DE19844111A1 - Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 - Google Patents
Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1Info
- Publication number
- DE19844111A1 DE19844111A1 DE19844111A DE19844111A DE19844111A1 DE 19844111 A1 DE19844111 A1 DE 19844111A1 DE 19844111 A DE19844111 A DE 19844111A DE 19844111 A DE19844111 A DE 19844111A DE 19844111 A1 DE19844111 A1 DE 19844111A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- nucleic acid
- antisense nucleic
- icam
- antisense
- nucleic acids
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Ceased
Links
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 title claims abstract description 41
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 title claims abstract description 37
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 title claims abstract description 37
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 title claims description 5
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 title claims description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 title description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 title description 5
- 102000015271 Intercellular Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 claims description 4
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 4
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 claims description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 claims description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 claims description 3
- 201000009053 Neurodermatitis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 2
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 claims description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 claims description 2
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 2
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims description 2
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 claims 1
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 claims 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 claims 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 abstract description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 abstract description 3
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 14
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 14
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 description 11
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 4
- ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 16-methylheptadecyl 16-methylheptadecanoate Chemical compound CC(C)CCCCCCCCCCCCCCCOC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC(C)C ABEXEQSGABRUHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000764238 Isis Species 0.000 description 3
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 3
- 238000005417 image-selected in vivo spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000012739 integrated shape imaging system Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 2
- 101000935040 Homo sapiens Integrin beta-2 Proteins 0.000 description 2
- 102100025390 Integrin beta-2 Human genes 0.000 description 2
- 101100341510 Mus musculus Itgal gene Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- 208000002874 Acne Vulgaris Diseases 0.000 description 1
- 208000030090 Acute Disease Diseases 0.000 description 1
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 description 1
- 101100289995 Caenorhabditis elegans mac-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000016289 Cell Adhesion Molecules Human genes 0.000 description 1
- 108010067225 Cell Adhesion Molecules Proteins 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 1
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012124 Opti-MEM Substances 0.000 description 1
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 206010000496 acne Diseases 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001364 causal effect Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000006020 chronic inflammation Effects 0.000 description 1
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000012223 nuclear import Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1138—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against receptors or cell surface proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/11—Antisense
- C12N2310/111—Antisense spanning the whole gene, or a large part of it
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Die vorliegende Erfindung betrifft spezifische Antisense-Nukleinsäuren, welche die Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 in Säugerzellen, insbesondere menschlichen Zellen, hemmen bzw. regulieren, diese Antisense-Nukleinsäuren enthaltende Vektoren und Wirtszellen sowie diese Antisense-Nukleinsäure enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen zur Hemmung oder Behandlung von beispielsweise akut oder chronisch entzündlichen Erkrankungen und diese Antisense-Nukleinsäuren enthaltende Kits für diagnostische Zwecke.
Description
Die vorliegende Erfindung betrifft spezifische Antisense-Nukleinsäuren, welche
die Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 in Säugerzellen, insbesondere
menschlichen Zellen, hemmen, und diese Antisense Nukleinsäuren enthaltende
Vektoren und Wirtszellen sowie diese Antisense-Nukleinsäure enthaltende
pharmazeutische Zusammensetzungen zur Behandlung von insbesondere akut
oder chronisch entzündlichen Erkrankungen, Virusinfektionen, Metastasierung,
Entzündungen der Haut, Mobilisierung von hämatopoetischen Stammzellen,
Erkältung und alle biologischen Prozesse unter Beteiligung von ICAM-1 auf
molekularer Ebene.
Entzündungen sind Reaktionen des vaskularisierten Gewebes auf Reizungen wie
zum Beispiel Infektionen und mechanische Verletzungen, Beispiele für entzündli
che Erkrankungen sind unter anderem Morbus Crohn, rheumatoide Arthritis und
Organabstossungsreaktionen, Virusinfektionen, Metastasierung, Entzündungen
der Haut, Mobilisierung von hämatopoetischen Stammzellen, Erkältung und alle
biologischen Prozesse unter Beteiligung von ICAM-1 auf molekularer Ebene. Die
Infiltration von Leukozyten ist ein wichtiger Schritt bei pathologischen Entzün
dungsreaktionen, wobei Zell-Zell-Adhäsion hierfür den initialen Schritt darstellt.
