toilettenpapier oder Haushaltstücher, Handtücher, Taschentücher und Servietten aus Papier). Suitable papers for the inventive assay are unsized papers, preferably filter paper (such. As Laborfiltrierpapier or coffee filter), blotting paper (such as. For example kitchen paper, blotting paper, dry towels of paper or pickup paper, for example for tables) or tissue paper (such. as toilet paper or household towels, towels, handkerchiefs and napkins of paper). Besonders bevorzugt sind Papiere der Qualität Toilettenpapier, Abtrockentücher, Kaffeefilter, Aufsaugpapier, wobei ganz besonders bevorzugt Papierqualitäten für Kaffeefilter und Aufsaugpapier für Labortische sind. Particularly preferred are papers of quality toilet paper, tea towels, coffee filters, pickup paper, with very particular preference to paper qualities for coffee filters and pickup paper for lab tables. Die Papiere können bevorzugt auch eine einseitige Beschichtung aus lösungsmittelundurchlässigem Material, bevorzugt Polyethylen, aufweisen, durch welches die Befestigung auf der Dokumentations-Testkarte erheblich erleichtert wird und die ein Eindringen von Lösungsmitteln und Testsubstanzen in die Testkarte verhindert. The papers may also preferably a one-sided coating of lösungsmittelundurchlässigem material, preferably polyethylene, having, by which is considerably easier to the publications test card attachment and prevents the penetration of solvents and test substances in the test card.

Eine praktikable Ausführungsform des erfindungsgemäßen Schnelltests ist als Beispiel in Fig. 1 dargestellt. A practical embodiment of the rapid test according to the invention is shown as an example in FIG. 1. Auf dieser nur als beispielhaft zu betrachtenden Testkarte bedeutet On this only as an example to be considered test card means
1 - Beschriftungsfelder zur Aufnahme der Identifikationsangaben für Spender und/oder Empfänger, 1 - labeling fields for receiving the identification information of the donor and / or receiver,
2 - ggf. ein zusätzliches Informationsfeld für technisch und dokumentarische Angaben, Signaturen etc., 2 - possibly an additional information field for technical and documentary information, signatures, etc.
3 - aufgeklebt je Probe ein Analysenfeld aus den og Trennmaterialien mit 3 - glued each sample, a field analysis of the above-mentioned release materials with
4 - der Auftragsfläche für das Lauf- oder Fließmittel, 4 - the application surface for the running or flow agents,
5 - mindestens einer linearen Auftragszone für das Testblut, 5 - at least one linear application zone of the test blood,
6 - mindestens einer linearen Auftragszone der Antiseren und 6 - at least one linear application zone of the antisera and
7 - mindestens einer Laufzone für die nicht agglutinierten Erythrozyten, 7 - at least one running zone for the non-agglutinated erythrocytes,
8 - einem Vorratsfeld je Probe, auf welchem das entnommene Kapillarblut bzw. Blut zunächst aufgetragen wird. 8 - a storage field for each sample, on which the taken blood or capillary blood is first applied.

In bevorzugter Form hat das Analysenfeld ( 3 ) ein kammartiges Aussehen mit mehreren Laufzonen ( 5 ), bevorzugt vier. In preferred form, the analysis field (3) has a comb-like appearance with several drive zones (5), preferably four.

Die in der Antiseren-Auftragszone ( 5 ) aufgetragenen Antiseren sind mono- oder polyklonale kommerzielle Präparate der Spezifitäten Anti-A, Anti-B und Anti-D, besonders bevorzugt sind monoklonale Antiseren. In the antisera-application zone (5) applied antisera are mono- or polyclonal commercial preparations of the specificity anti-A, anti-B and anti-D, particularly preferred are monoclonal antisera. Sie wurden als optimal für dieses Verfahren gefunden. They were found to be optimal for this procedure. An diesen Positionen werden 2-5 µl Antiserum in handelsüblicher Konzentration manuell je nach Bedarf und auszutestenden Blutgruppensystemen aufgetragen. 2-5 .mu.l antiserum be applied in commercially available concentration manually according to need and debugged blood group systems at these positions. Bevorzugt sind für Standard-Untersuchungen die Antiseren bereits industriell durch übliche Druckverfahren aufgetragen. antisera are preferred already applied industrially by conventional printing processes for standard tests.

Zur Durchführung des Tests wird das Kapillarblut (aus der Fingerbeere oder dem Ohrläppchen) oder das Spenderblut zunächst auf das Vorratsfeld ( 8 ) gegeben, welches bevorzugt aus einer undurchlässigen und indifferenten Folie besteht, von welcher die einzelnen Testfelder beschickt werden. To carry out the test, the capillary blood (from a fingertip or ear lobe), or the donor's blood to the first storage field (8) is provided, which consists preferably of an impermeable and inert film from which the single test fields are charged. Der verbleibende Rest kann vorzugsweise nach Eintrocknung ebenfalls mit einer Folie abgedeckt werden und dient als Referenzprobe für gegebenenfalls später zusätzlich erforderliche Tests, vor allem forensischer Art. Von diesem Kapillarblut bzw. Spenderblut werden dann 2-5 µl auf die Testblut-Auftragszone ( 5 ) gegeben. The remainder can be preferably also covered by desiccation with a film and is used as a reference sample is optionally later additionally required tests, particularly forensic art. From this capillary blood or donated blood 2-5 ul to the test blood application zone (5) are then added ,