Adhäsion wird durch Oberflächenproteine auf Leukozyten und der endothelialen
Oberfläche in Rezeptor-Ligand-analoger Weise vermittelt. Das endotheiale Ober
flächenprotein ICAM-1 nimmt bei solchen Zell-Zell-Kontakten die Rolle des
Rezeptors für die Leukozytenliganden CD11a/CD18, auch LFA1 genannt, und
CD11b/CD18, auch Mac-1 genannt, ein. Monoklonale Antikörper gegen Leuko
zyten-Adhäsionsmoleküle können die Adhäsion von Leukozyten und Endothel
zellen sowohl in vitro als auch in vivo hemmen (Arfors et al. 1987 Blood 69: 338-340;
Vedder et al. 1988 J. Cli. Invest. 81: 939-944). Bei verschiedenen Formen
akuter und chronischer Entzündungen scheint daher die Hemmung des Adhä
sionsmoleküls ICAM-1 erfolgversprechend.
Kausale Therapieansätze bei pathologischen Entzündungsreaktionen mit Hilfe von
Substanzen, die auf molekularer Ebene eingreifen, befinden sich gegenwärtig im
experimentellen Stadium. Zum Beispiel werden mit gewissem Erfolg sowohl
monoklonale Antikörper gegen LFA1 getestet als auch ICAM-1-gerichtete Anti
sense-Oligonukleotide (Yacyshyn et al., 1998 Gastroenterology 114: 1133-1142;
Stepkowski et al. 1995 Transplant. Proc. 27: 113; Kavanaugh et al.,
1994 Arthritis-Reum. 37: 992-999; Arfors et al. 1987 Blood 69: 338-340;
Vedder et al. 1988 J. Cli. Invest. 81-939-944; Benneft et al. 1997 J. Pharmacol.
Exp. Ther. 280: 988-1000). Nukleinsäuren als therapeutische Moleküle haben
grundsätzliche Vorteile gegenüber anderen Substanzklassen wie zum Beispiel
Peptiden und Proteinen. Hierzu zählen ihre geringe oder nicht vorhandene Immu
nogenität bzw. Nebenwirkungen und Toxizität.
Da die Auswahl der Antisense-Sequenzen bislang eher willkürlich und ohne
rationale Auswahlkriterien erfolgte, war ein großer Teil der untersuchten Sequen
zen nicht effektiv. Die Effektivität von Antisense-Inhibitoren in lebenden Syste
men wird durch das Assoziationsverhalten in vitro reflektiert. Wichtige Einfluß
größen auf das Assoziationsverhalten zwischen der Antisense-Nukleinsäure und
der Target-RNA, wie beispielsweise die Zugänglichkeit der Target-RNAs für die
Antisense-Nukleinsäuren, wurden nicht berücksichtigt. Ferner wurden bei den
Antisense-RNAs die strukturelle Vielfalt nicht berücksichtigt und damit das
Potential von effektiven Antisense-Inhibitoren nicht ausgeschöpft.
Somit liegt der vorliegenden Erfindung die Aufgabe zugrunde, Antisense-Nu
kleinsäuren bereitzustellen, die eine besonders wirkungsvolle Hemmung der
ICAM-1-Genexpression in Säugerzellen aufweisen.
Diese Aufgabe wird durch die in den beigefügten Patentansprüchen gekenn
zeichneten Ausführungsformen gelöst. Insbesondere wird eine Antisense-Nu
kleinsäure bereitgestellt, welche gegen eine spezifische RNA-Sequenz von ICAM-1
als Target bzw. Zielmolekül gerichtet ist und mindestens eine Sequenz, ausge
wählt aus SEQ ID Nr. 1-30, enthält.
Der Begriff "Antisense-Nukleinsäure" bedeutet ein natives, halbsynthetisches,
synthetisches oder modifiziertes Nukleinsäuremolekül aus Desoxyribonukleotiden
und/oder Ribonukleotiden und/oder modifizierten Nukleotiden.
Die lokale Zielsequenzen im ICAM-1-Gen umfassen die Positionen 1627-1671
(SEQ ID Nrn. 1-12), 59-82 (SEQ ID Nrn. 13-15), 593-634 (SEQ ID Nrn. 16-23),
1219-1242 (SEQ ID Nrn. 24 und 25), 1384-1410 (SEQ ID Nrn. 26-28) oder
1851-1874 (SEQ ID Nrn. 29 und 30).
Die erfindungsgemäßen Antisense-Nukleinsäuresequenzen zeigen eine signifikant
stärkere Hemmung als die vier wirksamsten bekannten Antisense-Oligonukleotide
der Fa. ISIS Inc., ("ISIS1570", "ISIS2302", "ISIS1939" und "ISIS3067") und
sind daher ausgezeichnete Inhibitoren der ICAM-1 Expression in lebenden Zellen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Vektor, der die
vorstehend definierte, erfindungsgemäße Antisense-Nukleinsäure oder der eine
entsprechende, zur Antisense-Nukleinsäure komplementäre DNA-Sequenz
enthält, die nach einer Transkription in geeigneten Wirtszellen zur vorstehend
definierten, erfindungsgemäßen Antisense-Nukleinsäure führt. Der erfindungs
gemäße Vektor kann vorzugsweise geeignete regulatorische Elemente, wie
Promotoren, Enhancer, Terminationssequenzen, oder virale Sequenzen enthalten.
In einer erfindungsgemäßen Ausführungsform kann der Vektor beispielsweise (i)
zur stabilen Integration der erfindungsgemäßen Nukleinsäure in das genetische
Material einer Wirtszelle verwendet werden und/oder (ii) für erhöhte zelluläre
Aufnahme geeignet sein und/oder (iii) nukleare Importsignale enthalten und/oder
(iv) zum Zell-Zell-Transport geeignet sein.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine Wirtszelle, welche
die erfindungsgemäße Antisense-Nukleinsäure oder den erfindungsgemäßen
Vektor enthält. Geeignete Wirtszellen sind beispielsweise Säugerzellen, ins
besondere menschliche Zellen.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist eine pharmazeutische
Zusammensetzung, welche die erfindungsgemäße Antisense-Nukleinsäure oder
ein Gemisch von mindestens zwei erfindungsgemäßen Antisense-Nukleinsäuren
oder den erfindungsgemäßen Vektor, gegebenenfalls in einem im Stand der
Technik bekannten, pharmazeutisch verträglichen Träger und/oder Verdünnungs
mittel enthält. Die erfindungsgemäße Zusammensetzung kann zur Hemmung
oder Beseitigung von insbesondere akut oder chronisch entzündlichen Krank
heitszuständen, beispielsweise Morbus Crohn, rheumatoide Arthritis, Organ
abstoßungsreaktionen, Virusinfektionen, Metastasierung, Entzündungen der
Haut, Mobilisierung von hämatopoetischen Stammzellen, Erkältung und alle
biologischen Prozesse unter Beteiligung von ICAM-1 auf molekularer Ebene,
Colitis ulcerosa, Rheumatoide Arthritis, Lupus erythematodes, "Graft-versus-host
Reaktionen" nach allogener Knochenmarkstransplantation, Psoriasis, Asthma,
Neurodermitis durch transiente oder stabile Integration der erfindungsgemäßen
Antisense-Nukleinsäure mittels Transformation bzw. Transfektion und anderen
im Stand der Technik bekannten Einschleusungsverfahren in ICAM-1 exprimie
renden Wirtszellen verwendet werden. Ferner kann die erfindungsgemäße
Zusammensetzung auch für kosmetische Zwecke, beispielsweise zur Behandlung
von Akne, verwendet werden.
Ferner können die erfindungsgemäßen Antisense-Nukleinsäuren zur Regulation
oder Suppression der ICAM-1-Genexpression in Säugerzellen verwendet werden.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein mindestens eine oder
mehrere erfindungsgemäße Antisense-Nukleinsäuren enthaltender Kit zur Diagno
se von ICAM-1-assoziierten Störungen bzw. Krankheiten von Säugern, ins
besondere Mensch, wobei die Antisense-Nukleinsäuren mindestens eine nach
weisbare Markierung, beispielsweise an Nukleotide gekoppelte Fluoreszenzfarb
stoffe, Biotin oder Digoxygenin oder radioaktive Isotope, enthalten.
Ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein transgener Organis
mus bzw. Säuger, welcher mindestens eine in das genetische Material stabil
integrierte Nukleinsäure enthält, wobei diese Nukleinsäure nach der Transkription
eine RNS-Sequenz, die mindestens eine Sequenz, ausgewählt aus SEQ ID Nrn.