Als Fließmittel für die Analyse dient ein für den Transport der Erythrozyten geeignetes Fließmittel, wie beispielsweise LISS- (lower ionic strenghts solution) oder PBS-Lösungen (phosphate buffered saline), bevorzugt physiologische Kochsalzlösung. As the mobile phase for the analysis of a material suitable for the transport of the erythrocytes flow agent is used, such as LISS (lower ionic strenghts solution) or PBS solutions (phosphate buffered saline), preferably physiological saline. Werden ca. 100-500 µl Fließmittel auf die Fließmittel-Auftragszone ( 4 ) der waagerecht liegenden Testkarte gegeben, so erreicht die Fließmittelfront schon nach wenigen Sekunden das Ende der Laufzone ( 7 ), wobei der Blutfleck bei Agglutination an der Auftragszone der Antiseren ( 6 ) verbleibt oder bei schwacher oder fehlender Agglutination sich mit dem Fließmittel bewegt. Are about 100-500 .mu.l fluid added to the flow agent application zone (4) of the test lying horizontally, so the solvent front reached after a few seconds, the end of the zone (7), wherein the blood stain on agglutination of the application zone of the antisera (6 ) remains or is moving at low or lack of agglutination with the flow agent.

Überraschend sind Schnelligkeit und Sensitivität der Methode, die nur Sekunden braucht, während herkömmliche Tests aus dem Stand der Technik im Bereich von eventuell 10-15 Minuten liegen. Surprisingly are speed and sensitivity of the method that takes only seconds, while conventional tests of the prior art in the range of 10-15 minutes may be.

Das in Fig. 1 dargestellte Analysenfeld ( 3 ) ist im Rahmen der Erfindung nur als Beispiel anzusehen und die Beschränkung auf 4 Laufzonen ( 7 ) nur eine mögliche Ausführungsform. The analysis field illustrated in Fig. 1 (3) is to be considered within the scope of the invention as an example only and the limitation to 4-off zones (7) only one possible embodiment. Es sind selbstverständlich Ausführungsformen mit nur einer Laufzone sowie mit einer beliebigen Zahl möglich, so daß mit einem einzigen Test gegen weitere Antiseren geprüft werden kann. There are, of course, embodiments with only one running zone, as well as with any number possible so that can be tested with a single test against further antisera.

Monoklonale Antiseren der Spezifitäten Anti-M und Anti-N, sowie Anti-Le-a und Anti-Le-b sind ebenfalls auf diese Weise als Schnelltests erprobt worden und bieten sowohl aus Kapillarblut wie aus Erythrocytensuspension herkömmlichen Testen den og genannten entscheidenden Zeitvorteil bei der Schnellauswahl von Blutkonserven. Monoclonal antisera the specificities anti-M and anti-N, as well as anti-Le-a and anti-Le-b have also been tested in this way as rapid tests and offer both from capillary like erythrocyte conventional testing the above mentioned crucial time advantage in quick selection of stored blood. Der Test bietet sich daher neben dem AB0-Blutgruppensystem allgemein für die schnelle Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen mit monoklonalen Antikörpern der IgM-Klasse an, zum Beispiel der Duffy-, Kell-Cellano-, Kidd-, Lewis-, Lutheran-, MNSs-, P-, Rhesus-, HLA-System oder des Plasmaproteinpolymorphismus. The test has therefore beside the AB0 blood group system in general for the rapid differentiation of erythrocytes features with monoclonal antibodies of the IgM class, for example, Duffy, Kell Cellano-, Kidd, Lewis, Lutheran-, MNSs-, P -, rhesus, HLA system or Plasmaproteinpolymorphismus.

Da Blutgruppenverträglichkeiten vor einer Übertragung ausgetestet werden müssen, bietet sich der erfindungsgemäße Schnelltest auf Papier besonders zur industriellen Herstellung von Bedside-Testkarten an, indem eine Karte aus Papier, Karton oder einem geeigneten Kunststoffmaterial mit den notwendigen Angaben und Feldern zur Aufnahme von Informationen vorbedruckt wird. Since blood group compatibility to be tested before transmission, the rapid test according to the invention offers on paper especially for industrial production of bedside test cards by a card made of paper, cardboard or a suitable plastic material with the necessary information and fields for recording information is pre-printed. Anschließend werden dann das Analysenfeld ( 3 ) aus beschichtetem Papier aufgeklebt sowie das Referenzfeld ( 8 ) für die Aufnahme der Blutprobe. The analysis field (3) are then glued then coated paper as well as the reference field (8) for receiving the blood sample.