1-30 und dargestellt als RNS, umfaßt.
Die Figuren zeigen:
Fig. 1 zeigt die erfindungsgemäßen ICAM-1-gerichteten Antisense-Oligonukleo
tidsequenzen, wobei sich die Numerierung der Sequenzpositionen auf die
Referenz "Chian et al. 1991 J. Biol. Chem. 266: 18162-18171" bezieht. (A)
zeigt die Antisense-Oligonukleotide SEQ ID Nrn. 1-12 gegen die lokale ICAM-1-Ziel
sequenz pos. 1627-1671, (B) zeigt zeigt die Antisense-Oligonukleotide SEQ
ID Nrn. 13-15 gegen die lokale ICAM-1-Zielsequenz pos. 59-82, (C) zeigt die
Antisense-Oligonukleotide SEQ ID Nrn. 16-23 gegen die lokale ICAM-1-Zielse
quenz pos. 593-634, (D) zeigt die Antisense-Oligonukleotide SEQ ID Nrn. 24
und 25 gegen die lokale ICAM-1-Zielsequenz pos. 1219-1242, (E) zeigt die
Antisense-Oligonukleotide SEQ ID Nrn. 26-28 gegen die lokale ICAM-1-Zielse
quenz pos. 1384-1410 und (F) zeigt die Antisense-Oligonukleotide SEQ ID Nr.
29 und 30 gegen die lokale ICAM-1-Zielsequenz pos. 1851-1874.
Fig. 2 ist eine graphische Darstellung der Hemmung der Genexpression von
ICAM-1 in ECV304-Zellen nach Lipofectin-vermittelter Transfektion mit bekann
ten und erfindungsgemäßen Phosphorothioat-modifizierten Antisense-Oligonu
kleotiden und Cytokin-Stimulation der ICAM-1 Expression. Es ist deutlich ersicht
lich, daß die getesteten erfindungsgemäßen Antisense-Oligonukleotide 1630A,
C, D, E, H, I, J und L (SEQ ID Nr. 1, 3-8 und 10), AUGC (SEQ ID Nr. 5) und
1840B (SEQ ID Nr. 30) eine signifikant stärkere Hemmung aufweisen als bei
spielsweise die bekannten Antisense-Oligonukleotide ISIS1570, ISIS2302,
ISIS1939 und ISIS3067 der Fa. ISIS Inc. Als Negativkontrolle "NEG" wurde ein
als ungünstig vorhergesagtes ICAM-1-gerichtetes Antisense-Olionukleotid mit der
Sequenz 5'-GGAAAGTGCCATCCTTTAGA-3' verwendet. Die Oligonukleotide
nsISIS1570 und nsISIS2302 sind von ISIS Inc. verwendete Kontrollen.
Durch das nachfolgende Beispiel wird die vorliegende Erfindung näher erläutert.
Ein 60%-80% konfluenter Monolayer der Endothelzellinie ECV304 wurde unter
Verwendung des kationischen Lipids DOTMA (LIPOFECTIN, Life Technologies,
Karlsruhe) entsprechend der Angaben des Hersteller mit den Oligonukleotiden
transfiziert. Dabei wurden Konzentrationen von 0,1 µM Oligonukleotid sowie 5
µg/ml LIPOFECTIN und das Serum-freie Medium OptiMEM (Life Technologies)
verwendet. Nach Zugabe des Transfektionsansatzes wurden die Zellen 4 h bei
37°C inkubiert und anschließend das Serum-freie Transfektionsmedium gegen
Medium 199 mit 10% FCS ausgetauscht. Nach einer weiteren Inkubationszeit
von 4 h wurde das Medium erneut durch Medium 199 mit 10% FCS und 200
U/ml Interleukin 1β ersetzt. Nach einer Stimulationszeit von 16 h bei 37°C
wurden die Endothelzellen durch eine 5minütige Trypsinierung von der Zell
kulturschale abgelöst und mit einem Phycoerythrin-gekoppelten, ICAM-1-spezi
fischen monoklonalen Antikörper gefärbt. Die ICAM-1-Expression wurde als
mittlere Fluoreszenzintensität durchflußzytometrisch bestimmt. Das Ausmaß der
Hemmwirkung eines Antisense-Oligonukleotids wurde nach folgender Formel
berechnet:
[(ICAM-1-Expression-Antisense-Oligonukleotid-behandelter, stimulierter ECV304) - (ICAM-1-Expression unbehandelter, nicht stimulierter ECV304)]/[(ICAM-1- Expression unbehandelter, stimulierter ECV304) - (ICAM-1-Expression unbe handelter, nicht stimulierter ECV304)].
[(ICAM-1-Expression-Antisense-Oligonukleotid-behandelter, stimulierter ECV304) - (ICAM-1-Expression unbehandelter, nicht stimulierter ECV304)]/[(ICAM-1- Expression unbehandelter, stimulierter ECV304) - (ICAM-1-Expression unbe handelter, nicht stimulierter ECV304)].
Claims (9)
1. Antisense-Nukleinsäure, welche gegen eine spezifische Nukleinsäure-
Sequenz von ICAM-1 gerichtet ist und mindestens eine Sequenz, ausge
wählt aus SEQ ID Nrn. 1-30, enthält.
2. Antisense-Nukleinsäure nach Anspruch 1, welche Desoxyribonukleotide
und/oder Ribonukleotide und/oder modifizierte Desoxyribo- oder Ribonu
kleotide enthält.
3. Vektor, enthaltend mindestens eine der nach Anspruch 1 oder 2 definier
ten Antisense-Nukleinsäuren.
4. Wirtszelle, enthaltend mindestens eine nach Anspruch 1 oder 2 definierten
Antisense-Nukleinsäuren oder den nach Anspruch 3 definierten Vektor.
5. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend die Antisense-Nuklein
säure nach Anspruch 1 oder 2 oder ein Gemisch von mindestens zwei
Antisense-Nukleinsäuren nach Anspruch 1 oder 2 oder den Vektor nach
Anspruch 3.
6. Verwendung der Antisense-Nukleinsäure nach Anspruch 1 oder 2 oder
des Vektors nach Anspruch 3 zur Hemmung oder Beseitigung von akut
oder chronisch entzündlichen Krankheitszuständen beim Menschen,
Virusinfektionen, Metastasierung, Entzündungen der Haut, Mobilisierung
von hämatopoetischen Stammzellen, Erkältung und alle biologischen
Prozesse unter Beteiligung von ICAM-1 auf molekularer Ebene, Colitis
ulcerosa, Rheumatoide Arthritis, Lupus erythematodes, Organabstos
sungsreaktionen, "Graft-versus-host-Reaktionen" nach allogener Knochen
markstransplantation, Psoriasis, Asthma, Neurodermitis.
7. Verwendung der Antisense-Nukleinsäure nach Anspruch 1 oder 2 oder
des Vektors nach Anspruch 3 oder der pharmazeutischen Zusammenset
zung nach Anspruch 5 zur Regulation oder Suppression der ICAM-1-
Genexpression.
8. Kit zur Diagnose von ICAM-1-assoziierten Störungen bzw. Krankheiten
von Säugern, enthaltend mindestens eine oder mehrere Antisense-Nu
kleinsäuren nach Anspruch 1 oder 2 mit mindestens einer nachweisbaren
Markierung.
9. Transgener Organismus, welcher mindestens eine in das genetische
Material stabil integrierte Nukleinsäure enthält, wobei diese Nukleinsäure
nach der Transkription eine RNS-Sequenz, die mindestens eine Sequenz,
ausgewählt aus SEQ ID Nrn. 1-30 und dargestellt als RNS, umfaßt.