Claims (15)

  1. 1. Schnelltest zur Differenzierung von Erythrozytenmerkmalen, dadurch gekennzeichnet, daß auf Papier aufgetragene Antiseren die durch ein Laufmittel bewirkte Migration der Erythrozyten in unterschiedlicher Weise hemmen. 1. Quick test for differentiation of erythrocyte features, characterized in that applied to paper antisera inhibit the migration caused by an eluent of erythrocytes in different ways.
  2. 2. Schnelltest gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Papier ein ungeleimtes Papier ist, bevorzugt von der Qualität Filtrierpapier, Fließpapier, Hygienepapier. 2. Rapid test according to claim 1, characterized in that the paper is an unsized paper, preferably of the quality of filter paper, blotting paper, sanitary paper.
  3. 3. Schnelltest gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß das Papier von der Qualität eines mit Polyethylen beschichtetes Aufsaugpapiers für Labortische ist. 3. Rapid test according to claim 1 or 2, characterized in that the paper of the quality of a polyethylene-coated Aufsaugpapiers for lab tables is.
  4. 4. Schnelltest gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß auf dem Papier mindestens ein Antiserum der verschiedenen Blutgruppensysteme aufgetragenen ist. 4. Rapid test according to claim 1, characterized in that is applied to the paper at least an anti-serum of the different blood group systems.
  5. 5. Schnelltest gemäß Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, daß das Antiserum ein monoklonales Antiserum des AB0-Systems und/oder des Rhesus-Systems ist. 5. Rapid test according to claim 4, characterized in that the anti-serum is a monoclonal anti-serum of the AB0 system and / or the Rhesus system.
  6. 6. Schnelltest gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Laufmittel zur Differenzierung eine LISS-, PBS- oder physiologische Kochsalzlösung ist. 6. Rapid test according to claim 1, characterized in that the running means of differentiating a LISS, PBS or physiological saline is.
  7. 7. Schnelltest gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß das Papier ( 3 ) ein kammförmiges Aussehen hat mit einer Auftragzone ( 4 ) für das Laufmittel und zwei oder mehr Laufzonen ( 7 ) zur Differenzierung. 7. Rapid test according to claim 1, characterized in that the paper (3) has a comb-like appearance with an application zone (4) for the eluent and two or more off zones (7) for differentiation.
  8. 8. Schnelltest gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß das Papier vier Laufzonen ( 7 ) hat. 8. Rapid test according to claim 7, characterized in that the paper four drive zones (7).
  9. 9. Verwendung des Schnelltests gemäß Anspruch 1 zur Bestimmung von Erythrozythenmerkmalen. 9. The use of the rapid test according to claim 1 for the determination of Erythrozythenmerkmalen.
  10. 10. Verwendung des Schnelltests gemäß Anspruch 1 zur Bestimmung von Blutgruppen und/oder Unverträglichkeit von Blutgruppen. 10. The use of the rapid test according to claim 1 for the determination of blood groups and / or incompatibility of blood groups.
  11. 11. Verwendung des Schnelltests gemäß Anspruch 1 als Bedside-Test. 11. The use of the rapid test according to claim 1 as a bedside test.
  12. 12. Bedside-Testkarte enthaltend a) ein oder mehrere Identifikations- bzw. Informationsfelder ( 1 , 2 ), b) ein oder mehrere Analysenfelder aus Papier ( 3 ) mit einem Auftragsfeld für das Laufmittel ( 4 ), ein oder mehreren Auftragszonen für die Blutprobe ( 5 ) und die Antiseren ( 6 ) sowie Laufzonen ( 7 ) für die nicht agglutinieren Erythrozyten und c) ein oder mehrere Vorratsfelder ( 8 ). 12. bedside test card containing a) one or more identification or information fields (1, 2), b) one or more fields of analysis of paper (3) with an application field for the drive means (4), one or more application zones for the blood sample (5) and antisera (6) and drive zones (7) for the non agglutinate erythrocytes and c) one or more storage fields (8).
  13. 13. Bedside-Testkarte gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß sie zwei Analysenfelder ( 3 ) mit je vier Laufzonen ( 7 ) und zwei Vorratsfelder ( 8 ) enthält. 13. bedside test card according to claim 12, characterized in that it comprises two analysis areas (3) with four barrel zones (7) and two storage boxes (8).
  14. 14. Bedside-Testkarte gemäß Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, daß die Antiseren in den Auftragszonen ( 6 ) industriell aufgedruckt sind. 14. bedside test card according to claim 12, characterized in that the antisera in the application zones (6) are industrially printed.
  15. 15. Verfahren zur Herstellung von Bedside-Testkarten, dadurch gekennzeichnet, daß eine entsprechende Karte vorbedruckt wird mit Hinweisen zur Eintragung von Informationen, auf die derartige Karte zwei kammförmige Analysenfelder ( 3 ) aus beschichtetem Papier und zwei Referenzfelder ( 8 ) zur Aufnahme der Blutprobe aufgeklebt werden und die entsprechenden Antiseren auf die dafür vorgesehenen Auftragszonen ( 6 ) aufgedruckt werden. 15. A process for the preparation of bedside test cards, characterized in that a corresponding card is preprinted glued with references to the entry of information to which such a card two comb-shaped analysis fields (3) made of coated paper, and two reference fields (8) for receiving the blood sample be and the corresponding antisera are printed on the intended application zones (6).
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