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19844111A DE19844111A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 |
| EP99948807A EP1115858B1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Antisense-sequenzen für die hemmung der expression des adhäsionsmoleküls icam-1 |
| AT99948807T ATE236250T1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Antisense-sequenzen für die hemmung der expression des adhäsionsmoleküls icam-1 |
| ES99948807T ES2196864T3 (es) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Secuencia antisentido para la inhibicion de la expresion de la molecula de adhesion icam-1. |
| AU61936/99A AU6193699A (en) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Antisense-sequences for inhibiting the expression of the adhesion molecule icam-1 |
| PCT/EP1999/006972 WO2000018907A2 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Antisense-sequenzen für die hemmung der expression des adhäsionsmoleküls icam-1 |
| DE59904870T DE59904870D1 (de) | 1998-09-25 | 1999-09-21 | Antisense-sequenzen für die hemmung der expression des adhäsionsmoleküls icam-1 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19844111A DE19844111A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19844111A1 true DE19844111A1 (de) | 2000-04-20 |
Family
ID=7882288
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19844111A Ceased DE19844111A1 (de) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| DE (1) | DE19844111A1 (de) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994005333A1 (en) * | 1992-09-02 | 1994-03-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
| US5580969A (en) * | 1992-07-24 | 1996-12-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Antisense oligonucleotides directed against human ICAM-I RNA |
| WO1998024797A1 (en) * | 1996-12-02 | 1998-06-11 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Antisense inhibition of human adhesion molecules |
-
1998
- 1998-09-25 DE DE19844111A patent/DE19844111A1/de not_active Ceased
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5580969A (en) * | 1992-07-24 | 1996-12-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Antisense oligonucleotides directed against human ICAM-I RNA |
| WO1994005333A1 (en) * | 1992-09-02 | 1994-03-17 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotide modulation of cell adhesion |
| WO1998024797A1 (en) * | 1996-12-02 | 1998-06-11 | Dyad Pharmaceutical Corporation | Antisense inhibition of human adhesion molecules |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Bennett, C.F. et al., J. Immunol. 152, 1994, 3530-40 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69432315T2 (de) | ANTISENSE NUKLEINSÄUREN ZUR VORBEUGUNG UND BEHANDLUNG VON BESCHWERDEN IN WELCHEN DIE EXPRIMIERUNG VON C-erbB-2 EINE ROLLE SPIELT | |
| EP2121922B1 (de) | Biologisch wirksame moleküle, insbesondere auf grundlage von pna und sirna, verfahren zu deren zellspezifischen aktivierung sowie applikationskit zur verabreichung | |
| DE10202419A1 (de) | Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens | |
| DE102006026191A1 (de) | Vorrichtung und Substanz zur Isolierung von mesenchymalen Stammzellen (MSC) | |
| EP1115858B1 (de) | Antisense-sequenzen für die hemmung der expression des adhäsionsmoleküls icam-1 | |
| DE19844111A1 (de) | Antisense-Sequenzen für die Hemmung der Expression des Adhäsionsmoleküls ICAM-1 | |
| EP2360250B1 (de) | siRNA-Moleküle zur Behandlung von Blutgefäßen | |
| EP1841461B1 (de) | Iniizierbares mittel zur zielgerichteten behandlung von retinalen ganglienzellen | |
| Hempel et al. | The chicken lysozyme gene 5′ MAR and the Drosophila histone SAR are electroelutable from encapsulated and digested nuclei | |
| EP1162276A2 (de) | mRNA Moleküle zur Verwendung als Indikatoren für den Aktivierungs- und Funktionszustand von T-Lymphozyten | |
| DE4447015C2 (de) | Verfahren zur schnellen Isolierung und ggf. Lagerung von Ribonukleinsäuren | |
| DE102016216657B4 (de) | Eukaryotische adulte Zellen umfassend ein Transfektionssystem und deren Herstellung und Verwendung | |
| DE10109466B4 (de) | Verfahren und Mittel zur Modifikation humaner Angiogenese | |
| EP1743037B1 (de) | Verfahren zur isolierung von spezifischen molekülen, die hochselektiv an ausgewählte zielmoleküle binden | |
| EP1692284B1 (de) | Anti-apoptotisch wirksame apatamere | |
| EP2281044B1 (de) | Oligonukleotide zur hemmung und zum nachweis von humanen argonaute-proteinen | |
| EP1444253B1 (de) | Pna-konjugat zur therapie der chronischen myeloischen leukämie (cml) | |
| DE19945441A1 (de) | Verfahren und Vorrichtung zum Einbringen von Nukleinsäuren und Proteinen in eukaryontische Zellen | |
| EP1080192B1 (de) | Antisense-oligonukleotide zur behandlung von proliferierenden zellen | |
| WO2004035774A2 (de) | Expressionsvektoren zur selektion aus stammzellen differenzierter cardiomyocyten | |
| DE102004038535A1 (de) | Zelluläre Einschleusung von Nukleinsäurewirkstoffen | |
| EP1438409A1 (de) | Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur behandlung einer infektion mit einem (+)-strang-rna-virus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| 8131 | Rejection |